CN110250052A - 一种乌苏里拟鲿耐低氧家系的选育方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种乌苏里拟鲿耐低氧家系的选育方法，包括亲本挑选、催产、授精、孵化与鱼苗培育、低氧胁迫与成活率计算等步骤。本发明通过选择性腺发育良好的亲本，在适宜比例和剂量的催产药物作用下，可达到较好的催产效果；其次，通过将每尾雌鱼单独进行挤卵、授精、布卵、孵化及鱼苗培育等操作，从而构建出乌苏里拟鲿家系；最后，通过有效的低氧胁迫处理，从而选育出耐低氧家系。本发明提供的乌苏里拟鲿家系构建及耐低氧家系选育技术，将为基于多家系的乌苏里拟鲿人工选育工作提供技术支撑，同时也对加快乌苏里拟鲿耐低氧新品种培育进程具有重要意义。
Description
技术领域
本发明属于水产养殖中人工选育技术领域，尤其涉及一种乌苏里拟鲿耐低氧家系的选育方法。
背景技术
在水产养殖中，生长、抗逆等性状一直是影响水产品产量和质量的重要因素。如何获得生长快、抗逆性强的水产动物新品种，一直是广大水产从业者努力的方向。选择育种一直是水产动物育种中最常用、最传统的方法，而家系可为优良性状的保持和延续提供重要载体，因此家系构建是该育种方法中的重要技术之一。
乌苏里拟鲿(Pseudobagrus ussuriensis)隶属于鲶形目、鲿科、拟鲿属，分布于我国黑龙江至珠江各水系。该鱼肉质细嫩、味道鲜美、营养价值高、食性广、病害少，深受广大消费者和养殖户喜爱。经过水产工作者十余年的养殖试验和推广，目前其人工养殖已在全国多省开展。然而，相对于同科的黄颡鱼，乌苏里拟鲿的耐低氧能力较差，养殖池塘的溶氧变化易造成浮头甚至泛塘，这也制约了其养殖产业的健康发展，因此，开展其耐低氧品种的人工选育工作尤为必要。
发明内容
本发明的目的在于提供一种乌苏里拟鲿耐低氧家系的选育方法，即提供一套从乌苏里拟鲿亲本挑选到鱼苗培育再到耐低氧家系选育的技术方法，为乌苏里拟鲿人工选育工作提供技术支撑。
本发明是这样实现的，一种乌苏里拟鲿耐低氧家系的选育方法，该方法包括以下步骤：
(1)对所挑选的雌性亲鱼以及雄性亲鱼进行人工催产；
(2)将催产后所得的雌鱼鱼卵、雄鱼精液进行人工授精，将受精卵布置在聚乙烯网片上，根据家系进行编号；
(3)将所述聚乙烯网片置于孵化桶进行孵化，将所孵化的鱼苗培育60～70天；
(4)从每个家系中挑选所培育的鱼苗进行低氧胁迫处理，统计各家系鱼苗存活率，将存活率最高的家系选为耐低氧家系，并作为后续耐低氧品种选育的基础群体。
优选地，在步骤(1)中，所述雌性亲鱼的挑选标准为：腹部膨大、松软且富有弹性、仰腹可见卵巢轮廓、无伤病、体重在150克以上；
所述雄性亲鱼的挑选标准为：生殖突尖而长且末端泛红、体质强壮、无伤病、体重在250克以上。
优选地，在步骤(1)中，所述人工催产为人工注射催产剂的方式进行催产；其中，所述催产剂采用促黄体生成素释放激素类似物A2(LRH-A2)、人绒毛膜促性腺激素(HCG)与地欧酮(DOM)三种药物配制得到；
所述雌性亲鱼的人工催产包括以下步骤：采用胸鳍基部两次注射法，每尾注射容积控制在0.5～1毫升范围内；雌鱼每千克注射LRH-A2 10～15微克、HCG 1000～2000单位、DOM 3～6毫克；其中，第一针只注射LRH-A2，注射量为总注射剂量的25％～35％，间隔10～13小时后第二针注射余量；
所述雄性亲鱼的人工催产包括以下步骤：雄鱼一次注射，注射剂量为雌鱼剂量的一半，雄鱼每千克注射LRH-A2 5～7.5微克、HCG 500～1000单位、DOM 1.5～3毫克。
雌、雄亲鱼的具体注射时间与剂量需根据亲鱼发育状况及水温等条件进行适当调整：亲鱼性腺发育好、水温高时适当减少注射剂量，缩短两针间的时间间隔；亲鱼性腺发育差、水温低时适当增加注射剂量，延长两针间的时间间隔。
优选地，所述雌性亲鱼的人工催产过程中，在水温20～23℃、亲鱼发育状况良好的情况下，雌鱼第一针注射LRH-A2 5微克/千克，间隔12小时后注射LRH-A2 10微克/千克+HCG1500单位/千克+DOM 5毫克/千克；
所述雄性亲鱼注射时间与雌鱼第二针时间一致，目的是为了使雌、雄亲鱼生殖细胞在相同时间成熟，便于人工授精。
优选地，在步骤(2)中，所述人工授精过程中，获取鱼卵的雌鱼和获取精液的雄鱼数量比为(3～5)：1。
优选地，在步骤(3)中，所述孵化的具体过程为：孵化水温控制在20～23℃，保持桶内水质清洁，并用充气泵持续充气；受精24小时后，将网片分别取出，在另一注满曝气水的塑料桶中抖动，去除死卵后放回；孵化过程中每隔10～12小时用5～8毫克/升的甲醛溶液对各网片上的受精卵进行防霉处理，直至孵化出膜；在水温20～23℃时，受精后65～72小时开始有幼鱼出膜，经过10～14小时完成出膜过程。
优选地，在步骤(3)中，所述鱼苗的培育具体为：在鱼苗卵黄耗尽且开口摄食时，以刚孵化出的丰年虫无节幼体为开口饵料投喂4～6次/天，5～6天后改用剪碎的红血虫作为饵料继续培育，培育过程中保持水质清新。
优选地，在步骤(4)中，所述低氧胁迫处理时间为48小时，控制溶解氧在1.0～2.0毫克/升之间。
本发明克服现有技术的不足，提供一种乌苏里拟鲿耐低氧家系的选育方法，包括亲本挑选、催产、授精、孵化与鱼苗培育、低氧胁迫与成活率计算等步骤。本发明通过选择性腺发育良好的亲本，在适宜比例和剂量的催产药物作用下，可达到较好的催产效果；其次，通过将每尾雌鱼单独进行挤卵、授精、布卵、孵化及鱼苗培育等操作，从而构建出乌苏里拟鲿家系；最后，通过有效的低氧胁迫处理，从而选育出耐低氧家系。本发明提供的乌苏里拟鲿家系构建及耐低氧家系选育技术，将为基于多家系的乌苏里拟鲿人工选育工作提供技术支撑，同时也对加快乌苏里拟鲿耐低氧新品种培育进程具有重要意义。
相比于现有技术的缺点和不足，本发明具有以下有益效果：
(1)本发明保证了鱼苗来源清晰，能够直接追溯其亲本；
(2)本发明通过不同家系鱼苗低氧胁迫下存活率的高低，可挑选耐低氧家系，为后续育种工作提供基础群体。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例1乌苏里拟鲿繁殖亲本挑选与催产
本发明所用乌苏里拟鲿亲本已于前一年进行了亲本培育及强化。雌鱼挑选20尾，体重介于100～150克，腹部膨大、松软且富有弹性、仰腹可见卵巢轮廓、无伤病。雄鱼6尾，生殖突尖而长且末端泛红、体质强壮、无伤病，体重在250克～310克。亲本挑选后置于直径1.7米的产卵池中暂养3天，暂养期间不投喂饲料。
第一针催产注射：配制LRH-A2催产剂，将25微克装的LRH-A2利用1毫升0.75％的生理盐水溶解，之后用0.75％的生理盐水将药物稀释，每尾雌鱼注射剂量为5微克/千克，注射药物体积控制在0.5～1毫升，注射位置为胸鳍基部，进针深度为0.5厘米，进针角度为斜向前约45°。注射时间为2017年5月25日20:00，注射完毕将雌鱼再次放回产卵池暂养。
第二针催产注射：于5月26日9:00进行第二针注射。利用0.75％生理盐水配制LRH-A2 10微克+HCG 1500单位+DOM 5毫克每千克体重的催产混合剂。将雌鱼捞出，按照上述剂量注射第二针，注射方法与第一针相同，但注射时进针位置不可与第一针重叠，避免药物从针孔溢出。注射完毕后将雌鱼放回产卵池，捞出雄鱼，并按照LRH-A2 5微克+HCG 800单位+DOM 3毫克每千克体重的剂量进行注射，注射方法同雌鱼，之后将雄鱼放回产卵池。
实施例2乌苏里拟鲿人工授精与孵化
在水温20～23℃条件下，5月27日14:00，经催产29小时后，轻压雌鱼腹部即有卵粒流出，说明达到效应时间。捞出亲鱼，将雄鱼擦干，剖开腹部取出精巢，在研钵中剪碎并研磨后加入100毫升Hanks液；将每尾雌鱼的卵分别挤入不同培养皿中，20尾雌鱼中有11尾能顺利挤出卵粒，之后将稀释后的雄鱼精液倒入盛卵的培养皿中，并迅速用羽毛搅拌，使精卵充分接触，雌、雄鱼配比为3:1。搅拌后静置1分钟，然后将11个培养皿中的受精卵分别均匀布置到经过消毒处理的大小为50×60厘米的聚乙烯网片上并编号家系1-11。授精完成时间为14:30。
将11个家系的网片分别悬吊于11个孵化桶中，孵化桶编号与网片相同，孵化水温维持在20～23℃，为保持桶内水质清洁，每6小时更换一次水，换水量为总水量的1/4，并用充气泵持续充气。受精24小时后，分别将网片取出，在另一注满曝气水的塑料桶中抖动，去除死卵后放回。孵化过程中为避免水霉病的发生，每隔12小时用6毫克/升的甲醛溶液对各网片上的受精卵进行防霉处理，直至孵化出膜。在水温20～23℃时，于5月30日8:30，受精后67小时开始有幼鱼出膜，至21:30，受精80小时后出膜完成。各家系出苗量约400～800尾，平均约500尾，孵化率约60％。
实施例3乌苏里拟鲿鱼苗培育
刚孵化出的幼鱼由于靠卵黄囊提供早期发育所有营养，无需投喂。当孵化4天后，卵黄基本耗尽，此时鱼苗开口摄食。采用刚孵化出的丰年虫无节幼体作为开口饵料，每天投喂4次，每次间隔6小时，投喂量以投喂后30分钟仍有部分未被摄食的丰年虫幼体为宜。投喂6天后，改用剪碎的红血虫作为饵料继续培育。整个鱼苗培育过程中，每8小时吸污一次，并更换约1/3的水，保持水质清新。在孵化桶中饲养至体长1.5厘米后，更换大水泥池或者下塘饲养。
实施例4乌苏里拟鲿耐低氧家系筛选
从构建的11个家系中各随机挑选50尾个体，在温度为22～25℃条件下利用密封塑料盆进行养殖，养殖4小时后，每隔1小时用溶氧测定仪检测各盆中溶解氧，当测得溶解氧降于2毫克/升时，开始计时，持续进行低氧胁迫处理48小时。试验完成后统计各试验组存活个体数，并计算存活率。通过比较发现各家系的存活率介于18％～86％，其中，家系2的存活率(86％)最高(如下表1所示)，因此将该家系作为今后乌苏里拟鲿耐低氧品种选育的基础群体，而家系11(80％)和家系1(78％)可作为后备选育群体。
表1乌苏里拟鲿11个家系低氧胁迫48h后存活情况
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (8)
1.一种乌苏里拟鲿耐低氧家系的选育方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
(1)对所挑选的雌性亲鱼以及雄性亲鱼进行人工催产；
(2)将催产后所得的雌鱼鱼卵、雄鱼精液进行人工授精，将受精卵布置在聚乙烯网片上，根据家系进行编号；
(3)将所述聚乙烯网片置于孵化桶进行孵化，将所孵化的鱼苗培育60～70天；
(4)从每个家系中挑选所培育的鱼苗进行低氧胁迫处理，统计各家系鱼苗存活率，将存活率最高的家系选为耐低氧家系，并作为后续耐低氧品种选育的基础群体。
2.如权利要求1所述的乌苏里拟鲿耐低氧家系的选育方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述雌性亲鱼的挑选标准为：腹部膨大、松软且富有弹性、仰腹可见卵巢轮廓、无伤病、体重在150克以上；
所述雄性亲鱼的挑选标准为：生殖突尖而长且末端泛红、体质强壮、无伤病、体重在250克以上。
3.如权利要求1所述的乌苏里拟鲿耐低氧家系的选育方法，其特征在于，在步骤(1)中，所述人工催产为人工注射催产剂的方式进行催产；其中，所述催产剂采用促黄体生成素释放激素类似物A2(LRH-A2)、人绒毛膜促性腺激素(HCG)与地欧酮(DOM)三种药物配制得到；
所述雌性亲鱼的人工催产包括以下步骤：采用胸鳍基部两次注射法，每尾注射容积控制在0.5～1毫升范围内；雌鱼每千克注射LRH-A210～15微克、HCG1000～2000单位、DOM 3～6毫克；其中，第一针只注射LRH-A2，注射量为总注射剂量的25％～35％，间隔10～13小时后第二针注射余量；
所述雄性亲鱼的人工催产包括以下步骤：雄鱼一次注射，雄鱼每千克注射LRH-A25～7.5微克、HCG 500～1000单位、DOM 1.5～3毫克。
4.如权利要求3所述的乌苏里拟鲿耐低氧家系的选育方法，其特征在于，所述雌性亲鱼的人工催产过程中，在水温20～23℃、亲鱼发育状况良好的情况下，雌鱼第一针注射LRH-A25微克/千克，间隔12小时后注射LRH-A210微克/千克+HCG 1500单位/千克+DOM 5毫克/千克；
所述雄性亲鱼注射时间与雌鱼第二针时间一致。
5.如权利要求1所述的乌苏里拟鲿耐低氧家系的选育方法，其特征在于，在步骤(2)中，所述人工授精过程中，获取鱼卵的雌鱼和获取精液的雄鱼数量比为(3～5)：1。
6.如权利要求1所述的乌苏里拟鲿耐低氧家系的选育方法，其特征在于，在步骤(3)中，所述孵化的具体过程为：孵化水温控制在20～23℃，保持桶内水质清洁，并用充气泵持续充气；受精24小时后，将网片分别取出，在另一注满曝气水的塑料桶中抖动，去除死卵后放回；孵化过程中每隔10～12小时用5～8毫克/升的甲醛溶液对各网片上的受精卵进行防霉处理，直至孵化出膜；在水温20～23℃时，受精后65～72小时开始有幼鱼出膜，经过10～14小时完成出膜过程。
7.如权利要求1所述的乌苏里拟鲿耐低氧家系的选育方法，其特征在于，在步骤(3)中，所述鱼苗的培育具体为：在鱼苗卵黄耗尽且开口摄食时，以刚孵化出的丰年虫无节幼体为开口饵料投喂4～6次/天，5～6天后改用剪碎的红血虫作为饵料继续培育，培育过程中保持水质清新。
8.如权利要求1所述的乌苏里拟鲿耐低氧家系的选育方法，其特征在于，在步骤(4)中，所述低氧胁迫处理时间为48小时，控制溶解氧在1.0～2.0毫克/升之间。
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