WO2021115495A1 - 一种小分子含硫杂环化合物 - Google Patents

一种小分子含硫杂环化合物 Download PDF

Info

Publication number
WO2021115495A1
WO2021115495A1 PCT/CN2021/073564 CN2021073564W WO2021115495A1 WO 2021115495 A1 WO2021115495 A1 WO 2021115495A1 CN 2021073564 W CN2021073564 W CN 2021073564W WO 2021115495 A1 WO2021115495 A1 WO 2021115495A1
Authority
WO
WIPO (PCT)
Prior art keywords
compound
reaction
substituted
reaction solution
yield
Prior art date
Application number
PCT/CN2021/073564
Other languages
English (en)
French (fr)
Inventor
沈旺
党奎峰
张超
陈春明
单立弘
丁文
王鑫
糜佳晨
孙亚波
盛夏鑫
沈家磊
李勇
Original Assignee
维眸生物科技（上海）有限公司
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 维眸生物科技（上海）有限公司 filed Critical 维眸生物科技（上海）有限公司
Publication of WO2021115495A1 publication Critical patent/WO2021115495A1/zh

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D495/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D495/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D495/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A61P27/06—Antiglaucoma agents or miotics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/12—Antihypertensives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D275/00—Heterocyclic compounds containing 1,2-thiazole or hydrogenated 1,2-thiazole rings
    • C07D275/04—Heterocyclic compounds containing 1,2-thiazole or hydrogenated 1,2-thiazole rings condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Definitions

  • the present invention relates to the field of small molecule compounds, in particular to a small molecule sulfur-containing heterocyclic compound and its application for treating glaucoma.
  • Rho-related coiled-coil protein kinase belongs to the AGC (PKA/PKG/PKC) family of serine-threonine kinases.
  • AGC PKA/PKG/PKC
  • ROCK-I ROCK-II
  • ROK ⁇ ROCK-II
  • Rho belongs to the small molecule monomer GTPase superfamily and is a mammalian gene homologue of the Ras superfamily. It regulates cell muscle through its most important downstream effector molecule Rho kinase (Rho-associated coiled-coil containing protein kinase, ROCK)
  • Rho kinase Rho-associated coiled-coil containing protein kinase, ROCK
  • the reorganization of the kinesin skeleton is widely involved in a series of biological processes such as cell mitosis, cytoskeleton adjustment, smooth muscle cell contraction, nerve regeneration, tumor cell infiltration, and regulation of apoptosis. After activation, Rho/ROCK can act on a variety of substrates, resulting in biological processes.
  • MLC myosin light chain
  • MLCP myosin light chain phosphatase
  • the phosphorylation level of MLC is an important factor in determining the degree of smooth muscle contraction.
  • Myosin light chain kinase (MLCK) phosphorylates the Ser-19 site of MLC, leading to smooth muscle contraction; inhibition of MLCP can further enhance the phosphorylation of MLC and the contraction of smooth muscle.
  • ROCK can phosphorylate MLC to produce myofilament contraction; at the same time, it can phosphorylate MLCP to inactivate MLCP, leading to increased phosphorylation of MLC in the cell cytoplasm, which indirectly promotes myofilament contraction.
  • Rho kinase activity in animal models shows a variety of benefits in the treatment of human diseases, including cardiovascular diseases such as pulmonary hypertension, hypertension, atherosclerosis, cardiac hypertrophy, high intraocular pressure, cerebral ischemia, cerebral vasospasm, etc. , And central nervous system disorders such as neuronal degeneration, and tumors.
  • cardiovascular diseases such as pulmonary hypertension, hypertension, atherosclerosis, cardiac hypertrophy, high intraocular pressure, cerebral ischemia, cerebral vasospasm, etc.
  • central nervous system disorders such as neuronal degeneration, and tumors.
  • ROCK expression and activity are elevated in spontaneously hypertensive rats, indicating that it is associated with the occurrence of hypertension in these animals (Involvement of Rho-kinase in hypertensive vascular disease: a novel therapeutic target in hypertension. FASEB J .,2001,15(6):1062-4).
  • ROCK inhibitor Y-27632 can significantly reduce blood pressure in three rat hypertension models (spontaneous hypertension, renal hypertension, and deoxycorticosterone acetate salt-type hypertension), but has a greater effect on blood pressure in control rats.
  • Small Calcium sensitization of smooth muscle mediated by a Rho-associated protein kinase in hypertension[J].Nature,1997,389(6654):990-4).
  • ROCK inhibitors have a good effect on pulmonary hypertension (Acute vasodilator effects of a Rho-kinase inhibitor, fasudil in patients with severe pulmonary hypertension. Heart, 2005:91(3):391-2).
  • ROCK activity is an important signal transmission mechanism in leukocyte-platelet-endothelial interaction, leukocyte extravasation and edema.
  • Excessive activation of Rho kinase in endothelial cells can cause leakage caused by the destruction of cell-cell junctions that facilitate recruitment of inflammatory cells.
  • these evidences point to the role of ROCK in pathological conditions related to acute and chronic inflammation and autoimmune diseases (Isoform-specific targeting of ROCK proteins in immune cells. Small GTPases. 2016; 7(3): 173-177 ).
  • Fasudil's inhibitory effect on T-cell migration may expand its clinical application as a new therapy for multiple sclerosis (Therapeutic potential of experimental autoimmune encephalomyelitis by Fasudil, a Rho kinase inhibitor. J Neurosci Res. 2010; 88(8) :1664-72). Accumulated evidence has also confirmed that ROCK plays a key role in the three disease factors that regulate the pathogenesis of inflammatory bowel disease (IBD): destruction of the intestinal barrier, exposure of intestinal contents to mucosal immune cells, and abnormal immune response ( Role of Rho kind signal pathway in inflammatory bowel disease. Int J ClinExp Med. 2015; 8(3): 3089-3097).
  • IBD inflammatory bowel disease
  • Rhopressa netarsudil
  • the purpose of the present invention is to provide a new type of inhibitor with high activity on ROCK kinase and its preparation method and application.
  • the present invention provides a sulfur-containing heterocyclic compound characterized in that it is a compound represented by the following structural formula or its stereoisomers, geometric isomers, tautomers, racemates, deuterated isotopes Derivatives, hydrates, solvates, metabolites and pharmaceutically acceptable salts or prodrugs;
  • ring A is aryl or heteroaryl
  • B is a bicyclic heteroaryl group, containing one N atom and one stream atom;
  • R 1 is any one or several substituted hydrogen, hydroxy, halogen, amino, cyano, substituted or unsubstituted alkyl, substituted or unsubstituted alkoxy, substituted or unsubstituted heteroalkyl on the G2 ring;
  • R 2 is any one or several substituted hydrogen, halogen, cyano, substituted or unsubstituted alkyl, substituted or unsubstituted alkoxy on the G1 ring;
  • R 3 and R 4 are each independently selected from hydrogen, substituted or unsubstituted alkyl, and substituted or unsubstituted cycloalkyl;
  • R 3 and R 4 are connected to form a substituted or unsubstituted cycloheteroalkyl group
  • R 5 is any one or several substituted hydrogen, hydroxy, halogen, amino, cyano, substituted or unsubstituted alkyl, substituted or unsubstituted alkoxy, substituted or unsubstituted heteroalkyl on the A ring.
  • the preferred structure can be:
  • R 6 is selected from substituted or unsubstituted alkyl, substituted or unsubstituted aryl, substituted or unsubstituted heteroaryl, substituted or unsubstituted alkoxy, NR A R B ;
  • R A and R B is independently selected from substituted or unsubstituted alkyl group, or R A and R B are connected to form a substituted or unsubstituted cycloheteroalkyl.
  • substituted or unsubstituted heteroalkyl refers to: on the basis of the above-mentioned substituted or unsubstituted alkyl, one or more carbon atoms on the carbon chain are replaced by oxygen, sulfur, and nitrogen.
  • substituted cycloalkyl means that one or more hydrogen atoms on the ring of the cyclic group are substituted by other groups, and the other groups referred to herein can be alkyl, substituted alkyl (same as above), halogen ( F, Cl, Br, I) , carboxy, cyano (-CN), sulfonyl (-SO 2 R a, R a is an alkyl group, an aryl group, etc.), an alkynyl group (-C ⁇ CH, -C ⁇ CR b , R b is alkyl, aryl, etc.), amide group (-C(O)NR x R y , R x R y is hydrogen, alkyl, aryl, etc.), ester group (-C(O)OR z , R z is an alkyl group, an aryl group, etc.), an aryl group, a heteroaryl group, etc., or one or more carbons on the
  • substituted or unsubstituted heterocycloalkyl refers to: on the basis of the above-mentioned substituted or unsubstituted cycloalkyl, one or more carbon atoms on the ring are replaced by oxygen, sulfur, and nitrogen.
  • the substituted alkoxy in the present invention refers to alkoxy ( n is selected from 0 or any natural number, m is a natural number including 0) one or more of the hydrogen atoms on the carbon chain are replaced by other groups, and the other groups referred to herein may be cycloalkyl groups (similar to in Any hydrogen atom on the cycloalkyl ring can also be substituted by halogen, cyano, alkyl, hydroxyl, carboxyl and other groups), heterocycloalkyl (ie, in the aforementioned cycloalkyl On the basis of, at least one carbon atom on the alkyl ring is replaced by oxygen, sulfur, and nitrogen), halogen (F, Cl, Br, I), carboxyl, cyano (-CN), sulfonyl (-SO 2 R a, R a is an alkyl group, an aryl group, etc.), an alkynyl group (-C ⁇ CH, -C ⁇ CR b, R b
  • the above-mentioned sulfur-containing heterocyclic compound, or its stereoisomer, or its pharmaceutically acceptable salt, or its solvate, or its prodrug, or its metabolite, used in the preparation of ROCK inhibitors The medicine is used to prepare medicines for the treatment of cardiovascular diseases, ocular hypertension, pulmonary hypertension, and glaucoma.
  • the specific method is: using the above-mentioned compound, or its stereoisomer, or its pharmaceutically acceptable salt, or its solvate, or its prodrug, or its metabolite as the active ingredient, plus pharmaceutically acceptable Preparations prepared from the excipients.
  • the present invention also provides a method for preparing the above sulfur-containing heterocyclic derivative, which is characterized in that the specific reaction equation is as follows:
  • Re is selected from an alkyl group
  • Prot is an amine protecting group
  • the compounds shown in formula IV-1 and IV-2 can be directly purchased or obtained by known common synthetic methods.
  • Formula IV-1 and Formula IV-2 can be heated at 30-150°C under alkaline conditions (such as K 2 CO 3 , or DBU, etc.) to obtain the compound shown in Formula IV-3.
  • the formula IV-3 is hydrolyzed (such as with NaOH in methanol and water solvent) to convert to the acid shown in formula IV-4. Curtius rearrangement of the acid shown in formula IV-4 to obtain the amine shown in formula IV-5.
  • Prot is an amine protecting group.
  • the compound shown in Formula Interm B can be synthesized by known methods (such as US2007/112019, Journal of Medicinal Chemistry, 2003, vol.46, p.3354-3370, US2002/86891, etc. (Disclosed method of distribution).
  • the compound shown by the formula Interm B is reacted with trifluoromethanesulfonic anhydride under basic conditions (such as triethylamine, pyridine) to obtain the compound shown by the formula V-1.
  • the compound shown in V-1 is amination reaction catalyzed by palladium to obtain the compound shown in formula V-2. Hydrolysis of V-2 yields the compound shown in formula V-3.
  • the compound shown in Formula V-3 and Interm A is reacted to obtain the compound shown in Formula V-4.
  • Deprotection gives the compound shown in formula IIIb1, which is mono- or di-alkylated to form the compound shown in formula IIIb2.
  • Step A Methyl 2-(4-(((tert-butyldimethylsilyl)oxy)methyl)phenyl)acetate (Compound 1.1)
  • reaction was quenched by adding water, extracted with ethyl acetate (20 mL ⁇ 3), the organic phases were combined, washed with saturated brine (50 mL), the organic phase was dried over anhydrous sodium sulfate, filtered, spin-dried, and purified by column chromatography to obtain the product 1.1 ( 8.1g, yield: 98%).
  • Step B 2-(4-(((tert-butyldimethylsilyl)oxy)methyl)phenyl)-3-(1,3-dioxoisoindolin-2-yl) Methyl propionate (compound 1.2)
  • Dissolve compound 1.1 (3.0g, 10.2mmol) in 10mL of anhydrous tetrahydrofuran, replace with nitrogen, cool to -78°C with dry ice acetone, and slowly dropwise add lithium hexamethyldisilazide (1.0M, 12.2mL, 12.2mmol) ), after the dropwise addition is complete, the system is stirred at -78°C for 1 hour, N-bromomethylphthalimide (2.9g, 12.2mmol) is dissolved in 10mL tetrahydrofuran, and slowly added dropwise to the system to control The dropping temperature was lower than -70°C, and after the dropping, the reaction was kept at -78°C and stirred for 3 hours.
  • Step C 2-((2-(4-(((tert-butyldimethylsilyl)oxy)methyl)phenyl)-2-carboxyethyl)carbamoyl)benzoic acid (compound 1.3 )
  • Step D 2-(4-(((tert-butyldimethylsilyl)oxy)methyl)phenyl)-3-(1,3-dioxoisoindolin-2-yl) Propionic acid (compound 1.4)
  • reaction solution was diluted with water, extracted with dichloromethane (20mL ⁇ 3), the organic phases were combined, washed with saturated brine (50mL), the organic phase was dried over anhydrous sodium sulfate, filtered, spin-dried, and purified by column chromatography to obtain the product 1.4 (1.5 g, yield: 46%).
  • Step E 2-(4-(((tert-butyldimethylsilyl)oxy)methyl)phenyl)-3-(1,3-dioxoisoindolin-2-yl)- N-(1H-Indazol-6-yl)propionamide (Compound 1.5)
  • reaction was quenched by adding water, extracted with ethyl acetate (20 mL ⁇ 3), the organic phases were combined, washed with saturated brine (50 mL), the organic phase was dried over anhydrous sodium sulfate, filtered, spin-dried, and purified by column chromatography to obtain the product 1.5 ( 50mg, yield: 39%).
  • Step F 3-(1,3-dioxoisoindolin-2-yl)-2-(4-(hydroxymethyl)phenyl)-N-(1H-indazol-6-yl)propane Amide (Compound 1.6)
  • Step G 3-Amino-2-(4-(hydroxymethyl)phenyl)-N-(1H-indazol-6-yl)propionamide (Compound 1)
  • Step B Benzo[d]isothiazole-6-ol (Compound 2.2)
  • Step C Benzo[d]isothiazol-6-yl trifluoromethanesulfonate (Compound 2.3)
  • Step D N-(Diphenylmethylene)benzo[d]isothiazole-6-amine (Compound 2.4)
  • Step F N-(benzo[d]isothiazol-6-yl)-3-(1,3-dioxoisoindolin-2-yl)-2-(p-tolyl)propionamide (compound 2.6)
  • Step G 3-Amino-N-(benzo[d]isothiazol-6-yl)-2-(p-tolyl)propionamide (Compound 2)
  • Step A (Z)-N-((5-Bromothiophen-2-yl)methylene)-2,2-dimethoxyethylamine (Compound 3.1)
  • Step B ((5-Bromothiophen-2-yl)(dimethoxyphosphoryl)methyl)(2,2-dimethoxyethyl)carbamate (Compound 3.2)
  • Step D N-(Diphenylmethylene)thieno[2,3-c]pyridine-2-amine (Compound 3.4)
  • Step E Thieno[2,3-c]pyridine-2-amine (Compound 3.5)
  • Step F 3-(1,3-dioxoisoindolin-2-yl)-N-(thieno[2,3-c]pyridin-2-yl)-2-(p-tolyl)propane Amide (Compound 3.6)
  • Step G 3-Amino-N-(thieno[2,3-c]pyridin-2-yl)-2-(p-tolyl)propionamide (Compound 3)
  • Step A 1-(2-(Benzyloxy)-2-oxoethyl)-4-methylpyridine-1-ium (Compound 4.1)
  • Step B Benzyl 2-(4-methyl-5,6-dihydropyridine-1(2H)-yl)acetate (Compound 4.2)
  • Step C Benzyl 3-(1,3-dioxoisoindolin-2-yl)-2-(4-methyl-5,6-dihydropyridine-1(2H)-yl)propionate (Compound 4.3)
  • Step D 2-((2-carboxy-2-(4-methyl-5,6-dihydropyridine-1(2H)-yl)ethyl)carbamoyl)benzoic acid (compound 4.4)
  • Step E 3-(1,3-dioxoisoindolin-2-yl)-2-(4-methyl-5,6-dihydropyridine-1(2H)-yl)propionic acid (compound 4.5)
  • Step F 3-(1,3-dioxoisoindolin-2-yl)-N-(isoquinolin-6-yl)-2-((4-methyl-5,6-dihydro Pyridine-1(2H)-yl)methyl)propionamide (Compound 4.6)
  • Step G 3-Amino-N-(isoquinolin-6-yl)-2-((4-methyl-5,6-dihydropyridine-1(2H)-yl)methyl)propionamide (compound 4)
  • Step B 3-(1,3-dioxoisoindolin-2-yl)-2-(4-methyl-2-oxopyridine-1(2H)-yl)propionic acid methyl ester (compound 5.2)
  • Step C 2-((2-Carboxy-2-(4-methyl-2-oxopyridine-1(2H)-yl)ethyl)carbamoyl)benzoic acid (Compound 5.3)
  • Step D 3-(1,3-dioxoisoindolin-2-yl)-2-(4-methyl-2-oxopyridine-1(2H)-yl)propionic acid (Compound 5.4)
  • Step E 3-(1,3-dioxoisoindolin-2-yl)-N-(isoquinolin-6-yl)-2-(4-methyl-2-oxopyridine-1 (2H)-yl)propionamide (Compound 5.5)
  • Step F 3-Amino-N-(isoquinolin-6-yl)-2-(4-methyl-2-oxopyridine-1(2H)-yl)propionamide (Compound 5)
  • Methyl p-chlorophenylacetate (3g, 16.2mmol) was dissolved in 30mL tetrahydrofuran solution, and the temperature was reduced to minus 78°C under nitrogen protection. , LiHMDS (29.2ml, 29.2mmol) was added dropwise, stirred for 1 hour, bromoacetonitrile (1.7ml, 24.32mmol) was dissolved in 10mL tetrahydrofuran solution, added dropwise to the reaction solution, and stirred for 2 hours.
  • Step B 6-(4-chlorophenyl)-4-azaspiro[2.4]heptan-5-one (Compound 6.2)
  • Step C 6-(4-Chlorophenyl)-5-oxo-4-azaspiro[2.4]heptane-4-carboxylic acid tert-butyl ester (Compound 6.3)
  • Step D 3-(1-((tert-butoxycarbonyl)amino)cyclopropyl)-2-(4-chlorophenyl)propionic acid (Compound 6.4)
  • Step E tert-Butyl (1-(2-(4-chlorophenyl)-3-(isoquinolin-6-ylamino)-3-oxopropyl)cyclopropyl)carbamate (Compound 6.5)
  • Step F tert-Butyl (1-(3-(isoquinolin-6-ylamino)-3-oxo-2-phenylpropyl)cyclopropyl)carbamate (Compound 6.6)
  • Step G 3-(1-Aminocyclopropyl)-N-(isoquinolin-6-yl)-2-phenylpropionamide (Compound 6)
  • Step A 4-Chlorothieno[2,3-C]pyridine-2-carboxylic acid methyl ester (Compound 7.1)
  • Step B (4-Chlorothieno[2,3-C]pyridine-2-carboxylic acid (Compound 7.2)
  • Step C 4-Chlorothieno[2,3-c]pyridine-2-amine (Compound 7.3)
  • Step D N-(4-Chlorothieno[2,3-c]pyridin-2-yl)-3-(1,3-dioxoisoindolin-2-yl)-2-(p-toluene Base) propionamide (compound 7.4)
  • Step E 3-Amino-N-(4-chlorothieno[2,3-c]pyridin-2-yl)-2-(p-tolyl)propionamide (Compound 7)
  • Step A 2-(4-(Bromomethyl)phenyl)acetic acid (Compound 8.1)
  • Step D Methyl 2-(4-(((triisopropylsilyl)oxy)methyl)phenyl)acetate (Compound 8.4)
  • Step E 2-(4-(((Triisopropylsilyl)oxy)methyl)phenyl)acetic acid (Compound 8.5)
  • Step F (R)-4-benzyl-3-(2-(4-(((triisopropylsilyl)oxy)methyl)phenyl)acetyl)oxazolidin-2-one ( Compound 8.6)
  • Step G 2-((S)-3-((R)-4-benzyl-2-oxooxazolidin-3-yl)-3-oxo-2-(4-((( ⁇ (Propylsilyl)oxy)methyl)phenyl)propyl)isoindoline-1,3-dione (compound 8.7)
  • Dissolve compound 8.6 (44g, 91.3mmol) in anhydrous tetrahydrofuran (500mL), replace with nitrogen, cool to -78°C with dry ice acetone, slowly add LiHMDS (1M, 109mL) dropwise, continue at -78°C after the addition is complete
  • LiHMDS LiHMDS
  • N-bromomethylphthalimide (26.3g, 109.6mmol)
  • anhydrous tetrahydrofuran 200mL
  • the temperature of the addition is lower than -70°C.
  • the reaction is kept at -78°C and stirred for 3 hours. The temperature is naturally raised to room temperature and stirred overnight.
  • the reaction is extracted with saturated aqueous ammonium chloride (400 mL), and the aqueous layer is acetic acid. Extract with ethyl acetate (300mL X 3), combine the organic layers, wash sequentially with saturated brine (300mL), dry with anhydrous sodium sulfate, filter, and spin dry to obtain a yellow solid, which is recrystallized with ethyl acetate/petroleum ether system , A solid precipitated, filtered, the filter cake was washed with petroleum ether (100 mL), and spin-dried to obtain compound 8.7 (32 g, yield: 55%, white solid).
  • Step H (S)-2-((2-carboxy-2-(4-(((triisopropylsilyl)oxy)methyl)phenyl)ethyl)carbamoyl)benzoic acid ( Compound 8.8)
  • Step I (S)-3-(1,3-dioxoisoindolin-2-yl)-2-(4-(((triisopropylsilyl)oxy)methyl)benzene Base) propionic acid (compound 8.9)
  • Step J (S)-3-(1,3-dioxoisoindolin-2-yl)-N-(thieno[2,3-c]pyridin-2-yl)-2-(4 -(((Triisopropylsilyl)oxy)methyl)phenyl)propionamide (Compound 8.10)
  • Step K (S)-3-(1,3-dioxoisoindolin-2-yl)-2-(4-(hydroxymethyl)phenyl)-N-(thieno[2,3 -c)pyridin-2-yl)propionamide (compound 8.11)
  • Step L (S)-3-amino-2-(4-(hydroxymethyl)phenyl)-N-(thieno[2,3-c]pyridin-2-yl)propionamide (Compound 8)
  • Step A Using benzo[d]isothiazole-6-amine instead of thieno[2,3-c]pyridin-2-amine in step A of Example 8, compound 9.1 was synthesized.
  • Step B Using Step B in Example 8 to synthesize compound 9.2.
  • Step C Using Step C in Example 8, Example 9 was synthesized.
  • Step A 2-(4-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)phenyl)acetic acid (compound 10.1)
  • Step B Benzyl 2-(4-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)phenyl)acetate (Compound 10.2)
  • Dissolve compound 10.1 (5.78g, 21.70mmol) in 100mL N,N-dimethylformamide, cool the solution to 0°C, add potassium carbonate (3.6g, 26.04mmol) and benzyl bromide (4.45g, 26.04mmol) ), the reaction solution was stirred at room temperature for 2 hours.
  • Step C Benzyl 2-(4-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)phenyl)-3-(1,3-dioxoisoindolin-2-yl)propionate (Compound 10.3)
  • Step D 2-(4-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)phenyl)-3-(1,3-dioxoisoindolin-2-yl)propionic acid (compound 10.4)
  • Step E 2-(4-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)phenyl)-3-(1,3-dioxoisoindolin-2-yl)-N-( Thieno[2,3-c]pyridin-2-yl)propionamide (Compound 10.5)
  • Dissolve compound 10.4 (600mg, 1.41mmol) in 20mL N,N-dimethylformamide, add diisopropylethylamine (276mg, 2.11mmol), 2-(7-benzotriazole oxide)- N,N,N",N'-tetramethylurea hexafluorophosphate (648mg, 1.69mmol), and thieno[2,3-c]pyridine-2-amine (233mg, 1.55mmol).
  • the reaction solution is in Stir for 2 hours at 25°C under nitrogen protection.
  • Step F 3-(1,3-dioxoisoindolin-2-yl)-2-(4-hydroxyphenyl)-N-(thieno[2,3-c]pyridin-2-yl ) Propionamide (Compound 10.6)
  • Step G 3-Amino-2-(4-hydroxyphenyl)-N-(thieno[2,3-c]pyridin-2-yl)propionamide (Compound 10)
  • Step B Methyl 4-fluorothieno[2,3-C]pyridine-2-carboxylate (Compound 11.2)
  • Step D 4-Fluorothieno[2,3-c]pyridine-2-amine (Compound 11.4)
  • Step E N-(4-fluorothieno[2,3-c]pyridin-2-yl)-3-(1,3-dioxoisoindolin-2-yl)-2-(p-toluene Base) propionamide (compound 11.5)
  • Step F 3-Amino-N-(4-fluorothieno[2,3-c]pyridin-2-yl)-2-(p-tolyl)propionamide (Compound 11)
  • Methyl 2-(4-bromophenyl)acetate (11.0g, 48.0mmol), potassium trifluoro(vinyl) borate (7.7g, 57.6mmol) and cesium carbonate (31.3g, 96.0mmol) were dissolved in 200mL of tetrahydrofuran And 20 mL of water, then add bis(triphenylphosphine) palladium dichloride (674 mg, 0.96 mmol), and react overnight at 85°C under nitrogen protection. LCMS monitored the reaction to be complete.
  • Step B Methyl 2-(4-(2-hydroxyethyl)phenyl)acetate (Compound 12.2)
  • reaction was quenched by adding water, extracted with ethyl acetate (50 mL ⁇ 3), the organic phases were combined, washed with saturated brine (100 mL), the organic phase was dried over anhydrous sodium sulfate, filtered, spin-dried, and purified by column chromatography to obtain the product 12.2 ( 1.5g, yield: 39%).
  • Step C Methyl 2-(4-(2-((triisopropylsilyl)oxy)ethyl)phenyl)acetate (Compound 12.3)
  • Step D 3-(1,3-dioxoisoindolin-2-yl)-2-(4-(2-((triisopropylsilyl)oxy)ethyl)phenyl) Methyl propionate (Compound 12.4)
  • TLC monitored the raw material reaction to be complete.
  • the reaction was quenched by adding saturated ammonium chloride solution (10 mL), extracted with ethyl acetate (20 mL ⁇ 3), and washed with saturated brine (50 mL). It was dried with anhydrous sodium sulfate, filtered, spin-dried, and purified by column chromatography to obtain product 12.4 (1.0 g, yield: 33%).
  • Step E 2-((2-carboxy-2-(4-(2-((triisopropylsilyl)oxy)ethyl)phenyl)ethyl)carbamoyl)benzoic acid (Compound 12.5 )
  • Step F 3-(1,3-dioxoisoindolin-2-yl)-2-(4-(2-((triisopropylsilyl)oxy)ethyl)phenyl) Propionic acid (Compound 12.6)
  • Step G 3-(1,3-dioxoisoindolin-2-yl)-N-(thieno[2,3-c]pyridin-2-yl)-2-(4-(2- ((Triisopropylsilyl)oxy)ethyl)phenyl)propionamide (compound 12.7)
  • Step H 3-(1,3-dioxoisoindolin-2-yl)-2-(4-(2-hydroxyethyl)phenyl)-N-(thieno[2,3-c )Pyridin-2-yl)propionamide (compound 12.8)
  • Step A tert-Butyl (2-(4-hydroxyphenyl)-3-oxo-3-(thieno[2,3-c]pyridin-2-ylamino)propyl)carbamate (Compound 13.1)
  • Step B (2-(4-(3-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)propoxy)phenyl)-3-oxo-3-(thieno[2,3- c)Pyridin-2-ylamino)propyl)tert-butyl carbamate (Compound 13.2)
  • Step C 3-Amino-2-(4-(3-hydroxypropoxy)phenyl)-N-(thieno[2,3-c]pyridin-2-yl)propionamide (Compound 13)
  • Step A (2-(4-(2,3-Dihydroxypropoxy)phenyl)-3-oxo-3-(thieno[2,3-c]pyridin-2-ylamino)propyl ) Tert-butyl carbamate (Compound 14.1)
  • Step B 3-Amino-2-(4-(2,3-dihydroxypropoxy)phenyl)-N-(thieno[2,3-c]pyridin-2-yl)propionamide (Compound 14 )
  • Step A 2-(4-(3-((tert-butoxycarbonyl)amino)-1-oxo-1-(thieno[2,3-c]pyridin-2-ylamino)propan-2- (Phenoxy) dimethyl malonate (Compound 15.1)
  • Step B (2-(4-((1,3-Dihydroxypropan-2-yl)oxy)phenyl)-3-oxo-3-(thieno[2,3-c]pyridine-2 -Ylamino)propyl)tert-butyl carbamate (compound 15.2)
  • Step C 3-Amino-2-(4-((1,3-dihydroxyprop-2-yl)oxy)phenyl)-N-(thieno[2,3-c]pyridin-2-yl ) Propionamide (Compound 15)
  • Step B 5-Chloro-6-methoxybenzo[d]isothiazole (Compound 16.2)
  • Step D 5-Chlorobenzo[d]isothiazol-6-yl trifluoromethanesulfonate (Compound 16.4)
  • Step E 5-Chloro-N-(diphenylmethylene)benzo[d]isothiazole-6-amine (Compound 16.5)
  • Step F 5-Chlorobenzo[d]isothiazole-6-amine (Compound 16.6)
  • Step G N-(5-Chlorobenzo[d]isothiazol-6-yl)-3-(1,3-dioxoisoindolin-2-yl)-2-(p-tolyl)propane Amide (Compound 16.7)
  • reaction solution was directly spin-dried in vacuo, transferred to a reaction flask with anhydrous pyridine (4 mL), and compound 51.6 (13 mg, 0.071 mmol) was added, followed by stirring at 80 degrees Celsius for 8 hours under a nitrogen atmosphere.
  • reaction solution was spin-dried directly in vacuo, the residue was dissolved in ethyl acetate (20 mL), the organic phase was washed with 1 mol/L dilute hydrochloric acid and saturated brine, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered, spin-dried, and purified by column chromatography. Then the product 16.7 (20mg, yield: 65%, purity: 95%) was obtained.
  • Step B Methyl 2-(4-(2,2-dimethyl-1,3-dioxolane-4-yl)phenyl)acetate (Compound 17.2)
  • Step C 2-(4-(2,2-Dimethyl-1,3-dioxolane-4-yl)phenyl)-3-(1,3-dioxoisoindoline-2 -Yl) methyl propionate (compound 17.3)
  • Step D 2-((2-carboxy-2-(4-(2,2-dimethyl-1,3-dioxolane-4-yl)phenyl)ethyl)carbamoyl)benzoic acid (Compound 17.4)
  • Step E 2-(4-(2,2-Dimethyl-1,3-dioxolan-4-yl)phenyl)-3-(1,3-dioxoisoindoline-2 -Yl) propionic acid (compound 17.5)
  • Step F 2-(4-(2,2-Dimethyl-1,3-dioxolan-4-yl)phenyl)-3-(1,3-dioxoisoindoline-2 -Yl)-N-(thieno[2,3-c]]pyridin-2-yl)propionamide (Compound 17.6)
  • Step G 2-(4-(1,2-Dihydroxyethyl)phenyl)-3-(1,3-dioxoisoindolin-2-yl)-N-(thieno[2, 3-c)pyridin-2-yl)propionamide (compound 52.7)
  • Step H 3-Amino-2-(4-(1,2-dihydroxyethyl)phenyl)-N-(thieno[2,3-c]pyridin-2-yl)propionamide (Compound 17)
  • Step A (2-(4-(2-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)ethoxy)phenyl)-3-oxo-3-(thieno[2,3- c)Pyridin-2-ylamino)propyl)tert-butyl carbamate (Compound 18.1)
  • Step B 3-Amino-2-(4-(2-hydroxyethoxy)phenyl)-N-(thieno[2,3-c]pyridin-2-yl)propionamide (Compound 18)
  • Step A 3-Amino-2-(4-((tert-butyldimethyl)oxy)phenyl)-N-(thieno[2,3-c]pyridin-2-yl)propionamide (compound 19.1)
  • Step B (2-(4-((tert-butyldimethylsilyl)oxy)phenyl)-3-oxo-3-(thieno[2,3-c]pyridin-2-yl (Amino)propyl)tert-butyl carbamate (Compound 19.2)
  • Step C tert-Butyl (2-(4-hydroxyphenyl)-3-oxo-3-(thieno[2,3-c]pyridin-2-ylamino)propyl)carbamate (Compound 19.3)
  • Step D 4-(3-((tert-butoxycarbonyl)amino)-1-oxo-1-(thieno[2,3-c]pyridin-2-ylamino)propan-2-yl)benzene Triflate (Compound 19.4)
  • Step E tert-Butyl (2-(4-allylphenyl)-3-oxo-3-(thieno[2,3-c]pyridin-2-ylamino)propyl)carbamate (compound 19.5)
  • Step F Tertiary (2-(4-(3-hydroxypropyl)phenyl)-3-oxo-3-(thieno[2,3-c]pyridin-2-ylamino)propyl)carbamate Butyl ester (Compound 19.6)
  • Step G 3-Amino-2-(4-(3-hydroxypropyl)phenyl)-N-(thieno[2,3-c]pyridin-2-yl)propionamide (Compound 19)
  • Step A Methyl 2-(4-(4-hydroxybut-1-yn-1-yl)phenyl)acetate (Object 20.1)
  • Step B Methyl 2-(4-(4-hydroxybutyl)phenyl)acetate (Compound 20.2)
  • Step C Methyl 2-(4-(4-((triisopropylsilyl)oxy)butyl)phenyl)acetate (Compound 20.3)
  • Step D 3-(1,3-dioxoisoindolin-2-yl)-2-(4-(4-((triisopropylsilyl)oxy)butyl)phenyl) Methyl propionate (Compound 20.4)
  • Step E 2-((2-carboxy-2-(4-(4-((triisopropylsilyl)oxy)butyl)phenyl)ethyl)carbamoyl)benzoic acid (Compound 20.5 )
  • Step F 3-(1,3-dioxoisoindolin-2-yl)-2-(4-(4-((triisopropylsilyl)oxy)butyl)phenyl) Propionic acid (Compound 20.6)
  • Step G 3-(1,3-dioxoisoindolin-2-yl)-N-(thieno[2,3-c]pyridin-2-yl)-2-(4-(4- ((Triisopropylsilyl)oxy)butyl)phenyl)propionamide (compound 20.7)
  • Step H 3-(1,3-dioxoisoindolin-2-yl)-2-(4-(4-hydroxybutyl)phenyl)-N-(thieno[2,3-c )Pyridin-2-yl)propionamide (compound 20.8)
  • Methyl 2-(4-bromophenyl)acetate (10g, 43.65mmol) was dissolved in 200mL of tetrahydrofuran and 20mL of water, potassium vinyl trifluoroborate (7g, 52.39mmol), cesium carbonate (28.6g, 87.31mmol) were added And bis(triphenylphosphine)palladium chloride (600mg, 0.87mmol), the reaction solution was stirred at 78°C under nitrogen protection for 16 hours.
  • reaction solution was cooled to room temperature, 100 mL of water was added to the reaction solution, extracted twice with ethyl acetate (400 mL), the organic phases were combined, and the organic phase was washed twice with saturated brine (100 mL), dried with anhydrous sodium sulfate, and filtered It was spin-dried and purified by column chromatography to obtain compound 21.1 (5.6 g, yield: 73%, colorless oil).
  • Step B 2-(4-(2-hydroxyethyl)phenyl)acetic acid (Compound 21.2)
  • Step D Methyl 2-(4-(2-((triisopropylsilyl)oxy)ethyl)phenyl)acetate (Compound 21.4)
  • Step E 2-(4-(2-((Triisopropylsilyl)oxy)ethyl)phenyl)acetic acid (Compound 21.5)
  • Step F 2-(4-(2-((Triisopropylsilyl)oxy)ethyl)phenyl)acetyl chloride (Compound 21.6)
  • Step G (R)-4-benzyl-3-(2-(4-(2-((triisopropylsilyl)oxy)ethyl)phenyl)acetyl)oxazolidine-2- Ketone (Compound 21.7)
  • Step H 2-((R)-3-((R)-4-benzyl-2-oxooxazolidin-3-yl)-3-oxo-2-(4-(2-(( (Triisopropylsilyl)oxy)ethyl)phenyl)propyl)isoindole-1,3-dione (compound 21.8)
  • Step I (R)-2-((2-carboxy-2-(4-(2-((triisopropylsilyl)oxy)ethyl)phenyl)ethyl)carbamoyl)benzene Formic acid (Compound 21.9)
  • Step J (R)-3-(1,3-dioxoisoindolin-2-yl)-2-(4-(2-((triisopropylsilyl)oxy)ethyl )Phenyl)propionic acid (compound 21.10)
  • reaction solution was adjusted to pH 4 with 1M hydrochloric acid solution, extracted twice with ethyl acetate (60 mL), the organic phases were combined, washed with saturated brine (30 mL) three times, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered, and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by column chromatography to obtain the product 21.10 (840 mg, yield: 89%, yellow oil).
  • Step K (S)-3-(1,3-dioxoisoindolin-2-yl)-N-(thieno[2,3-c]pyridin-2-yl)-2-(4 -(2-((Triisopropylsilyl)oxy))ethyl)phenyl)propionamide (Compound 21.11)
  • Step L (S)-3-(1,3-dioxoisoindolin-2-yl)-2-(4-(2-hydroxyethyl)phenyl)-N-(thieno[2 ,3-c)pyridin-2-yl)propionamide (compound 21.12)
  • Step M (S)-3-amino-2-(4-(2-hydroxyethyl)phenyl)-N-(thieno[2,3-c]pyridin-2-yl)propionamide (Compound 21 )
  • Step A (S)-3-(1,3-dioxoisoindolin-2-yl)-N-(4-fluorothieno[2,3-c]pyridin-2-yl)-2 -(4-(((Triisopropylsilyl))oxy)methyl)phenyl)propionamide (Compound 22.1)
  • Step B (S)-3-(1,3-dioxoisoindolin-2-yl)-N-(4-fluorothieno[2,3-c]pyridin-2-yl)-2 -(4-(hydroxymethyl)phenyl)propionamide (Compound 22.2)
  • Step C (S)-3-amino-N-(4-fluorothieno[2,3-c]pyridin-2-yl)-2-(4-(hydroxymethyl)phenyl)propionamide (compound twenty two)
  • Step B (R)-4-benzyl-3-(2-(p-tolyl)acetyl)oxazolidinebutan-2-one (Compound 23.2)
  • Step C 2-((R)-3-((R)-4-benzyl-2-oxooxazolidinebut-3-yl)-3-oxo-2-(p-tolyl)propyl ) Isoindoline-1,3-dione (compound 23.3)
  • Step D (R)-2-((2-Carboxy-2-(p-tolyl)ethyl)carbamoyl)benzoic acid (Compound 23.4)
  • Step E (R)-3-(1,3-Dioxyisoindol-2-yl)-2-(p-tolyl)propionic acid (Compound 23.5)
  • reaction solution was adjusted to pH 3 with 1M hydrochloric acid solution, extracted twice with ethyl acetate (100 mL), combined the organic phases, washed with saturated brine (50 mL) three times, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered, and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by column chromatography to obtain the product 23.5 (2.8 g, yield: 64%, white solid).
  • Step F (S)-3-(1,3-Dioxyisoindol-2-yl)-N-(thieno[2,3-c]pyridin-2-yl)-2-(p-tolyl ) Propionamide (Compound 23.6)
  • Dissolve compound 23.5 (600mg, 1.94mmol) in 30mL N,N-dimethylformamide, add diisopropylethylamine (664mg, 5.82mmol), 2-(7-benzotriazole oxide)- N,N,N",N'-tetramethylurea hexafluorophosphate (1.1g, 2.91mmol) and thieno[2,3-c]pyridine-2-amine (361mg, 1.94mmol). The reaction solution is in Stir at room temperature for 16 hours.
  • Step G (S)-3-amino-N-(thieno[2,3-c]pyridin-2-yl)-2-(p-tolyl)propionamide (Compound 23)
  • Step A (S)-3-(Dimethylamino)-N-(thieno[2,3-c]pyridin-2-yl)-2-(p-tolyl)propionamide (Compound 24)
  • Step A Methyl 2-(4-bromophenyl)-3-(1,3-dioxoisoindol-2-yl)propionate (Compound 25.1)
  • Step B 2-((2-(4-Bromophenyl)-2-carboxyethyl)carbamoyl)benzoic acid (Compound 25.2)
  • Step C 2-(4-Bromophenyl)-3-(1,3-dioxoisoindol-2-yl)propionic acid (Compound 25.3)
  • reaction solution was adjusted to pH 3 with 1M hydrochloric acid solution, extracted twice with ethyl acetate (60 mL), the organic phases were combined, washed with saturated brine (50 mL) three times, dried over anhydrous sodium sulfate, filtered, and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by column chromatography to obtain the product 25.3 (1.6 g, yield: 62%).
  • Step D 2-(4-Bromophenyl)-3-(1,3-dioxoisoindol-2-yl)-N-(thieno[2,3-c]pyridin-2-yl)propane Amide (Compound 25.4)
  • Dissolve compound 25.3 (1.0g, 2.67mmol) in 20mL N,N-dimethylformamide, add diisopropylethylamine (690mg, 8.02mmol), 2-(7-benzotriazole oxide) -N,N,N",N'-tetramethylurea hexafluorophosphate (1.53g, 4.01mmol) and thieno[2,3-c]pyridine-2-amine (440mg, 2.94mmol). Reaction solution Stir at room temperature for 2 hours.
  • Step E 3-Amino-2-(4-bromophenyl)-N-(thieno[2,3-c]pyridin-2-yl)propionamide (Compound 25.5)
  • Step F tert-Butyl (2-(4-bromophenyl)-3-oxo-3-(thieno[2,3-c]pyridin-2-ylamino)propyl)carbamate (Compound 25.6)
  • Step G 4-(3-((tert-butoxycarbonyl)amino)-1-oxo-1-(thieno[2,3-c]pyridin-2-ylamino)propan-2-yl)benzoic acid Methyl ester (Compound 25.7)
  • Step H Methyl 4-(3-amino-1-oxy-1-(thieno[2,3-c]pyridin-2-ylamino)prop-2-yl)benzoate (Compound 25)
  • Step A 4-(3-Amino-1-oxo-1-(thieno[2,3-c]pyridin-2-ylamino)prop-2-yl)benzoic acid (Compound 26)
  • Step A (S)-4-(3-(1,3-Dioxyisoindol-2-yl)-1-oxo-1-(thieno[2,3-c]pyridin-2-ylamino )Prop-2-yl)benzyl benzoate (Compound 27.1)
  • reaction was quenched by adding water, extracted with ethyl acetate (20 mL ⁇ 2), the organic phases were combined, washed with saturated brine (30 mL), the organic phase was dried over anhydrous sodium sulfate, filtered, spin-dried, and purified by column chromatography to obtain the product 27.1 ( 90 mg, yield: 92%).
  • Step B Benzyl (S)-4-(3-amino-1-oxo-1-(thieno[2,3-c]pyridin-2-ylamino)propan-2-yl)benzoate (Compound 27 )
  • Step A (S)-4-(3-((tert-butoxycarbonyl)amino)-1-oxo-1-(thieno[2,3-c]pyridin-2-ylamino)propan-2-yl )Benzyl dimethyl 2,4-benzoate (Compound 28.1)
  • Step B (S)-4-(3-Amino-1-oxo-1-(thieno[2,3-c]pyridin-2-ylamino)propan-2-yl)2,4-dimethyl Benzoate (Compound 28)
  • Step A (S)-4-(3-((tert-butoxycarbonyl)amino)-1-oxo-1-(thieno[2,3-c]pyridin-2-ylamino)prop-2-yl )Benzyl dimethyl 3,5-benzoate (Compound 29.1)
  • reaction was quenched by adding water, extracted with ethyl acetate (20mL ⁇ 2), the organic phases were combined, washed with saturated brine (10mL ⁇ 2), the organic phase was dried over anhydrous sodium sulfate, filtered, spin-dried, and purified by column chromatography to obtain the product 29.1 ( 96 mg, yield: 73%).
  • Step B (S)-4-(3-Amino-1-oxo-1-(thieno[2,3-c]pyridin-2-ylamino)propan-2-yl)3,5-dimethyl Benzoate (Compound 29)
  • the final concentration of each component of the ROCK2 reaction is: ROCK2: 1nM, substrate: 500nM, ATP: 6uM, and the final concentration range of the test compound is: 100nM-5pM
  • ROCK2 kinase inhibitor activity (IC 50 ) of the compound detected by this method is as follows:
  • the cell activity (IC 50 ) of the compound detected by this method is as follows:

Abstract

本发明涉及一种含硫的杂环化合物，其特征在于：为由如下结构式（I）所示的化合物或其立体异构体，几何异构体，互变异构体，消旋体，氘代同位素衍生物，水合物，溶剂化物，代谢产物以及药学上可接受的盐或前药；该化合物可作为ROCK激酶抑制剂，包含这类抑制剂的组合物，特别是药物，以及这些抑制剂在治疗和预防疾病方面的用途。更具体地，这些化合物可用于治疗眼部疾病(如青光眼和视网膜疾病)。

Description

一种小分子含硫杂环化合物 技术领域
本发明涉及小分子化合物领域，具体地，涉及一种小分子含硫杂环化合物及其用于治疗青光眼的应用。
背景技术
Rho-相关的卷曲螺旋型蛋白激酶(ROCK)，属于丝氨酸-苏氨酸激酶的AGC(PKA/PKG/PKC)家族。已经描述了ROCK的两种人同种型，ROCK-I(也被称作p160ROCK或ROKβ)和ROCK-II(ROKα)是大约160kDa蛋白，其含有一个N-端Ser/Thr激酶结构域，继之以一个卷曲螺旋结构、一个普列克底物蛋白同源性结构域和在C-端处的一个富含半胱氨酸的区域(Multifunctional kinases in cell behaviour.Nat.Rev.Mol.CellBiol.2003(4):446-456)。
Rho属于小分子单聚体GTPase超家族，是Ras超家族的哺乳动物基因同系物，通过其下游最主要的效应分子Rho激酶(Rho-associated coiled-coil containing protein kinase，ROCK)，来调节细胞肌动蛋白骨架的重组，从而广泛参与细胞有丝分裂、细胞骨架调整、平滑肌细胞收缩、神经再生、肿瘤细胞浸润、细胞凋亡的调节等一系列生物学过程。Rho/ROCK激活后可以作用于多种底物，从而产生生物学过程。最主要的两种底物是肌球蛋白轻链(MLC)和肌球蛋白轻链磷酸酶(MLCP)，MLC的磷酸化水平是决定平滑肌收缩程度的一个重要因素。肌球蛋白轻链激酶(MLCK)磷酸化MLC的Ser-19位点，导致平滑肌收缩；MLCP的抑制可以使MLC的磷酸化和平滑肌的收缩进一步增强。ROCK被激活以后，本身可以将MLC磷酸化而发生肌丝收缩作用；同时也能将MLCP磷酸化，使MLCP失活，导致细胞胞浆内MLC磷酸化程度增高，间接促进肌丝收缩。
在动物模型中Rho激酶活性的抑制展现出治疗人类疾病的多种益处，包括心血管疾病如肺动脉高压、高血压、动脉粥样硬化、心脏肥大、高眼压、脑缺血、脑血管痉挛等，和中枢神经系统病症如神经元变性等，以及肿瘤。研究表明ROCK表达和活性在自发性高血压大鼠中有所升高，说明其与这些动物高血压的发生具有关联(Involvement of Rho-kinase in hypertensive vascular disease:a novel therapeutic target in hypertension.FASEB J.,2001,15(6):1062-4)。ROCK抑制剂Y-27632可使三种大鼠高血压模型(自发性高血压、肾性高血压、醋酸脱氧皮质酮盐型高血压)中的血压显著降低，而对对照大鼠的血压作用较小(Calcium sensitization of smooth muscle mediated by a Rho-associated protein kinase in hypertension[J].Nature,1997,389(6654):990-4)。也有研究表明ROCK抑制剂对肺动脉高压具有较好的作用(Acute vasodilator effects of a Rho-kinase inhibitor,fasudil in patients with severe pulmonary hypertension.Heart,2005:91(3):391-2)。
ROCK活性是白血球-血小板-内皮相互作用、白血球外渗和水肿中的重要信号传递机制。内皮细胞中Rho激酶的过度活化会造成有利于炎症细胞募集的细胞-细胞连接部的破坏所引起的泄漏。总之，这些证据指出了ROCK在与急性和慢性炎症有关的病理学状况以及自身免疫疾病中的作用(Isoform-specific targeting of ROCK proteins in immune cells.Small GTPases.2016；7(3):173-177)。ROCK抑制在类风湿性关节炎和狼疮的实验模型中的有益效果的得到动物实验的验证(Rho kinase inhibitors and their application to inflammatory disorders.Curr.Top.Med.Chem.2009(9)：704-723；Antinociceptive effects of AS1892802,a novel rho kinase inhibitor,in rat models of inflammatory and noninflammatory arthritis.J.Pharmacol.Exp.Ther.2010,334：955-963；Administration of fasudil,a ROCK inhibitor,attenuates disease in lupus-prone NZB/W F1 female mice.Lupus.2012；21(6):656-61)。法舒地尔对T-细胞迁移的抑制作用可能扩大它作为多发性硬化的新疗法的临床应用(Therapeutic potential of experimental autoimmune encephalomyelitis by Fasudil,a Rho kinase inhibitor.J Neurosci Res.2010；88(8):1664-72)。累积的证据也证实，ROCK在调节炎性肠病(IBD)的发病机制的3个疾病因素中起关键作用：肠屏障的破坏，肠内容物向粘膜免疫细胞的暴露，和异常的免疫应答(Role of Rho kinase signal pathway in inflammatory bowel disease.Int J ClinExp Med.2015；8(3):3089-3097)。
目前已上市的ROCK抑制剂药物有Asahi Kasei公司的Eril(适用于脑血管痉挛的治疗)；Kowa公司的Glanatec(适用于高眼压症和青光眼的治疗，仅在日本获批),美国Aerie公司的青光眼新药Rhopressa(netarsudil)2017年在美国获批用于治疗罹患开角型青光眼或高眼压的患者，降低他们的眼内压。 Rhopressa是一款全新的每日一次滴眼液。
因此，进行开发作用于ROCK的靶向小分子药物研究，得到活性更好、选择性更高、更低毒性和副作用、更经济的ROCK抑制剂，具有十分重要的社会和经济意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一种新型的对ROCK激酶有高活性的抑制剂及其制备方法和用途。
本发明提供了一种含硫的杂环化合物，其特征在于：为由如下结构式所示的化合物或其立体异构体，几何异构体，互变异构体，消旋体，氘代同位素衍生物，水合物，溶剂化物，代谢产物以及药学上可接受的盐或前药；
Figure PCTCN2021073564-appb-000001
其中，环A为芳基或杂芳基；
B为并环杂芳基，含一个N原子和一个流原子；
R 1为G2环上任一或任几取代的氢、羟基、卤素、氨基、氰基、取代或未取代的烷基、取代或未取代的烷氧基、取代或未取代的杂烷基；
R 2为G1环上任一或任几取代的氢、卤素、氰基、取代或未取代的烷基、取代或未取代的烷氧基；
R 3、R 4分别独立地选自氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的环烷基；
或者，R 3与R 4相连构成取代或未取代的环杂烷基；
R 5为A环上任一或任几取代的氢、羟基、卤素、氨基、氰基、取代或未取代的烷基、取代或未取代的烷氧基、取代或未取代的杂烷基。
其优选结构可以为：
Figure PCTCN2021073564-appb-000002
Figure PCTCN2021073564-appb-000003
上述R 6选自取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的烷氧基、NR AR B；
其中，R A和R B独立的选自取代或未取代的烷基、或R A和R B相连构成取代或未取代的环杂烷基。
在本发明中取代的烷基指烷基碳链上的氢原子中的一个或一个以上为其他基团所取代，此处所指的其他基团可以为羟基、环烷基(以类似于
Figure PCTCN2021073564-appb-000004
螺环，稠环等的形式进行取代，该环烷基环上的任何氢原子还可以为卤素、氰基、烷基、羟基、羧基等基团所取代(还可以为碳环上的一个或多个碳为C(＝O)所取代)、杂环烷基(即、在前述的环烷基的基础上，其烷基环上的至少一个碳原子为氧、硫、氮所替代)、卤素(F，Cl，Br，I)、羧基、氰基(-CN)、磺酰基(-SO 2R a，R a为烷基、芳基等)、炔基(-C≡CH，-C≡CR b，R b为烷基、芳基等)、酰胺基(-C(O)NR xR y，R xR y为烷基、芳基等)、酯基(-C(O)O-R z，R z为烷基、芳基等)、芳基、杂芳基等等基团，或碳链上的一个或多个碳为C(＝O)所取代；
在本发明中取代或未取代的杂烷基指：指在上述取代或未取代的烷基的基础上，其碳链上的一个或多个碳原子为氧、硫、氮所替代。
在本发明中取代的环烷基指环基环上的一个或多个氢原子为其他基团所取代，此处所指的其他基团可以为烷基、取代的烷基(同上)、卤素(F，Cl，Br，I)、羧基、氰基(-CN)、磺酰基(-SO 2R a，R a为烷基、芳基等)、炔基(-C≡CH，-C≡CR b，R b为烷基、芳基等)、酰胺基(-C(O)NR xR y，R xR y为氢、烷基、芳基等)、酯基(-C(O)O-R z，R z为烷基、芳基等)、芳基、杂芳基等等基团，或碳链上的一个或多个碳为C(＝O)所取代。
在本发明中取代或未取代的杂环烷基指：指在上述取代或未取代的环烷基的基础上，其环上的一个或多个碳原子为氧、硫、氮所替代。
在本发明中取代的烷氧基指烷氧基(
Figure PCTCN2021073564-appb-000005
n选自0或任何自然数，m为包括0的自然数)碳链上的氢原子中的一个或一个以上为其他基团所取代，此处所指的其他基团可以为环烷基(以类似于
Figure PCTCN2021073564-appb-000006
等的形式进行取代，该环烷基环上的任何氢原子还可以为卤素、氰基、烷基、羟基、羧基等基团所取代)、杂环烷基(即、在前述的环烷基的基础上，其烷基环上的至少一个碳原子为氧、硫、氮所替代)、卤素(F，Cl，Br，I)、羧基、氰基(-CN)、磺酰基(-SO 2R a，R a为烷基、芳基等)、炔基(-C≡CH，-C≡CR b，R b为烷基、芳基等)、酰胺基(-C(O)NR xR y，R xR y为氢、烷基、芳基等)、酯基(-C(O)O-R z，R z为烷基、芳基等)、芳基、杂芳基等等基团，或碳链上的一个或多个碳为C(＝O)所取代。
上述一种含硫的杂环化合物、或其立体异构体、或其药学上可接受的盐、或其溶剂合物、或其前体药物、或其代谢产物，用于制备ROCK抑制剂类药物，用于制备治疗心血管疾病、高眼压症、肺动脉高压、青光眼药物。
具体方法为：以上述化合物、或其立体异构体、或其药学上可接受的盐、或其溶剂合物、或其前体药物、或其代谢产物为活性成分，加上药学上可接受的辅料制备而成的制剂。
此外，本发明还提供了上述含硫杂环衍生物的制备方法，其特征在于，具体反应方程式如下：
Figure PCTCN2021073564-appb-000007
其中，Re选自烷基，Prot是胺基保护基团。
上述反应的具体过程可以为：如式IV-1和IV-2显示的化合物可以从直接购得，或通过已知的常见合成方法获得。式IV-1与式IV-2可以在碱性(如K 2CO 3，或DBU等)条件下加热30-150℃反应获得式IV-3显示的化合物。式IV-3水解(如用NaOH在甲醇和水溶剂中)转化成式IV-4显示的酸。式IV-4显示的酸进行Curtius重排获得式IV-5所显示的胺。式IV-5所显示的胺和中间体IntermA(合成见US2009/186917，Bioorg Med Chem Let,2016,26(10)：2475–2480，US2010/22585)偶合反应形成式IV-6所显示的化合物。脱保护得到式IIa1显示的化合物。式IIa1进行单一或双烷基化形成式IIa2所显示的化合物。
Figure PCTCN2021073564-appb-000008
Prot是胺基保护基团。
上述反应的具体过程可以为：式Interm B所显示的化合物可以通过已知的方法合成得到(如US2007/112019，Journal of Medicinal Chemistry,2003,vol.46,p.3354–3370，US2002/86891等所披露发方法)。式Interm B所显示的化合物在碱性(如三乙胺，吡啶)条件下和三氟甲磺酸酐反应得到式V-1所显示的化合物。V-1所显示的化合物用钯催化的胺化反应得到式V-2所显示的化合物。水解V-2则得到式V-3所显示的化合物。式V-3和式Interm A显示的化合物反应得到式V-4所显示的化合物。脱保护得到式IIIb1所显示对化合物，式IIIb1进行单或双烷基化形成式IIIb2所显示的化合物。
具体实施方式
在下述实施例中进一步详细公开了一些实施方案，这些实施例并不意图以任何方式限制所述权利要求的范围。
实施例1
Figure PCTCN2021073564-appb-000009
3-氨基-2-(4-(羟甲基)苯基)-N-(1H-吲唑-6-基)丙酰胺
具体反应方程式如下所示：
Figure PCTCN2021073564-appb-000010
步骤A：2-(4-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)苯基)乙酸甲酯(化合物1.1)
将2-(4-(羟甲基)苯基)乙酸甲酯(5.0g,27.8mmol)和咪唑(2.8g,41.7mmol)溶于50mL的N，N-二甲基甲酰胺中，然后加入叔丁基二甲基氯硅烷(5.0g,33.4mmol)，在室温下反应过夜。TLC监测反应完全。加入水淬灭反应，用乙酸乙酯(20mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(50mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物1.1(8.1g，产率：98％)。
步骤B：2-(4-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)苯基)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)丙酸甲酯(化合物1.2)
将化合物1.1(3.0g,10.2mmol)溶于10mL无水四氢呋喃中,氮气置换，干冰丙酮降温至-78℃，缓慢滴加六甲基二硅基胺基锂(1.0M，12.2mL,12.2mmol),滴加完成后体系于-78℃搅拌1小时，将N-溴甲基邻苯二甲酰亚胺(2.9g,12.2mmol)溶于10mL四氢呋喃中，慢慢滴加到体系中，控制滴加温度低于-70℃，滴加结束后反应保持在-78℃下搅拌3小时，TLC监测反应完全。加入饱和氯化铵溶液淬灭反应，用乙酸乙酯(20mLX3)萃取，有机相用饱和食盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物1.2(3.6g,产率：78％)。
步骤C：2-((2-(4-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)苯基)-2-羧乙基)氨基甲酰基)苯甲酸(化合物1.3)
将化合物1.2(3.6g,8.0mmol)溶于100mL四氢呋喃和30mL水中,在0℃下加入氢氧化锂一水合物(1.0g,24.0mmol)，于0℃下搅拌3小时，LCMS监测反应完全。减压蒸出有机溶剂，用1M的盐酸水溶液调pH至3-4，然后用乙酸乙酯(20mLX3)萃取，用饱和食盐水(50mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干得粗产物1.3(3.4g，产率：93％)。LCMS ESI(+)m/z：458.2(M+1).
步骤D：2-(4-(((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)甲基)苯基)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)丙酸(化合物1.4)
将化合物1.3(3.4g,7.4mmol)，1-羟基苯并三唑(0.9g,7.4mmol)和三乙胺(2.2g,22.2mmol)溶于10mL二氯甲烷中,氮气保护，降温至0℃，然后向反应液中加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(1.4g,7.4mmol)，搅拌一段时间，反应液变澄清，缓慢升温至室温，反应过夜。TLC监测反应完全。加水稀释反应液，用二氯甲烷(20mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(50mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物1.4(1.5g,产率：46％)。
步骤E：2-(4-(((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)甲基)苯基)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-N-(1H-吲唑-6-基)丙酰胺(化合物1.5)
将化合物1.4(100mg,0.23mmol)溶于2mL的N，N-二甲基甲酰胺中，然后依次加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(61mg,0.32mmol),4-二甲氨基吡啶(39mg,0.32mmol)和6-氨基吲唑(36mg,0.27mmol)，在室温下反应2小时。TLC监测反应完全。加入水淬灭反应，用乙酸乙酯(20mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(50mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物1.5(50mg，产率：39％)。
步骤F：3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-2-(4-(羟基甲基)苯基)-N-(1H-吲唑-6-基)丙酰胺(化合物1.6)
将化合物1.5(50mg,0.09mmol)溶于5mL四氢呋喃中，然后加入5mL盐酸水溶液(1.0M)，在室温下反应30分钟。LCMS监测反应完全。反应完后加入饱和碳酸氢钠溶液中和，然后用乙酸乙酯(20mLX3)萃取，合并有机相，用饱和的食盐水(50mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干得到粗产物1.6(15mg，产率：33％)。LCMS ESI(+)m/z:441.1(M+1).
步骤G：3-氨基-2-(4-(羟甲基)苯基)-N-(1H-吲唑-6-基)丙酰胺(化合物1)
将化合物1.6(15mg,0.03mmol)溶于2mL甲胺乙醇溶液中，在室温下反应2小时。LCMS监测反应完全。待反应完后，减压浓缩反应液，剩余物溶于2mL的甲醇中，过滤，滤液用反相制备纯化，冻干后得到目标产物实施例1(9.2mg，产率：77％)。LCMS ESI(+)m/z:311.1(M+1).
实施例2
Figure PCTCN2021073564-appb-000011
3-氨基-N-(苯并[d]异噻唑-6-基)-2-(对甲苯基)丙酰胺
具体反应方程式如下所示：
Figure PCTCN2021073564-appb-000012
步骤A：6-甲氧基苯并[d]异噻唑(化合物2.1)
将2-氟-4-甲氧基苯甲醛(20.0g,130.0mmol)溶于50mL2-甲氧基乙醇中，然后加入硫(4.1g,130.0mmol)和50mL氨水，在160℃下反应2小时。LCMS监测反应完全。加入水稀释反应液，用二氯甲烷(50mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(100mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物16.1(12.7g，产率：59％)。LCMS ESI(+)m/z:166.0(M+1).
步骤B：苯并[d]异噻唑-6-醇(化合物2.2)
将化合物2.1(12.7g,77.0mmol)溶于100mL二氯甲烷中，然后在0℃下慢慢滴加三溴化硼(14.5mL,154.0mmol)，在室温下反应5小时。TLC监测反应完全。反应完全后将反应液慢慢倒入冰水中，用二氯甲烷(50mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(100mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干得到粗产物2.2(11.5g，产率：98％)。
步骤C：苯并[d]异噻唑-6-基三氟甲磺酸盐(化合物2.3)
将化合物2.2(11.5g,76.0mmol)溶于二氯甲烷中，在-78℃下滴加二异丙基乙胺(48mL,129.0mmol)和三氟甲磺酸酐(20mL,114.0mmol),使反应在-78℃下反应1小时。LCMS监测反应完全。加入饱和氯化铵淬灭反应，用二氯甲烷(50mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(100mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物2.3(8.1g，产率：38％)。LCMS ESI(+)m/z:284.0(M+1).
步骤D：N-(二苯基亚甲基)苯并[d]异噻唑-6-胺(化合物2.4)
将化合物2.3(8.1g,28.6mmol),磷酸钾(9.1g,42.9mmol)，二苯甲酮亚胺(6.4g,35.8mmol)和2-二环己基磷-2,4,6-三异丙基联苯(2.7g,5.7mmol)溶于乙二醇二甲醚中，在氮气保护下加入三(二亚苄基丙酮)二钯(2.6g,2.8mmol)。在90℃和氮气保护下反应过夜。LCMS监测反应完全。加入水淬灭反应，用乙酸乙酯(50mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(100mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物2.4(8.4g，产率：93％)。LCMS ESI(+)m/z:315.1(M+1).
步骤E：苯并[d]异噻唑-6-胺(化合物2.5)
将化合物2.4(8.4g,26.7mmol)溶于50mL四氢呋喃中，在室温下加入50mL盐酸水溶液(2.0M)。在室温下反应过夜。LCMS监测反应完全。反应完后用乙酸乙酯萃取除去杂质，水相用饱和碳酸氢钠中和，用乙酸乙酯(50mLX3)萃取，合并有机层，用饱和食盐水(100mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤、旋干，得到粗产物2.5(1.5g，产率：37％)。LCMS ESI(+)m/z:151.0(M+1).
步骤F：N-(苯并[d]异噻唑-6-基)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-2-(对甲苯基)丙酰胺(化合物2.6)
将3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-2-(对甲苯基)丙酸(62mg,0.20mmol)溶于5mL的N，N-二甲基甲酰胺中，然后依次加入2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(114mg,0.30mmol)和N，N-二异丙基乙胺(52mg,0.40mmol)，在室温下搅拌5分钟，再加入化合物18.5(36mg,0.24mmol)，在室温下反应2小时。LCMS监测反应完全。反应完后加入水淬灭反应，用乙酸乙酯(10mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(20mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物2.6(82mg，产率：93％)。LCMS ESI(+)m/z:442.1(M+1)。
步骤G：3-氨基-N-(苯并[d]异噻唑-6-基)-2-(对甲苯基)丙酰胺(化合物2)
将化合物2.6(82mg,0.18mmol)溶于5mL甲胺乙醇溶液中，在室温下反应2小时。LCMS监测反应完全。待反应完后，减压浓缩反应液，剩余物溶于2mL的甲醇中，过滤，滤液用反相制备纯化，冻干后得到目标产物实施例2(1.3mg，产率：2％)。LCMS ESI(+)m/z:312.1(M+1).
实施例3
Figure PCTCN2021073564-appb-000013
3-氨基-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)-2-(对甲苯基)丙酰胺
具体反应方程式如下所示：
Figure PCTCN2021073564-appb-000014
步骤A：(Z)-N-((5-溴噻吩-2-基)亚甲基)-2,2-二甲氧基乙胺(化合物3.1)
将5-溴噻吩-2-甲醛(1.0g,5.2mmol)和氨基乙醛二甲基缩醛(546mg,5.2mmol)溶于10mL甲苯中，加热回流3小时，并用分水器除去反应生成的水，TLC监测反应完全，将反应液减压浓缩得到粗产物3.1(1.4g，产率：100％)。
步骤B：((5-溴噻吩-2-基)(二甲氧基磷酰基)甲基)(2,2-二甲氧基乙基)氨基甲酸乙酯(化合物3.2)
将化合物3.1(1.4g,5.2mmol)溶于10mL四氢呋喃中，在冰盐浴下滴加氯甲酸甲酯(561mg,5.2mmol)，搅拌5分钟后去掉冰盐浴，在室温下加入亚磷酸三甲酯(645mg,5.2mmol)，在室温下反应过夜。TLC监测反应完全，减压浓缩得到粗产物3.2(2.4g，产率：100％)。
步骤C：2-溴噻吩并[2,3-c]吡啶(化合物17.3)
将化合物3.2(2.4g，5.2mmol)溶于10mL二氯甲烷中，在冰浴下慢慢滴加四氯化钛(3.5mL，31.2mmol)，在40℃下反应24小时。LCMS监测反应完全，反应完后将反应液慢慢倒入20mL冰水和10mL氨水混合物中， 用硅藻土过滤除去反应生成的二氧化钛，并用二氯甲烷洗涤滤饼，滤液用二氯甲烷(50mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(100mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物3.3(583mg，产率：52％)。LCMS ESI(+)m/z:213.9(M+1，215.9(M+1)).
步骤D：N-(二苯基亚甲基)噻吩并[2,3-c]吡啶-2-胺(化合物3.4)
将化合物3.3(583mg，2.7mmol)，二苯甲酮亚胺(579mg，3.2mmol),1,1'-联萘-2,2'-双二苯膦(336mg，20mol％)和叔丁醇钾(365mg，3.8mmol)溶于10mL甲苯中，在氮气保护下加入三(二亚苄基丙酮)二钯(247mg,10mol％)。在80℃和氮气保护下反应过夜。LCMS监测反应完全。将反应液减压浓缩柱层析纯化得产物3.4(471mg，产率：54％)。LCMS ESI(+)m/z:315.1(M+1).
步骤E：噻吩并[2,3-c]吡啶-2-胺(化合物3.5)
将化合物3.4(471mg,1.5mmol)溶于5mL四氢呋喃中，在室温下加入5mL盐酸水溶液(2M)。在室温下反应过夜。LCMS监测反应完全。反应完后用乙酸乙酯萃取除去杂质，水相用饱和碳酸氢钠中和，再用乙酸乙酯萃取，合并有机层，用饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥。过滤、旋干，得到粗产物3.5(153mg，产率：68％)。LCMS ESI(+)m/z:151.0(M+1).
步骤F：3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)-2-(对甲苯基)丙酰胺(化合物3.6)
将3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-2-(对甲苯基)丙酸(100mg,0.30mmol)溶于5mL的N，N-二甲基甲酰胺中，然后依次加入2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(171mg,0.45mmol)和N，N-二异丙基乙胺(77mg,0.60mmol)，在室温下搅拌5分钟，再加入化合物3.5(54mg,0.36mmol)，在室温下反应2小时。LCMS监测反应完全。反应完后加入水淬灭反应，用乙酸乙酯(10mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(20mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物3.6(92mg，产率：70％)。LCMS ESI(+)m/z:442.1(M+1).
步骤G：3-氨基-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)-2-(对甲苯基)丙酰胺(化合物3)
将化合物3.6(92mg,0.21mmol)溶于5mL甲胺乙醇溶液中，在室温下反应2小时。LCMS监测反应完全。待反应完后，减压浓缩反应液，剩余物溶于2mL的甲醇中，过滤，滤液用反相制备纯化，冻干后得到目标产物实施例3(38mg，产率：45％)。LCMS ESI(+)m/z:312.1(M+1).
实施例4
Figure PCTCN2021073564-appb-000015
3-氨基-N-(异喹啉-6-基)-2-(4-甲基-5,6-二氢吡啶-1(2H)-基)丙酰胺
具体反应方程式如下所示：
Figure PCTCN2021073564-appb-000016
步骤A：1-(2-(苄氧基)-2-氧代乙基)-4-甲基吡啶-1-鎓(化合物4.1)
将称量好的4-甲基吡啶(4g，42.95mmol)溶于120mL乙腈中，加入2-溴乙酸苄基酯(10.8g，47.25mmol)，反应液在85度和氮气保护下搅拌24小时。将反应液减压浓缩得到化合物4.1(10.4g，粗品，棕色油状物)。 LCMS ESI(+)m/z：242.1(M).
步骤B：2-(4-甲基-5,6-二氢吡啶-1(2H)-基)乙酸苄酯(化合物4.2)
将化合物4.1(10.4g，42.92mmol)溶于100mL乙醇中，然后在0度分批加入硼氢化钠(1.62g，42.92mmol)，反应液在室温搅拌3小时。向反应液中加入饱和氯化铵溶液40mL，然后用乙酸乙酯(100mL)萃取3次，合并有机相，有机相用饱和食盐水(50mL)洗涤3次，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，柱层析纯化后得到化合物4.2(5g，收率：48％，黄色油状物)。LCMS ESI(+)m/z：246.1(M+1).
步骤C：3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-2-(4-甲基-5,6-二氢吡啶-1(2H)-基)丙酸苄酯(化合物4.3)
将化合物4.2(3g，12.23mmol)溶于50mL无水四氢呋喃中，冷却至-78度，在氮气保护下，慢慢滴入双三甲基硅基胺基锂(13.4mL，1M)，在-78度搅拌0.5小时，然后向反应液中滴加N-溴甲基邻苯二甲酰亚胺(3.23g，13.45mmol)的四氢呋喃溶液30mL，在-78度搅拌2.5小时。用氯化铵饱和溶液(30mL)对反应进行淬灭，用乙酸乙酯(100mL)萃取2次，合并有机相，有机相用饱和食盐水(50mL)洗涤2次，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，柱层析纯化后得到化合物4.3(700mg，收率：14％，黄色油状物)。LCMS ESI(+)m/z：405.2(M+1).
步骤D：2-((2-羧基-2-(4-甲基-5,6-二氢吡啶-1(2H)-基)乙基)氨基甲酰基)苯甲酸(化合物4.4)
将化合物4.3(580mg，1.43mmol)溶解在15mL甲醇，15mL四氢呋喃和15mL水中，加入一水合氢氧化锂(240mg,5.72mmol)，反应液在50度搅拌2小时。向反应液中加入1M盐酸溶液至pH为3，然后将反应液减压浓缩得到产物4.4(500mg,粗品，黄色油状物)。LCMS ESI(+)m/z：333.1(M+1).
步骤E：3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-2-(4-甲基-5,6-二氢吡啶-1(2H)-基)丙酸(化合物4.5)
将化合物4.4(500mg，1.50mmol)溶解在30mLN,N-二甲基甲酰胺中，加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(570mg，3.0mmol)，1-羟基苯并三唑(405mg，3.0mmol)和三乙胺(608mg，6.0mmol)。反应液在室温搅拌2小时。将反应液用4M盐酸/甲醇溶液调节pH至4，减压浓缩，剩余物用柱层析和反向制备纯化得到产物4.5(130mg，产率：28％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z：315.1(M+1).
步骤F：3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-N-(异喹啉-6-基)-2-((4-甲基-5,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲基)丙酰胺(化合物4.6)
将化合物4.5(120mg，0.38mmol)溶解在20mLN,N-二甲基甲酰胺中，加入二异丙基乙胺(148mg，1.14mmol)，6-氨基异喹啉(66mg，0.45mmol)和50％1-丙基磷酸酐/N,N-二甲基甲酰胺(488mg，0.76mmol)。反应液在室温搅拌2小时。向反应液中加入水30mL，用乙酸乙酯(50mL)萃取2次，合并有机相，用饱和食盐水(30mL)洗2次，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，剩余物用柱层析纯化得到产物4.6(50mg，产率：29％，黄色油状物)。LCMS ESI(+)m/z：455.2(M+1).
步骤G：3-氨基-N-(异喹啉-6-基)-2-((4-甲基-5,6-二氢吡啶-1(2H)-基)甲基)丙酰胺(化合物4)
将化合物4.6(50mg,0.11mmol)溶解在4mL甲胺/乙醇中，反应液在45度搅拌1小时。将反应液减压浓缩，剩余物用反向制备纯化得到实施例4(30mg，产率：83％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z：325.2(M+1).
实施例5
Figure PCTCN2021073564-appb-000017
3-氨基-N-(异喹啉-6-基)-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)丙酰胺
具体反应方程式如下所示：
Figure PCTCN2021073564-appb-000018
步骤A：2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)乙酸甲酯(化合物5.1)
将称量好的化合物4-甲基吡啶-2(1H)-酮(600mg，5.5mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中，然后将溴乙酸甲酯(925mg，6.05mmol)，溴化锂(957mg，11mmol)和碳酸铯(2.15g，6.6mmol)加入到反应瓶中，反应液在75度下搅拌3小时。通过LCMS和TLC(PE:EA＝5:1)来确认反应完全。水被加入到反应液中，然后用乙酸乙酯(80mL)萃取，分液合并有机相，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化得到化合物5.1(230mg，收率：23.1％,淡黄色油状物)。LCMS ESI(+)m/z:182.1(M+1).
步骤B：3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)丙酸甲酯(化合物5.2)
在零下78摄氏度下，将化合物5.1(230mg，1.27mmol)溶于无水四氢呋喃(15mL)中，然后慢慢滴入双三甲基硅基胺基锂(1.53mL，1.53mmol)到反应液里，在此温度下搅拌0.5小时，紧接着将称量好的N-溴甲基邻苯二甲酰亚胺(335.3mg，1.397mmol)溶解于无水四氢呋喃(5mL)后慢慢滴加到反应瓶中，之后在此温度下搅拌1小时和冰浴下搅拌1小时。通过TLC(PE:EA＝1:1)和LCMS确认反应完全。用氯化铵饱和溶液对反应进行淬灭，乙酸乙酯(60mL)萃取，分液合并有机相，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化后得到化合物5.2(130mg，收率：30.1％，无色油状物)。LCMS ESI(+)m/z:341.1(M+1).
步骤C：2-((2-羧基-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)乙基)氨基甲酰基)苯甲酸(化合物5.3)
将化合物5.2(130mg，0.382mmol)溶于甲醇(5mL)中，然后将一水合氢氧化锂(40mg，0.955mmol)溶于水(1mL)里滴入到反应液中，在常温搅拌3小时。通过TLC和LCMS确认反应完全。反应液真空浓缩，残渣溶于水中后用1M的稀盐酸将其酸性调到pH＝2-3，之后乙酸乙酯(50mL)萃取，分液合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干化后得到化合物5.3(100mg，收率：76％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z:345.1(M+1).
步骤D：3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)丙酸(化合物5.4)
将化合物5.3(100mg，0.29mmol)溶解在30mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(105mg，0.55mmol)，1-羟基苯并三唑(75mg，0.55mmol)和三乙胺(84mg，0.83mmol)。反应液在室温搅拌2小时,然后在45度搅拌2小时。将反应液用4M盐酸/甲醇溶液调节pH至4，减压浓缩，剩余物用柱层析和反向制备纯化得到产物5.4(50mg，产率：52％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z：327.1(M+1).
步骤E：3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-N-(异喹啉-6-基)-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)丙酰胺(化合物5.5)
将化合物5.4(50mg，0.15mmol)溶解在6mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入二异丙基乙胺(200mg，1.5mmol)，6-氨基异喹啉(33mg，0.22mmol)和50％1-丙基磷酸酐/N,N-二甲基甲酰胺(580mg，0.9mmol)。反应液在60度搅拌1小时。向反应液中加入水30mL，用乙酸乙酯(50mL)萃取2次，合并有机相，用饱和食盐水(30mL)洗2次，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，剩余物用柱层析纯化得到产物5.5(25mg，产率：36％，黄色固体)。LCMS ESI(+)m/z：453.2(M+1).
步骤F：3-氨基-N-(异喹啉-6-基)-2-(4-甲基-2-氧代吡啶-1(2H)-基)丙酰胺(化合物5)
将化合物5.5(25mg,0.06mmol)溶解在10mL甲胺/乙醇中，反应液在45度搅拌1小时。将反应液减压浓缩，剩余物用反向制备纯化得到实施例20(11mg，产率：62％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z：323.1(M+1).
实施例6
Figure PCTCN2021073564-appb-000019
3-(1-氨基环丙基)-N-(异喹啉-6-基)-2-苯基丙酰胺
具体反应方程式如下所示
Figure PCTCN2021073564-appb-000020
步骤A：2-(4-氯苯基)-3-氰基丙酸甲酯(化合物6.1)
将对氯苯乙酸甲酯(3g，16.2mmol)溶解在30mL四氢呋喃溶液中，氮气保护下降温至零下78℃。，滴加LiHMDS(29.2ml，29.2mmol)，搅拌1小时，溴乙腈(1.7ml，24.32mmol)溶解在10mL四氢呋喃溶液中，滴加到反应液中，在搅拌2小时。用饱和氯化铵水溶液淬灭反应，用50mL乙酸乙酯分三次萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，旋干，柱层析纯化得到产物6.1(3.15g，产率：87％)。LCMS ESI(+)m/z：224.0(M+1).
步骤B：6-(4-氯苯基)-4-氮杂螺[2.4]庚烷-5-酮(化合物6.2)
将化合物6.1(3.15g，14.06mmol)溶解在30mL四氢呋喃溶液中，加入钛酸四异丙酯(5ml，16.88mmol)，滴加乙基溴化镁(14ml，28.12mmol)，室温下搅拌2小时。用饱和氯化铵水溶液淬灭反应，用50mL乙酸乙酯分三次萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，旋干，柱层析纯化得到产物6.2(1.6g，产率：51％)。LCMS ESI(+)m/z：222.1(M+1).
步骤C：6-(4-氯苯基)-5-氧代-4-氮杂螺[2.4]庚烷-4-羧酸叔丁酯(化合物6.3)
将化合物6.2(1.6g，7.2mmol)溶解在20mL四氢呋喃溶液中，氮气保护下，在零下78℃下滴加LiHMDS(8.6ml，8.6mmol)，搅拌30分钟，二碳酸二叔丁酯(1.86ml，7.9mmol)溶解在5mL四氢呋喃溶液中，滴加到反应液中，在搅拌2小时。用饱和氯化铵水溶液淬灭反应，用50mL乙酸乙酯分三次萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥。旋干，柱层析纯化得到产物6.3(1.15g，产率：50％)。LCMS ESI(+)m/z：322.1(M+1)
步骤D：3-(1-((叔丁氧基羰基)氨基)环丙基)-2-(4-氯苯基)丙酸(化合物6.4)
采用实施例5中步骤C，合成得到化合物6.4。LCMS ESI(+)m/z：340.1(M+1).
步骤E：(1-(2-(4-氯苯基)-3-(异喹啉-6-基氨基)-3-氧代丙基)环丙基)氨基甲酸叔丁酯(化合物6.5)
采用实施例5中步骤E，合成得到化合物6.5。LCMS ESI(+)m/z：466.2(M+1).
步骤F：叔丁基(1-(3-(异喹啉-6-基氨基)-3-氧代-2-苯基丙基)环丙基)氨基甲酸酯(化合物6.6)
将化合物6.5(140mg，0.3mmol)溶解在5mL甲醇溶液中，加入钯碳(20mg)、三乙胺(0.5ml)， 氢气氛围下搅拌3小时。硅藻土过滤反应液，旋干，柱层析纯化得到产物6.6(100mg，产率：77％)。LCMS ESI(+)m/z：432.2(M+1).
步骤G：3-(1-氨基环丙基)-N-(异喹啉-6-基)-2-苯基丙酰胺(化合物6)
将化合物6.6(100mg，0.23mmol)溶解在5mL二氯甲烷溶液中，加入三氟乙酸(1mL)，室温下搅拌1小时。旋干，反向制备纯化得到实施例6(60mg，产率：99％)。LCMS ESI(+)m/z：332.2(M+1).
实施例7
Figure PCTCN2021073564-appb-000021
3-氨基-N-(4-氯噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)-2-(对甲苯基)丙酰胺
具体反应方程式如下所示：
Figure PCTCN2021073564-appb-000022
步骤A：4-氯噻吩并[2,3-C]吡啶-2-羧酸甲酯(化合物7.1)
将3,5-二氯异烟醛(2g，11.36mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(25mL)中，然后将碳酸铯(3.89g，11.93mmol)和巯基乙酸甲酯(1.81g，17.04mmol)加入到反应液中，之后常温搅拌3小时。通过TLC和LCMS来确认反应完全。将水加入到反应液中后有黄色固体析出，过滤，滤饼用水洗涤两遍，将滤饼中水分旋干后得到淡黄色固体7.1(2.2g，收率：85％)。LCMS ESI(+)m/z:228.0/230.0(M+1).
步骤B：(4-氯噻吩并[2,3-C]吡啶-2-羧酸(化合物7.2)
将化合物7.1(2.2g，9.69mmol)溶于四氢呋喃(10mL)和甲醇(10mL)中，然后将一水合氢氧化锂(1.02g，24.23mmol)溶解于水(2ml)里滴加到反应混合物中，常温搅拌3小时。通过TLC和LCMS确认反应完全。将反应液用真空泵浓缩后加入水，然后用2mol/L的稀盐酸调节水相pH＝3-4，有固体析出，过滤，收集固体旋干后得到灰白色固体7.2(1.89g，收率：92％)。LCMS ESI(+)m/z:214.0/216.0(M+1).
步骤C：4-氯噻吩并[2,3-c]吡啶-2-胺(化合物7.3)
在冰浴下，将化合物37.2(150mg，0.7mmol)溶于干燥的甲苯(5mL)中，冰浴下，加入三乙胺(176mg，1.75mmol)和叠氮磷酸二苯酯(250mg，0.91mmol)，继续保持0摄氏度搅拌0.5小时，然后在惰性气体氛围下85摄氏度搅拌2小时，紧接着水(25mg，1.4mmol)被加入到反应瓶中，85摄氏度搅拌过夜。通过LCMS确认反应完全。水被加入到反应液中，用乙酸乙酯(15mL)萃取后合并有机相，依次用饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干后得到粗品化合物7.3(70mg，收率：54％)。LCMS ESI(+)m/z:185.0/187.1(M+1).
步骤D：N-(4-氯噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-2-(对甲苯基)丙酰胺(化合物7.4)
将化合物7.3(31mg，0.16mmol)和3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-2-(对甲苯基)丙酸(40mg，0.129mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，然后加入N,N-二异丙基乙胺(33mg，0.25mmol)含量50％丙基磷酸酐的N,N-二甲基甲酰胺溶液(123mg，0.19mmol)到反应液中，该反应常温搅拌2小时。通过LCMS确认反应完全。水被加入到反应液中，用乙酸乙酯(12mL)萃取后合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水 硫酸钠干燥，过滤，旋干，经柱层析纯化得到淡黄色油状产品7.4(15mg，收率：24％)。LCMS ESI(+)m/z:476.1/478.1(M+1).
步骤E：3-氨基-N-(4-氯噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)-2-(对甲苯基)丙酰胺(化合物7)
将化合物7.4(15mg，0.032mmol)溶于乙醇(4mL)中，然后加入水合肼(16mg，0.32mmol)到反应液中，反应在惰性气体氛围下60摄氏度搅拌2小时。通过LCMS确认反应完全。反应液直接用真空泵浓缩旋干，残渣溶于甲醇(1.5mL)，反向制备纯化后得到白色固体实施例7(10mg，收率：69％，纯度：98％)。LCMS ESI(+)m/z:346.1/348.1(M+1). 1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.26(s,1H),9.07(s,1H),8.46(s,1H),7.93(s,3H),7.25(dd,J＝18.6,8.2Hz,4H),7.02(s,1H),4.16–4.08(m,1H),3.58-3.56(m,1H),3.26–2.96(m,1H),2.29(s,3H).
实施例8
Figure PCTCN2021073564-appb-000023
(S)-3-氨基-2-(4-(羟基甲基)苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺
具体反应方程式如下所示
Figure PCTCN2021073564-appb-000024
步骤A：2-(4-(溴甲基)苯基)乙酸(化合物8.1)
将4-甲基苯乙酸(100g，670mmol)溶于乙腈(1L)中，将N-溴代丁二酰亚胺(125.2g，703.5mmol)和偶氮二异丁腈(2.2g，13.4mmol)溶于反应液中，在氮气的保护下80℃反应3小时，反应完毕后，将反应液降至室温，有大量固体析出，过滤，滤饼依次用石油醚/乙酸乙酯(1:1)(200mL)，饱和亚硫酸氢钠(200mL)，水(200mL)，石油醚(200mL)洗涤，50℃烘干得到化合物8.1(82g，收率：54％,白色固体)。LCMS ESI(+)m/z:229.0/231.0(M+1).
步骤B：2-(4-(羟甲基)苯基)乙酸(化合物8.2)
将化合物41.1(82g，358.1mmol)加入水(300mL)中，加热100℃反应2小时，反应变澄清，然后冷却至室温，冰浴继续降温至0℃，析出白色固体，过滤，滤饼用水洗涤2次，50℃烘干得到化合物8.2(40g，收率：67％，白色固体)直接用于下一步反应。
步骤C：2-(4-(羟甲基)苯基)乙酸甲酯(化合物8.3)
将化合物8.2(40g，241.0mmol)溶于甲醇(400mL)中，加入硫酸(2.4g，24.1mmol)，冰浴反应2小时，反应完全后加入饱和碳酸氢钠溶液(200mL)，水层以乙酸乙酯(200mL X 3)萃取，合并有机层，用饱和食盐水(300mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，得到化合物8.3(41g，收率：95％，淡黄色 油状物)。LCMS ESI(+)m/z:181.1(M+1).
步骤D：2-(4-(((三异丙基甲硅烷基)氧基)甲基)苯基)乙酸甲酯(化合物8.4)
将化合物8.3(41g，226.5mmol)以及咪唑(23.1g，339.8mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(400mL)中，冰浴将至0℃，分批加入三异丙基氯硅烷(48.1g，249.2mmol)，自然升温至室温搅拌过夜，反应完全后加水(500mL)，水层以乙酸乙酯(200mL X 3)萃取，合并有机层，用饱和食盐水(300mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，得到化合物8.4(72g，收率：94％，无色油状物)，直接用于下一步反应。
步骤E：2-(4-(((三异丙基甲硅烷基)氧基)甲基)苯基)乙酸(化合物8.5)
将化合物8.4(72g，214.0mmol)溶于四氢呋喃(500mL)中，加入氢氧化锂(10.8g，256.8mmol)，室温搅拌过夜，反应完全后加入1M的盐酸溶液(300mL)，水层以乙酸乙酯(200mL X 3)萃取，合并有机层，用饱和食盐水(300mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤、旋干，得到化合物8.5(67g，收率：97％，无色油状物)直接用于下一步反应。
步骤F：(R)-4-苄基-3-(2-(4-(((三异丙基硅基)氧基)甲基)苯基)乙酰基)恶唑烷-2-酮(化合物8.6)
将化合物8.5(67g，207.8mmol)以及无水N,N-二甲基甲酰胺(0.76g，10.4mmol)溶于无水二氯甲烷中，在冰浴条件下缓慢滴加草酰氯(31.7g，249.4mmol)，保持冰浴制备得到酰氯，同时在另外一个三口瓶中将(R)-4-苄基-噁唑烷酮(25.7g，145.2mmol)加入无水四氢呋喃(300mL)中，氮气置换，用干冰丙酮降温至-78℃，缓慢滴加正丁基锂(2.5M，64mL)并保持温度在-78℃，滴加完毕后继续在-78℃小搅拌2小时，然后通过恒压滴液漏斗慢慢滴加之前制备的酰氯的无水四氢呋喃溶液，保持滴加温度在-78℃，滴加完成后继续保持-78℃反应2小时，然后自然升温至室温，反应完全后用饱和氯化铵水溶液(400mL)萃灭反应，水层以乙酸乙酯(300mL X 3)萃取，合并有机层，用饱和碳酸氢钠水溶液(300mL)，饱和食盐水(300mL)依次洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，经柱层析纯化，得化合物8.6(44g，收率：44％，无色油状物)。
步骤G:2-((S)-3-((R)-4-苄基-2-氧代恶唑烷-3-基)-3-氧代-2-(4-(((三异丙基硅基)氧基)甲基)苯基)丙基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物8.7)
将化合物8.6(44g，91.3mmol)溶于无水四氢呋喃(500mL)中，氮气置换，干冰丙酮降温至-78℃，缓慢滴加LiHMDS(1M，109mL)，滴加完毕后继续在-78℃下搅拌1小时，将N-溴甲基邻苯二甲酰亚胺(26.3g，109.6mmol)溶于无水四氢呋喃(200mL)中，通过恒压滴液漏斗慢慢滴加上述体系中，控制滴加温度低于-70℃，滴加结束后反应保持在-78℃下搅拌3小时，自然升温至室温搅拌过夜，反应完全后用饱和氯化铵水溶液(400mL)萃灭反应，水层以乙酸乙酯(300mL X 3)萃取，合并有机层，用饱和食盐水(300mL)依次洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，得到黄色固体，采用乙酸乙酯/石油醚体系对其重结晶，析出固体，过滤，滤饼用石油醚(100mL)洗涤，旋干，得到化合物8.7(32g，收率：55％，白色固体)。
步骤H：(S)-2-((2-羧基-2-(4-(((三异丙基甲硅烷基)氧基)甲基)苯基)乙基)氨基甲酰基)苯甲酸(化合物8.8)
将化合物8.7(32g，49.9mmol)溶于四氢呋喃(300mL)中，加水(100mL)，冰浴冷却反应体系至0℃，然后加入氢氧化锂(6.3g，149.7mmol)，于0℃搅拌1小时，反应完全后用2M盐酸溶液调节反应液pH值至2-3，水层以乙酸乙酯(200mL X 4)萃取，合并有机层，用饱和食盐水(300mL)依次洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，得到化合物8.8(20g，收率：80％，淡黄色固体)。LCMS ESI(+)m/z:500.2(M+1).
步骤I：(S)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-2-(4-(((三异丙基甲硅烷基)氧基)甲基)苯基)丙酸(化合物8.9)
将化合物8.8(20g，40mmol)，1-羟基苯并三唑(5.9g，44mmol)和三乙胺(12.1g，120mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺中，冰浴冷却反应体系至0℃，然后向反应液中加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(8.4g，44mmol)。搅拌一段时间，反应液变澄清，缓慢升至室温过夜，反应完全后反应液减压至干，加入饱和氯化铵水溶液(200mL)，水层以乙酸乙酯(200mL X 3)萃取，合并有机层，用饱和碳酸氢钠水溶液(300mL)，饱和食盐水(300mL)依次洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，得到化合物8.9(17g，收率：88％，黄色固体)
步骤J：(S)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)-2-(4-(((三异丙 基甲硅烷基)氧基)甲基基)苯基)丙酰胺(化合物8.10)
将(S)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-2-(4-(((三异丙基甲硅烷基)氧基)甲基)苯基)丙酸(65mg，0.123mmol)溶解在5mL N，N-二甲基甲酰胺中，加入二异丙基乙胺(25ul，0.16mmol)、2-(7-氧化苯并三氮唑)-N，N，N”，N'-四甲基脲六氟磷酸盐(77mg，0.20mmol)，室温下搅拌10分钟，加入噻吩并[2,3-c]吡啶-2-胺(20mg，0.135mmol)，搅拌2小时。用饱和氯化铵水溶液淬灭反应，用30mL乙酸乙酯分三次萃取，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，旋干，柱层析纯化得到产物8.10(48mg，产率：58％)。LCMS ESI(+)m/z：614.2(M+1).
步骤K：(S)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-2-(4-(羟甲基)苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺(化合物8.11)
将化合物8.10(48mg，0.078mmol)溶解在5mL四氢呋喃溶液中，加入1mL盐酸(2M)，室温下搅拌0.5小时。直接旋干溶剂得到产物8.11(30mg，产率：100％)。LCMS ESI(+)m/z：458.1(M+1).
步骤L：(S)-3-氨基-2-(4-(羟基甲基)苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺(化合物8)
将化合物8.11(30mg，0.066mmol)溶解在5mL甲氨乙醇溶液中，在60℃下搅拌3小时，旋干溶剂，反向制备纯化得到实施例8(18mg，产率：84％)。LCMS ESI(+)m/z：328.1(M+1).
实施例9
Figure PCTCN2021073564-appb-000025
(S)-3-氨基-N-(苯并[d]异噻唑-6-基)-2-(4-(羟基甲基)苯基)丙酰胺
具体反应方程式如下所示
Figure PCTCN2021073564-appb-000026
步骤A：用苯并[d]异噻唑-6-胺代替实施例8步骤A中的噻吩并[2,3-c]吡啶-2-胺，合成得到化合物9.1。LCMS ESI(+)m/z：614.2(M+1).
步骤B：采用实施例8中步骤B，合成得到化合物9.2。LCMS ESI(+)m/z：458.1(M+1).
步骤C：采用实施例8中步骤C，合成得到实施例9。LCMS ESI(+)m/z：328.1(M+1).
实施例10
Figure PCTCN2021073564-appb-000027
3-氨基-2-(4-羟基苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺
具体反应方程式如下所示：
Figure PCTCN2021073564-appb-000028
步骤A：2-(4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)苯基)乙酸(化合物10.1)
将对羟基苯乙酸(5.0g，32.86mmol)溶解在400mL四氢呋喃中，在0度，加入咪唑(11g,164.3mmol)和叔丁基二甲基氯硅烷(13.8g,92.00mmol)，反应液在室温下搅拌2小时。向反应液中加入130mL饱和碳酸钠溶液，室温继续搅拌1小时。向反应液中加入2M盐酸溶液至pH为4，用乙酸乙酯(500mL)萃取2次，合并有机相，食盐水(200mL)洗2次，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，剩余物用柱层析纯化得到产物10.1(5.78g,产率：66％，无色油状物)。
步骤B：2-(4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)苯基)乙酸苄酯(化合物10.2)
将化合物10.1(5.78g，21.70mmol)溶解在100mL N,N-二甲基甲酰胺中，将溶液冷却至0度，加入碳酸钾(3.6g，26.04mmol)和苄溴(4.45g，26.04mmol)，反应液在室温搅拌2小时。向反应液加入水80mL，用乙酸乙酯(100mL)萃取3次，合并有机相，用饱和食盐水(40mL)洗4次，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，剩余物用柱层析纯化得到产物10.2(3.66g，产率：47％，无色油状物)。
步骤C：2-(4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)苯基)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)丙酸苄酯(化合物10.3)
将化合物10.2(3.66g，10.27mmol)溶解在30mL无水四氢呋喃溶液中，将反应液冷却至-78度，在氮气保护下，滴加1M的六甲基二硅基胺基锂(12.3mL，12.3mmol),反应液在-78度和氮气保护下搅拌1小时。然后滴加2-(溴甲基)异吲哚-1,3-二酮(2.96g，12.3mmol)的四氢呋喃溶液25mL，反应液在-78度搅拌3小时。向反应液中加入30mL水，用乙酸乙酯(60mL)萃取3次，合并有机相，用饱和食盐水(40mL)洗2次，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液减压浓缩，剩余物用柱层析纯化得到产物10.3(3.9g，产率：74％，无色油状物)。LCMS ESI(+)m/z：516.2(M+1).
步骤D：2-(4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)苯基)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)丙酸(化合物10.4)
将化合物10.3(3.9g，7.56mmol)溶解在30mL四氢呋喃和60mL甲醇中，加入钯碳(600mg，10％)，反应液在室温和氢气保护下搅拌3小时。将反应液用硅藻土过滤，滤液减压浓缩，剩余物用柱层析纯化得到产物10.4(2.9g，产率：90％，黄色固体)。LCMS ESI(+)m/z：426.2(M+1).
步骤E：2-(4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)苯基)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺(化合物10.5)
将化合物10.4(600mg，1.41mmol)溶解在20mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入二异丙基乙胺(276mg，2.11mmol)，2-(7-氧化苯并三氮唑)-N，N，N”，N'-四甲基脲六氟磷酸盐(648mg，1.69mmol)，和噻吩并[2,3-c]吡啶-2-胺(233mg，1.55mmol)。反应液在25度和氮气保护下搅拌2小时。向反应中加水(40mL)，然后用乙酸乙酯(60mL)萃取2次，合并有机相，用饱和食盐水(30mL)洗2次，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，柱层析纯化得到产物10.5(780mg，产率：99％，黄色固体)。LCMS ESI(+)m/z：558.2(M+1).
步骤F：3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-2-(4-羟基苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺(化合物10.6)
将化合物10.5(780mg，1.40mmol)溶解在50mL四氢呋喃中，加入2M盐酸水溶液15mL，反应液在50度搅拌3小时。将反应液用饱和碳酸氢钠溶液调节pH为7，用乙酸乙酯(100mL)萃取3次，合并有机相，用无水硫酸钠干燥，减压浓缩，剩余物用柱层析纯化得到产物10.6(350mg，产率：56％，白色固体)。LCMS  ESI(+)m/z：444.1(M+1).
步骤G：3-氨基-2-(4-羟基苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺(化合物10)
将化合物10.6(15mg，0.03mmol)溶解在7mL甲胺/乙醇中，反应液在50度搅拌1小时。将反应液减压浓缩，剩余物用反向制备纯化得到实施例10(8mg，产率：80％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z：314.1(M+1).
实施例11
Figure PCTCN2021073564-appb-000029
3-氨基-N-(4-氟噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)-2-(对甲苯基)丙酰胺
具体反应方程式如下所示：
Figure PCTCN2021073564-appb-000030
步骤A：3,5-二氟吡啶-4-甲醛(化合物11.1)
将3,5-二氟吡啶(1g，58.5mmol)溶解于无水四氢呋喃(15mL)后冷却至零下78摄氏度，在氮气的保护下将二异丙基氨基锂(10mL，10.4mmol)慢慢滴加到反应瓶内，在此温度下继续搅拌0.5小时，将甲酸乙酯(1.61g，21.73mmol)溶于无水四氢呋喃(5mL)后慢慢滴加到反应瓶中，之后在冰浴下搅拌2小时。通过LCMS和TLC确认反应完全。水被加入到反应液中，用乙酸乙酯(20mL)萃取后合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化得到黄色固体产品11.1(280mg，收率：23％)。LCMS ESI(+)m/z:176.0(M+33).
步骤B：4-氟噻吩并[2,3-C]吡啶-2-羧酸甲酯(化合物11.2)
将化合物11.1(280mg，1.96mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(6mL)中，然后在冰浴下将碳酸铯(703mg，2.15mmol)和巯基乙酸甲酯(166mg，1.568mmol)加入到反应液中，之后常温搅拌3小时。通过TLC和LCMS来确认反应完全。水被加入到反应液中，用乙酸乙酯(15mL)萃取后合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化得到白色固体11.2(170mg，收率：41％)。LCMS ESI(+)m/z:212.0(M+1).
步骤C：(4-氟噻吩并[2,3-C]吡啶-2-羧酸(化合物11.3)
将化合物11.2(170mg，0.81mmol)溶于四氢呋喃(6mL)和甲醇(1mL)中，然后将一水合氢氧化锂(85mg，2.02mmol)溶解于水(2ml)里滴加到反应混合物中，40摄氏度搅拌0.5小时。通过TLC和LCMS确认反应完全。将反应液用真空泵浓缩后加入水，然后用2mol/L的稀盐酸调节水相pH＝3-4，有固体析出，过滤，收集固体旋干后得到灰白色固体11.3(130mg，收率：82％)。LCMS ESI(+)m/z:198.0(M+1).
步骤D：4-氟噻吩并[2,3-c]吡啶-2-胺(化合物11.4)
在冰浴下，将化合物11.3(150mg，0.7mmol)溶于干燥的甲苯(8mL)中，冰浴下，加入三乙胺(166mg，1.65mmol)和叠氮磷酸二苯酯(236mg，0.86mmol)，继续保持0摄氏度搅拌0.5小时，然后在惰性气体氛围下85摄氏度搅拌2小时，紧接着水(35mg，1.98mmol)被加入到反应瓶中，85摄氏度搅拌过夜。通过LCMS确认反应完全。水被加入到反应液中，用乙酸乙酯(15mL)萃取后合并有机相，依次用饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干后得到粗品化合物11.4(100mg，收率：90％)。LCMS  ESI(+)m/z:169.0(M+1).
步骤E：N-(4-氟噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-2-(对甲苯基)丙酰胺(化合物11.5)
将化合物11.4(26mg，0.155mmol)和3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-2-(对甲苯基)丙酸(40mg，0.129mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中，然后加入三乙胺(26mg，0.258mmol)和含量50％丙基磷酸酐的N,N-二甲基甲酰胺溶液(123mg，0.1935mmol)到反应液中，该反应常温搅拌3小时。通过LCMS确认反应完全。水被加入到反应液中，用乙酸乙酯(12mL)萃取后合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，硅胶柱纯化得到淡黄色油状产品11.5(20mg，收率：34％)。LCMS ESI(+)m/z:460.1(M+1).
步骤F：3-氨基-N-(4-氟噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)-2-(对甲苯基)丙酰胺(化合物11)
将化合物11.5(20mg，0.043mmol)溶于乙醇(5mL)中，然后加入水合肼(22mg，0.434mmol)到反应液中，反应在惰性气体氛围下60摄氏度搅拌2小时。通过LCMS确认反应完全。反应液直接用真空泵浓缩旋干，残渣溶于甲醇(1.5mL)，反向制备纯化后得到白色固体实施例11(3mg(三氟乙酸盐)，收率：21％，纯度：96％)。LCMS ESI(+)m/z:330.1(M+1).
实施例12
Figure PCTCN2021073564-appb-000031
3-氨基-2-(4-(2-羟基乙基)苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺
具体反应方程式如下所示：
Figure PCTCN2021073564-appb-000032
步骤A：2-(4-乙烯基苯基)乙酸甲酯(化合物12.1)
将2-(4-溴苯基)乙酸甲酯(11.0g,48.0mmol)，三氟(乙烯基)硼酸钾(7.7g,57.6mmol)和碳酸铯(31.3g,96.0mmol)溶于200mL四氢呋喃和20mL水中，然后加入二(三苯基膦)二氯化钯(674mg,0.96mmol)，在85℃和氮气保护下反应过夜。LCMS监测反应完全。过滤、滤液用乙酸乙酯(50mLX3)萃取三次，合并有机相，用饱和的食盐水(100mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物12.1(7.0g，产率：83％)。LCMS ESI(+)m/z:177.1(M+1).
步骤B：2-(4-(2-羟乙基)苯基)乙酸甲酯(化合物12.2)
将化合物12.1(3.5g,19.9mmol)溶于20mL四氢呋喃中，在冰浴下滴加硼烷(10.0M,4mL,40.0mmol)，在0℃下反应1小时，再在室温下反应1小时。然后在冰浴下滴加60mL氢氧化钠水溶液(1M)，再滴加5mL双氧水(30％)，在冰浴下反应30分钟，再在室温下反应30分钟。TLC监测到原料反应完全。加入水淬灭 反应，用乙酸乙酯(50mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(100mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物12.2(1.5g,产率：39％)。
步骤C：2-(4-(2-((三异丙基甲硅烷基)氧基)乙基)苯基)乙酸甲酯(化合物12.3)
将化合物12.2(1.5g,7.7mmol)溶于10mL二氯甲烷中,然后加入2,6-二甲基吡啶(1.4mL,11.6mmol)和三异丙基硅基三氟甲磺酸酯(2.5mL,9.2mmol)在室温下反应过夜。TLC监测到原料反应完全。加入水淬灭反应，用二氯甲烷(20mLX3)萃取三次，合并有机相，用饱和的食盐水(50mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物12.3(2.1g,产率：78％)。
步骤D：3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-2-(4-(2-((三异丙基甲硅烷基)氧基)乙基)苯基)丙酸甲酯(化合物12.4)
将化合物12.3(2.1g,6.0mmol)溶于20mL无水四氢呋喃中,氮气置换，干冰丙酮降温至-78℃，缓慢滴加六甲基二硅基胺基锂(1.0M，7.2mL，7.2mmol),滴加完成后体系于-78℃搅拌1小时，将N-溴甲基邻苯二甲酰亚胺(1.7g,7.2mmol)溶于10mL四氢呋喃中，慢慢滴加到体系中，控制滴加温度低于-70℃，滴加结束后反应保持在-78℃下搅拌3小时，TLC监测到原料反应完全。加入饱和的氯化铵溶液(10mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(20mLX3)萃取，饱和食盐水(50mL)洗涤。无水硫酸钠干燥，过滤、旋干，柱层析纯化得产物12.4(1.0g,产率：33％)。
步骤E：2-((2-羧基-2-(4-(2-((三异丙基甲硅烷基)氧基)乙基)苯基)乙基)氨基甲酰基)苯甲酸(化合物12.5)
将化合物12.4(1.0g,2.0mmol)溶于10mL四氢呋喃和3mL水中,在0摄氏度下加入氢氧化锂一水合物(252mg,6.0mmol)，于0℃下搅拌3小时，LCMS监测反应完全。减压蒸出有机溶剂，用1M的盐酸水溶液调pH至3-4，用乙酸乙酯(20mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(50mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干得产物12.5(960mg，产率：95％)。LCMS ESI(+)m/z：514.2(M+1).
步骤F：3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-2-(4-(2-((三异丙基甲硅烷基)氧基)乙基)苯基)丙酸(化合物12.6)
将化合物12.5(960mg,1.9mmol)，1-羟基苯并三唑(257mg,1.9mmol)和三乙胺(0.8mL,5.7mmol)溶于10mL二氯甲烷中,氮气保护，降温至0℃，然后向反应液中加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(365mg,1.9mmol)，搅拌一段时间，反应液变澄清，缓慢升温至室温，反应过夜。LCMS监测反应完全。加水稀释反应液，用二氯甲烷萃取(20mLX3)，合并有机相，用饱和食盐水(50mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物12.6(510mg,产率：54％)。LCMS ESI(+)m/z：496.2(M+1).
步骤G：3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)-2-(4-(2-((三异丙基硅基)氧基)乙基)苯基)丙酰胺(化合物12.7)
将化合物12.6(70mg,0.14mmol)溶于5mL的N，N-二甲基甲酰胺中，然后依次加入2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(80mg,0.21mmol)和N，N-二异丙基乙胺(36mg,0.28mmol)，在室温下搅拌5分钟，再加入化合物19.5(25mg,0.17mmol)，在室温下反应2小时。LCMS监测反应完全。反应完后加入水淬灭反应，用乙酸乙酯(10mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(20mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物12.7(62mg，产率：71％)。LCMS ESI(+)m/z:628.3(M+1).
步骤H：3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-2-(4-(2-羟基乙基)苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺(化合物12.8)
将化合物12.7(62mg,0.10mmol)溶于5mL四氢呋喃中，然后加入5mL盐酸水溶液(1M)中，40℃下反应2小时。LCMS监测反应完全。反应完后加入饱和碳酸氢钠溶液中和，然后用乙酸乙酯(10mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(20mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干得到粗产物12.8(47mg，产率：100％)。LCMS ESI(+)m/z:472.1(M+1).
步骤I：3-氨基-2-(4-(2-羟基乙基)苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺(化合物12)
将化合物12.8(47mg,0.10mmol)溶于5mL甲胺乙醇溶液中，在室温下反应2小时。LCMS监测反应完全。待反应完后，减压浓缩反应液，剩余物溶于2mL的甲醇中，过滤，滤液用反相制备纯化，冻干后得到目标产物实施例12(19mg，产率：44％)。LCMS ESI(+)m/z:342.1(M+1).
实施例13
Figure PCTCN2021073564-appb-000033
3-氨基-2-(4-(3-羟基丙氧基)苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺
具体反应方程式如下所示：
Figure PCTCN2021073564-appb-000034
步骤A：(2-(4-羟基苯基)-3-氧代-3-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(化合物13.1)
将3-氨基-2-(4-羟基苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺(850mg，2.71mmol)溶解在40mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入三乙胺(550mg,5.42mmol)和BOC酸酐(770mg,3.52mmol)，反应液在室温下搅拌20小时。将反应液减压浓缩，剩余物用柱层析纯化得到产物13.1(1.1g,产率：98％，黄色固体)。LCMS ESI(+)m/z：414.1(M+1).
步骤B：(2-(4-(3-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)丙氧基)苯基)-3-氧代-3-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(化合物13.2)
将化合物13.1(50mg，0.12mmol)溶解在10mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入碳酸钾(34mg，0.24mmol)和(3-溴丙氧基)(叔丁基)二甲基硅烷(46mg，0.18mmol)，反应液在100度和氮气保护下搅拌10小时。向反应液加入水30mL，用乙酸乙酯(40mL)萃取2次，合并有机相，用饱和食盐水(20mL)洗3次，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，剩余物用反向制备纯化得到产物13.2(10mg，产率：14％，黄色固体)。LCMS ESI(+)m/z：586.2(M+1).
步骤C：3-氨基-2-(4-(3-羟基丙氧基)苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺(化合物13)
将化合物13.2(10mg，0.02mmol)溶解在2mL二氯甲烷中，加入三氟乙酸1mL，反应液在室温搅拌1小时，将反应液减压浓缩，剩余物用反向制备纯化得到实施例13(5.8mg，产率：91％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z：372.1(M+1).
实施例14
Figure PCTCN2021073564-appb-000035
3-氨基-2-(4-(2,3-二羟基丙氧基)苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺
具体反应方程式如下所示：
Figure PCTCN2021073564-appb-000036
步骤A：(2-(4-(2,3-二羟基丙氧基)苯基)-3-氧代-3-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(化合物14.1)
将(2-(4-羟基苯基)-3-氧代-3-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(200mg，0.48mmol)溶解在18mL乙醇中，加入三乙胺(244mg,2.42mmol)和缩水甘油(180mg,2.42mmol)，反应液在80度和氮气保护下搅拌60小时。将反应液减压浓缩，剩余物用反向制备纯化得到产物14.1(5mg,产率：2％，黄色固体)。LCMS ESI(+)m/z：488.2(M+1).
步骤B：3-氨基-2-(4-(2,3-二羟基丙氧基)苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺(化合物14)
将化合物14.1(5mg，0.01mmol)溶解在2mL二氯甲烷中，加入三氟乙酸1mL，反应液在室温搅拌1小时，将反应液减压浓缩，剩余物用反向制备纯化得到实施例49(0.8mg，产率：20％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z：388.1(M+1).
实施例15
Figure PCTCN2021073564-appb-000037
3-氨基-2-(4-((1,3-二羟基丙-2-基)氧基)苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺
具体反应方程式如下所示：
Figure PCTCN2021073564-appb-000038
步骤A：2-(4-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)-1-氧代-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苯氧基)丙二酸二甲酯(化合物15.1)
将(2-(4-羟基苯基)-3-氧代-3-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(100mg，0.24mmol)溶解在8mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入2-溴丙二酸二甲酯(76mg,0.36mmol)和碳酸钾(67mg,0.48mmol)，反应液在50度搅拌3.5小时。向反应液中加入水25mL，用乙酸乙酯(40mL)萃取2次，合并有机相，用饱和食盐水(20mL)洗2次，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，剩余物用柱层析纯化得到产物15.1(35mg,产率：27％，黄色油状物)。LCMS ESI(+)m/z：544.2(M+1).
步骤B：(2-(4-((1,3-二羟基丙烷-2-基)氧基)苯基)-3-氧代-3-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(化合物15.2)
将化合物15.1(35mg，0.06mmol)溶解在8mL四氢呋喃中，反应液冷却至0度，加入硼氢化钠(15mg，0.36mol)，反应液在0度搅拌20分钟，滴加甲醇4mL，反应液在室温搅拌2小时。向反应液加入硼氢化锂(28mg，1.29mmol)，反应液在50度搅拌4小时。向反应液加入1M盐酸溶液至pH为7，将反应液减压浓缩，剩余物用反向制备纯化得到产物15.2(10mg，产率：32％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z：488.2(M+1).
步骤C：3-氨基-2-(4-((1,3-二羟基丙-2-基)氧基)苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺(化合物15)
将化合物15.2(10mg，0.02mmol)溶解在2mL二氯甲烷中，加入三氟乙酸1mL，反应液在室温搅拌1小时，将反应液减压浓缩，剩余物用反向制备纯化得到产物15(3.6mg，产率：45％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z：388.1(M+1).
实施例16
Figure PCTCN2021073564-appb-000039
3-氨基-N-(5-氯苯并[d]异噻唑-6-基)-2-(对甲苯基)丙酰胺
具体反应方程式如下所示：
Figure PCTCN2021073564-appb-000040
步骤A：5-氯-2-氟-4-甲氧基苯甲醛(化合物16.1)
将2-氟-4-甲氧基苯甲醛(6g，38.96mmol)溶于冰醋酸(13mL)中，在冰浴下将氯化砜(10.52g，77.92mmol)慢慢加入到反应液中，然后反应常温搅拌过夜。通过LCMS确认反应完全。反应液被加入到冰水中，有固体析出后过滤，固体用乙酸乙酯溶解，然后有机相依次用饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩旋干，粗品固体用石油醚打浆，过滤后得到白的固体产物16.1(4g，收率：55％)。LCMS ESI(+)m/z:189.0/191.0(M+1)。
步骤B：5-氯-6-甲氧基苯并[d]异噻唑(化合物16.2)
将化合物16.1(3.8g，20.2mmol)溶于乙二醇甲醚(20mL)中，然后将硫粉(646.4mg，20.2mmol)和氨水(20mL)加入到反应液里，在封管里140摄氏度搅拌2小时。通过TLC和LCMS确认反应完全(反应有部分掉氯的分子)。反应液被加入到冰水中，用乙酸乙酯(20mL)萃取，然后合并有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，柱层析纯化得到淡黄色固体产物16.2(1.88g，收率：47％)。LCMS ESI(+)m/z:200.0/202.0(M+1)。
步骤C：5-氯苯并[d]异噻唑-6-醇(化合物16.3)
将化合物51.2(1.88g，9.5mmol)和吡啶盐酸盐(10g)加到反应瓶中，170摄氏度搅拌8小时。通过TLC(PE：EA＝10：1)和LCMS确认反应完全。水被加入到反应瓶中，有固体析出，过滤旋干后得到淡粉色固体16.3(1.57g，收率：90％)。LCMS ESI(+)m/z:186.0/188.0(M+1).
步骤D：5-氯苯并[d]异噻唑-6-基三氟甲磺酸盐(化合物16.4)
将称量好的化合物16.3(1.57g，8.48mmol)溶于二氯甲烷(20mL)中，在零下78摄氏度条件下，加入N,N-二异丙基乙胺(3.28g，25.46mmol)和三氟甲磺酸酐(3.59g，12.73mmol)，继续保持此温度搅拌1小时。通过TLC(PE：EA＝10：1)和LCMS确认反应完全。用二氯甲烷稀释反应液，然后依次用1mol/L的稀盐酸、饱和碳酸氢钠溶液和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，柱层析纯化后得到淡黄色固体16.4(1.37g，收率：51％)。LCMS ESI(+)m/z:318.1/320.1(M+1).
步骤E：5-氯-N-(二苯基亚甲基)苯并[d]异噻唑-6-胺(化合物16.5)
将化合物16.4(640mg，2.02mmol)溶于1,4-二氧六环(12mL)中，然后加入二苯甲酮亚胺(402mg，2.22mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(185mg，0.20mmol)、4,5-双二苯基膦-9,9-二甲基氧杂蒽(233mg，0.404mmol)和碳酸铯(1.32g，4.04mmol)到反应液中，该反应在惰性气体氛围下90摄氏度搅拌过夜。通过LCMS确认反应完全。水被加入到反应液中，用乙酸乙酯(15mL)萃取后合并有机相，用饱和食盐水 洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化得到黄色固体产物16.5(660mg，收率：94％)。LCMS ESI(+)m/z:349.1/351.1(M+1).
步骤F：5-氯苯并[d]异噻唑-6-胺(化合物16.6)
将化合物16.5(660mg，0.043mmol)溶于四氢呋喃(10mL)中，然后加入3mol/L的稀盐酸(10mL)到反应液中，反应在室温搅拌2小时。通过TLC(PE：EA＝8：1)和LCMS确认反应完全。水被加入到反应液中，用乙酸乙酯(15mL)萃取后合并有机相，用饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干后得到粗品，然后用石油醚打浆10分钟后过滤，得到黄色固体产物16.6(295mg，收率：85％，纯度：95％)。LCMS ESI(+)m/z:185.0/187.0(M+1).
步骤G：N-(5-氯苯并[d]异噻唑-6-基)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-2-(对甲苯基)丙酰胺(化合物16.7)
将3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-2-(对甲苯基)丙酸(20mg，0.064mmol)溶于二氯甲烷(5mL)中，在冰浴下，加入N,N-二甲基甲酰胺(1滴)和草酰氯(16mg，0.13mmol)到反应液中，反应在室温搅拌2小时。通过TLC确认反应完全。直接将反应液真空旋干，用无水吡啶(4mL)转移到反应瓶中，紧接着加入化合物51.6(13mg，0.071mmol)，在氮气氛围下80摄氏度搅拌8小时。同样直接将反应液真空旋干，残渣用乙酸乙酯(20mL)溶解，有机相依次用1mol/L的稀盐酸和饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化后得到产物16.7(20mg，收率：65％，纯度：95％)。LCMS ESI(+)m/z:476.1/478.1(M+1).
步骤H：3-氨基-N-(5-氯苯并[d]异噻唑-6-基)-2-(对甲苯基)丙酰胺(化合物16)
将化合物16.7(20mg，0.042mmol)溶于乙醇(6mL)中，然后加入水合肼(21mg，0.42mmol)到反应液中，反应在惰性气体氛围下60摄氏度搅拌2小时。通过LCMS确认反应完全。反应液直接用真空泵浓缩旋干，残渣溶于甲醇(1.5mL)，反向制备纯化后得到白色固体实施例16(6mg，收率：31％，纯度：96％)。LCMS ESI(+)m/z:346.1/348.1(M+1).
实施例17
Figure PCTCN2021073564-appb-000041
3-氨基-2-(4-(1,2-二羟基乙基)苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺
具体反应方程式如下所示：
Figure PCTCN2021073564-appb-000042
步骤A：2-(4-(环氧乙烷-2-基)苯基)乙酸甲酯(化合物17.1)
将称量好的2-(4-乙烯基苯基)乙酸甲酯(2.2g，12.48mmol)溶于80mL二氯甲烷中，在冰浴下分批加入间氯过氧苯甲酸(7.6g，37.44mmol),反应液在0度搅拌1小时，然后在室温搅拌16小时。向反应液中加入饱和亚硫酸钠溶液300mL，搅拌1小时，用二氯甲烷(300mL)萃取2次，合并有机相，有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤2次，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化得到化合物17.1(1.84g，产率：77％，无色油状物)。
步骤B：2-(4-(2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)苯基)乙酸甲酯(化合物17.2)
将化合物17.1(1.84g，9.57mmol)溶于30mL丙酮中，然后加入Amberlyst 15(2.5g，12.44mmol)，反应液在室温搅拌20小时。将反应液过滤，向滤液中加入饱和碳酸氢钠溶液150mL，然后用乙酸乙酯(300mL)萃取2次，分液合并有机相，有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤1次，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化后得到化合物17.2(1.5g，收率：63％，无色油状物)。
步骤C：2-(4-(2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)苯基)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)丙酸甲酯(化合物17.3)
在零下78摄氏度下，将化合物17.2(1.5g，5.99mmol)溶于无水四氢呋喃(20mL)中，然后慢慢滴入双三甲基硅基胺基锂(7.2mL，7.19mmol)到反应液里，在-78度和氮气保护下搅拌0.5小时，紧接着将称量好的N-溴甲基邻苯二甲酰亚胺(1.73g，7.19mmol)溶解于无水四氢呋喃(10mL)后慢慢滴加到反应瓶中，之后继续在此温度下搅拌1.5小时。用20mL氯化铵饱和溶液对反应进行淬灭，用乙酸乙酯(60mL)萃取2次，分液合并有机相，有机相用饱和食盐水(30mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化后得到化合物17.3(2g，收率：82％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z：410.1(M+1).
步骤D：2-((2-羧基-2-(4-(2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)苯甲酸(化合物17.4)
将化合物17.3(2g，4.88mmol)溶解在35mL四氢呋喃和30mL水中，加入一水合氢氧化锂(615mg,14.64mmol)，反应液在室温搅拌2小时。向反应液中加入饱和柠檬酸溶液至pH为6，用乙酸乙酯(40mL)萃取3次，合并有机相，用饱和食盐水(40mL)洗2次，无水硫酸钠干燥,过滤，减压浓缩得到产物17.4(1.1g,产率：55％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z：414.1(M+1).
步骤E：2-(4-(2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)苯基)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)丙酸(化合物17.5)
将化合物17.4(1.1g，2.66mmol)溶解在30mL的N,N-二甲基甲酰胺中，加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(760mg，3.99mmol)，1-羟基苯并三唑(540mg，3.99mmol)和二异丙基乙胺(688mg，5.32mmol)。反应液在室温搅拌12小时。将反应液减压浓缩，向剩余物加入水20mL，用饱和柠檬酸溶液至pH为6，用乙酸乙酯(40mL)萃取3次，合并有机相，用饱和食盐水(40mL)洗2次，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，剩余物用柱层析纯化得到产物17.5(760mg，产率：72％，黄色固体)。LCMS ESI(+)m/z：396.1(M+1).
步骤F：2-(4-(2,2-二甲基-1,3-二氧戊环-4-基)苯基)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻吩并[2,3-c]]吡啶-2-基)丙酰胺(化合物17.6)
将化合物17.5(260mg，0.66mmol)溶解在12mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入二异丙基乙胺(127mg，0.99mmol)，6-氨基异喹啉(104mg，0.69mmol)和2-(7-氧化苯并三氮唑)-N，N，N”，N'-四甲基脲六氟磷酸盐(300mg，0.79mmol)。反应液在室温搅拌1.5小时。向反应液中加入水30mL，用乙酸乙酯(50mL)萃取2次，合并有机相，用饱和食盐水(30mL)洗2次，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，剩余物用柱层析纯化得到产物17.6(260mg，产率：75％，黄色固体)。LCMS ESI(+)m/z：528.1(M+1).
步骤G：2-(4-(1,2-二羟乙基)苯基)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺(化合物52.7)
将化合物17.6(260mg,0.49mmol)溶解在30mL甲醇和30mL乙腈中，加入3.3mL 1.5M的盐酸水溶液，反应液在30度搅拌2小时，将反应液减压浓缩，得到产物17.7(240mg，产率：100％，黄色固体)。LCMS ESI(+)m/z：488.1(M+1).
步骤H：3-氨基-2-(4-(1,2-二羟基乙基)苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺(化合物17)
将化合物17.7(25mg，0.05mmol)溶解在5mL甲胺/乙醇中，反应液在50度搅拌1小时。将反应液减压浓缩，剩余物用反向制备纯化得到实施例17(11mg，产率：61％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z：358.1(M+1).
实施例18
Figure PCTCN2021073564-appb-000043
3-氨基-2-(4-(2-羟基乙氧基)苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺
具体反应方程式如下所示：
Figure PCTCN2021073564-appb-000044
步骤A：(2-(4-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)苯基)-3-氧代-3-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(化合物18.1)
将(2-(4-羟基苯基)-3-氧代-3-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(100mg，0.24mmol)溶解在8mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入(2-溴乙氧基)(叔丁基)二甲基硅烷(115mg,0.48mmol)和碳酸钾(100mg,0.72mmol)，反应液在100度搅拌12小时。向反应液中加入40mL水，用乙酸乙酯(50mL)萃取2次，合并有机相，用饱和食盐水(30mL)洗2次，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，剩余物用柱层析纯化得到产物18.1(21mg,产率：15％，黄色固体)。LCMS ESI(+)m/z：572.2(M+1).
步骤B：3-氨基-2-(4-(2-羟基乙氧基)苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺(化合物18)
将化合物18.1(21mg，0.04mmol)溶解在4mL二氯甲烷中，加入三氟乙酸2mL，反应液在50度和氮气保护下搅拌2小时。将反应液减压浓缩，剩余物用反向制备纯化得到实施例18(3mg，产率：23％，黄色固体)。LCMS ESI(+)m/z：358.1(M+1).
实施例19
Figure PCTCN2021073564-appb-000045
3-氨基-2-(4-(3-羟基丙基)苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺
具体反应方程式如下所示：
Figure PCTCN2021073564-appb-000046
步骤A：3-氨基-2-(4-((叔丁基二甲基)氧基)苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺(化合物19.1)
将2-(4-((叔丁基二甲基硅烷基)氧基)苯基)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺(1.5g,3.5mmol)溶于10mL甲胺乙醇溶液中，在50℃反应1.5小时。LCMS监测反应完全。反应完后加入水淬灭反应，然后用乙酸乙酯(20mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(50mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、柱层析纯化得产物19.1(1.0g，产率：66％)。LCMS ESI(+)m/z:428.2(M+1)。
步骤B：(2-(4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)苯基)-3-氧代-3-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(化合物19.2)
将化合物19.1(1.0g,2.3mmol)和N，N-二异丙基乙胺(0.7mL,3.5mmol)溶于5mL的N，N-二甲基甲酰胺中，然后加入二碳酸二叔丁酯(0.8mL,3.5mmol)，在室温下反应1小时，LCMS监测反应完全。反应完后加入水淬灭反应，然后用乙酸乙酯(20mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(50mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、柱层析纯化得产物19.2(1.2g，产率：100％)。LCMS ESI(+)m/z:528.2(M+1).
步骤C：(2-(4-羟基苯基)-3-氧代-3-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(化合物19.3)
将化合物19.2(1.2g,2.3mmol)溶于10mL甲醇中，然后加入碳酸钾(476mg,3.5mmol)，在50℃反应2小时，LCMS监测反应完全。反应完后将反应液浓缩，柱层析纯化得产物19.3(940mg，产率：63％)。LCMS ESI(+)m/z:414.1(M+1).
步骤D：4-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)-1-氧代-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苯基三氟甲磺酸酯(化合物19.4)
将化合物19.3(940mg,1.5mmol)和吡啶(474mg,6.0mmol)溶于5mL二氯甲烷中，在0℃下滴加三氟甲磺酸酐(846mg,3.0mmol)，然后在室温下反应30分钟，LCMS监测反应完全。反应完后加入水淬灭反应，然后用二氯甲烷(20mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(50mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、柱层析纯化得产物19.4(220mg，产率：27％)。LCMS ESI(+)m/z:546.1(M+1).
步骤E：(2-(4-烯丙基苯基)-3-氧代-3-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(化合物19.5)
将化合物19.4(100mg,0.18mmol)，2-烯丙基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼杂环戊烷(37mg,0.22mmol)和碳酸铯(117mg,0.36mmol)溶于9mL四氢呋喃和1mL水中，然后加入[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(6mg,5mol％)，氮气置换，在85℃下反应过夜，LCMS监测反应完全。反应完后加入水淬灭反应，然后用乙酸乙酯(10mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(20mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、柱层析纯化得产物19.5(78mg，产率：99％)。LCMS ESI(+)m/z:438.2(M+1).
步骤F：(2-(4-(3-羟丙基)苯基)-3-氧代-3-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(化合物19.6)
将化合物19.5(78mg,0.17mmol)溶于2mL四氢呋喃中，在冰浴下滴加硼烷(10.0M,0.02mL,0.34mmol)，在0℃下反应1小时，再在室温下反应1小时。然后在冰浴下滴加5mL氢氧化钠水溶液(1M)，再滴加1mL双氧水(30％)，在冰浴下反应30分钟，再在室温下反应30分钟。LCMS监测反应完全。加入水淬灭反应， 用乙酸乙酯萃取(10mLX3)，合并有机相，用饱和食盐水(20mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物19.6(20mg,产率：26％)。LCMS ESI(+)m/z:456.2(M+1).
步骤G：3-氨基-2-(4-(3-羟基丙基)苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺(化合物19)
将化合物19.6(12mg,0.03mmol)溶于2mL二氯甲烷中，然后加入2mL盐酸/1,4-二氧六环溶液，在室温下反应1小时。LCMS监测反应完全。待反应完后，减压浓缩反应液，剩余物溶于2mL的甲醇中，过滤，滤液用反相制备纯化，冻干后得到目标产物实施例19(2mg，产率：15％)。LCMS ESI(+)m/z:356.1(M+1).
实施例20
Figure PCTCN2021073564-appb-000047
3-氨基-2-(4-(4-羟丁基)苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺
具体反应方程式如下所示：
Figure PCTCN2021073564-appb-000048
步骤A：2-(4-(4-羟基丁-1-炔-1-基)苯基)乙酸甲酯(物20.1)
将2-(4-溴苯基)乙酸甲酯(4.3g,18.7mmol)，3-丁炔-1-醇(2.6g,37.4mmol)溶于100mL三乙胺中，然后加入四(三苯基膦)钯(864mg,4mol％)和碘化亚铜(426mg,12mol％)，氮气置换，在100℃下反应2小时。LCMS监测反应完全。过滤，滤液减压浓缩，旋干，柱层析纯化得产物20.1(2.8g，产率：68％)。LCMS ESI(+)m/z:219.1(M+1).
步骤B：2-(4-(4-羟基丁基)苯基)乙酸甲酯(化合物20.2)
将化合物20.1(2.8g,12.8mmol)溶于20mL甲醇中，然后加入钯/碳(280mg,10％)，氢气置换三次，在40℃下反应过夜。LCMS监测反应完全。过滤，滤液减压浓缩，旋干，柱层析纯化得产物20.2(2.0g，产率：70％)。LCMS ESI(+)m/z:223.1(M+1).
步骤C：2-(4-(4-((三异丙基甲硅烷基)氧基)丁基)苯基)乙酸甲酯(化合物20.3)
将化合物20.2(2.0g,9.0mmol)溶于10mL二氯甲烷中,然后加入2,6-二甲基吡啶(1.6mL,13.5mmol)和三异丙基硅基三氟甲磺酸酯(3.0mL,10.8mmol)在室温下反应过夜。TLC监测到原料反应完全。加入水淬灭反应，用二氯甲烷(50mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(100mLX3)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物20.3(3.4g,产率：100％)。
步骤D：3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-2-(4-(4-((三异丙基甲硅烷基)氧基)丁基)苯基)丙酸甲酯(化合物20.4)
将化合物20.3(3.4g,9.0mmol)溶于20mL无水四氢呋喃中,氮气置换，干冰丙酮降温至-78℃，缓慢滴加六甲基二硅基胺基锂(1.0M，10.8mL，10.8mmol),滴加完成后体系于-78℃搅拌1小时，将N-溴甲基 邻苯二甲酰亚胺(2.6g,10.8mmol)溶于10mL四氢呋喃中，慢慢滴加到体系中，控制滴加温度低于-70℃，滴加结束后反应保持在-78℃下搅拌3小时，LCMS监测到原料反应完全。加入饱和的氯化铵溶液(10mL)淬灭反应，用乙酸乙酯(50mLX3)萃取，饱和食盐水(100mL)洗涤。无水硫酸钠干燥，过滤、旋干，柱层析纯化得产物20.4(2.9g,产率：60％)。LCMS ESI(+)m/z：538.3(M+1).
步骤E：2-((2-羧基-2-(4-(4-((三异丙基甲硅烷基)氧基)丁基)苯基)乙基)氨基甲酰基)苯甲酸(化合物20.5)
将化合物20.4(2.9g,5.4mmol)溶于10mL四氢呋喃和3mL水中,在0℃下加入氢氧化锂一水合物(680mg,16.2mmol)，于0℃下搅拌3小时，LCMS监测反应完全。减压蒸出有机溶剂，用1M的盐酸水溶液调pH至3-4，用乙酸乙酯萃取(50mLX3)，合并有机相，用饱和食盐水(100mLX3)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干得产物20.5(2.8g，产率：94％)。LCMS ESI(+)m/z：542.3(M+1).
步骤F：3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-2-(4-(4-((三异丙基甲硅烷基)氧基)丁基)苯基)丙酸(化合物20.6)
将化合物20.5(2.8g,5.1mmol)，1-羟基苯并三唑(688mg,5.1mmol)和三乙胺(2.1mL,15.3mmol)溶于10mL二氯甲烷中,氮气保护，降温至0℃，然后向反应液中加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(979mg,5.1mmol)，搅拌一段时间，反应液变澄清，缓慢升温至室温，反应过夜。LCMS监测反应完全。加水稀释反应液，用二氯甲烷(50mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(100mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物20.6(2.3g,产率：86％)。LCMS ESI(+)m/z：524.3(M+1).
步骤G：3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)-2-(4-(4-((三异丙基硅基)氧基)丁基)苯基)丙酰胺(化合物20.7)
将化合物20.6(300mg,0.57mmol)溶于5mL的N，N-二甲基甲酰胺中，然后依次加入2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(327mg,0.86mmol)和N，N-二异丙基乙胺(147mg,1.1mmol)，在室温下搅拌5分钟，再加入化合物17.5(102mg,0.68mmol)，在室温下反应2小时。LCMS监测反应完全。反应完后加入水淬灭反应，用乙酸乙酯(20mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(50mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物20.7(373mg，产率：100％)。LCMS ESI(+)m/z:656.3(M+1).
步骤H：3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-2-(4-(4-羟丁基)苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺(化合物20.8)
将化合物20.7(373mg,0.69mmol)溶于2mL四氢呋喃中，然后加入6mL盐酸水溶液(1.0M)中，40℃下反应过夜。LCMS监测反应完全。反应完后加入饱和碳酸氢钠溶液中和，然后用乙酸乙酯(20mLX3)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(50mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干得到粗产物20.8(270mg，产率：95％)。LCMS ESI(+)m/z:500.2(M+1).
步骤I：3-氨基-2-(4-(4-羟丁基)苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺(化合物20)
将化合物20.8(30mg,0.06mmol)溶于5mL甲胺乙醇溶液中，在室温下反应2小时。LCMS监测反应完全。待反应完后，减压浓缩反应液，剩余物溶于2mL的甲醇中，过滤，滤液用反相制备纯化，冻干后得到目标产物实施例20(18mg，产率：67％)。LCMS ESI(+)m/z:370.2(M+1).
实施例21
Figure PCTCN2021073564-appb-000049
(S)-3-氨基-2-(4-(2-羟基乙基)苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺
具体反应方程式如下所示：
Figure PCTCN2021073564-appb-000050
步骤A：2-(4-乙烯基苯基)乙酸甲酯(化合物21.1)
将2-(4-溴苯基)乙酸甲酯(10g，43.65mmol)溶于200mL四氢呋喃和20mL水中，加入乙烯基三氟硼酸钾(7g，52.39mmol)，碳酸铯(28.6g，87.31mmol)和双(三苯基膦)氯化钯(600mg，0.87mmol),反应液在78度和氮气保护下搅拌16小时。将反应液冷却至室温，向反应液中加入水100mL，用乙酸乙酯(400mL)萃取2次，合并有机相，有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤2次，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化得到化合物21.1(5.6g，产率：73％，无色油状物)。
步骤B：2-(4-(2-羟乙基)苯基)乙酸(化合物21.2)
将化合物21.1(5.6g，31.78mmol)溶于50mL四氢呋喃中，冷却至0度，滴加10M的硼烷二甲硫醚溶液6.4mL。反应液在0度和氮气保护下搅拌1小时，然后在20度搅拌1小时。将反应液冷却至0度，滴加1M的氢氧化钠溶液和30％的双氧水56mL。反应液在0度搅拌0.5小时，然后在20度搅拌1小时。向反应液中加入饱和亚硫酸钠溶液400mL，然后用1M的盐酸溶液调节pH为2，用乙酸乙酯(500mL)萃取5次，合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化后得到化合物21.2(3.85g，收率：67％，白色固体)。
步骤C：2-(4-(2-羟乙基)苯基)乙酸甲酯(化合物21.3)
将化合物21.2(3.85g，21.37mmol)溶于45mL二氯甲烷和10mL甲醇中，冷却至0度，滴加2M的三甲基硅基重氮甲烷11.2mL，反应液在室温搅拌0.5小时。将反应液减压浓缩，柱层析纯化后得到化合物21.3(2.4g，收率：58％，无色油状物)。
步骤D：2-(4-(2-((三异丙基甲硅烷基)氧基)乙基)苯基)乙酸甲酯(化合物21.4)
将化合物21.3(2.4g，12.36mmol)溶于40mL二氯甲烷中，冷却至0度，加入2,6-二甲基吡啶(1.99g，18.54mmol)和三异丙基硅基三氟甲磺酸酯(4.56g，14.83mmol)，反应液在室温搅拌16小时。向反应液中加入水50mL，用二氯甲烷(80mL)萃取2次，分液合并有机相，有机相用饱和食盐水(30mL)洗涤1次，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化后得到化合物21.4(3.7g，收率：85％，无色油状物)。
步骤E：2-(4-(2-((三异丙基甲硅烷基)氧基)乙基)苯基)乙酸(化合物21.5)
将化合物21.4(3.7g，10.55mmol)溶解在15mL水，15mL甲醇和40mL四氢呋喃中，加入一水合氢氧化锂(1.33g,31.65mmol)，反应液在室温搅拌2小时。向反应液中加入1M的盐酸溶液至pH为3，用乙酸乙酯(100mL)萃取2次，合并有机相，用饱和食盐水(40mL)洗2次，无水硫酸钠干燥,过滤，减压浓缩得到产物21.5(3.43g,产率：97％，黄色固体)。
步骤F：2-(4-(2-((三异丙基甲硅烷基)氧基)乙基)苯基)乙酰氯(化合物21.6)
将化合物21.5(3.43g，10.19mmol)溶解在40mL二氯甲烷中，将反应液冷却至0度，在氮气保 护下滴加草酰氯(1.55g，12.23mmol),反应液在室温搅拌12小时。将反应液减压浓缩得到产物21.6(3.62g，产率：100％，黄色油状物)。
步骤G：(R)-4-苄基-3-(2-(4-(2-((三异丙基硅基)氧基)乙基)苯基)乙酰基)恶唑烷-2-酮(化合物21.7)
将(R)-4-苄基恶唑烷-2-酮(1.72g，9.69mmol)溶解在30mL四氢呋喃中，将反应液冷却至-78度，在氮气保护下，滴加2.5M的正丁基锂(4.28mL，10.71mmol)，反应液在-78度搅拌1小时。然后向反应液中滴加化合物21.6(3.62g，10.20mmol)的四氢呋喃溶液15mL。反应液在-78度搅拌2.5小时。向反应液中加入氯化铵溶液30mL，用乙酸乙酯(150mL)萃取2次，合并有机相，用饱和食盐水(50mL)洗2次，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，剩余物用柱层析纯化得到产物21.7(3.15g，产率：62％，无色油状物)。LCMS ESI(+)m/z：496.3(M+1).
步骤H：2-((R)-3-((R)-4-苄基-2-氧代恶唑烷-3-基)-3-氧代-2-(4-(2-((三异丙基硅基)氧基)乙基)苯基)丙基)异吲哚-1,3-二酮(化合物21.8)
在零下78摄氏度下，将化合物21.7(3.15g，6.35mmol)溶于30mL无水四氢呋喃中，然后慢慢滴入双三甲基硅基胺基锂(7.63mL，7.63mmol)到反应液里，在此温度下搅拌1小时，紧接着将称量好的N-溴甲基邻苯二甲酰亚胺(1.83g，7.63mmol)溶解于无水四氢呋喃(20mL)后慢慢滴加到反应瓶中，之后在此温度下搅拌2小时。用氯化铵饱和溶液对反应进行淬灭，乙酸乙酯(200mL)萃取2次，分液合并有机相，有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤2次，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化后得到化合物21.8(2g，收率：48％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z:655.3(M+1).
步骤I：(R)-2-((2-羧基-2-(4-(2-((三异丙基甲硅烷基)氧基)乙基)苯基)乙基)氨基甲酰基)苯甲酸(化合物21.9)
将化合物21.8(2g，3.05mmol)溶于25mL甲醇和25mL四氢呋喃中，然后将一水合氢氧化锂(385mg，9.16mmol)溶于水(20mL)里滴入到反应液中，在室温搅拌3小时。向反应液中加入水60mL，水相用乙酸乙酯(40mL)洗2次，然后用1M的盐酸溶液调节pH为4，用乙酸乙酯(100mL)萃取2次，分液合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干后得到化合物21.9(980mg，收率：62％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z:514.2(M+1).
步骤J：(R)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-2-(4-(2-((三异丙基甲硅烷基)氧基)乙基)苯基)丙酸(化合物21.10)
将化合物21.9(980mg，1.91mmol)溶解在30mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(548mg，2.86mmol)，1-羟基苯并三唑(387mg，2.86mmol)和三乙胺(577mg，5.72mmol)，反应液在室温搅拌12小时。将反应液用1M盐酸溶液调节pH至4，用乙酸乙酯(60mL)萃取2次，合并有机相，用饱和食盐水(30mL)洗3次，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，剩余物用柱层析纯化得到产物21.10(840mg，产率：89％，黄色油状物)。LCMS ESI(+)m/z：496.2(M+1).
步骤K：(S)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)-2-(4-(2-((三异丙基甲硅烷基)氧基))乙基)苯基)丙酰胺(化合物21.11)
将化合物21.10(840mg，1.69mmol)溶解在30mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入二异丙基乙胺(438mg，3.39mmol)，2-(7-氧化苯并三氮唑)-N，N，N”，N'-四甲基脲六氟磷酸盐(967mg，2.54mmol)和噻吩并[2,3-c]吡啶-2-胺(305mg，2.03mmol)。反应液在室温搅拌2小时。向反应液中加入水30mL，用乙酸乙酯(50mL)萃取2次，合并有机相，用饱和食盐水(30mL)洗2次，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，剩余物用柱层析纯化得到产物21.11(580mg，产率：55％，黄色固体)。LCMS ESI(+)m/z：628.3(M+1).
步骤L：(S)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-2-(4-(2-羟乙基)苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺(化合物21.12)
将化合物21.11(580mg，0.92mmol)溶解在50mL四氢呋喃中，加入1.5M的盐酸水溶液20mL，反应液在40度搅拌2小时。将反应液冷却至室温，用饱和碳酸氢钠溶液调节pH至8，用乙酸乙酯(100mL)萃取2次，合并有机相，用饱和食盐水(30mL)洗3次，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，剩余物用柱层析纯化得到产物21.12(350mg，产率：80％，黄色固体)。LCMS ESI(+)m/z：472.1(M+1).
步骤M：(S)-3-氨基-2-(4-(2-羟基乙基)苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺(化合物 21)
将化合物21.12(100mg，0.21mmol)溶解在33％的甲胺/乙醇溶液6mL中，反应液在50度搅拌1小时。将反应液减压浓缩，剩余物用反向制备纯化得到产物实施例21(50mg，产率：69％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z：342.1(M+1).
实施例22
Figure PCTCN2021073564-appb-000051
(S)-3-氨基-N-(4-氟噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)-2-(4-(羟甲基)苯基)丙酰胺
具体反应方程式如下所示：
Figure PCTCN2021073564-appb-000052
步骤A：(S)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-N-(4-氟噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)-2-(4-(((三异丙基甲硅烷基))氧基)甲基)苯基)丙酰胺(化合物22.1)
将(S)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-2-(4-(((三异丙基甲硅烷基)氧基)甲基)苯基)丙酸(400mg，0.832mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(6mL)中，然后加入50％1-丙基磷酸酐的N,N-二甲基甲酰胺溶液(793mg，1.24mmol)、N,N-二异丙基乙胺(214mg，1.66mmol)和4-氟噻吩并[2,3-c]吡啶-2-胺(154mg，0.92mmol)，将反应常温搅拌2小时。通过TLC(DCM:MeOH＝10:1)和LCMS确认反应完全。水被加入到反应瓶中，然后用乙酸乙酯(12mL)萃取，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，柱层析纯化后得到白色固体22.1(300mg，收率：57％)。LCMS ESI(+)m/z:632.2(M+1).
步骤B：(S)-3-(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)-N-(4-氟噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)-2-(4-(羟甲基)苯基)丙酰胺(化合物22.2)
将化合物22.1(300mg，0.475mmol)溶于四氢呋喃(12mL)和甲醇(2mL)中，然后将1.5mol/L的稀盐酸(5mL)加入反应瓶中，将反应置于55摄氏度的油浴中搅拌4小时。通过LCMS确认反应完全。饱和的碳酸氢钠溶液被加入到反应瓶中，然后用乙酸乙酯(12mL)萃取，饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，真空浓缩后得到灰白色固体22.2(185mg，收率：82％)。LCMS ESI(+)m/z:476.1(M+1).
步骤C：(S)-3-氨基-N-(4-氟噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)-2-(4-(羟甲基)苯基)丙酰胺(化合物22)
将化合物22.2(125mg，0.263mmol)溶于33％甲胺的乙醇溶液(6mL)中，，反应在惰性气体氛围下50摄氏度搅拌1.5小时。通过LCMS确认反应完全。反应液直接用真空泵浓缩旋干，残渣溶于甲醇(1.5mL)，反向制备纯化后得到白色固体实施例22(61mg，收率：50％，纯度：98％)。LCMS ESI(+)m/z:346.1(M+1). 1H NMR(400MHz,DMSO)δ12.28(s,1H),9.00(d,J＝1.4Hz,1H),8.41(d,J＝2.3Hz,1H),7.93(s,3H),7.38–7.31(m,4H),7.03(d,J＝0.6Hz,1H),4.48(s,2H),4.14(q,J＝8.8,5.6Hz,2H),3.62–3.54(m,1H),3.19–3.08(m,1H)。
实施例23
Figure PCTCN2021073564-appb-000053
(S)-3-氨基-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)-2-(对甲苯基)丙酰胺
具体反应方程式如下所示：
Figure PCTCN2021073564-appb-000054
步骤A：2-(对甲苯基)乙酰氯(化合物23.1)
将对甲基苯乙酸(5.0g，33.29mmol)溶解在100mL二氯甲烷中，将反应液冷却至0度，在氮气保护下滴加草酰氯(5.07g，39.95mmol),反应液在室温搅拌12小时。将反应液减压浓缩得到产物23.1(5.61g，产率：100％，黄色油状物)。
步骤B：(R)-4-苄基-3-(2-(对甲苯基)乙酰基)恶唑烷丁-2-酮(化合物23.2)
将(R)-4-苄基恶唑烷-2-酮(5.6g，31.61mmol)溶解在60mL四氢呋喃中，将反应液冷却至-78度，在氮气保护下，滴加2.5M的正丁基锂(13.97mL，34.93mmol)，反应液在-78度搅拌1小时。然后向反应液中滴加化合物1.1(5.61g，33.27mmol)的四氢呋喃溶液30mL。反应液在-78度搅拌2.5小时，然后逐渐升高至室温，搅拌12小时。向反应液中加入氯化铵溶液50mL，用乙酸乙酯(300mL)萃取2次，合并有机相，用饱和食盐水(100mL)洗2次，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，剩余物用柱层析纯化得到产物23.2(5.7g，产率：55％，无色油状物)。LCMS ESI(+)m/z：310.1(M+1).
步骤C：2-((R)-3-((R)-4-苄基-2-氧代恶唑烷丁-3-基)-3-氧代-2-(对甲苯基)丙基)异吲哚啉-1,3-二酮(化合物23.3)
在零下78摄氏度下，将化合物23.2(5.7g，18.43mmol)溶于70mL无水四氢呋喃中，然后慢慢滴入双三甲基硅基胺基锂(22.1mL，22.1mmol)到反应液里，在此温度下搅拌1小时，紧接着将称量好的N-溴甲基邻苯二甲酰亚胺(5.31g，22.1mmol)溶解于无水四氢呋喃(35mL)后慢慢滴加到反应瓶中，之后在此温度下搅拌3小时。用氯化铵饱和溶液对反应进行淬灭，乙酸乙酯(200mL)萃取2次，分液合并有机相，有机相用饱和食盐水(100mL)洗涤2次，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化后得到化合物23.3(7.8g，收率：90％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z:469.2(M+1).
步骤D：(R)-2-((2-羧基-2-(对甲苯基)乙基)氨基甲酰基)苯甲酸(化合物23.4)
将化合物23.3(7.8g，16.65mmol)溶于25mL甲醇和100mL四氢呋喃中，然后将一水合氢氧化锂(2.1g，49.95mmol)溶于水(40mL)里滴入到反应液中，在室温搅拌2小时。向反应液中加入水120mL，水相用乙酸乙酯(40mL)洗3次，然后用1M的盐酸溶液调节pH为3，用乙酸乙酯(100mL)萃取2次，分液合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干后得到化合物23.4(4.6g，收率：84％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z:328.1(M+1).
步骤E：(R)-3-(1,3-二氧异吲哚-2-基)-2-(对甲苯基)丙酸(化合物23.5)
将化合物23.4(4.6g，14.05mmol)溶解在80mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(4.0g，21.07mmol)，1-羟基苯并三唑(2.84g，21.07mmol)和三乙胺(5.26g，42.15mmol)，反应液在室温搅拌12小时。将反应液用1M盐酸溶液调节pH至3，用乙酸乙酯(100mL)萃 取2次，合并有机相，用饱和食盐水(50mL)洗3次，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，剩余物用柱层析纯化得到产物23.5(2.8g，产率：64％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z：310.1(M+1).
步骤F：(S)-3-(1,3-二氧异吲哚-2-基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)-2-(对甲苯基)丙酰胺(化合物23.6)
将化合物23.5(600mg，1.94mmol)溶解在30mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入二异丙基乙胺(664mg，5.82mmol)，2-(7-氧化苯并三氮唑)-N，N，N”，N'-四甲基脲六氟磷酸盐(1.1g，2.91mmol)和噻吩并[2,3-c]吡啶-2-胺(361mg，1.94mmol)。反应液在室温搅拌16小时。向反应液中加入水30mL，用乙酸乙酯(50mL)萃取2次，合并有机相，用饱和食盐水(30mL)洗2次，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，剩余物用柱层析纯化得到产物23.6(500mg，产率：58％，黄色固体)。LCMS ESI(+)m/z：442.1(M+1).
步骤G：(S)-3-氨基-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)-2-(对甲苯基)丙酰胺(化合物23)
将化合物23.6(500mg，1.13mmol)溶解在30mL乙醇和5mL N,N-二甲基甲酰胺中中，加入水合肼(567mg，11.30mmol)，反应液在50度搅拌4小时。将反应液冷却至室温，有固体析出，过滤，将滤液减压浓缩，剩余物用柱层析纯化得到粗产物360mg，取100mg样品用反向制备纯化得到产物实施例23(53mg，产率：53％，白色固体)。LCMS ESI(+)m/z：312.1(M+1). 1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.51(s,1H),9.49(s,1H),8.52(d,J＝6.4Hz,1H),8.27(s,3H),8.16(d,J＝6.4Hz,1H),7.48-7.32(m,3H),7.20(d,J＝8.0Hz,2H),4.44(dd,J＝5.6,8.8Hz,1H),3.62(s,1H),3.17-3.04(m,1H),2.28(s,3H).
实施例24
Figure PCTCN2021073564-appb-000055
(S)-3-(二甲基氨基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)-2-(对甲苯基)丙酰胺
具体反应方程式如下所示：
Figure PCTCN2021073564-appb-000056
步骤A：(S)-3-(二甲基氨基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)-2-(对甲苯基)丙酰胺(化合物24)
将(S)-3-氨基-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)-2-(对甲苯基)丙酰胺(260mg，0.83mmol)溶解在30mL甲醇中，加入37％-40％甲醛水溶液(339mg，4.17mmol),氰基硼氢化钠(157mg，2.50mmol)和醋酸(150mg，2.50mmol)，反应液在室温和氮气保护下搅拌2小时。向反应液中加入碳酸氢钠水溶液(20mL)，用乙酸乙酯(70mL)萃取2次，合并有机相，用饱和食盐水(20mL)洗1次，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，剩余物用反向制备纯化得到产物实施例24(130mg，产率：46％，淡黄色固体)。LCMS ESI(+)m/z：340.1(M+1). 1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ13.88(s,1H),10.56(s,1H),9.50(s,1H),8.53(d,J＝6.4Hz,1H),8.19(d,J＝6.4Hz,1H),7.49-7.37(m,3H),7.22(d,J＝8.0Hz,2H),4.82(dd,J＝4.4,8.8Hz,1H),4.03(dd,J＝8.8,12.8Hz,1H),3.47(d,J＝12.0Hz,1H),2.80(s,6H),2.28(s,3H).
实施例25
Figure PCTCN2021073564-appb-000057
4-(3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苯甲酸甲酯
具体反应方程式如下所示：
Figure PCTCN2021073564-appb-000058
步骤A：2-(4-溴苯基)-3-(1,3-二氧异吲哚-2-基)丙酸甲酯(化合物25.1)
在零下78摄氏度下，将对溴苯乙酸甲酯(2.0g，8.73mmol)溶于40mL无水四氢呋喃中，然后慢慢滴入双三甲基硅基胺基锂(1.75g，10.48mmol)到反应液里，在此温度下搅拌1小时，紧接着将称量好的N-溴甲基邻苯二甲酰亚胺(2.52g，10.48mmol)溶解于无水四氢呋喃(20mL)后慢慢滴加到反应瓶中，之后在此温度下搅拌2小时。用氯化铵饱和溶液对反应进行淬灭，乙酸乙酯(100mL)萃取2次，分液合并有机相，有机相用饱和食盐水(50mL)洗涤2次，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干，柱层析纯化后得到化合物25.1(2.64g，收率：78％)。LCMS ESI(+)m/z:388.0,390.0(M+1).
步骤B：2-((2-(4-溴苯基)-2-羧乙基)氨基甲酰基)苯甲酸(化合物25.2)
将化合物25.1(2.6g，6.7mmol)溶于25mL甲醇和25mL四氢呋喃中，然后将一水合氢氧化锂(482mg，20.1mmol)溶于水(10mL)里滴入到反应液中，在室温搅拌3小时。向反应液中加入水50mL，用1M的盐酸溶液调节pH为3，用乙酸乙酯(60mL)萃取2次，分液合并有机相，无水硫酸钠干燥，过滤，旋干后得到化合物25.2(2.63g，收率：100％)。LCMS ESI(+)m/z:392.0,394.0(M+1).
步骤C：2-(4-溴苯基)-3-(1,3-二氧异吲哚-2-基)丙酸(化合物25.3)
将化合物25.2(2.63g，6.89mmol)溶解在50mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(1.98g，10.33mmol)，1-羟基苯并三唑(1.4g，10.33mmol)和三乙胺(2.09g，20.67mmol)，反应液在室温搅拌12小时。将反应液用1M盐酸溶液调节pH至3，用乙酸乙酯(60mL)萃取2次，合并有机相，用饱和食盐水(50mL)洗3次，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，剩余物用柱层析纯化得到产物25.3(1.6g，产率：62％)。LCMS ESI(+)m/z：274.0,276.0(M+1).
步骤D：2-(4-溴苯基)-3-(1,3-二氧异吲哚-2-基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺(化合物25.4)
将化合物25.3(1.0g，2.67mmol)溶解在20mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入二异丙基乙胺(690mg，8.02mmol)，2-(7-氧化苯并三氮唑)-N，N，N”，N'-四甲基脲六氟磷酸盐(1.53g，4.01mmol)和噻吩并[2,3-c]吡啶-2-胺(440mg，2.94mmol)。反应液在室温搅拌2小时。向反应液中加入水30mL，用乙酸乙酯(50mL)萃取2次，合并有机相，用饱和食盐水(30mL)洗2次，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，剩余物用柱层析纯化得到产物25.4(560mg，产率：41％)。LCMS ESI(+)m/z：506.0,508.0(M+1).
步骤E：3-氨基-2-(4-溴苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺(化合物25.5)
将化合物25.4(560mg，1.10mmol)溶解在30mL乙醇中，加入水合肼(551mg，11.00mmol)，反应液在50度搅拌4小时。将反应液冷却至室温，有固体析出，过滤，将滤液减压浓缩得到产物25.5(415mg，产率：100％)。LCMS ESI(+)m/z：376.0,378.0(M+1).
步骤F：(2-(4-溴苯基)-3-氧代-3-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(化合 物25.6)
将化合物25.5(415mg，1.10mmol)溶解在15mL N,N-二甲基甲酰胺中，加入三乙胺(333mg，3.30mmol)，BOC酸酐(480mg，2.20mmol)，反应液在室温搅拌3小时。向反应液中加入水30mL，用乙酸乙酯(60mL)萃取2次，合并有机相，用饱和食盐水(40mL)洗3次，无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，剩余物用柱层析纯化得到产物25.6(525mg，产率：100％)。LCMS ESI(+)m/z：476.0,478.0(M+1).
步骤G：4-(3-((叔丁氧基羰基)氨基)-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苯甲酸甲酯(化合物25.7)
将化合物25.6(100mg，0.21mmol)溶解在2mL N,N-二甲基甲酰胺,2mL三乙胺和6mL甲醇中，加入1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(44mg，0.06mmol)，反应液在80度和一氧化碳氛围中搅拌12小时。向反应液中加入水30mL，用乙酸乙酯(50mL)萃取2次，合并有机相，用饱和食盐水(30mL)洗2次，用无水硫酸钠干燥，过滤，减压浓缩，剩余物用柱层析纯化得到产物25.7(37mg，产率：39％)。LCMS ESI(+)m/z：456.2(M+1).
步骤H：4-(3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苯甲酸甲酯(化合物25)
将化合物25.7(37mg，0.08mmol)溶解在5mL甲醇中，加入4M的盐酸/甲醇溶液2mL，反应液在室温搅拌4小时。将反应液减压浓缩，剩余物用反向制备纯化得到产物实施例25(20mg，产率：69％)。LCMS ESI(+)m/z：356.1(M+1).
实施例26
Figure PCTCN2021073564-appb-000059
4-(3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苯甲酸
具体反应方程式如下所示：
Figure PCTCN2021073564-appb-000060
步骤A：4-(3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苯甲酸(化合物26)
将4-(3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苯甲酸甲酯(15mg，0.04mmol)溶解在5mL四氢呋喃中，加入一水合氢氧化锂(5.3mg，0.12mmol)的水溶液2mL,反应液在室温搅拌2小时。向反应液中加入2M的盐酸溶液至pH为5，将反应液减压浓缩，剩余物用反向制备纯化得到产物实施例26(7mg，产率：50％)。LCMS ESI(+)m/z：342.1(M+1).
实施例27
Figure PCTCN2021073564-appb-000061
(S)-4-(3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苯甲酸苄酯
具体反应方程式如下所示：
Figure PCTCN2021073564-appb-000062
步骤A：(S)-4-(3-(1,3-二氧异吲哚-2-基)-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苯甲酸苄酯(化合物27.1)
将(S)-3-(1,3-二氧异吲哚-2-基)-2-(4-(羟甲基)苯基)-N-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基)丙酰胺(80mg,0.175mmol)溶于2mL的吡啶中，在冰水浴下加入苯甲酰氯(80uL,0.694mmol)，然后升至室温并搅拌2.5小时。LCMS监测反应完全。加入水淬灭反应，用乙酸乙酯(20mLX2)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(30mL)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物27.1(90mg，产率：92％)。
步骤B：(S)-4-(3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苯甲酸苄酯(化合物27)
将化合物27.1(90mg,0.16mmol)溶于5mL的四氢呋喃中，然后加入水合肼(77uL,1.6mmol),在55℃下反应3小时。TLC及LCMS监测反应完全。反应完后加水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(20mLX2)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(10mLX2)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，得到的残留物溶于5mL的甲醇和水溶液中，过滤，滤液用反相制备纯化，冻干后得到目标产物实施例27(36mg，产率：52％，纯度：97％)。LCMS ESI(+)m/z:432.2(M+1). 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ13.56(s,1H),9.48(s,1H),8.52(d,J＝6.4Hz,1H),8.26(s,3H),8.15(d,J＝6.4Hz,1H),8.07–7.86(m,2H),7.66(t,J＝7.4Hz,1H),7.53(dt,J＝11.9,6.0Hz,6H),7.41(s,1H),5.34(s,2H),4.51(dd,J＝8.5,5.5Hz,1H),3.65(s,1H),3.18(d,J＝5.5Hz,1H).
实施例28
Figure PCTCN2021073564-appb-000063
(S)-4-(3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)2,4-二甲基苯甲酸酯
Figure PCTCN2021073564-appb-000064
步骤A：(S)-4-(3-((叔丁氧羰基)氨基)-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基2,4-苯甲酸二甲酯(化合物28.1)
将(S)-(2-(4-(羟甲基)苯基)-3-氧代-3-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(100mg,0.234mmol)和2,4-二甲基苯甲酸(38mg,0.257mmol)溶于3mL的N，N-二甲基甲酰胺中，然后加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(67mg,0.351mmol)和4-二甲氨基吡啶(28mg,0.234mmol)，在室温下反应过夜。TLC监测反应完全。加入水淬灭反应，用乙酸乙酯(20mLX2)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(10mLX2)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物28.1(91mg，产率：69％)。
步骤B：(S)-4-(3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)2,4-二甲基苯甲酸酯(化合物28)
将化合物28.1(89mg,0.16mmol)溶于5mL的甲醇中，加入3mL盐酸甲醇溶液(4M)，先在室温下搅拌 1小时，然后将体系升温至50℃反应2小时，TLC监测反应完全。待反应完后，减压浓缩反应液，剩余物溶于5mL的甲醇和水溶液中，过滤，滤液用反相制备纯化，冻干后得到目标产物实施例28(50mg，产率：68％，纯度：98％)。LCMS ESI(+)m/z:460.2(M+1). 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ13.52(s,1H),9.47(s,1H),8.51(d,J＝6.4Hz,1H),8.26(s,3H),8.14(d,J＝6.4Hz,1H),7.77(d,J＝8.0Hz,1H),7.51(dd,J＝17.6,8.0Hz,4H),7.41(s,1H),7.27–6.92(m,2H),5.28(s,2H),4.51(dd,J＝8.4,5.6Hz,1H),3.65(s,1H),3.19(s,1H),2.49(s,3H),2.30(s,3H).
实施例29
Figure PCTCN2021073564-appb-000065
(S)-4-(3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)3,5-二甲基苯甲酸酯
具体反应方程式如下所示：
Figure PCTCN2021073564-appb-000066
步骤A：(S)-4-(3-((叔丁氧羰基)氨基)-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)苄基3,5-苯甲酸二甲酯(化合物29.1)
将(S)-(2-(4-(羟甲基)苯基)-3-氧代-3-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(100mg,0.234mmol)和3,5-二甲基苯甲酸(38mg,0.257mmol)溶于3mL的N，N-二甲基甲酰胺中，然后加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亚胺盐酸盐(67mg,0.351mmol)和4-二甲氨基吡啶(28mg,0.234mmol)，在室温下反应过夜。TLC监测反应完全。加入水淬灭反应，用乙酸乙酯(20mLX2)萃取，合并有机相，用饱和食盐水(10mLX2)洗涤，有机相经无水硫酸钠干燥,过滤、旋干，柱层析纯化得产物29.1(96mg，产率：73％)。
步骤B：(S)-4-(3-氨基-1-氧-1-(噻吩并[2,3-c]吡啶-2-基氨基)丙-2-基)3,5-二甲基苯甲酸酯(化合物29)
将化合物29.1(96mg,0.17mmol)溶于5mL的甲醇中，加入2mL盐酸甲醇溶液(4M)，先在室温下搅拌1小时，然后将体系升温至50℃反应2小时，TLC监测反应完全。待反应完后，减压浓缩反应液，剩余物溶于5mL的甲醇和水溶液中，过滤，滤液用反相制备纯化，冻干后得到目标产物实施例29(46mg，产率：60％，纯度：98％)。LCMS ESI(+)m/z:460.2(M+1). 1H NMR(400MHz,DMSO-d 6)δ13.34(s,1H),9.46(s,1H),8.51(d,J＝6.6Hz,1H),8.18(s,3H),8.13(d,J＝6.6Hz,1H),7.59(s,2H),7.51(s,4H),7.37(s,1H),7.29(s,1H),5.32(s,2H),4.45(dd,J＝8.8,5.6Hz,1H),3.64(s,1H),3.20(s,1H),2.31(s,6H).
实施例30：ROCK2激酶抑制剂活性测试
<一>实验过程。
1)按照实验需求准备4X ROCK2反应溶液，4X ATP反应溶液，4X底物溶液，4X化合物溶液。
2)向384多孔板中依次加入2.5μL，4X激酶溶液，和2.5μL，已经稀释好的不同浓度梯度的4X测试化合物溶液，每个浓度设置2个复孔，同时设置酶溶液空白对照组和阴性对照组(DMSO组)，1000转，离心1分钟，混匀酶和化合物，向384多孔板中加入2.5μL，4X底物溶液，1000转离心1分钟，向384多孔板中加入2.5μL，4XATP溶液，1000转离心1分钟起始酶反应，室温孵育1.5小时。
ROCK2反应的各组分终浓度分别为：ROCK2：1nM，底物：500nM，ATP：6uM，测试化合物终浓度范围为：100nM-5pM
3)按照实验需求配制4X Streptavidin-XL-665检测溶液。
4)酶反应结束后，向384多孔板每孔中加入5ul，4X Streptavidin-XL-665检测溶液，1000转，离心1分钟，向384多孔板每孔中加入5μL，4X STK Antibody-cryptate检测抗体溶液，1000转，离心1分钟，室温条件下孵育1小时。
5)抗体孵育结束后，在Envision读板仪上用HTRF程序测定各孔的信号值。
<二>数据分析
1)以酶溶液空白对照组为100％抑制率和阴性对照组(DMSO组)为0％抑制率，计算检测化合物各个浓度对应的百分比抑制率。
2)在GraphPad Prism软件中对检测化合物的浓度对数值和相对应的百分比抑制率进行非线性回归分析，得到检测化合物的半数抑制浓度(IC50)。
用此方法检测得到化合物ROCK2激酶抑制剂活性(IC 50)如下表：
Figure PCTCN2021073564-appb-000067
实施例31：细胞活性测试
<一>实验过程
1)消化处于对数生长期的A7R5细胞，每孔2E5个细胞接种在6孔板中，5％CO2，37℃培养过夜，24小时后将细胞培养基替换为含有0.05％FBS的饥饿培养基，饥饿细胞20小时。
2)去除饥饿培养基，用配制好的化合物浓度梯度处理细胞60分钟，设置VIP-5021(10uM)为阳性对照，DMSO组为阴性对照。
3)化合物处理结束后，吸走化合物溶液，PBS清洗2次，每孔加入100ul细胞裂解液，用细胞刮板轻轻刮下细胞，并将细胞转移至离心管中，冰上裂解60分钟。
4裂解结束后，4℃，14000rpm离心15分钟，收集裂解液上清，采用BCA方法进行蛋白定量，调整蛋白浓度，按照比例加入上样缓冲液，100℃，处理10分钟，使蛋白变性。
5)组装好电泳设备，每个样品上样20ug总蛋白，固定电压125V，电泳90分钟，电泳结束后，组装转膜系统，固定电流300mA，转膜120分钟，转膜结束后，取出PVDF膜，PBS清洗2次，加入封闭液，室温封闭60分钟，去除封闭液，加入含有一抗(Phospho-Myosin Light Chain2(Ser19))溶液(抗体稀释倍数1：1000)，选定GAPDH作为内参，4℃，孵育过夜。
6)PBST清洗3次，加入含有对应种属的HRP-抗体(二抗稀释倍数1：2000)，室温孵育60分钟，PBST清洗3次，准备HRP化学发光底物，按照0.1毫升每平方厘米滴加在PVDF膜上，作用30秒，使用凝胶成像仪(ChemiDoc XRS+(BIO-RAD))采集化学发光信号。
7)使用imageJ软件对各个条带进行定量分析，以GAPDH表达量为内参，校正各个样品中Phospho-Myosin Light Chain2(Ser19)的磷酸化蛋白水平。
<二>数据分析
1)以最高浓度化合物样品的MLC2(Ser19)蛋白磷酸化水平为100％抑制率，以阴性对照组(DMSO组)的MLC2(Ser19)蛋白磷酸化水平为0％抑制率，计算检测化合物各个浓度对应的百分比抑制率
2)在GraphPad Prism软件中对检测化合物的浓度对数值和相对应的百分比抑制率进行非线性回归分析，得到检测化合物的细胞水平的半数抑制浓度(IC50)。
用此方法检测得到化合物细胞活性(IC 50)如下表：
Ex# IC 50(nM) Ex# IC 50(nM)
8 35 9 21

Claims (9)

  1. 一种含硫的杂环化合物，其特征在于：为由如下结构式所示的化合物或其立体异构体，几何异构体，互变异构体，消旋体，氘代同位素衍生物，水合物，溶剂化物，代谢产物以及药学上可接受的盐或前药；
    Figure PCTCN2021073564-appb-100001
    其中，环A为芳基或杂芳基；
    B为并环杂芳基，含一个N原子和一个硫原子；
    R 1为B环上任一或任几取代的氢、羟基、卤素、氨基、氰基、取代或未取代的烷基、取代或未取代的烷氧基、取代或未取代的杂烷基；
    R 2为B环上任一或任几取代的氢、卤素、氰基、取代或未取代的烷基、取代或未取代的烷氧基；
    R 3、R 4分别独立地选自氢、取代或未取代的烷基、取代或未取代的环烷基；
    或者，R 3与R 4相连构成取代或未取代的环杂烷基；
    R 5为A环上任一或任几取代的氢、羟基、卤素、氨基、氰基、取代或未取代的烷基、取代或未取代的烷氧基、取代或未取代的杂烷基。
  2. 如权利要求1所述的一种含硫的杂环化合物，其特征在于，为如下结构所示的化合物或其立体异构体，几何异构体，互变异构体，消旋体，氘代同位素衍生物，水合物，溶剂化物，代谢产物以及药学上可接受的盐或前药：
    Figure PCTCN2021073564-appb-100002
  3. 如权利要求1所述的一种含硫的杂环化合物，其特征在于，为如下结构所示的化合物或其立体异构体，几何异构体，互变异构体，消旋体，氘代同位素衍生物，水合物，溶剂化物，代谢产物以及药学上可接受的盐或前药：
    Figure PCTCN2021073564-appb-100003
  4. 如权利要求3所述的一种含硫的杂环化合物，其特征在于，式A所示化合物的具体制备方法如下所示：
    S1.化合物IV-1和化合物IV-2在碱性条件下，加热反应获得化合物IV-3；
    S2.化合物IV-3水解为化合物IV-4；
    S3.化合物IV-4进行Curtius重排获得化合物IV-5；
    S4.化合物IV-5和中间体Interm A偶合反应形成化合物IV-6；
    S5.化合物IV-6脱保护得到化合物IIa1；
    S6.化合物IIa1进行单一或双烷基化反应形成化合物IIa2；
    其中，化合物Interm A、IV-1、IV-2、IV-3、IV-4、IV-5、IV-6、IIa1、IIa2为如下结构所示的化合物：
    Figure PCTCN2021073564-appb-100004
    Re选自烷基，Prot是胺基保护基团。
  5. 如权利要求3所述的一种含硫的杂环化合物，其特征在于，式B所示化合物的具体制备方法如下所示：
    S1.化合物Interm B在碱性条件下和三氟甲磺酸酐反应得到化合物V-1；
    S2.化合物V-1用钯催化的胺化反应得到式化合物V-2；
    S3.化合物V-2水解得到化合物V-3；
    S4.化合物V-3和化合物Interm A反应得到化合物V-4；
    S5.化合物V-4脱保护得到化合物IIIb1；
    S6.化合物IIIb1进行单一或双烷基化反应形成化合物IIIb2；
    其中，化合物Interm B、Interm A、V-1、V-2、V-3、V-4、IIIb1、IIIb2为如下结构所示的化合物：
    Figure PCTCN2021073564-appb-100005
    Prot是胺基保护基团。
  6. 如权利要求1所述的一种含硫的杂环化合物，其特征在于，为如下结构所示的化合物或其立体异构体，几何异构体，互变异构体，消旋体，氘代同位素衍生物，水合物，溶剂化物，代谢产物以及药学上可接受的盐或前药：
    Figure PCTCN2021073564-appb-100006
    R 6选自取代或未取代的烷基、取代或未取代的芳基、取代或未取代的杂芳基、取代或未取代的烷氧基、NR AR B；
    其中，R A和R B独立的选自取代或未取代的烷基、或R A和R B相连构成取代或未取代的环杂烷基。
  7. 如权利要求1-6任一项所述的一种含硫的杂环化合物、或其立体异构体、或其药学上可接受的盐、或其溶剂合物、或其前体药物、或其代谢产物，用于制备ROCK抑制剂类药物。
  8. 如权利要求1-6任一项所述的一种含硫的杂环化合物、或其立体异构体、或其药学上可接受的盐、或其溶剂合物、或其前体药物、或其代谢产物，用于制备治疗心血管疾病、高眼压症、肺动脉高压、青光眼的药物。
  9. 以如权利要求1-6任一项所述的一种含硫的杂环化合物、或其立体异构体、或其药学上可接受的盐、或其溶剂合物、或其前体药物、或其代谢产物为活性成分，加上药学上可接受的辅料制备而成的制剂。
PCT/CN2021/073564 2019-12-12 2021-01-25 一种小分子含硫杂环化合物 WO2021115495A1 (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201911274951.7A CN112979675B (zh) 2019-12-12 2019-12-12 一种小分子含硫杂环化合物
CN201911274951.7 2019-12-12

Publications (1)

Publication Number Publication Date
WO2021115495A1 true WO2021115495A1 (zh) 2021-06-17

Family

ID=76329652

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
PCT/CN2021/073564 WO2021115495A1 (zh) 2019-12-12 2021-01-25 一种小分子含硫杂环化合物

Country Status (2)

Country Link
CN (1) CN112979675B (zh)
WO (1) WO2021115495A1 (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023143476A1 (en) * 2022-01-27 2023-08-03 Vivavision Biotech, Inc. Deuterated rock inhibitors, pharmaceutical compositions, and therapeutic applications

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110248939A (zh) * 2017-01-30 2019-09-17 奇斯药制品公司 作为rho-激酶抑制剂的酪氨酸酰胺衍生物
WO2019178324A1 (en) * 2018-03-14 2019-09-19 Aerie Pharmaceuticals, Inc. Amino-benzoisothiazole and amino-benzoisothiadiazole amide compounds
CN110382481A (zh) * 2016-11-21 2019-10-25 转化药物开发有限责任公司 作为激酶抑制剂的杂环化合物
CN111217834A (zh) * 2020-02-21 2020-06-02 维眸生物科技（上海）有限公司 Rock激酶抑制剂的硝基氧衍生物

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110382481A (zh) * 2016-11-21 2019-10-25 转化药物开发有限责任公司 作为激酶抑制剂的杂环化合物
CN110248939A (zh) * 2017-01-30 2019-09-17 奇斯药制品公司 作为rho-激酶抑制剂的酪氨酸酰胺衍生物
WO2019178324A1 (en) * 2018-03-14 2019-09-19 Aerie Pharmaceuticals, Inc. Amino-benzoisothiazole and amino-benzoisothiadiazole amide compounds
CN111217834A (zh) * 2020-02-21 2020-06-02 维眸生物科技（上海）有限公司 Rock激酶抑制剂的硝基氧衍生物

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2023143476A1 (en) * 2022-01-27 2023-08-03 Vivavision Biotech, Inc. Deuterated rock inhibitors, pharmaceutical compositions, and therapeutic applications

Also Published As

Publication number Publication date
CN112979675A (zh) 2021-06-18
CN112979675B (zh) 2023-12-19

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN103038233B (zh) 吡啶酮和氮杂吡啶酮化合物及使用方法
TWI480282B (zh) 稠合雜環衍生物及其用途
WO2021088945A1 (zh) 作为shp2抑制剂的化合物及其应用
WO2021104431A1 (zh) Kras g12c抑制剂化合物及其用途
CN106458934B (zh) 喹喔啉化合物及其用途
WO2015127872A1 (zh) 2,4-二取代苯-1,5-二胺衍生物及其应用以及由其制备的药物组合物和药用组合物
US11976062B2 (en) Benzisoxazole compound
EP3150592B1 (en) Alk kinase inhibitor, and preparation method and use thereof
CN113286794A (zh) Kras突变蛋白抑制剂
WO2002032872A1 (en) Nitrogenous aromatic ring compounds
CN108884078A (zh) 糖苷酶抑制剂
TW201446758A (zh) 作爲β－分泌酶抑制劑的全氟化５，６－二氫－４Ｈ－１，３－□－２－胺化合物及其用途
CN111566089A (zh) Ire1小分子抑制剂
TWI748996B (zh) 嘧啶類七元環化合物、其製備方法、藥用組合物及其應用
CN103459382B (zh) 用于抑制pask的杂环化合物
CN111163766A (zh) Ahr抑制剂和其用途
CN112004816A (zh) Prc2抑制剂
US8822485B2 (en) Amino heteroaryl compounds as beta-secretase modulators and methods of use
CN114269748A (zh) 作为用于治疗癌症的PRC2抑制剂的咪唑并[1,2-c]嘧啶衍生物
CN115038688A (zh) Usp30抑制剂及其用途
WO2020108661A1 (zh) 作为cdk-hdac双通路抑制剂的杂环化合物
CN104822658B (zh) 作为多种激酶抑制剂的稠合三环酰胺类化合物
TW201441233A (zh) 作爲β－分泌酶抑制劑之稠合多環的碸化合物及其使用方法
WO2021115495A1 (zh) 一种小分子含硫杂环化合物
KR20230133396A (ko) Rip2 키나아제 억제제로서의 헤테로아릴 화합물, 이의 조성물 및 용도

Legal Events

Date Code Title Description
121 Ep: the epo has been informed by wipo that ep was designated in this application

Ref document number: 21731377

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1

NENP Non-entry into the national phase

Ref country code: DE

122 Ep: pct application non-entry in european phase

Ref document number: 21731377

Country of ref document: EP

Kind code of ref document: A1