CN114375912B - 一种全雄青虾规模化繁育的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种全雄青虾规模化繁育的方法，包括如下步骤：步骤一，根据青虾基因序列sequence1序列体外制备dsRNA；步骤二，将得到的dsRNA对虾苗进行转染，检测干扰效果；步骤三，将RNA干扰后的青虾饲养至体长3±0.5cm时抓捕，鉴定雌雄性别情况；对其中的表现型为雌虾的进行分子生物学的性别鉴定；步骤四，全雄青虾的培育与验证；步骤五，全雄青虾母本“假雌”虾的传代；本发明能够有效解决青虾繁殖引起养殖密度过高的问题，雄虾生长快，蜕皮同步性高，残杀率低，便于养殖管理，提高养殖产量。

Description

一种全雄青虾规模化繁育的方法
技术领域
本发明涉及基因工程领域，特别是一种全雄青虾规模化繁育的方法。
背景技术
青虾，又名河虾，学名日本沼虾，其肉质鲜美、营养价值高，是我国重要的淡水虾类养殖品种。青虾雌雄性别差异显著，雄虾个体大，生长快，具有生长优势，市场上，大规格青虾有明显的价格优势。
青虾养殖过程中，放苗2个多月后雌虾开始性成熟，周期性抱卵、孵化产生大量仔虾。雌虾的繁殖导致密度过高从而影响生长速度，最终上市规格偏小，进而影响经济效益。
甲壳动物单性化育种是一项新兴的水产动物育种技术。虾蟹单性化养殖，可以利用其性别差异性的生长优势，减少因繁殖消耗的能量，有效控制养殖密度。因此，单性化的全雄苗技术在青虾养殖中具有广阔的市场前景。甲壳动物全雄制种技术的核心是制备“假雌”母本，目前主流的依靠有RNAi技术干扰IAG基因生产“假雌”亲虾并由此生产全雄品系，该方法已经在罗氏沼虾中成熟运用。此外，还有切除促雄性腺也可制备“假雌”亲本，但该方法操作技术要求高，劳动强度大，死亡率高，并且逆转效率极低，因而不适合规模化量产。尽管生产上对全雄青虾苗种需求迫切，但目前还没有规模化的全雄青虾育种方法。因此，本发明生产的全雄青虾将提升青虾单性化育种技术，同时将促进青虾养殖业升级。
发明内容
为解决现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种全雄青虾规模化繁育的方法，能够解决青虾养殖过程中自繁引起的养殖密度过高，生长速度慢、大规格虾比例低的问题；采用本方法繁育的虾苗雄性比例高，生长快，经济效益好。
为了实现上述目标，本发明采用如下的技术方案：
一种全雄青虾规模化繁育的方法，包括如下步骤：
步骤一，根据青虾基因序列sequence1序列体外制备dsRNA；
从青虾的精巢中提取RNA后，采用逆转录试剂盒的试剂及操作方法合成cDNA；根据转录组SEQNO 01序列，设计合成引物序列sequence1F和sequence1R；
再利用primestar max premix进行PCR扩增序列；获得的序列用于后续dsRNA合成；
步骤二，将得到的dsRNA对虾苗进行转染，检测干扰效果；
步骤三，将RNA干扰后的青虾饲养至体长3±0.5cm时抓捕，鉴定雌雄性别情况；对其中的表现型为雌虾的进行分子生物学的性别鉴定；
步骤四，全雄青虾的培育与验证：
选取经过分子标记验证后的“假雌”♀ZZ亲虾与雄虾♂ZZ交配受精；
按照每个雌虾建家系，每个家系虾进行分池养殖，体长至3±0.5cm鉴定雌雄性别情况；保留其中子代全部是雄虾的母本，用与后续全雄虾苗的培育；
步骤五，全雄青虾母本“假雌”虾的传代：
经验证后“假雌”♀ZZ亲虾与雄虾♂ZZ交配后育苗，对其后代全雄虾苗进行RNA干扰后养殖至性别分化，挑选其中表型为雌虾的“假雌”虾，用于后续继续传代和扩繁。
前述的一种全雄青虾规模化繁育的方法，步骤一中dsRNA合成的具体步骤为：按照T7High Yield Transcription Kit试剂盒的操作步骤进行dsRNA的制备，合成含有T7启动子的sequence1的DNA作为反应的模板，反应体系为：T7 RNAPolymerase Mix 2μl；ReactionBuffer4μl；ATP/UTP/GTP/CTP Solution mix 8μl；DNA模板2μl；RNase Inhibitor 3μl，RNase-free H2O 31μl；反应液混匀后，在PCR仪上37℃反应2h后；所得的转录产物进行纯化、浓度测定后用于后续RNAi试验。
前述的一种全雄青虾规模化繁育的方法，步骤二中的虾苗的选取的方法为：收集安徽升金湖、湖南洞庭湖地区的野生青虾，体长大于6cm，体重大于3g，收集完以后保留升金湖地区的雄性个体作为父本，保留洞庭湖地区的雌虾作为母本，用于后续育种试验。
前述的一种全雄青虾规模化繁育的方法，步骤二中的虾苗的繁殖的方法为：
步骤a，室内驯化与营养强化：
收集的虾雌雄分开于独立的水泥池饲养，水温要保持在22℃左右，每天饲料早晚投喂一次，每周投喂螺蛳肉2次进行营养强化，投喂量为虾体重的1％～3％，每天人工吸污，保证池底洁净；每周换水2次，每次换水量为20％；
步骤b，人工繁殖：
营养强化1个月后，水温升至27℃时，按照雌雄比4：1进行混合投放种虾进行交配；雌虾产卵后，将抱卵的青虾转移至孵化池饲养，放养密度为20只/平方米；每天观察受精卵孵化情况；保持水质、水温稳定，溶解氧＞6mg/L，亚硝酸＜0.03mg/L；
受精卵孵化后，用100目网布从表层收集幼体；计数以后，参照10万尾/m3的密度将幼体放至育苗池中；第二天向水池中添加小球藻到终浓度100万细胞/ml，开始投喂丰年虫、轮虫、枝角类等青虾幼体喜食的饵料生物，每天四次；培育时，育苗池水温在30℃左右，pH值在7.2～8.2之间；全池曝气，溶氧≥5mg/L，每日换水一次，换水量20％，保持水质稳定；每天观察幼体摄食、蜕皮发育情况，幼体经20天左右培育完成变态发育、开始转为底栖时，投喂南美白对虾配合饲料粉料，日投喂量为虾苗体重的1～2％。
根据权利要求1所述的一种全雄青虾规模化繁育的方法，其特征在于，所述步骤二中sequence1基因dsRNA对虾苗的转染具体方法为：选取变态后虾苗p＜40，按照1μg/只的dsRNA注射于青虾的肌肉中，注射后虾苗放回水泥池饲养，当天按照10g/m3泼洒维生素C减少应激性。
前述的一种全雄青虾规模化繁育的方法，步骤三中鉴定雌雄性别情况的方法为：采用人工观察法，青虾体长至3.0±0.5cm时抓捕，利用青虾雄性生殖孔凸起鉴定性别，第五步足基部存在凸起的为雄虾，不存在凸起的为雌虾。
前述的一种全雄青虾规模化繁育的方法，步骤四中所述“假雌”亲本的检测与筛选的具体方法包括：
分子标记进一步筛选：
利用青虾性别特异性分子标记，对群体中表型为雌性的青虾进行遗传学上的鉴定；提取每只雌虾的DNA后，然后进行PCR扩增后进行电泳验证，正常群体中，雌虾的DNA可以扩增出片段，而雄虾DNA无法扩增出条带。
前述的一种全雄青虾规模化繁育的方法，步骤五中全雄青虾母本“假雌”虾的传代的具体方法包括：
步骤a，用正常性别的雄虾与RNAi干扰后的雌虾，按照雌雄比4:1进行配对，水温保持在27℃。交配产卵后，抓取抱卵虾单独孵化，待孵化出幼体后，以雌虾为单位建立家系，每个家系的幼体培育至变态后成仔虾；待每个家系的后代单独培育至3cm左右，采用人工观察法，通过足基部的雄性交接器凸起来判断雌雄；当子代的雌雄比例约为1:1时，母本的遗传型为ZW，淘汰该母本；当子代雄性比例为100％时，保留其ZZ型母本用于后续扩繁；
步骤b，对筛选后的“假雌”亲本进行精养，然后进行交配产卵，待繁育仔虾后，对全雄仔虾进行规模化RNAi干扰，将合成的dsRNA用壳聚糖纳米颗粒包被以后，按照1μg/只的标准注射到虾苗的肌肉处，全雄的ZZ型子代经过RNAi逆转后，筛选其中表型为雌性的虾，均为假雌虾，ZZ型假雌虾在水泥池养殖3个月左右开始性成熟，随后可与正常雄虾交配，然后进入室外土塘大规模繁殖或者工厂化育苗。
前述的一种全雄青虾规模化繁育的方法，步骤五中全雄青虾母本“假雌”虾的大规模扩繁的具体方法还包括：步骤c，将假雌虾转移至室外池塘进行为期2个月的养殖；室外养殖期间，养殖密度控制在30000尾/亩，养殖期间，每天投喂两次，每周投喂2次螺蛳肉进行营养强化，保持水质的稳定，进水时用80目筛绢网过滤，经室外营养强化的雌虾体长达到4cm以上，抱卵量4000个以上/个，此后可进行全雄青虾规模化生产，采用室外土池育苗或者进行工厂化育苗。
本发明的有益之处在于：
本发明发现从青虾克隆青虾sequence1基因片段，根据青虾sequence1基因序列设计并合成dsRNA，在虾苗时期经过显微注射导入到青虾体内，干扰sequence1基因片段的表达可以引起雄虾向雌虾性别逆转获得假雌虾。干扰后的虾，采用性别特异性分子标记和家系交配验证结合的方式筛选获得的假雌亲本；经筛选的假雌亲本与正常雄虾交配繁殖，能够产生100％的全雄后代，能够有效解决青虾过渡繁殖引起养殖密度过高的问题，雄虾生长快，蜕皮同步性高，残杀率低，便于养殖管理，提高养殖产量；
因为上市规格大，所以价格优势明显，经济效益提升明显。
附图说明
图1是本发明的全雄青虾制种过程流程图；
图2是青虾的雌雄性别分子检测图。
具体实施方式
以下结合附图和具体实施例对本发明作具体的介绍。
理论基础：在青虾幼体期,将青虾普通苗种进行RNAi干扰，沉默青虾体内sequence1序列：TCAGGGGCCATGAACTCTTCCACGGGTACGCCCTCGTCGTCATTGGCAACACGTACCTCGAGCGGCTCGGTCTGGACAACGTGACGGACATTCTGAACGGATCCGTCCGGATCGAGAAAAACTGGATCCTGTGCCCCGGCCTGGACAACATGTGGGAGAACATCACCCACAAGTCCAGGGAAGCCAAAAACGTCATCCAGAACAACTACATCTACTGCATCTACGACCCTTGTGAGACGGACAACAGCTGTCCCACGGAGGTGAGGTCCAACAACAAGGTTTGCTCCSEQNO01。使得其中的雄虾性别逆转为假雌虾，假雌虾是表型为雌性且具有产卵功能的雄虾。经过养殖后，先利用分子标记初步筛选出假雌虾，再与普通父本交配后建立家系，通过子代的性别比例来推断RNAi处理后亲本性别的遗传类型，筛选其中真正的假雌虾。经筛选的假雌虾用于后续建立全雄品系，再利用繁殖的全雄苗进行RNAi干扰，批量获取假雌虾，完成全雄青虾的传代和规模化扩繁。
一种全雄青虾规模化繁育的方法，如图1所示，包括如下步骤：
步骤一，根据青虾基因序列sequence1序列体外制备dsRNA；
从青虾的精巢中提取RNA后，采用逆转录试剂盒的试剂及操作方法合成cDNA；根据转录组SEQNO 01序列，设计合成引物序列sequence1F(5-3TCAGGGGCCATGAACTCT，SEQNO02)和sequence1R(5-3GAGCAAACCTTGTTGTTGGA，SEQNO 03)；再利用primestar max premix进行PCR扩增序列；PCR产物经过琼脂糖凝胶电泳后，转入PMD-T19载体中后转化入DH5α感受态细胞中，经蓝白斑菌落筛选，挑取白色单菌落到LB液体培养基继续培养后经菌落PCR检测后，送测序公司完成测序；获得的序列用于后续dsRNA合成；
作为一种优选，步骤一中dsRNA合成的具体步骤为：按照T7 High YieldTranscription Kit试剂盒的操作步骤进行dsRNA的制备，合成含有T7启动子的sequence1的DNA作为反应的模板，反应体系为：T7 RNA Polymerase Mix 2μl；Reaction Buffer 4μl；ATP/UTP/GTP/CTP Solution mix 8μl；DNA模板2μl；RNase Inhibitor 3μl，RNase-freeH2O 31μl；将反应液混匀后，在PCR仪上37℃反应2h后；所得的转录产物进行纯化、浓度测定后用于后续RNAi试验。
步骤二，将得到的dsRNA对虾苗进行转染，检测干扰效果；
作为一种优选，虾苗的选取的方法为：收集安徽升金湖、湖南洞庭湖地区的野生青虾，体长大于6cm，体重大于3g，收集完以后保留升金湖地区的雄性个体作为父本，保留洞庭湖地区的雌虾作为母本，用于后续育种试验。
作为一种优选，虾苗的繁殖的方法为：
步骤a，室内驯化与营养强化：
收集后的虾雌雄分开后于独立的水泥池饲养。水温要保持在22℃左右，每天饲料早晚投喂一次，每周投喂螺蛳肉2次进行营养强化，投喂量为虾体重的1％～3％。每天人工吸污，保证池底洁净。每周换水2次，每次换水量为20％。
步骤b，人工繁殖：
营养强化1个月后，水温升至27℃时，按照雌雄比4：1进行混合投放种虾进行交配。雌虾产卵后，将抱卵青虾转移至孵化池进行饲养，放养密度为20只/平方米。孵化期间每天观察受精卵孵化情况。保持水质、水温稳定，溶解氧＞6mg/L，亚硝酸＜0.03mg/L。
受精卵孵化后，用100目网布从表层收集幼体。幼体定量计数以后，参照10万尾/m3的密度将幼体放至育苗池中。第二天向池中添加小球藻到终浓度100万细胞/ml，开始投喂丰年虫、轮虫、枝角类等青虾幼体喜食的饵料生物，每天四次。培育时，育苗池水温在30℃左右，pH值在7.2～8.2之间。全池曝气，溶氧≥5mg/L，每日换水一次，换水量20％，保持水质稳定。每天观察幼体摄食、蜕皮发育情况，青虾幼体经20天左右完成变态发育、开始转为底栖时，投喂南美白对虾配合饲料粉料，日投喂量为虾苗体重的1～2％。
作为一种优选，将得到的dsRNA对虾苗转染具体方法为：选取变态后虾苗p＜40，按照1μg/只的dsRNA注射于青虾肌肉中，注射完以后，放回水泥池饲养，当天按照10g/m3泼洒维生素C减少应激性。
步骤三，将RNA干扰后的青虾饲养至体长3±0.5cm时抓捕，鉴定雌雄性别情况；对其中表型为雌虾的虾进行分子生物学性别鉴定；
作为一种优选，鉴定雌雄性别情况的方法为：采用人工观察法，通过足基部的雄性交接器凸起来判断雌雄。然后对群体中表型为雌性的青虾进行遗传学上的鉴定；提取每只雌虾的DNA后，进行PCR扩增后进行电泳验证，测试结果如图2所示，经过PCR检测以后，正常群体中，雌虾DNA显示250bp的条带，而雄虾DNA无法扩增出条带。
步骤四，全雄青虾的培育与验证：
经分子标记检测出的“假雌”♀ZZ亲虾养殖至卵巢发育成熟，后与雄虾♂ZZ交配受精；
按照每个雌虾建立家系，获得的每个家系的仔虾进行分池养殖，体长至3±0.5cm鉴定雌雄性别情况；保留子代全部是雄虾的母本，用与后续全雄虾苗的培育。
作为一种优选，家系验证筛选的方法为：用正常性别的雄虾与假雌虾按照雌雄比4:1进行配对，水温保持在27℃，完成交配产卵后，抓取抱卵虾单独孵化，待孵化出幼体，以雌虾为单位建立家系，每个家系的幼体采用步骤1的方法培育成仔虾。待每个家系的后代单独培育至3cm左右，采用人工观察法，通过第五步足基部的雄性交接器凸起来判断雌雄。当子代的雌雄比例约为1:1时，母本的遗传型为ZW，淘汰该母本；当子代雄性比例为100％时，保留其ZZ型母本用于后续扩繁；
步骤五，全雄青虾母本“假雌”虾的传代：
“假雌”亲本的扩群传代：
经家系验证后的假雌亲本精养后进行交配产卵，待繁育成仔虾后，对全雄仔虾进行规模化RNAi干扰，将合成的dsRNA用壳聚糖纳米颗粒包被以后，按照1μg/只的标准注射到全雄虾苗的肌肉处，经过壳聚糖纳米颗粒包被以后，dsRNA进入青虾体内干扰效率显著性提高到30％。全雄ZZ型虾苗经过RNAi逆转后，筛选其中表型为雌性的虾，均为假雌虾，ZZ型假雌虾在水泥池养殖3个月左右开始性成熟。随后可以与正常雄虾交配，然后进入室外土塘大规模繁殖或者工厂化育苗；
为了进一步提高假雌虾产卵量，作为一种优选，步骤c，将假雌虾转移至室外池塘进行为期2个月的养殖，提高其规格与产卵量。室外养殖期间，养殖密度控制在30000尾/亩，养殖期间，每天投喂两次，每周投喂2次螺蛳肉进行营养强化，保持水质的稳定，进水时用80目筛绢网过滤，防止普通雌虾进入池塘引起的串种。经过室外营养强化的雌虾体长可以达到4cm以上，单只抱卵量4000个以上，此后采用室外土池育苗或者进行工厂化育苗，进行全雄青虾规模化生产。
以下通过实验验证采用本发明的方法得到的青虾的技术效果：
将本发明获得的全雄青虾在德清开展养殖对比测试：
试验塘为6个2亩左右的标准小池塘，3月20日左右，池塘遍池用生石灰60千克/亩进行清塘消毒，消除野杂鱼和其他虾类的残余品种，并晒塘10天。4月15日池塘开始进水，池塘进水1米左右开始调水肥水，水质保持“肥、活、爽、嫩”，透明度在30厘米左右。4月25日，水质稳定以后，按照每亩30000尾的密度投放工场化全雄青虾苗。对照组放苗规格为2000尾/kg，放苗15kg/亩，共计30000尾/亩。投苗以后，根据天气与温度情况，每天投喂1次，按青虾总重量的0.5％～1％投喂，每周调整一次投喂量，每15天加水一次，每次换水量不超过20cm。养殖期间，勤于观察，做好养殖管理与记录。经过100天左右养殖，青虾规格达到5cm以上，开始用地笼抓捕。统计雄虾的产量、雄性率、规格在3g以上的比例，实验结果见表1。
表1
Figure BDA0003494377750000071
结果分析：经过统计分析后，发现全雄青虾规格在4g以上的比例在69.8％，同步性好，雄性率100％。平均产量在62.5kg/亩，明显优于对照组的普通虾苗。因此，经济效益可观。
本发明方法攻克目前青虾养殖过程中过渡繁殖和早熟的问题，也有利于解决青虾自繁过程中的近交衰退。用本发明提供的方法步骤，可以培育全雄青虾，雄性率99％以上；全雄品种在养殖过程中，养殖4个月，相比普通品种亩产增加8％以上，5g大规格青虾比例提高15％。本发明建立的规模化培育全雄青虾的方法，操作性强，培育的全雄青虾具有生长快、性状稳定，能够有效控制养殖密度，为实现青虾的单性化养殖提供强有力的技术支撑。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征和优点。本行业的技术人员应该了解，上述实施例不以任何形式限制本发明，凡采用等同替换或等效变换的方式所获得的技术方案，均落在本发明的保护范围内。
                         序列表
<110>  浙江省淡水水产研究所
<120>  一种全雄青虾规模化繁育的方法
<141>  2022-01-26
<160>  3
<170>  SIPOSequenceListing 1.0
<210>  1
<211>  287
<212>  DNA
<213>  Macrobrachium rosenbergii
<400>  1
tcaggggcca tgaactcttc cacgggtacg ccctcgtcgt cattggcaac acgtacctcg  60
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acaacagctg tcccacggag gtgaggtcca acaacaaggt ttgctcc               287
<210>  2
<211>  18
<212>  DNA
<213>  Artificial Sequence
<400>  2
tcaggggcca tgaactct                                                18
<210>  3
<211>  20
<212>  DNA
<213>  Artificial Sequence
<400>  3
gagcaaacct tgttgttgga                                              20

Claims (9)

1.一种全雄青虾规模化繁育的方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一，根据青虾基因序列sequence1序列体外制备dsRNA；
从青虾的精巢中提取RNA后，采用逆转录试剂盒的试剂及操作方法合成cDNA；根据转录组SEQ NO 01序列，设计合成引物序列sequence1F和sequence1R；
再利用primestar max premix进行PCR扩增序列；
PCR产物经过琼脂糖凝胶电泳后，转入PMD-T19载体中后转化入DH5α感受态细胞中，经蓝白斑菌落筛选，挑取白色单菌落到LB液体培养基继续培养后经菌落PCR检测后，送测序公司完成测序；
获得的序列用于后续dsRNA合成；
步骤二，将得到的dsRNA对虾苗进行RNAi显微注射，检测干扰效果；
步骤三，将RNA 干扰后的青虾饲养至体长3±0.5 cm时抓捕，鉴定雌雄性别情况；对其中表现型为雌虾的进行分子生物学性别鉴定；
步骤四，全雄青虾的培育与验证：
选取经过分子标记验证的“假雌”♀ZZ亲虾继续养殖至卵巢发育成熟，后与雄虾♂ZZ交配受精；
以每个雌虾为单位建立家系，获得的每个家系的仔虾进行分池养殖，体长至3±0.5cm鉴定雌雄性别；保留子代全部是雄虾的母本，用与后续全雄虾苗的培育；
步骤五，全雄青虾母本“假雌”虾的传代：
将经验证后 “假雌”♀ZZ亲虾与雄虾♂ZZ交配后育苗，对其后代全雄虾苗进行RNA干扰后养殖至性别分化，挑选其中表型为雌虾的“假雌”虾，用于后续继续传代和扩繁。
2. 根据权利要求1所述的一种全雄青虾规模化繁育的方法，其特征在于，所述步骤一中dsRNA合成的具体步骤为：按照T7 High Yield Transcription Kit试剂盒的操作步骤进行dsRNA的制备，合成含有T7启动子的sequence1的DNA作为反应的模板，反应体系为：T7RNA Polymerase Mix 2μl；Reaction Buffer 4μl；ATP /UTP/ GTP/ CTP Solution mix 8μl；DNA模板2μl ；RNase Inhibitor 3μl，RNase-free H2O 31μl；反应液混匀后，PCR仪上37℃反应2h后；所得的转录产物进行纯化、浓度测定后用于后续RNAi试验。
3.根据权利要求1所述的一种全雄青虾规模化繁育的方法，其特征在于，所述步骤二中的虾苗的选取的方法为：收集安徽升金湖、湖南洞庭湖地区的野生青虾，体长大于6cm，体重大于3g，收集完以后保留升金湖地区的雄性个体作为父本，保留洞庭湖地区的雌虾作为母本，用于后续育种试验。
4.根据权利要求1所述的一种全雄青虾规模化繁育的方法，其特征在于，所述步骤二中的虾苗的繁殖的方法为：
步骤a，室内驯化与营养强化：
收集的虾雌雄分开后于独立水泥池饲养，水温保持在22 ℃左右，每天早晚投喂饲料一次，每周投喂螺蛳肉2次进行营养强化，投喂量为虾体重的1%～3%，每天人工吸污，保证池底洁净；每周换水2次，每次换水量为20%；
步骤b，人工繁殖：
营养强化1个月后，水温升至27℃时，按照雌雄比4：1混合投放种虾进行交配；雌虾产卵后，将抱卵青虾转移至孵化池进行单独饲养，密度为20只/平方米；每天观察受精卵孵化情况；保持水质、水温稳定，溶解氧＞6mg/L，亚硝酸＜0.03 mg/L；
受精卵孵化后，用100目网布从表层收集幼体；幼体计数以后，参照10万尾/立方米的密度将幼体放至育苗池中；布虾苗后，第二天向水池中添加小球藻到终浓度100万细胞/ml，同时投喂丰年虫、轮虫、或枝角类饵料生物，每天四次；培育时，育苗水温在30℃左右，pH值在7.2～8.2之间；全池曝气，溶氧≥5 mg /L，每日换水一次，换水量20%，保持水质稳定；每天观察幼体摄食、蜕皮发育情况，青虾幼体经20天左右培育完成变态发育、转为底栖时，开始投喂南美白对虾配合饲料粉料，日投喂量为虾苗体重的1~2%。
5.根据权利要求1所述的一种全雄青虾规模化繁育的方法，其特征在于，所述步骤二中将得到的dsRNA对虾苗转染具体方法为：选取变态后虾苗p＜40，按照1μg/只的dsRNA注射于青虾肌肉中，注射后，放回室内水泥池饲养，当天按照10g/m3水体泼洒维生素C减少应激性。
6.根据权利要求1所述的一种全雄青虾规模化繁育的方法，其特征在于，所述步骤三中鉴定雌雄性别情况的方法为：采用人工观察法，通过足基部的雄性交接器凸起来判断雌雄。
7.根据权利要求1所述的一种全雄青虾规模化繁育的方法，其特征在于，步骤四中所述“假雌”亲本的检测与筛选的具体方法包括：
分子标记精细筛选：
利用青虾性别特异性分子标记，对群体中表型为雌性的青虾进行遗传学上的鉴定；提取每只雌虾的DNA后，然后进行PCR扩增后进行电泳验证，正常群体中，雌虾的DNA可以扩增出片段，而雄虾DNA无法扩增出条带。
8.根据权利要求1所述的一种全雄青虾规模化繁育的方法，其特征在于，所述步骤五中全雄青虾母本“假雌”虾的传代的具体方法包括：
对筛选后的假雌亲本进行精养后，进行交配产卵，待繁育仔虾后，对全雄仔虾进行规模化RNAi干扰，将合成的dsRNA用壳聚糖纳米颗粒包被，按照1μg/只的标准注射到雄性虾苗的肌肉处，全雄的ZZ型子代经过RNAi逆转后，筛选其中表型为雌性的虾，均为假雌虾；ZZ型假雌虾在水泥池养殖3个月左右开始性成熟，随后可以与正常雄虾交配，然后进入室外土塘大规模繁殖或工厂化育苗。
9. 根据权利要求5所述的一种全雄青虾规模化繁育的方法，其特征在于，所述步骤五中全雄青虾母本“假雌”虾的扩繁的具体方法还包括：步骤c，将假雌虾转移至室外池塘进行2个月的养殖；室外养殖期间，养殖密度控制在30000尾/亩，养殖期间，每天投喂两次，每周投喂2次螺蛳肉进行营养强化，保持水质的稳定，进水时用80目筛绢网过滤，经过室外营养强化的雌虾体长达到4cm以上，抱卵量4000个以上/只, 此后采用室外土池育苗或者进行工厂化育苗，进行全雄青虾规模化生产。
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