CN108207712A - 一种耐盐碱罗非鱼的优良品系选育方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种耐盐碱罗非鱼的优良品系选育方法，包括以下步骤：先收集至少三个不同品系尼罗罗非鱼作为选育基础群体，并进行耐盐碱性评估；再对上述不同品系尼罗罗非鱼每年进行一代耐盐碱选育，且连续选育至少两代，其中耐盐碱选育过程包括：繁殖池准备、亲鱼选择与培育、孵苗和捞苗、筛选和强化培养与越冬；再将经耐盐碱选育后的耐盐碱且生长优势明显的不同品系尼罗罗非鱼混合，再进行耐盐碱选育且连续选育至少四代，即为优良品系的耐盐碱罗非鱼；该方法可靠性高、操作性强、效率高，为鱼类抗逆品种选育开辟新的技术途径，对养殖鱼类抗逆良种培育的推广具有重要意义和应用价值。
Description
技术领域
本发明属于水产养殖技术领域，具体涉及一种耐盐碱罗非鱼的优良品系选育方法。
背景技术
目前，我国渔业生产可利用淡水资源日益萎缩，而我国约有0.31亿hm2盐碱水域，其大多数水体中的生物资源较贫瘠，基本处于闲置，合理利用盐碱水开展水产养殖，可以将盐碱水这一非常规资源转化为区域特色经济优势，同时保护和改善环境，其中开发适于盐碱水养殖的品种是实现这一目标的重要途径。
尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)具有生长快、味道鲜美而少刺等优良特征，是我国重要的出口创汇优势养殖品种。尼罗罗非鱼是一种广盐性的鱼类，海淡水中皆可生存，且在碳酸盐碱度为41.6mg当量/L、pH＝9.42的水体中仍可存活，因此适合作为耐盐碱新品种的选育对象。育种技术是指以遗传学为理论基础，并综合应用生态、生理、生化、病理和生物统计等多种学科知识，通过创造遗传变异、改良遗传特性，以获得优良动植物新品种的应用科学，其中，鱼类育种技术有选育、杂交、多倍体和分子标记辅助育种等。鱼类对各种胁迫因子的抗御能力称为抗逆性，是鱼类在长期的进化和适应过程中形成的对某些环境因子的适应能力，如抗病性、抗寒性、耐低氧性、耐盐碱性等。
在开发耐盐碱罗非鱼优良品系过程中，存在操作可行性差、选育效率低下，以及适应盐碱环境较单一从而影响生产推广等问题。其中，耐盐碱选育技术存在如下缺点：1)主要是针对盐度胁迫而形成的技术路线，培育出的罗非鱼新品种也以耐盐为主，作为新的优良新品种，需要尽可能在更为广泛的区域养殖示范，取得鱼类养殖产业的最大化。然而，实际中不同养殖区域水体环境因素差异巨大，尤其是盐碱水体情况更为复杂，由于同时存在盐度和碱度两种胁迫因子，鱼类生长影响更复杂，单一耐盐选育技术及品种并不适应盐碱水体中广泛推广，严重制约优良鱼种产业化发展；2)大规模家系选育需要大量人力、物力，育种效率较低；3)杂交育种技术中人工受精操作难度大、孵化率低，严重限制基础群体数量，一定程度上限制繁殖制种规模，无法满足生产需要；4)多倍体育种技术偶然成分高，孵化率不稳定；5)鱼类分子标记辅助育种技术在国内外还处于起步阶段，目前在实践中还不能很好应用；6)转基因育种技术一直以来在应用上存在争议，尤其是涉及到转基因安全等问题，目前尚无应用于生产水产经济动物先例。
发明内容
为克服现有技术的上述缺陷，本发明的目的在于提供一种耐盐碱罗非鱼的优良品系选育方法，为鱼类抗逆品种选育开辟新的技术途径，对养殖鱼类抗逆良种培育的推广具有重要意义和应用价值。
本发明的上述目的通过以下技术方案实现：
一种耐盐碱罗非鱼的优良品系选育方法，具体地，包括以下步骤：
S1、收集至少三个不同品系尼罗罗非鱼作为选育基础群体，并进行耐盐碱性评估；
S2、对步骤S1中所述不同品系尼罗罗非鱼每年进行一代耐盐碱选育，且连续选育至少两代，在选育的同时监测并评估所述不同品系尼罗罗非鱼的耐盐碱性；
其中，所述耐盐碱选育过程包括：繁殖池准备、亲鱼选择与培育、孵苗和捞苗、筛选和强化培养与越冬；
S3、将步骤S2耐盐碱选育后的耐盐碱且生长优势明显的不同品系尼罗罗非鱼混合，再每年进行一代上述耐盐碱选育，且连续选育至少四代，即为优良品系的耐盐碱罗非鱼。
进一步地，步骤S2中，所述耐盐碱选育过程具体方法为：
S21、繁殖池准备
选择清塘作为繁殖池并进行清理和消毒，然后注入新水并防止野朵鱼和有害生物随水入池；在亲鱼下塘前6～8天施放肥料使水体变肥，为水中培育饵料生物；
S22、亲鱼选择与培育
选择耐盐碱性能高、成熟度好且生长快的亲鱼在3月中旬放入步骤S21中繁殖池内，池内水温控制在23℃以上；所述亲鱼的投放密度为6～8尾亲鱼每平方米，且雌雄比例为2～3：1；
S23、孵化与捞苗
在水温为22～23℃时雌鱼产卵，然后水温维持25℃投喂和培育，经过6～8天孵出鱼苗；待上述鱼苗长至0.7～1cm时，每天用三角抄网将上述鱼苗捞起转入到网箱；在该步骤投喂和培育时要满足所述亲鱼和鱼苗，避免亲鱼因过分饥饿而吞食鱼苗的情况；
S24、盐碱筛选
将步骤S23中装有鱼苗的网箱直接放入盐度为15‰、碱度为6g/L的高盐高碱混合水体中筛选并观察鱼苗情况，当所述鱼苗群体死亡率超过50％，将所述装有鱼苗的网箱放入淡水；所述筛选时间不超过24h；如果筛选程度不够或过强，可适当提高或降低盐度、碱度；
S25、强化培养与越冬
将经步骤S24筛选后存活的罗非鱼放入淡水中加强培育，并越冬用于第二年的耐盐碱选育。
进一步地，步骤S22中，静水池内每日投饲量为所述亲鱼体重的2％，流水池内每日投饲量为所述亲鱼体重的3％。
进一步地，步骤S23中，所述网箱的网眼大小为3～4mm。
进一步地，步骤S25中，所述越冬方法选自温泉、余热或塑料搭棚中的一种。
与现有技术相比，本发明的有益效果在于：
一、收集不同品系即具有不同生长优势的尼罗罗非鱼作为选育基础群体，可以获得更好的耐盐碱基因池；在耐盐碱筛选过程中，依据不同盐碱胁迫浓度、选育鱼体规格、留存比、处理时间等参数可以培育耐盐碱能力明显提高的罗非鱼优良品系，具有广泛的盐碱耐受性，适合在多种盐碱水域中推广生产。
二、本发明共经过连续选育至少六代，选育过程中将具有耐盐碱性且生长优势明显的不同品系个体混合，可以有效避免近亲繁殖，保持群体遗传多样性，且加快选育进程。
三、本发明整个选育过程中对选育群体的耐盐碱性进行评估和监测，可以及时准确地反映选育效果并适时调整，极大地提高了选育效率。
四、本发明为鱼类抗逆品种选育开辟新的技术途径，对养殖鱼类抗逆良种培育的推广具有重要意义和应用价值，且该方法可靠性高、操作性强、效率高。
附图说明
图1为本发明耐盐碱选育方法的流程图；
图2为不同盐度中3种品系尼罗罗非鱼日均增重率比较；
图3为不同碱度中3种品系尼罗罗非鱼日均增重率比较；
图4为不同盐碱混合中3种品系尼罗罗非鱼日均增重率比较；
图5为不同盐碱混合处理对选育后的尼罗罗非鱼日增重影响；其中，相同字母表示差异不显著，不同字母表示差异显著(P<0.05)。
具体实施方式
下面结合附图给出本发明较佳实施例，以详细说明本发明的技术方案，但本发明的保护范围不限于下述实施例。
所述实验方法，如无特殊说明均为常规方法；所述试剂与材料，无特殊说明均市售可得。
实施例1耐盐碱选育实验
如附图1所示，每年对上述尼罗罗非鱼进行一代耐盐碱选育，具体过程为繁殖池准备、亲鱼选择与培育、孵化和捞苗、筛选、强化培养与越冬，具体为：
第一步、繁殖池准备：选择清塘作为繁殖池并进行清理和消毒，然后注入新水并防止野杂鱼和有害生物随水入池，在亲鱼下塘前7天施放肥料使水体变肥，为水中培育饵料生物。
第二步、亲鱼选择与培育：选择成熟度好的亲鱼在3月中旬放入上述准备好的繁殖池内投喂和培育，池内水温控制在23℃以上，亲鱼的投放密度为7尾亲鱼每平方米，且雌雄比例为2：1；静水池内每日投饲量为亲鱼体重的2％，流水池内每日投饲量为亲鱼体重的3％；投喂和培育时要满足亲鱼和鱼苗，避免亲鱼因过分饥饿而吞食鱼苗的情况。
第三步、孵化与捞苗：在水温为22℃时雌鱼产卵，然后水温维持25℃投喂和培育，经过7天孵出鱼苗；待上述鱼苗长至0.7～1cm时，每天用三角抄网将上述鱼苗捞起转入到网眼大小为3～4mm的网箱。
第四步、筛选：将上述装有鱼苗的网箱放入盐度为15‰、碱度为6g/L的高盐高碱混合水体中筛选并观察鱼苗情况，当鱼苗群体死亡率超过50％，将装有鱼苗的网箱放入淡水中，总的筛选时间不超过24h。
第五步、强化培养与越冬：将经筛选后存活的罗非鱼加强培育，并越冬用于第二年的耐盐碱选育，其中越冬方法可以为温泉、余热或塑料搭棚等保温方式。
实施例2不同盐碱环境中不同品系尼罗罗非鱼日均增重率比较实验
分别选取上海、山东和河北地区的3个不同品系尼罗罗非鱼幼鱼，在不同盐度、碱度、盐碱混合梯度下的网箱中养殖。
盐碱混合组中不同盐碱混合梯度的配置方法为：先用盐卤水和淡水勾兑成不同盐度，再按照一定比例加入分析纯的NaHCO3配制成各盐碱梯度，沉淀2天后取出上层清水用于试验，其中，盐度和碱度检测分别使用SG7便携式盐度计和HI83200多参数水质分析仪。
上海品系在单盐度15‰组、单盐度20‰组，山东品系在单碱度2g/L组、盐碱混合组(盐度15‰、碱度1g/L)，河北品系在盐碱混合组(盐度20‰、碱度1g/L)、盐碱混合组(盐度20‰、碱度2g/L)中有一定的相对生长优势。不同品系对上述盐碱环境耐受性能产生的差异如附图2～4所示，差异存在的原因与尼罗罗非鱼品系遗传背景不同有关，上海品系为新吉富罗非鱼选育F16，山东品系为埃及引进尼罗罗非鱼后代，河北品系为吉富品系选育后代F13，且均经多代选育。
实施例3评估和监测不同品系尼罗罗非鱼的耐盐碱性实验
对上述尼罗罗非鱼进行耐盐碱选育的同时，评估和监测其耐盐碱性，包括生长实验、急性致死实验和慢性致死实验，具体为：
生长实验在水泥池中进行，先设置5个组分别为淡水组、单盐度组(10‰)、盐碱混合组(盐度10‰、碱度2g/L)、盐碱混合组(盐度10‰、碱度4g/L)和盐碱混合组(盐度10‰、碱度6g/L)。实验前对实验用鱼进行剪左右胸鳍标记，以区别选育组和对照组，每个池子240条，选育组与对照组各120条，定期测量鱼的体重、体长和体高，并记录性别，养殖60天后取出。实验期间，每天投喂三次，根据天气和摄食量来确定投喂量，每天排水一次，清理底泥，以排出的水水色变清为止，两到三周换注一半新水(新水提前调好)，将pH控制在8.5左右，每日18:00至次日6:00进行充氧。
急性致死实验在300L的白色塑料桶中进行，各浓度组梯度设置如下：1)单盐组5个盐度的浓度梯度(20‰、22‰、24‰、26‰、28‰)；2)单碱组6个碱度的浓度梯度(2g/L、4g/L、6g/L、8g/L、10g/L、12g/L)；3)盐碱混合组设置9个浓度梯度(碱度2g/L、4g/L、6g/L；盐度0、15‰、20‰两两相互组合共9组)；其中，单盐组浓度梯度用海水和淡水调配，提前三天调配制，并进行曝气处理至实验开始前；单碱组浓度梯度用淡水和碳酸氢钠混合，计算好每个梯度所需碳酸氢钠溶解入相应的桶中混匀后，提前5天配置，以后每天搅动一次至实验前，实验过程中不要搅动，影响实验结果。再每组放入150尾规格整齐、活力较强且体重为1g左右的鱼苗，分别统计24h、48h、72h、96h的死亡情况。实验前两天将鱼导入塑料桶中进行暂养并停止喂养，试验期间采用气泵供氧保证水中的溶氧充足，不换水，不投喂；并注意观察死亡情况，及时捞出。
慢性致死实验在300L的白色塑料桶中进行，设置三个平行组，放入数量相同规格齐整、活力较强且体重为100g左右的越冬成鱼和体重为1g左右的鱼苗。从淡水开始，盐度组每天提高8‰的盐度(加海水晶)，碱度组每天提高2g/L的碱度(加NaHCO3)，实验期间每天定时调高盐度和碱度，直至实验鱼全部死亡为止，记录死亡时间和尾数。实验前三天实验鱼开始停食，排空粪便，试验期间正常投喂，用气泵充氧，以保证氧气的充足，对水质进行监测，每三天换注一半新水，新水需提前配制并保证盐度、碱度不变。
如附图5所示，通过对比上述三组实验可知，在相同盐碱胁迫组中，选育三代鱼苗的日均质量增加率均显著高于对照组，选育后代在盐碱水环境中表现出更好的适应性与生长性能，选育三代S10‰A6g/L(S表示盐度，A表示碱度)组日均质量增加为S10‰A0g/L组的58％，高于选育二代的41％，表明选育三代生长性能较选育二代有所提升。
以上所述为本发明的较佳实施例而已，但本发明不应该局限于该实施例所公开的内容。所以凡是不脱离本发明所公开的精神下完成的等效或修改，都落入本发明保护的范围。
Claims (6)
1.一种耐盐碱罗非鱼的优良品系选育方法，其特征在于，包括以下步骤：
S1、收集至少三个不同品系尼罗罗非鱼作为选育基础群体，并进行耐盐碱性评估；
S2、对步骤S1中所述不同品系尼罗罗非鱼每年进行一代耐盐碱选育，且连续选育至少两代，在选育的同时监测并评估所述不同品系尼罗罗非鱼的耐盐碱性；
其中，所述耐盐碱选育过程包括：繁殖池准备、亲鱼选择与培育、孵苗和捞苗、筛选和强化培养与越冬；
S3、将步骤S2耐盐碱选育后的耐盐碱且生长优势明显的不同品系尼罗罗非鱼混合，再每年进行一代上述耐盐碱选育，且连续选育至少三代，即为优良品系的耐盐碱罗非鱼。
2.一种如权利要求1所述耐盐碱罗非鱼的优良品系选育方法，其特征在于，步骤S2中，所述耐盐碱选育过程具体方法为：
S21、繁殖池准备
选择清塘作为繁殖池并进行清理和消毒，然后注入新水并防止野杂鱼和有害生物随水入池；在亲鱼下塘前6～8天施放肥料使水体变肥，为水中培育饵料生物；
S22、亲鱼选择与培育
选择耐盐碱性能高、成熟度好且生长快的亲鱼在3月中旬放入步骤S21中繁殖池内投喂和培育，池内水温控制在23℃以上；所述亲鱼的投放密度为6～8尾亲鱼每平方米，且雌雄比例为2～3∶1；
S23、孵化与捞苗
在水温为22～23℃时雌鱼产卵，然后水温维持25℃投喂和培育，经过6～8天孵出鱼苗；待上述鱼苗长至0.7～1cm时，每天将上述鱼苗捞起转入到网箱；
S24、盐碱筛选
将步骤S23中装有鱼苗的网箱直接放入高盐高碱混合水体中筛选并观察鱼苗情况，当所述鱼苗群体死亡率超过50％，将所述装有鱼苗的网箱放入淡水；所述筛选时间不超过24h；
S25、强化培养与越冬
将经步骤S24筛选后存活的罗非鱼放入淡水中加强培育，并越冬用于第二年所述耐盐碱选育。
3.一种如权利要求2所述耐盐碱罗非鱼的优良品系选育方法，其特征在于，步骤S22中，静水池内每日投饲量为所述亲鱼体重的2％，流水池内每日投饲量为所述亲鱼体重的3％。
4.一种如权利要求2所述耐盐碱罗非鱼的优良品系选育方法，其特征在于，步骤S23中，所述网箱的网眼大小为3～4mm。
5.一种如权利要求2所述耐盐碱罗非鱼的优良品系选育方法，其特征在于，步骤S24中，所述高盐高碱混合水体的盐度为15‰，碱度为6g/L。
6.一种如权利要求2所述耐盐碱罗非鱼的优良品系选育方法，其特征在于，步骤S25中，所述越冬方法选自温泉、余热或塑料搭棚中的一种。
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