CN111213585B - 一种楸树一步法组培快繁培育工艺 - Google Patents

一种楸树一步法组培快繁培育工艺 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种楸树一步法组培快繁培育工艺。步骤如下：将清洗后的带腋芽的茎段接入原代培养基中，在原代培养基的诱导下，腋芽分化出叶片，获得无菌苗；待不定芽无菌苗生长至1～2cm后即可接种到一步法诱导培养基中进行培养；将经过诱导产生的长势良好的生根组培苗，移至自然光下，先松开瓶口，再逐渐打开瓶盖炼苗，炼苗5～7d后取出组培苗，洗净根部的琼脂，移栽置灭菌的基质中即可。本发明将楸树的扩繁、壮苗和生根三个环节融为一体，在本发明提供的一种培养基上仅需30d便可将楸树小苗培养成长为完整的植株，直接用于移栽。

Description

一种楸树一步法组培快繁培育工艺
技术领域
本发明涉及一种楸树的体外培养方法，涉及一种楸树一步法组培快繁培育工艺。
背景技术
楸树(Catalpa bungei C.A.Mey.)为紫葳科乔木，分布在我国山东、河北、河南、山西、陕西、甘肃、江苏、浙江、湖南等地。楸树用途广泛，享有“木王”的美誉。它木材密度大、材质坚韧，纹理通直、花纹美观，耐腐抗蛀，是我国重要且珍贵的材种，作为家具和建筑用材，并用于制造枪托、模型、船舶、乐器、文化体育用品等特殊用途。另外，楸树树形优美、枝叶繁茂、花色艳丽，具有较高的观赏价值和绿化效果，可作行道树和观赏树。并且楸树能隔音、降噪、除尘，吸收二氧化硫、氯气等有害气体，是绿化城市、改善环境的优良树种。因此，楸树目前的市场需求量很大。
楸树传统的繁殖方法主要有：播种、埋根、扦插和嫁接，但这些方法存在成活率低、繁殖材料不足、操作复杂、需要大量田间管理等问题，不利于楸树的大量繁殖和推广。现代植物组织培养技术为楸树的快速繁殖提供了有效途径，前人对楸树组培已做了大量的研究，楸树组培通常需要经历芽诱导、扩繁、壮苗、生根、炼苗移栽等步骤，需多种培养基，并且每个环节都要转瓶移栽，需要消耗大量的人力和物力。
发明内容
针对上述现有技术的不足，本发明提供一种楸树一步法组培快繁培育工艺。实现了组培苗的几何级数增长，可在短时间内大量生产种苗。
一种楸树一步法组培快繁培育工艺，步骤如下：
1)原代培养
将清洗后的带腋芽的茎段接入原代培养基中，在原代培养基的诱导下，腋芽分化出叶片，获得无菌苗；
所述原代培养基为：诱导培养基为MS基础培养基，加入6-BA 0.5～5mg/L、KT 0.01～2mg/L、NAA 0.01～2mg/L、蔗糖10～50g/L、琼脂5.0～10.0g/L，调节培养基pH值为5.7～5.9；
2)一步法诱导培养
待步骤1)诱导产生的无菌苗生长至1～2cm后即可接种到一步法诱导培养基中进行培养；
所述一步法诱导培养基为：诱导培养基为MS培养基，加入TDZ 0.01～3mg/L、KT0.01～2mg/L、灵发素0.01～1mg/L、腺嘌呤20mg/L、蔗糖10～50g/L、琼脂5.0～10.0g/L，调节培养基pH值为5.7～5.9；
3)移栽
将步骤2)获得的带根的长势良好的组培苗，移至自然光下，先松开瓶口，再逐渐打开瓶盖炼苗，炼苗5～7d后取出组培苗，洗净根部的琼脂，移栽置灭菌的基质中即可。
优选的，步骤1)所述清洗步骤为：先用质量百分数0.05％的洗洁精浸泡金丝楸幼嫩茎段10min，再用自来水反复冲洗干净，转入超净工作台，无菌水冲洗3～5次，用70％乙醇消毒30s，再用0.1％的HgCl2消毒8min，然后用无菌水冲洗3～5次。
优选的，步骤1)所述原代培养条件为：培养温度25±1℃，光照强度1500～2000lx，光照时间为14h/d。
优选的，步骤2)所述一步法诱导培养条件为：培养温度25±1℃，光照强度1500～2000lx，光照时间为16h/d。
优选的，步骤3)所述基质为灭菌土、蛭石和珍珠岩按照体积比(1～3):(1～3):(1～3)的混合物。
有益效果：
本发明将楸树的扩繁、壮苗和生根三个环节融为一体，在本发明提供的一种培养基上仅需30d便可将楸树小苗培养成长为完整的植株，直接用于移栽。并且在植株的基部可以同时分化出大量的再生苗可用于继代循环，实现了组培苗数目呈几何级数增长，可在短时间内大量生产种苗。本发明大大简化了楸树的育苗程序，缩短了育苗周期，育苗期间无需转瓶，大大节约了人力和生产成本，为楸树种苗的快速繁育提供技术支撑。
附图说明
图1为本发明实施例1培育的楸树组培苗生长和生根情况。
图2为本发明对比例1培育的楸树组培苗生长和生根情况。
图3为本发明对比例2培育的楸树组培苗生长和生根情况。
图4为本发明对比例3培育的楸树组培苗生长和生根情况。
具体实施方式
实施例1
楸树一步法组培快繁培育工艺，步骤如下：
1)原代培养
先用质量百分数0.05％的洗洁精(市售常规产品即可)浸泡金丝楸幼嫩茎段10min，再用自来水反复冲洗干净，转入超净工作台，无菌水冲洗3～5次，用70％乙醇消毒30s，再用0.1％的HgCl2消毒8min，然后用无菌水冲洗3～5次,最后将带腋芽的茎段接入原代培养基中，培养温度25±1℃，光照强度1500～2000lx，光照时间为14h/d；在原代培养基的诱导下腋芽逐渐萌动、膨大，并逐渐分化出叶片，获得无菌苗；
原代培养基为：MS基础培养基+6-BA2.0mg/L+KT 0.1mg/L+NAA 0.05mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7.0g/L，pH值5.8；
2)一步法诱导培养
待上述步骤诱导产生的无菌苗生长至1～2cm后即可接种到一步法诱导培养基中进行培养；
所述一步法诱导培养基为：MS培养基+TDZ 0.5mg/L+KT 0.2mg/L+LFS(灵发素)0.1mg/L+Ad(腺嘌呤)20mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7.0g/L，pH值5.8；
培养条件为：培养温度25±1℃，光照强度1500～2000lx，光照时间为16h/d；
30d后观察植株的生长及生根情况，并统计扩增系数、生根系数和生根率，扩增系数＝再生植株总数/外植体总数；生根系数＝主根生根总数/外植体总数；生根率＝生根植株总数/外植体总数×100％；
由图1可见楸树嫩芽外植体在该培养基上生长旺盛，植株较高，叶片茂盛，能分化产生大量的丛生苗，扩增系数为25.7。在苗的基部产生大量发达致密的不定根，生根系数为13.6，生根率为100％；
3)移栽
将步骤2)获得的带根的长势良好的组培苗，移至自然光下，先松开瓶口，再逐渐打开瓶盖炼苗，炼苗5～7d后取出组培苗，洗净根部的琼脂，移栽置灭菌的基质(由灭菌土、蛭石和珍珠岩按照体积比1:1:1混合)中即可，注意保持水分。
对比例1：
楸树组培培育工艺，步骤同实施例1。不同之处仅在于，所述一步法诱导培养基为：MS培养基+TDZ 0.5mg/L+KT 0.2mg/L+Ad 20mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7.0g/L，pH值5.8；
由图2可见楸树植株矮小，嫩芽外植体在该培养基上没有分化，外植体数目没有增加。基部能分化产生稀疏的短不定根，生根系数为6.3，生根率为75％。
对比例2：
楸树组培培育工艺，步骤同实施例1。不同之处仅在于，所述一步法诱导培养基为：MS培养基+TDZ 0.5mg/L+KT 0.2mg/L+LFS(灵发素)0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7.0g/L，pH值5.8；
由图3可见楸树嫩芽外植体在该培养基上植株较高，长势旺盛，叶色浓绿，叶片舒展，但植株没有分化现象，外植体数目没有增加。在苗的基部可分化出大量较长的不定根，生根系数为9.3，生根率为100％。
对比例3：
楸树一步法组培快繁培育工艺，步骤同实施例1。不同之处仅在于，所述一步法诱导培养基为：MS培养基+6-BA 0.5mg/L+KT 0.2mg/L+NAA0.1mg/L+蔗糖30g/L+琼脂7.0g/L，pH值5.8；
由图4可见楸树嫩芽外植体在该培养基上可成簇分化，产生较多的丛生苗，扩增系数为12.3；但组培苗整体长势弱，叶片较小，有卷曲和玻璃化的现象，部分叶片产生黄化、褐变，在组培苗的基部没有根的分化。
本发明可用其他的不违背本发明的精神或主要特征的具体形式来概述。因此，无论从哪一点来看，本发明的上述实施方案都只能认为是对本发明的说明而不能限制本发明，权利要求书指出了本发明的范围，而上述的说明并未指出本发明的范围，因此，在与本发明的权利要求书相当的含义和范围内的任何改变，都应认为是包括在本发明的权利要求书的范围内。

Claims (5)

1.一种楸树一步法组培快繁培育工艺，其特征在于，步骤如下：
1）原代培养
将清洗后的带腋芽的茎段接入原代培养基中，在原代培养基的诱导下，腋芽分化出叶片，获得无菌苗；
所述原代培养基为：MS基础培养基加入6-BA 0.5~5 mg/L、KT 0.01~2 mg/L、NAA 0.01~2 mg/L、蔗糖 10~50g/L、琼脂5.0~10.0 g/L，调节培养基pH值为5.7~5.9；
2）一步法诱导培养
待步骤1）诱导产生的无菌苗生长至1~2cm后接种到一步法诱导培养基中进行培养；
所述一步法诱导培养基为：MS培养基加入TDZ 0.01~3 mg/L、KT 0.05~1 mg/L、灵发素0.05~1 mg/L、腺嘌呤20 mg/L、蔗糖 10~50g/L、琼脂5.0~10.0 g/L，调节培养基pH值为5.7~5.9；
3）移栽
将步骤2）获得的带根的长势良好的组培苗，移至自然光下，先松开瓶口，再逐渐打开瓶盖炼苗，炼苗5~7 d 后取出组培苗，洗净根部的琼脂，移栽至灭菌的基质中。
2.如权利要求1所述的楸树一步法组培快繁培育工艺，其特征在于，步骤1）所述清洗步骤为：先用质量百分数0.05 %的洗洁精浸泡金丝楸幼嫩茎段10 min，再用自来水反复冲洗干净，转入超净工作台，无菌水冲洗3～5次，用70%乙醇消毒20~60 s，再用0.1 %的HgCl2消毒5~10 min，然后用无菌水冲洗3～5次。
3.如权利要求1所述的楸树一步法组培快繁培育工艺，其特征在于，步骤1）所述原代培养条件为：培养温度25±1℃，光照强度1500~2000lx，光照时间为14 h/d。
4.如权利要求1所述的楸树一步法组培快繁培育工艺，其特征在于，步骤2）所述一步法诱导培养条件为：培养温度25±1℃，光照强度1500~2000 lx，光照时间为16 h/d。
5.如权利要求1所述的楸树一步法组培快繁培育工艺，其特征在于，步骤3）所述基质为灭菌土、蛭石和珍珠岩按照体积比（1~3）:（1~3）:（1~3）的混合物。
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