CN111217834A - Rock激酶抑制剂的硝基氧衍生物 - Google Patents

Rock激酶抑制剂的硝基氧衍生物 Download PDF

Info

Publication number
CN111217834A
CN111217834A CN202010107800.9A CN202010107800A CN111217834A CN 111217834 A CN111217834 A CN 111217834A CN 202010107800 A CN202010107800 A CN 202010107800A CN 111217834 A CN111217834 A CN 111217834A
Authority
CN
China
Prior art keywords
compound
reaction
substituted
unsubstituted
added
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN202010107800.9A
Other languages
English (en)
Other versions
CN111217834B (zh
Inventor
沈旺
党奎峰
张超
陈春明
单立弘
丁文
王鑫
糜佳晨
孙亚波
盛夏鑫
沈家磊
李勇
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Weimu Biotechnology (Zhejiang) Co.,Ltd.
Original Assignee
Vivavision Biopharma Shanghai Co ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Vivavision Biopharma Shanghai Co ltd filed Critical Vivavision Biopharma Shanghai Co ltd
Priority to CN202010107800.9A priority Critical patent/CN111217834B/zh
Publication of CN111217834A publication Critical patent/CN111217834A/zh
Priority to AU2020403705A priority patent/AU2020403705B2/en
Priority to JP2021529083A priority patent/JP7364258B2/ja
Priority to SG11202109516WA priority patent/SG11202109516WA/en
Priority to KR1020217027931A priority patent/KR20210134327A/ko
Priority to PCT/CN2020/129840 priority patent/WO2021164351A1/zh
Priority to US17/298,676 priority patent/US20220332726A1/en
Priority to CA3132077A priority patent/CA3132077A1/en
Priority to EP20913089.7A priority patent/EP3901156A4/en
Priority to IL285709A priority patent/IL285709A/en
Application granted granted Critical
Publication of CN111217834B publication Critical patent/CN111217834B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A61P27/06—Antiglaucoma agents or miotics
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D495/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D495/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D495/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/425—Thiazoles
    • A61K31/428—Thiazoles condensed with carbocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/4353—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/4365—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems the heterocyclic ring system having sulfur as a ring hetero atom, e.g. ticlopidine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/47—Quinolines; Isoquinolines
    • A61K31/472—Non-condensed isoquinolines, e.g. papaverine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D217/00—Heterocyclic compounds containing isoquinoline or hydrogenated isoquinoline ring systems
    • C07D217/02—Heterocyclic compounds containing isoquinoline or hydrogenated isoquinoline ring systems with only hydrogen atoms or radicals containing only carbon and hydrogen atoms, directly attached to carbon atoms of the nitrogen-containing ring; Alkylene-bis-isoquinolines
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D217/00—Heterocyclic compounds containing isoquinoline or hydrogenated isoquinoline ring systems
    • C07D217/22—Heterocyclic compounds containing isoquinoline or hydrogenated isoquinoline ring systems with hetero atoms or with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached to carbon atoms of the nitrogen-containing ring
    • C07D217/26—Carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D275/00—Heterocyclic compounds containing 1,2-thiazole or hydrogenated 1,2-thiazole rings
    • C07D275/04—Heterocyclic compounds containing 1,2-thiazole or hydrogenated 1,2-thiazole rings condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Abstract

本发明提供了一种NO供体的小分子化合物，其特征在于：为由如下结构式I所示的化合物或其立体异构体，几何异构体，互变异构体，消旋体，氘代同位素衍生物，水合物，溶剂化物，代谢产物以及药学上可接受的盐或前药；
Figure DDA0002388977740000011
其中，环A为取代或未取代的杂芳环；X选自(CH2)n，其中n选自0、1、2、3；R为末端‑O‑NO2的取代基；R1选自氢、羟基、卤素、氨基、氰基、取代或未取代的烷基、取代或未取代的烷氧基、取代或未取代的烯基，取代或未取代的炔基，取代或未取代的杂烷基；R2、R3分别独立地选自氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的环烷基、氨基保护基；或者，R2与R3相连构成取代或未取代的环杂烷基。该化合物对ROCK激酶有高活性的抑制作用。

Description

ROCK激酶抑制剂的硝基氧衍生物
技术领域
本发明涉及新的杂环ROCK激酶抑制剂，更具体的，本发明涉及ROCK激酶抑制剂的硝基氧衍生物，这些化合物可用于治疗青光眼和视网膜疾病。
背景技术
Rho-相关的卷曲螺旋型蛋白激酶(ROCK)，属于丝氨酸-苏氨酸激酶的AGC(PKA/PKG/PKC)家族。已经描述了ROCK的两种人同种型，ROCK-I(也被称作p160ROCK或ROKβ)和ROCK-II(ROKα)是大约160kDa蛋白，其含有一个N-端Ser/Thr激酶结构域，继之以一个卷曲螺旋结构、一个普列克底物蛋白同源性结构域和在C-端处的一个富含半胱氨酸的区域(Multifunctional kinases in cell behaviour.Nat.Rev.Mol.Cell Biol.2003(4):446-456)。
Rho属于小分子单聚体GTPase超家族，是Ras超家族的哺乳动物基因同系物，通过其下游最主要的效应分子Rho激酶(Rho-associated coiled-coil containing proteinkinase，ROCK)，来调节细胞肌动蛋白骨架的重组，从而广泛参与细胞有丝分裂、细胞骨架调整、平滑肌细胞收缩、神经再生、肿瘤细胞浸润、细胞凋亡的调节等一系列生物学过程。Rho/ROCK激活后可以作用于多种底物，从而产生生物学过程。最主要的两种底物是肌球蛋白轻链(MLC)和肌球蛋白轻链磷酸酶(MLCP)，MLC的磷酸化水平是决定平滑肌收缩程度的一个重要因素。肌球蛋白轻链激酶(MLCK)磷酸化MLC的Ser-19位点，导致平滑肌收缩；MLCP的抑制可以使MLC的磷酸化和平滑肌的收缩进一步增强。ROCK被激活以后，本身可以将MLC磷酸化而发生肌丝收缩作用；同时也能将MLCP磷酸化，使MLCP失活，导致细胞胞浆内MLC磷酸化程度增高，间接促进肌丝收缩。
在动物模型中Rho激酶活性的抑制展现出治疗人类疾病的多种益处，包括心血管疾病如肺动脉高压、高血压、动脉粥样硬化、心脏肥大、高眼压、脑缺血、脑血管痉挛等，和中枢神经系统病症如神经元变性等，以及肿瘤。研究表明ROCK表达和活性在自发性高血压大鼠中有所升高，说明其与这些动物高血压的发生具有关联(Involvement of Rho-kinasein hypertensive vascular disease:a novel therapeutic target inhypertension.FASEB J.,2001,15(6):1062-4)。ROCK抑制剂Y-27632可使三种大鼠高血压模型(自发性高血压、肾性高血压、醋酸脱氧皮质酮盐型高血压)中的血压显著降低，而对对照大鼠的血压作用较小(Calcium sensitization of smooth muscle mediated by aRho-associated protein kinase in hypertension[J].Nature,1997,389(6654):990-4)。也有研究表明ROCK抑制剂对肺动脉高压具有较好的作用(Acute vasodilator effectsof a Rho-kinase inhibitor,fasudil in patients with severe pulmonaryhypertension.Heart,2005:91(3):391-2)。
ROCK活性是白血球-血小板-内皮相互作用、白血球外渗和水肿中的重要信号传递机制。内皮细胞中Rho激酶的过度活化会造成有利于炎症细胞募集的细胞-细胞连接部的破坏所引起的泄漏。总之，这些证据指出了ROCK在与急性和慢性炎症有关的病理学状况以及自身免疫疾病中的作用(Isoform-specific targeting of ROCK proteins in immunecells.Small GTPases.2016；7(3):173-177)。ROCK抑制在类风湿性关节炎和狼疮的实验模型中的有益效果的得到动物实验的验证(Rho kinase inhibitors andtheir applicationtoinflammatory disorders.Curr.Top.Med.Chem.2009(9)：704-723；Antinociceptiveeffects of AS1892802,a novel rho kinase inhibitor,in rat models ofinflammatory and noninflammatory arthritis.J.Pharmacol.Exp.Ther.2010,334：955-963；Administration of fasudil,a ROCK inhibitor,attenuates disease in lupus-prone NZB/W F1 female mice.Lupus.2012；21(6):656-61)。法舒地尔对T-细胞迁移的抑制作用可能扩大它作为多发性硬化的新疗法的临床应用(Therapeutic potential ofexperimental autoimmune encephalomyelitis by Fasudil,a Rho kinase inhibitor.JNeurosci Res.2010；88(8):1664-72)。累积的证据也证实，ROCK在调节炎性肠病(IBD)的发病机制的3个疾病因素中起关键作用：肠屏障的破坏，肠内容物向粘膜免疫细胞的暴露，和异常的免疫应答(Role of Rho kinase signal pathway in inflammatory boweldisease.Int J ClinExp Med.2015；8(3):3089-3097)。
目前已上市的ROCK抑制剂药物有Asahi Kasei公司的Eril(适用于脑血管痉挛的治疗)；Kowa公司的Glanatec(适用于高眼压症和青光眼的治疗，仅在日本获批),美国Aerie公司的青光眼新药Rhopressa(netarsudil)2017年在美国获批用于治疗罹患开角型青光眼或高眼压的患者，降低他们的眼内压。Rhopressa是一款全新的每日一次滴眼液。
一氧化氮(NO)是重要的细胞间信息传导因子。一氧化氮(NO)可以通过一氧化氮合成酶在生物体内合成，或者通过由药物(如硝化甘油，Latanoprostene Bunod含硝基的前列腺素药物)释放出来。NO结合可溶性鸟苷酸环化酶(sGC)，然后将鸟苷三磷酸转化为环鸟苷单磷酸(cGMP)。cGMP是第二信使，调节平滑肌松弛和血管舒张以及许多其他重要的生物学过程，例如血小板抑制和细胞生长以及差异化。一氧化氮在调节视神经乳头血流量和IOP中具有重要的生理作用。在视神经头中，NO供体通过放松平滑肌来降低血管阻力，导致局部血管舒张和视神经头血流量增加。反之，NO通路受损会降低视神经头部的血流量，从而导致缺血。
一氧化氮在调节眼睛眼内压(IOP)中具有重要的生理作用。例如，内皮一氧化氮合成酶(eNOS)存在于葡萄膜血管系统，Schlemm管和睫状体的内皮中。已知一氧化氮会增加人的前段的小梁流出系统(TM)，而NO供体在动物模型中会降低IOP。同时，过表达eNOS的小鼠的IOP较低。相比之下，eNOS敲除小鼠(无功能eNOS基因的动物，因此没有内源性eNOS)的IOP升高，而sGC敲除小鼠会有IOP升高和视神经变性。NO降低IOP的机制似乎是通过抑制肌动蛋白-肌球蛋白相互作用，从而使TM和Schlemm管中的细胞松弛，导致水流出增加和IOP降低
因此进行开发出同时对ROCK激酶由抑制作用，又是NO供体的小分子药物，可能会达到比单一功能小分子更好的降低眼睛内压(IOP)效果，具有十分重要的社会和经济意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一种新型的对ROCK激酶有高活性的抑制剂，同时又是NO供体的小分子药物，及其制备方法和用途。
本发明提供的一种NO供体的小分子化合物，其特征在于：为由如下结构式I所示的化合物或其立体异构体，几何异构体，互变异构体，消旋体，氘代同位素衍生物，水合物，溶剂化物，代谢产物以及药学上可接受的盐或前药；
Figure BDA0002388977730000021
其中，环A为取代或未取代的杂芳环；
X选自(CH2)n，其中n选自0、1、2、3；
R为末端-O-NO2的取代基；
R1选自氢、羟基、卤素、氨基、氰基、取代或未取代的烷基、取代或未取代的烷氧基、取代或未取代的烯基，取代或未取代的炔基，取代或未取代的杂烷基；
R2、R3分别独立地选自氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的环烷基、氨基保护基；
或者，R2与R3相连构成取代或未取代的环杂烷基。
进一步地，本发明提供的一种NO供体的小分子化合物，其特征还在于，为由如下结构式所示的化合物或其立体异构体，几何异构体，互变异构体，消旋体，氘代同位素衍生物，水合物，溶剂化物，代谢产物以及药学上可接受的盐或前药：
Figure BDA0002388977730000022
L是一个链接基团，选自取代或未取代的亚烷基，取代或未取代的亚杂烷基，选自取代或未取代的亚烷氧基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的杂环基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的酯基。
进一步地，本发明提供的一种NO供体的小分子化合物，其特征还在于，所述环A为选自式A，或式B；
Figure BDA0002388977730000031
R‘为杂芳环上一个或多个取代的取代基团；
所述取代基团选自氢、羟基、卤素、氨基、氰基、取代或未取代的烷基、取代或未取代的烷氧基、取代或未取代的杂烷基；
A1、A2、A3、A4、A5、A6、A7、A8、A9中的至少一个选自氮、硫、氧；
B1、B2、B3、B4、B5、B6、B7、B8、B9中的至少一个选自氮、硫、氧。
进一步地，本发明提供的一种NO供体的小分子化合物，其特征还在于，所述环A为选自式Ia，或式Ib，或式Ic；
Figure BDA0002388977730000032
R21选自氢、羟基、卤素、氨基、氰基、取代或未取代的烷基、取代或未取代的烷氧基、取代或未取代的杂烷基；
R22选自氢、卤素、氰基、取代或未取代的烷基、取代或未取代的烷氧基。
进一步地，本发明提供的一种NO供体的小分子化合物，其特征还在于，为由如下结构式所示的化合物或其立体异构体，几何异构体，互变异构体，消旋体，氘代同位素衍生物，水合物，溶剂化物，代谢产物以及药学上可接受的盐或前药：
Figure BDA0002388977730000033
其中，L1为化学键，或是取代或未取代的亚烷基；
L2选自取代或未取代的亚烷基，取代或未取代的亚烷氧基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的杂芳基；
L3为化学键，或取代或未取代的亚烷氧基。
进一步地，本发明提供的一种NO供体的小分子化合物，其特征还在于，为由如下结构式所示的化合物或其立体异构体，几何异构体，互变异构体，消旋体，氘代同位素衍生物，水合物，溶剂化物，代谢产物以及药学上可接受的盐或前药：
Figure BDA0002388977730000041
n1为0，或自然数；
n2为0，或自然数；
Y选自取代或未取代的烷基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的杂环基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的杂芳基。
进一步地，本发明提供的一种NO供体的小分子化合物，其特征还在于，将如下结构所示的化合物中的羟基经硝化反应获得；硝化条件可以是浓硝酸，或者通过硝酸在乙酸酐中进行。
Figure BDA0002388977730000042
进一步地，本发明提供的一种NO供体的小分子化合物，其特征还在于，将如下结构所示的化合物中的卤素经硝化反应获得；硝化条件可以是硝酸银作用。
Figure BDA0002388977730000043
Y为卤素。
进一步地，本发明提供的一种NO供体的小分子化合物，其特征还在于，由如下式IIIa与式IIIb所示的化合物进行偶合反应获得；
Figure BDA0002388977730000044
Z为卤素。
进一步地，本发明提供的一种NO供体的小分子化合物，其特征还在于，作为ROCK激酶的抑制剂使用。
本发明中所提及的取代的烷基指烷基碳链上的氢原子中的一个或一个以上为其他基团所取代，此处所指的其他基团可以但不限于为环烷基(以类似于
Figure BDA0002388977730000045
等的形式进行取代，该环烷基环上的任何氢原子还可以为卤素、氰基、烷基、羟基、羧基等基团所取代)、杂环烷基(即、在前述的环烷基的基础上，其烷基环上的至少一个碳原子为氧、硫、氮所替代)、卤素(F，Cl，Br，I)、羧基、氰基(-CN)、磺酸基(-SO4,)、磺酰基(-SO2Ra，Ra为氢、烷基、芳基等)、炔基(-C≡CH，-C≡CRb，Rb为烷基、芳基等)、酰胺基(-C(O)NRxRy，RxRy为烷基、芳基等)、酯基(-C(O)O-Rz，Rz为烷基、芳基等)、芳基、杂芳基、-O-NO2等等基团；
本发明中所提及的取代的杂烷基为上述取代的烷基中的一个或多个碳为氮、氧、硫等杂原子替代；
本发明中所提及的取代的环烷基指烷基环上的一个或多个氢原子为其他基团所取代，此处所指的其他基团可以但不限于为烷基、取代的烷基(同上)、卤素(F，Cl，Br，I)、羧基、氰基(-CN)、磺酸基(-SO4,)、磺酰基(-SO2Ra，Ra为氢、烷基、芳基等)、炔基(-C≡CH，-C≡CRb，Rb为烷基、芳基等)、酰胺基(-C(O)NRxRy，RxRy为烷基、芳基等)、酯基(-C(O)O-Rz，Rz为烷基、芳基等)、芳基、杂芳基、-O-NO2等等基团；
本发明中所提及的取代的杂环烷基指上述取代的环烷基环上的至少一个碳原子为氮、氧、硫等杂原子取代；
本发明中所提及的取代的烯基指-C＝C-结构中的氢原子为其他基团所取代，此处的的其他基团可以但不限于为烷基、取代的烷基(同上)、卤素(F，Cl，Br，I)、羧基、氰基(-CN)、酰胺基(-C(O)NRxRy，RxRy为烷基、芳基等)、酯基(-C(O)O-Rz，Rz为烷基、芳基等)、芳基、杂芳基、-O-NO2等等基团；
本发明中所提及的取代的炔基指-C≡CH结构中的氢原子为其他基团所取代，此处的的其他基团可以但不限于为烷基、取代的烷基(同上)、卤素(F，Cl，Br，I)、羧基、氰基(-CN)、酰胺基(-C(O)NRxRy，RxRy为烷基、芳基等)、酯基(-C(O)O-Rz，Rz为烷基、芳基等)、芳基、杂芳基、-O-NO2等等基团；
本发明中所提及的取代的亚烷基指-(CH2)n(0，自然数)-结构中的一个或多个氢原子为其他基团所取代，此处所指的其他基团可以但不限于为环烷基(以类似于
Figure BDA0002388977730000051
等的形式进行取代，该环烷基环上的任何氢原子还可以为卤素、氰基、烷基、羟基、羧基等基团所取代)、杂环烷基(即、在前述的环烷基的基础上，其烷基环上的至少一个碳原子为氧、硫、氮所替代)、卤素(F，Cl，Br，I)、羧基、氰基(-CN)、磺酸基(-SO4,)、磺酰基(-SO2Ra，Ra为氢、烷基、芳基等)、炔基(-C≡CH，-C≡CRb，Rb为烷基、芳基等)、酰胺基(-C(O)NRxRy，RxRy为烷基、芳基等)、酯基(-C(O)O-Rz，Rz为烷基、芳基等)、芳基、杂芳基、-O-NO2等等基团，此外，多个碳原子之间还可由桥健连接；
本发明中所提及的取代的亚烷氧基-O-(CH2)n(0，自然数)-或-(CH2)n(0，自然数)-O-(CH2)n(0，自然数)-结构中的一个或多个氢原子为其他基团所取代，此处所指的其他基团可以但不限于为环烷基(以类似于
Figure BDA0002388977730000052
等的形式进行取代，该环烷基环上的任何氢原子还可以为卤素、氰基、烷基、羟基、羧基等基团所取代)、杂环烷基(即、在前述的环烷基的基础上，其烷基环上的至少一个碳原子为氧、硫、氮所替代)、卤素(F，Cl，Br，I)、羧基、氰基(-CN)、磺酸基(-SO4,)、磺酰基(-SO2Ra，Ra为氢、烷基、芳基等)、炔基(-C≡CH，-C≡CRb，Rb为烷基、芳基等)、酰胺基(-C(O)NRxRy，RxRy为烷基、芳基等)、酯基(-C(O)O-Rz，Rz为烷基、芳基等)、芳基、杂芳基、-O-NO2等等基团；
本发明中所提及的取代的亚杂烷基指上述取代的亚烷基中的一个或多个碳原子为氮、氧、硫等杂原子替代；
本发明中所提及的取代的芳基指苯、萘、芴等五元及以上的芳香环或苯并芳香环，环上的一个或多个氢原子为其他基团所取代，此处所指的其他基团可以为烷基、取代的烷基(同上)、卤素(F，Cl，Br，I)、羧基、氰基(-CN)、磺酸基(-SO4,)、磺酰基(-SO2Ra，Ra为氢、烷基、芳基等)、炔基(-C≡CH，-C≡CRb，Rb为烷基、芳基等)、酰胺基(-C(O)NRxRy，RxRy为烷基、芳基等)、酯基(-C(O)O-Rz，Rz为烷基、芳基等)、芳基、杂芳基等等基团。
本发明中所提及的杂芳基指噻吩、吡咯、吡啶、呋喃、咪唑、苯并咪唑、喹啉等五元及以上的芳香杂环或苯并芳香杂环。
本发明中所提及的取代的杂芳基指噻吩、吡咯、吡啶、呋喃、咪唑、苯并咪唑、喹啉等五元及以上的芳香杂环或苯并芳香杂环，环上的一个或多个氢原子为其他基团所取代，此处所指的其他基团可以为烷基、取代的烷基(同上)、卤素(F，Cl，Br，I)、羧基、氰基(-CN)、磺酸基(-SO4,)、磺酰基(-SO2Ra，Ra为氢、烷基、芳基等)、炔基(-C≡CH，-C≡CRb，Rb为烷基、芳基等)、酰胺基(-C(O)NRxRy，RxRy为烷基、芳基等)、酯基(-C(O)O-Rz，Rz为烷基、芳基等)、芳基、杂芳基、-O-NO2等等基团。
本发明中所提及的取代的酯基指-O-C(O)-RS-或-Ls-O-C(O)-RS-或-O-C(O)-O-RS-或-Ls-O-C(O)-O-RS-的形态，其中Ls为亚烷基(取代的亚烷基)、芳基、环烷基(取代的环烷基)；Rs为亚烷基(取代的亚烷基)、芳基、环烷基(取代的环烷基)。
具体实施方式
实施例1
Figure BDA0002388977730000061
(S)-4-(3-氨基-1-氧代-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基硝酸酯
具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0002388977730000062
步骤A：2-(4-(溴甲基)苯基)乙酸(化合物1.1)
将4-甲基苯乙酸(100g，670mmol)溶于乙腈(1L)中，将N-溴代丁二酰亚胺(125.2g，703.5mmol)和偶氮二异丁腈(2.2g，13.4mmol)溶于反应液中，在氮气的保护下80℃反应3小时，反应完毕后，将反应液降至室温，有大量固体析出，过滤，滤饼依次用石油醚/乙酸乙酯(1:1)(200mL)，饱和亚硫酸氢钠(200mL)，水(200mL)，石油醚(200mL)洗涤，50℃烘干得到化合物1.1(82g，收率：54％,白色固体)。LCMS ESI(+)m/z:229.0/231.0(M+1)，直接用于下一步反应。
步骤B：2-(4-(羟甲基)苯基)乙酸(化合物1.2)
将化合物1.1(82g，358.1mmol)加入水(300mL)中，加热100℃反应2小时，反应变澄清，然后冷却至室温，冰浴继续降温至0℃，析出白色固体，过滤，滤饼用水洗涤2次，50℃烘干得到化合物1.2(40g，收率：67％，白色固体)直接用于下一步反应。
步骤C：2-(4-(羟甲基)苯基)乙酸甲酯(化合物1.3)
将化合物1.2(40g，241.0mmol)溶于甲醇(400mL)中，加入硫酸(2.4g，24.1mmol)，冰浴反应2小时，反应完全后加入饱和碳酸氢钠溶液(200mL)，水层以乙酸乙酯(200mL X 3)萃取，合并有机层，用饱和食盐水(300mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，得到化合物1.3(41g，收率：95％，淡黄色油状物)。LCMS ESI(+)m/z:181.1(M+1)，直接用于下一步反应。1HNMR(400MHz,DMSO)δ7.23(dd,J＝22.8,8.4Hz,4H),5.15(s,1H),4.47(s,2H),3.64(s,2H),3.60(s,3H).
步骤D：2-(4-(((三异丙基甲硅烷基)氧基)甲基)苯基)乙酸甲酯(化合物1.4)
将化合物1.3(41g，226.5mmol)，咪唑(23.1g，339.8mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(400mL)中，冰浴降至0℃，分批加入三异丙基氯硅烷(48.1g，249.2mmol)，自然升温至室温搅拌过夜，反应完全后加水(500mL)，水层以乙酸乙酯(200mL X 3)萃取，合并有机层，用饱和食盐水(300mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤、旋干，得到化合物1.4(72g，收率：94％，无色油状物)，直接用于下一步反应。
步骤E：2-(4-(((三异丙基甲硅烷基)氧基)甲基)苯基)乙酸(化合物1.5)
将化合物1.4(72g，214.0mmol)溶于四氢呋喃(500mL)中，加入氢氧化锂(10.8g，256.8mmol)，室温搅拌过夜，反应完全后加入1M的盐酸溶液(300mL)，水层以乙酸乙酯(200mL X 3)萃取，合并有机层，用饱和食盐水(300mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥。过滤、旋干，得到化合物1.5(67g，收率：97％，无色油状物)。1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.28(s,1H),7.25(d,J＝12.8Hz,4H),4.78(s,2H),3.54(s,2H),1.14(s,3H),1.05(d,J＝6.8Hz,18H).
步骤F：(R)-4-苄基-3-(2-(4-(((三异丙基硅基)氧基)甲基)苯基)乙酰基)恶唑烷-2-酮(化合物1.6)
将化合物1.5(67g，207.8mmol)以及无水N,N-二甲基甲酰胺(0.76g，10.4mmol)溶于无水二氯甲烷中，在冰浴条件下缓慢滴加草酰氯(31.7g，249.4mmol)，保持冰浴制备得到酰氯，同时在另外一个三口瓶中将(R)-4-苄基-噁唑烷酮(25.7g，145.2mmol)加入无水四氢呋喃(300mL)中，氮气置换，用干冰丙酮降温至-78℃，缓慢滴加正丁基锂(2.5M，64mL)并保持温度在-78℃，滴加完毕后继续在-78℃小搅拌2小时，然后通过恒压滴液漏斗慢慢滴加制备的酰氯的无水四氢呋喃溶液，保持滴加温度在-78℃，滴加完成后继续保持-78℃反应2小时，然后自然升温至室温，反应完全后用饱和氯化铵水溶液(400mL)萃灭反应，水层以乙酸乙酯(300mL X 3)萃取，合并有机层，用饱和碳酸氢钠水溶液(300mL)，饱和食盐水(300mL)依次洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，经柱层析纯化，得化合物1.6(44g，收率：44％，无色油状物)。
步骤G:2-((S)-3-((R)-4-苄基-2-氧代恶唑烷-3-基)-3-氧代-2-(4-(((三异丙基硅基)氧基)甲基)苯基)丙基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物1.7)
将化合物1.6(44g，91.3mmol)溶于无水四氢呋喃(500mL)中，氮气置换，干冰丙酮降温至-78℃，缓慢滴加LiHMDS(1M，109mL)，滴加完毕后继续在-78℃下搅拌1小时，将N-溴甲基邻苯二甲酰亚胺(26.3g，109.6mmol)溶于无水四氢呋喃(200mL)中，通过恒压滴液漏斗慢慢滴加上述体系中，控制滴加温度低于-70℃，滴加结束后反应保持在-78℃下搅拌3小时，自然升温至室温搅拌过夜，反应完全后用饱和氯化铵水溶液(400mL)萃灭反应，水层以乙酸乙酯(300mL X 3)萃取，合并有机层，用饱和食盐水(300mL)依次洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，得到黄色固体，采用乙酸乙酯/石油醚体系对其重结晶，析出固体，过滤，滤饼用石油醚(100mL)洗涤，旋干，得到化合物1.7(32g，收率：55％，白色固体)。
步骤H：(S)-2-((2-羧基-2-(4-(((三异丙基甲硅烷基)氧基)甲基)苯基)乙基)氨基甲酰基)苯甲酸(化合物1.8)
将化合物1.7(32g，49.9mmol)溶于四氢呋喃(300mL)中，加水(100mL)，冰浴冷却反应体系至0℃，然后加入氢氧化锂(6.3g，149.7mmol)，于0℃搅拌1小时，反应完全后用2M盐酸溶液调节反应液pH值至2-3，水层以乙酸乙酯(200mL X 4)萃取，合并有机层，用饱和食盐水(300mL)依次洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，得到化合物1.8(20g，收率：80％，淡黄色固体)。LCMS ESI(+)m/z:500.2(M+1).
步骤I：(S)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-2-(4-(((三异丙基甲硅烷基)氧基)甲基)苯基)丙酸(化合物1.9)
将化合物1.8(20g，40mmol)，1-羟基苯并三唑(5.9g，44mmol)和三乙胺(12.1g，120mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺中，冰浴冷却反应体系至0℃，然后向反应液中加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(8.4g，44mmol)。搅拌一段时间，反应液变澄清，缓慢升至室温过夜，反应完全后反应液减压至干，加入饱和氯化铵水溶液(200mL)，水层以乙酸乙酯(200mL X 3)萃取，合并有机层，用饱和碳酸氢钠水溶液(300mL)，饱和食盐水(300mL)依次洗涤，无水硫酸钠干燥.过滤、旋干，得到化合物1.9(17g，收率：88％，黄色固体)
步骤J：(S)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)-2-(4-(((三异丙基甲硅烷基)氧基)甲基基)苯基)丙酰胺(化合物1.10)
将化合物1.9(65mg，0.123mmol)溶解于5mL的N，N-二甲基甲酰胺中，加入二异丙基乙胺(25ul，0.16mmol)、2-(7-氧化苯并三氮唑)-N，N，N”，N'-四甲基脲六氟磷酸盐(77mg，0.20mmol)，室温下搅拌10分钟，加入噻吩并[2,3-c]吡啶-2-胺(20mg，0.135mmol)，搅拌2小时。用饱和氯化铵水溶液淬灭反应，用30mL乙酸乙酯分三次萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，旋干，柱层析纯化得到产物1.10(48mg，产率：58％)。LCMS ESI(+)m/z：614.2(M+1)/
步骤K：(S)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-2-(4-(羟甲基)苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺(化合物1.11)
将化合物1.10(48mg，0.078mmol)溶解在5mL四氢呋喃溶液中，加入1mL盐酸(2M)，室温下搅拌0.5小时。直接旋干溶剂得到产物1.11(30mg，产率：100％)。LCMS ESI(+)m/z：458.1(M+1)
步骤L：(S)-4-(3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-1-氧代-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基硝酸酯(化合物1.12)
将2滴硝酸和1滴乙酸酐溶于二氯甲烷中，在室温下搅拌10分钟，然后将化合物1.11(20mg,0.04mmol)的二氯甲烷溶液慢慢滴入到体系中，反应过程中会有很多化合物1.11难溶，再在另一反应瓶中配置同样的硝酸和乙酸酐的二氯甲烷溶液，将不溶的反应液慢慢滴入，重复3-4次，直到化合物1.11全部溶解。LCMS监测反应完全。反应完后加入水淬灭反应，然后用二氯甲烷(10mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(20mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥。过滤、旋干，剩余物用柱层析纯化得产物1.12(20mg，产率：93％)。LCMS ESI(+)m/z:503.1(M+1).
步骤M：(S)-4-(3-氨基-1-氧代-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基硝酸酯(化合物1)
将化合物1.12(20mg,0.04mmol)溶于1mL甲醇中，然后加入水合肼，在40℃下反应过夜，LCMS监测反应完全。反应完后加入水淬灭反应，然后用乙酸乙酯(10mLX3)萃取，合并有机相，减压浓缩，剩余物溶于2mL的甲醇中，过滤，滤液用反相制备纯化，冻干后得到目标产物实施例1(8mg，产率：44％)。LCMS ESI(+)m/z:373.1(M+1)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.71(s,1H),9.41(s,1H),8.51(d,J＝6.4Hz,1H),8.06(d,J＝6.0Hz,1H),7.99(s,3H),7.54–7.50(m,2H),7.46–7.42(m,2H),7.24(s,1H),5.57(s,2H),4.27–4.22(m,1H),3.62–3.57(m,1H),3.25–3.15(m,1H).
实施例2
Figure BDA0002388977730000081
3-(3-氨基-1-(异喹啉-6-基氨基)-1-氧代丙-2-基)苄基硝酸酯
具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0002388977730000082
步骤A：2-(4-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)苯基)乙酸甲酯(化合物2.1)
将2-(4-(羟甲基)苯基)乙酸甲酯(5.0g,27.8mmol)和咪唑(2.8g,41.7mmol)溶于50mL的N，N-二甲基甲酰胺中，然后加入叔丁基二甲基氯硅烷(5.0g,33.4mmol)，在室温下反应过夜。TLC监测反应完全。加入水淬灭反应，用乙酸乙酯(20mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(50mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥.过滤、旋干，柱层析纯化得产物2.1(8.1g，产率：98％)。
步骤B：2-(4-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)苯基)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)丙酸甲酯(化合物2.2)
将化合物2.1(3.0g,10.2mmol)溶于10mL无水四氢呋喃中,氮气置换，干冰丙酮降温至-78℃，缓慢滴加六甲基二硅基胺基锂(1.0M，12.2mL,12.2mmol),滴加完成后体系于-78℃搅拌1小时，将N-溴甲基邻苯二甲酰亚胺(2.9g,12.2mmol)溶于10mL四氢呋喃中，慢慢滴加到体系中，控制滴加温度低于-70℃，滴加结束后反应保持在-78℃下搅拌3小时，TLC监测反应完全。加入饱和氯化铵溶液淬灭反应，用乙酸乙酯(20mLX3)萃取，有机相用饱和食盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物2.2(3.6g,产率：78％)。
步骤C：2-((2-(4-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)苯基)-2-羧乙基)氨基甲酰基)苯甲酸(化合物2.3)
将化合物2.2(3.6g,8.0mmol)溶于100mL四氢呋喃和30mL水中,在0℃下加入氢氧化锂一水合物(1.0g,24.0mmol)，于0℃下搅拌3小时，LCMS监测反应完全。减压蒸出有机溶剂，用1M的盐酸水溶液调pH至3-4，然后用乙酸乙酯(20mLX3)萃取，用饱和食盐水(50mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干得粗产物2.3(3.4g，产率：93％)。LCMS ESI(+)m/z：458.2(M+1)
步骤D：2-(4-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)苯基)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)丙酸(化合物2.4)
将化合物2.3(3.4g,7.4mmol)，1-羟基苯并三唑(0.9g,7.4mmol)和三乙胺(2.2g,22.2mmol)溶于10mL二氯甲烷中,氮气保护，降温至0℃，然后向反应液中加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(1.4g,7.4mmol)，搅拌一段时间，反应液变澄清，缓慢升温至室温，反应过夜。TLC监测反应完全。加水稀释反应液，用二氯甲烷(20mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(50mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物2.4(1.5g,产率：46％)。
步骤E：2-(4-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)苯基)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-N-(异喹啉-6-基)丙酰胺(化合物2.5)
将化合物2.4(500mg,1.1mmol)溶于5mL的N，N-二甲基甲酰胺中，然后依次加入2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(627mg,1.6mmol)和N，N-二异丙基乙胺(283mg,2.2mmol)，在室温下搅拌5分钟，再加入6-氨基异喹啉(190mg,1.3mmol)，在室温下反应2小时。LCMS监测反应完全。反应完后加入水淬灭反应，用乙酸乙酯(20mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(50mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物2.5(443mg，产率：71％)。LCMS ESI(+)m/z:566.2(M+1).
步骤F：3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-2-(4-(羟基甲基)苯基)-N-(异喹啉-6-基)丙酰胺(化合物2.6)
将化合物2.5(443mg,0.80mmol)溶于5mL四氢呋喃中，然后加入5mL盐酸水溶液(1M)中，在室温下反应30分钟。LCMS监测反应完全。反应完后加入饱和碳酸氢钠溶液中和，然后用乙酸乙酯(20mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(50mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干得到粗产物2.6(242mg，产率：68％)。LCMS ESI(+)m/z:452.2(M+1).
步骤G：4-(3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-1-(异喹啉-6-基氨基)-1-氧代丙-2-基)硝酸苄酯(化合物2.7)
将2滴硝酸和1滴乙酸酐溶于二氯甲烷中，在室温下搅拌10分钟，然后将化合物2.6(242mg,0.50mmol)的二氯甲烷溶液慢慢滴入到体系中，反应过程中会有很多化合物2.6难溶，再在另一反应瓶中配置同样的硝酸和乙酸酐的二氯甲烷溶液，将不溶的反应液慢慢滴入，重复3-4次，直到化合物2.6全部溶解。LCMS监测反应完全。反应完后加入水淬灭反应，然后用二氯甲烷(20mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(50mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、柱层析纯化得产物2.7(136mg，产率：54％)。LCMS ESI(+)m/z:497.1(M+1).
步骤H：3-氨基-2-(4-(肼基甲基)苯基)-N-(异喹啉-6-基)丙酰胺(化合物2)
将化合物2.7(30mg,0.06mmol)溶于1mL甲醇中，然后加入水合肼，在40℃下反应5小时，LCMS监测反应完全。反应完后加入水淬灭反应，然后用乙酸乙酯(10mLX3)萃取三次，合并有机相，减压浓缩，剩余物溶于2mL的甲醇中，过滤，滤液用反相制备纯化，冻干后得到目标产物实施例2(1.1mg，产率：4％)。LCMS ESI(+)m/z:367.1(M+1).
实施例3
Figure BDA0002388977730000101
4-(3-氨基-1-氧代-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苯乙酸乙酯
具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0002388977730000102
步骤A：2-(4-乙烯基苯基)乙酸甲酯(化合物3.1)
将2-(4-溴苯基)乙酸甲酯(11.0g,48.0mmol)，三氟(乙烯基)硼酸钾(7.7g,57.6mmol)和碳酸铯(31.3g,96.0mmol)溶于200mL四氢呋喃和20mL水中，然后加入二(三苯基膦)二氯化钯(674mg,0.96mmol)，在85℃和氮气保护下反应过夜。LCMS监测反应完全。过滤、滤液用乙酸乙酯(50mLX3)萃取三次，合并有机相，用饱和的食盐水(100mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物3.1(7.0g，产率：83％)。LCMS ESI(+)m/z:177.1(M+1).
步骤B：2-(4-(2-羟乙基)苯基)乙酸甲酯(化合物3.2)
将化合物3.1(3.5g,19.9mmol)溶于20mL四氢呋喃中，在冰浴下滴加硼烷(10.0M,4mL,40.0mmol)，在0℃下反应1小时，再在室温下反应1小时。然后在冰浴下滴加60mL氢氧化钠水溶液(1M)，再滴加5mL双氧水(30％)，在冰浴下反应30分钟，再在室温下反应30分钟。TLC监测到原料反应完全。加入水淬灭反应，用乙酸乙酯(50mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(100mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物3.2(1.5g,产率：39％)。
步骤C：2-(4-(2-((三异丙基甲硅烷基)氧基)乙基)苯基)乙酸甲酯(化合物3.3)
将化合物3.2(1.5g,7.7mmol)溶于10mL二氯甲烷中,然后加入2,6-二甲基吡啶(1.4mL,11.6mmol)和三异丙基硅基三氟甲磺酸酯(2.5mL,9.2mmol)在室温下反应过夜。TLC监测到原料反应完全。加入水淬灭反应，用二氯甲烷(20mLX3)萃取三次，合并有机相，用饱和的食盐水(50mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物3.3(2.1g,产率：78％)。
步骤D：3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-2-(4-(2-((三异丙基甲硅烷基)氧基)乙基)苯基)丙酸甲酯(化合物3.4)
将化合物3.3(2.1g,6.0mmol)溶于20mL无水四氢呋喃中,氮气置换，干冰丙酮降温至-78℃，缓慢滴加六甲基二硅基胺基锂(1.0M，7.2mL，7.2mmol),滴加完成后体系于-78℃搅拌1小时，将N-溴甲基邻苯二甲酰亚胺(1.7g,7.2mmol)溶于10mL四氢呋喃中，慢慢滴加到反应液中，控制滴加温度低于-70℃，滴加结束后反应保持在-78℃下搅拌3小时，TLC监测到原料反应完全。加入饱和的氯化铵溶液(10mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(20mLX3)萃取，饱和食盐水(50mL)洗涤。无水硫酸钠干燥，过滤、旋干，柱层析纯化得产物3.4(1.0g,产率：33％)。
步骤E：2-((2-羧基-2-(4-(2-((三异丙基甲硅烷基)氧基)乙基)苯基)乙基)氨基甲酰基)苯甲酸(化合物3.5)
将化合物3.4(1.0g,2.0mmol)溶于10mL四氢呋喃和3mL水中,在0摄氏度下加入氢氧化锂一水合物(252mg,6.0mmol)，于0℃下搅拌3小时，LCMS监测反应完全。减压蒸出有机溶剂，用1M的盐酸水溶液调pH至3-4，用乙酸乙酯(20mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(50mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干得产物,3.5(960mg，产率：95％)。LCMSESI(+)m/z：514.2(M+1).
步骤F：3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-2-(4-(2-((三异丙基甲硅烷基)氧基)乙基)苯基)丙酸(化合物3.6)
将化合物3.5(960mg,1.9mmol)，1-羟基苯并三唑(257mg,1.9mmol)和三乙胺(0.8mL,5.7mmol)溶于10mL二氯甲烷中,氮气保护，降温至0℃，然后向反应液中加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(365mg,1.9mmol)，搅拌一段时间，反应液变澄清，缓慢升温至室温，反应过夜。LCMS监测反应完全。加水稀释反应液，用二氯甲烷萃取(20mLX3)，合并有机相，用饱和食盐水(50mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物3.6(510mg,产率：54％)。LCMS ESI(+)m/z：496.2(M+1).
步骤G：3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)-2-(4-(2-((三异丙基硅基)氧基)乙基)苯基)丙酰胺(化合物3.7)
将化合物3.6(70mg,0.14mmol)溶于5mL的N，N-二甲基甲酰胺中，然后依次加入2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(80mg,0.21mmol)和N，N-二异丙基乙胺(36mg,0.28mmol)，在室温下搅拌5分钟，再加入噻吩并[2,3-c]吡啶-2-胺(25mg,0.17mmol)，在室温下反应2小时。LCMS监测反应完全。反应完后加入水淬灭反应，用乙酸乙酯(10mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(20mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物3.7(62mg，产率：71％)。LCMS ESI(+)m/z:628.3(M+1).
步骤H：3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-2-(4-(2-羟基乙基)苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺(化合物3.8)
将化合物3.7(62mg,0.10mmol)溶于5mL四氢呋喃中，然后加入5mL盐酸水溶液(1M)中，40℃下反应2小时。LCMS监测反应完全。反应完后加入饱和碳酸氢钠溶液中和，然后用乙酸乙酯(10mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(20mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干得到粗产物3.8(47mg，产率：100％)。LCMS ESI(+)m/z:472.1(M+1).
步骤I：4-(3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-1-氧代-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苯乙酸乙酯(化合物3.9)
将2滴硝酸和1滴乙酸酐溶于二氯甲烷中，在室温下搅拌10分钟，然后将化合物3.8(30mg,0.06mmol)的二氯甲烷溶液慢慢滴入到体系中，反应过程中会有很多化合物难溶，再在另一反应瓶中配置同样的硝酸和乙酸酐的二氯甲烷溶液，将不溶的反应液慢慢滴入，重复3-4次，直到化合物全部溶解。LCMS监测反应完全。反应完后加入水淬灭反应，然后用二氯甲烷(10mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(20mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、柱层析纯化得产物3.9(12mg，产率：48％)。LCMS ESI(+)m/z:517.1(M+1).
步骤J：4-(3-氨基-1-氧代-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苯乙酸乙酯(化合物3)
将化合物3.9(12mg,0.03mmol)溶于1mL甲醇中，然后加入水合肼(14mg,0.30mmol)，在40℃下反应过夜，LCMS监测反应完全。反应完后加入水淬灭反应，然后用乙酸乙酯(10mLX3)萃取，合并有机相，减压浓缩，剩余物溶于2mL的甲醇中，过滤，滤液用反相制备纯化，冻干后得到目标产物实施例3(5mg，产率：36％)。LCMS ESI(+)m/z:387.1(M+1).
实施例4
Figure BDA0002388977730000121
(S)-4-(3-氨基-1-(苯并[d]异噻唑-6-基氨基)-1-氧代丙-2-基)硝酸苄酯
具体反应方程式如下所示
Figure BDA0002388977730000122
步骤A：用苯并[d]异噻唑-6-胺代替实施例1步骤J中的噻吩并[2,3-c]吡啶-2-胺，合成得到化合物4.1。LCMS ESI(+)m/z：614.2(M+1).
步骤B：采用实施例1中步骤K，合成得到化合物4.2。LCMS ESI(+)m/z：458.1(M+1).
步骤C：(S)-4-(1-(苯并[d]异噻唑-6-基氨基)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-1-氧代丙-2-基)苄基硝酸酯(化合物4.3)
将化合物4.2(150mg，0.33mmol)溶解在10mL二氯甲烷溶液中，加入乙酸酐(0.5ml)、硝酸(0.5ml)，氮气保护，在40℃下搅拌3小时。旋干溶剂，柱层析纯化得到化合物4.3(40mg，产率：24％)。LCMS ESI(+)m/z：503.1(M+1).
步骤D：(S)-4-(3-氨基-1-(苯并[d]异噻唑-6-基氨基)-1-氧代丙-2-基)硝酸苄酯(化合物4)
将化合物4.3(40mg，0.08mmol)溶解在5mL甲氨乙醇溶液中，在60℃下搅拌3小时，旋干溶剂，反向制备纯化得到化合物4(1.4mg，产率：5％)。LCMS ESI(+)m/z：373.1(M+1).
实施例5
Figure BDA0002388977730000123
1-(4-(3-氨基-1-氧代-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苯基)乙烷-1,2-二硝酸酯
具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0002388977730000131
步骤A：2-(4-(环氧乙烷-2-基)苯基)乙酸甲酯(化合物5.1)
将称量好的2-(4-乙烯基苯基)乙酸甲酯(2.2g，12.48mmol)溶于80mL二氯甲烷中，在冰浴下分批加入间氯过氧苯甲酸(7.6g，37.44mmol),反应液在0度搅拌1小时，然后在室温搅拌16小时。向反应液中加入饱和亚硫酸钠溶液300mL，搅拌1小时，用二氯甲烷(300mL)萃取2次，合并有机相，有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤2次，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化得到化合物5.1(1.84g，产率：77％，无色油状物)。
步骤B：2-(4-(2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)苯基)乙酸甲酯(化合物5.2)
将化合物5.1(1.84g，9.57mmol)溶于30mL丙酮中，然后加入Amberlyst 15(2.5g，12.44mmol)，反应液在室温搅拌20小时。将反应液过滤，向滤液中加入饱和碳酸氢钠溶液150mL，然后用乙酸乙酯(300mL)萃取2次，分液合并有机相，有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤1次，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化后得到化合物5.2(1.5g，收率：63％，无色油状物)。
步骤C：2-(4-(2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)苯基)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)丙酸甲酯(化合物5.3)
在零下78摄氏度下，将化合物5.2(1.5g，5.99mmol)溶于无水四氢呋喃(20mL)中，然后慢慢滴入双三甲基硅基胺基锂(7.2mL，7.19mmol)到反应液里，在-78度和氮气保护下搅拌0.5小时，紧接着将称量好的N-溴甲基邻苯二甲酰亚胺(1.73g，7.19mmol)溶解于无水四氢呋喃(10mL)后慢慢滴加到反应瓶中，之后继续在此温度下搅拌1.5小时。用20mL氯化铵饱和溶液对反应进行淬灭，用乙酸乙酯(60mL)萃取2次，分液合并有机相，有机相用饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化后得到化合物5.3(2g，收率：82％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z：410.1(M+1).
步骤D：2-((2-羧基-2-(4-(2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)苯甲酸(化合物5.4)
将化合物5.3(2g，4.88mmol)溶解在35mL四氢呋喃和30mL水中，加入一水合氢氧化锂(615mg,14.64mmol)，反应液在室温搅拌2小时。向反应液中加入饱和柠檬酸溶液至pH为6，用乙酸乙酯(40mL)萃取3次，合并有机相，用饱和食盐水(40mL)洗2次，无水硫酸钠干燥,过滤，减压浓缩得到产物5.4(1.1g,产率：55％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z：414.1(M+1).
步骤E：2-(4-(2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)苯基)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)丙酸(化合物5.5)
将化合物5.4(1.1g，2.66mmol)溶解在30mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(760mg，3.99mmol)，1-羟基苯并三唑(540mg，3.99mmol)和二异丙基乙胺(688mg，5.32mmol)。反应液在室温搅拌12小时。将反应液减压浓缩，向剩余物加入水20mL，用饱和柠檬酸溶液至pH为6，用乙酸乙酯(40mL)萃取3次，合并有机相，用饱和食盐水(40mL)洗2次，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，剩余物用柱层析纯化得到产物5.5(760mg，产率：72％，黄色固体)。LCMS ESI(+)m/z：396.1(M+1).
步骤F：2-(4-(2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)苯基)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻吩并[2,3-c]]吡啶-2-基)丙酰胺(化合物5.6)
将化合物5.5(260mg，0.66mmol)溶解在12mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入二异丙基乙胺(127mg，0.99mmol)，6-氨基异喹啉(104mg，0.69mmol)和2-(7-氧化苯并三氮唑)-N，N，N”，N'-四甲基脲六氟磷酸盐(300mg，0.79mmol)。反应液在室温搅拌1.5小时。向反应液中加入水30mL，用乙酸乙酯(50mL)萃取2次，合并有机相，用饱和食盐水(30mL)洗2次，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，剩余物用柱层析纯化得到产物5.6(260mg，产率：75％，黄色固体)。LCMSESI(+)m/z：528.1(M+1).
步骤G：2-(4-(1,2-二羟乙基)苯基)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺(化合物5.7)
将化合物5.6(260mg,0.49mmol)溶解在30mL甲醇和30mL乙腈中，加入3.3mL1.5M的盐酸水溶液，反应液在30度搅拌2小时，将反应液减压浓缩，得到产物5.7(240mg，产率：100％，黄色固体)。LCMS ESI(+)m/z：488.1(M+1).
步骤H：1-(4-(3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-1-氧代-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苯基)乙烷-1,2-二硝酸二硝酯(化合物5.8)
将0.4mL硝酸溶液加入到6mL二氯甲烷中，反应液冷却至0度，滴加硫酸0.2mL，反应液在0度搅拌0.5小时。向反应液中滴加化合物5.7(30mg，0.06mmol)的3mL二氯甲烷悬浊液。反应液在0度搅拌2小时。向反应液中加入饱和碳酸氢钠溶液调节pH为8，用二氯甲烷(30mL)萃取2次，合并有机相，用饱和食盐水(30mL)洗2次，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，剩余物用柱层析纯化得到产物5.8(5mg,产率：14％，黄色固体)。LCMSESI(+)m/z：578.1(M+1).
步骤I：1-(4-(3-氨基-1-氧代-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苯基)乙烷-1,2-二硝酸酯(化合物5)
将化合物5.8(5mg，0.01mmol)溶解在8mL乙醇中，加入水合肼(17mg，0.40mmol)，反应液在50度和氮气保护下搅拌6小时。向反应液中加入20mL水，用乙酸乙酯(30mL)萃取2次，合并有机相，用饱和食盐水(30mL)洗2次，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，剩余物用反向制备纯化得到化合物5(1.2mg，产率：31％，白色固体)。LCMSESI(+)m/z：448.1(M+1).
实施例6
Figure BDA0002388977730000142
(S)-4-(3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙烷-2-基)3-(硝基氧基)环丁烷羧酸苄酯
具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0002388977730000141
步骤A：3-(硝基氧基)环丁烷羧酸(化合物6.1)
在冰浴条件下，将醋酸酐(2mL)加入到50mL反应瓶中，紧接着将浓硝酸(1mL)慢慢滴加到反应瓶里，反应液在冰浴下搅拌10分钟。在冰浴条件下，将3-羟基环丁烷羧酸(100mg，0.862mmol)溶于醋酸酐(3mL)中，然后将醋酸酐-浓硝酸混合液(3mL)慢慢滴加到反应液中，然后反应液在常温下搅拌1小时。通过TLC(溴甲酚绿显色)来确认反应完全。将水加入到反应液中，用乙酸乙酯来萃取(15mL)，分液合并有机相，然后有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，硅胶柱纯化，得到白色固体6.1(62mg，收率：44.67％)。
步骤B：(S)-4-(3-(1,3-二氧异吲哚-2-基)-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基3-(硝基氧基)环丁烷羧酸盐(化合物6.2)
将化合物1.11(60mg，0.131mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(6mL)中，然后依次加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(37.7mg，0.197mmol)、4-二甲氨基吡啶(24mg，0.197mmol)和化合物6.1(31.7mg，0.197mmol)，混合液在常温下搅拌过夜。通过LCMS确认反应完全。将水加入到反应液中，用乙酸乙酯来萃取(15mL)，分液合并有机相，然后有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，硅胶柱纯化，得到白色固体6.2(50mg，收率：63.5％)。LCMS ESI(+)m/z:601.1(M+1).
步骤C：(S)-4-(3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙烷-2-基)3-(硝基氧基)环丁烷羧酸苄酯(化合物6)
将化合物6.2(83mg，0.138mmol)溶于8mLd的乙醇中，加水合肼(69mg，1.38mmol)到反应液中，反应升至55度，在惰性气体氛围下搅拌2小时。通过LCMS确认反应完全。加水到反应液里，用乙酸乙酯(12mL)萃取，饱和食盐水洗涤。有机相无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩旋干，剩余物溶于甲醇(3mL)，经反向制备纯化后得到白色固体产物实施例6(20mg(盐酸盐)，收率：28.5％，纯度：97％)。LCMS ESI(+)m/z:471.1(M+1).1H NMR(400MHz,DMSO)δ13.41(s,1H),9.47(s,1H),8.52(d,J＝6.8Hz,1H),8.21–8.12(m,4H),7.49(d,J＝8.4Hz,2H),7.40(d,J＝8.8Hz,3H),5.26(p,J＝7.2Hz,1H),5.10(s,2H),4.45(dd,J＝8.8,5.6Hz,1H),3.63(s,1H),3.21–3.12(m,1H),3.03–2.92(m,1H),2.71–2.61(m,2H),2.34(ddd,J＝17.2,9.6,2.8Hz,2H).
实施例7
Figure BDA0002388977730000151
3-(4-(3-氨基-1-氧代-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苯氧基)丙烷-1,2-二硝酸酯具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0002388977730000152
步骤A：2-(4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)苯基)乙酸(化合物7.1)
将对羟基苯乙酸(5.0g，32.86mmol)溶解在400mL四氢呋喃中，在0度，加入咪唑(11g,164.3mmol)和叔丁基二甲基氯硅烷(13.8g,92.00mmol)，反应液在室温下搅拌2小时。向反应液中加入130mL饱和碳酸钠溶液，室温继续搅拌1小时。向反应液中加入2M盐酸溶液至pH为4，用乙酸乙酯(100mLX2)萃取，合并有机相，用食盐水(200mL)洗2次，无水硫酸钠干燥。过滤、减压浓缩，剩余物用柱层析纯化得到产物7.1(5.78g,产率：66％，无色油状物)。
步骤B：2-(4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)苯基)乙酸苄酯(化合物7.2)
将化合物7.1(5.78g，21.70mmol)溶解在100mL N,N-二甲基甲酰胺中，将溶液冷却至0度，加入碳酸钾(3.6g，26.04mmol)和苄溴(4.45g，26.04mmol)，反应液在室温搅拌2小时。向反应液加入80mL水，用乙酸乙酯(100mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(40mL)洗4次，用无水硫酸钠干燥.过滤、减压浓缩，剩余物用柱层析纯化得到产物7.2(3.66g，产率：47％，无色油状物)。
步骤C：2-(4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)苯基)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)丙酸苄酯(化合物7.3)
将化合物7.2(3.66g，10.27mmol)溶解在30mL无水四氢呋喃溶液中，将反应液冷却至-78度，在氮气保护下，滴加1M的六甲基二硅基胺基锂(12.3mL，12.3mmol),反应液在-78度和氮气保护下搅拌1小时。然后滴加2-(溴甲基)异吲哚-1,3-二酮(2.96g，12.3mmol)的四氢呋喃溶液25mL，反应液在-78度搅拌3小时。向反应液中加入30mL水，用乙酸乙酯(60mL)萃取3次，合并有机相，用饱和食盐水(40mL)洗2次，无水硫酸钠干燥。过滤,滤液减压浓缩，剩余物用柱层析纯化得到产物7.3(3.9g，产率：74％，无色油状物)。LCMS ESI(+)m/z：516.2(M+1).
步骤D：2-(4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)苯基)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)丙酸(化合物7.4)
将化合物7.3(3.9g，7.56mmol)溶解在30mL四氢呋喃和60mL甲醇中，加入钯碳(600mg，10％)，反应液在室温和氢气保护下搅拌3小时。将反应液用硅藻土过滤，滤液减压浓缩，剩余物用柱层析纯化得到产物7.4(2.9g，产率：90％，黄色固体)。LCMS ESI(+)m/z：426.2(M+1).
步骤E：2-(4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)苯基)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺(化合物7.5)
将化合物7.4(600mg，1.41mmol)溶解在20mL的N,N-二甲基甲酰胺中，加入二异丙基乙胺(276mg，2.11mmol)，2-(7-氧化苯并三氮唑)-N，N，N”，N'-四甲基脲六氟磷酸盐(648mg，1.69mmol)，和噻吩并[2,3-c]吡啶-2-胺(233mg，1.55mmol)。反应液在25度和氮气保护下搅拌2小时。向反应中加水(40mL)，然后用乙酸乙酯(60mLX2)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(30mLX2)洗，无水硫酸钠干燥。过滤，减压浓缩，柱层析纯化得到产物7.5(780mg，产率：99％，黄色固体)。LCMS ESI(+)m/z：558.2(M+1).
步骤F：3-氨基-2-(4-((叔丁基二甲基)氧基)苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺(化合物7.6)
将化合物7.5(1.2g，2.15mmol)溶于20mL的33％的甲胺/乙醇溶液，反应液在50度搅拌1小时。将反应液减压浓缩，柱层析纯化得到化合物7.6(655mg，产率：71％，黄色固体)。LCMS ESI(+)m/z：428.2(M+1).
步骤G：烯丙基(2-(4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)苯基)-3-氧代-3-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙基)氨基甲酸酯(化合物7.7)
将化合物7.6(655mg，1.53mmol)溶于30mL二氯甲烷中，加入三乙胺(620mg，6.12mmol)和氯甲酸烯丙脂(369mg，3.06mmol)，反应液在室温搅拌5分钟。向反应液中加入30mL水，然后用二氯甲烷(50mLX2)萃取，分液合并有机相，有机相用饱和食盐水(30mL)洗涤1次，无水硫酸钠干燥。过滤、旋干，柱层析纯化后得到化合物7.7(630mg，收率：80％，黄色固体)。LCMS ESI(+)m/z：512.2(M+1).
步骤H：烯丙基(2-(4-羟基苯基)-3-氧代-3-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙基)氨基甲酸酯(化合物7.8)
将化合物7.7(630mg，1.23mmol)溶于15mL甲醇中，加入碳酸钾(255mg，1.84mmol)，反应液在40度搅拌1小时。向反应液中加入饱和柠檬酸溶液至pH为7，用乙酸乙酯(60mL)萃取2次，分液合并有机相，有机相用饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤、旋干，柱层析纯化后得到化合物7.8(490mg，收率：100％，黄色固体)。LCMS ESI(+)m/z：398.1(M+1).
步骤I：烯丙基(2-(4-(2,3-二羟基丙氧基)苯基)-3-氧代-3-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙基)氨基甲酸酯(化合物7.9)
将化合物7.8(100mg，0.25mmol)溶解在10mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入氢氧化钠(24mg,0.60mmol)和缩水甘油(46mg,0.60mmol)，反应液在50度搅拌14小时。向反应液中加入4M盐酸/二氧六环溶液至pH为6，将反应液减压浓缩，柱层析纯化得到产物7.9(35mg,产率：30％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z：472.1(M+1).
步骤J：烯丙基(2-(4-(2,3-双(硝基氧基)丙氧基)苯基)-3-氧代-3-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙基)氨基甲酸酯(化合物7.10)
将30滴硝酸溶液加入到40mL二氯甲烷中，反应液冷却至0度，滴加硫酸7滴，反应液在0度搅拌1小时。向反应液中滴加化合物7.9(35mg，0.07mmol)的20mL二氯甲烷悬浊液。反应液在40度搅拌16小时。向反应液中加入饱和碳酸氢钠溶液调节pH为8，用二氯甲烷(30mLX2)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(30mLX2)洗涤，用无水硫酸钠干燥。过滤、减压浓缩，剩余物用柱层析纯化得到产物7.10(14mg,产率：34％，无色油状物)。LCMS ESI(+)m/z：562.1(M+1).
步骤K：3-(4-(3-氨基-1-氧代-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苯氧基)丙烷-1,2-二硝酸酯(化合物7)
将化合物7.10(14mg，0.02mmol)溶解在30mL二氯甲烷中，加入1,3-二甲基嘧啶-2,4,6(1H，3H，5H)-三酮(19mg，0.10mmol)和四三苯基膦钯(15mg，0.01mmol)，反应液在25度和氮气保护下搅拌2小时。将反应液减压浓缩，剩余物用反向制备纯化得到实施例7(2.8mg，产率：24％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z：478.1(M+1).
实施例8
Figure BDA0002388977730000171
3-(4-(3-氨基-1-氧代-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苯基)丙基硝酸酯
具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0002388977730000172
步骤A：3-氨基-2-(4-((叔丁基二甲基)氧基)苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺(化合物8.1)
将化合物6.5(1.5g,3.5mmol)溶于10mL甲胺乙醇溶液中，在50℃反应1.5小时。LCMS监测反应完全。反应完后加入水淬灭反应，然后用乙酸乙酯(20mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(50mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、柱层析纯化得产物8.1(1.0g，产率：66％)。LCMS ESI(+)m/z:428.2(M+1)。
步骤B：(2-(4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)苯基)-3-氧代-3-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(化合物8.2)
将化合物8.1(1.0g,2.3mmol)和N，N-二异丙基乙胺(0.7mL,3.5mmol)溶于5mL的N，N-二甲基甲酰胺中，然后加入二碳酸二叔丁酯(0.8mL,3.5mmol)，在室温下反应1小时，LCMS监测反应完全。反应完后加入水淬灭反应，然后用乙酸乙酯(20mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(50mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、柱层析纯化得产物8.2(1.2g，产率：100％)。LCMS ESI(+)m/z:528.2(M+1).
步骤C：(2-(4-羟基苯基)-3-氧代-3-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(化合物8.3)
将化合物8.2(1.2g,2.3mmol)溶于10mL甲醇中，然后加入碳酸钾(476mg,3.5mmol)，升温至50℃反应2小时，LCMS监测反应完全。将反应液浓缩，柱层析纯化得产物8.3(940mg，产率：63％)。LCMS ESI(+)m/z:414.1(M+1).
步骤D：4-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)-1-氧代-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苯基三氟甲磺酸酯(化合物8.4)
将化合物8.3(940mg,1.5mmol)和吡啶(474mg,6.0mmol)溶于5mL二氯甲烷中，在0℃下滴加三氟甲磺酸酐(846mg,3.0mmol)，然后在室温下反应30分钟，LCMS监测反应完全。反应完后加入水淬灭反应，然后用二氯甲烷(20mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(50mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥。过滤、柱层析纯化得产物8.4(220mg，产率：27％)。LCMS ESI(+)m/z:546.1(M+1).
步骤E：(2-(4-烯丙基苯基)-3-氧代-3-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(化合物8.5)
将化合物8.4(100mg,0.18mmol)，2-烯丙基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(37mg,0.22mmol)和碳酸铯(117mg,0.36mmol)溶于9mL四氢呋喃和1mL水中，然后加入[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(6mg,5mol％)，氮气置换，在85℃下反应过夜，LCMS监测反应完全。反应完后加入水淬灭反应，然后用乙酸乙酯(10mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(20mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、柱层析纯化得产物8.5(78mg，产率：99％)。LCMS ESI(+)m/z:438.2(M+1).
步骤F：(2-(4-(3-羟丙基)苯基)-3-氧代-3-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(化合物8.6)
将化合物8.5(78mg,0.17mmol)溶于2mL四氢呋喃中，在冰浴下滴加硼烷(10.0M,0.02mL,0.34mmol)，在0℃下反应1小时，再在室温下反应1小时。然后在冰浴下滴加5mL氢氧化钠水溶液(1M)，再滴加1mL双氧水(30％)，在冰浴下反应30分钟，再在室温下反应30分钟。LCMS监测反应完全。加入水淬灭反应，用乙酸乙酯萃取(10mLX3)，合并有机相，用饱和食盐水(20mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥。过滤、旋干，柱层析纯化得产物8.6(20mg,产率：26％)。LCMS ESI(+)m/z:456.2(M+1).
步骤G：3-(4-(3-氨基-1-氧代-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苯基)丙基硝酸酯(化合物8)
将2滴硝酸和1滴乙酸酐溶于二氯甲烷中，在室温下搅拌10分钟，然后将化合物8.6(8mg,0.02mmol)的二氯甲烷溶液慢慢滴入到体系中，在室温下反应1小时，LCMS监测反应完全。待反应完后，减压浓缩反应液，剩余物溶于2mL的甲醇中，过滤，滤液用反相制备纯化，冻干后得到目标产物实施例8(1mg，产率：11％)。LCMS ESI(+)m/z:401.1(M+1).
实施例9
Figure BDA0002388977730000181
(S)-4-(3-氨基-1-氧代-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基5-(硝基氧基)戊酸酯
具体反应方程式如下所示
Figure BDA0002388977730000182
步骤A：(S)-4-(3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-1-氧代-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基-5-戊酸酯(化合物9.1)
将化合物1.11(150mg，0.33mmol)溶解在10mL的N，N-二甲基甲酰胺中，加入二环己基碳二亚胺(135mg，0.65mmol)、溴戊酸(60mg，0.33mmol)、4-二甲氨基吡啶(41mg，0.33mmol)，在室温下搅拌过夜。用饱和氯化铵水溶液淬灭反应，用30mL乙酸乙酯分三次萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，旋干、柱层析纯化得到产物9.1(120mg，产率：59％)。LCMS ESI(+)m/z：620.1,622.1(M+1).
步骤B：(S)-4-(3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-1-氧代-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基5-(硝基氧基)戊酸(化合物9.2)
将化合物9.1(120mg,0.19mmol)溶解在10mL乙腈溶液中，加入硝酸银(36mg，0.21mmol)，氮气保护下，在70℃搅拌过夜。硅藻土过滤反应液，旋干,柱层析纯化得到产物9.2(40mg，产率：34％)。LCMS ESI(+)m/z：603.1(M+1).
步骤C：(S)-4-(3-氨基-1-氧代-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基5-(硝基氧基)戊酸酯(化合物9)
将化合物9.2(40mg，0.07mmol)溶解在10mL甲氨乙醇溶液中，在60℃下搅拌3小时，旋干溶剂，反向制备纯化得到实施例9(10mg，产率：32％)。LCMS ESI(+)m/z：473.1(M+1).1HNMR(400MHz,DMSO)δ13.38(s,1H),9.47(s,1H),8.52(d,J＝6.4Hz,1H),8.20–8.12(m,4H),7.48(d,J＝8.4Hz,2H),7.39(d,J＝9.2Hz,3H),5.07(s,2H),4.50(t,J＝6.2Hz,2H),4.44(q,J＝8.2,5.5Hz,1H),3.66–3.59(m,1H),3.20–3.13(m,1H),2.41(t,J＝7.2Hz,2H),1.68–1.57(m,4H).
实施例10
Figure BDA0002388977730000191
4-(4-(3-氨基-1-氧代-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苯基)丁基硝酸丁酯
具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0002388977730000192
步骤A：2-(4-(4-羟基丁-1-炔-1-基)苯基)乙酸甲酯(化合物10.1)
将2-(4-溴苯基)乙酸甲酯(4.3g,18.7mmol)，3-丁炔-1-醇(2.6g,37.4mmol)溶于100mL三乙胺中，然后加入四(三苯基膦)钯(864mg,4mol％)和碘化亚铜(426mg,12mol％)，氮气置换，在100℃下反应2小时。LCMS监测反应完全。过滤，滤液减压浓缩，旋干，柱层析纯化得产物10.1(2.8g，产率：68％)。LCMS ESI(+)m/z:219.1(M+1)。
步骤B：2-(4-(4-羟基丁基)苯基)乙酸甲酯(化合物10.2)
将化合物10.1(2.8g,12.8mmol)溶于20mL甲醇中，然后加入钯/碳(280mg,10％)，氢气置换三次，在40℃下反应过夜。LCMS监测反应完全。过滤，滤液减压浓缩，旋干，柱层析纯化得产物10.2(2.0g，产率：70％)。LCMS ESI(+)m/z:223.1(M+1)。
步骤C：2-(4-(4-((三异丙基甲硅烷基)氧基)丁基)苯基)乙酸甲酯(化合物10.3)
将化合物10.2(2.0g,9.0mmol)溶于10mL二氯甲烷中,然后加入2,6-二甲基吡啶(1.6mL,13.5mmol)和三异丙基硅基三氟甲磺酸酯(3.0mL,10.8mmol)在室温下反应过夜。TLC监测到原料反应完全。加入水淬灭反应，用二氯甲烷(50mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(100mLX3)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物10.3(3.4g,产率：100％)。
步骤D：3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-2-(4-(4-((三异丙基甲硅烷基)氧基)丁基)苯基)丙酸甲酯(化合物10.4)
将化合物10.3(3.4g,9.0mmol)溶于20mL无水四氢呋喃中,氮气置换，干冰丙酮降温至-78℃，缓慢滴加六甲基二硅基胺基锂(1.0M，10.8mL，10.8mmol),滴加完成后体系于-78℃搅拌1小时，将N-溴甲基邻苯二甲酰亚胺(2.6g,10.8mmol)溶于10mL四氢呋喃中，慢慢滴加到体系中，控制滴加温度低于-70℃，滴加结束后反应保持在-78℃下搅拌3小时，LCMS监测到原料反应完全。加入饱和的氯化铵溶液(10mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(50mLX3)萃取，饱和食盐水(100mL)洗涤。无水硫酸钠干燥，过滤、旋干，柱层析纯化得产物10.4(2.9g,产率：60％)。LCMS ESI(+)m/z：538.3(M+1)。
步骤E：2-((2-羧基-2-(4-(4-((三异丙基甲硅烷基)氧基)丁基)苯基)乙基)氨基甲酰基)苯甲酸(化合物10.5)
将化合物10.4(2.9g,5.4mmol)溶于10mL四氢呋喃和3mL水中,在0℃下加入氢氧化锂一水合物(680mg,16.2mmol)，于0℃下搅拌3小时，LCMS监测反应完全。减压蒸出有机溶剂，用1M的盐酸水溶液调pH至3-4，用乙酸乙酯萃取(50mLX3)，合并有机相，用饱和食盐水(100mLX3)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干得产物10.5(2.8g，产率：94％)。LCMSESI(+)m/z：542.3(M+1)。
步骤F：3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-2-(4-(4-((三异丙基甲硅烷基)氧基)丁基)苯基)丙酸(化合物10.6)
将化合物10.5(2.8g,5.1mmol)，1-羟基苯并三唑(688mg,5.1mmol)和三乙胺(2.1mL,15.3mmol)溶于10mL二氯甲烷中,氮气保护，降温至0℃，然后向反应液中加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(979mg,5.1mmol)，搅拌一段时间，反应液变澄清，缓慢升温至室温，反应过夜。LCMS监测反应完全。加水稀释反应液，用二氯甲烷(50mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(100mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物10.6(2.3g,产率：86％)。LCMS ESI(+)m/z：524.3(M+1)。
步骤G：3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)-2-(4-(4-((三异丙基硅基)氧基)丁基)苯基)丙酰胺(化合物10.7)
将化合物10.6(300mg,0.57mmol)溶于5mL的N，N-二甲基甲酰胺中，然后依次加入2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(327mg,0.86mmol)和N，N-二异丙基乙胺(147mg,1.1mmol)，在室温下搅拌5分钟，再加入化合物19.5(102mg,0.68mmol)，在室温下反应2小时。LCMS监测反应完全。反应完后加入水淬灭反应，用乙酸乙酯(20mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(50mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物10.7(373mg，产率：100％)。LCMS ESI(+)m/z:656.3(M+1)。
步骤H：3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-2-(4-(4-羟丁基)苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺(化合物10.8)
将化合物10.7(373mg,0.69mmol)溶于2mL四氢呋喃中，然后加入6mL盐酸水溶液(1.0M)中，40℃下反应过夜。LCMS监测反应完全。反应完后加入饱和碳酸氢钠溶液中和，然后用乙酸乙酯(20mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(50mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干得到粗产物10.8(270mg，产率：95％)。LCMS ESI(+)m/z:500.2(M+1)。
步骤I：4-(4-(3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-1-氧代-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苯基)丁基硝酸盐(化合物10.9)
将4滴硝酸和2滴乙酸酐溶于二氯甲烷中，在室温下搅拌10分钟，然后将化合物10.8(30mg,0.06mmol)的二氯甲烷溶液慢慢滴入到体系中，反应过程中化合物难溶，再在另一反应瓶中配置同样的硝酸和乙酸酐的二氯甲烷溶液，将不溶的反应液慢慢滴入，重复3-4次，直到化合物全部溶解。LCMS监测反应完全。反应完后加入水淬灭反应，然后用二氯甲烷(10mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(20mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、柱层析纯化得产物10.9(22mg，产率：67％)。LCMS ESI(+)m/z:545.1(M+1)。
步骤J：4-(4-(3-氨基-1-氧代-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苯基)丁基硝酸丁酯(化合物10)
将化合物10.9(22mg,0.04mmol)溶于1mL甲醇中，然后加入水合肼(20mg,0.40mmol)，在40℃下反应过夜，LCMS监测反应完全。反应完后加入水淬灭反应，然后用乙酸乙酯(10mLX3)萃取，合并有机相，减压浓缩，剩余物溶于2mL的甲醇中，过滤，滤液用反相制备纯化，冻干后得到目标产物实施例10(2mg，产率：10％)。LCMS ESI(+)m/z:415.1(M+1)。
实施例11
Figure BDA0002388977730000211
(S)-4-(3-氨基-1-氧代-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苯硝酸乙酯
具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0002388977730000212
步骤A：2-(4-乙烯基苯基)乙酸甲酯(化合物11.1)
将2-(4-溴苯基)乙酸甲酯(10g，43.65mmol)溶于200mL四氢呋喃和20mL水中，加入乙烯基三氟硼酸钾(7g，52.39mmol)，碳酸铯(28.6g，87.31mmol)和双(三苯基膦)氯化钯(600mg，0.87mmol),反应液在78度和氮气保护下搅拌16小时。将反应液冷却至室温，向反应液中加入水100mL，用乙酸乙酯(400mL)萃取2次，合并有机相，有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤2次，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化得到化合物11.1(5.6g，产率：73％，无色油状物)。
步骤B：2-(4-(2-羟乙基)苯基)乙酸(化合物11.2)
将化合物11.1(5.6g，31.78mmol)溶于50mL四氢呋喃中，冷却至0度，滴加10M的硼烷二甲硫醚溶液6.4mL。反应液在0度和氮气保护下搅拌1小时，然后在20度搅拌1小时。将反应液冷却至0度，滴加1M的氢氧化钠溶液和30％的双氧水56mL。反应液在0度搅拌0.5小时，然后在20度搅拌1小时。向反应液中加入饱和亚硫酸钠溶液400mL，然后用1M的盐酸溶液调节pH为2，用乙酸乙酯(500mL)萃取5次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化后得到化合物11.2(3.85g，收率：67％，白色固体)。
步骤C：2-(4-(2-羟乙基)苯基)乙酸甲酯(化合物11.3)
将化合物11.2(3.85g，21.37mmol)溶于45mL二氯甲烷和10mL甲醇中，冷却至0度，滴加2M的三甲基硅基重氮甲烷11.2mL，反应液在室温搅拌0.5小时。将反应液减压浓缩，柱层析纯化后得到化合物11.3(2.4g，收率：58％，无色油状物)。
步骤D：2-(4-(2-((三异丙基甲硅烷基)氧基)乙基)苯基)乙酸甲酯(化合物11.4)
将化合物11.3(2.4g，12.36mmol)溶于40mL二氯甲烷中，冷却至0度，加入2,6-二甲基吡啶(1.99g，18.54mmol)和三异丙基硅基三氟甲磺酸酯(4.56g，14.83mmol)，反应液在室温搅拌16小时。向反应液中加入水50mL，用二氯甲烷(80mL)萃取2次，分液合并有机相，有机相用饱和食盐水(30mL)洗涤1次，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化后得到化合物11.4(3.7g，收率：85％，无色油状物)。
步骤E：2-(4-(2-((三异丙基甲硅烷基)氧基)乙基)苯基)乙酸(化合物11.5)
将化合物11.4(3.7g，10.55mmol)溶解在15mL水，15mL甲醇和40mL四氢呋喃中，加入一水合氢氧化锂(1.33g,31.65mmol)，反应液在室温搅拌2小时。向反应液中加入1M的盐酸溶液至pH为3，用乙酸乙酯(100mL)萃取2次，合并有机相，用饱和食盐水(40mL)洗2次，无水硫酸钠干燥,过滤，减压浓缩得到产物11.5(3.43g,产率：97％，黄色固体)。
步骤F：2-(4-(2-((三异丙基甲硅烷基)氧基)乙基)苯基)乙酰氯(化合物11.6)
将化合物11.5(3.43g，10.19mmol)溶解在40mL二氯甲烷中，将反应液冷却至0度，在氮气保护下滴加草酰氯(1.55g，12.23mmol),反应液在室温搅拌12小时。将反应液减压浓缩得到产物11.6(3.62g，产率：100％，黄色油状物)。
步骤G：(R)-4-苄基-3-(2-(4-(2-((三异丙基硅基)氧基)乙基)苯基)乙酰基)恶唑烷-2-酮(化合物11.7)
将(R)-4-苄基恶唑烷-2-酮(1.72g，9.69mmol)溶解在30mL四氢呋喃中，将反应液冷却至-78度，在氮气保护下，滴加2.5M的正丁基锂(4.28mL，10.71mmol)，反应液在-78度搅拌1小时。然后向反应液中滴加化合物11.6(3.62g，10.20mmol)的四氢呋喃溶液15mL。反应液在-78度搅拌2.5小时。向反应液中加入氯化铵溶液30mL，用乙酸乙酯(150mL)萃取2次，合并有机相，用饱和食盐水(50mL)洗2次，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，剩余物用柱层析纯化得到产物11.7(3.15g，产率：62％，无色油状物)。LCMS ESI(+)m/z：496.3(M+1).
步骤H：2-((R)-3-((R)-4-苄基-2-氧代恶唑烷-3-基)-3-氧代-2-(4-(2-((三异丙基硅基)氧基)乙基)苯基)丙基)异吲哚-1,3-二酮(化合物11.8)
在零下78摄氏度下，将化合物11.7(3.15g，6.35mmol)溶于30mL无水四氢呋喃中，然后慢慢滴入双三甲基硅基胺基锂(7.63mL，7.63mmol)到反应液里，在此温度下搅拌1小时，紧接着将称量好的N-溴甲基邻苯二甲酰亚胺(1.83g，7.63mmol)溶解于无水四氢呋喃(20mL)后慢慢滴加到反应瓶中，之后在此温度下搅拌2小时。用氯化铵饱和溶液对反应进行淬灭，乙酸乙酯(200mL)萃取2次，分液合并有机相，有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤2次，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化后得到化合物11.8(2g，收率：48％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z:655.3(M+1).
步骤I：(R)-2-((2-羧基-2-(4-(2-((三异丙基甲硅烷基)氧基)乙基)苯基)乙基)氨基甲酰基)苯甲酸(化合物11.9)
将化合物11.8(2g，3.05mmol)溶于25mL甲醇和25mL四氢呋喃中，然后将一水合氢氧化锂(385mg，9.16mmol)溶于水(20mL)里滴入到反应液中，在室温搅拌3小时。向反应液中加入水60mL，水相用乙酸乙酯(40mL)洗2次，然后用1M的盐酸溶液调节pH为4，用乙酸乙酯(100mL)萃取2次，分液合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干后得到化合物11.9(980mg，收率：62％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z:514.2(M+1).
步骤J：(R)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-2-(4-(2-((三异丙基甲硅烷基)氧基)乙基)苯基)丙酸(化合物11.10)
将化合物11.9(980mg，1.91mmol)溶解在30mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(548mg，2.86mmol)，1-羟基苯并三唑(387mg，2.86mmol)和三乙胺(577mg，5.72mmol)，反应液在室温搅拌12小时。将反应液用1M盐酸溶液调节pH至4，用乙酸乙酯(60mL)萃取2次，合并有机相，用饱和食盐水(30mL)洗3次，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，剩余物用柱层析纯化得到产物11.10(840mg，产率：89％，黄色油状物)。LCMS ESI(+)m/z：496.2(M+1).
步骤K：(S)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)-2-(4-(2-((三异丙基甲硅烷基)氧基))乙基)苯基)丙酰胺(化合物11.11)
将化合物11.10(840mg，1.69mmol)溶解在30mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入二异丙基乙胺(438mg，3.39mmol)，2-(7-氧化苯并三氮唑)-N，N，N”，N'-四甲基脲六氟磷酸盐(967mg，2.54mmol)和噻吩并[2,3-c]吡啶-2-胺(305mg，2.03mmol)。反应液在室温搅拌2小时。向反应液中加入水30mL，用乙酸乙酯(50mL)萃取2次，合并有机相，用饱和食盐水(30mL)洗2次，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，剩余物用柱层析纯化得到产物11.11(580mg，产率：55％，黄色固体)。LCMS ESI(+)m/z：628.3(M+1).
步骤L：(S)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-2-(4-(2-羟乙基)苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺(化合物11.12)
将化合物11.11(580mg，0.92mmol)溶解在50mL四氢呋喃中，加入1.5M的盐酸水溶液20mL，反应液在40度搅拌2小时。将反应液冷却至室温，用饱和碳酸氢钠溶液调节pH至8，用乙酸乙酯(100mL)萃取2次，合并有机相，用饱和食盐水(30mL)洗3次，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，剩余物用柱层析纯化得到产物11.12(350mg，产率：80％，黄色固体)。LCMSESI(+)m/z：472.1(M+1).
步骤M：(S)-4-(3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-1-氧代-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苯硝酸乙酯(化合物11.13)
将2mL硝酸溶液加入到50mL二氯甲烷中，反应液冷却至0度，滴加硫酸0.5mL，反应液在0度搅拌1小时。向反应液中滴加化合物11.12(250mg，0.53mmol)的10mL二氯甲烷悬浊液。反应液在40度搅拌8小时。向反应液中加入饱和碳酸氢钠溶液调节pH为8，用二氯甲烷(80mL)萃取2次，合并有机相，用饱和食盐水(30mL)洗2次，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，剩余物用柱层析纯化得到产物11.13(250mg,产率：92％，黄色固体)。LCMS ESI(+)m/z：517.1(M+1).
步骤N：(S)-4-(3-氨基-1-氧代-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苯硝酸乙酯(化合物11)
将化合物11.13(250mg，0.48mmol)溶解在35mL乙醇中，加入水合肼(243mg，4.80mmol)，反应液在50度和氮气保护下搅拌5小时。向反应液中加入70mL水，用乙酸乙酯(100mL)萃取2次，合并有机相，用饱和食盐水(40mL)洗2次，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，剩余物用反向制备纯化得到产物11(88mg，产率：47％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z：387.1(M+1).1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.75(s,1H),9.43(s,1H),8.52(d,J＝6.4Hz,1H),8.07(d,J＝6.4Hz,1H),8.01(s,2H),7.35(s,4H),7.26(s,1H),4.74(t,J＝6.8Hz,2H),4.21(dd,J＝5.4,8.8Hz,1H),3.61(s,1H),3.18(s,1H),3.00(t,J＝6.8Hz,2H)
实施例12
Figure BDA0002388977730000231
(S)-4-(3-氨基-1-((4-氟噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)苄基硝酸酯
具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0002388977730000232
步骤A：(S)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-N-(4-氟噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)-2-(4-(((三异丙基甲硅烷基))氧基)甲基)苯基)丙酰胺(化合物12.1)
将化合物1.9(400mg，0.83mmol)溶于6mL的N,N-二甲基甲酰胺中，然后加入50％1-丙基磷酸酐的N,N-二甲基甲酰胺溶液(793mg，1.24mmol)、N,N-二异丙基乙胺(214mg，1.66mmol)和4-氟噻吩并[2,3-c]吡啶-2-胺(154mg，0.92mmol)，将反应常温搅拌2小时。通过LCMS确认反应完全。加水到反应瓶中，用乙酸乙酯(10mLX2)萃取，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，柱层析纯化后得到白色固体12.1(300mg，收率：57％)。LCMS ESI(+)m/z:632.2(M+1).
步骤B：(S)-3-氨基-N-(4-氟噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)-2-(4-(((三异丙基甲硅烷基)氧基)甲基)苯基)丙酰胺(化合物12.2)
将化合物12.1(1.1g，1.74mmol)溶于乙醇(12mL)中，然后加入水合肼(870mg，17.4mmo)到反应液中，反应在惰性气体氛围下55摄氏度搅拌2小时。LCMS确认反应完全，反应液用真空泵浓缩旋干，剩余物溶于乙酸乙酯中，然后有机相用水和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，真空浓缩后得到淡黄色固体产物12.2(580mg，收率：66％)。LCMS ESI(+)m/z:502.2(M+1).
步骤C：(S)-烯丙基(3-((4-氟噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)氨基)-3-氧代-2-(4-(((三异丙基甲硅烷基)氧基)甲基)苯基)丙基)氨基甲酸酯(化合物12.3)
将化合物12.2(580mg，1.16mmol)溶于二氯甲烷(10mL)中，然后将称量好的N,N-二异丙基乙胺(194mg，1.51mmol)和氯甲酸烯丙酯(167mg，1.39mmol)加入反应瓶中，反应度常温搅拌1小时。LCMS确认反应完全。用二氯甲烷稀释反应液，之后用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，经柱层析纯化后得到淡黄色固体12.3(520mg，收率：77％)。LCMS ESI(+)m/z:586.3(M+1).
步骤D：(S)-烯丙基(3-((4-氟噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)氨基)-2-(4-(羟甲基)苯基)-3-氧代丙基)氨基甲酸酯(化合物12.4)
将化合物12.3(520mg，0.89mmol)溶于四氢呋喃(10mL)和甲醇(1mL)中，然后将1.5mol/L的稀盐酸(6mL)加入反应瓶中，将反应置于60摄氏度的油浴中搅拌2小时。LCMS确认反应完全。将饱和的碳酸氢钠溶液加入到反应瓶中，然后用乙酸乙酯(12mL)萃取，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，真空浓缩后粗品用甲基叔丁基醚打浆，得到粗品白色固体12.4(400mg，收率：100％)。LCMS ESI(+)m/z:430.1(M+1).
步骤E：(S)-烯丙基(3-((4-氟噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)氨基)-2-(4-((硝基氧基)甲基)苯基)-3-氧代丙基)氨基甲酸酯(化合物12.5)
将乙酸酐(15滴)和浓硝酸(30滴)溶于50mL二氯甲烷中，反应液常温搅拌20分钟，然后将化合物12.4(320mg，0.75mmol)加入反应液中，常温下继续搅拌50分钟。LCMS检测到反应完全，将饱和碳酸氢钠溶液加到反应瓶中，用二氯甲烷(15mL)萃取，饱和食盐水洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥。过滤、旋干，剩余物经柱层析纯化后得到白色固体12.5(123mg，收率：35％)。LCMS ESI(+)m/z:475.1(M+1).
步骤F：(S)-4-(3-氨基-1-((4-氟噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)氨基)-1-氧代丙-2-基)苄基硝酸酯(化合物12)
将化合物12.5(123mg，0.26mmol)溶于8mL的二氯甲烷中，然后加入四(三苯基膦)钯(30mg，0.026mmol)和1,3-二甲基巴比妥酸(44.6mg，0.286mmol)到反应液中，常温搅拌1小时。LCMS检测反应完全。加饱和的碳酸氢钠溶液到反应瓶中，用二氯甲烷(12mL)萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，旋干，剩余物经反向制备，冻干后得到白色固体12(65mg，收率：50％，纯度：98％)。LCMS ESI(+)m/z:391.1(M+1).
实施例13
Figure BDA0002388977730000251
(S)-4-(3-氨基-1-氧代-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基(4-(硝基氧基)丁基)碳酸酯
具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0002388977730000252
步骤A：(S)-4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丁基4-(3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-1-氧代-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2)-氨基)丙-2-基)碳酸苄酯(化合物13.1)
在冰浴下，将4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)丁-1-醇(100mg，0.49mmol)溶于二氯甲烷(8mL)中，然后加入三光气(87mg，0.29mmol)和吡啶(46mg，0.59mmol)到反应液中，然后常温搅拌3小时。再将化合物1.11(40mg，0.088mmol)和吡啶(7mg，0.096mmol)加入到反应瓶中，常温搅拌过夜。LCMS确认反应完全，反应液用二氯甲烷稀释，依次用饱和碳酸氢钠、0.5mol/L的稀盐酸和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，经柱层析纯化后得到淡黄色油状产物13.1(25mg，收率：42％)。LCMS ESI(+)m/z:688.2(M+1).
步骤B：(S)-4-(3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-1-氧代-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基(4-羟基丁基)碳酸酯(13.2)
将化合物13.1(25mg，0.036mmol)溶于四氢呋喃(5mL)和甲醇(1mL)中，然后将4mol/L的盐酸-二氧六环溶液(0.1mL)加入反应瓶中，反应常温搅拌10分钟。LCMS确认反应完全,反应液真空浓缩后得到粗品白色固体13.2(15mg，收率：72％)。LCMS ESI(+)m/z:574.2(M+1).
步骤C：(S)-4-(3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-1-氧代-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基(4-(硝基氧基)丁基)碳酸酯(化合物13.3)
将乙酸酐(1滴)和浓硝酸(2滴)溶于二氯甲烷(10mL)中，反应液常温搅拌20分钟，然后将化合物13.2(15mg，0.026mmol)加入反应瓶中，反应继续在常温搅拌20分钟。通过LCMS确认反应完全,将饱和的碳酸氢钠溶液加入到反应瓶中，然后用二氯甲烷(10mL)萃取，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，经柱层析化后得到淡黄色油状产物13.3(5mg，收率：31％)。LCMS ESI(+)m/z:619.1(M+1).
步骤D：(S)-4-(3-氨基-1-氧代-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基(4-(硝基氧基)丁基)碳酸酯(化合物13)
将化合物13.3(5mg，0.008mmol)溶于乙醇(5mL)中，然后加入水合肼(1滴)到反应液中，反应在惰性气体氛围下55摄氏度搅拌1.5小时。通过LCMS确认反应完全。水被加入到反应液里，用乙酸乙酯(10mL)进行萃取，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩旋干，残渣溶于甲醇(1mL)，反向制备纯化后得到白色固体实施例13(1.5mg(三氟乙酸盐)，收率：31％，纯度：95％)。LCMS ESI(+)m/z:489.1(M+1).
实施例14
Figure BDA0002388977730000261
2-(4-(3-氨基-1-氧代-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苯氧基)丙烷-1,3-二硝酸酯具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0002388977730000262
步骤A：2-(4-(3-(((烯丙氧基)羰基)氨基)-1-氧代-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苯氧基)丙二酸二甲酯(化合物14.1)
将化合物7.8(500mg，1.26mmol)溶解在20mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入2-溴丙二酸二甲酯(319mg,1.51mmol)和碳酸钾(260mg,1.89mmol)，反应液在50度搅拌1.5小时。向反应液中加入水25mL，用乙酸乙酯(80mL)萃取2次，合并有机相，用饱和食盐水(40mL)洗2次，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，剩余物用柱层析纯化得到产物14.1(250mg,产率：38％，黄色油状物)。LCMS ESI(+)m/z：528.1(M+1).
步骤B：烯丙基(2-(4-((1,3-二羟基丙烷-2-基)氧基)苯基)-3-氧代-3-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙基)氨基甲酸酯(化合物14.2)
将化合物14.1(250mg，0.47mmol)溶解在15mL四氢呋喃中，反应液冷却至0度，分批加入硼氢化钠(107mg，2.84mol)，反应液在0度搅拌20分钟，滴加甲醇15mL，反应液在室温搅拌1小时。向反应液加入硼氢化锂(100mg，4.70mmol)，反应液在50度搅拌3小时。向反应液加入1M盐酸溶液至pH为6，将反应液减压浓缩，剩余物用反向制备纯化得到产物14.2(130mg，产率：58％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z：472.1(M+1).
步骤C：烯丙基(2-(4-((1,3-双(硝基氧基)丙-2-基)氧基)苯基)-3-氧代-3-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙基)氨基甲酸酯(化合物14.3)
将3mL硝酸溶液加入到100mL二氯甲烷中，反应液冷却至0度，滴加硫酸0.7mL，反应液在0度搅拌1小时。向反应液中加入化合物14.2(130mg，0.27mmol)，反应液在40度搅拌4小时。向反应液中加入饱和碳酸氢钠溶液调节pH为8，用二氯甲烷(80mL)萃取2次，合并有机相，用饱和食盐水(30mL)洗2次，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，剩余物用柱层析纯化得到产物14.3(8mg,产率：5％，黄色固体)。LCMS ESI(+)m/z：562.1(M+1).
步骤D：2-(4-(3-氨基-1-氧代-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苯氧基)丙烷-1,3-二硝酸酯(化合物14)
将化合物14.3(8mg，0.01mmol)溶解在8mL二氯甲烷中，加入1,3-二甲基嘧啶-2,4,6(1H，3H，5H)-三酮(2.7mg，0.02mmol)和四三苯基膦钯(2mg，0.002mmol)，反应液在室温和氮气保护下搅拌0.5小时。将反应液减压浓缩，剩余物用反向制备纯化得到实施例14(6.5mg，产率：96％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z：478.1(M+1).
实施例15
Figure BDA0002388977730000271
(S)-4-(3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基4-(硝基氧基)环己烷-1-甲酸
具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0002388977730000272
步骤A：(S)-3-氨基-2-(4-(羟甲基)苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺(化合物15.1)
将化合物1.11(6g，13.13mmol)溶于乙醇(130mL)和N,N-二甲基甲酰胺(25mL)中，然后加水合肼(6.56g，131.3mmol)到反应液中，反应在60度搅拌3小时。LCMS确认反应完全，反应液冷却到室温后硅藻土过滤，滤液真空浓缩旋干，得到粗品化合物15.1(5g)。LCMS ESI(+)m/z:328.1(M+1).
步骤B：(S)-叔丁基(2-(4-(羟甲基)苯基)-3-氧代-3-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙基)氨基甲酸酯(化合物15.2)
将粗品化合物15.1(5g，15.3mmol)溶于60mL的N,N-二甲基甲酰胺中，加入三乙胺(6.18g，61.2mmol)和二碳酸二叔丁酯(6.67g，30.6mmol)，反应在常温搅拌0.5小时。通过LCMS确认反应完全，加水到反应液里，用乙酸乙酯(35mL)萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤、浓缩旋干，剩余物经硅胶柱纯化后得到淡黄色固体产物15.2(3.5g，纯度：97％)。LCMS ESI(+)m/z:428.1(M+1).
步骤C：4-(硝基氧基)环己烷-1-羧酸(化合物15.3)
将4-羟基环己烷-1-羧酸(200mg,1.39mmol)溶于1mL的乙酸酐中，冰水浴下加入浓硝酸和乙酸酐的混酸溶液(0.2mL硝酸,0.4mL醋酸酐)，在0℃下搅拌1小时，TLC监测反应完全。待反应完后，加入20mL水淬灭反应，用乙酸乙酯(10mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(10mLX2)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物15.3(210mg，产率：80％)。
步骤D：(S)-4-(3-((叔丁氧羰基)氨基)-1-氧代-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基4-(硝基氧基))-1-羧酸环己烷(化合物15.4)
将化合物15.2(100mg,0.23mmol)和化合物15.3(49mg,0.26mmol)溶于3mL的N，N-二甲基甲酰胺中，然后加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(68mg,0.35mmol)和4-二甲氨基吡啶(28mg,0.23mmol)，在室温下反应过夜。TLC监测反应完全,加水淬灭反应，用乙酸乙酯(20mLX2)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(10mLX2)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物15.4(127mg，产率：91％)。
步骤E：(S)-4-(3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基4-(硝基氧基)环己烷-1-甲酸(化合物15)
将化合物15.4(127mg,0.215mmol)溶于5mL的甲醇中，加入2mL盐酸甲醇溶液(4M)，在室温下搅拌1小时，然后将体系升温至50℃反应1小时，TLC监测反应完全。待反应完后，减压浓缩反应液，剩余物溶于5mL的甲醇和水溶液中，过滤，滤液用反相制备纯化，冻干后得到目标产物实施例15(19mg，产率：18％，纯度：97％)。LCMS ESI(+)m/z:499.2(M+1).1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.36(d,J＝10.0Hz,1H),9.46(s,1H),8.52(d,J＝6.5Hz,1H),8.12–8.06(m,1H),7.48(d,J＝8.2Hz,2H),7.39(d,J＝8.6Hz,3H),5.17(s,1H),5.08(d,J＝3.9Hz,2H),5.05–4.88(m,1H),4.54–4.30(m,1H),3.63(s,1H),3.18(s,2H),2.02(dd,J＝21.9,11.0Hz,3H),1.93–1.68(m,2H),1.68–1.33(m,4H).
实施例16
Figure BDA0002388977730000281
(S)-4-(3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基4-(2-(硝基氧基)乙基)苯甲酸酯
具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0002388977730000282
步骤A：(4-溴苯乙氧基)(叔丁基)二甲基硅烷(化合物16.1)
将4-溴苯乙醇(2g,9.95mmol)和咪唑(1.7g,25mmol)溶于20mL的N，N-二甲基甲酰胺中，在冰水浴下分批加入叔丁基二甲基氯硅烷(3g,19.9mmol),然后该体系在室温下搅拌2小时。TLC监测反应完全。待反应完后，加水淬灭反应，用乙酸乙酯(30mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(40mLX2)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物16.1(2.82g，产率：90％)。
步骤B：4-(2-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙基)苯甲酸甲酯(化合物16.2)
将化合物16.1(2.82g,8.95mmol)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(659mg,0.1mmol)溶于30mL的N，N-二甲基甲酰胺和90mL的甲醇混合溶剂中，然后加入10mL三乙胺，该体系在80℃和CO氛围下反应过夜。LCMS监测反应完全。待反应完后，加水淬灭反应，用乙酸乙酯(40mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(40mLX2)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥，过滤、旋干，柱层析纯化得产物16.2(1.84g，产率：70％)。
步骤C：4-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙基)苯甲酸(化合物16.3)
将化合物16.2(736mg,2.5mmol)溶于5mL的甲醇中，然后加入一水氢氧化锂(315mg,7.5mmol)，在室温下反应过夜。LCMS监测反应完全。待反应完后，加水淬灭反应，用6N的盐酸水溶液调节pH至3并搅拌半小时，再用乙酸乙酯(30mLX2)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(20mLX2)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥，过滤、旋干，柱层析纯化得产物16.3(254mg，产率：61％)。
步骤D：4-(2-(硝基氧基)乙基)苯甲酸(化合物16.4)
将化合物16.3(100mg,0.6mmol)溶于3mL的二氯甲烷中，在冰水浴下加入浓硝酸和浓硫酸的混合酸溶液(0.4mL的浓硝酸,0.1mL的浓硫酸)，然后在室温下反应2小时。TLC监测反应完全。待反应完后，加水淬灭反应，用二氯甲烷(15mLX2)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(10mLX2)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物16.4(92mg，产率：73％)。
步骤E：(S)-4-(3-((叔丁氧羰基)氨基)-1-氧代-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙烷-2-基)苄基4-(2-(硝基氧基)乙基)苯甲酸酯(化合物16.5)
将化合物15.2(100mg,0.234mmol)和化合物16.4(55mg,0.258mmol)溶于3mL的N，N-二甲基甲酰胺中，然后加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(67mg,0.351mmol)和4-二甲氨基吡啶(28mg,0.234mmol)，在室温下反应过夜。TLC监测反应完全。加入水淬灭反应，用乙酸乙酯(20mLX2)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(20mLX2)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物16.5(117mg，产率：81％)。
步骤F：(S)-4-(3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基4-(2-(硝基氧基)乙基)苯甲酸酯(化合物16)
将化合物16.5(117mg,0.19mmol)溶于5mL的甲醇中，加入1.5mL盐酸甲醇溶液(4M)，先在室温下搅拌1小时，然后将体系升温至50℃反应1小时，TLC监测反应完全。待反应完后，减压浓缩反应液，剩余物溶于5mL的甲醇和水溶液中，过滤，滤液用反相制备纯化，冻干后得到目标产物实施例16(83mg，产率：84％，纯度：94％)。LCMS ESI(+)m/z:521.2(M+1).1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.47(s,1H),8.52(d,J＝6.4Hz,1H),8.22(s,3H),8.14(d,J＝6.4Hz,1H),7.93(d,J＝8.4Hz,2H),7.51(d,J＝3.2Hz,3H),7.44(d,J＝8.4Hz,2H),7.39(s,1H),5.33(s,2H),4.78(t,J＝6.4Hz,2H),4.48(dd,J＝8.4,5.6Hz,1H),3.64(s,1H),3.18(d,J＝6.0Hz,1H),3.09(t,J＝6.4Hz,2H).
实施例17
Figure BDA0002388977730000291
(S)-4-(3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基2-甲基-4-(2-(硝基氧基))乙基)苯甲酸酯
具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0002388977730000292
步骤A：2-甲基-4-乙烯基苯甲酸甲酯(化合物17.1)
将4-溴-2-甲基苯甲酸甲酯(2g,8.73mmol)溶于40mL四氢呋喃和4mL水中，加入乙烯基三氟硼酸钾(1.4g，10.48mmol)，碳酸铯(5.7g，17.46mmol)和双(三苯基膦)氯化钯(122mg，0.17mmol),反应液在78度和氮气保护下搅拌16小时。将反应液冷却至室温，向反应液中加入水50mL，用乙酸乙酯(60mLX2)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(30mLX2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化得到化合物17.1(1.3g，产率：85％，黄色油状物)。
步骤B：4-(2-羟乙基)-2-甲基苯甲酸甲酯(化合物17.2)
将化合物17.1(1.3g，7.39mmol)溶于10mL四氢呋喃中，冷却至0度，滴加10M的硼烷二甲硫醚溶液2.2mL。反应液在0度和氮气保护下搅拌1小时，然后在20度搅拌1小时。将反应液冷却至0度，先后滴加2M的氢氧化钠溶液10mL和30％的双氧水2.5mL。反应液在0度搅拌0.5小时，然后在20度搅拌1小时。向反应液中加入饱和亚硫酸钠溶液100mL，然后用2M的盐酸溶液调节pH为2，用乙酸乙酯(100mLX3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化后得到化合物17.2(0.61g，收率：42％，无色液体)。
步骤C：4-(2-羟乙基)-2-甲基苯甲酸(化合物17.3)
将化合物17.2(610mg,3.14mmol)溶于6mL的甲醇中，然后加入2M的氢氧化钠溶液5mL，搅拌回流4小时。LCMS监测反应完全。待反应完后，加水淬灭反应，用6N的盐酸水溶液调节pH至3并搅拌半小时，再用乙酸乙酯(30mLX2)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(20mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物17.3(509mg，产率：90％，白色固体)。
步骤D：2-甲基-4-(2-(硝基氧基)乙基)苯甲酸(化合物17.4)
将化合物17.3(200mg,1.11mmol)溶于5mL的二氯甲烷中，在冰水浴下加入浓硝酸和浓硫酸的混合酸溶液(1.4mL的浓硝酸,0.35mL的浓硫酸)，然后在室温下反应5小时。TLC监测反应完全。待反应完后，加水淬灭反应，用乙酸乙酯(15mLX2)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(10mLX2)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物17.4(192mg，产率：77％，白色固体)。
步骤E：(S)-4-(3-((叔丁氧羰基)氨基)-1-氧代-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基2-甲基-4-(2-(硝基氧基)乙基)苯甲酸酯(化合物17.5)
将化合物15.2(100mg,0.234mmol)和化合物17.4(58mg,0.258mmol)溶于3mL的N，N-二甲基甲酰胺中，然后加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(68mg,0.351mmol)和4-二甲氨基吡啶(28mg,0.234mmol)，在室温下反应过夜。TLC监测反应完全。加入水淬灭反应，用乙酸乙酯(20mLX2)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(20mLX2)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物17.5(115mg，产率：78％，淡黄色固体)。
步骤F：(S)-4-(3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基2-甲基-4-(2-(硝基氧基))乙基)苯甲酸酯(化合物17)
将化合物17.5(98mg,0.15mmol)溶于1mL的甲醇中，加入3mL盐酸甲醇溶液(4M)，室温下搅拌2小时，TLC监测反应完全。待反应完后，减压浓缩反应液，剩余物溶于5mL的甲醇和水溶液中，过滤，滤液用反相制备纯化，冻干后得到目标产物化合物17(72mg，产率：90％，纯度：98.8％)。LCMS ESI(+)m/z:535.2(M+1).1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.52(s,1H),9.48(s,1H),8.52(d,J＝6.4Hz,1H),8.24(s,3H),8.15(d,J＝6.4Hz,1H),7.82(d,J＝8.0Hz,1H),7.51(q,J＝8.4Hz,4H),7.41(s,1H),7.26(s,1H),7.23(d,J＝8.0Hz,1H),5.30(s,2H),4.76(t,J＝6.4Hz,2H),4.50(dd,J＝8.4,5.5Hz,1H),3.65(s,1H),3.18(d,J＝6.4Hz,1H),3.02(t,J＝6.4Hz,2H),2.50(s,3H).
实施例18
Figure BDA0002388977730000301
(S)-4-(3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基2-甲基-5-(2-(硝基氧基))乙基)苯甲酸酯
具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0002388977730000311
步骤A：2-甲基-5-乙烯基苯甲酸甲酯(化合物18.1)
将5-溴-2-甲基苯甲酸甲酯(2g,8.73mmol)溶于40mL四氢呋喃和4mL水中，加入乙烯基三氟硼酸钾(1.4g，10.48mmol)，碳酸铯(5.7g，17.46mmol)和双(三苯基膦)氯化钯(122mg，0.17mmol),反应液在78度和氮气保护下搅拌16小时。将反应液冷却至室温，向反应液中加入水50mL，用乙酸乙酯(60mLX2)萃取，合并有机相，有机相用饱和食盐水(30mLX2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化得到化合物18.1(1.13g，产率：74％，黄色油状物)。
步骤B：5-(2-羟乙基)-2-甲基苯甲酸甲酯(化合物18.2)
将化合物18.1(1.13g，6.42mmol)溶于10mL四氢呋喃中，冷却至0度，滴加10M的硼烷二甲硫醚溶液2.2mL。反应液在0度和氮气保护下搅拌1小时，然后在20度搅拌1小时。将反应液冷却至0度，先后滴加2M的氢氧化钠溶液10mL和30％的双氧水2.5mL。反应液在0度搅拌0.5小时，然后在20度搅拌1小时。向反应液中加入饱和亚硫酸钠溶液100mL，然后用2M的盐酸溶液调节pH为2，用乙酸乙酯(100mLX3)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化后得到化合物18.2(0.62g，收率：50％，无色液体)。
步骤C：5-(2-羟乙基)-2-甲基苯甲酸(化合物18.3)
将化合物18.2(620mg,3.20mmol)溶于6mL的甲醇中，然后加入2M的氢氧化钠溶液5mL，搅拌回流4小时。LCMS监测反应完全。待反应完后，加水淬灭反应，用6N的盐酸水溶液调节pH至3并搅拌半小时，再用乙酸乙酯(30mLX2)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(20mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干得产物18.3(570mg，产率：99％，白色固体)。
步骤D：2-甲基-5-(2-(硝基氧基)乙基)苯甲酸(化合物18.4)
将化合物18.3(200mg,1.11mmol)溶于5mL的二氯甲烷中，在冰水浴下加入浓硝酸和浓硫酸的混合酸溶液(1.4mL的浓硝酸,0.35mL的浓硫酸)，然后在室温下反应5小时。TLC监测反应完全。待反应完后，加水淬灭反应，用乙酸乙酯(15mLX2)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(10mLX2)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物18.4(191mg，产率：76％，淡黄色固体)。
步骤E：(S)-4-(3-((叔丁氧羰基)氨基)-1-氧代-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基2-甲基-5-(2-(硝基氧基)乙基)苯甲酸酯(化合物18.5)
将化合物15.2(100mg,0.234mmol)和化合物18.4(58mg,0.258mmol)溶于3mL的N，N-二甲基甲酰胺中，然后加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(68mg,0.351mmol)和4-二甲氨基吡啶(28mg,0.234mmol)，在室温下反应过夜。TLC监测反应完全。加入水淬灭反应，用乙酸乙酯(20mLX2)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(20mLX2)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物18.5(88mg，产率：59％，淡黄色固体)。
步骤F：(S)-4-(3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基2-甲基-5-(2-(硝基氧基))乙基)苯甲酸酯(化合物18)
将化合物18.5(88mg,0.14mmol)溶于1mL的甲醇中，加入3mL盐酸甲醇溶液(4M)，室温下搅拌2小时，TLC监测反应完全。待反应完后，减压浓缩反应液，剩余物溶于5mL的甲醇和水溶液中，过滤，滤液用反相制备纯化，冻干后得到目标产物化合物18(64mg，产率：86％，纯度：97％)。LCMS ESI(+)m/z:535.2(M+1).1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.54(s,1H),9.48(s,1H),8.52(d,J＝6.4Hz,1H),8.26(s,3H),8.15(d,J＝6.4Hz,1H),7.76(d,J＝1.6Hz,1H),7.52(q,J＝8.4Hz,4H),7.46–7.35(m,2H),7.28(d,J＝7.6Hz,1H),5.32(s,2H),4.72(t,J＝6.4Hz,2H),4.51(dd,J＝8.4,5.4Hz,1H),3.65(s,1H),3.17(d,J＝6.0Hz,1H),3.01(t,J＝6.4Hz,2H),2.48(s,3H).
实施例19
Figure BDA0002388977730000321
4-((S)-3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基(1s，4R)-4-(硝基氧基)环己烷-1-羧酸盐
具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0002388977730000322
步骤A：(1s，4s)-4-(硝基氧基)环己烷-1-甲酸(化合物19.1)
将化合物(1s，4s)-4-羟基环己烷-1-羧酸(200mg,1.39mmol)溶于1.5mL的乙酸酐中，冰水浴下加入浓硝酸和乙酸酐的混酸溶液(0.8mL硝酸,1.6mL醋酸酐)，在0℃下搅拌4小时，TLC监测反应完全。待反应完后，加入30mL乙酸乙酯稀释，将反应液先后用水(10mLX3)和饱和食盐水(10mLX2)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物19.1(220mg，产率：90％，白色固体)。
步骤B：4-((S)-3-((叔丁氧羰基)氨基)-1-氧代-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基(1s，4R)-4-(硝基氧基)环己烷-1-甲酸(化合物19.2)
将化合物15.2(100mg,0.234mmol)和化合物19.1(50mg,0.257mmol)溶于3mL的N，N-二甲基甲酰胺中，然后加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(68mg,0.351mmol)和4-二甲氨基吡啶(28mg,0.234mmol)，在室温下反应过夜。TLC监测反应完全。加入水淬灭反应，用乙酸乙酯(20mLX2)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(10mLX2)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物19.2(72mg，产率：51％)。
步骤C：4-((S)-3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基(1s，4R)-4-(硝基氧基)环己烷-1-羧酸盐(化合物19)
将化合物19.2(72mg,0.12mmol)溶于3mL的二氯甲烷中，加入2mL三氟乙酸，在室温下搅拌2小时，TLC监测反应完全。待反应完后，加入饱和碳酸氢钠(40mL)淬灭反应，用二氯甲烷(20mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(30mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干。将剩余物溶于10mL的乙酸乙酯中，加入0.2mL氯化氢乙酸乙酯溶液(2M)并搅拌1小时，真空旋干溶剂，固体用乙酸乙酯和甲醇的混合溶液打浆、过滤。滤饼用超纯水溶解、过滤，用反相制备纯化，冻干后得到目标产物实施例19(54mg，产率：90％，纯度：98％)。LCMSESI(+)m/z:499.2(M+1)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.50(s,1H),9.47(s,1H),8.52(d,J＝6.4Hz,1H),8.23(s,3H),8.14(d,J＝6.4Hz,1H),7.50(d,J＝8.4Hz,2H),7.45–7.23(m,3H),5.17(s,1H),5.09(s,2H),4.48(dd,J＝8.4,5.6Hz,1H),3.64(s,1H),3.64(s,1H),3.24–3.04(m,1H),3.21–3.02(m,1H),2.58–2.52(m,1H),1.90–1.81(m,2H),1.81–1.71(m,4H),1.69–1.57(m,2H).
实施例20
Figure BDA0002388977730000331
4-((S)-3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基(1r，4S)-4-(硝基氧基)环己烷-1-羧酸盐
具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0002388977730000332
步骤A：(1r，4r)-4-(硝基氧基)环己烷-1-甲酸(化合物20.1)
将化合物(1r，4r)-4-羟基环己烷-1-羧酸(200mg,1.39mmol)溶于1.5mL的乙酸酐中，冰水浴下加入浓硝酸和乙酸酐的混酸溶液(0.8mL硝酸,1.6mL醋酸酐)，在0℃下搅拌4小时，TLC监测反应完全。待反应完后，加入30mL乙酸乙酯稀释，将反应液先后用水(10mLX3)和饱和食盐水(10mLX2)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物20.1(210mg，产率：80％，白色固体)。
步骤B：4-((S)-3-((叔丁氧羰基)氨基)-1-氧代-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基(1r，4S)-4-(硝基氧基)环己烷-1-甲酸(化合物20.2)
将化合物15.2(100mg,0.234mmol)和化合物20.1(50mg,0.257mmol)溶于3mL的N，N-二甲基甲酰胺中，然后加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(68mg,0.351mmol)和4-二甲氨基吡啶(28mg,0.234mmol)，在室温下反应过夜。TLC监测反应完全。加入水淬灭反应，用乙酸乙酯(30mLX2)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(10mLX2)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物20.2(126mg，产率：90％，淡黄色固体)。
步骤C：4-((S)-3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基(1r，4S)-4-(硝基氧基)环己烷-1-羧酸盐(化合物20)
将化合物20.2(126mg,0.21mmol)溶于3mL的二氯甲烷中，加入2mL三氟乙酸，在室温下搅拌2小时，TLC监测反应完全。待反应完后，加入饱和碳酸氢钠(40mL)淬灭反应，用二氯甲烷(20mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(30mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干。将剩余物溶于10mL的乙酸乙酯中，加入0.2mL氯化氢乙酸乙酯溶液(2M)并搅拌1小时，真空旋干溶剂，固体用乙酸乙酯和甲醇的混合溶液打浆、过滤。滤饼用超纯水溶解、过滤，冻干后得到目标产物实施例20(58mg，产率：55％，纯度：96.5％)。LCMS ESI(+)m/z:499.2(M+1).1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.06(s,1H),9.28(s,1H),8.44(d,J＝6.0Hz,1H),8.19(s,3H),7.92(d,J＝6.0Hz,1H),7.48(d,J＝8.4Hz,2H),7.38(d,J＝8.4Hz,2H),7.26(s,1H),5.08(s,2H),5.05–4.92(m,1H),4.41(dd,J＝8.8,5.6Hz,1H),3.68–3.54(m,1H),3.14(d,J＝8.0Hz,1H),2.43(tt,J＝11.2,3.6Hz,1H),2.12–1.89(m,4H),1.64–1.36(m,4H).
实施例21
Figure BDA0002388977730000333
(S)-4-(3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)3-((硝基氧基)甲基)苯甲酸苄酯
具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0002388977730000341
步骤A：3-((硝基氧基)甲基)苯甲酸(化合物21.1)
将3-溴甲基苯甲酸(537mg，2.5mmol)溶于10mL乙腈中，加入硝酸银(510mg，3.0mmol),反应液在室温下避光搅拌过夜。待TLC监测反应完全，将反应液浓缩后，用乙酸乙酯(20mL)溶解，过滤，滤液旋干得到化合物21.1(495mg，产率：99％，白色固体)。
步骤B：3-((硝基氧基)甲基)苯甲酰氯(化合物21.2)
将化合物21.1(71mg，0.36mmol)溶于4mL二氯甲烷中，在冰水浴下加入草酰氯(0.06mL，0.72mmol)和2滴DMF，反应液在室温下搅拌1小时。待TLC监测反应完全，将反应液浓缩后得到化合物21.2粗产物，直接用于下一步反应。
步骤C：(S)-4-(3-((叔丁氧羰基)氨基)-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基3-((硝基氧基)甲基)苯甲酸酯(化合物21.3)
将上一步得到的化合物21.2(0.36mmol)、化合物15.2(51mg，0.12mmol)和4-二甲基氨基吡啶(1.5mg，0.01mmol)溶于5mL四氢呋喃和3mL二氯甲烷的混合溶剂中，在冰水浴下加入三乙胺(0.05mL，0.36mmol)。待反应完全后，反应液用二氯甲烷(10mL)稀释，先后用饱和碳酸氢钠溶液(10mL)、水(10mL)和饱和食盐水(10mL)洗涤。有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化后再进行薄层色谱层析分离纯化得到化合物21.3(28.6mg，收率：39％，淡黄色固体)。LCMS ESI(+)m/z：607.2(M+1).
步骤D：(S)-4-(3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)3-((硝基氧基)甲基)苯甲酸苄酯(化合物21)
将化合物21.3(28.6mg，0.047mmol)溶于2mL甲醇中，加入氯化氢甲醇溶液(4M，1mL)，在室温下反应2小时。待LCMS监测反应完全，将反应液浓缩，用反向制备纯化得到实施例21(13.7mg，产率：64％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z：507.1(M+1).
实施例22
Figure BDA0002388977730000342
(S)-4-(3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)4-((硝基氧基)甲基)苯甲酸苄酯
具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0002388977730000343
步骤A：4-((硝基氧基)甲基)苯甲酸(化合物22.1)
将4-溴甲基苯甲酸(537mg，2.5mmol)溶于10mL乙腈中，加入硝酸银(510mg，3.0mmol),反应液在室温下避光搅拌过夜。将反应液浓缩后，用乙酸乙酯(20mL)溶解，过滤，滤液旋干得到化合物22.1(476mg，产率：97％，白色固体)。
步骤B：3-((硝基氧基)甲基)苯甲酰氯(化合物22.2)
将化合物22.1(94.6mg，0.48mmol)溶于5mL二氯甲烷中，在冰水浴下加入草酰氯(0.08mL，0.96mmol)和2滴DMF，反应液在室温下搅拌1小时。待TLC监测反应完全，将反应液浓缩后得到化合物22.2粗产物，直接用于下一步反应。
步骤C：(S)-4-(3-((叔丁氧羰基)氨基)-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基4-((硝基氧基)甲基)苯甲酸酯(化合物22.3)
将上一步得到的化合物22.2(0.48mmol)，化合物15.2(102.5mg,0.24mmol)和4-二甲基氨基吡啶(3mg，0.024mmol)溶于8mL的四氢呋喃和3mL的二氯甲烷的混合溶剂中，在冰水浴下加入三乙胺(0.07mL，0.48mmol)。待反应完全后，反应液用二氯甲烷(15mL)稀释，分别用饱和碳酸氢钠溶液(15mL)、水(15mL)和饱和食盐水(15mL)洗涤。有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化后再进行薄层色谱层析分离纯化得到化合物22.3(70mg，收率：48％，淡黄色固体)。LCMS ESI(+)m/z：607.2(M+1).
步骤D：(S)-4-(3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)4-((硝基氧基)甲基)苯甲酸苄酯(化合物22)
将化合物22.3(70mg，0.115mmol)溶于氯化氢甲醇溶液(4M，3mL)后在室温下反应。待LCMS监测反应完全，将反应液浓缩，用反向制备纯化得到产物实施例22(36.7mg，产率：59％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z：507.1(M+1).
实施例23
Figure BDA0002388977730000351
(S)-4-(3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙烷-2-基)苄基3-((硝基氧基)甲基)环丁烷-1-羧酸酯
具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0002388977730000352
步骤A：3-亚甲基环丁烷-1-羧酸(化合物23.1)
将3-亚甲基环丁烷-1-腈(3.1g，33.7mmol)溶于20mL乙醇中，加入氢氧化钾(7.6g，135mmol)的水溶液(20mL),80℃反应3小时。待LCMS监测反应完全，旋去有机溶剂，水相用浓盐酸调节至pH＜2，用乙酸乙酯萃取(50mL×2)。合并的有机相用饱和食盐水(50mL)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化得到产物23.1(3.88g，产率：100％，无色油液)。LCMSESI(+)m/z：113.1(M+1).
步骤B：3-亚甲基环丁烷-1-羧酸苄酯(化合物23.2)
将化合物23.1(1.8g，16mmol)溶于20mLN，N-二甲基甲酰胺，加入碳酸钾(3.32g，24mmol)和溴化苄(2.09mL，17.6mmol)，室温反应过夜。待LCMS监测反应完全后，将反应液过滤，滤液浓缩，用水(50mL)稀释，乙酸乙酯萃取(50mL×2)。合并的有机相用饱和食盐水洗(50mL×5)，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化得到产物23.2(2.85g，产率：88％，无色油液)。LCMS ESI(+)m/z：203.2(M+1).
步骤C：3-(羟甲基)环丁烷-1-羧酸苄酯(化合物23.3)
氮气保护下，将化合物23.2(1.41g，7mmol)溶于10mL四氢呋喃，在冰盐浴下滴加2.1mL硼烷二甲硫醚溶液(10M)，滴加完毕后在室温下反应1小时。待TLC监测反应完全，在冰盐浴下先后加入7mL氢氧化钠水溶液(3M)和2.4mL过氧化氢溶液(30％)，在室温下继续反应2小时。待TLC监测反应完全，用饱和亚硫酸钠溶液(5mL)淬灭反应，加水(20mL)稀释后用乙酸乙酯(50mL×2)萃取。合并有机相，饱和食盐水洗(50mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化得到产物23.3(749mg，产率：49％，无色油液)。LCMS ESI(+)m/z：221.2(M+1).
步骤D：3-(羟甲基)环丁烷-1-羧酸(化合物23.4)
将化合物23.3(716mg，3.25mmol)溶于10mL甲醇，加入氢氧化钠(390mg，9.7mmol)的水溶液(5mL)，室温搅拌反应。待LCMS监测反应完全，反应液用水(20mL)稀释，乙酸乙酯萃取(25mL×3)，合并有机相，饱和食盐水(50mL)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干得到化合物23.4(236mg，产率：56％，无色液体)。
步骤E：3-((硝基氧基)甲基)环丁烷-1-羧酸(化合物23.5)
在冰水浴下将1mL发烟硝酸滴加到2mL乙酸酐中，搅拌5分钟。将化合物23.4(200mg，1.54mmol)溶于5mL乙酸酐，冰水浴下滴加上述硝酸乙酸酐溶液，保温反应1小时。待TLC监测反应完全，将反应液用水(20mL)稀释，乙酸乙酯(20mL×2)萃取，合并有机相，饱和食盐水(20mL)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化得到产物23.5(155.6mg，产率：58％，淡棕色液体)。
步骤F：(S)-4-(3-((叔丁氧羰基)氨基)-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基3-((硝基氧基)甲基)环丁烷-1-羧酸酯(化合物23.6)
将化合物23.5(75mg，0.43mmol),化合物15.2(100mg，0.23mmol)和4-二甲基氨基吡啶(41.5mg，0.34mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(5mL),加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(88mg，0.46mmol)，在室温下反应过夜。待TLC监测反应完全，将反应液用水(20mL)稀释，乙酸乙酯萃取(20mL×2)，合并有机相，饱和食盐水(20mL)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化得到产物23.6(158.1mg，产率：81％，淡黄色固体)。LCMS ESI(+)m/z：585.2(M+1).
步骤G：(S)-4-(3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙烷-2-基)苄基3-((硝基氧基)甲基)环丁烷-1-羧酸酯(化合物23)
将化合物23.6(75mg，0.128mmol)溶于3mL二氯甲烷后，加入0.3mL三氟乙酸，在室温下反应1小时。待LCMS监测反应完全，将反应液浓缩，加入20mL乙酸乙酯，先后用饱和碳酸氢钠溶液(20mL)和饱和食盐水(20mL)洗涤，有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，用反向制备纯化得到产物实施例23(47.8mg，产率：72％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z：485.2(M+1).1H NMR(400MHz,DMSO)δ13.56(s,1H),9.48(s,1H),8.52(d,J＝6.4Hz,1H),8.26(s,3H),8.15(d,J＝6.4Hz,1H),7.51(d,J＝8.0Hz,2H),7.43-7.35(m,3H),5.08(d,J＝7.2Hz,2H),4.58(d,J＝7.2Hz,1H),4.52-4.44(m,2H),3.72-3.57(m,1H),3.31-3.21(m,1H),3.20-3.08(m,1H),2.69-2.56(m,1H),2.36-2.21(m,2H),2.14-1.94(m,2H).
实施例24
Figure BDA0002388977730000361
(S)-4-(3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基(2-(硝基氧基)乙基)氨基甲酸酯
具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0002388977730000371
步骤A：2-氨基硝酸乙酯硝酸盐(24.1)
在冰水浴下，将3mL发烟硝酸滴加到12mL乙酸酐中，搅拌30分钟。随后在冰水浴下加入乙醇胺(977.3mg，16mmol)，保持温度低于5℃搅拌30分钟。将反应液浓缩，加入50mL乙醚打浆1小时，过滤得到产物24.1(1.95g，产率：72％，白色固体)。
步骤B：(S)-叔丁基(2-(4-((((((2-(硝基氧基)乙基)氨基甲酰基)氧基)甲基)苯基)-3-氧代-3-(硫代[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙基)氨基甲酸酯(24.2)
氩气保护下，将化合物15.2(64mg，0.15mmol)和三光气(22.2mg，0.075mmol)溶于3mL四氢呋喃，在冰水浴下加入二异丙基乙胺(19.4mg，0.15mmol)和4-二甲基氨基吡啶(3.7mg，0.03mmol)的四氢呋喃(1mL)溶液，保持温度反应1小时。待TLC监测反应完全，加入化合物24.1(50.7mg，0.3mmol)和二异丙基乙胺(38.8mg，0.3mmol)的四氢呋喃(1mL)溶液，室温反应1小时。待TLC监测反应完全，乙酸乙酯(20mL)稀释反应液，先后用饱和氯化铵溶液(20mL)和饱和食盐水(20mL)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化得到产物24.2(24.8mg，产率30％，淡黄色固体)。LCMS ESI(+)m/z：560.2(M+1).
步骤C：(S)-4-(3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基(2-(硝基氧基)乙基)氨基甲酸酯(化合物24)
将化合物24.2(24.8mg，0.044mmol)溶于1.5mL甲醇中，加入氯化氢甲醇溶液(4M，1.5mL)后在室温下反应。待反应完全，将反应液浓缩，用反向制备纯化得到产物实施例24(11.6mg，产率：53％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z：460.1(M+1).1H NMR(400MHz,DMSO)δ13.50(s,1H),9.48(s,1H),8.52(d,J＝6.4Hz,1H),8.24(s,3H),8.15(d,J＝6.4Hz,1H),7.55-7.45(m,3H),7.43-7.32(m,3H),5.02(s,2H),4.59-4.40(m,3H),3.72-3.57(m,1H),3.36-3.31(m,2H),3.20-3.10(m,1H).
实施例25
Figure BDA0002388977730000372
(1R，3S)-4-((S)-3-氨基-1-氧代-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基3-(硝基氧基)环丁烷羧酸苄酯
具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0002388977730000373
步骤A：(1R，3R)-3-(硝基氧基)环丁烷甲酸(化合物25.1)
在冰浴条件下，将称量好的醋酸酐(3mL)加入到单口反应瓶(50mL)中，紧接着把浓硝酸(1.5mL)慢慢滴加到反应瓶里，反应液在冰浴下搅拌10分钟。在冰浴条件下，将(1R，3R)-3-羟基环丁烷羧酸(150mg，1.29mmol)溶于醋酸酐(4mL)中，然后将醋酸酐-浓硝酸混合液(4.5mL)慢慢滴加到反应液中，然后反应液在常温下搅拌1小时。通过TLC(溴甲酚绿显色)来确认反应完全。将水加入到反应液中，用乙酸乙酯来萃取(15mL)，分液合并有机相，然后有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，硅胶柱纯化，得到白色固体25.1(120mg，收率：58％)。
步骤B：(1R，3S)-4-((S)-3-(1,3-二氧代异吲哚-2-基)-1-氧代-1-(硫代[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙烷-2-(硝基)3-(硝基氧基)环丁烷羧酸苄基酯(化合物25.2)
将化合物1.11(100mg，0.219mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(6mL)中，然后依次加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(63.3mg，0.33mmol)、4-二甲氨基吡啶(40.26mg，0.33mmol)和化合物25.1(42.34mg，0.26mmol)，混合液在常温搅拌过夜。通过LCMS检测反应完全。加水到反应液中，用乙酸乙酯来萃取(15mLX2)，合并有机相，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤、旋干，剩余物用硅胶柱纯化得到淡黄色固体25.2(105mg，收率：80％)。LCMS ESI(+)m/z:601.1(M+1).
步骤C：1R，3S)-4-((S)-3-氨基-1-氧代-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基3-(硝基氧基)环丁烷羧酸苄酯(化合物25)
将化合物25.2(105mg，0.175mmol)溶于乙醇(8mL)中，加水合肼(87.5mg，1.75mmol)到反应液中，反应在惰性气体氛围下60摄氏度搅拌2小时。通过LCMS检测反应完全。加水到反应液里，用乙酸乙酯(12mLX2)萃取。有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤、浓缩旋干，剩余物溶于3mL甲醇中，用反向制备纯化，冻干后得到淡黄色固体实施例25(25mg，收率：30％，纯度：96％)。LCMS ESI(+)m/z:471.1(M+1).1H NMR(400MHz,DMSO)δ13.40(s,1H),9.47(s,1H),8.52(d,J＝6.5Hz,1H),8.22–8.12(m,4H),7.49(d,J＝8.2Hz,2H),7.43–7.37(m,3H),5.45–5.35(m,1H),5.12(s,2H),4.48–4.42(m,1H),3.64(s,1H),3.25(ddd,J＝14.4,9.7,4.6Hz,2H),3.21–3.11(m,1H),2.62(ddd,J＝12.1,7.3,4.9Hz,2H),2.48–2.44(m,1H).
实施例26
Figure BDA0002388977730000381
(S)-4-(3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基2-甲基-3-(硝基氧基)-2-((硝基氧基)甲基)丙酸酯
具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0002388977730000382
步骤A：(S)-4-(3-(1,3-二氧异吲哚-2-基)-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基2-3-(硝基氧基)-2-((硝基氧基)甲基)丙酸甲酯(化合物26.1)
将化合物1.11(50mg，0.11mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(6mL)中，然后加入O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲(62.7mg，0.165mmol)和N,N-二异丙基乙胺(35.5mg，0.275mmol)，反应液常温搅拌30分钟，然后加入2-甲基-3-(硝基氧基)-2-((硝基氧基)甲基)丙酸(29.57mg，0.132mmol)，混合液在常温搅拌过夜。通过LCMS确认反应完全。将水加入到反应液中，用乙酸乙酯萃取(15mL)，分液合并有机相，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤，旋干，硅胶柱纯化，得到淡黄色固体26.1(40mg，收率：55％)。LCMS ESI(+)m/z:664.1(M+1).
步骤B：(S)-4-(3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基2-甲基-3-(硝基氧基)-2-((硝基氧基)甲基)丙酸酯(化合物26)
将化合物26.1(40mg，0.06mmol)溶于7mL的乙醇中，然后加入水合肼(30mg，0.6mmol)到反应液中，反应在惰性气体氛围下60摄氏度搅拌2小时。通过LCMS确认反应完全。加水到反应液里，用乙酸乙酯(12mL)萃取，饱和食盐水洗涤。有机相用无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩旋干，残渣溶于甲醇(3mL)，反向制备纯化后得到白色固体产物实施例26(10.5mg(盐酸盐)，收率：30.5％，纯度：98％)。LCMS ESI(+)m/z:534.1(M+1).1H NMR(400MHz,DMSO)δ13.35(s,1H),9.46(s,1H),8.52(d,J＝6.4Hz,1H),8.22–8.11(m,4H),7.48(d,J＝8.4Hz,2H),7.42–7.36(m,3H),5.17(s,2H),4.78–4.69(m,4H),4.44(dd,J＝8.8,5.0Hz,1H),3.64(s,1H),3.20–3.11(m,1H),1.29(s,3H).
实施例27
Figure BDA0002388977730000391
4-((S)-3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基(1s，4R)-4-((硝基氧基)甲基)环己烷-1-甲酸
具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0002388977730000392
步骤A：反式-4-((硝基氧基)甲基)环己烷-1-甲酸(27.1)
在冰水浴下，将2mL浓硝酸滴加到2mL浓硫酸中，搅拌100分钟。随后在冰水浴下加入反式-4-(羟甲基)环己烷-1-甲酸(60mg，0.38mmol)的二氯甲烷(4mL)溶液，保持温度低于5℃搅拌50分钟。待TLC监测反应完全，在冰水浴下将反应液用水(20mL)稀释，二氯甲烷(20mL×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化得到产物27.1(63mg，产率：81％，白色固体)。
步骤B：反式-(S)-4-(3-((叔丁氧羰基)氨基)-1-氧代-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙烷-2-基)苄基4-((硝基氧基)甲基)环己烷-1-甲酸(27.2)
将化合物27.1(43.25mg，0.21mmo)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(54.8mg，0.28mmol)和4-二甲基氨基吡啶(33.5mg，0.28mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(3mL),加入化合物15.2(60.8mg，0.14mmol)，在室温下反应过夜。待LCMS监测反应完全，将反应液用水(15mL)稀释，乙酸乙酯萃取(15mL×2)，合并有机相，饱和食盐水(20mL)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化得到产物27.2(62.7mg，产率：72％，淡黄色固体)。LCMSESI(+)m/z：613.1(M+1).
步骤C：反式-(S)-4-(3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基4-((硝基氧基)甲基)环己烷-1-羧酸盐(化合物27)
将化合物27.2(57mg，0.093mmol)溶于5mL氯化氢的1，4-二氧六环溶液(4M)，室温下反应1小时。待LCMS监测反应完全，将反应液浓缩至干，用反向制备纯化得到产物实施例27(30.9mg，产率：60％，淡黄色固体)。LCMS ESI(+)m/z：513.1(M+1).
实施例28
Figure BDA0002388977730000393
(S)-4-(3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基3-(2-(硝基氧基)乙基)苯甲酸酯
具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0002388977730000401
步骤A：(3-溴苯乙氧基)(叔丁基)二甲基硅烷(化合物28.1)
将3-溴苯乙醇(1.89g,9.4mmol)和咪唑(2.56g,36.16mmol)溶于50mL的二氯甲烷中，在室温下加入叔丁基二甲基氯硅烷(2.83g,18.78mmol),然后该体系在室温下搅拌2.5小时。TLC监测反应完全。待反应完后，依次用水(30mLX2)，饱和碳酸氢钠溶液(30mLX2)，用饱和食盐水(30mLX2)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物28.1(2.64g，产率：89％)。
步骤B：3-(2-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙基)苯甲酸甲酯(化合物28.2)
将化合物28.1(2.64g,8.37mmol)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(612mg,0.0837mmol)溶于15mL的N，N-二甲基甲酰胺和45mL的甲醇混合溶剂中，然后加入15mL三乙胺，该体系在80℃和一氧化碳氛围下反应过夜。LCMS监测反应完全。待反应完后，加水淬灭反应，浓缩后用乙酸乙酯(30mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(40mLX2)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物28.2(2g，产率：81％)。
步骤C：3-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙基)苯甲酸(化合物28.3)
将化合物28.2(2g,6.79mmol)溶于20mL的甲醇中，然后加入20mL四氢呋喃和15mL水，然后加入一水合氢氧化锂(859mg,20.37mmol)，在室温下反应过夜。LCMS监测反应完全。待反应完后，用1M的盐酸水溶液调节pH至3并搅拌半小时，再用乙酸乙酯(60mLX2)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(30mLX1)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物28.3(1.2g，产率：63％)。
步骤D：3-(2-羟乙基)苯甲酸(化合物28.4)
将化合物28.3(700mg,2.5mmol)溶于10mL乙酸乙酯中，然后加入3mL的氯化氢/甲醇(4M)溶液，室温下搅拌反应1.5小时，反应结束后，浓缩，残余物柱层析得到产物28.4(258mg,产率：62％)
步骤E：3-(2-(硝基氧基)乙基)苯甲酸(化合物28.5)
向冰水浴下的30mL的二氯甲烷中加入浓硝酸和浓硫酸的混合酸溶液(20滴的浓硝酸,4滴的浓硫酸)，冰浴下搅拌1小时,然后加入化合物28.4(250mg,1.5mmol)，并在室温下反应4小时。TLC监测反应完全。待反应完后，加水淬灭反应，用二氯甲烷(40mLX2)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(30mLX3)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物28.5(235mg，产率：74％)。
步骤F：(S)-4-(3-((叔丁氧羰基)氨基)-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基3-(2-(硝基氧基)乙基)苯甲酸酯(化合物28.6)
将化合物15.2(161mg,0.378mmol)和化合物28.5(114mg,0.539mmol)溶于3mL的N，N-二甲基甲酰胺中，然后加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(155mg,0.808mmol)和4-二甲氨基吡啶(98.6mg,0.808mmol)，在室温下反应过夜。TLC监测反应完全。加入水淬灭反应，用乙酸乙酯(20mLX2)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(20mLX2)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物28.6(185mg，产率：79％)。
步骤G：(S)-4-(3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基3-(2-(硝基氧基)乙基)苯甲酸酯(化合物28)
将化合物28.6(100mg,0.16mmol)溶于6mL的甲醇中，加入4mL盐酸甲醇溶液(4M)，在室温下搅拌3小时，TLC监测反应完全。待反应完后，减压浓缩反应液，剩余物溶于5mL的甲醇和水溶液中，过滤，滤液用反相制备纯化，冻干后得到目标产物化合物实施例28(76mg，产率：91％，纯度：99％)。LCMS ESI(+)m/z:521.2(M+1).1H NMR(400MHz,DMSO)δ13.55(s,1H),9.48(s,1H),8.52(d,J＝6.4Hz,1H),8.25(s,3H),8.15(d,J＝6.4Hz,1H),7.94-7.81(m,2H),7.59(d,J＝7.6Hz,1H),7.56-7.45(m,5H),7.41(s,1H),5.35(s,2H),4.76(t,J＝6.4Hz,2H),4.51(dd,J＝5.6,8.4Hz,1H),3.63-3.66(m,1H),3.22-3.12(m,1H),3.08(t,J＝6.4Hz,2H).
实施例29
Figure BDA0002388977730000411
(S)-4-(3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基2-(1-((硝基氧基)甲基)乙酸环丙酯
具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0002388977730000412
步骤A：2-(1-(羟甲基)环丙基)乙酸(化合物29.1)
将化合物2-(1-(羟甲基)环丙基)乙腈(1g，9mmol)溶于15mL乙醇中，然后加入氢氧化钾(5g，89.12mmol)的水(20mL)溶液，在80℃下，搅拌反应16小时，TLC监测反应结束后，浓缩除去乙醇，然后冷却至0℃，用浓盐酸调节PH至1-2，然后用乙酸乙酯(80mLX2)萃取，合并有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩得到化合物29.1(870mg，产率：74％)
步骤B：2-(1-(((硝基氧基)甲基)环丙基)乙酸(化合物29.2)
在0℃下，1mL浓硝酸加入到2mL乙酸酐中，然后该混合物在0℃下搅拌10分钟，然后将混合物在0℃下滴加到化合物29.1(200mg,1.54mmol)的醋酸酐(15mL)溶液中，保持0℃并搅拌1.5小时。TLC监测反应结束后，加入水(20mL)，用二氯甲烷(40mLX2)萃取，合并的有机相分别用水，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，浓缩，柱层析得到化合物29.2(56mg,收率：21％)
步骤C：(S)-4-(3-((叔丁氧羰基)氨基)-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基2-(1-((硝基氧基)甲基)环丙基)乙酸酯(化合物29.3)
将化合物29.2(56mg,0.319mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(92mg，0.479mmol),4-二甲氨基吡啶(59mg，0.483mmol)以及化合物15.2(68mg，0.159mmol)，N2保护下室温搅拌过夜，LC-MS监测反应结束后，加入水(30mL),再用乙酸乙酯(40mLX2)萃取，合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤、浓缩，柱层析得到化合物29.3(72mg，收率：77％)。LCMS ESI(+)m/z:585.2(M+1).
步骤D：(S)-4-(3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基2-(1-((硝基氧基)甲基)乙酸环丙酯(化合物29)
将化合物29.3(72mg,0.123mmol)溶于15mL的四氢呋喃中，加入30mL的氯化氢/甲醇溶液(4M)，在室温下搅拌5小时，TLC监测反应完全。待反应完后，减压浓缩反应液，用碳酸氢钠溶液调节pH＝8-10，用乙酸乙酯萃取(50mLX2)，然后用饱和食盐水洗涤(30mLX1)，有机相浓缩后送p-HPLC反相制备，冻干后得到目标产物实施例29(17mg，产率：28％，纯度：81％)。LCMS ESI(+)m/z:485.1(M+1).
实施例30
Figure BDA0002388977730000421
(S)-4-(3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基2,2-二甲基-5-(硝基氧基)戊酸酯
具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0002388977730000422
步骤A：5-溴-2,2-二甲基戊酸(化合物30.1)
将化合物2,2-二甲基戊-4-烯酸(900mg,7.02mmol)溶于正己烷(35mL)中，然后冰浴冷却至0℃，该温度下加入氢溴酸的醋酸溶液(3.44g，33％含量)，然后室温下搅拌4小时，TLC监测反应结束后，向混合物中加入水(40mL),然后用乙酸乙酯萃取(50mL×2)，合并有机相用水(30mL×2)，饱和食盐水(30mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得到化合物30.1(1.36g,收率：93％)。
步骤B：2,2-二甲基-5-(硝基氧基)戊酸(化合物30.2)
将化合物30.1(1.1g，5.26mmol)溶于乙腈(16mL)中，然后加入硝酸银(1.79,10.59mmol),氮气保护下，升温至80℃反应6小时。待反应结束后，冷却至室温，过滤，将滤液浓缩，剩余物用柱层析得到化合物30.2(340mg,收率：31％)。
步骤C：5-氯-4,4-二甲基-5-氧戊基硝酸盐(化合物30.3)
将化合物30.2(150mg,0.78mmol)溶解在二氯甲烷(16mL)中，氮气保护下，冰浴冷却至0℃，加入草酰氯(0.133mL)和催化量的N,N-二甲基甲酰胺，室温下搅拌3小时，反应结束后，浓缩得到化合物30.3的粗产物，直接用于下一步。
步骤D：(S)-4-(3-((叔丁氧羰基)氨基)-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基2,2-5-(硝基氧基)戊酸二甲酯(化合物30.4)
将化合物15.2(168mg,351.27mmol)溶于四氢呋喃(20mL)中，加入二异丙基乙胺(303mg，2.35mmol)后混合物冷却至0℃，再滴加上述化合物30.3粗产物的二氯甲烷(10mL)溶液，以及4-二甲氨基吡啶(96mg,0.786mmol),混合物室温搅拌1小时，LCMS监测反应结束后，加入水(30mL),用乙酸乙酯萃取(50mL×2),合并有机相用饱和食盐水洗涤(30mL×1)，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，剩余物用柱层析得到化合物30.4(150mg,收率：64％)。LCMSESI(+)m/z:601.2(M+1).
步骤E：(S)-4-(3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基2,2-二甲基-5-(硝基氧基)戊酸酯(化合物30)
将化合物30.4(150mg,0.25mmol)溶于8mL的二氯甲烷中，加入三氟乙酸(2mL)，室温搅拌1小时，LC-MS监测反应结束后，用碳酸氢钠溶液调节PH至8，然后用乙酸乙酯(50mL×2)萃取,合并有机相用饱和食盐水洗涤(30mL×1)，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩，剩余物经过p-HPLC制备得到产物实施例30(82mg，收率：66％)。LCMS ESI(+)m/z:501.2(M+1).1H NMR(400MHz,DMSO)δ13.63(s,1H),9.50(s,1H),8.52(d,J＝6.4Hz,1H),8.30(s,3H),8.16(d,J＝6.4Hz,1H),7.51(d,J＝8.4Hz,2H),7.43(s,1H),7.38(d,J＝8.4Hz,2H),5.07(s,2H),4.52(dd,J＝5.2,8.8Hz,1H),4.48-4.40(m,2H),3.65(d,J＝4.4Hz,1H),3.20-3.07(m,1H),1.64-1.47(m,4H),1.14(s,6H)
实施例31
Figure BDA0002388977730000431
(S)-4-(3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙烷-2-基)6-(硝基氧基)己酸苄酯具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0002388977730000432
步骤A：6-(硝基氧基)己酸(化合物31.1)
将称量好的6-溴己酸(500mg，2.56mmol)溶于8mL的乙腈中，把硝酸银(871mg，5.13mmol)加入到反应液里。避光，在惰性气体氛围下，反应液在85摄氏度下搅拌5小时。通过TLC(溴甲酚绿显色)来确认反应完全。将反应液中析出的固体用硅藻滤掉，滤饼用乙腈洗涤，将滤液旋干，剩余物溶于乙酸乙酯中，有机相依次用水(15mL)和饱和食盐水(15mL)洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤、旋干，得到无色液体31.1(400mg，收率：88％)。
步骤B：((S)-4-(3-(1,3-二氧异吲哚-2-基)-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基6-(硝基氧基)己酸酯(化合物31.2)
将化合物1.11(100mg，0.219mmol)溶于7mL的N,N-二甲基甲酰胺中，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(63.3mg，0.33mmol)、4-二甲氨基吡啶(40.26mg，0.33mmol)和化合物31.1(46.55mg，0.263mmol)，混合液在常温搅拌过夜。LCMS确认反应完全。加水到反应液中，用乙酸乙酯来萃取(15mL)，分液合并有机相，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤、旋干，剩余物用硅胶柱纯化，得到淡黄色固体31.2(80mg，收率：59％)。LCMS ESI(+)m/z:617.2(M+1).
步骤C：(S)-4-(3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙烷-2-基)6-(硝基氧基)己酸苄酯(化合物31)
将化合物31.2(80mg，0.13mmol)溶于8mL的乙醇中，加入水合肼(65mg，1.3mmol)，加热反应到60摄氏度，在惰性气体氛围下搅拌3小时。通过LCMS确认反应完全。加水淬灭反应，用乙酸乙酯(12mL)萃取，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩旋干，剩余物溶于甲醇/四氢呋喃
(1.5mL/1.5mL)，反向制备纯化后得到淡黄色固体产物实施例31(35mg，收率：52％，纯度：96％)。LCMS ESI(+)m/z:487.2(M+1).1H NMR(400MHz,DMSO)δ13.54(s,1H),9.48(s,1H),8.52(d,J＝6.4Hz,1H),8.25(s,3H),8.15(d,J＝6.4Hz,1H),7.50(d,J＝8.0Hz,2H),7.42–7.36(m,3H),5.07(s,2H),4.52–4.45(m,3H),3.70–3.56(m,1H),3.20–3.10(m,1H),2.36(t,J＝7.6Hz,2H),1.68–1.60(m,2H),1.56(dt,J＝15.2,7.6Hz,2H),1.39–1.28(m,2H).
实施例32
Figure BDA0002388977730000441
(S)-4-(3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙烷-2-基)苄基1-((硝基氧基)甲基)环丙烷羧酸酯
具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0002388977730000442
步骤A：1-(羟甲基)环丙烷甲酸(化合物32.1)
在冰浴下，将1-(甲氧羰基)环丙烷羧酸(650mg，4.51mmol)溶于10mL的无水四氢呋喃中，在氮气保护下，将硼烷的二甲硫醚溶液(0.5mL,4.961mmol)慢慢滴加到反应液里，然后将反应常温搅拌1.5小时。通过TLC(溴甲酚绿显色)来确认反应完全。再将反应液冷却至0摄氏度，用甲醇淬灭反应。将反应液浓缩旋干，得到淡黄色油状的粗品32.1(410mg，收率：69.87％)。
步骤B：1-((硝基氧基)甲基)环丙烷甲酸(化合物32.2)
在冰浴条件下，将称量好的醋酸酐(2mL)加入到单口反应瓶(50mL)中，慢慢滴加浓硝酸(1mL)到反应瓶里，反应液在冰浴下搅拌10分钟。在冰浴条件下，将化合物32.1(150mg，1.29mmol)溶于醋酸酐(3mL)中，然后将醋酸酐-浓硝酸混合液(3mL)慢慢滴加到反应液中，然后反应液在常温下搅拌1小时。通过TLC(溴甲酚绿显色)来确认反应完全。将水加入到反应液中，用乙酸乙酯来萃取(15mL)，分液合并有机相，然后有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，硅胶柱纯化，得到白色固体32.2(60mg，收率：43％)。
步骤C：(S)-4-(3-(1,3-二氧异吲哚-2-基)-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基1-((硝基氧基)甲基)环丙烷甲酸(化合物32.3)
将化合物32.2(55mg，0.342mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(7mL)中，然后依次加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(98.34mg，0.513mmol)、4-二甲氨基吡啶(62.58mg，0.513mmol)和化合物1.11(109.7mg，0.24mmol)，混合液在常温搅拌过夜。通过LCMS确认反应完全(剩余大约15％的原料1.11)。加水到反应液中，用乙酸乙酯萃取(15mL)，分液合并有机相。有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤、旋干，硅胶柱纯化，得到白色固体32.3(82mg，收率：40％)。LCMS ESI(+)m/z:601.1(M+1).
步骤D：(S)-4-(3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙烷-2-基)苄基1-((硝基氧基)甲基)环丙烷羧酸酯(化合物32)
将化合物32.3(82mg，0.137mmol)溶于7mL的乙醇中，然后加水合肼(68.5mg，1.37mmol)到反应液中，反应在惰性气体氛围下6加热到60摄氏度搅拌3小时。LCMS确认反应完全。加水到反应液里，用乙酸乙酯(12mL)萃取。有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤、浓缩旋干，剩余物溶于甲醇/四氢呋喃(1.5mL/1.5mL)，反向制备纯化后得到白色固体产物实施例32(29.5mg，收率：43％，纯度：94％)。LCMS ESI(+)m/z:471.1(M+1).1H NMR(400MHz,DMSO)δ13.47(s,1H),9.48(s,1H),8.52(d,J＝6.4Hz,1H),8.25–8.13(m,4H),7.49(d,J＝8.4Hz,2H),7.41–7.35(m,3H),5.11(s,2H),4.71(s,2H),4.47(dd,J＝8.4,5.6Hz,1H),3.64(s,1H),3.17(d,J＝6.4Hz,1H),1.31(dd,J＝7.2,4.2Hz,2H),1.19(dd,J＝7.2,4.4Hz,2H).
实施例33
Figure BDA0002388977730000451
4-((S)-3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基(R)-4,5-双(硝基氧基)戊酸
具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0002388977730000452
步骤A：(S，E)-3-(2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)丙烯酸甲酯(化合物33.1)
将化合物(2-甲氧基乙基)磷酸二甲酯(2.28mL,15.36mmol)在0℃下缓慢的滴加到15mL含有氢化钠(60％，614mg,15.36mmol)的乙二醇二甲醚中并搅拌0.5小时，然后再加入(S)-2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-甲醛(2g,15.36mmol)，室温下搅拌2小时。TLC监测反应完全。待反应完后，加入饱和的氯化铵溶液淬灭反应，用乙酸乙酯(100mL)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(50mL)洗涤。有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得到化合物33.1(1.645g，产率：58％，无色油状液体)。
步骤B：(S，E)-4,5-二羟基戊-2-烯酸甲酯(化合物33.2)
将化合物33.1(1.16g，6.23mmol)溶于7.5mL的乙酸水溶液(80％)中，并加热到80℃搅拌3小时。TLC监测反应完全。待反应完后，将反应液直接旋干，柱层析纯化得到化合物33.2(706mg，产率：78％，无色油状液体)。
步骤C：(R)-4,5-二羟基戊酸甲酯(化合物33.3)
将化合物33.2(706mg,4.84mmol)溶于10mL的乙醇中，在氢气氛围下，加入钯碳(10％，71mg)并在室温下搅拌过夜。TLC监测反应完全。待反应完后，反应液用硅藻土过滤，将滤液旋干，剩余物用柱层析纯化得到化合物33.3(558mg，产率：78％，无色油状液体)。
步骤D：(R)-4,5-双(硝基氧基)戊酸甲酯(化合物33.4)
将化合物33.3(100mg,0.68mmol)溶于1mL的乙酸酐中，冰水浴下加入浓硝酸和乙酸酐的混酸溶液(0.8mL硝酸,1.6mL醋酸酐)，在0℃下搅拌4小时，TLC监测反应完全。待反应完后，加入30mL乙酸乙酯稀释，将反应液先后用水(10mLX2)，饱和的碳酸氢钠溶液(10mL)和饱和食盐水(10mLX2)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，得到粗产品33.4(138mg，产率：85％，淡黄色液体)。
步骤E：(R)-4,5-双(硝基氧基)戊酸(化合物33.5)
将化合物33.4(93mg,0.39mmol)溶于1.5mL四氢呋喃和0.5mL水的混合溶液中，在冰水浴下加入一水合氢氧化锂(20mg,0.47mmol),并在该温度下搅拌1小时，TLC监测反应完全。待反应完后，用2M的盐酸溶液调节pH为4，用乙酸乙酯(20mL)萃取，有机相经饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得到化合物33.5(45mg，产率：85％，无色油状液体)。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ12.28(s,1H),5.70–5.22(m,1H),4.94(dd,J＝12.8,2.4Hz,1H),4.72(dd,J＝12.8,6.0Hz,1H),2.48–2.17(m,2H),2.13–1.70(m,2H).
步骤F：4-((S)-3-((叔丁氧基羰基)氨基)-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基(R)-4,5-双(硝基氧基)戊酸酯(化合物33.6)
将化合物15.2(51mg,0.12mmol)和化合物33.5(40mg,0.18mmol)溶于2mL的N，N-二甲基甲酰胺中，然后加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(46mg,0.24mmol)和4-二甲氨基吡啶(22mg,0.18mmol)，在室温下反应过夜。LCMS监测反应完全。加入水淬灭反应，用乙酸乙酯(30mLX2)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(10mLX2)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物33.6(55mg，产率：72％，淡黄色固体)。
步骤G：4-((S)-3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基(R)-4,5-双(硝基氧基)戊酸(化合物33)
将化合物33.6(55mg,0.087mmol)溶于2mL的乙酸乙酯中，加入2mL的乙酸乙酯盐酸溶液(2M)，在室温下搅拌2小时，LCMS监测反应完全。待反应完后，将溶剂旋干，残留物用超纯水溶解、过滤，反相制备纯化，冻干后得到目标产物实施例33(45mg，产率：97％，纯度：99％)。LCMS ESI(+)m/z:534.1(M+1).1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.22(s,1H),9.45(s,1H),8.52(d,J＝6.4Hz,1H),8.11(s,4H),7.46(d,J＝7.6Hz,2H),7.40(d,J＝8.4Hz,2H),7.34(s,1H),5.49–5.40(m,1H),5.08(s,2H),4.92(dd,J＝12.8,2.8Hz,1H),4.71(dd,J＝12.8,6.0Hz,1H),4.39(s,1H),3.63(s,1H),3.17(d,J＝5.6Hz,1H),2.59–2.53(m,2H),2.08–1.87(m,2H).
实施例34
Figure BDA0002388977730000461
(1S，3R)-4-((S)-3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙烷-2-基)苄基3-((硝基氧基)甲基)环丁烷羧酸盐
具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0002388977730000462
步骤A：3-((苄氧基)羰基)环丁烷羧酸(化合物34.1)
将化合物23.3(2.33g，10.58mmol)溶于30mL二氯甲烷，30mL乙腈和30mL水中，冷却至0度，加入高碘酸钠(6.8g，31.73mmol)和一水合三氯化钌(233mg，1.06mmol),将反应液升到室温，反应6小时。反应液用乙酸乙酯(100mL)稀释，搅拌下加入1M的盐酸溶液直至固体全部溶解，水相用乙酸乙酯(50mL)萃取1次，合并的有机相用10％的亚硫酸氢钠溶液(30mL)洗2次，饱和食盐水(30mL)洗1次，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化得到产物34.1(2.3g，产率：93％，无色油状物)。LCMS ESI(+)m/z：235.1(M+1).
步骤B：(1S，3S)-二苄基环丁烷-1,3-二羧酸酯(化合物34.2)和(1r，3r)-二苄基环丁烷-1,3-二羧酸酯(化合物34.3)
将化合物34.1(2.3g，9.82mmol)溶于30mL的N，N-二甲基甲酰胺，加入碳酸钾(4.07g，29.46mmol)和溴化苄(5.04g，29.46mmol)，室温反应过夜。待LCMS监测反应完全后，向反应液中加入水(50mL)，用乙酸乙酯(70mL)萃取2次。合并的有机相用饱和食盐水(50mL)洗4次，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化得到极性相对较小产物34.2(1.29g，无色油状物)和极性相对较大产物34.3(1.58g，无色油液，产率：90％)。
步骤C：(1s，3s)-3-((苄氧基)羰基)环丁烷羧酸(化合物34.4)
将化合物34.2(1.19g，3.67mmol)溶于15mL四氢呋喃，15mL甲醇和15mL水中，加入氢氧化钠(146.7mg，3.67mmol)，反应液在室温下反应3小时。待TLC监测反应完全，向反应液中加入2M的盐酸溶液至pH为3，然后用乙酸乙酯(60mL)萃取2次，合并的有机相用饱和食盐水(30mL)洗1次，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化得到产物34.4(380mg，产率：44％，无色油状物)。LCMS ESI(+)m/z：235.1(M+1).
步骤D：(1s，3s)-3-(羟甲基)环丁烷甲酸苄酯(化合物34.5)
将化合物34.4(380mg，1.62mmol)溶于15mL四氢呋喃，在冰浴和氮气保护下滴加0.24mL硼烷二甲硫醚溶液(10M)，滴加完毕后在室温下反应3小时。待TLC监测反应完全，在冰浴下先后加入5mL甲醇和4mL 2M的盐酸溶液，在室温下继续搅拌10分钟。向反应液中加入水(20mL)，用乙酸乙酯(50mL×4)萃取。合并的有机相，用饱和食盐水洗(30mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化得到产物34.5(245mg，产率：69％，无色油状物)。LCMS ESI(+)m/z：221.1(M+1).
步骤E：(1s，3s)-3-(羟甲基)环丁烷羧酸(化合物34.6)
将化合物34.5(245mg，1.11mmol)溶于6mL甲醇和15mL四氢呋喃中，加入氢氧化钠(89mg，2.22mmol)的水溶液(5mL)，室温搅拌反应3小时。待TLC监测反应完全，反应液用水(40mL)稀释，乙酸乙酯洗(25mL×3)，然后将水相用2M的盐酸溶液调节pH至2，用乙酸乙酯萃取(40mL×6)，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干得到化合物34.6(145mg，产率：100％，白色固体)。
步骤F：(1s，3s)-3-((硝基氧基)甲基)环丁烷羧酸(化合物34.7)
在冰水浴下将1.5mL浓硝酸滴加到3mL乙酸酐中，搅拌5分钟。将化合物34.6(145mg，1.11mmol)溶于5mL乙酸酐，冰水浴下滴加上述硝酸乙酸酐溶液，0度反应3小时。待TLC监测反应完全，将反应液用水(20mL)稀释，乙酸乙酯(40mL×2)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(20mL)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化得到产物34.7(110mg，产率：56％，白色固体)。
步骤G：(1s，3R)-4-((S)-3-((叔丁氧羰基)氨基)-1-氧代-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基3-((硝基氧基)甲基)环丁烷甲酸苄酯(化合物34.8)
将化合物34.7(50mg，0.28mmol)溶于20mL N，N-二甲基甲酰胺中，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(82mg，0.42mmol)，4-二甲基氨基吡啶(53mg，0.42mmol)和化合物15.2(85mg，0.20mmol)，反应液在室温下反应过夜。待TLC监测反应完全，将反应液用水(30mL)稀释，乙酸乙酯萃取(40mL×2)，合并有机相，用饱和食盐水(20mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，剩余物用柱层析纯化得到产物34.8(90mg，产率：78％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z：585.2(M+1).
步骤H：(1s，3R)-4-((S)-3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙烷-2-基)苄基3-((硝基氧基)甲基)环丁烷羧酸盐(化合物34)
将化合物34.8(90mg，0.15mmol)溶于8mL二氯甲烷后，加入1.5mL三氟乙酸，在室温下反应1小时。待LCMS监测反应完全，向反应液中加入饱和碳酸氢钠溶液pH为8，用乙酸乙酯(50mL X 2)萃取，合并的有机相用饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，用反向制备纯化得到产物实施例34(64mg，产率：85％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z：485.1(M+1).1H NMR(400MHz,DMSO)δ13.53(s,1H),9.48(s,1H),8.52(d,J＝6.4Hz,1H),8.24(s,3H),8.15(d,J＝6.4Hz,1H),7.50(d,J＝8.0Hz,2H),7.43-7.34(m,3H),5.09(s,2H),4.58(d,J＝7.2Hz,2H),4.53-4.44(m,1H),3.62-3.66(m,1H),3.22-3.29(m,1H),3.19-3.08(m,1H),2.59-2.68(m,1H),2.27-2.34(m,2H),2.03-2.10(m,2H).
实施例35
Figure BDA0002388977730000481
(1R，3S)-4-((S)-3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙烷-2-基)苄基3-((硝基氧基)甲基)环丁烷羧酸盐
具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0002388977730000482
步骤A：(1R，3r)-3-((苄氧基)羰基)环丁烷羧酸(化合物35.1)
将化合物34.3(1.48g，4.56mmol)溶于15mL四氢呋喃，15mL甲醇和15mL水中，加入氢氧化钠(182mg，4.56mmol)，反应液在室温下反应3小时。待TLC监测反应完全，向反应液中加入2M的盐酸溶液至pH为3，然后用乙酸乙酯(60mL)萃取2次，合并的有机相用饱和食盐水(30mL)洗1次，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化得到产物35.1(380mg，产率：36％，无色油状物)。LCMS ESI(+)m/z：235.1(M+1).
步骤B：(1r，3r)-3-(羟甲基)环丁烷甲酸苄酯(化合物35.2)
将化合物35.1(380mg，1.62mmol)溶于15mL四氢呋喃，在冰浴和氮气保护下滴加0.24mL硼烷二甲硫醚溶液(10M)，滴加完毕后在室温下反应3小时。待TLC监测反应完全，在冰浴下先后加入5mL甲醇和4mL 2M的盐酸溶液，在室温下继续搅拌10分钟。向反应液中加入水(20mL)，用乙酸乙酯(50mL×4)萃取。合并的有机相，用饱和食盐水洗(30mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化得到产物35.2(300mg，产率：84％，无色油状物)。LCMS ESI(+)m/z：221.1(M+1).
步骤C：(1r，3r)-3-(羟甲基)环丁烷羧酸(化合物35.3)
将化合物35.2(300mg，1.36mmol)溶于6mL甲醇和15mL四氢呋喃中，加入氢氧化钠(109mg，2.72mmol)的水溶液(5mL)，室温搅拌反应3小时。待TLC监测反应完全，反应液用水(40mL)稀释，乙酸乙酯洗(25mL×3)，然后将水相用2M的盐酸溶液调节pH至2，用乙酸乙酯萃取(40mL×6)，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，旋干得到化合物35.3(177mg，产率：100％，无色油状物)。
步骤D：(1r，3r)-3-((硝基氧基)甲基)环丁烷羧酸(化合物35.4)
在冰水浴下将1.5mL浓硝酸滴加到3mL乙酸酐中，搅拌5分钟。将化合物35.3(177mg，1.36mmol)溶于5mL乙酸酐，冰水浴下滴加上述硝酸乙酸酐溶液，0度反应3小时。待TLC监测反应完全，将反应液用水(20mL)稀释，乙酸乙酯(40mL×2)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(20mL)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化得到产物35.4(120mg，产率：50％，无色油状物)。
步骤E：(1r，3S)-4-((S)-3-((叔丁氧羰基)氨基)-1-氧代-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基3-((硝基氧基)甲基)环丁烷甲酸苄酯(化合物35.5)
将化合物35.4(50mg，0.28mmol)溶于20mL N，N-二甲基甲酰胺中，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(82mg，0.42mmol)，4-二甲基氨基吡啶(53mg，0.42mmol)和化合物15.2(85mg，0.20mmol)，反应液在室温下反应过夜。待TLC监测反应完全，将反应液用水(30mL)稀释，乙酸乙酯萃取(40mL×2)，合并有机相，用饱和食盐水(20mL×2)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化得到产物35.5(96mg，产率：82％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z：585.2(M+1).
步骤F：(1r，3S)-4-((S)-3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙烷-2-基)苄基3-((硝基氧基)甲基)环丁烷羧酸盐(化合物35)
将化合物35.5(96mg，0.164mmol)溶于8mL二氯甲烷后，加入1.5mL三氟乙酸，在室温下反应1小时。待LCMS监测反应完全，向反应液中加入饱和碳酸氢钠溶液pH为8，用乙酸乙酯(50mL X 2)萃取，合并的有机相用饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，用反向制备纯化得到产物实施例35(66mg，产率：83％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z：485.1(M+1).1H NMR(400MHz,DMSO)δ13.53(s,1H),9.47(d,J＝5.2Hz,1H),8.52(d,J＝6.4Hz,1H),8.37-8.08(m,4H),7.49(t,J＝8.4Hz,2H),7.44-7.32(m,3H),5.07(s,2H),4.61-4.40(m,3H),3.63(s,1H),3.09-3.18(m,2H),2.68-2.54(m,1H),2.34-2.19(m,2H),2.08-1.95(m,2H).
实施例36
Figure BDA0002388977730000491
(S)-4-(3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基3,3-双((硝基氧基)甲基)环丁烷羧酸盐
具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0002388977730000492
步骤A：5,5-双(溴甲基)-2-苯基-1,3-二恶烷(化合物36.1)
将2,2-双(溴甲基)丙烷-1,3-二醇(10g，38.18mmol)溶于140mL甲苯中，加入苯甲醛(4.25g，40.09mmol)和对甲苯磺酸(657mg，3.82mmol),将反应液升到120度，反应4小时。将反应液冷却至室温，用饱和碳酸氢钠溶液(40mL)洗3次，饱和食盐水洗(30mL)洗1次，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，剩余物用甲醇室温重结晶得到产物36.1(12.7g，产率：95％，白色固体)。
步骤B：7-苯基-6,8-二氧杂螺[3.5]壬烷-2,2-二羧酸二乙酯(化合物36.2)
将丙二酸二乙酯(2.0g，12.49mmol)滴加到含有钠氢(500mg，12.49mmol)的20mLN，N-二甲基甲酰胺的悬浊液中，搅拌至不再放出气泡，加入化合物36.1(2.19g，6.24mmol)的10mL的N，N-二甲基甲酰胺溶液，反应液在140度反应3小时。待LCMS监测反应完全后，将反应液冷却至室温，加入氯化铵溶液(30mL)，用乙酸乙酯(70mL)萃取2次。合并的有机相用饱和食盐水(50mL)洗4次，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化得到产物36.2(1.4g，产率：64％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z：349.2(M+1).
步骤C：7-苯基-6,8-二氧杂螺[3.5]壬烷-2,2-二羧酸(化合物36.3)
将化合物36.2(1.4g，4.02mmol)溶于20mL乙醇和15mL水中，加入氢氧化钾(676mg，12.06mmol)，反应液在80度反应0.5小时。待LCMS监测反应完全，将反应液减压浓缩除去乙醇，向反应液中加入2M的盐酸溶液至pH为4，固体析出，过滤，干燥，得到产物36.3(1.09g，产率：93％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z：293.1(M+1).
步骤D：7-苯基-6,8-二氧杂螺[3.5]壬烷-2-羧酸(化合物36.4)
将化合物36.3(1.09g，3.73mmol)溶于20mL吡啶，将反应液回流20小时。待LCMS监测反应完全，将反应液减压浓缩除去吡啶，剩余物用2M盐酸溶液调节pH为5，用乙酸乙酯(50mL×2)萃取。合并的有机相，用饱和食盐水洗(30mL)，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化得到产物36.4(500mg，产率：54％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z：249.1(M+1).
步骤E：3,3-双(羟甲基)环丁烷羧酸(化合物36.5)
将化合物36.4(350mg，1.41mmol)溶于25mL甲醇中，加入钯碳(100mg)，反应液在室温和氢气氛围中搅拌反应36小时。待TLC监测反应完全，将反应液用硅藻土过滤，滤液减压浓缩得到化合物36.5(220mg，产率：98％，白色固体)。
步骤F：3,3-双((硝基氧基)甲基)环丁烷羧酸(化合物36.6)
在冰水浴下将1.5mL浓硝酸滴加到3mL乙酸酐中，搅拌10分钟。将化合物36.5(110mg，0.69mmol)溶于15mL乙酸酐，冰水浴下滴加上述硝酸乙酸酐溶液，室温反应2小时。待TLC监测反应完全，将反应液用水(20mL)稀释，乙酸乙酯(40mL×2)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(20mL)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化得到产物36.6(57mg，产率：33％，白色固体)。
步骤G：(S)-4-(3-((叔丁氧羰基)氨基)-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基3,3-双((硝基氧基)甲基)环丁烷羧酸酯(化合物36.7)
将化合物36.6(50mg，0.20mmol)溶于20mL N，N-二甲基甲酰胺中，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(57mg，0.30mmol)，4-二甲基氨基吡啶(37mg，0.30mmol)和化合物15.2(77mg，0.18mmol)，反应液在室温下反应过夜。待LCMS监测反应完全，将反应液用水(30mL)稀释，乙酸乙酯萃取(40mL×2)，合并有机相，用饱和食盐水(20mL×2)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化得到产物36.7(82mg，产率：69％，白色固体)。LCMSESI(+)m/z：660.2(M+1).
步骤H：(S)-4-(3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基3,3-双((硝基氧基)甲基)环丁烷羧酸盐(化合物36)
将化合物36.7(82mg，0.124mmol)溶于10mL二氯甲烷后，加入2mL三氟乙酸，在室温下反应2小时。待LCMS监测反应完全，向反应液中加入饱和碳酸氢钠溶液pH为8，用乙酸乙酯(50mL X 2)萃取，合并的有机相用饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，用反向制备纯化得到产物实施例36(58mg，产率：84％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z：560.1(M+1).1H NMR(400MHz,DMSO)δ13.36(s,1H),9.46(s,1H),8.52(d,J＝6.4Hz,1H),8.25-8.08(m,4H),7.52-7.44(m,2H),7.42-7.34(m,3H),5.10(s,2H),4.66(s,2H),4.51(s,2H),4.47-4.40(m,1H),3.60-3.68(m,1H),3.33-3.29(m,1H),3.21-3.07(m,1H),2.32-2.14(m,4H).
实施例37
Figure BDA0002388977730000501
(3R，4R)-4-((S)-3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙烷-2-基)苄基3,4-双(硝基氧基)环戊烷羧酸盐
具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0002388977730000502
步骤A：环戊-3-烯甲酸苄酯(化合物37.1)
将环戊-3-烯羧酸(1g，8.93mmol)溶于12mL N，N-二甲基甲酰胺中，加入碳酸钾(2.5g，17.86mmol)和苄溴(1.83g，10.72mmol),反应液在室温搅拌过夜。向反应液加入水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(40mL)萃取2次，合并有机相，用饱和食盐水洗(30mL)洗2次，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化得到产物37.1(1.69g，产率：94％，无色油状物)。LCMSESI(+)m/z：203.1(M+1).
步骤B：(1R，3s，5S)-6-氧杂双环[3.1.0]己烷-3-羧酸苄酯(化合物37.2)
将化合物37.1(650mg，3.22mmol)溶解于15mL二氯甲烷中，冷却至0度，将间氯过氧苯甲酸(724mg，4.20mmol)分批加入，反应液在室温搅拌3小时。有白色固体析出，将反应液过滤，滤液依次用饱和碳酸氢钠溶液(20mL)，20％的亚硫酸钠溶液(20mL)和饱和食盐水(20mL)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化得到产物37.2(460mg，产率：88％，无色油状物)。LCMS ESI(+)m/z：219.1(M+1).
步骤C：(3R，4R)-3,4-二羟基环戊烷甲酸羧苄酯(化合物37.3)
将化合物37.2(460mg，2.11mmol)溶于4mL四氢呋喃和4mL水中，加入0.17mL硫酸溶液，反应液在室温搅拌过夜。向反应液中加入饱和碳酸氢钠至pH为8，用乙酸乙酯(50mL)萃取2次，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，柱层析纯化得到产物37.3(290mg，产率：58％，无色油状物)。LCMS ESI(+)m/z：237.1(M+1).
步骤D：(3R，4R)-3,4-二羟基环戊烷羧酸(化合物37.4)
将化合物37.3(330mg，1.4mmol)溶于6mL甲醇中，加入钯碳(33mg)，反应液在室温和氢气氛围中搅拌3小时。将反应液用硅藻土过滤，滤液减压浓缩得到产物37.4(200mg，产率：98％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z：145.1(M-1).
步骤E：(3R，4R)-3,4-双(硝基氧基)环戊烷羧酸(化合物37.5)
在冰水浴下将1mL浓硝酸滴加到2mL乙酸酐中，搅拌10分钟。将化合物37.4(100mg，0.69mmol)溶于2mL乙酸酐，冰水浴下滴加上述硝酸乙酸酐溶液，在0度反应1小时。待TLC监测反应完全，将反应液用水(20mL)稀释，乙酸乙酯(40mL×2)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(20mL)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化得到产物37.5(95mg，产率：59％，无色油状物)。
步骤F：(3R，4R)-4-((S)-3-((叔丁氧羰基)氨基)-1-氧代-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基3,4-双(硝基氧基)环戊烷甲酸苄酯(化合物37.6)
将化合物37.5(40mg，0.17mmol)溶于5mL N，N-二甲基甲酰胺中，加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(49mg，0.255mmol)，4-二甲基氨基吡啶(31mg，0.255mmol)和化合物15.2(44mg，0.102mmol)，反应液在室温下反应过夜。待LCMS监测反应完全，将反应液用水(30mL)稀释，乙酸乙酯萃取(40mL×2)，合并有机相，用饱和食盐水(20mL×2)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化得到产物37.6(50mg，产率：46％，白色固体)。LCMSESI(+)m/z：646.2(M+1).
步骤G：(3R，4R)-4-((S)-3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙烷-2-基)苄基3,4-双(硝基氧基)环戊烷羧酸盐(化合物37)
将化合物37.6(50mg，0.08mmol)溶于4mL的二氯甲烷中，加入0.8mL三氟乙酸，在室温下反应2小时。待LCMS监测反应完全，向反应液中加入饱和碳酸氢钠溶液至pH为8，用乙酸乙酯(50mL X 2)萃取，合并的有机相用饱和食盐水(20mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，用反向制备纯化得到产物实施例37(27mg，产率：60％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z：546.1(M+1).1H NMR(400MHz,DMSO)δ13.42(s,1H),9.47(s,1H),8.52(d,J＝6.4Hz,1H),8.20(s,3H),8.14(d,J＝6.4Hz,1H),7.54-7.45(m,2H),7.39-7.41(m,3H),5.70-5.51(m,2H),5.11(s,2H),4.55-4.37(m,1H),3.62-3.66(m,1H),3.22-3.05(m,2H),2.60-2.53(m,1H),2.45-2.35(m,1H),2.14-2.21(m,1H),2.10-1.99(m,1H).
实施例38
Figure BDA0002388977730000511
(1r，4S)-4-((S)-3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙烷-2-基)苄基4-((硝基氧基)甲基)环己烷甲酸
具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0002388977730000521
步骤A：(1R，4R)-4-((硝基氧基)甲基)环己烷羧酸(化合物38.1)
在冰水浴下，将3mL浓硝酸滴加到3mL浓硫酸中，搅拌10分钟。随后在冰水浴下加入(1R，4R)-4-(羟甲基)环己烷羧酸(100mg，0.63mmol)的二氯甲烷(2mL)溶液，保持温度低于5℃搅拌30分钟。待TLC监测反应完全，在冰水浴下将反应液用水(20mL)稀释，二氯甲烷(20mL×2)萃取，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化得到产物38.1(102mg，产率：79％，白色固体)。
步骤B：(1R，4S)-4-((S)-3-((叔丁氧羰基)氨基)-1-氧代-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基4-((硝基氧基)甲基)环己烷甲酸苄酯(化合物38.2)
将化合物38.1(43.5mg，0.21mmol),1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(54.8mg，0.28mmol)和4-二甲基氨基吡啶(33.5mg，0.28mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(3mL),加入化合物15.2(60.8mg，0.14mmol)，在室温下反应过夜。待LCMS监测反应完全，将反应液用水(15mL)稀释，乙酸乙酯萃取(15mL×2)，合并有机相，饱和食盐水(20mL×5)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化得到产物38.2(82.5mg，产率：94％，淡黄色固体)。LCMS ESI(+)m/z：613.2(M+1).
步骤C：(1R，4S)-4-((S)-3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙烷-2-基)苄基4-((硝基氧基)甲基)环己烷甲酸(化合物38)
将化合物38.2(80mg，0.13mmol)溶于5mL氯化氢的乙酸乙酯溶液(4M)，室温下反应1小时。待LCMS监测反应完全，将反应液浓缩至干，用反向制备纯化得到产物实施例38(40.4mg，产率：60％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z：513.2(M+1).1H NMR(400MHz,DMSO)δ13.53(s,1H),9.47(s,1H),8.52(d,J＝6.4Hz,1H),8.25(s,3H),8.14(d,J＝6.4Hz,1H),7.50(d,J＝8.4Hz,2H),7.41(s,1H),7.38(d,J＝8.2Hz,2H),5.06(s,2H),4.52–4.44(m,1H),4.34(d,J＝6.4Hz,2H),3.70–3.58(m,1H),3.21–3.08(m,1H),2.30(tt,J＝12.0,3.2Hz,1H),1.93(d,J＝10.4Hz,2H),1.79–1.62(m,3H),1.34(qd,J＝12.8,3.2Hz,2H),1.06(qd,J＝12.8,3.2Hz,2H).
实施例39
Figure BDA0002388977730000522
(S)-4-((S)-3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙烷-2-基)苄基1-(2-(硝基氧基))乙基)吡咯烷-2-羧酸酯
具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0002388977730000523
步骤A：(S)-1-(2-羟乙基)吡咯烷-2-羧酸(化合物39.1)
将L-脯氨酸(921mg，8mmol)和氢氧化钾(1.35g，24mmol)溶于20mL异丙醇，滴加2-溴乙醇(1.2g，9.6mmol)，在40℃下反应过夜。待LCMS监测反应完全，用盐酸调节至pH＜4。减压旋去有机溶剂，加入20mL乙醇和20mL二氯甲烷搅拌2h后过滤，滤液浓缩，用20mL丙酮和2mL甲醇重结晶得到化合物39.1(968mg，产率76％，白色固体)。
步骤B：(S)-1-(2-(硝基氧基)乙基)吡咯烷-2-羧酸(化合物39.2)
在冰水浴下，将3mL浓硝酸滴加到3mL浓硫酸中，搅拌10分钟。随后在冰水浴下加入化合物39.1(500mg，3.1mmol)的二氯甲烷(10mL)溶液，保持温度低于5℃搅拌1小时。待TLC监测反应完全，在冰水浴下将反应液用二氯甲烷(40mL)稀释，用碳酸钠固体调节至pH＝5左右，旋去有机溶剂，加入30mL二氯甲烷和乙醇的混合溶液(1：1)，在室温下搅拌1小时后，过滤，滤液浓缩，得到产物39.2(337mg，产率：53％，黄色固体)。
步骤C：(S)-4-((S)-3-((叔丁氧羰基)氨基)-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基1-(2-(硝基氧基)乙基)吡咯烷-2-羧酸酯(化合物39.3)
将化合物39.2(73mg，0.36mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(69mg，0.36mmol)和4-二甲基氨基吡啶(44mg，0.36mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(3mL),加入化合物15.2(51mg，0.12mmol)，在室温下反应过夜。待LCMS监测反应完全，将反应液用水(15mL)稀释，乙酸乙酯萃取(15mL×2)，合并有机相，饱和食盐水(20mL×5)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化得到产物39.3(47mg，产率：64％，淡黄色固体)。LCMS ESI(+)m/z：614.2(M+1).
步骤D：(S)-4-((S)-3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙烷-2-基)苄基1-(2-(硝基氧基))乙基)吡咯烷-2-羧酸酯(化合物39)
将化合物39.3(47mg，0.076mmol)溶于5mL氯化氢的乙酸乙酯溶液(4M)，室温下反应1小时。待LCMS监测反应完全，将反应液浓缩至干，用反向制备纯化得到产物实施例39(19mg，产率：52％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z：514.2(M+1).
实施例40
Figure BDA0002388977730000531
(S)-4-(3-(二甲基氨基)-1-氧代-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙烷-2-基)苄基2-甲基-3-(硝基氧基)-2-((硝基氧基)甲基)丙酸酯
具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0002388977730000532
步骤A：(S)-4-(3-(1,3-二氧异吲哚-2-基)-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基2-3-(硝基氧基)-2-((硝基氧基)甲基)丙酸甲酯(化合物40.1)
将2-甲基-3-(硝基氧基)-2-((硝基氧基)甲基)丙酸(146mg，0.32mmol)、1-[双(二甲基氨基)亚甲基]-1H-1,2,3-三唑并[4,5-b]吡啶鎓3-氧化六氟磷酸盐(182mg，0.48mmol)和二异丙基乙胺(123.8mg，0.96mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(10mL),加入化合物15.2(107.5mg，0.32mmol)，在室温下反应3小时。待TLC监测反应完全，将反应液用水(30mL)稀释，乙酸乙酯萃取(30mL×2)，合并有机相，饱和食盐水(30mL×5)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化得到产物40.1(157mg，产率：74％，淡黄色固体)。LCMS ESI(+)m/z：664.1(M+1).
步骤B：(S)-4-(3-氨基-1-氧代-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基2-甲基-3-(硝基氧基)-2-((硝基氧基)甲基)丙酸酯(化合物40.2)
将化合物40.1(157mg，0.237mmol)溶于5mL乙醇，加入水合肼(118mg，2.37mmol)，55℃反应2小时。待LCMS监测反应完全，将反应液用水(20mL)稀释，乙酸乙酯萃取(20mL×2)，合并有机相，饱和食盐水(20mL)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化得到产物40.2(75mg，产率：59％，淡黄色固体)。LCMS ESI(+)m/z：534.1(M+1).
步骤C：(S)-4-(3-(二甲基氨基)-1-氧代-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙烷-2-基)苄基2-甲基-3-(硝基氧基)-2-((硝基氧基)甲基)丙酸酯(化合物40)
在氮气保护下，将化合物40.2(75mg，0.14mmol)、甲醛(57mg，37-40％的水溶液，0.7mmol)和一滴乙酸溶于5mL甲醇，在冰水浴下加入氰基硼氢化钠(26.4mg，0.42mmol)，并在室温下反应1小时。待LCMS监测反应完全，反应液用饱和碳酸氢钠溶液(10mL)淬灭，加水(10mL)稀释，乙酸乙酯萃取(20mL×2)，合并有机相，饱和食盐水(20mL)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化得到粗产物，继续用反向制备纯化得到产物实施例40(48mg，产率：57％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z：562.2(M+1).1H NMR(400MHz,DMSO)δ13.47(s,1H),9.27(s,1H),8.44(s,1H),7.92(s,1H),7.54(d,J＝7.6Hz,2H),7.40(d,J＝7.6Hz,2H),7.27(s,1H),5.17(s,2H),4.86–4.69(m,5H),4.07–3.96(m,1H),3.49–3.41(m,1H),2.79(s,6H),1.29(s,3H).
实施例41
Figure BDA0002388977730000541
(S)-4-(3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基3-((硝基氧基)甲基)双环[1.1.1]戊烷-1-羧酸酯
具体反应方程式如下所示：
Figure BDA0002388977730000542
步骤A：3-(羟甲基)双环[1.1.1]戊烷-1-羧酸甲酯(化合物41.1)
在氮气保护下，将3-(甲氧基羰基)双环[1.1.1]戊烷-1-羧酸(493mg，2.9mmol)溶于15mL四氢呋喃，在冰水浴下滴加硼烷的二甲硫醚溶液(0.44mL，10M，4.35mmol)，并在室温下反应3小时。待TLC监测反应完全，用5mL甲醇和4mL盐酸(2M)淬灭反应。减压旋去有机溶剂后，用水(20mL)稀释，乙酸乙酯萃取(20mL×2)，合并有机相，饱和食盐水(20mL)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化得到产物41.1(402mg，产率：89％，白色固体)。
步骤B：3-(羟甲基)双环[1.1.1]戊烷-1-羧酸(化合物41.2)
将化合物41.1(400mg，2.5mmol)溶于10mL四氢呋喃和10mL甲醇，加入氢氧化钠(200mg，5mmol)的水溶液(5mL)，在室温下反应过夜。待TLC监测反应完全，减压旋去有机溶剂后，用水(15mL)稀释，乙酸乙酯(15mL×2)洗。水层用盐酸调节至pH＜4，乙酸乙酯萃取(20mL×2)，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化得到产物41.2(287mg，产率：81％，白色固体)。
步骤C：3-((硝基氧基)甲基)双环[1.1.1]戊烷-1-羧酸(化合物41.3)
在冰水浴下，将5mL浓硝酸滴加到5mL浓硫酸中，搅拌10分钟。随后在冰水浴下加入化合物41.2(285mg，2mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液，保持温度低于5℃搅拌2小时。待TLC监测反应完全，将反应液倒入20mL冰水中稀释，乙酸乙酯萃取(20mL×2)，合并有机相，饱和食盐水(20mL)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化得到产物41.3(303mg，产率：81％，白色固体)。
步骤D：(S)-4-(3-((叔丁氧羰基)氨基)-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙烷-2-基)苄基3-((硝基氧基)甲基)双环[1.1.1]戊烷-1-羧酸酯(化合物41.4)
将化合物41.3(33.7mg，0.18mmol)、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(46mg，0.24mmo)和4-二甲基氨基吡啶(29.3mg，0.24mmol)溶于N，N-二甲基甲酰胺(2mL),加入化合物15.2(51mg，0.12mmol)，在室温下反应过夜。待LCMS监测反应完全，将反应液用水(15mL)稀释，乙酸乙酯萃取(15mL×2)，合并有机相，饱和食盐水(20mL×3)洗，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，剩余物用柱层析纯化得到产物41.4(54.9mg，产率：77％，淡黄色固体)。LCMS ESI(+)m/z：597.2(M+1).
步骤E：(S)-4-(3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基3-((硝基氧基)甲基)双环[1.1.1]戊烷-1-羧酸酯(化合物41)
将化合物41.4(54mg，0.09mmol)溶于3mL乙酸乙酯和3mL氯化氢的乙酸乙酯溶液(4M)，室温下反应2.5小时。待LCMS监测反应完全，将反应液浓缩至干，用反向制备纯化得到产物实施例41(40mg，产率：83％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z：497.2(M+1).1H NMR(400MHz,DMSO)δ13.56(s,1H),9.47(s,1H),8.52(d,J＝6.4Hz,1H),8.21(s,3H),8.15(d,J＝6.4Hz,1H),7.50(d,J＝7.6Hz,2H),7.43–7.31(m,3H),5.08(s,2H),4.58(s,2H),4.53–4.40(m,1H),3.70–3.56(m,1H),3.22–3.08(m,1H),2.02(s,6H).
实施例42：
ROCK2激酶抑制剂活性测试
<一>实验过程。
1)按照实验需求准备4X ROCK2反应溶液，4X ATP反应溶液，4X底物溶液，4X化合物溶液。
2)向384多孔板中依次加入2.5μL，4X激酶溶液，和2.5μL，已经稀释好的不同浓度梯度的4X测试化合物溶液，每个浓度设置2个复孔，同时设置酶溶液空白对照组和阴性对照组(DMSO组)，1000转，离心1分钟，混匀酶和化合物，向384多孔板中加入2.5μL，4X底物溶液，1000转离心1分钟，向384多孔板中加入2.5μL，4XATP溶液，1000转离心1分钟起始酶反应，室温孵育1.5小时。
ROCK2反应的各组分终浓度分别为：ROCK2：1nM，底物：500nM，ATP：6uM，测试化合物终浓度范围为：100nM-5pM
3)按照实验需求配制4X Streptavidin-XL-665检测溶液。
4)酶反应结束后，向384多孔板每孔中加入5ul，4X Streptavidin-XL-665检测溶液，1000转，离心1分钟，向384多孔板每孔中加入5μL，4X STK Antibody-cryptate检测抗体溶液，1000转，离心1分钟，室温条件下孵育1小时。
5)抗体孵育结束后，在Envision读板仪上用HTRF程序测定各孔的信号值。
<二>数据分析
1)以酶溶液空白对照组为100％抑制率和阴性对照组(DMSO组)为0％抑制率，计算检测化合物各个浓度对应的百分比抑制率。
2)在GraphPad Prism软件中对检测化合物的浓度对数值和相对应的百分比抑制率进行非线性回归分析，得到检测化合物的半数抑制浓度(IC50)。
用此方法检测得到化合物ROCK2激酶抑制剂活性(IC50)如下表：
Figure BDA0002388977730000551
Figure BDA0002388977730000561
实施例43：细胞活性测试
<一>实验过程
1)消化处于对数生长期的A7R5细胞，每孔2E5个细胞接种在6孔板中，5％CO2，37℃培养过夜，24小时后将细胞培养基替换为含有0.05％FBS的饥饿培养基，饥饿细胞20小时。
2)去除饥饿培养基，用配制好的化合物浓度梯度处理细胞60分钟，设置VI P-5021(10uM)为阳性对照，DMSO组为阴性对照。
3)化合物处理结束后，吸走化合物溶液，PBS清洗2次，每孔加入100ul细胞裂解液，用细胞刮板轻轻刮下细胞，并将细胞转移至离心管中，冰上裂解60分钟。
4裂解结束后，4℃，14000rpm离心15分钟，收集裂解液上清，采用BCA方法进行蛋白定量，调整蛋白浓度，按照比例加入上样缓冲液，100℃，处理10分钟，使蛋白变性。
5)组装好电泳设备，每个样品上样20ug总蛋白，固定电压125V，电泳90分钟，电泳结束后，组装转膜系统，固定电流300mA，转膜120分钟，转膜结束后，取出PVDF膜，PBS清洗2次，加入封闭液，室温封闭60分钟，去除封闭液，加入含有一抗(Phospho-Myosin LightChain2(Ser19))溶液(抗体稀释倍数1：1000)，选定GAPDH作为内参，4℃，孵育过夜。
6)PBST清洗3次，加入含有对应种属的HRP-抗体(二抗稀释倍数1：2000)，室温孵育60分钟，PBST清洗3次，准备HRP化学发光底物，按照0.1毫升每平方厘米滴加在PVDF膜上，作用30秒，使用凝胶成像仪(ChemiDoc XRS+(BIO-RAD))采集化学发光信号。
7)使用image J软件对各个条带进行定量分析，以GAPDH表达量为内参，校正各个样品中Phospho-Myosin Light Chain2(Ser19)的磷酸化蛋白水平。
<二>数据分析
1)以最高浓度化合物样品的MLC2(Ser19)蛋白磷酸化水平为100％抑制率，以阴性对照组(DMSO组)的MLC2(Ser19)蛋白磷酸化水平为0％抑制率，计算检测化合物各个浓度对应的百分比抑制率
2)在GraphPad Prism软件中对检测化合物的浓度对数值和相对应的百分比抑制率进行非线性回归分析，得到检测化合物的细胞水平的半数抑制浓度(IC50)。
用此方法检测得到化合物细胞活性(IC50)如下表：
Figure BDA0002388977730000571

Claims (10)

1.一种NO供体的小分子化合物，其特征在于：为由如下结构式I所示的化合物或其立体异构体，几何异构体，互变异构体，消旋体，氘代同位素衍生物，水合物，溶剂化物，代谢产物以及药学上可接受的盐或前药；
Figure FDA0002388977720000011
其中，环A为取代或未取代的杂芳环；
X选自(CH2)n，其中n选自0、1、2、3；
R为末端-O-NO2的取代基；
R1选自氢、羟基、卤素、氨基、氰基、取代或未取代的烷基、取代或未取代的烷氧基、取代或未取代的烯基，取代或未取代的炔基，取代或未取代的杂烷基；
R2、R3分别独立地选自氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的环烷基、氨基保护基；
或者，R2与R3相连构成取代或未取代的环杂烷基。
2.如权利要求1所述的一种NO供体的小分子化合物，其特征在于，为由如下结构式所示的化合物或其立体异构体，几何异构体，互变异构体，消旋体，氘代同位素衍生物，水合物，溶剂化物，代谢产物以及药学上可接受的盐或前药：
Figure FDA0002388977720000012
L是一个链接基团，选自取代或未取代的亚烷基，取代或未取代的亚杂烷基，选自取代或未取代的亚烷氧基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的杂环基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的酯基。
3.如权利要求1所述的一种NO供体的小分子化合物，其特征在于：
所述环A为选自式A，或式B；
Figure FDA0002388977720000013
R‘为杂芳环上一个或多个取代的取代基团；
所述取代基团选自氢、羟基、卤素、氨基、氰基、取代或未取代的烷基、取代或未取代的烷氧基、取代或未取代的杂烷基；
A1、A2、A3、A4、A5、A6、A7、A8、A9中的至少一个选自氮、硫、氧；
B1、B2、B3、B4、B5、B6、B7、B8、B9中的至少一个选自氮、硫、氧。
4.如权利要求1所述的一种NO供体的小分子化合物，其特征在于：
所述环A为选自式Ia，或式Ib，或式Ic；
Figure FDA0002388977720000021
R21选自氢、羟基、卤素、氨基、氰基、取代或未取代的烷基、取代或未取代的烷氧基、取代或未取代的杂烷基；
R22选自氢、卤素、氰基、取代或未取代的烷基、取代或未取代的烷氧基。
5.如权利要求1所述的一种NO供体的小分子化合物，其特征在于，为由如下结构式所示的化合物或其立体异构体，几何异构体，互变异构体，消旋体，氘代同位素衍生物，水合物，溶剂化物，代谢产物以及药学上可接受的盐或前药：
Figure FDA0002388977720000022
其中，L1为化学键，或是取代或未取代的亚烷基；
L2选自取代或未取代的亚烷基，取代或未取代的亚烷氧基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的杂芳基；
L3为化学键，或取代或未取代的亚烷氧基。
6.如权利要求1所述的一种NO供体的小分子化合物，其特征在于，为由如下结构式所示的化合物或其立体异构体，几何异构体，互变异构体，消旋体，氘代同位素衍生物，水合物，溶剂化物，代谢产物以及药学上可接受的盐或前药：
Figure FDA0002388977720000023
n1为0，或自然数；
n2为0，或自然数；
Y选自取代或未取代的烷基，取代或未取代的环烷基，取代或未取代的杂环基，取代或未取代的芳基，取代或未取代的杂芳基。
7.如权利要求1所述的一种NO供体的小分子化合物的制备方法，其特征在于：
将如下结构所示的化合物中的羟基经硝化反应获得；
Figure FDA0002388977720000024
8.如权利要求1所述的一种NO供体的小分子化合物的制备方法，其特征在于：
将如下结构所示的化合物中的卤素经硝化反应获得；
Figure FDA0002388977720000031
Y为卤素。
9.如权利要求3所述的一种NO供体的小分子化合物的制备方法，其特征在于：
由如下式IIIa与式IIIb所示的化合物进行偶合反应获得；
Figure FDA0002388977720000032
Z为卤素。
10.如权利要求1-9任一所述的一种NO供体的小分子化合物，其特征在于：作为ROCK激酶的抑制剂使用。
CN202010107800.9A 2020-02-21 2020-02-21 Rock激酶抑制剂的硝基氧衍生物 Active CN111217834B (zh)

Priority Applications (10)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010107800.9A CN111217834B (zh) 2020-02-21 2020-02-21 Rock激酶抑制剂的硝基氧衍生物
JP2021529083A JP7364258B2 (ja) 2020-02-21 2020-11-18 Ｒｏｃｋキナーゼ阻害剤のニトロキシド誘導体
AU2020403705A AU2020403705B2 (en) 2020-02-21 2020-11-18 Nitroxide derivative of rock kinase inhibitor
SG11202109516WA SG11202109516WA (en) 2020-02-21 2020-11-18 Nitroxide derivative of rock kinase inhibitor
KR1020217027931A KR20210134327A (ko) 2020-02-21 2020-11-18 Rock 키나아제 억제제의 니트로옥시 유도체
PCT/CN2020/129840 WO2021164351A1 (zh) 2020-02-21 2020-11-18 Rock激酶抑制剂的硝基氧衍生物
US17/298,676 US20220332726A1 (en) 2020-02-21 2020-11-18 Nitroxide derivative of rock kinase inhibitor
CA3132077A CA3132077A1 (en) 2020-02-21 2020-11-18 Nitroxide derivative of rock kinase inhibitor
EP20913089.7A EP3901156A4 (en) 2020-02-21 2020-11-18 NITROOXY DERIVATIVE OF ROCK KINASE INHIBITOR
IL285709A IL285709A (en) 2020-02-21 2021-08-18 Nitroxide derivative of rock conase inhibitor

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202010107800.9A CN111217834B (zh) 2020-02-21 2020-02-21 Rock激酶抑制剂的硝基氧衍生物

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN111217834A true CN111217834A (zh) 2020-06-02
CN111217834B CN111217834B (zh) 2021-10-26

Family

ID=70807677

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN202010107800.9A Active CN111217834B (zh) 2020-02-21 2020-02-21 Rock激酶抑制剂的硝基氧衍生物

Country Status (10)

Country Link
US (1) US20220332726A1 (zh)
EP (1) EP3901156A4 (zh)
JP (1) JP7364258B2 (zh)
KR (1) KR20210134327A (zh)
CN (1) CN111217834B (zh)
AU (1) AU2020403705B2 (zh)
CA (1) CA3132077A1 (zh)
IL (1) IL285709A (zh)
SG (1) SG11202109516WA (zh)
WO (1) WO2021164351A1 (zh)

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021115495A1 (zh) * 2019-12-12 2021-06-17 维眸生物科技（上海）有限公司 一种小分子含硫杂环化合物
WO2021164351A1 (zh) * 2020-02-21 2021-08-26 维眸生物科技（上海）有限公司 Rock激酶抑制剂的硝基氧衍生物
WO2021227897A1 (zh) * 2020-05-12 2021-11-18 中国药科大学 一种一氧化氮供体型netarsudil衍生物及其制备方法和用途
CN114184693A (zh) * 2021-10-14 2022-03-15 重庆医科大学 4-羟苯乙酸作为标志物在制备脓毒症脑病的诊断试剂盒中的应用

Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023143476A1 (en) * 2022-01-27 2023-08-03 Vivavision Biotech, Inc. Deuterated rock inhibitors, pharmaceutical compositions, and therapeutic applications

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2018138293A1 (en) * 2017-01-30 2018-08-02 Chiesi Farmaceutici S.P.A. Tyrosine amide derivatives as rho- kinase inhibitors

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TW200306819A (en) * 2002-01-25 2003-12-01 Vertex Pharma Indazole compounds useful as protein kinase inhibitors
ES2632808T3 (es) * 2014-09-04 2017-09-15 Nicox Science Ireland Compuestos de carnosina donadores de óxido nítrico
TWI705827B (zh) * 2014-11-07 2020-10-01 瑞士商諾華公司 治療眼部疾病之方法
CN111479568A (zh) * 2017-12-21 2020-07-31 参天制药株式会社 司培前列素与Rho激酶抑制剂的组合药物
CA3093963A1 (en) * 2018-03-14 2019-09-19 Aerie Pharmaceuticals, Inc. Amino-benzoisothiazole and amino-benzoisothiadiazole amide compounds
CA3108551A1 (en) * 2018-08-06 2020-02-13 Nicox S.A. Nitric oxide releasing phosphodiesterase type 5 inhibitor
CN111217834B (zh) * 2020-02-21 2021-10-26 维眸生物科技（上海）有限公司 Rock激酶抑制剂的硝基氧衍生物
CN111606852B (zh) * 2020-05-12 2022-02-11 中国药科大学 一种一氧化氮供体型Netarsudil衍生物及其制备方法和用途

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2018138293A1 (en) * 2017-01-30 2018-08-02 Chiesi Farmaceutici S.P.A. Tyrosine amide derivatives as rho- kinase inhibitors

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
FEI YUE, ZHANG YIHUA;HUANG ZHANGJIAN: "Advance in Selective/Targeted Nitric Oxide Releasing Strategies", PROGRESS IN PHARMACEUTICAL SCIENCES, vol. 43, no. 11, 25 November 2019 (2019-11-25), CN, pages 804 - 816, XP055838401, ISSN: 1001-5094 *
GUOYAN G. XU, TANVI M. DESHPANDE, MOHINI S. GHATGE, AKUL Y. MEHTA, ABDEL SATTAR M. OMAR, MOSTAFA H. AHMED, JURGEN VENITZ, OSHEIZA : "Design, Synthesis, and Investigation of Novel Nitric Oxide (NO)-Releasing Prodrugs as Drug Candidates for the Treatment of Ischemic Disorders: Insights into NO-Releasing Prodrug Biotransformation and Hemoglobin−NO Biochemistry", BIOCHEMISTRY, vol. 54, no. 49, 15 December 2015 (2015-12-15), pages 7178 - 7192, XP055387964, ISSN: 0006-2960, DOI: 10.1021/acs.biochem.5b01074 *

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2021115495A1 (zh) * 2019-12-12 2021-06-17 维眸生物科技（上海）有限公司 一种小分子含硫杂环化合物
WO2021164351A1 (zh) * 2020-02-21 2021-08-26 维眸生物科技（上海）有限公司 Rock激酶抑制剂的硝基氧衍生物
WO2021227897A1 (zh) * 2020-05-12 2021-11-18 中国药科大学 一种一氧化氮供体型netarsudil衍生物及其制备方法和用途
CN114184693A (zh) * 2021-10-14 2022-03-15 重庆医科大学 4-羟苯乙酸作为标志物在制备脓毒症脑病的诊断试剂盒中的应用
CN114184693B (zh) * 2021-10-14 2023-10-13 重庆医科大学 4-羟苯乙酸作为标志物在制备脓毒症脑病的诊断试剂盒中的应用

Also Published As

Publication number Publication date
CA3132077A1 (en) 2021-08-26
JP7364258B2 (ja) 2023-10-18
CN111217834B (zh) 2021-10-26
KR20210134327A (ko) 2021-11-09
SG11202109516WA (en) 2021-09-29
IL285709A (en) 2021-10-31
EP3901156A1 (en) 2021-10-27
WO2021164351A1 (zh) 2021-08-26
AU2020403705A1 (en) 2021-09-09
AU2020403705B2 (en) 2023-01-12
US20220332726A1 (en) 2022-10-20
JP2022530590A (ja) 2022-06-30
EP3901156A4 (en) 2022-03-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN111217834B (zh) Rock激酶抑制剂的硝基氧衍生物
CN113614080B (zh) Kras g12c抑制剂化合物及其用途
JP6797464B2 (ja) Ｈｉｖ複製阻害作用を有する含窒素３環性誘導体
CN104822687B (zh) 抗纤维化吡啶酮类
JP4324221B2 (ja) Ｐｐａｒアゴニスト活性を有する誘導体
CN108884029A (zh) Lsd1抑制剂
WO2022166890A1 (zh) 取代的哒嗪苯酚类衍生物
WO2012176763A1 (ja) 新規インダゾール誘導体
CN107001271A (zh) 羟基脒类衍生物、其制备方法及其在医药上的应用
CN113330009A (zh) 氮杂环化合物、其制备方法及用途
WO2022121517A1 (zh) 一种苄胺或苄醇衍生物及其用途
KR100337579B1 (ko) 사람 면역결핍성 바이러스(hiv) 프로테아제 억제제를 제조하는 방법
UA45317C2 (uk) Спосіб одержання інгібіторів віл-протеази, проміжні сполуки та спосіб їх отримання
CN102464608B (zh) 化合物及其作为l-型钙通道阻滞剂或/和乙酰胆碱酯酶抑制剂的应用
CN112979675A (zh) 一种小分子含硫杂环化合物
CN111233661B (zh) 靶向泛素化降解ERRα蛋白的化合物及其药用组合物和应用
WO2017167183A1 (zh) 二芳基-β-内酰胺类化合物及其制备方法和在制药中的用途
EP3919474B1 (en) Hbv inhibitor and use thereof
CN109153667A (zh) 新型钾通道抑制剂
WO2021117759A1 (ja) 含窒素芳香族複素環式基を有するヒストン脱アセチル化酵素阻害剤
CN115066417A (zh) 凝血因子XIa抑制剂
CN115594622A (zh) 一种吡咯磺酰类衍生物、及其制备方法与应用
CN117143176A (zh) 降解sos1蛋白的化合物及其用途
TW202409046A (zh) 氧雜氮雜環庚三烯衍生物
CN117143175A (zh) 靶向sos1蛋白泛素化调节的化合物及其制备方法和应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
CP03 Change of name, title or address
CP03 Change of name, title or address

Address after: 325006, Room 4020, Building B, Gene Medicine Valley North District, Ouhai District, Wenzhou City, Zhejiang Province

Patentee after: Weimu Biotechnology (Zhejiang) Co.,Ltd.

Address before: Room 207, 209, building 5, 334 Edison Road, China (Shanghai) pilot Free Trade Zone, Pudong New Area, Shanghai, 200120

Patentee before: VIVAVISION BIOPHARMA (SHANGHAI) Co.,Ltd.