CN101658146A - 罗非鱼耐盐育种技术 - Google Patents

Abstract

本发明涉及罗非鱼耐盐育种技术，公开了一种适合海水养殖的鱼类的育种方法，所述方法包括如下步骤：将“尼罗罗非”鱼与“萨罗”鱼作为杂交组合，从成熟的雌性亲鱼取卵，从成熟的雄性亲鱼取精，将卵和精混匀，从而获得杂种受精卵；孵育受精卵，从而得到杂交鱼，所述杂交鱼是适合海水养殖的鱼类。本发明人通过远缘杂交，培育出了耐盐性和生长速度兼优的具有杂交优势的罗非鱼新品种，其不仅没有淡水养殖罗非鱼常有的土腥味，而且肉质紧密富弹性，品质高。

Description

罗非鱼耐盐育种技术

技术领域

本发明属于水产养殖和鱼类育种领域；更具体的，本发明涉及一种适合海水养殖的鱼类的育种和制种方法。

背景技术

目前在中国的咸、海水水域中，养殖生产都存在一些亟待解决的问题，比如，海水网箱养殖，缺少适合的养殖对象和养殖模式，现有的养殖对象几乎全部是肉食性鱼类，苗种来源困难，饵料不易解决，不仅养殖成本高昂，养殖风险大，而且由于大量、长期投喂冰鲜杂鱼也容易产生生态和环境问题；而中西部咸水养殖的主要问题是缺乏优良的养殖对象，现有的鱼类，大多生长缓慢、经济价值低。

“罗非”鱼类原产非洲，属热带性鱼类。其中“尼罗罗非”鱼因个体大、肉厚色白、质嫩刺少、富有弹性、细腻味美，含有丰富的蛋白质、钙、磷、铁和维生素等营养成分，同时含有多种不饱和脂肪酸等特点，是老少皆宜的健康食品，符合人类追求健康食品的要求。随着世界鳕鱼和野生鲑鳟鱼类资源的减少，美国、欧洲、日本、韩国白鱼肉市场正在寻找新的替代品种。罗非鱼因其具有生长速度快、抗病能力强、饲料易解决、养殖周期短、易加工保鲜、生产成本低、营养价值高，市场前景广等特点，成为联合国粮农组织向世界推荐的最有发展前景的水产优良养殖对象之一。同时由于肉质洁白而少刺，而被称为“白色三文鱼”，可替代短缺的鳕鱼等海洋优质鱼，成为人类的“21世纪的鱼”。目前世界“罗非”鱼总产量逾200万吨。其中养殖产量约占3/4，而“尼罗罗非”鱼占有90％以上，但其耐盐性不强，不能再海水中养殖，基本上局限于在淡水水体中养殖生产。

由于淡水养殖存在水域面积和水资源有限、水质易于受到环境污染等问题，每年获得的鱼产量难以满足市场的需求；而海洋的面积远远大于淡水的面积，且污染小。此外，淡水养殖的鱼类有时还会存在土腥味。因此开发海水养殖是非常有必要的，特别是利用海水来养殖一些经济鱼类。然而，使一些常规在淡水中养殖的鱼在海水中生长繁殖并非是容易的事情。

因此，目前迫切需要突破“尼罗罗非”鱼在盐度条件下不能生长繁殖的限制，开发一种适合于在海水中养殖的、抗逆性强的、且具有“尼罗罗非”鱼的生长快速、肉质优美、营养价值高等优点的鱼种，从而为海水鱼类养殖提供新的优良品种。

发明内容

本发明的目的在于提供一种在海水中生长速度较快、抗逆性强、肉质好的罗非鱼杂交种的制种方法，解决“尼罗罗非”鱼不能在较高盐度海水中养殖的问题。

因此，在本发明提供一种适合海水养殖的鱼类的育种方法，所述方法包括如下步骤：

(1)将“尼罗罗非”鱼与“萨罗”鱼作为杂交组合；

(2)从成熟的雌性亲鱼取卵，从成熟的雄性亲鱼取精，将卵子和精子在氯化钠溶液中混匀，其中氯化钠的浓度按照重量体积比在0.65～1.5％，从而获得杂种受精卵；和

(3)孵育(2)获得的受精卵，从而得到杂交鱼，所述杂交鱼是适合海水养殖的鱼类。

在另一优选例中，所述的杂交鱼能在盐度为0～32的水中生长。

在另一优选例中，所述的氯化钠溶液中氯化钠的浓度按照重量体积比在0.65～0.9％。

在另一优选例中，所述的氯化钠溶液是充分曝气的氯化钠溶液。

在另一优选例中，步骤(1)中，所述的杂交包括正交或反交，所述的正交为“尼罗罗非”鱼♀ד萨罗”鱼

，所述的反交为“萨罗”鱼♀ד尼罗罗非”鱼

。

在另一优选例中，采用正交的方式进行杂交。

在另一优选例中，所述的“尼罗罗非”鱼是“吉富尼罗罗非”鱼；更佳地，所述的“尼罗罗非”鱼是“新吉富尼罗罗非”鱼。

在另一优选例中，步骤(1)中，选择年龄为2～4龄的亲鱼；其中，“尼罗罗非”鱼体重不低于500g，“萨罗”鱼体重不低于200g。

在另一优选例中，雄鱼选择有明显的婚姻色，体色鲜艳，尾鳍变红，腹部粉红，且轻压腹部能挤出清白色精液的鱼。

在另一优选例中，雌鱼选择后腹部饱满、柔软，生殖乳突大而突出，孔围呈现红晕的鱼。

在另一优选例中，步骤(1)中，其中雌性亲鱼与雄性亲鱼的比例是2∶1左右。

在另一优选例中，步骤(1)中，卵子和精子混匀的时间是0.5～10分钟；较佳地1～3分钟。

在另一优选例中，步骤(1)中，在取卵或取精前，对雌性亲鱼和/或雄性亲鱼注射催产素。

在另一优选例中，所述的催产素包括：绒毛膜促性腺激素(HCG)和/或促黄体生成素释放激素类似物(LRH-A2)。较佳的，绒毛膜促性腺激素单次注射的剂量为：1500～2500单位(优选2000单位)/Kg鱼体重、促黄体释放激素类似物单次注射的剂量为：4～6微克/Kg鱼体重。

在另一优选例中，母本亲鱼采用一或两次注射催产素，父本亲鱼采用一次注射催产素。

在另一优选例中，步骤(2)中，包括：将受精卵在鱼类孵化器中进行流水孵化，水温保持在26～32℃(优选26-30℃)，调节孵化器中水流至受精卵能上下翻动。

在另一优选例中，每隔0.5-1小时，察看孵化器内孵化情况，除去死亡的卵子。

在另一优选例中，所述的“尼罗罗非”鱼满足以下至少一个条件：

(a)身体两侧有与体轴垂直、平行的条纹7～9条；和/或

(b)尾鳍上垂直或平行排列的斑点条纹13条以上；和/或

(c)体长与体高的比例不低于2.18；和/或

(d)背鳍D：XV～X VII·12～14；和/或

(e)臀鳍A：III·8～10；和/或

(f)上侧线鳞数：13～26；和/或

(g)下侧线鳞数：13～20；和/或

(h)第一鳃弓外侧鳃耙数：27～31；和/或

(i)生长快：在3000～4000尾/亩密度下，池塘饲养6个月，体重达600～800克；

或者，所述的“萨罗”鱼满足以下至少一个条件：

(a)体色灰白，腹侧珍珠蓝，背部橘黄或金黄，成体颊部有一显著黑斑；和/或

(b)头长与全长的比例为0.27～0.29；和/或

(c)背鳍D：XV～XVI·10～12；和/或

(d)臀鳍A：III·8～10；和/或

(e)侧线上鳞：3～4；和/或

(f)上侧线鳞数：18～21；和/或

(g)下侧线鳞数：10～12；和/或

(h)在20～35盐度的海水中正常生长。

在另一优选例中，步骤(1)中，所述的成熟亲鱼满足以下条件：所述成熟亲鱼为2～4年龄，“尼罗罗非”鱼体重不低于500g，“萨罗”鱼体重不低于200g。

其中，D是背鳍的代号，A是臀鳍的代号，罗马数字(如XV～X VII)代表硬棘数量，阿拉伯数字(如12～14)代表软鳍条数量。

在另一优选例中，还包括步骤(3)：

对步骤(2)获得的杂交鱼进行培育和繁殖(可正常自然繁殖)，从而获得遗传稳定的、可育的后代鱼，所述杂交鱼能在盐度为0～32的水中生长。

较佳的，所述的杂交鱼能在盐度为0～32的水中生长；更佳的，所述的杂交鱼能在盐度为10～25的水中生长；如生长于盐度为20～25的海水中。

在另一优选例中，所述的方法包括：

(i)选用“新吉富尼罗罗非”鱼♀ד萨罗”鱼

作为杂交组合；

(ii)在水温26～32℃时，在步骤(i)中选择后腹部饱满、柔软，生殖孔突起，体格健壮，体形较好的“新吉富尼罗罗非”鱼♀，挑选轻按腹部即有清白色精液流出的“萨罗”鱼

，按2∶1的雌雄比例，放入网箱中，充气以保证溶氧充足；

(iii)采用催产素绒毛膜促性腺激素和促黄体生成素释放激素类似物注射亲鱼；“新吉富尼罗罗非”鱼♀采用1～2次注射，“萨罗”鱼

采用1次注射；

(iv)将步骤(ii)注射催产激素后的亲鱼放入网箱；当水温在26～30℃，在催产素效应时间20～30小时后；捕起雌性“新吉富尼罗罗非”，揩干其身体上的水分，将成熟卵子挤入洁净干燥的容器中；随即取出雄性“萨罗”鱼，揩干其身体上水分，挤出精液至刚排出的卵上；用快速拌匀卵和精，再倒入已充分曝气的氯化钠溶液(优选氯化钠浓度在0.65～0.9％)，使卵子受精1～3分钟；

(v)将受精卵倒入孵化器中进行流水孵化；孵化采用充分曝气的水，水温保持在26～30℃，调节孵化器中水流至卵能上下翻动；

(vi)在孵化过程中，每隔0.5～1小时，查看孵化器里的情况，将死亡的卵吸去；和

(vii)孵化结束，获得适合海水养殖的鱼类。

本发明的其它方面由于本文的公开内容，对本领域的技术人员而言是显而易见的。

附图说明

图1显示了不同盐度下杂交鱼与父本的绝对增重率比较。

图2显示了“新吉富”罗非鱼♀ד萨罗”鱼

的杂交F1代鱼的形态特征。

具体实施方式

为了开发适合于在海水中生长和繁育的鱼类，本发明人经过了长期而反复的试验，意外地发现“萨罗”鱼特别适合作为与“尼罗罗非”鱼远缘杂交的对象，其杂交后代可育，不仅具有生长速度快、抗逆性强、肉质好的特性，而且还能够在海水中正常生长。并且，本发明人在长期的研究过程中积累了丰富的经验，优化了“尼罗罗非”鱼与“萨罗”鱼的杂交后代的培育方法，在此基础上完成了本发明。

“萨罗”鱼(Sarotherodon melanotheron)，与“尼罗罗非”鱼同为鲈形目(Perciformes)，丽鱼科(Cichlidae)，但为不同属。“尼罗罗非”鱼归“罗非”鱼属(Oreochromis)，而“萨罗”鱼归“萨罗”鱼属(Sarotherodon)，它们的亲缘关系较远。

“新吉富”罗非鱼是尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus)的选育良种，其特点是：(1)生长快，抗逆性强，规格齐；(2)体型高，出肉率高；(3)尾鳍条纹典型个体比例高，易识别；(4)遗传纯度高，具可检测的特有分子遗传标记。但其耐盐性不强，不能在海水中养殖。所述的“新吉富”罗非鱼可简称为“新吉富”鱼。

“萨罗”鱼具有较强的耐盐性，据报道，在盐度为35时可正常繁殖。然而，这种鱼尽管耐盐性良好，但因其生长速度慢，养殖价值并不大。

除非另外解释或说明，本发明中涉及的术语与本领域常用的术语相同，例如，所述的“亲本”和“亲鱼”可以互相交换使用。所述“亲本”或“亲鱼”是指“父本”或“母本”。所述的“雌鱼”即为“母本”，所述的“雄鱼”即为“父本”。

本发明中，所述的“远缘杂交”是指杂交亲本之间的亲缘关系较远，超过种内关系的杂交。远缘杂交可分为种间杂交、属间杂交、亚科间杂交等，通常亲缘关系越远的杂交成功率越低，普遍存在受精率和孵化率极低、后代不能正常发育和繁育等问题。找到合适的、理想的远缘杂交对象是远缘杂交技术的难点，通过远缘杂交获得可正常生长，正常繁殖的后代尤为困难。“尼罗罗非”鱼与“萨罗”鱼的杂交组合为属间的“远缘杂交”。

本发明中，“母本”也可以以符号“♀”表示；“父本”也可以以符号

表示。

本发明中，所述的“杂交”包括“正交”或“反交”，所述的“正交”为“尼罗罗非”鱼♀ד萨罗”鱼

，正交获得的后代也可称为“尼萨”鱼；所述的“反交为“萨罗”鱼♀ד尼罗罗非”鱼

，“反交”的后代也可称为“萨尼”鱼。

本发明中，水的盐度可以采用本领域常规测量盐度的方法进行测定，本发明没有特别的限制。以往，盐度用千分比(‰)，如“30‰”，转换为目前的表示方式，为“盐度30”，或“30个盐度”。

不同属的两种鱼由于亲缘关系较远，因此要成功地获得它们的杂交后代存在诸多的困难，例如：亲本雌鱼与亲本雄鱼合适的成熟度的掌握，人工授精时易于出现假受精现象，受精成功率极低，子代畸形率高等。因此，要得到性状良好的“萨罗”鱼与“尼罗罗非”鱼子代鱼，需要优化各种杂交条件，从而提高杂交的成功率。

因此，本发明人在经过长期而反复的试验研究之后，成功地找到了一种适合海水养殖的鱼类的育种方法，所述方法包括如下步骤：(1)将“尼罗罗非”鱼与“萨罗”鱼作为杂交组合，从成熟的雌性亲鱼取卵，从成熟的雄性亲鱼取精，将卵和精混匀，从而获得杂种受精卵；和(2)孵育(1)获得的受精卵，从而得到杂交鱼。

在自然情况下，“尼罗罗非”鱼通过雌性鱼口含的方式孵卵，“萨罗”鱼通过雄性鱼口含的方式孵卵；并且，雌性亲鱼的卵在自然情况下是分批成熟的；因此，通过让鱼自行孵卵的方式可操作性极差，极难控制。考虑到上述因素以及远缘杂交的困难性，本发明人选择了人工授精的方式来制备受精卵，也即采用离体方式制备受精卵并孵育鱼苗，而并没有选择通过亲本之间自然交配培育后代杂交鱼。

作为本发明的优选方式，所述的“尼罗罗非”鱼是“新吉富”品种。

在亲本的选择上，本发明人发现，选择体质健壮、色泽正常、体厚背高，年龄为2～4龄的亲鱼，“尼罗罗非”鱼体重不低于500g，“萨罗”鱼体重不低于200g，可以获得较好的卵子和精子，在人工授精后，获得的受精卵质量较高，从而可提高杂交的成功率。

所述的杂交可以是正交或反交，所述的正交为“尼罗罗非”鱼♀ד萨罗”鱼，所述的反交为“萨罗”鱼♀ד尼罗罗非”鱼

。本发明人通过检测正交后代和反交后代的生长情况、繁殖情况发现，反交后代鱼的生长速度不如正交后代鱼，且繁殖能力也不如正交后代鱼。因此，作为本发明的优选方式，采用正交的方式进行杂交。

作为本发明的优选方式，用于杂交取精或取卵时，选择的雌性亲鱼与雄性亲鱼的比例在2∶1左右是合适的，可以得到相对于卵子或精子数而言较高比例的受精卵，该比例也是最为经济的。

作为本发明的优选方式，步骤(1)中，在取卵或取精前，对雌性亲鱼和/或雄性亲鱼注射催产素。对母本注射催产素可以促进卵子的成熟和同步排卵；对父本注射催产素可以促进精子的产生。

所述的催产素优选的是：绒毛膜促性腺激素(HCG)和/或促黄体生成素释放激素类似物(LRH-A2)。较佳的，绒毛膜促性腺激素单次注射的剂量为：1500～2500单位(优选2000单位)/Kg鱼体重、促黄体释放激素类似物单次注射的剂量为：4～6微克/Kg鱼体重。

在分别获得了卵子和精子后，可将卵子和精子在适当的介质中混匀，从而促使卵子受精，这个步骤是人工授精技术中非常关键的，决定了杂交的成败。经过了无数次的试验后，本发明人意外地发现，在取得雌性亲鱼与雄性亲鱼的卵子和精子后，将它们置于氯化钠溶液中受精可很有效地提高杂交的成功率，成功率可提高30％以上。

优选地，所述的氯化钠溶液中氯化钠的浓度按照重量体积比在0.65～1.5％范围内，更佳的氯化钠的浓度是0.65～0.9％范围内。适合浓度的氯化钠溶液为卵子的受精提供了良好的条件(如适当的渗透压)，从而有利于提高受精成功率，降低受精卵死亡率，降低杂交子代的畸形率。

更优地，所述的氯化钠溶液是经过充分曝气的氯化钠溶液，如曝气1～2天。卵受精的时间为0.5～10分钟；优选1～3分钟。

所获得的受精卵可在常规的鱼类孵化器中进行孵化。在进行孵化时，水温条件的选择对于成功获得鱼苗也是较为重要的。作为本发明的优选方式，较佳的水温条件是26～32℃，优选26-30℃，如27℃，28℃。在所述的水温条件下，受精卵可较好地发育和孵化，有效减少受精卵夭折的可能性，减少孵化的畸形率，从而可获得尽可能多的鱼苗。

本发明人发现，将原本口孵的卵子进行离体孵化，保持孵化器中一定的水流动也是非常有利于受精卵的孵化的；优选地，调节孵化器中水流至受精卵能缓慢地上下翻动。在孵化过程中，及时地去除孵化器内出现的死亡卵子。在26～30℃孵化水温条件下，通常在受精孵化5～7天(如约6天)后，受精卵可形成鱼苗。

获得的鱼苗在平游后即可入池，入池后3天卵黄囊未吸收尽，不喂食；第4天开始，喂饲适量的蛋黄；每3天加量喂食蛋黄，从而使得鱼苗良好地生长发育；在使用蛋黄喂食8～12天后，改用常规的粉状饲料进行喂饲，每天喂4～7次。

在获得了F1代杂交鱼后，还包括步骤：对获得的杂交鱼进行培育、养成，通过正常的自然交配繁殖，以批量地生产F2代杂交鱼，从而满足养殖生产的需要。

本发明人检测了杂交后代的平均成活时间(Mean survival time，MST)，发现在盐度为32的海水中，试验鱼的平均成活时间大于1小时。将健康试验鱼从淡水直接移入盐度为32的海水后，鱼的50％成活时间(Median survival time，ST50)大于3小时。而在盐度为20～25条件下，正、反交鱼均能成活和生长。

本发明获得的杂交鱼能在盐度为0～32的水中生长；较佳的，所述的杂交鱼能在盐度为0～32的水中生长；更佳的，所述的杂交鱼能在盐度为10～25的水中生长；如可在盐度为20～25的海水中正常生长。

本发明的方法获得的杂交鱼具有保留了亲本的优势、兼具优良生长性能和耐盐性能、能在海水中正常养殖。从性状特征来看，本发明的方法获得的杂交鱼形似“萨罗”鱼，但有部分可数性状与“新吉富”鱼相似；在遗传学方面，杂交鱼既继承了“萨罗”鱼的遗传物质，又继承了“新吉富”鱼的遗传物质。并且，所述的杂交鱼的后代性状稳定，具有良好的耐盐性，可正常繁育，且生长速度较快，肉质鲜美。同时，本发明的方法获得的杂交鱼在盐度为20度的条件下的生长速度是父本“萨罗”鱼的4倍多，耐盐性能较其母本“新吉富”鱼(在20盐度下不能存活)有了极大的提高，且肉质似海鱼，无泥腥味。

本发明人将获得的杂交后代称为“尼萨”鱼(正交)或“萨尼”鱼(反交)，也称为“吉丽罗非鱼”或“吉丽”鱼。

本发明的主要优点在于：

(1)本发明意外地找到了一组适合于属间远缘杂交的对象，以生产速度快的“尼罗罗非”鱼和耐盐性强的“萨罗”鱼和为主要遗传材料，通过远缘杂交，培育出了耐盐性和生长速度兼优的具有杂交优势的罗非鱼新品种——“吉丽”罗非鱼。

(2)本发明优化了“尼罗罗非”鱼和“萨罗”鱼人工授精技术以及受精卵离体孵育技术，从而大大提高了获得杂交后代的成功率，为大规模养殖该鱼类杂交新品种提供了良好的条件。

(3)在海水中养殖的“吉丽”罗非鱼，不仅没有淡水养殖罗非鱼常有的土腥味，而且肉质紧密富弹性，品质好，极具商业应用价值。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。

实施例1.雌雄双亲群体的选择

(1)新吉富罗非鱼种质特征

①遗传型特征

“新吉富”群体的遗传多样性为10.5±0.5％，平均杂合度不大于0.027；个体间平均遗传相似度大于92.7％。

②表型特征

(a)成鱼身体两侧有与体轴垂直、平行的点状条带7～9条。

(b)背鳍、臀鳍及尾鳍上均有黑白相间的斑点，在背、臀鳍上呈斜向排列，尾鳍上的斑点呈线条状垂直、平行排列，成鱼在13条以上；性成熟雄鱼的尾鳍及背鳍边缘呈红色。背鳍边缘黑色；幼鱼阶段背鳍有一个大而显著的斑点，以后逐渐消失；体型较高；

(c)体长与体高的比例不低于2.18；

(d)背鳍D：XV～X VII·12～14；

(e)臀鳍A：III·8～10；和/或

(f)上侧线鳞数：13～26；

(g)下侧线鳞数：13～20；

(h)第一鳃弓外侧鳃耙数：27～31。

(2)萨罗鱼种质特征

(a)体色灰白，腹侧珍珠蓝，背部橘黄或金黄，成体颊部有一显著黑斑；

(b)头长与全长的比例为0.27～0.29；

(c)背鳍D：XV～XVI·10～12；

(d)臀鳍A：III·8～10；

(e)侧线上鳞：3～4；

(f)上侧线鳞数：18～21；

(g)下侧线鳞数：10～12。

(3)配种亲鱼的个体选择

选择体质健壮、色泽正常、体厚背高，年龄为2～4龄的亲鱼。

雄鱼腹部后方有两个开口，前为肛门，后为泄殖孔。

雌鱼在腹部后方紧邻着有3个开口，依次为肛门、生殖孔和泌尿孔。

在进行挑选时，成熟雄鱼选择有明显的婚姻色，体色鲜艳，尾鳍变红，腹部粉红，全身棕红，且轻压腹部可挤出少量清白色精液。

在进行挑选时，成熟雌鱼选择后腹部饱满、柔软，生殖乳突大而突出，孔围呈现红晕。

实施例2.亲鱼池的准备、亲鱼的配组及饲养

亲鱼池面积为50m²左右。水位在100～120cm。亲鱼下池前用生石灰或漂白粉进行清池消毒。

按雌雄比例2∶1进行亲鱼饲养。下池前用3％的食盐水浸泡消毒。在繁殖初期一是看水质情况施放追肥；二是投喂罗非鱼专用人工配合饲料，适当搭配一些有利于性腺发育的青饲料，如浮萍、苦荬菜等。配合饲料投喂量为鱼体总重量的3～5％，每天投喂两次，并根据水色、天气情况、鱼体活动情况等及时调整投喂量。

实施例3.亲鱼的人工授精及其育苗孵化

在水温达26℃以上时，拉网检查两种罗非鱼性腺发育情况。选择后腹部饱满、柔软，生殖孔突起并发红，体格健壮体形较好的“新吉富”鱼作为母本；杂交父本则挑选轻按腹部即有乳白色精液流出的雄“萨罗”鱼，同时按雌雄比2∶1选两种亲鱼，本实施例选择雌性鱼20条、雄性鱼10条。

将上述亲鱼放入网箱中；采用催产素进行人工注射，催产素分别为：绒毛膜促性腺激素(HCG)剂量为：2000单位/Kg鱼体重、促黄体释放激素类似物(LRH-A2)剂量为：4～6微克/Kg鱼体重。母本“新吉富”鱼采用2次注射，间隔8～10小时，对雄性“萨罗”鱼可注射1次催产素；将亲鱼注射催产激素后，放入网箱中饲养。

当水温在26～30℃，效应时间一般为20～30小时；取出网箱中的雌性“新吉富”鱼，用纸揩干其身体上的水分，将成熟卵子挤入洗净并擦干的白瓷碗中，随即取出雄性“萨罗”鱼，揩干水分，挤出清白色精液至刚排出的卵上，用干净、柔软的毛笔快速拌匀，倒入已充分曝气的氯化钠溶液中(氯化钠浓度在0.65％至0.9％)，使卵受精1～3分钟。

然后，将受精卵倒入准备好的孵化器中进行流水孵化，孵化采用充分曝气的水，水温在26～30℃，调节孵化器中水流至卵能上下翻动为好；在孵化过程中，每隔0.5～1小时，查看孵化器里的状况，随时将死亡的卵吸去。过大约5～6天后，小苗孵出。

反交(“萨罗”鱼♀ד新吉富”鱼

)的条件和处理方法与正交(“新吉富”鱼♀ד萨罗”鱼

)基本相同。

实施例4.苗种培育

用漂白粉对池子进行彻底消毒，暴晒3天后，加入池塘肥水。加水时用细筛绢过滤，以免带入其它鱼苗和大型浮游生物。鱼苗平游后即可入池，入池后3天卵黄囊未吸收尽，不喂食。第4天开始，每天每池喂2个蛋黄，每3天加一个蛋黄，共喂10天，然后改喂粉状饲料，每天喂4～7次。

本发明人将获得的正交后代称为“尼萨”鱼，也称为“吉丽罗非鱼”或“吉丽鱼”。该杂交后代的外观形态如图2所示。

在一批试验中，本发明人采取实施例3的方法，不同处在于将成熟卵子和精子放在白瓷碗中后，倒入常规的水，使卵受精1～3分钟。多次试验发现，该方法获得的受精卵的质量低于采用氯化钠溶液的情况，最终获得鱼苗的数量比采用实施例3的方法少30％以上。

在另一批试验中，本发明人采取实施例3的方法，不同处在于孵化时水温在22～25℃，且孵化时不采用流水孵化而使受精卵静置于水中，结果发现，孵化时间可拖延至2周，孵化率极低。

实施例5.杂交种尼萨鱼在不同盐度下的生长性能

2006年，在河北中捷国家级罗非鱼良种场对杂交种“尼萨”鱼及其父本“萨罗”鱼进行了不同盐度下生长对比试验。结果发现，杂交种在20～25盐度下生长速度最快，其绝对增重率是其父本“萨罗”鱼的4倍多，不同盐度下杂交种及其父本的绝对增重率、瞬时增重率以及成活率等的计算结果如表1和图1所示。

表1

实施例6.杂交种尼萨鱼耐盐性能

耐盐指标如下：

(1)平均成活时间(Mean survival time，MST)

将健康试验鱼从淡水直接移入盐度为32的海水中，记录每尾试验鱼的成活时间，然后计算每种鱼的所有鱼的平均值，即为该种鱼的平均成活时间。

(2)50％成活时间(Median survival time，ST₅₀)

将健康试验鱼从淡水直接移入盐度为32的海水后，记录正好只有一半鱼存活的时间。

(3)96h半致死盐度(Median lethal salinity-96h，MLS-96)

将健康试验鱼直接移入各种盐度梯度中，记录饲养96h后各盐度中试验鱼的死亡数目，通过Excel软件作出盐度与死亡数目的相关曲线，一半试验鱼死亡所对应的盐度即为96h半致死盐度的观察值。

对杂交种及其亲本进行了耐盐试验，杂交后代及其亲本的平均体重、平均存活时间、50％存活时间、96h半致死盐度的比较结果见表2，从表中可以清楚地看到，杂交种的各项耐盐指标较其母本“新吉富”鱼有了很大提高，这说明杂交种适合在咸水中养殖。

表2

实施例7.杂交种尼萨罗非鱼遗传多样性分析

采用6对微卫星引物对杂交种及其亲本进行遗传多样性分析，各遗传指标的分析结果见表3，可以看出杂交种的各遗传指标都比其亲本大，表现了显著的杂交优势。

表3

分析杂交种的可育性，发现杂交种可正常地自然繁殖，正交鱼(“新吉富”鱼♀ד萨罗”鱼

)的繁殖情况与“新吉富”鱼基本相同，即1对雌雄鱼能够繁殖1000～2000条子代鱼。

实施例8.“新吉富”鱼与“萨罗”鱼亲本对耐盐罗非鱼杂种优势贡献力的评估

以原始亲本“新吉富”鱼和“萨罗”鱼为对照，正交鱼(“新吉富”鱼♀ד萨罗”鱼)自繁第二代(F₂)和反交鱼(“萨罗”鱼♀ד新吉富”鱼

)自繁第二代(F₂)为试验对象，观察和比较它们在0、15、20及25盐度中的耐盐性和生长性能，并估算杂种优势及亲本的贡献力。

结果如下：

(1)具有良好的耐盐性，盐度20～25是正、反交鱼的适宜生长盐度，它们在这一范围盐度里的日均增重率为“新吉富”鱼在盐度0下的75％左右、“萨罗”鱼在盐度25下的4倍左右，表明杂交后代的生长速度比较接近“新吉富”鱼，远优于“萨罗”鱼。在盐度25条件下，正交鱼比反交鱼生长快7％左右。正交后代和反交后代均是可育的，但正交鱼后代表现出相对更好的可育性。

(2)在盐度15与20下，生长速度和体重变异系数的杂种优势较明显，未发现不同盐度会导致正反交鱼成活率有显著变化。

(3)不同亲本鱼类的强势性状，如“新吉富”鱼的快速生长、“萨罗”的高耐盐性，对杂交后代的不同性状在不同盐度中有不同的贡献力。运用公式F₁≤a₁P₁+a₂P₂(其中，F₁代表正反交子代平均值，a₁和a₂代表系数，P₁和P₂分别代表亲本1和亲本2某性状的平均值)进行估算。

结果表明，对杂交后代在15～25盐度下的生长率，“新吉富”鱼的杂种优势贡献力比萨罗的大3～4倍；对杂交后代在25盐度下的耐盐性，“新吉富”鱼的贡献力几乎为零，而“萨罗”鱼的贡献力几乎为100％，可见杂交后代良好地保留了父本和母本的优势。

实施例9.“尼萨”鱼的养殖示范

2007年8月17日，从河北中捷罗非鱼良种场运送平均体重为1～2g的耐盐“尼萨”鱼至广东茂名5000尾、海南海口12000尾。在广东茂名，同南美北对虾一起，混养于4只盐度为24的养虾池内，在海南文昌，饲养于盐度为18的对虾三池内。

经82天饲养，长到150-200克。证明在18～24的盐度里，饲养5～6个月(5月份-10月份)可以长到400～500克的商品鱼规格。

2008年6月起，进一步在广东茂名市冠利达水产公司的养虾基地开展“尼萨”鱼的单养和鱼虾混养试验，目前鱼的生长良好。

在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims (10)

1.一种适合海水养殖的鱼类的育种方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：

(1)将“尼罗罗非”鱼与“萨罗”鱼作为杂交组合；

(2)从成熟的雌性亲鱼取卵子，从成熟的雄性亲鱼取精子，将卵子和精子在氯化钠溶液中混匀，其中氯化钠的浓度按照重量体积比在0.65～1.5％，从而获得杂种受精卵；和

(3)孵育(2)获得的受精卵，从而得到杂交鱼，所述杂交鱼是适合海水养殖的鱼类。

2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的杂交包括正交或反交，所述的正交为“尼罗罗非”鱼♀ד萨罗”鱼

所述的反交为“萨罗”鱼♀ד尼罗罗非”鱼

较佳地，采用正交的方式进行杂交。

3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，选择年龄为2～4龄的亲鱼；且“尼罗罗非”鱼的体重不低于500g，“萨罗”鱼的体重不低于200g。

4.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，其中雌性亲鱼与雄性亲鱼的比例是2∶1。

5.如权利要求l所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，在取卵或取精前，对雌性亲鱼和/或雄性亲鱼注射催产素。

6.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(2)中，卵子和精子混匀的时间是0.5～10分钟；较佳地1～3分钟。

7.如权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，包括：将受精卵在鱼类孵化器中进行流水孵化，水温保持在26～32℃，调节孵化器中水流至受精卵能上下翻动。

8.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的“尼罗罗非”鱼满足以下至少一个条件：

(a)身体两侧有与体轴垂直、平行的条纹7～9条；和/或

(b)尾鳍上垂直或平行排列的斑点条纹13条以上；和/或

(c)体长与体高的比例不低于2.18；和/或

(d)背鳍D：XV～XVII·12～14；和/或

(e)臀鳍A：III·8～10；和/或

(f)上侧线鳞数：13～26；和/或

(g)下侧线鳞数：13～20；和/或

(h)第一鳃弓外侧鳃耙数：27～31：和/或

(i)生长快：在3000～4000尾/亩密度下，池塘饲养6个月，体重达600～800克；

或者，所述的“萨罗”鱼满足以下至少一个条件：

(a)体色灰白，腹侧珍珠蓝，背部橘黄或金黄，成体颊部有一显著黑斑；和/或

(b)头长与全长的比例为0.27～0.29；和/或

(c)背鳍D：XV～XVI·10～12；和/或

(d)臀鳍A：III·8～10；和/或

(e)侧线上鳞：3～4；和/或

(f)上侧线鳞数：18～21；和/或

(g)下侧线鳞数：10～12；和/或

(h)在20～35盐度的海水中正常生长。

9.如权利要求1所述的方法，其特征在于，还包括步骤(4)：

对步骤(3)获得的杂交鱼进行培育和繁殖，从而获得遗传稳定的、可育的后代鱼，所述杂交鱼能在盐度为0～32的水中生长。

10.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的方法包括：

(i)选用“新吉富尼罗罗非”鱼♀ד萨罗”鱼

作为杂交组合；

(ii)在水温26～32℃时，在步骤(i)中选择后腹部饱满、柔软，生殖孔突起，体格健壮，体形好的“新吉富尼罗罗非”鱼♀，选择轻按腹部即有清白色精液流出的“萨罗”鱼

按2∶1的雌雄比例，放入网箱中，充气以保证溶氧充足；

(iii)采用催产素绒毛膜促性腺激素和促黄体生成素释放激素类似物注射亲鱼；“新吉富尼罗罗非”鱼♀采用1～2次注射，“萨罗”鱼

采用1次注射；

(iv)将步骤(ii)注射催产激素后的亲鱼放入网箱；当水温在26～30℃，在催产素效应时间20～30小时后；捕起雌性“新吉富尼罗罗非”鱼，揩干其身体上的水分，将成熟卵子挤入洁净干燥的容器中；随即取出雄性“萨罗”鱼，揩干其身体上水分，挤出精液至刚排出的卵上；快速拌匀卵和精，再倒入已充分曝气的氯化钠溶液，使卵子受精1～3分钟；

(v)将受精卵倒入孵化器中进行流水孵化；孵化采用充分曝气的水，水温保持在26～30℃，调节孵化器中水流至卵能上下翻动；

(vi)在孵化过程中，每隔0.5～1小时，查看孵化器里的情况，将死亡的卵吸去；和

(vii)孵化结束，获得适合海水养殖的鱼类。

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