CN102792910B - 一种金鳟全雌杂交苗种的培育方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种金鳟全雌杂交苗种的培育方法。本发明使用雄性激素诱导性成熟期的雌性硬头鳟亲鱼获得具有雄性功能的硬头鳟伪雄鱼；使金鳟亲鱼卵子与硬头鳟伪雄鱼精子受精，孵化，获得全雌杂交金鳟鱼苗种。孵化期间受精卵发眼率为83%以上，苗种孵化率达到90%以上，得到的鱼苗经检测，雌性率为100%，苗种金鳟率（体色为金黄色）达到91%以上，苗种培养30天增重率为114%以上，成活率达到98%以上。本发明提供的金鳟全雌杂交苗种培育方法与纯种金鳟交配产生的苗种相比，既保持金鳟率不变，又获得了具备杂交和全雌双重优势的金鳟苗种，具有较好的经济效益和市场价值。
Description
技术领域
本发明涉及水产生物育种技术领域，具体地涉及金鳟全雌杂交鱼苗种的培育方法。
背景技术
鲑鳟鱼是目前世界上主要养殖的鱼类之一,自然条件下它们多生长于常年水温不超过20℃、水质为贫营养性、没有化学污染和有机污染的低温泉水或清澈的溪流中，因此又称之为冷水性鱼类。由于鲑科鱼类对生存水质有非常高的要求，略有污染即无法生存，所以鲑鳟鱼体干净，无任何污染，是名副其实的无公害绿色食品，吃起来放心。另外，鲑鳟鱼是一种高蛋白、高脂肪、低胆固醇(胆固醇含量微乎其微)的鱼类。和其它鱼相比，鲑鳟鱼含有一般鱼类所缺乏的甘氨酸，维生素A、B的含量也高于其它鱼类，微量元素铁的含量更是其它鱼类所不及。鲑鳟鱼肉质鲜嫩，无邪味，无腥味，无需刮鳞，人每周吃两次鲑鳟鱼就可以预防血栓病的发生。意大利专家一项最新的研究结果表明，吃含有鲑鳟鱼的保健品能够大幅度减少心脏病患者突然死亡的风险。每天吃1克用鲑鳟鱼鱼油提炼的DHA，将会减少心脏病发作时突然死亡的风险。因此，鲑鳟鱼是一种肉质鲜美且具有保健价值的鱼类。由于其自身的品质和对生活环境的特殊要求,决定了它绿色、环保营养食品的性质,因此颇受消费者的青睐。鲑鳟鱼是我国目前主要的冷水性养殖鱼类,由于长期近亲繁殖、缺乏系统选育等原因,导致养殖个体出现了性早熟、个体小型化、病害滋生等问题,不能满足消费者对大规格鲑鳟鱼的需求，造成养殖效益下降。
研究表明：杂交能够急剧的动摇遗传的保守性，使杂种的遗传性富于游动性，具有更大的可塑性，从而能迅速和显著地提高杂种的生活力，进而获得杂种优势；杂种能丰富遗传结构，通过杂交将两个以上遗传基础不同的品种或种以上个体的基因自由组合，出现新的遗传类型，继而人们可以选择优良的个体，培育成新品种。正常情况下，雌鱼的性成熟比雄鱼晚1年，由于性成熟又引起生产停滞、肉质下降，为了避免因性成熟早而影响鱼的产量和质量，进行杂交全雌性养殖是一个有效提高养殖效益的途径。
国内对鲑鳟鱼杂交苗种制备的研究主要集中在虹鳟与溪红点鲑的杂交苗种制备、虹鳟与山女鳟的杂交苗种制备、虹鳟与金鳟的杂交苗种制备等，对鲑鳟鱼全雌苗种制备的研究主要集中在虹鳟纯种全雌苗种的制备方面，其方法为：用人工诱导雌核发育技术获得全雌二倍体苗种,再通过投喂雄性激素诱导全雌二倍体苗种成为伪雄鱼,培育至性成熟后利用原雌鱼与假雄鱼进行人工繁殖。该方法操作相对繁琐，需要先获得全雌二倍体苗种，再对苗种进行雄激素诱导，培育至性成熟，待伪雄鱼性腺发育成熟后再进行后续受精工作，整个过程耗时将近3年，因此该方法费时费力，且由于是纯种繁育，故培育的种苗缺少杂交优势。
金鳟（Oncorhynchus mykiss）体呈金黄色，是虹鳟的一个体色分离种，为常见的冷水性养殖鱼类。目前对金鳟全雌杂交鱼苗种的制备技术的研究尚未见有报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种金鳟全雌杂交苗种培育方法，以克服现有技术的不足。
本发明提供的金鳟全雌杂交苗种的培育方法，包括以下步骤：
1）用雄性激素诱导性成熟期的雌性硬头鳟亲鱼获得具有雄性功能的硬头鳟伪雄鱼；
2）使金鳟亲鱼卵子与硬头鳟伪雄鱼精子受精；
3）受精卵孵化。
其中，步骤1）所述性成熟期的硬头鳟亲鱼为3龄以上，体重≥2.5kg。
其中，步骤1）所述雄性激素诱导性成熟期的雌性硬头鳟亲鱼的方法为，将含雄性激素40-100mg/kg的鱼饲料投喂雌性硬头鳟亲鱼70-100d；之后，改用不含雄性激素的鱼饲料投喂4-6个月，获得具有雄性功能的硬头鳟伪雄鱼。
进一步地，步骤1）所述雄性激素诱导性成熟期的雌性硬头鳟亲鱼的方法为，将含雄性激素40-50mg/kg的鱼饲料投喂雌性硬头鳟亲鱼90d；之后，改用不含雄性激素的鱼饲料投喂5个月，获得具有雄性功能的硬头鳟伪雄鱼。
其中，步骤1）的雄性激素为17α甲基睾丸酮（17α-methyltestosterone）。
进一步地，所述17α甲基睾丸酮添加入饲料前，用浓度≥60%的酒精进行溶解，17α甲基睾丸酮与酒精的质量体积比为1mg：1~4ml。将溶解后的17α甲基睾丸酮溶液用清水稀释10倍后均匀喷洒于亲鱼饲料上，搅动，使混合均匀，备用。
本发明提供的金鳟全雌杂交苗种的培育方法中，步骤2）所述硬头鳟伪雄鱼精子是通过以下方法获得的：机械破碎伪雄鱼精巢，获得精液后，将精子激活液与伪雄鱼精液按照体积比20-30：1混合进行激活，所述精子激活液1L配方为NaCl 7.60g，KCl 2.98g，CaCl2·2H2O0.37g，MgCl2·6H2O 0.31g，NaHCO3 0.21g，加蒸馏水至1000ml，调节pH值为8.0-10.0；激活条件为2-6℃激活3-4h。
优选地，将精子激活液与伪雄鱼精液按照体积比25：1混合进行激活，所述精子激活液pH值为9.0；激活条件为4℃激活3h。
干法受精法，取金鳟雌鱼卵与激活后的硬头鳟伪雄鱼精液进行受精。
本发明方法中，步骤3）所述孵化条件为受精卵在8-10℃养殖用水中孵化45-65d。
本发明方法中，所述金鳟为红眼金鳟。
本发明提供了上述方法在金鳟全雌杂交苗种育种工作中的应用。
本发明使用雄性激素诱导性成熟期的雌性硬头鳟亲鱼获得具有雄性功能的硬头鳟伪雄鱼；使金鳟亲鱼卵子与硬头鳟伪雄鱼精子受精，孵化，获得全雌杂交金鳟鱼苗种。实验检测发现，本发明方法制备的全雌杂交金鳟鱼孵化期间受精卵发眼率为83%以上，苗种孵化率达到90%以上，得到的鱼苗经检测，雌性率为100%，苗种金鳟率（体色为金黄色）达到91%以上，苗种培养30天增重率为114%以上，成活率达到98%以上。本发明提供的金鳟全雌杂交苗种培育方法与纯种金鳟交配产生的苗种相比，既保持金鳟率不变，又获得了具备杂交和全雌双重优势的金鳟苗种，且制苗时间短，仅9个月左右，大大缩短了养殖周期，降低了养殖成本，具有较好的经济效益和市场价值。
具体实施方式
以下实施例进一步说明本发明的内容，但不应理解为对本发明的限制。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。
若未特别指明，实施例中所用的技术手段为本领域技术人员所熟知的常规手段。本发明的硬头鳟亲鱼和红眼金鳟亲鱼均为北京市水产科学研究所由北欧玛生物科技有限公司购买的发眼卵培育而成。17α甲基睾丸酮购自德国SIGMA公司，纯度98%以上。
本发明使用的精子激活液1L配方为NaCl 7.60g，KCl 2.98g，CaCl2·2H2O 0.37g，MgCl2·6H2O 0.31g，NaHCO3 0.21g，加蒸馏水至1000ml。
实施例1 全雌杂交苗种培育方法（1）
1、用纯度为65%的酒精溶解17α甲基睾丸酮，17α甲基睾丸酮与酒精的质量体积比为1mg：2ml，溶解后的甲基睾丸酮溶液用清水稀释10倍后，用喷壶均匀的喷于亲鱼饲料上，使饲料中17α甲基睾丸酮的含量为60mg/kg。反复搅动，使其混合均匀，在通风处阴干备用。
2、挑选3龄以上，规格达到2.6kg，性成熟的雌性硬头鳟亲鱼放入单独的养殖池中，投喂步骤1中已配好的含有17α甲基睾丸酮的亲鱼饲料，按照常规的饲养方法喂养100d，之后改投正常的不含17α甲基睾丸酮的亲鱼饲料继续饲喂4个月。在经过17α甲基睾丸酮诱导后又正常饲喂的雌性硬头鳟中，挑选在形态上上颌稍长于下颌、下颌前端向上突起、体色较正常鱼黑的投喂过17α甲基睾丸酮饲料的硬头鳟亲鱼即为假性雄鱼（伪雄鱼）。检测发现，本发明通过17α甲基睾丸酮诱导雌性硬头鳟亲鱼后，获得预期的性腺逆转雄鱼，伪雄鱼的出现率为96%。
取出伪雄鱼的精巢，用研钵磨碎精巢，纱布过滤，精液用pH值为9.5的精子激活液稀释（V/V=1:20），存放于冰箱4℃条件下将精子激活，使其具有正常的精子功能，精子激活时间为3h。
鱼卵采用干法受精。先将发育成熟的红眼金鳟雌鱼采用挤压法将鱼卵挤入干净的水盆内，每4尾雌鱼为1组。再将经激活的硬头鳟伪雄鱼精液倒入有鱼卵的水盆内，立即搅拌均匀，按与激活精液的体积比150:1加入孵化用水，轻轻搅拌，1min后将水倒出，如此反复3次，清洗。
3、将受精卵清洗干净后即可放入8℃的孵化用水的孵化桶中正常孵化。经50天受精卵孵化出鱼苗。孵化出的鱼苗即为体色为金黄色的全雌杂交金鳟。采用该方法处理得到的全雌杂交鱼受精卵发眼率达到84%，苗种孵化率达到94%，苗种雌性比率为100%，苗种金鳟率（即体色为金黄色）达到93%。本发明方法说明与纯种金鳟交配产生的苗种金鳟率相比，本发明方法获得的全雌杂交金鳟苗种的金鳟率不变，同时全雌杂交金鳟苗种又具有杂交和全雌苗种的双重优势。
实施例2 全雌杂交苗种培育方法（2）
1、用纯度为70%的酒精溶解17α甲基睾丸酮，17α甲基睾丸酮与酒精的质量体积比为1mg：1ml。溶解后的甲基睾丸酮溶液用清水稀释10倍后，用喷壶均匀的喷于亲鱼饲料上，使饲料中17α甲基睾丸酮的含量为20mg/kg。反复搅动，使其混合均匀，在通风处阴干备用。
2、挑选3龄以上，规格达到2.5kg，性成熟的雌性硬头鳟亲鱼放入单独的养殖池中，投喂步骤1中已配好的含有17α甲基睾丸酮的饲料，按照常规的饲养方法喂养120d，之后改投正常的不含17α甲基睾丸酮的亲鱼饲料继续饲喂5个月。在经过17α甲基睾丸酮诱导后又正常饲喂的雌性硬头鳟中，挑选在形态上上颌稍长于下颌，下颌前端向上突起、体色较正常鱼黑的投喂过17α甲基睾丸酮饲料的硬头鳟亲鱼即为假性雄鱼（伪雄鱼）。检测发现，本发明通过17α甲基睾丸酮诱导雌性硬头鳟亲鱼后，获得预期的性腺逆转雄鱼，伪雄鱼的出现率为54%。
取出伪雄鱼的精巢，用研钵磨碎精巢，纱布过滤，精液用pH值为8.0的精子激活液稀释（V/V=1:20），存放于冰箱4℃条件下将精子激活，使其具有正常的精子功能，精子激活时间为3h。
鱼卵采用干法受精。先将发育成熟的红眼金鳟雌鱼采用挤压法将鱼卵挤入干净的水盆内，每4尾雌鱼为1组。再将经激活的硬头鳟伪雄鱼精液倒入有鱼卵的水盆内，立即搅拌均匀，按与激活精液的体积比140:1加入孵化用水，轻轻搅拌，1min后将水倒出，如此反复4次，清洗。
3、将受精卵清洗干净后即可放入8℃的孵化用水的孵化桶中正常孵化。经55天受精卵孵化出鱼苗。孵化出的鱼苗即为体色为金黄色的全雌杂交金鳟。
采用该方法处理得到的全雌杂交鱼受精卵发眼率达到85%，苗种孵化率达到94%，苗种雌性比率为100%，苗种金鳟率（即体色为金黄色）达到94%。本发明方法说明与纯种金鳟交配产生的苗种金鳟率相比，本发明方法获得的全雌杂交金鳟苗种的金鳟率不变，同时全雌杂交金鳟苗种又具有杂交和全雌苗种的双重优势。
实施例3 全雌杂交苗种培育方法（3）
1、用纯度为60%的酒精溶解17α甲基睾丸酮，17α甲基睾丸酮与酒精的质量体积比为1mg：2ml溶解后的甲基睾丸酮溶液用清水稀释10倍后用喷壶均匀的喷于亲鱼饲料上，使饲料中17α甲基睾丸酮的含量为40mg/kg。反复搅动，使其混合均匀，在通风处阴干备用。
2、挑选3龄以上，规格达到2.55kg，性成熟的雌性硬头鳟亲鱼放入单独的养殖池中，投喂步骤1中已配好的含有17α甲基睾丸酮的饲料，按照常规的饲养方法喂养90d，之后改投正常的不含17α甲基睾丸酮的亲鱼饲料继续饲喂5个月。在经过17α甲基睾丸酮诱导后又正常饲喂的雌性硬头鳟中，挑选在形态上上颌稍长于下颌，下颌前端向上突起、体色较正常鱼黑的投喂过17α甲基睾丸酮饲料的硬头鳟亲鱼即为假性雄鱼（伪雄鱼）。检测发现，本发明通过17α甲基睾丸酮诱导雌性硬头鳟亲鱼后，获得预期的性腺逆转雄鱼，伪雄鱼的出现率为90%。
取出伪雄鱼的精巢，用研钵磨碎精巢，纱布过滤，精液用pH值为9.0的精子激活液稀释（V/V=1:25），存放于冰箱4℃条件下将精子激活，使其具有正常的精子功能，精子激活时间为3.5h。
鱼卵采用干法受精。先将发育成熟的红眼金鳟雌鱼采用挤压法将鱼卵挤入干净的水盆内，每4尾雌鱼为1组。再将经激活的硬头鳟伪雄鱼精液倒入水盆内，立即搅拌均匀，按与激活精液的体积比145:1加入孵化用水，轻轻搅拌，1min后将水倒出，如此反复4次，清洗。
3、将受精卵清洗干净后即可放入9℃的孵化用水的孵化桶中正常孵化。经53天受精卵孵化出鱼苗。孵化出的鱼苗即为体色为金黄色的全雌杂交金鳟。
采用该方法处理得到的全雌杂交鱼受精卵发眼率达到90%，苗种孵化率达到96%，苗种雌性比率为100%，苗种金鳟率（即体色为金黄色）达到98%。本发明方法说明与纯种金鳟交配产生的苗种金鳟率相比，本发明方法获得的全雌杂交金鳟苗种的金鳟率不变，同时全雌杂交金鳟苗种又具有杂交和全雌苗种的双重优势。
实施例4 全雌杂交苗种培育方法（4）
1、用纯度为70%的酒精溶解17α甲基睾丸酮，17α甲基睾丸酮与酒精的质量体积比为1mg：3ml。溶解后的甲基睾丸酮溶液用清水稀释10倍后用喷壶均匀的喷于亲鱼饲料上，使饲料中17α甲基睾丸酮的含量为50mg/kg。反复搅动，使其混合均匀，在通风处阴干备用。
2、挑选3龄以上，规格达到2.6kg，性成熟的雌性硬头鳟亲鱼放入单独的养殖池中，投喂步骤1中已配好的含有17α甲基睾丸酮的饲料，按照常规的饲养方法喂养90d，之后改投正常的不含17α甲基睾丸酮的亲鱼饲料继续饲喂5个月。在经过17α甲基睾丸酮诱导后又正常饲喂的雌性硬头鳟中，挑选在形态上上颌稍长于下颌，下颌前端向上突起、体色较正常鱼黑的投喂过17α甲基睾丸酮饲料的硬头鳟亲鱼即为假性雄鱼（伪雄鱼）。检测发现，本发明通过17α甲基睾丸酮诱导雌性硬头鳟亲鱼后，获得预期的性腺逆转雄鱼，伪雄鱼的出现率为96%。
取出硬头鳟伪雄鱼的精巢，用研钵磨碎精巢，纱布过滤，精液用pH值为9.0的精子激活液稀释（V/V=1:25），存放于冰箱4℃条件下将精子激活，使其具有正常的精子功能，精子激活时间为3.5h。
鱼卵采用干法受精。先将发育成熟的红眼金鳟雌鱼采用挤压法将鱼卵挤入干净的水盆内，每4尾雌鱼为1组。再将经激活的硬头鳟伪雄鱼精液倒入水盆内，立即搅拌均匀，按与激活精液的体积比150:1加入孵化用水，轻轻搅拌，1min后将水倒出，如此反复4次，清洗。
3、将受精卵清洗干净后即可放入10℃的孵化用水的孵化桶中正常孵化。经55天受精卵孵化出鱼苗。孵化出的鱼苗即为体色为金黄色的全雌杂交金鳟。
采用该方法处理得到的全雌杂交鱼受精卵发眼率达到88%，苗种孵化率达到95%，苗种雌性比率为100%，苗种金鳟率（即体色为金黄色）达到90%。本发明方法说明与纯种金鳟交配产生的苗种金鳟率相比，本发明方法获得的全雌杂交金鳟苗种的金鳟率不变，同时全雌杂交金鳟苗种又具有杂交和全雌苗种的双重优势。
实施例5 全雌杂交苗种培育方法（5）
1、用纯度为75%的酒精溶解17α甲基睾丸酮，17α甲基睾丸酮与酒精的质量体积比为1mg：4ml。溶解后的甲基睾丸酮溶液用清水稀释10倍后用喷壶均匀的喷于亲鱼饲料上，使饲料中17α甲基睾丸酮的含量为100mg/kg。反复搅动，使其混合均匀，在通风处阴干备用。
2、挑选3龄以上，规格达到2.5kg，性成熟的雌性硬头鳟亲鱼放入单独的养殖池中，投喂步骤1中已配好的含有17α甲基睾丸酮的饲料，按照常规的饲养方法喂养70d，之后改投正常的不含17α甲基睾丸酮的亲鱼饲料继续饲喂6个月。在经过17α甲基睾丸酮诱导后又正常饲喂的硬头鳟中，挑选在形态上上颌稍长于下颌，下颌前端向上突起、体色较正常鱼黑的投喂过17α甲基睾丸酮饲料的硬头鳟亲鱼即为假性雄鱼（伪雄鱼）。检测发现，本发明通过17α甲基睾丸酮诱导雌性硬头鳟亲鱼后，获得预期的性腺逆转雄鱼，伪雄鱼的出现率为89%。
取出硬头鳟伪雄鱼的精巢，用研钵磨碎精巢，纱布过滤，精液用pH值为10.0的精子激活液稀释（V/V=1:25），存放于冰箱4℃条件下将精子激活，使其具有正常的精子功能，精子激活时间为4h。
鱼卵采用干法受精。先将发育成熟的红眼金鳟雌鱼采用挤压法将鱼卵挤入干净的水盆内，每4尾雌鱼为1组。再将经激活的硬头鳟伪雄鱼精液倒入水盆内，立即搅拌均匀，按与激活精液的体积比130:1加入孵化用水，轻轻搅拌，1min后将水倒出，如此反复5次，清洗。
3、将受精卵清洗干净后即可放入9℃的孵化用水的孵化桶中正常孵化。经52天受精卵孵化出鱼苗。孵化出的鱼苗即为体色为金黄色的全雌杂交金鳟。
采用该方法处理得到的全雌杂交鱼受精卵发眼率达到81%，苗种孵化率达到92%，苗种雌性比率为100%，苗种金鳟率（即体色为金黄色）达到93%。本发明方法说明与纯种金鳟交配产生的苗种金鳟率相比，本发明方法获得的全雌杂交金鳟苗种的金鳟率不变，同时全雌杂交金鳟苗种又具有杂交和全雌苗种的双重优势。
实施例6 全雌杂交苗种培育方法（6）
1、用纯度为65%的酒精溶解17α甲基睾丸酮，17α甲基睾丸酮与酒精的质量体积比为1mg：2ml。溶解后的甲基睾丸酮溶液用清水稀释10倍后用喷壶均匀的喷于亲鱼饲料上，使饲料中17α甲基睾丸酮的含量为80mg/kg。反复搅动，使其混合均匀，在通风处阴干备用。
2、挑选3龄以上，规格达到2.7kg，性成熟的雌性硬头鳟亲鱼放入单独的养殖池中，投喂步骤1中已配好的含有17α甲基睾丸酮的饲料，按照常规的饲养方法喂养80d，之后改投正常的不含17α甲基睾丸酮的亲鱼饲料继续饲喂6个月。在经过17α甲基睾丸酮诱导后又正常饲喂的雌性硬头鳟中，挑选在形态上上颌稍长于下颌，下颌前端向上突起、体色较正常鱼黑的投喂过17α甲基睾丸酮饲料的硬头鳟亲鱼即为假性雄鱼（伪雄鱼）。检测发现，本发明通过17α甲基睾丸酮诱导雌性硬头鳟亲鱼后，获得预期的性腺逆转雄鱼，伪雄鱼的出现率为86%。
取出伪雄鱼的精巢，用研钵磨碎精巢，纱布过滤，精液用pH值为9.0的精子激活液稀释（V/V=1:30），存放于冰箱4℃条件下将精子激活，使其具有正常的精子功能，精子激活时间为4h。
鱼卵采用干法受精。先将发育成熟的红眼金鳟雌鱼采用挤压法将鱼卵挤入干净的水盆内，每4尾雌鱼为1组。再将经激活的硬头鳟伪雄鱼精液倒入有鱼卵的水盆内，立即搅拌均匀，按与激活精液的体积比130:1加入孵化用水，轻轻搅拌，1min后将水倒出，如此反复3次，清洗。
3、将受精卵清洗干净后即可放入8℃的孵化用水的孵化桶中正常孵化。经55天受精卵孵化出鱼苗。孵化出的鱼苗即为体色为金黄色的全雌杂交金鳟。
采用该方法处理得到的全雌杂交鱼受精卵发眼率达到85%，苗种孵化率达到95%，苗种雌性比率为100%，苗种金鳟率（即体色为金黄色）达到93%。本发明方法说明与纯种金鳟交配产生的苗种金鳟率相比，本发明方法获得的全雌杂交金鳟苗种的金鳟率不变，同时全雌杂交金鳟苗种又具有杂交和全雌苗种的双重优势。
实施例7 本发明培育的全雌杂交苗种生长速度和成活率实验实验用鱼
取实施例1-6培育得到的全雌杂交金鳟苗种，每个实施例取6000尾。纯种硬头鳟和纯种金鳟各6000尾。平均规格为1.5~1.8g/尾鱼苗。
2、方法
在水温8℃条件下，将上述鱼苗按品种不同和制备批次不同，分别放养在8个养殖池中，放养密度为3000尾/m2。投喂北京汉业科技有限公司的苗种料，每天投喂5次，投饵量为5%，水交换量为1次/2h。观察并记录30天各鱼苗的体重和增长情况。结果见表1。
表1不同鱼苗饲喂30天增长速度比较（X±SD）
| 品种 | 0d | 30d | 增重率% |
| 实施例1的鱼苗 | 1.61±0.11 | 3.47±0.15 | 115.6 |
| 实施例2的鱼苗 | 1.62±0.08 | 3.48±0.18 | 114.9 |
| 实施例3的鱼苗 | 1.60±0.12 | 3.44±0.23 | 115.3 |
| 实施例4的鱼苗 | 1.62±0.09 | 3.49±0.42 | 115.6 |
| 实施例5的鱼苗 | 1.60±0.13 | 3.46±0.33 | 116.4 |
| 实施例6的鱼苗 | 1.63±0.10 | 3.50±0.25 | 115.2 |
| 硬头鳟雌鱼×金鳟假雄鱼 | 1.61±0.15 | 3.60±0.24 | 123.6 |
| 纯种硬头鳟 | 1.65±0.08 | 3.35±0.12 | 104.2 |
| 纯种金鳟 | 1.63±0.13 | 3.17±0.18 | 94.6 |
增重实验结果发现，本发明实施例1-6方法培育的全雌杂交金鳟鱼苗种生长速度明显快于纯种硬头鳟和纯种金鳟的生长速度。在试验期间实施例1-6鱼苗没有发病现象，成活率为98.9%，对照的纯种硬头鳟鱼苗成活率为98.1%，纯种金鳟的成活率为94.2%，可见本发明的全雌杂交金鳟鱼苗种具备杂交优势和全雌特点，其成活率高于纯种硬头鳟和纯种金鳟。
Claims (5)
1.一种金鳟全雌杂交苗种的培育方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）用雄性激素诱导性成熟期的雌性硬头鳟亲鱼获得具有雄性功能的硬头鳟伪雄鱼；所述性成熟期的硬头鳟亲鱼为3龄以上，体重≥2.5kg；所述雄性激素诱导性成熟期的雌性硬头鳟亲鱼的方法为，将含雄性激素40-100mg/kg的鱼饲料投喂硬头鳟亲鱼70-100d；之后，改用不含雄性激素的鱼饲料投喂4-6个月，获得具有雄性功能的硬头鳟伪雄鱼；所述雄性激素为17α甲基睾丸酮；
2）使金鳟雌鱼亲鱼卵子与硬头鳟伪雄鱼精子受精；所述金鳟为红眼金鳟；所述硬头鳟伪雄鱼精子是通过以下方法获得的：机械破碎伪雄鱼精巢，获得精液后，将精子激活液与伪雄鱼精液按照体积比20-30：1进行激活，所述精子激活液1L配方为NaCl7.60g，KCl2.98g，CaCl2·2H2O0.37g，MgCl2·6H2O0.31g，NaHCO30.21g加蒸馏水至1000ml，调节pH值为8.0-10.0；激活条件为4℃激活3-3.5h；
3）受精卵孵化，孵化条件为受精卵在8-10℃养殖用水中孵化45-65d。
2.如权利要求1所述的一种金鳟全雌杂交苗种的培育方法，其特征在于，步骤1）所述雄性激素诱导性成熟期的雌性硬头鳟亲鱼的方法为，将含雄性激素40-50mg/kg的鱼饲料投喂硬头鳟亲鱼85-90d；之后，改用不含雄性激素的鱼饲料投喂5个月，获得具有雄性功能的硬头鳟伪雄鱼。
3.如权利要求1所述的一种金鳟全雌杂交苗种的培育方法，其特征在于，步骤1）的雄性激素为17α甲基睾丸酮，在将所述17α甲基睾丸酮添加入饲料之前，用纯度为65%的酒精溶解17α甲基睾丸酮，17α甲基睾丸酮与酒精的质量体积比为1mg：2ml，溶解后的甲基睾丸酮溶液用清水稀释10倍后，用喷壶均匀的喷于亲鱼饲料上，使饲料中17α甲基睾丸酮的含量为60mg/kg；反复搅动，使其混合均匀，在通风处阴干备用。
4.如权利要求1所述的一种金鳟全雌杂交苗种的培育方法，其特征在于，将精子激活液与伪雄鱼精液按照体积比25：1进行激活，所述精子激活液pH值为9.0；激活条件为4℃激活3h。
5.权利要求1-4任一所述的一种金鳟全雌杂交苗种的培育方法在金鳟全雌杂交苗种育种工作中的应用。
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