CN104488759B - 一种分子辅助选育草鱼优良品系及选育效果验证的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种分子辅助选育草鱼优良品系及选育效果验证的方法，包括：选择形态特征好、遗传多样性高的草鱼作为亲本，标记为G1，注射激素进行催熟，人工授精获得受精卵，进行1龄种鱼培育；同年12月优选G1中具有生长优势的个体进行抗性实验，存活的个体通过草鱼亲子鉴定的技术找出对应的亲本G1A，通过对G1A及其第二年子代g1A进行验证确定优良品系。使用本发明的草鱼优良品系选育及验证方法，周期短，且可根据不同的养殖环境需要选育出具有相应抗性的优良草鱼品系。
Description
【技术领域】
本发明涉及草鱼优良品种选育及效果验证的方法，具体地说，是一种分子辅助选育草鱼优良品系及选育效果验证的方法。
【背景技术】
草鱼是我国四大家鱼之一，在我国已有近两千年的养殖历史。早期草鱼养殖用鱼苗主要是从天然水体中捕捞，靠天吃饭一直限制草鱼养殖行业的发展；草鱼人工繁殖技术突破后，我国出现了大规模草鱼养殖状况；目前，草鱼产量已多年保持在淡水养殖第一位。但目前草鱼养殖行业仍面临较多困扰，最重要的问题是草鱼种质资源正在不断衰退。不注重亲鱼的选育与更新、甚至进行逆向选育或近亲繁殖，是导致草鱼种质资源不断衰退的主要原因。
草鱼选育工作中最重要的环节是亲本的选择。在传统选育方法中，亲本的选择主要依据其形态特征，但亲本之间的亲缘关系不容易确定，会导致选育结果的不稳定性；且草鱼性成熟年龄较长，传统选育过程消耗大量的人力物力，选育结果也很难验证；尤为重要的是，我国草鱼养殖环境复杂，不同时间、地域有其独特性，需要有不同的优良品系，而传统选育方法自身特点很难满足这一要求。随着现代生物技术的发展，细胞、生化、分子等技术也逐渐应用于草鱼选育工作，已出现了抗性强或生长快的转基因草鱼品系。但大众对转基因的认同率普遍较低，转基因草鱼的发展受到一定限制。
中国专利文献200910197874.X，公开了一种养殖草鱼家系的构建和良种选育方法，该种方法能选育出优质、高产、稳产的草鱼新品种，但其需要分别对鱼种的夏花、1龄鱼、2龄鱼、3龄鱼、4龄鱼五个阶段进行优选，耗时长，而且该种方法没有涉及对草鱼的抗病毒、耐盐、耐低氧等优良品系的选育。因此，开发一种能针对不同地域环境，快速选育出具有生长优势及不同抗性的草鱼选育的方法是十分必要的。
【发明内容】
本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供一种分子辅助选育草鱼优良品系及选育效果验证的方法。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：
一种分子辅助选育草鱼优良品系及选育效果验证的方法，包括以下步骤：
(1)亲本的选择：选择体型匀称，活泼健康，体重高于平均体重15～20％，并达到性成熟的草鱼作为待选亲本；使用PIT标记对每条待选亲本进行编号，并剪取每条鱼的胸鳍，用12对微卫星对剪下来的胸鳍进行STR分型，对分型结果用Cervus3.0软件分析这些待选亲本的遗传多样性；对遗传多样性较低的待选亲本进行舍去，有较高遗传多样性的作为亲本，并标记为G0；所述G0为待选亲本中遗传多样性较高，用于后续选育实验的基本群体；所述12对微卫星序列如SEQIDNO.1～SEQIDNO.24所示。
(2)建立家系：G0亲本性腺成熟后，一次人工注射激素进行催熟，人工授精获得受精卵；每个家系的受精卵放入一个孵化桶，室温下进行孵化，孵化桶底部进入流水，水从桶上面流出；不同家系受精卵的卵膜破裂4天后，每家系随机取500条混于相同大小池塘饲养，池塘提前进行消毒，提前一周使用畜粪培育生物饵料，饲养过程中随时关注塘内生物饵料的变化情况，及时补充肥料；至夏花阶段，同一家系鱼苗平均分配到两个或两个以上池塘进行1龄种鱼培育，并标记为G1；所述G1为G0第一年子代。
(3)优良品系的筛选：同年12月对G1的生长数据进行统计，并挑选个体较大、活泼健康的G1进行抗性试验，取存活下来种鱼，并标记为G1A；取G1A的部分胸鳍，用无水乙醇保存，草鱼亲子鉴定技术找出G1A相对应的亲本，并标记为G0A，G1中除去G1A所剩下的群体标记为G1B，G0中除去G0A所剩下的群体标记为G0B；所述G1A为G1中具有生长优势且抗性试验存活的群体；所述G0A为G1A对应的亲本。
(4)优良品系的验证：第2年分别对G0A、G0B两个群体进行人工授精、建立家系、受精卵孵化和1龄种鱼培育(方法同步骤2)，分别标记为g1A和g1B；同年12月份分别对g1A和g1B两个群体的体长、体宽、体高和体重进行测量，比较g1A群体的生长优势；g1A和g1B各随机取1000尾种鱼进行抗性试验(方法同步骤3)，比较g1A群体的抗性优势；所述的g1A、g1B分别为G0A和G0B两群体亲本第二年对应的子后。
(5)优良品系的确定：通过对待选亲本的筛选和验证，G0A群体中同时满足下列两个条件的即可作为兼具生长优势、抗性的优良品系：a.第一年子代与G1B相比有生长优势和抗性；b.第二年子代与g1B相比兼具生长优势和抗性。
所述的抗性试验为抗嗜水气单胞菌攻毒试验、抗盐试验、抗低氧试验、耐高温试验。
步骤(1)中所述的G0亲本的雌雄比例为1.5～2.0:1。
步骤(2)中所述的人工受精是用干毛巾擦拭雄性草鱼的腹部和生殖孔，使用干净的注射器吸取精液，并低温保存；用干毛巾擦拭雌性草鱼的腹部和生殖孔，轻压腹部，用干燥的脸盆收集卵子；快速将需要建立的不同家系的精子、卵子混合，并用干燥的羽毛搅拌，加入少量清水搅拌，即可获得不同家系的受精卵。
步骤(2)中所述的激素为促黄体生成素释放激素类似物和地欧酮；所述激素的注射量为雌鱼每kg体重注射促黄体生成素释放激素类似物3μg，当水温偏低或性腺发育较差时，每千克体重加3mg地欧酮；雄鱼每kg体重注射促黄体生成素释放激素类似物1.5μg，当水温偏低或性腺发育较差时，每千克体重加1.5mg地欧酮。
本发明优点在于：
1、本发明的草鱼选育及验证方法周期短，只需通过第一年筛选和第二年的验证即可确定优良品系，大大缩短了选育年限。
2、本发明的草鱼选育及验证方法简单可靠，且可根据不同的养殖环境需要选育出相应抗性的优良草鱼品系。
3、本发明的草鱼选育及验证方法切实可行，不涉及转基因技术，社会认同度高。
【具体实施方式】
下面对本发明提供的具体实施方式作详细说明。
实施例1具有生长优势及抗嗜水气单胞菌的草鱼优良品系的选育及效果验证
(1)收集600对珠江水系草鱼，从中选出体型匀称，活泼健康，体重高于平均体重15～20％，并达到性成熟的雌雄草鱼250对作为待选亲本；使用PIT标记(上海逐海仪器设备有限公司，HPT8)对每条待选亲本进行编号，并剪取每条鱼的胸鳍，使用12对微卫星(表1)对剪下来的胸鳍进行STR分型，对分型结果用Cervus3.0软件分析这些待选亲本的遗传多样性(参见文献，任昆等，草鱼的微卫星亲权鉴定，南方农业学报，2013,44(8)：1367-1371)；选出100对有较高遗传多样性的作为亲本，并标记为G0。
表112对用于草鱼亲子鉴定的多重PCR微卫星序列
(2)待G0亲本性腺成熟后，采用一次人工注射促黄体生成素释放激素类似物和地欧酮进行催熟；雌性草鱼每千克体重注射促黄体生成素释放激素类似物3μg，当水温偏低或性腺发育较差时，每千克体重加3mg地欧酮，雄性草鱼剂量均减半；人工授精时：用干毛巾擦拭雄性草鱼的腹部和生殖孔，使用干净的注射器吸取精液，并低温保存；用干毛巾擦拭雌性草鱼的腹部和生殖孔，轻压腹部，用干燥的脸盆收集卵子；快速将需要建立的不同家系的精子、卵子混合，并用干燥的羽毛搅拌，加入少量清水搅拌，即可获得不同家系的受精卵。每个家系的受精卵放入一个孵化桶(孵化桶底部进入流水，水从上面流出)，室温下进行孵化。不同家系受精卵的卵膜破裂4天后，每家系随机取500条混于相同大小的池塘(提前进行消毒，并提前一周使用畜粪培育生物饵料)，随时关注塘内生物饵料的变化情况，及时补充肥料；至夏花阶段，平均分配到两个或两个以上池塘进行1龄种鱼(记为G1)培育，根据种鱼生长状况，及时更改合适的商业颗粒饲料。
(3)抗嗜水气单胞菌预实验，随机挑50条35g左右的G1，平均分为5组；分别用1×104CFU、1×105CFU、1×106CFU、1×107CFU、1×108CFU五个浓度梯度的嗜水气单胞菌对5组草鱼采取腹腔注射的方法，观测72小时后死亡率。发现攻毒浓度为1×104、1×105、5×106的均未死亡，1×108的均死亡，1×107的死亡5尾。确定嗜水气单胞菌对35g左右的G1草鱼72小时半致死浓度为1×107CFU，嗜水气单胞菌的72小时半致死浓度为1/35×107CFU/g(该浓度记为C)。
预实验得到的半致死浓度，根据体重(记为W)每条鱼腹腔注射W×C的嗜水气单胞菌。72小时后取存活下来个体的部分胸鳍，无水乙醇保存备用。
(4)同年12月分别对G1中每个家系的体长、体宽、体高和体重进行统计，计算平均值，并挑选出各项指标均处于前30％、活泼健康的G1进行抗嗜水气单胞菌攻毒试验；使用预实验得到的合适菌液浓度，根据每尾鱼的体重注射不同体积的菌液，保证每尾鱼的攻毒浓度相同。攻毒后每小时捞出已经死去的个体，72小时后取存活下来每尾鱼的部分胸鳍(标记为G1A)；利用草鱼亲子鉴定的技术(参见文献FuJ,ShenY,XuX,etal.MultiplexmicrosatellitePCRsetsforparentageassignmentofgrasscarp(Ctenopharyngodonidella)[J].AquacultureInternational,2013,21(6):1195-1207)提取G1A基因组DNA，多重PCR扩增出相应片段，送上海迈浦生物科技有限公司进行STR分型，得到G1A的STR结果，使用Cervus3.0软件对G0和G1A的STR结果进行分析，找出G1A中每个个体对应的亲本，并标记为G0A，G1中除去G1A所剩下的群体标记为G1B，G0中除去G0A所剩下的群体标记为G0B。
(5)第2年分别对优选出的G0A、G0B两个群体进行人工授精、建立家系、受精卵孵化和1龄种鱼培育(方法同上)，分别标记为g1A和g1B；同年12月份分别对g1A和g1B两个群体的体长、体宽、体高和体重进行测量，比较验证g1A群体的生长优势；g1A和g1B各随机取1000尾种鱼进行抗嗜水气单胞菌试验(方法同步骤4)，比较验证g1A群体的抗嗜水气单胞菌优势。
(6)优良品系的确定：验证G0A群体中同时满足下列两个条件的即可作为兼具生长优势、嗜水气单胞菌抗性的优良品系：a.第一年子代与G1B相比有生长优势和嗜水气单胞菌抗性；b.第二年子代与g1B相比兼具生长优势和嗜水气单胞菌抗性。
实施例2具有生长优势及耐盐的草鱼优良品系的选育及效果验证
(1)收集600对珠江水系草鱼，从中选出体型匀称，活泼健康，体重高于平均体重15～20％，并达到性成熟的雌雄草鱼300对作为待选亲本；使用PIT标记(上海逐海仪器设备有限公司，HPT8)对每条待选亲本进行编号，并剪取每条鱼的胸鳍，使用12对微卫星(表1)对剪下来的胸鳍进行STR分型，对分型结果用Cervus3.0软件分析这些待选亲本的遗传多样性(参见文献，任昆等，草鱼的微卫星亲权鉴定，南方农业学报，2013,44(8)：1367-1371)，选出120对有较高遗传多样性的作为亲本，并标记为G0。
(2)待G0亲本性腺成熟后，采用一次人工注射促黄体生成素释放激素类似物和地欧酮进行催熟；雌性草鱼每千克体重注射促黄体生成素释放激素类似物3μg，当水温偏低或性腺发育较差时，每千克体重加3mg地欧酮，雄性草鱼剂量均减半；人工授精时：用干毛巾擦拭雄性草鱼的腹部和生殖孔，使用干净的注射器吸取精液，并低温保存；用干毛巾擦拭雌性草鱼的腹部和生殖孔，轻压腹部，用干燥的脸盆收集卵子；快速将需要建立的不同家系的精子、卵子混合，并用干燥的羽毛搅拌，加入少量清水搅拌，即可获得不同家系的受精卵。每个家系的受精卵放入一个孵化桶(孵化桶底部进入流水，水从上面流出)，室温下进行孵化。不同家系受精卵的卵膜破裂4天后，每家系随机取500条混于相同大小的池塘(提前进行消毒，并提前一周使用畜粪培育生物饵料)，随时关注塘内生物饵料的变化情况，及时补充肥料；至夏花阶段，平均分配到两个或两个以上池塘进行1龄种鱼(记为G1)培育，根据种鱼生长状况，及时更改合适的商业颗粒饲料。
(3)同年12月分别对G1中每个家系的体长、体宽、体高和体重进行统计，计算平均值，并挑选出各项指标均处于前30％、活泼健康的G1进行耐盐试验；设定20℃条件下进行，每个家系取相同数目的草鱼G1，放入相同大小的生化培养箱(石狮育仁水产养殖有限公司)，用食盐调节盐度为1.8％，每小时捞出死亡个体，72小时后取存活下来每尾鱼的部分胸鳍(标记为G1A)；利用草鱼亲子鉴定的技术(参见文献FuJ,ShenY,XuX,etal.MultiplexmicrosatellitePCRsetsforparentageassignmentofgrasscarp(Ctenopharyngodonidella)[J].AquacultureInternational,2013,21(6):1195-1207)提取G1A基因组DNA，多重PCR扩增出相应片段，送上海迈浦生物科技有限公司进行STR分型，得到G1A的STR结果，使用Cervus3.0软件对G0和G1A的STR结果进行分析，找出G1A中每个个体对应的亲本，并标记为G0A，G1中除去G1A所剩下的群体标记为G1B，G0中除去G0A所剩下的群体标记为G0B。
(4)第2年分别对优选出的G0A、G0B两个群体进行人工授精、建立家系、受精卵孵化和1龄种鱼培育(方法同上)，分别标记为g1A和g1B；同年12月份分别对g1A和g1B两个群体的体长、体宽、体高和体重进行测量，比较验证g1A群体的生长优势；g1A和g1B各随机取1000尾种鱼进行耐盐试验(方法同步骤3)，比较验证g1A群体的耐盐优势。
(5)优良品系的确定：验证G0A群体中同时满足下列两个条件的即可作为兼具生长优势、耐盐性的优良品系：a.第一年子代与G1B相比有生长优势和耐盐性；b.第二年子代与g1B相比兼具生长优势和耐盐性。
实施例3具有生长优势及耐高温的草鱼优良品系的选育及效果验证
(1)收集600对珠江水系草鱼，从中选出体型匀称，活泼健康，体重高于平均体重15～20％，并达到性成熟的雌雄草鱼280对作为待选亲本；使用PIT标记(上海逐海仪器设备有限公司，HPT8)对每条待选亲本进行编号，并剪取每条鱼的胸鳍，使用12对微卫星(表1)对剪下来的胸鳍进行STR分型，对分型结果用Cervus3.0软件分析这些待选亲本的遗传多样性(参见文献，任昆等，草鱼的微卫星亲权鉴定，南方农业学报，2013,44(8)：1367-1371)，选出80对有较高遗传多样性的作为亲本，并标记为G0。
(2)待G0亲本性腺成熟后，采用一次人工注射促黄体生成素释放激素类似物和地欧酮进行催熟；雌性草鱼每千克体重注射促黄体生成素释放激素类似物3μg，当水温偏低或性腺发育较差时，每千克体重加3mg地欧酮，雄性草鱼剂量均减半；人工授精时：用干毛巾擦拭雄性草鱼的腹部和生殖孔，使用干净的注射器吸取精液，并低温保存；用干毛巾擦拭雌性草鱼的腹部和生殖孔，轻压腹部，用干燥的脸盆收集卵子；快速将需要建立的不同家系的精子、卵子混合，并用干燥的羽毛搅拌，加入少量清水搅拌，即可获得不同家系的受精卵。每个家系的受精卵放入一个孵化桶(孵化桶底部进入流水，水从上面流出)，室温下进行孵化。不同家系受精卵的卵膜破裂4天后，每家系随机取500条混于相同大小的池塘(提前进行消毒，并提前一周使用畜粪培育生物饵料)，随时关注塘内生物饵料的变化情况，及时补充肥料；至夏花阶段，平均分配到两个或两个以上池塘进行1龄种鱼(记为G1)培育，根据种鱼生长状况，及时更改合适的商业颗粒饲料。
(3)同年12月分别对G1中每个家系的体长、体宽、体高和体重进行统计，计算平均值，并挑选出各项指标均处于前30％、活泼健康的G1进行耐高温试验；每个家系取相同数目的草鱼G1，放入相同大小的生化培养箱中，控制温度为37℃条件下，饲养每小时捞出死亡个体，72小时后取存活下来每尾鱼的部分胸鳍(标记为G1A)；利用草鱼亲子鉴定的技术(参见文献FuJ,ShenY,XuX,etal.MultiplexmicrosatellitePCRsetsforparentageassignmentofgrasscarp(Ctenopharyngodonidella)[J].AquacultureInternational,2013,21(6):1195-1207)提取G1A基因组DNA，多重PCR扩增出相应片段，送上海迈浦生物科技有限公司进行STR分型，得到G1A的STR结果，使用Cervus3.0软件对G0和G1A的STR结果进行分析，找出G1A中每个个体对应的亲本，并标记为G0A，G1中除去G1A所剩下的群体标记为G1B，G0中除去G0A所剩下的群体标记为G0B。
(4)第2年分别对优选出的G0A、G0B两个群体进行人工授精、建立家系、受精卵孵化和1龄种鱼培育(方法同上)，分别标记为g1A和g1B；同年12月份分别对g1A和g1B两个群体的体长、体宽、体高和体重进行测量，比较验证g1A群体的生长优势；g1A和g1B各随机取1000尾种鱼进行耐高温试验(方法同步骤3)，比较验证g1A群体的耐高温优势。
(5)优良品系的确定：验证G0A群体中同时满足下列两个条件的即可作为兼具生长优势、耐高温性的优良品系：a.第一年子代与G1B相比有生长优势和耐高温性；b.第二年子代与g1B相比兼具生长优势和耐高温性。
实施例4具有生长优势及耐低氧的草鱼优良品系的选育及效果验证
(1)收集600对珠江水系草鱼，从中选出体型匀称，活泼健康，体重高于平均体重15～20％，并达到性成熟的雌雄草鱼280对作为待选亲本；使用PIT标记(上海逐海仪器设备有限公司，HPT8)对每条待选亲本进行编号，并剪取每条鱼的胸鳍，使用12对微卫星(表1)对剪下来的胸鳍进行STR分型，对分型结果用Cervus3.0软件分析这些待选亲本的遗传多样性(参见文献，任昆等，草鱼的微卫星亲权鉴定，南方农业学报，2013,44(8)：1367-1371)，选出80对有较高遗传多样性的作为亲本，并标记为G0。
(2)待G0亲本性腺成熟后，采用一次人工注射促黄体生成素释放激素类似物和地欧酮进行催熟；雌性草鱼每千克体重注射促黄体生成素释放激素类似物3μg，当水温偏低或性腺发育较差时，每千克体重加3mg地欧酮，雄性草鱼剂量均减半；人工授精时：用干毛巾擦拭雄性草鱼的腹部和生殖孔，使用干净的注射器吸取精液，并低温保存；用干毛巾擦拭雌性草鱼的腹部和生殖孔，轻压腹部，用干燥的脸盆收集卵子；快速将需要建立的不同家系的精子、卵子混合，并用干燥的羽毛搅拌，加入少量清水搅拌，即可获得不同家系的受精卵。每个家系的受精卵放入一个孵化桶(孵化桶底部进入流水，水从上面流出)，室温下进行孵化。不同家系受精卵的卵膜破裂4天后，每家系随机取500条混于相同大小的池塘(提前进行消毒，并提前一周使用畜粪培育生物饵料)，随时关注塘内生物饵料的变化情况，及时补充肥料；至夏花阶段，平均分配到两个或两个以上池塘进行1龄种鱼(记为G1)培育，根据种鱼生长状况，及时更改合适的商业颗粒饲料。
(3)同年12月分别对G1中每个家系的体长、体宽、体高和体重进行统计，计算平均值，并挑选出各项指标均处于前30％、活泼健康的G1进行耐低氧试验，每个家系取相同数目的G1置于生化培养箱中，通过溶氧仪(HQ10，HachCompany，Ivoeland，Colorado，USA)向培养箱中充氧气和氮气保持含氧量为2mgO2/L，饲养每小时捞出死亡个体，72小时后取存活下来每尾鱼的部分胸鳍(标记为G1A)；利用草鱼亲子鉴定的技术(参见文献FuJ,ShenY,XuX,etal.MultiplexmicrosatellitePCRsetsforparentageassignmentofgrasscarp(Ctenopharyngodonidella)[J].AquacultureInternational,2013,21(6):1195-1207)提取G1A基因组DNA，多重PCR扩增出相应片段，送上海迈浦生物科技有限公司进行STR分型，得到G1A的STR结果，使用Cervus3.0软件对G0和G1A的STR结果进行分析，找出G1A中每个个体对应的亲本，并标记为G0A，G1中除去G1A所剩下的群体标记为G1B，G0中除去G0A所剩下的群体标记为G0B。
(4)第2年分别对优选出的G0A、G0B两个群体进行人工授精、建立家系、受精卵孵化和1龄种鱼培育(方法同上)，分别标记为g1A和g1B；同年12月份分别对g1A和g1B两个群体的体长、体宽、体高和体重进行测量，比较验证g1A群体的生长优势；g1A和g1B各随机取1000尾种鱼进行耐低氧试验(方法同步骤3)，比较验证g1A群体的耐低氧优势。
(5)优良品系的确定：验证G0A群体中同时满足下列两个条件的即可作为兼具生长优势、耐低氧性的优良品系：a.第一年子代与G1B相比有生长优势和耐低氧性；b.第二年子代与g1B相比兼具生长优势和耐低氧性。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。
Claims (5)
1.一种分子辅助选育草鱼优良品系及选育效果验证的方法，包括以下步骤：
(1)亲本的选择：选择体型匀称，活泼健康，体重高于平均体重15～20％，并达到性成熟的草鱼作为待选亲本；使用PIT标记对每条待选亲本进行编号，并剪取每条鱼的胸鳍，用12对微卫星对剪下来的胸鳍进行STR分型，对分型结果用Cervus3.0软件分析这些待选亲本的遗传多样性；对遗传多样性较低的待选亲本进行舍去，有较高遗传多样性的作为亲本，并标记为G0；所述G0为待选亲本中遗传多样性较高，用于后续选育实验的基本群体；所述12对微卫星序列如SEQIDNO.1～SEQIDNO.24所示；
(2)建立家系：G0亲本性腺成熟后，一次人工注射激素进行催熟，人工授精获得受精卵；每个家系的受精卵放入一个孵化桶，室温下进行孵化，孵化桶底部进入流水，水从桶上面流出；不同家系受精卵的卵膜破裂4天后，每家系随机取500条混于相同大小池塘饲养，池塘提前进行消毒，提前一周使用畜粪培育生物饵料，饲养过程中随时关注塘内生物饵料的变化情况，及时补充肥料；至夏花阶段，同一家系鱼苗平均分配到两个或三个以上池塘进行1龄种鱼培育，并标记为G1；所述G1为G0第一年子代；
(3)优良品系的筛选：同年12月对G1的生长数据进行统计，并挑选个体较大、活泼健康的G1进行抗性试验，取存活下来的种鱼，并标记为G1A；取G1A的部分胸鳍，用无水乙醇保存，草鱼亲子鉴定技术找出G1A相对应的亲本，并标记为G0A，G1中除去G1A所剩下的群体标记为G1B，G0中除去G0A所剩下的群体标记为G0B；所述G1A为G1中具有生长优势且抗性试验存活的群体；
(4)优良品系的验证：第2年分别对G0A、G0B两个群体进行人工授精、建立家系、受精卵孵化和1龄种鱼培育，所述人工授精、建立家系、受精卵孵化和1龄种鱼培育的方法与步骤(2)相同，分别标记为g1A和g1B；同年12月份分别对g1A和g1B两个群体的体长、体宽、体高和体重进行测量，比较g1A群体的生长优势；g1A和g1B各随机取1000尾种鱼进行抗性试验，所述抗性实验的方法同步骤(3)，比较g1A群体的抗性优势；所述的g1A、g1B分别为G0A和G0B两群体亲本第二年对应的子后；
(5)优良品系的确定：通过对待选亲本的筛选和验证，G0A群体中同时满足下列两个条件的即可作为兼具生长优势、抗性的优良品系：a.第一年子代与G1B相比有生长优势和抗性；b.第二年子代与g1B相比兼具生长优势和抗性。
2.根据权利要求1所述的分子辅助选育草鱼优良品系及选育效果验证的方法，其特征在于，所述的抗性试验为抗嗜水气单胞菌攻毒试验、抗盐试验、抗低氧试验、耐高温试验。
3.根据权利要求1所述的分子辅助选育草鱼优良品系及选育效果验证的方法，其特征在于，步骤(1)中所述的G0亲本的雌雄比例为1.5～2.0:1。
4.根据权利要求1所述的分子辅助选育草鱼优良品系及选育效果验证的方法，其特征在于，步骤(2)中所述的人工授精是用干毛巾擦拭雄性草鱼的腹部和生殖孔，使用干净的注射器吸取精液，并低温保存；用干毛巾擦拭雌性草鱼的腹部和生殖孔，轻压腹部，用干燥的脸盆收集卵子；快速将需要建立的不同家系的精子、卵子混合，并用干燥的羽毛搅拌，加入少量清水搅拌，即可获得不同家系的受精卵。
5.根据权利要求1所述的分子辅助选育草鱼优良品系及选育效果验证的方法，其特征在于，步骤(2)中所述的激素为促黄体生成素释放激素类似物和地欧酮；所述激素的注射量为雌鱼每kg体重注射促黄体生成素释放激素类似物3μg，当水温偏低或性腺发育较差时，每千克体重加3mg地欧酮；雄鱼每kg体重注射促黄体生成素释放激素类似物1.5μg，当水温偏低或性腺发育较差时，每千克体重加1.5mg地欧酮。
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