CN110338104A - 使用乙炔雌二醇的浸泡处理来诱导奥利亚罗非鱼的雌性化的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明揭示一种使用乙炔雌二醇的浸泡处理来诱导奥利亚罗非鱼的雌性化的方法，其包括将鱼龄为1至3dph(days post hatching)的奥利亚罗非鱼浸泡于142至200ppm的浓度范围的乙炔雌二醇中历时1至3分钟。
Description
技术领域
本发明是有关于一种用于诱导奥利亚罗非鱼的雌性化的方法，其 包括将鱼龄为1至3dph(days post hatching)的奥利亚罗非鱼浸泡 于具有一范围落在142至200ppm的浓度的乙炔雌二醇中历时1至3 分钟。
背景技术
罗非鱼(tilapia)是一群属于慈鲷科(Cichlidae)的淡水鱼类，具 有生长快速、繁衍能力强、适应力佳以及杂食性等优点，而成为世界 水产养殖业收成量居首的养殖鱼类。常见的养殖鱼种包括尼罗口孵非 鲫(Oreochromis niloticus)[又被称为尼罗罗非鱼(Nile tilapia)] 以及奥利口孵丽鲷(Oreochromis aureus)[又被称为奥利亚罗非鱼(Tilapia aurea)]等。
当雄鱼与雌鱼混在一起养殖时，罗非鱼会因自行繁殖而消耗能 量，进而使得成长速度变得缓慢，再者，由繁殖所产生的子代鱼只数 量的增加会导致养殖池的养殖密度过高，进而造成成长停滞。因此， 单性养殖(mono-sex culture)已被广泛地采用来解决上述问题。此外， 在单性养殖的情况下雄鱼的成长速度与体重被发现可达致雌鱼所具 者的2倍。于是，如何获得雄性罗非鱼即成为本领域所致力的目标。 虽然雄性奥利亚罗非鱼的体型较小，但将雄性的奥利亚罗非鱼(ZZ♂) 拿来与雌性的尼罗罗非鱼(XX♀)进行交配[也就是种间杂交 (interspecific hybridization)]，则而得到体型较大的全雄性的罗 非鱼杂交种(all-male tilapia hybrids)(XZ♂)。因此，对于水产养 殖业者而言，存在有一需要去发展出一种提高雄性奥利亚罗非鱼的子 代的方法。
目前已有研究尝试利用雌性激素(estrogen)的喂食来诱导奥利 亚罗非鱼的雌性化，并且通过将所述经雌性化的奥利亚罗非鱼 (ZZ△♀)与雄性的奥利亚罗非鱼(ZZ♂)进行交配来提高子代的雄性 率。例如，在Melard(1995),Aquaculture,130:25-34中，Melard 将配于95％乙醇中的乙炔雌二醇(ethinyl estradiol)[又被称为 17α-乙炔基雌二醇(17α-ethynylestradiol)]喷洒于饲料中，而分 别得到含有100、150以及200mg/kg的乙炔雌二醇的饲料。接着， 分别对奥利亚罗非鱼鱼苗喂食以所述3种饲料历时40天。而实验结 果发现，使用100、150以及200mg/kg的乙炔雌二醇来诱导奥利亚 罗非鱼的雌性化，所得到的奥利亚罗非鱼的雌性率分别为94％、93％ 以及98％。Melard进一步将所得到的经雌性化的奥利亚罗非鱼拿来与 雄性的奥利亚罗非鱼进行交配，而得到的子代的雄性率为68％至100％。
由于利用雌性激素的喂食来诱导雌性化需要较长的时间并且具 有适口性差以及雌性激素喂食不均匀的问题，因而难以确保所有的奥 利亚罗非鱼鱼苗皆有摄取到足够的雌性激素。因此，若能发展出一种 操作方便快速并且具有稳定雌性率的诱导方法，会是我们所企望达成 的。
发明内容
于是，本发明提供一种使用乙炔雌二醇的浸泡处理来诱导奥利 亚罗非鱼的雌性化的方法，其包括将鱼龄为1至3dph的奥利亚罗 非鱼浸泡于具有一范围落在142至200ppm的浓度的乙炔雌二醇中 历时1至3分钟。
本发明所述使用乙炔雌二醇的浸泡处理来诱导奥利亚罗非鱼的 雌性化的方法，所述奥利亚罗非鱼的鱼龄为3dph。
本发明所述使用乙炔雌二醇的浸泡处理来诱导奥利亚罗非鱼的 雌性化的方法，所述乙炔雌二醇的浓度为200ppm。
本发明所述使用乙炔雌二醇的浸泡处理来诱导奥利亚罗非鱼的 雌性化的方法，所述浸泡是在25至30℃下被进行。
本发明所述使用乙炔雌二醇的浸泡处理来诱导奥利亚罗非鱼的 雌性化的方法，所述浸泡是在25℃下被进行。
具体实施方式
为了这本说明书的目的，将被清楚地了解的是：文字“包含有 (comprising)”意指“包含但不限于”，以及文字“包括 (comprises)”具有一对应的意义。
除非另外有所定义，在本文中所使用的所有技术性与科学术语具 有本领域技术人员所共同了解的意义。熟悉本技艺者会认知到许多与 那些被描述于本文中相似或等效的方法和材料，它们可被用于实施本 发明。当然，本发明决不受到所描述的方法和材料的限制。
为了发展出一种操作方便快速并且具有稳定雌性率的浸泡制程， 申请人发现使用142至200ppm的乙炔雌二醇来对奥利亚罗非鱼鱼苗 进行浸泡处理能够有效地诱导雌性化。
因此，本发明提供一种用于诱导奥利亚罗非鱼的雌性化的方法， 其包括将鱼龄为1至3dph的奥利亚罗非鱼浸泡于具有一范围落在 142至200ppm的浓度的乙炔雌二醇中历时1至3分钟。
较佳地，所述奥利亚罗非鱼的鱼龄为3dph。
较佳地，乙炔雌二醇的浓度为200ppm。
依据本发明，所述浸泡可在25至30℃下被进行。在本发明的一 个较佳具体例中，所述浸泡是在25℃下被进行。
依据本发明，依据本发明方法所得到的经雌性化的奥利亚罗非鱼 (ZZ△♀)(也就是F1子代)可被拿来与一野生型(wild-type)的雄性的 奥利亚罗非鱼(ZZ♂)交配以得到全雄性的奥利亚罗非鱼(ZZ♂)(也就 是F2子代)。所述全雄性的奥利亚罗非鱼(ZZ♂)可直接被拿来做为食 品，或者被拿来生成全雄性的罗非鱼杂交种(all-male tilapia hybrids)(XZ♂)，而其操作流程如下：先将一利用本发明所属技术领 域的惯用技术所得到的经雄性化的尼罗罗非鱼(XX△♂)与一野生型 的雌性的尼罗罗非鱼(XX♀)交配以得到全雌性的尼罗罗非鱼(XX♀)。 接着，将所得到的全雌性的尼罗罗非鱼(XX♀)与全雄性的奥利亚罗非 鱼(ZZ♂)(也就是F2子代)交配，则可得到全雄性的罗非鱼杂交种 (XZ♂)(也就是F3子代)。
本发明将就下面的实施例来做进一步说明，但应了解的是，所述 实施例仅是供例示说明用，而不应被解释为本发明的实施上的限制。 <实施例>
实施例1.利用乙炔雌二醇(ethinyl estradiol)的浸泡处理来诱导 奥利亚罗非鱼(Tilapia aurea)的雌性化(feminization)
实验材料：
A.制备3dph的奥利亚罗非鱼鱼苗：
在本实施例中被用来作为种鱼(parent fish)的奥利亚罗非鱼雄 鱼与雌鱼(鱼龄为12个月大以上)是由嘉义大学水生生物科学系 (Department of Aquatic Biosciencesat National Chiayi University)的郭建贤教授所提供。雄鱼以及雌鱼分别于自然光照下被饲养于水温维持在25℃以及溶氧量(dissolved oxygen,DO)维持在 6mg/L以上的水泥池中，而且饲料被充分地供给。交配时，雄鱼与雌 鱼是以一为2：5的比例来进行，受精卵(fertilized egg)是通过冲 洗雌鱼的口腔而被收取，继而于25℃下进行培育历时7至14天，借 此而得到3dph的鱼苗。
实验方法与结果：
将适量的乙炔雌二醇配于10mL的乙醇中，继而添加至含有5L 水的水缸中并予以混合，而使得所述水缸含有所欲的乙炔雌二醇浓 度。接着，于25℃下将3dph的奥利亚罗非鱼鱼苗置于所述水缸中进 行诱导历时3分钟。之后，将经诱导的鱼苗移置一设置有增氧装置 (oxygen-enriched equipment)的水缸中进行培育。7个月后，观察所 有存活鱼只的性别并计算雌性率(percentage of female)。试验总共 进行5次，各次试验所使用的乙炔雌二醇浓度与鱼苗数目以及所得到 的雌性率被显示于下面表1中。
表1.试验所使用的乙炔雌二醇浓度与鱼苗数目以及所得到的雌性率
由表1可见，各次试验的雌性率皆为大约87％以上，特别地，当 乙炔雌二醇浓度为200ppm时可得到高达100％的雌性率。相对地，在 未处理雌性激素的一般情况下，雄鱼与雌鱼交配而得的子代的雌性率 应为50％。这个实验结果显示：使用142.85至200ppm的乙炔雌二醇 来对奥利亚罗非鱼鱼苗进行浸泡处理能够有效地诱导雌性化。
此外，申请人进一步将经由浸泡于200ppm的乙炔雌二醇而得到 的经雌性化的奥利亚罗非鱼拿来与雄性的奥利亚罗非鱼以一为5：2 的比例来进行交配，而得到的子代的雄性率高达95％至100％。这个实 验结果显示：依据本发明方法所得到的雌性化奥利亚罗非鱼可供用于 生产全雄性的奥利亚罗非鱼。
于本说明书中被引述的所有专利和文献以其整体被并入本申请 作为参考数据。若有所冲突时，本申请详细说明(包含界定在内)将占 上风。
惟以上所述者，仅为本发明的具体实施方式而已，不能以此限定 本发明实施的范围，凡是按照本发明权利要求及说明书内容所作的简 单等效变化与修饰，皆仍属本发明权利要求涵盖的范围内。
Claims (5)
1.一种使用乙炔雌二醇的浸泡处理来诱导奥利亚罗非鱼的雌性化的方法，其特征在于：所述方法包括：将鱼龄为1至3dph的奥利亚罗非鱼浸泡于具有一范围落在142至200ppm的浓度的乙炔雌二醇中历时1至3分钟。
2.根据权利要求1所述的使用乙炔雌二醇的浸泡处理来诱导奥利亚罗非鱼的雌性化的方法，其特征在于：所述奥利亚罗非鱼的鱼龄为3dph。
3.根据权利要求1所述的使用乙炔雌二醇的浸泡处理来诱导奥利亚罗非鱼的雌性化的方法，其特征在于：所述乙炔雌二醇的浓度为200ppm。
4.根据权利要求1所述的使用乙炔雌二醇的浸泡处理来诱导奥利亚罗非鱼的雌性化的方法，其特征在于：所述浸泡是在25至30℃下进行。
5.根据权利要求4所述的使用乙炔雌二醇的浸泡处理来诱导奥利亚罗非鱼的雌性化的方法，其特征在于：所述浸泡是在25℃下进行。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Application publication date: 20191018 |
|
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |