CN108377936A - 一种全雌鳜鱼的规模化生产方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种全雌鳜鱼的规模化生产方法，包括如下步骤：S1.鱖性逆转的饲养处理：在鳜鱼苗开口后10天以内，性腺分化之前，采用17α‑甲基睾丸酮激素混合饲料经饵料鱼被鳜鱼摄食的方式进行鳜鱼性逆转；S2.性逆转个体性腺鉴定：S3.性逆转个体的测交；S4.全雌鳜鱼苗的生产。本发明采用激素混合饲料经饵料鱼被鳜鱼摄食的方式进行鳜鱼性逆转，建立了一套高效率诱导鳜鱼性逆转的技术，并配套相应的生理性别性腺显微鉴定、遗传性别测交鉴定技术，为鱖性别控制和全雌育种研究提供技术支撑。本发明提供的方法能够实现鳜鱼雌鱼的99%的雄性化性逆转，生产出全雌鳜鱼雌性比例可达100%，与普通养殖鳜鱼相比全雌鱼具有明显的生长优势，具有极佳的应用前景。
Description
技术领域
本发明属于鱼类养殖繁殖技术领域，更具体地，涉及一种全雌鳜鱼的规模化生产方法。
背景技术
鳜（Siniperca chuatsi）为鲈形目，鮨科，鳜亚科，鳜属鱼类，生活适温7℃~32℃，最适温度18℃~25℃，自开食起终生以活鱼虾为食，由于它具有体型大,生长快,味道鲜美，无肌间刺等特点,深受国内外消费者喜爱,有“淡水石斑鱼”之称,是一种高档食用鱼类。目前鳜养殖规模不断扩大, 根据中国渔业统计年鉴的数据，2011~2013年我国鳜鱼总产量分别为274576吨、281502吨、284780吨，逐年增长，2013年全国鳜鱼养殖总产值超过 140 亿元，已经成为我国重要的名贵经济鱼类。鳜从低纬度的越南经云南中部至四川抵秦岭以东过黄河至东北黑龙江流域均有分布, 向东扩及朝鲜半岛，养殖适应环境范围广。如果能培育出兼具不同品质和优点的鱼类，则更能满足市场的需求。
已有研究结果表明，鳜鱼雌鱼的生长速度明显快于雄鱼。蒋一珪（1959，中国科学院水上生物研究所）、李达等（1998，江西省畜牧水产学校）在鱖生物学的调查中报道雌性鱖生长速度比雄性的要快10~20%。王晓清等（2006，湖南农业大学）报道同塘养殖6个月雌性鱖平均体重比雄性大18.6%，养殖9个月雌性鱖平均体重比雄性大15.8%。我们2013年进行同塘养殖对比试验，选取鳜鱼雌的60尾，雄的42尾，生长7个月，雌性鳜鱼的体重比雄性鳜鱼大32%，雌性鳜鱼的体长比雄性鳜鱼长10.9%，雌性鳜鱼的体高比雄性鳜鱼长10.6%。由于雄性个体生长慢，降低了鱖的养殖产量，增加了养殖成本，因而进行鱖性逆转和性别控制技术的研究，培育鱖全雌品系，将大幅提高鱖的养殖产量，增加收益。迄今，国内外均未见有关鱖性逆转和性别控制技术的研究报道。
鱖自开食起终生以活鱼虾为食，因此传统投喂人工饲料进行激素性逆转的方法不可行。因此，研究开发一种全新的鳜鱼性逆转技术并应用于全雌鳜鱼的规模化养殖，具有极大的现实意义。
发明内容
本发明的目的在于根据现有技术中的不足，提供了一种全雌鳜鱼的规模化生产方法。
本发明通过研究外源性激素经过饵料鱼被吞食的方式对鱖性腺发育和性别分化的影响，弄清鱖性逆转的激素种类、方式和浓度对鳜鱼性逆转的影响，从而建立诱导鱖性逆转的技术，并配套相应的生理性别性腺显微鉴定、遗传性别测交鉴定技术，为鱖性别控制和全雌育种研究提供技术支撑。
本发明的目的通过以下技术方案实现：
本发明提供了一种全雌鳜鱼的规模化生产方法，包括如下步骤：
S1. 鱖性逆转的饲养处理：在鳜鱼苗开口后10天以内，性腺分化之前，采用17α-甲基睾丸酮激素混合饲料经饵料鱼被鳜鱼摄食的方式进行鳜鱼性逆转；
S2. 性逆转个体性腺鉴定：
S3. 性逆转个体的测交：挑选性逆转个体中性腺表现为雄鱼的发育良好的个体，与正常待产雌鱼配对繁殖测交，子代每个家系后代分两组培育至9~12cm；如果正常培育组子代全部为雌性，而同家系性逆转试验组的个体经性腺鉴定确定为雄性的，则为伪雄鱼，备用；
S4. 全雌鳜鱼苗的生产：将上述伪雄鱼作为繁育全雌鱼的父本亲鱼，与正常雌性个体配对繁殖，规模化生产全雌鳜鱼苗；
本发明公开了一种全雌鳜鱼的规模化生产方法，包括利用外源性雄激素（17α-甲基睾丸酮）经过饵料鱼摄食后被吞食的方式对鱖性腺发育和性别分化的影响，确定适宜的鱖性逆转的激素种类、方式和、浓度、激素投喂时间，成功开发诱导鱖性逆转的技术，并配套建立了相应的生理性别性腺显微鉴定、遗传性别测交鉴定技术，成功开发出新的鱖全雌鱼苗规模化繁育技术体系。
优选地，S1中激素混合饲料为每kg饲料含17α-甲基睾丸酮50~2000 ug。
优选地，S1中激素混合饲料为每kg饲料含17α-甲基睾丸酮1500 ug。
优选地，S1中饵料鱼为鲮、鲢、鲂、鳙、鲫或鲤中的一种或多种，且饵料鱼规格小于鳜鱼的口径。
优选地，S1中采用17α-甲基睾丸酮激素混合饲料喂食饵料鱼的频率为每天2~3次，激素混合饲料每次投喂量为饵料鱼体重的1.5~10%，然后采用喂食后的饵料鱼饱食饲喂鱖鱼苗，连续投喂30~90天。
优选地，S1中鱖性逆转的饲养处理具体为：破膜一天内，将刚孵出来的鳜鱼苗喂食刚破膜的饵料鱼水花；鳜鱼苗开口第3天至第10天，配套喂食破膜2~6天的饵料鱼，此时饵料鱼摄食激素混合饲料，至鳜鱼苗为1.0~1.3 cm；将0.9~1.1cm的饵料鱼水花投喂1.0~1.3 cm鱖苗至长到3.8~4.2 cm；继续培育鱖苗长至9~12 cm左右，其中鳜鱼苗摄食激素时间持续30~90天。
优选地，S1中激素混合饲料首先被饵料鱼摄食，半小时内吃过激素混合饲料的饵料鱼，被鳜鱼摄食。
优选地，S3性逆转个体的测交中，雌雄鱼以1:1搭配繁殖催产，鱼苗培育过程中保持饵料鱼与鳜鱼重量之比为1~2：1。
与现有技术相比，本发明具有以下优点及有益效果：
本发明采用激素混合饲料经饵料鱼被鳜鱼摄食的方式进行鳜鱼性逆转，建立了一套高效率诱导鳜鱼性逆转的技术，并配套相应的生理性别性腺显微鉴定、遗传性别测交鉴定技术，为鱖性别控制和全雌育种研究提供技术支撑。本发明提供的方法能够实现鳜鱼雌鱼的99%的雄性化性逆转，生产出全雌鳜鱼雌性比例可达100%，与普通养殖鳜鱼相比全雌鱼具有明显的生长优势，具有极佳的应用前景。
附图说明
图1是全雌鳜鱼的规模化生产技术路线。
图2是鳜鱼精巢压片显微图片。
图3是鳜鱼卵巢压片显微图片。
具体实施方式
以下结合具体实施例和附图来进一步说明本发明，但实施例并不对本发明做任何形式的限定。除非特别说明，本发明采用的试剂、方法和设备为本技术领域常规试剂、方法和设备。
除非特别说明，本发明所用试剂和材料均为市购。
实施例1：
（1）2014年6月准备刚孵出来的鳜鱼水花6000尾，配套投喂刚破膜的饵料鱼水花（团头鲂、泰鲮、麦鲮、土鲮等鱼苗水花，破膜一天内）；鳜鱼苗开口第3天至第10天配套破膜2~6天的饵料鱼水花（团头鲂、泰鲮、麦鲮、土鲮等鱼苗水花），至鳜鱼苗1.2 cm左右；提前10~12天土塘培育饵料鱼水花（团头鲂、泰鲮、麦鲮、土鲮、鲢鳙等），至1.0 cm左右，饵料鱼苗转至水泥池培育，投喂1.2 cm鱖苗至长到4 cm左右；土塘培育4~6召饵料鱼苗，转至水泥池，饲料投喂饵料鱼，饵料鱼饲喂鱖苗长至9~12cm左右，约90天，期间，激素混合饲料首先被饵料鱼摄食，半小时内吃过激素料的饵料鱼，被鳜鱼摄食，鳜鱼摄食激素时间持续30~90天。
（2）分别设计试验，用小水泥池和大桶采用雄激素注射、雄激素包裹埋植、激素浸泡、激素混合饲料经饵料鱼被鳜鱼摄食四种方式进行鳜鱼雄性化性逆转，每个试验组200尾鱼，每种方式6个梯度，同时设置一个对照组，结果如表1所示，从表1中可以看出，激素混合饲料经饵料鱼被鳜鱼摄食的方式最合适。
表1
（3）根据表1中结果，选择激素混合饲料的方式进行饲喂，具体为：
准备好拌有雄激素（17α-甲基睾丸酮）的饲料。设置每kg饲料含17α-甲基睾丸酮50、200、500、1000、1500、2000 微克的浓度梯度，将雄激素先溶于酒精，然后与饲料搅拌均匀，晾干备用。
3.1购买饵料鱼鱼苗，在12个水泥池中培育，分别投喂伴有不同浓度激素的饲料，每天2~3次，每次投喂量为1.5~10%，投喂后半小时内起捕饵料鱼，饱食饲喂鱖鱼苗。
3.2鳜鱼性逆转试验的实施：设置18个水泥池的鳜鱼鱼苗培育池，每个不同的激素浓度三个重复，从鳜鱼苗开口3天后开始投喂摄食了激素饲料的饵料鱼，连续投喂激素约30~90天，期间做好鳜鱼和饵料鱼的养殖管理工作，试验结束检查鳜鱼的性腺，鉴定结果。
（4）鉴定性逆转个体的性腺：上述的鳜苗，生长体长到10厘米左右（生长约80天），参照罗非鱼鱼种性别鉴定方法（SCT 1105-2007），配置洋红-冰乙酸溶液和结晶紫-乙醇溶液，取5%的冰乙酸溶液0.2 ml-0.3 ml，用注射器注入鱼的腹腔，约30 s后，用手术剪剪开鱼的腹腔，用镊子将两条紧贴背部腹膜、已变为灰白色的性腺组织剪断取出，将性腺组织放在预先滴有1滴洋红-冰乙酸溶液的载玻片上，再加入1滴结晶紫-乙醇溶液，染色3 min-5 min后盖上盖玻片，并将性腺组织轻轻压平，在10Ⅹ10倍显微镜下进行镜检，根据图2、3鉴别性别，性别鉴定结果见表2。
表2 投喂不同浓度激素鳜鱼苗养殖80天生理雄性性别比例（n=30）
（5）测交：繁殖的亲本分别放在1~3亩的池塘培养，水深1.5~1.8米。水质符合渔业水质标准GB11607的规定，其中溶氧保持在5毫克/升以上。专池培育。每亩放养60千克左右。雌雄鱼以1:1搭配。饵料鱼以细长的鲮、野鲮、麦鲮、鲢、鲂、鳙、鲫、鲤等鱼类之一种或多种为主，也可以是其他类似幼鱼，规格小于亲鱼的口径。亲鱼的投饵在放养亲鱼的同时投入饵料鱼。投饵量为亲鱼重量的两倍，以后定期检查塘内饵料鱼存塘情况，视饵料鱼的存量多少，调整投饵量，保持池中饵料鱼与鳜亲鱼重量之比为1~2:1左右。发现鱼病，及时治疗；每隔15~20天冲新水一次；产卵前一个月，应每隔7天冲水，保持水质清新。
2015年4月挑选出性逆转的性腺（生理）表现为雄鱼的发育良好的个体，同时准备正常的性腺发育良好待产的雌鱼，繁殖季节性腺成熟的鳜雌鱼腹部膨大、柔软、卵巢轮廓明显、生殖孔松弛、手压腹部松软而富有弹性、腹中线下凹、卵巢下坠后有移动状、肛门红肿。配对，注射激素人工催产，注射剂量为DOM 3-8 毫克+ LHRH—A2 5-15微克/千克（雌鱼体重），一次注射，雄鱼用量减半。等到效应期，分别取出精液和卵，混合在一起授精孵化，建立家系28个，每个家系出水花1-5万。每个家系孵出水花选取1万开口后，分两组，一组正常培育，水泥池养殖至10 cm进行性腺鉴定。另一组投喂适当浓度的雄激素进行性逆转，如（2）所示步骤，培育至10 cm，养成19个家系，每个家系对照组和试验组鱼苗数量在120-600尾。对照组和试验组分别取鱼30尾，解剖鉴定，根据性腺鉴定结果，如果正常饲养组全部为雌性，而且同时性逆转实验组的个体经确定为雄性的，则其父本为伪雄鱼（遗传上为XX，生理上雄性），可以作为全雌鳜鱼的父本，全部可以作为繁育全雌鱼的父本亲鱼培育；如果饲养组雌性比例在10-80%，则其父本为XY型鱼，不能用作生产全雌鳜鱼的父本，舍弃。最终19个家系中9个家系为全雌鱼，表明其父本为伪雄鱼，这9个家系的性逆转组雄性个体可以作为大规模繁育全雌鳜鱼的伪雄鱼父本，共鉴定出792尾。
（6）全雌鳜鱼的生产：测交鉴定的伪雄鱼，专门池塘养殖，加强管理，越冬并经过一年左右时间的精心培育，2016年5月达到性成熟，和正常的性成熟待产的正常雌鱼，配对，注射激素人工催产，注射剂量为DOM 3-8 毫克+ LHRH—A2 5-15微克/千克（雌鱼体重），一次注射，雄鱼用量减半。等到效应期，随机选取30尾伪雄鱼和雌鱼，分别取出精液和卵，混合在一起授精孵化，产出水花30万左右，经培育，出3 cm鱼苗15 万尾，养殖过程中经鉴定雌性比例为100%（n=100），为全雌鳜鱼，表现出生长优势，养殖9个月，平均体重与普通鳜鱼相比大15%左右。
当然，本发明不限于上述及附图示出的实施例，凡依本创造之精神所作的修改及等效变换，或在此基础上采用多种变形，都属于本发明保护范围内。
Claims (8)
1.一种全雌鳜鱼的规模化生产方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1. 鱖性逆转的饲养处理：在鳜鱼苗开口后10天以内，性腺分化之前，采用17α-甲基睾丸酮激素混合饲料经饵料鱼被鳜鱼摄食的方式进行鳜鱼性逆转；
S2. 性逆转个体性腺鉴定：
S3. 性逆转个体的测交：挑选性逆转个体中性腺表现为雄鱼的发育良好的个体，与正常待产雌鱼配对繁殖测交，子代每个家系后代分两组培育至9~12cm；如果正常培育组子代全部为雌性，而同家系性逆转试验组的个体经性腺鉴定确定为雄性的，则为伪雄鱼，备用；
S4. 全雌鳜鱼苗的生产：将上述伪雄鱼作为繁育全雌鱼的父本亲鱼，与正常雌性个体配对繁殖，规模化生产全雌鳜鱼苗。
2.根据权利要求1所述的全雌鳜鱼的规模化生产方法，其特征在于，S1中激素混合饲料为每kg饲料含17α-甲基睾丸酮50~2000 ug。
3.根据权利要求1所述的全雌鳜鱼的规模化生产方法，其特征在于，S1中激素混合饲料为每kg饲料含17α-甲基睾丸酮1500 ug。
4.根据权利要求1所述的全雌鳜鱼的规模化生产方法，其特征在于，S1中饵料鱼为鲮、鲢、鲂、鳙、鲫或鲤中的一种或多种，且饵料鱼规格小于鳜鱼的口径。
5.根据权利要求3所述的全雌鳜鱼的规模化生产方法，其特征在于，S1中采用17α-甲基睾丸酮激素混合饲料喂食饵料鱼的频率为每天2~3次，激素混合饲料每次投喂量为饵料鱼体重的1.5~10%，然后采用喂食后的饵料鱼饱食饲喂鱖鱼苗，连续投喂30~90天。
6.根据权利要求1所述的全雌鳜鱼的规模化生产方法，其特征在于，S1中鱖性逆转的饲养处理具体为：破膜一天内，将刚孵出来的鳜鱼苗喂食刚破膜的饵料鱼水花；鳜鱼苗开口第3天至第10天，配套喂食破膜2~6天的饵料鱼，此时饵料鱼摄食激素混合饲料，至鳜鱼苗为1.0~1.3 cm；将0.9~1.1cm的饵料鱼水花投喂1.0~1.3 cm鱖苗至长到3.8~4.2 cm；继续培育鱖苗长至9~12cm，其中鳜鱼苗摄食激素时间持续30~90天。
7.根据权利要求6所述的全雌鳜鱼的规模化生产方法，其特征在于，S1中激素混合饲料首先被饵料鱼摄食，半小时内吃过激素混合饲料的饵料鱼，被鳜鱼摄食。
8.根据权利要求1所述的全雌鳜鱼的规模化生产方法，其特征在于，S3性逆转个体的测交中，雌雄鱼以1:1搭配繁殖催产，鱼苗培育过程中保持饵料鱼与鳜鱼重量之比为1~2：1。
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