CN101416613A - Wz♀-zz♂型奥利亚罗非鱼zz合子的雌性化方法 - Google Patents

Wz♀-zz♂型奥利亚罗非鱼zz合子的雌性化方法 Download PDF

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张海明
陈远生
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Abstract

本发明公开了一种WZ♀－ZZ♂型奥利亚罗非鱼ZZ合子的雌性化方法，属罗非鱼养殖技术领域，其技术方案的要点是将性腺未分化前的奥利亚罗非鱼苗用含雌性激素的药饵处理投喂15天以上，然后进行正常的饲养管理，即可获得ZZ型生理雌鱼，药饵中雌性激素的剂量为每克饲料含雌性激素100～200微克；投喂药饵处理时的水温为25～30℃。本发明的方法可将遗传雄鱼转变为生理雌鱼，从而建立目前全球尚无的ZZ型全雄罗非鱼苗繁育系，对全雄罗非鱼的推广养殖具有重大意义。

Description

WZ♀-ZZ♂型奥利亚罗非鱼ZZ合子的雌性化方法
技术领域
本发明涉及一种WZ♀-ZZ♂型罗非鱼育种技术，更具体地说，它涉及一种WZ♀-ZZ♂型奥利亚罗非鱼ZZ合子的雌性化方法。
背景技术
罗非鱼以其肉质鲜美、食性广、繁殖快、适应性和抗病力强的优点，在世界上很多国家都有饲养；我国大陆地区从20世纪60年代引入罗非鱼品种后，在20世纪80年代后期罗非鱼的养殖才得到较大的发展，目前全国的总体年产量已超过120万吨，已成为主要的淡水经济鱼类之一。在罗非鱼的养殖技术中，正是罗非鱼繁殖快的特点，也成为困扰罗非鱼养殖发展的重要缺点，原因是罗非鱼的性成熟早，按传统的雌雄混养方法，容易造成罗非鱼的过度繁殖，使养殖群体的大小难以控制，造成产品规格不齐、价格低、经济效益差。
为此，业内人员提出了罗非鱼的全雄鱼养殖技术，而全雄罗非鱼苗的来源目前是通过奥利亚罗非鱼与尼罗罗非鱼杂交获得，但其雄性率为80％～95％，远不符合养殖业需要。鉴于上述情况，1979年美国学者jensen和Shelton提出使奥利亚雄鱼性反转为雌鱼，再与原雄鱼配种获得遗传上的全雄鱼的设想。但他们始终未能获得成功。同年本申请的发明人也提出类似的想法，并从2002年起，利用从台湾省和美国引进的奥利亚罗非鱼进行相关的实验，经过近8年的努力，终于在该技术领域取得了实质性突破，发明了此项技术。
发明内容
本发明要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种可将WZ♀-ZZ♂型奥利亚罗非鱼ZZ合子转变为生理雌鱼(ZZ△♀)，从而实现由生理雌鱼与原雄鱼配种(ZZ△♀×ZZ♂)获得遗传上的全雄鱼(ZZ♂)。
本发明的技术方案是这样的：一种WZ♀-ZZ♂型奥利亚罗非鱼ZZ合子的雌性化方法，是将性腺未分化的奥利亚罗非鱼苗用含雌性激素(FH)的药饵投喂15天以上，然后进行正常的饲养管理，即可获得ZZ型生理雌鱼；药饵中雌性激素的剂量为每克饲料含雌性激素100～200微克；药饵投喂时的水温为25～30℃。
上述的WZ♀-ZZ♂型奥利亚罗非鱼ZZ合子的雌性化方法中，所述的雌性激素(FH)为雌二醇。
上述的WZ♀-ZZ♂型奥利亚罗非鱼ZZ合子的雌性化方法中，所述的性腺未分化的奥利亚罗非鱼苗以后期胚胎或刚孵出的鱼苗为佳，方法是放在孵化桶里，以每克饲料含雌性激素(FH)100～200微克的药饵投喂5～10天，转入水泥池后，再以每克饲料含雌性激素50～100微克的药饵继续投喂20～25天，共投喂30天后停药，停药后进入正常的饲养管理工作。
本发明与现有技术相比，具有下述优点：
(1)解决了长期困扰WZ♀-ZZ♂型罗非鱼全雄鱼养殖中的关键技术问题，从而建立目前全球尚无的ZZ型全雄罗非鱼苗繁育系，为水产养殖业提供二系配套产生全雄性技术路线。
(2)采用本发明的方法对ZZ型合子进行雌性化，其转化率高，最高可100％转化为生理雌鱼，并且经雌性化后的罗非鱼(ZZ△♀)不会性逆转。
(3)本发明的方法极大地丰富了现代生理遗传学的内容，并为控制脊椎动物的性别和品种改进，特别是WZ♀-ZZ♂型鱼类养殖业的发展具有重要的意义。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步地详细说明，但不构成对本发明的任何限制。
实施例1
雌性激素用量对雌性化效果的影响
1.材料与方法
1.1材料
本实验的奥利亚罗非鱼(o.aurus)源自以色列，是从台湾引进经过多年选育的品种，其性别决定为WZ♀-ZZ♂类型。在本公司国家级水产良种场的保种场进行。
1.2方法
1.2.1转化药物与方法
采用雌性激素(FH)进行奥利亚罗非鱼性别转化实验。雌性激素使用的剂量为每克饲料含雌二醇80～200微克，以FH80～FH200表示。实验鱼苗在刚孵出的阶段进行口服处理，每天喂药饵3～6次。FH处理时间分为30天、60天、100天三组，每到一个处理时段，进行性别检查、计算转化率。同时设有(不喂药饵)对照组。
1.2.2性别鉴定
对实验鱼的性别主要取性腺以组织学方法确定。为区别原系和转化系，我们在本文引进性别基因生理型的概念和转化鱼的符号△。例如，奥利亚罗非鱼原雄鱼的性别基因型为ZZ♂，其转化雌鱼的基因生理型以ZZ△♀表达。
2.结果
2.1第一阶段
2001年～2003年，采用每克饲料含雌性激素80微克(以FH80表示)的药饵，处理性腺末分化的奥利亚罗非鱼苗(全长8～11mm)，处理时间分为30天、60天、100天三组。实验结果表明，ZZ型合子转变为雌鱼的效果不明显。现仅列出2002年处理时间为100天抽样检查结果作为代表，列入表1。
表1  2002年奥利亚罗非鱼雌性化实验捡查结果
 
编号 体重(克) 体态判别 生殖孔判别 生殖腺发育状况 综合判断
01 420 ♂ 雄性 精巢 原雄鱼
02 380 ♂ 雌性 (卵巢) 似转化鱼
03 320 ♀ 雌性 卵巢 原雌鱼
04 420 ♂ 似雌性 精巢 原雄鱼
05 380 ♂ 异常 精巢，人参状 原雄鱼
06 340 ♀ 雌性 卵巢 原雌鱼
07 380 ♂ 异常 精巢，人参状 原雄鱼
08 320 ♀ 雌性 卵巢 原雌鱼
09 400 ♂ 雌性孔小 精巢，人参状 原雄鱼，有雌性孔
10 500 ♂ 雌性孔小 精巢，人参状 原雄鱼，有雌性孔
11 300 ♀ 雌性 卵巢 原雌鱼
12 340 ♀ 雌性 卵巢 原雌鱼
13 340 ♀ 雌性 卵巢 原雌鱼
14 720 ♂ 雌性 卵巢和精巢 雌雄同体鱼
15 410 ♂ 孔末破 精巢，人参状 原雄鱼
表1中被随机抽查的15尾经FH80处理实验鱼中，7尾为雌鱼，雌性率为46.7％，与对照组(47.3％)无显著性差异性。但经过综合分辩发现，其中02号实验雌鱼似是转化雌鱼(ZZ△♀)，嗣后，以它与ZZ雄鱼配种进行测实验，对它们375尾子F1的性别捡查结果，全为雄性鱼，即雄性率为100％。这一结果表明虽然雌性化率很低，但提示了一个重要信息，即奥利亚罗非鱼雌性化是可行的。
2.2第二阶段
2005年将02号转化雌鱼(ZZ△♀)与雄鱼(ZZ♂)交配，对其繁殖的子代苗(8～11mm)继续进行雌性化实验。其中，实验一组为采用每克饲料含雌性激素140微克(以FH140表示)处理组，实验二组为采用每克饲料含雌性激素200微克(以FH200表示)处理组，对照组为未作FH处理组。现将雌性化实验结果列入表2和表3。
表2  ZZ合子转化为雌性生殖器的捡查结果
Figure A200810219396D00061
表3  实验二组ZZ型合子转化为雌性生殖腺发育状况
 
编号 全长(cm) 体重(g) 生殖孔数 性腺发育状况
1 20.9 154.5 2 卵巢形态正常，发育处于IV期
2 20.6 149.5 2 卵巢发育处于IV期
3 20.1 128.0 2 二个卵巢发育对称，处于III—VI期
4 19.3 116.0 1 典型精巢
5 18.9 200.0 2 卵巢不大，卵粒小而多，处于II期
6 21.0 168.0 2 卵巢不大，囊状，卵粒小而少
7 21.3 174.0 2 卵巢发育正常，处于II期
8 19.9 125.0 1 精巢处于III-IV期
从表2和表3可看出：
(1)实验一组的实验鱼，生殖器为雌性征(2孔)达93.7％，较之对照组的0.00％，差异性极显著(P<0.001)，但仍保持精巢不变。这说明FH140对ZZ合子性征雌性化效果显著，但对性腺转化无效。
(2)实验二组的实验鱼，80％的生殖器和生殖腺表现为雌性，说明FH200可以将原雄性ZZ型合子转变为生理雌鱼(ZZ△♀)。进一步观察(表3)表明，这种转化雌鱼大部分卵巢发育正常，多处于II～IV期，且有繁殖功能。由此共获得500尾生理雌鱼。
(3)实验二组取得实验成功与我们调整的激素剂量和选择鱼苗的发育阶段有密切关系。
实施例2
雌性激素的处理时机对雌性化效果的影响
1.材料与方法
1.1材料
1.1.1实验鱼：亲鱼系从台湾引进的奥利亚(o.aureus)原种雄鱼(ZZ♂)和以上研究获得的转化生理雌鱼(ZZ△♀)。采用二系配套法即ZZ△♀×ZZ♂获得刚孵化出的ZZ型鱼苗做材鱼，这种实验材料，在正常情况下会表现为全雄鱼。实验在厦门鹭业和海南鹭业两公司的各自试验场进行。厦门试验场以后期胚胎为实验材料；海南试验场以捞捕(雌亲鱼口孵阶段结束时)鱼苗为实验材料。
1.1.2性别转化设施
1.1.2.1性别转化器：是我们在总结以往孵化桶型转化器经验的基础上重新设计，用塑料大盆(直经67cm，高16cm，容量0.12m3)制作而成。其深度较浅，大小适中。在盆的上方开1～2处矩形窗口，然后以45～50目的金属筛绢片封口，并配备进排水和增气系统。这种性别转化器突出优点是结构简单，价格便宜，功能多样。它既可作鱼卵胚胎的孵化器，又可进行雌雄性别转化的幼鱼的培育设备。就性反转而言，它可起到药铒和浸泡的双效作用。
1.1.2.2附属设备
在厦门鹭业和海南性别转化区，除性别转化器外还配备有20余口(200cm×200cm×120cm)为A、B、C、D…的小水泥池，用于雌化实验鱼的培育。水泥池配备有水塔、水泵、抽水机、增氧等设施。水塔均由河水和地下水二股水源供水，为罗非鱼的雌性化实验提供了良好的生态条件。
1.2方法
1.2.1雌性化诱导：采用雌性激素(FH)对奥利亚鱼苗进行雌性化诱导，使用剂量为每克饲料含200微克，以FH200表示。剂量减半以FH100表示。
1.2.2实验组：为了查找雌性激素(FH)持续作用的有效天数，本实验以同批孵化的鱼苗为材料，分别进行对比实验；
1.2.2.1厦门实验组：将后期胚胎或刚孵出的鱼苗放在孵化桶里，以FH200药饵处理10天，转入水泥池后，再以FH100继续处理20天。停药后进入正常的饲养管理工作。
1.2.2.2海南实验组以4朝筛选用鱼苗(10mm左右)作材料，以FH200处理5～10天，之后药饵剂量减半，再雌性化20天。共处理30天停药，进入正常的饲养管理。
鱼苗孵出时，即以FH200处理鱼苗。持续天数按5、10、15、20、25、30、60天分组。到时停药，而后进行正常的饲养管理。
1.2.2.3对照组：奥利亚罗非鱼ZZ△♀×ZZ♂繁殖的鱼苗，不做雌化诱导处理，正常情况下发育为全雄鱼。以处理0天表示。
1.2.2.4雌化效果检查待实验鱼发育到7～10cm左右时，随机抽样解剖检查，以性腺和泄殖孔的特征进行性别确认。FH雌性化的效果，以雌鱼百分率表达。由于对照组的雄性率为100％。所以，这里雌性率就是ZZ型合子转变为生理雌鱼百分数。最后对观察的结果进行综合分析。
2.结果
2.1以后期胚胎为起始材料的厦门实验组雌性化实验
(1)雌性化结果：2007年9月6日取D池44尾实验鱼(全长8.9cm～9.7cm)进行解剖观察全为卵巢。11月12日又取78尾实验鱼，解剖观察也全为卵巢。二次检查结果均为100％的雌鱼。
(2)E池雌性化结果：9月6日，取实验鱼(全长7cm～8cm)102尾进行解剖观察，全为卵巢，雌性率为100％。
以上实验表明，采用近孵化的胚胎或刚孵出的鱼苗(带卵黄囊)作实验材料，以FH200～FH100雌性激素分段进行诱导，可获得100％的ZZ型生理雌鱼。
2.2以捞捕鱼苗为起始材料的雌性化实验
该埸雌性化的鱼苗达几十批，合计鱼苗达30余万尾。它们分配在10余口鱼池进行培育。现将二口鱼池抽查的雌性化情况，报告如下：
(1)A池的雌性化结果：取60尾实验鱼(7～9cm)进行解剖观察，其中雌鱼52尾，雄鱼8尾，雌性率为86.7％。
(2)B池的雌性化结果：取62尾实验鱼(10～14cm)进行检查，其中雌鱼30尾，雄鱼32尾。雌性率为48.4％。
如果将二口池合计，其总数为122尾，雌鱼数82尾，其平均雌性转化率为67.2％。
2.3雌性化不同持续天数的效果观察
将FH200处理鱼苗不同持续天数及其观察结果，列入表4内，由表4可以看出，在FH200处理10天内的实验组，其出现的雌性率为0％，这与对照组相同。FH200处理15天组，出现雌鱼(25.6.％)。而后雌性率迅速提高，到FH200处理30天，已接近100％的雌性率。
分析结果表明，采用剂量为FH200的雌性激素处理刚孵化出膜的鱼苗30天，即可使ZZ型合子转化为生理雌鱼(ZZ△♀)。
表4  FH处理不同持续天数ZZ型合子雌性化效果的比较
Figure A200810219396D00091

Claims (3)

1.一种WZ♀-ZZ♂型奥利亚罗非鱼ZZ合子的雌性化方法，其特征在于，将性腺未分化的奥利亚罗非鱼苗用含雌性激素的药饵投喂15天以上，然后进行正常的饲养管理，即可获得ZZ型生理雌鱼，药饵中雌性激素的剂量为每克饲料含雌性激素100～200微克；投喂药饵的水温为25～30℃。
2.根据权利要求1所述的WZ♀-ZZ♂型奥利亚罗非鱼ZZ合子的雌性化方法，其特征在于，所述的雌性激素为雌二醇。
3.根据权利要求1所述的WZ♀-ZZ♂型奥利亚罗非鱼ZZ合子的雌性化方法，其特征在于，所述的性腺未分化的奥利亚罗非鱼苗为后期胚胎或刚孵出的鱼苗，方法是放在孵化桶里，以每克饲料含雌性激素100～200微克的药饵投喂5～10天，转入水泥池后，再以每克饲料含雌性激素50～100微克的药饵继续投喂20～25天，共投喂30天后停药，停药后进入正常的饲养管理工作。
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Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102283149A (zh) * 2011-07-05 2011-12-21 中国科学院水生生物研究所 一种雌性鲤鱼性逆转为雄性鲤鱼的培育方法
CN103548740A (zh) * 2013-11-07 2014-02-05 武汉百瑞生物技术有限公司 一种生产全雌泥鳅的方法
CN105377025A (zh) * 2013-06-15 2016-03-02 古高尔控股有限公司 淡水鳗鱼的人工排卵及产卵诱导方法
CN106069948A (zh) * 2016-07-15 2016-11-09 广东海洋大学 一种提高泰国斗鱼雄性率的方法
CN108244000A (zh) * 2018-02-08 2018-07-06 宁波市海洋与渔业研究院 岱衢族大黄鱼雌性化的诱导方法
CN109924149A (zh) * 2019-04-22 2019-06-25 宁德师范学院 一种促进赤点石斑鱼雄鱼亲本性转变的方法
CN110338104A (zh) * 2018-04-03 2019-10-18 嘉丰海洋国际股份有限公司 使用乙炔雌二醇的浸泡处理来诱导奥利亚罗非鱼的雌性化的方法
CN115500286A (zh) * 2022-09-19 2022-12-23 中山大学 一种人工诱导获得伪雌翘嘴鳜鱼的方法

Cited By (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102283149A (zh) * 2011-07-05 2011-12-21 中国科学院水生生物研究所 一种雌性鲤鱼性逆转为雄性鲤鱼的培育方法
CN105377025A (zh) * 2013-06-15 2016-03-02 古高尔控股有限公司 淡水鳗鱼的人工排卵及产卵诱导方法
CN105377025B (zh) * 2013-06-15 2017-06-06 古高尔控股有限公司 淡水鳗鱼的人工排卵及产卵诱导方法
CN103548740A (zh) * 2013-11-07 2014-02-05 武汉百瑞生物技术有限公司 一种生产全雌泥鳅的方法
CN106069948A (zh) * 2016-07-15 2016-11-09 广东海洋大学 一种提高泰国斗鱼雄性率的方法
CN108244000A (zh) * 2018-02-08 2018-07-06 宁波市海洋与渔业研究院 岱衢族大黄鱼雌性化的诱导方法
CN110338104A (zh) * 2018-04-03 2019-10-18 嘉丰海洋国际股份有限公司 使用乙炔雌二醇的浸泡处理来诱导奥利亚罗非鱼的雌性化的方法
CN109924149A (zh) * 2019-04-22 2019-06-25 宁德师范学院 一种促进赤点石斑鱼雄鱼亲本性转变的方法
CN109924149B (zh) * 2019-04-22 2021-05-28 宁德师范学院 一种促进赤点石斑鱼亲本向雄性转变的方法
CN115500286A (zh) * 2022-09-19 2022-12-23 中山大学 一种人工诱导获得伪雌翘嘴鳜鱼的方法

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