CN114184693B - 4-羟苯乙酸作为标志物在制备脓毒症脑病的诊断试剂盒中的应用 - Google Patents

4-羟苯乙酸作为标志物在制备脓毒症脑病的诊断试剂盒中的应用 Download PDF

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Abstract

本发明涉及医学技术领域，尤其涉及4‑羟苯乙酸作为标志物在制备脓毒症脑病及其相关性疾病的诊断、患病程度评估和/或预后评估的试剂盒中的应用。本发明首次发现4‑羟苯乙酸与脓毒症脑病的发生发展相关，通过定量检测4‑羟苯乙酸，可对脓毒症脑病进行诊断、患病程度评估和预后评估，检测对象为血清、全血或血样样本，检测方法简单易操作，具有良好的应用前景。

Description

4-羟苯乙酸作为标志物在制备脓毒症脑病的诊断试剂盒中的 应用
技术领域
本发明涉及医学技术领域，尤其涉及4-羟苯乙酸作为标志物在制备脓毒症脑病的诊断试剂盒中的应用。
背景技术
脓毒症是由感染引起的全身炎症反应失控导致的多器官功能障碍，是重症监护室中的常见致命性疾病，具有高发病率(30-70％)及死亡率(16-65％)的特点。脓毒症可引起多器官功能能障碍，而脓毒症相关性脑病或脓毒症脑病(Sepsis associatedencephalopathy,SAE)作为严重脓毒症的并发症之一，指在神经系统没有确切感染证据下，由全身炎症引起的弥漫性脑功能障碍综合征。然而脓毒症脑病发病机制复杂，具体发病机制仍不清楚，目前较为接受的病理生理机制为神经递质和氨基酸异常、脑血流改变及血液微循环障碍、炎症反应及氧化应激损伤。并且脓毒症脑病患者临床表现多样，神经系统异常表现从注意力下降、嗜睡等到严重的癫痫、谵妄、昏迷均有可能出现，临床表现的多样化可能影响患者早期诊断及治疗。尽管相关研究显示动态脑电图、格拉斯哥昏迷指数的评估(GCS评分)及颅脑核磁共振检测(MRI)等方式可对患者神经系统损害进行评估和判断，但由于重症监护室内重症患者常常需要镇静镇痛、机械辅助通气等治疗，均在一定程度上影响了脓毒症脑病的早期诊治。
4-羟苯乙酸隶属于苯基碳酸，具有生物刺激活性，在病原微生物和人的整合中共享代谢和信号通路，影响细菌和真核细胞，4-羟苯乙酸还能在肺组织中减少缺氧、炎症、血管渗漏和水肿，并降低HIF-1α蛋白水平，从另一侧面说明4-羟苯乙酸在感染免疫过程中的作用。因此，通过4-羟苯乙酸制备脓毒症脑病早期诊断及预后评估检测试剂盒，可在临床应用中了解患者病情发展情况，并予以早期干预及监测随访。
发明内容
为了解决现有技术中的问题，本发明的目的在于提供检测4-羟苯乙酸的试剂在制备诊断、患病程度评估和/或预后评估的试剂盒中的应用。
本发明通过检测脓毒症患者及根据GCS评分分级的脓毒症脑病患者血浆，经气相色谱GC-MS进行代谢组学分析，明确在脓毒症脑病患者中4-羟苯乙酸与脓毒症脑病严重程度存在相关性。通过监测患者血清4-羟苯乙酸的改变，可以实现早期诊断脓毒症脑病、评估脓毒症脑病严重程度、评估患者预后。
其中，所述脓毒症脑病相关性疾病为感染性腹泻、急性膀胱炎、尿道感染、骨盆骨折、转子间骨折、急性肾盂肾炎、溃疡性结肠炎、蜂窝组织炎、上呼吸道感染、支气管扩张伴感染、支气管扩张伴感染、肺炎、吸入性肺炎、慢性支气管炎急性发作或肺挫伤中的一种或多种并发症。
所述脓毒症脑病相关性疾病为脓毒症脑病引起的意识障碍和/或行为改变，所述意识障碍包括注意力下降、性格改变、言语不清、定向定位异常、计算能力改变、嗜睡、癫痫、谵妄、昏迷中的至少一种；行为改变包括四肢肌力肌张力改变、活动范围减小、活动方式受限、生理反射减少中的至少一种。
本发明中，所述检测的样本为血清样本、全血样本或血浆样本。
本发明还提供一种脓毒症相关性脑病的诊断、患病程度评估和/或预后评估的试剂盒，包括盒体和检测4-羟苯乙酸的试剂。
本发明提供的试剂盒包括化学发光免疫试剂盒、荧光免疫试剂盒、酶联免疫反应试剂盒。
本发明提供的试剂盒中，所述检测4-羟苯乙酸的试剂包括4-羟苯乙酸溴化反应试剂和显色液。
一些实施方案中，所述试剂盒的盒体上设有检测带管槽、试剂槽、观察槽，所述检测4-羟苯乙酸的试剂包被在检测带上。根据检测带显色情况确定评估患者血清4-羟苯乙酸含量，进而实现脓毒症脑病的早期诊断、脓毒症脑病严重程度的评估和患者预后评估。
一些实施方案中，本发明提供的试剂盒，其盒体为树脂材料。
特别是在急诊和/或重症护理医学情况下。根据本发明，通过检测4-羟苯乙酸的水平，能够进行正确的临床决策，有效治疗或控制疾病的发生发张。这样的临床决策还包括通过处理或治疗脓毒症脑病的药物疗法进行的进一步治疗。同时，利用本发明能够对重症患者镇静镇痛过程中与脓毒症脑病引起神经系统异常表现进行鉴别，同时指导镇静镇痛药物的使用。
本发明也涉及划分患者危险度的方法，特别是划分患者的危险度用于临床决策，优选在重症医学或急诊医学中的临床决策方面——其中意识障碍程度是关键。
根据本发明的一个实施方案，进行诊断用于预防、用于鉴别诊断的早期识别和鉴别诊断的识别、用于评估严重程度和用于评估与肺源性急性肺损伤疾病的伴随疗法的过程评估。
本发明首次发现了4-羟苯乙酸与脓毒症脑病的发生发展相关。研究结果显示，脓毒症与健康对照血浆中代谢组学差异研究中发现4-羟苯乙酸存在显著统计学差异，在脓毒症中4-羟苯乙酸含量与健康对照相比明显升高，继而对诊断脓毒症脑病的脓毒症患者通过GCS评分对患者意识障碍严重程度进行分级比较，发现4-羟苯乙酸在血浆中含量随意识障碍加重而变化，4-羟苯乙酸作为脓毒症脑病的特异诊断标记物，在用于制备诊断脓毒症脑病的诊断工具中具有明显的用途和良好的应用前景。而4-羟苯乙酸在脓毒症脑病意识障碍加重后呈现的含量下降的特点，可通过4-羟苯乙酸血浆含量的随访评估对脓毒症脑病患者意识障碍严重程度进行评估，同时指导镇静镇痛药物使用。
附图说明
图1是对脓毒症患者和健康对照进行气相色谱分析代谢产物，通过T检验展示出存在统计学差异的代谢产物情况；
图2是通过Anova检验后，各组间存在统计学意义的代谢产物热图；
图3是在不同程度GCS评分下，均具有统计学意义的代谢产物图；
图4是本发明临床血清4-羟苯乙酸的快速检测试剂盒组装后的结构示意图；
图5是本发明4-羟苯乙酸的快速检测试剂盒拆分后的结构示意图；
图6为空白对照组(样本为生理盐水)检测结果；
图7为健康人血清样本检测结果；
图8为中轻度脓毒症脑病患者血清检测结果；
图9为重度脑病患者血清结果。
具体实施方式
本发明提供了4-羟苯乙酸作为标志物在制备脓毒症脑病的诊断试剂盒中的应用。本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的方法及应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文的方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
本发明采用的试材皆为普通市售品，皆可于市场购得。
下面结合实施例，进一步阐述本发明：
实施例1
选取2015年10月-2016年2月重庆医科大学附属第一医院重症监护室Sepsis患者31例，选取重庆医科大学附属第一医院体检中心健康对照23例，采取离体血清标本以气相色谱方法检测脓毒症患者与健康对照血清代谢产物。并运用T检验对代谢产物进行统计学分析，筛选出124种代谢产物具有差异。
检测结果图1。气相色谱共检测出代谢产物222种，其中124中代谢产物具有统计学意义，结果显示：4-羟苯乙酸在脓毒症患者血清中显著升高。
综上，通过重症监护室临床病例检测发现，相比健康志愿者脓毒症患者中，4-羟苯乙酸的含量显著升高，说明4-羟苯乙酸可作为标志物取区分患者和健康人。
实施例2
根据已收集的31例脓毒症患者的相关临床指标，对继发脓毒症脑病的患者入院1小时内进行GCS评分，并根据GCS评分对患者意识障碍程度进行分级。其中GCS＝15分为组1，GCS为14～12为组2，GCS为11～9为组3，GCS为8～3为组4。根据图2-3可知，通过Anova检验对血清中代谢产物进行统计学分析，检测结果：实验中4种代谢产物在4组中均具有较高统计学差异，其中4-羟苯乙酸在组1、组2、组3中均有明显升高，而在组4中有显著下降。
综上，4-羟苯乙酸在血清中含量与患者意识障碍程度有差异，可通过4-羟苯乙酸含量的定量或定性检测，可评估患者意识障碍程度。因此，本实验通过对4-羟苯乙酸的含量评估脓毒症脑病严重程度提供了相关依据。
实施例3
本研究发明运用溴化反应原理，通过Br2,AcOH溶剂浸泡的玻璃纤维纸与血清中4-羟苯乙酸在室温下可发生溴化反应，反应时间为5分钟，有甲基红、溴甲酚绿、百里酚蓝这三种显色剂进行显色。
请参阅图4，本发明提供以下技术方案：一种血清4-羟苯乙酸检测试剂盒，包括盒体1、盒盖2、检测带3；盒体1和盒盖2通过轴4相互连接，盒体1内部排列设置有检测带管槽5、检测带6，在盒体2上设置有试剂槽7、观察槽8。
本发明的工作原理及使用流程：本试剂盒在使用时，检测人员可将离心后的血清样本通过滴管加入试剂槽7，等待检测带6与血清中4-羟苯乙酸反应，5-6分钟后，可与观察槽8中观察颜色变化并记录。
实施例4
1.采集患者静脉血3ml，置于离心管中，冰上静置2小时至血液充分凝固；
2.血液凝固后将样本置于离心机中，300G加速度，4度离心10分钟至血液分层后采集上层血清；
3.离心后的血清样本通过滴管加入试剂槽7，等待检测带6与血清中4-羟苯乙酸反应，5-6分钟后，于观察槽8中观察颜色变化并与比色卡做对照；
4、结果大于等于3提示脓毒症脑病，颜色越深表示疾病越严重。
按照以上方法对5例健康患者、7中轻度患者和4重度脑病患者进行检测，脑病患者大于等于3，且重度脑病患者大于等于5，接近6，检测结果与样本实际情况一致，能够快速简便的初步区分健康人和患者，并且对疾病的严重程度具有一定指示作用。其中，一些样本的结果见图6～图9，依次为空白对照、健康人血清、轻度脑病患者和重度脑病患者的检测结果。
由图6～9可以看出，空白样本与比色卡的条带1颜色还要浅，健康人血清样本的检测结果接近条带2，中轻度患者的检测结果接近条带3，介于条带3和4之间，重度患者的检测结果接近条带6。以上结果表明，本发明试剂盒可快速简便的初步区分健康人与脑病患者，并且对疾病的严重程度具有一定的指示作用。
以上仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (3)

1.一种脓毒症相关性脑病的诊断、患病程度评估和/或预后评估的试剂盒，其特征在于，包括盒体和检测4-羟苯乙酸的试剂；
所述检测4-羟苯乙酸的试剂包括4-羟苯乙酸溴化反应试剂和显色液；
所述4-羟苯乙酸溴化反应试剂包括Br2和AcOH溶剂；
所述显色液中包括甲基红、溴甲酚绿和百里酚蓝。
2.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括化学发光免疫试剂盒、荧光免疫试剂盒、酶联免疫检测试剂盒。
3.根据权利要求1所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的盒体上设有检测带管槽、试剂槽、观察槽，所述检测4-羟苯乙酸的试剂包被在检测带上。
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