CN111205348B - 一种长链多肽的固相合成方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种长链多肽的固相合成方法，该发明使用了一种多功能反应釜，该反应釜包括底座、反应釜体、储液槽，在反应釜体顶部设有喷淋层，将液态反应物通过喷洒的方式加入反应釜中，同时反应釜中的固态粉末状物料进行搅拌，使得液态反应物和固态粉末状物料的接触面积增大，提升了反应速率，锦进一步提升了长链多肽的制备效率，多肽合成只在一个反应容器中进行，完全避免了在反应过程中转移反应物造成反应物污染的情况，从而保证了多肽的纯度，且该方法制备的长链多肽氨基酸的副反应较少，副反应产物较少，进一步保证了制备的长链多肽的纯度。

Description

一种长链多肽的固相合成方法

技术领域

本发明属于多肽制备领域，具体涉及一种长链多肽的固相合成方法。

背景技术

多肽是α-氨基酸以肽键连接在一起而形成的化合物，是蛋白质水解的中间产物，常用的多肽合成法为固相和液相两种，固相合成多肽在一定程度上使得多肽的纯度不高，且副反应较多，导致多肽中含有较多副反应产物，进一步影响多肽的纯度；

中国发明CN108059667A公开了一种兰瑞肽的固相合成方法，该发明以Fmoc-氨基树脂为固相合成的载体，依次缩合8个保护氨基酸，的到兰瑞肽的前体线性肽树脂，然后进行二硫环化反应，得到兰瑞肽树脂，采用固相氧化的方式进行二硫键的环化反应，最后将太树脂裂解、脱去侧链保护基，得到兰瑞肽粗品，进一步纯化的到兰瑞肽纯品，该发明制备的兰瑞肽方法简单，反应时间短，但该发明制备的兰瑞肽粗品纯度较低，且在制备过程可能会受外界影响，使得制备的瑞兰太受到污染。

发明内容

本发明的目的在于提供一种长链多肽的固相合成方法，在制备过程中未使用微波加热技术进行加热，使得在制备过程中不会出现较多的副反应，一定程度上保证了多肽的纯度，同时在制备过程中使用一种多功能反应釜，该反应釜通过在反应釜的顶部设置喷淋层，将液态反应物通过喷洒的方式加入反应釜中，同时反应釜中的固态粉末状物料进行搅拌，使得液态反应物和固态粉末状物料的接触面积增大，提升了反应速率，进一步提升了长链多肽的制备效率，在反应釜体底部设有过滤板和密封阀门，使得反应完成后，多余的液料可以直接排出反应釜，加装鼓风机使得在进行多肽提取的过程中，直接将氮气通入反应釜中，完全避免了在反应过程中转移反应物造成反应物污染的情况，从而进一步保证了多肽的纯度。

本发明要解决的技术问题：

1、传统的制备长链多肽的固相合成方法制备的长链多肽，纯度不高在制备过程中要经过多次，装载设备更换，容易造成制备的多肽被污染，甚至导致无法制备相应的长链多肽，使得长链多肽的制备效率低，不适合大量生产；

2、传统的制备长链多肽的固相合成方法制备的长链多肽，用到微波加热技术，在制备的长链多肽的过程中，发生较多的副反应，副反应产物较多，影响了制备长链多肽的纯度，同时影响了长链多肽的产率。

本发明的目的可以通过以下技术方案实现：

一种长链多肽的固相合成方法，具体步骤如下：

A、将树脂放入多功能反应釜中加入DMF,搅拌30min,将多余的DMF去除，得到溶胀树脂；

B、向步骤A中的多功能反应釜中加入哌啶/DMF溶液，搅拌5min，去除多功能反应釜中的溶液，再次加入哌啶/DMF溶液，搅拌15min，去除多功能反应釜中的溶液，进行洗涤，得到溶胀树脂；

C、将Fmoc保护的氨基酸与DMF的混合溶液、肽耦联试剂与DMF的混合溶液、NMM，加入步骤B中的多功能反应釜中，在温度为50℃的条件下，进行反应30min，再次洗涤，去除洗涤液；

D、重复步骤B和步骤C六次,进行洗涤，去除洗涤液；

E、向步骤D中的多功能反应釜中加入裂解液，进行反应2h，吹干洗涤，得到长链多肽。

进一步，步骤B中所述的洗涤方法如下：向多功能反应釜中加入DMF进行洗涤两次，去除DMF，加入甲醇进行洗涤两次，去除甲醇，加入DMF进行洗涤两次，去除DMF得到洗涤后的溶胀树脂；步骤C中所述的洗涤方法如下：加入DMF进行洗涤两次，去除DMF，加入甲醇进行洗涤两次，去除甲醇，加入DMF进行洗涤两次，去除DMF；步骤D中所述的洗涤方法如下：不步骤S3中的多功能反应釜加入DMF进行洗涤两次，去除DMF，加入甲醇进行洗涤两次，去除甲醇，加入DMF进行洗涤两次，去除DMF，加入DCM进行洗涤两次，进行洗涤两次，去除DCM；步骤E中所述的吹干洗涤方法如下：向多功能反应釜内通往氮气至裂解液完全挥发，加入乙醚进行洗涤六次，在常温条件下进行挥发至乙醚完全挥发，得到长链多肽。

进一步，所述的哌啶/DMF溶液为20％哌啶/DMF溶液，所述的肽耦联试剂为HBTU；步骤A中树脂和DMF的用量比为1:15；步骤B中的哌啶/DMF、MDF、甲醇和树脂的用量比为15:10:10:1；步骤C中Fmoc保护的氨基酸与DMF的用量比为15：1，肽耦联试剂与DMF的用量比为15：1，Fmoc保护的氨基酸与DMF的混合溶液、肽耦联试剂与DMF的混合溶液、NMM和树脂的用量比为3:3:10:1；步骤D中DMF、甲醇、DCM和树脂的用量比为10:10:10:1；步骤E中的裂解液的组份为：94％TFA、2.5％水、EDT2.5％、1％TIS，裂解液和树脂的用量比为10:1。

进一步，所述的多功能反应釜包括底座、反应釜体、储液槽，底座放置在水平面上，底座的一端设有支撑柱，支撑柱的顶端左侧设有固定块，集液槽放置在底座的上端面上；

所述的反应釜体的外部一侧与固定块固定连接，反应釜体的上端为广口端，反应釜体的下端为窄口端，反应釜体的上端一侧开有进料口，反应釜体的下端开有出料口，出料口内部设有第二密封阀门，反应釜体的一侧开有进气口，进气口内部设有第三密封阀门，进气口上设有鼓风机，反应釜体的另一侧开有出气口，出气口的内部设有第四密封阀门，反应釜体的一侧还设有加热器；

所述的储液槽位于底座的上端面，储液槽的一侧下端设有输液管，输液管的一端与储液槽相互连通，输液管上设有输液泵，输液管的另一端设有喷淋层，输液管与喷淋层相互连通，喷淋层上设有喷淋头，喷淋层位于反应釜体的上端，喷淋层通过螺接固定在反应釜体上，形成密封空间，喷淋头位于反应釜体内部，喷淋层上端面设有电机，电机的输出轴伸上设有搅拌螺杆，搅拌螺杆穿过喷淋层，搅拌螺杆位于反应釜体内部，搅拌螺杆上设有若干搅拌叶片。

进一步，所述的支撑柱与底座垂直设置，集液槽位于出料口的下端，集液槽和储液槽分别位于底座上端面两边。

进一步，所述的进料口的内部设有第一密封阀门，进料口的开口朝上，第二密封阀门位于出料口的内部下端，出料口的上端设有过滤板，过滤板通过螺接固定在出料口上，进气口和出气口的位置均高于反应釜体内物料的高度。

进一步，所述的搅拌螺杆穿过喷淋层，搅拌螺杆与喷淋层转动连接，搅拌叶片的直径与出料口的口径相同。

本发明的有益效果：本发明在制备过程中使用了一种多功能反应釜，该反应釜通过，在反应釜的顶部设置喷淋层，将液态反应物通过喷洒的方式加入反应釜中，同时反应釜中的固态粉末状物料进行搅拌，使得液态反应物和固态粉末状物料的接触面积增大，提升了反应速率，进一步提升了长链多肽的制备效率，在反应釜上加装加热器，使得反应釜可以根据，反应所需温度进行调节，保证反应正常进行，在反应釜体底部设有过滤板和密封阀门，使得反应完成后，多余的液料可以直接排出反应釜，加装鼓风机使得在进行多肽提取的过程中，直接将氮气通入反应釜中，完全避免了在反应过程中转移反应物造成反应物污染的情况，从而保证了多肽的纯度，且该方法制备的长链多肽氨基酸的副反应较少，副反应产物较少，进一步保证了制备的长链多肽的纯度。

附图说明

下面结合附图对本发明作进一步的说明。

图1是本发明一种长链多肽的固相合成方法中多功能反应釜的结构示意图；

图2是本发明一种长链多肽的固相合成方法中多功能反应釜中进料口的结构示意图；

图3是本发明一种长链多肽的固相合成方法中多功能反应釜中出料口的结构示意图；

图4是本发明一种长链多肽的固相合成方法中多功能反应釜中进风口和鼓风机的结构示意图；

图5是本发明一种长链多肽的固相合成方法中多功能反应釜中出风口的结构示意图；

图中：1、底座；11、支撑柱；12、固定块；13、集液槽；2、反应釜体；21、进料口；211、第一密封阀门；22、出料口；221、第二密封阀门；222、过滤板；23、进气口；231、第三密封阀门；24、鼓风机；25、出气口；251、第四密封阀门；26、加热器；3、储液槽；31、输液泵；32、输液管；33、喷淋层；331、喷淋头；34、电机；341、搅拌螺杆；342、搅拌叶片。

具体实施方式

下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

一种长链多肽的固相合成方法,具体步骤如下：

步骤S1：将树脂放入多功能反应釜中加入DMF,搅拌30min,将多余的DMF去除，得到溶胀树脂；

步骤S2：向步骤S1中的多功能反应釜中加入哌啶/DMF溶液，搅拌5min，去除多功能反应釜中的溶液，再次加入哌啶/DMF溶液，搅拌15min，去除多功能反应釜中的溶液，向多功能反应釜中加入DMF进行洗涤两次，去除DMF，加入甲醇进行洗涤两次，去除甲醇，加入DMF进行洗涤两次，去除DMF得到洗涤后的溶胀树脂；

步骤S3：将Fmoc保护的氨基酸与DMF的混合溶液、肽耦联试剂与DMF的混合溶液、NMM，加入步骤S2中的多功能反应釜中，在温度为50℃的条件下，进行反应30min，加入DMF进行洗涤两次，去除DMF，加入甲醇进行洗涤两次，去除甲醇，加入DMF进行洗涤两次，去除DMF；

步骤S4：重复步骤S2和步骤S3六次,向不步骤S3中的多功能反应釜加入DMF进行洗涤两次，去除DMF，加入甲醇进行洗涤两次，去除甲醇，加入DMF进行洗涤两次，去除DMF，加入DCM进行洗涤两次，进行洗涤两次，去除DCM；

步骤S5：向步骤步骤S4的多功能反应釜中加入裂解液，进行反应2h，向多功能反应釜内通往氮气至裂解液完全挥发，加入乙醚进行洗涤六次，在常温条件下进行挥发至乙醚完全挥发，得到长链多肽。

对比例1

本对比例为微波多肽的固相合成方法，具体步骤如下：

步骤S1：向反应器中加入树脂、Fmoc保护的氨基酸、缩合剂、溶剂，通过微波加热技术，在温度为50℃的条件下，进行反应30min，加入DMF进行洗涤三次，去除DMF；

步骤S2：向步骤S1的反应器中加入哌啶/DMF溶液，通过微波加热技术，在温度为50℃的条件下，进行反应5min，加入DMF进行洗涤，去除DMF，加入氯仿进行洗涤，去除氯仿，重复洗涤七次；

步骤S3：将Fmoc保护的氨基酸、缩合剂、溶剂加入步骤S2中的反应器中，通过微波加热技术，在温度为50℃的条件下，进行反应30min，加入DMF进行洗涤三次，去除DMF；

步骤S4：向步骤S3的反应器中加入哌啶/DMF溶液，通过微波加热技术，在温度为50℃的条件下，进行反应5min，加入DMF进行洗涤，去除DMF，加入氯仿进行洗涤，去除氯仿，重复洗涤七次；

步骤S5：按照氨基酸从羧基端到氨基端的顺序，更换氨基酸，重复加热步骤S1和步骤S2的反应，得到所需要的保护肽-树脂，将得到的保护肽-树脂进行切肽反应得到的反应产物，将反应产物进行过滤，得到所需多肽。

对比例2

本对比例与实施例1相比未使用实施例1中的多功能反应釜，具体步骤如下：

步骤S1：将树脂放入反应釜中加入DMF,进行搅拌30min,将多余的DMF去除，得到溶胀树脂；

步骤S2：步骤S2：向步骤S1中的多功能反应釜中加入哌啶/DMF溶液，搅拌5min，去除多功能反应釜中的溶液，再次加入哌啶/DMF溶液，搅拌15min，去除多功能反应釜中的溶液，向多功能反应釜中加入DMF进行洗涤两次，去除DMF，加入甲醇进行洗涤两次，去除甲醇，加入DMF进行洗涤两次，去除DMF得到洗涤后的溶胀树脂；

步骤S3：将Fmoc保护的氨基酸与DMF的混合溶液、肽耦联试剂与DMF的混合溶液、NMM，加入步骤S2中的反应釜中，在温度为50℃的条件下，进行反应30min，加入DMF进行洗涤两次，去除DMF，加入甲醇进行洗涤两次，去除甲醇，加入DMF进行洗涤两次，去除DMF；

步骤S4：重复步骤S2和步骤S3六次,向不步骤S3中的反应釜加入DMF进行洗涤两次，去除DMF，加入甲醇进行洗涤两次，去除甲醇，加入DMF进行洗涤两次，去除DMF，加入DCM进行洗涤两次，进行洗涤两次，去除DCM；

步骤S5：向步骤步骤S4的反应釜中加入裂解液，进行反应2h，得到第一混合溶液，将第一混合溶液加入氮气吹干仪，至裂解液完全吹干，加入乙醚进行洗涤六次，在常温条件下进行挥发至乙醚完全挥发，得到长链多肽。

对比例3

本对比例为常用的多肽的液相合成方法合成的多肽。

对实施例1和对比例1-3制备的长链多太肽进行多肽纯度进行检测，检测结果如下表1

多肽纯度：依照GB/T 5009.5-2003的标准，称取实施例1和对比例1-3制备的多肽样品1.000g，加入15％的三氯乙酸并定容至50ml，充分摇匀，静置30min，过滤取5ml上清液，移入干燥的100ml定氮瓶中，加入0.04g硫酸铜,1.2g硫酸钾及5ml硫酸，稍摇匀后与瓶口放一小漏斗，将瓶以45度角支有小孔的石棉网上，进行加热，待内容物完全碳化，泡沫完全停止后，加强活力，保持瓶内液体微沸，到液体呈蓝色澄清透明后，再继续加热0.5h-1h，依照GB/T5009.5-2003中的图1装好定氮装置，于水蒸气发生瓶内装水到2/3处，加入数粒玻璃珠，加甲基红指示液数滴及数毫升硫酸，以保持水呈酸性，用调压器控制，加热水蒸气发生瓶内的水，向接收瓶内加入10ml硼酸溶液(20g/L)和5滴混合指示剂，提起玻塞用少量蒸馏水多次洗涤，全部试样处理液流入反应室，棒装玻塞塞紧，将10ml氢氧化钠溶液(400g/L)有效玻璃杯加入反应室，立即将玻璃塞盖紧，并加水于小玻璃杯以防漏气，夹紧螺旋夹，开始蒸馏5min，移动接收瓶，液面离开冷凝管下端，在蒸馏1min，用少量水冲洗冷凝管下端外部，取下接收瓶，以硫酸或盐酸标准滴定溶液(0.05mol/L)滴定至灰色或蓝紫色为终点，计算蛋白质含量，进一步得到多肽的纯度。

表1

	实施例1	对比例1	对比例2	对比例3
					多肽纯度	42.36％	12.81％	5.38％	6.42％

由上表1可以看出实施例1制备的长链多肽的纯度远远高于对比例1-3，表明实施例1制备的多肽产量高，同时在制备过程中不需要多次更换装载设备，保证了制备过程中不受到其他污染，且制备过程中不会产生很多副反应，从而降低长链多肽的纯度。所以本发明一种长链多肽的固相合成方法制备的长链多肽纯度高，产率高，且制备过程更简单便捷，有利于提升长链多肽合成的效率。

请参阅图1-5所示，多功能反应釜包括底座1、反应釜体2、储液槽3，底座1放置在水平面上，底座1的一端设有支撑柱11，支撑柱11的顶端左侧设有固定块12，集液槽13放置在底座1的上端面上；

所述的反应釜体2的外部一侧与固定块12固定连接，反应釜体2的上端为广口端，反应釜体2的下端为窄口端，反应釜体2的上端一侧开有进料口21，反应釜体2的下端开有出料口22，出料口22内部设有第二密封阀门221，反应釜体2的一侧开有进气口23，进气口23内部设有第三密封阀门231，进气口23上设有鼓风机24，反应釜体2的另一侧开有出气口25，出气口25的内部设有第四密封阀门251，反应釜体2的一侧还设有加热器26；

所述的储液槽3位于底座1的上端面，储液槽3的一侧下端设有输液管32，输液管32的一端与储液槽3相互连通，输液管32上设有输液泵31，输液管32的另一端设有喷淋层33，输液管32与喷淋层33相互连通，喷淋层33上设有喷淋头331，喷淋层33位于反应釜体2的上端，喷淋层33通过螺接固定在反应釜体2上，形成密封空间，喷淋头331位于反应釜体2内部，喷淋层33上端面设有电机34，电机34的输出轴伸上设有搅拌螺杆341，搅拌螺杆341穿过喷淋层33，搅拌螺杆341位于反应釜体2内部，搅拌螺杆341上设有若干搅拌叶片342。

支撑柱11与底座1垂直设置，集液槽13位于出料口22的下端，集液槽13和储液槽3分别位于底座1上端面两边。

进料口21的内部设有第一密封阀门211，进料口21的开口朝上，第二密封阀门221位于出料口22的内部下端，出料口22的上端设有过滤板222，过滤板222通过螺接固定在出料口22上，进气口23和出气口25的位置均高于反应釜体2内物料的高度。

搅拌螺杆341穿过喷淋层33，搅拌螺杆341与喷淋层33转动连接，搅拌叶片342的直径与出料口22的口径相同。

工作原理：打开第一密封阀门211，关闭第二密封阀门221、第三密封阀门231、第四密封阀门251，将树脂由进料口21加入反应釜体2内，将DMF加入储液槽3内，关闭第一密封阀门211，打开电机34带动搅拌螺杆341，使得树脂在反应釜体2内部搅拌，将输液泵31打开，储液槽3内的DMF在输液泵31的作用下，沿输液管32进入喷淋层33，由喷淋头331喷洒DMF，通过喷洒的方式将DMF加入正在搅拌的树脂中，使得DMF与树脂的接触面积增大，大大降低了树脂的溶胀时间，提高了树脂溶胀效率，将第二密封阀门221打开，在过滤板222的作用下溶胀树脂留在反应釜内，多余的DMF滤出，收集至集液槽13中，关闭第二密封阀门221，分别将Fmoc保护的氨基酸与DMF的混合溶液、肽耦联试剂与DMF的混合溶液、NMM由喷淋层33加入反应釜体2中，打开加热器26使得反应釜达到所需温度进行反应，将多余的反应液均通过打开第二密封阀门221的方式去除，完成多次洗涤，通过底部过滤板222和第二密封阀门221将多余的液料排出，不需要将反应物移至其它设备保证了制备的多肽链不受其它污染物的污染，将裂解液加入反应釜体2后，打开第三密封阀门231和第四密封阀门251，开启鼓风机24将氮气沿进气口23进入反应釜体2将裂解液吹干，氮气由出气口25排出，吹干后关闭鼓风机24、第三密封阀门231、第四密封阀门251，加入乙醚进行洗涤，用鼓风机24鼓入空气，将乙醚吹干，打开第二密封阀门221，将过滤板222取下得到长链多肽，由于过滤板222通过螺接的方式固定，使得过滤板222方便取下和更换，进一步提升了长链多肽的制备效率。

以上内容仅仅是对本发明的构思所作的举例和说明，所属本技术领域的技术人员对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替代，只要不偏离发明的构思或者超越本权利要求书所定义的范围，均应属于本发明的保护范围。

Claims (6)

1.一种长链多肽的固相合成方法，其特征在于：由如下步骤制备:

A、将树脂放入多功能反应釜中加入DMF,搅拌30min,将多余的DMF去除，得到溶胀树脂；

B、向步骤A中的多功能反应釜中加入哌啶/DMF溶液，搅拌5min，去除多功能反应釜中的溶液，再次加入哌啶/DMF溶液，搅拌15min，去除多功能反应釜中的溶液，进行洗涤，得到溶胀树脂；

C、将Fmoc保护的氨基酸与DMF的混合溶液、肽耦联试剂与DMF的混合溶液、NMM，加入步骤B中的多功能反应釜中，在温度为50℃的条件下，进行反应30min，再次洗涤，去除洗涤液；

D、重复步骤B和步骤C六次,进行洗涤，去除洗涤液；

E、向步骤D中的多功能反应釜中加入裂解液，进行反应2h，吹干洗涤，得到长链多肽；

所述的多功能反应釜包括底座(1)、反应釜体(2)、储液槽(3)，底座(1)放置在水平面上，底座(1)的一端设有支撑柱(11)，支撑柱(11)的顶端左侧设有固定块(12)，集液槽(13)放置在底座(1)的上端面上；

所述的反应釜体(2)的外部一侧与固定块(12)固定连接，反应釜体(2)的上端为广口端，反应釜体(2)的下端为窄口端，反应釜体(2)的上端一侧开有进料口(21)，反应釜体(2)的下端开有出料口(22)，出料口(22)内部设有第二密封阀门(221)，反应釜体(2)的一侧开有进气口(23)，进气口(23)内部设有第三密封阀门(231)，进气口(23)上设有鼓风机(24)，反应釜体(2)的另一侧开有出气口(25)，出气口(25)的内部设有第四密封阀门(251)，反应釜体(2)的一侧还设有加热器(26)；

所述的储液槽(3)位于底座(1)的上端面，储液槽(3)的一侧下端设有输液管(32)，输液管(32)的一端与储液槽(3)相互连通，输液管(32)上设有输液泵(31)，输液管(32)的另一端设有喷淋层(33)，输液管(32)与喷淋层(33)相互连通，喷淋层(33)上设有喷淋头(331)，喷淋层(33)位于反应釜体(2)的上端，喷淋层(33)通过螺接固定在反应釜体(2)上，形成密封空间，喷淋头(331)位于反应釜体(2)内部，喷淋层(33)上端面设有电机(34)，电机(34)的输出轴伸上设有搅拌螺杆(341)，搅拌螺杆(341)穿过喷淋层(33)，搅拌螺杆(341)位于反应釜体(2)内部，搅拌螺杆(341)上设有若干搅拌叶片(342)。

2.根据权利要求1所述的一种长链多肽的固相合成方法，其特征在于：步骤B中所述的洗涤方法如下：向多功能反应釜中加入DMF进行洗涤两次，去除DMF，加入甲醇进行洗涤两次，去除甲醇，加入DMF进行洗涤两次，去除DMF得到洗涤后的溶胀树脂；步骤C中所述的洗涤方法如下：加入DMF进行洗涤两次，去除DMF，加入甲醇进行洗涤两次，去除甲醇，加入DMF进行洗涤两次，去除DMF；步骤D中所述的洗涤方法如下：不步骤S3中的多功能反应釜加入DMF进行洗涤两次，去除DMF，加入甲醇进行洗涤两次，去除甲醇，加入DMF进行洗涤两次，去除DMF，加入DCM进行洗涤两次，进行洗涤两次，去除DCM；步骤E中所述的吹干洗涤方法如下：向多功能反应釜内通往氮气至裂解液完全挥发，加入乙醚进行洗涤六次，在常温条件下进行挥发至乙醚完全挥发，得到长链多肽。

3.根据权利要求1或2所述的一种长链多肽的固相合成方法，其特征在于：所述的哌啶/DMF溶液为20％哌啶/DMF溶液，所述的肽耦联试剂为HBTU；步骤A中树脂和DMF的用量比为1:15；步骤B中的哌啶/DMF、MDF、甲醇和树脂的用量比为15:10:10:1；步骤C中Fmoc保护的氨基酸与DMF的用量比为15：1，肽耦联试剂与DMF的用量比为15:1，Fmoc保护的氨基酸与DMF的混合溶液、肽耦联试剂与DMF的混合溶液、NMM和树脂的用量比为3:3:10:1；步骤D中DMF、甲醇、DCM和树脂的用量比为10:10:10:1；步骤E中的裂解液的组份为：94％TFA、2.5％水、EDT2.5％、1％TIS，裂解液和树脂的用量比为10:1。

4.根据权利要求1所述的一种长链多肽的固相合成方法，其特征在于：所述的支撑柱(11)与底座(1)垂直设置，集液槽(13)位于出料口(22)的下端，集液槽(13)和储液槽(3)分别位于底座(1)上端面两边。

5.根据权利要求1所述的一种长链多肽的固相合成方法，其特征在于：所述的进料口(21)的内部设有第一密封阀门(211)，进料口(21)的开口朝上，第二密封阀门(221)位于出料口(22)的内部下端，出料口(22)的上端设有过滤板(222)，过滤板(222)通过螺接固定在出料口(22)上，进气口(23)和出气口(25)的位置均高于反应釜体(2)内物料的高度。

6.根据权利要求1所述的一种长链多肽的固相合成方法，其特征在于：搅拌螺杆(341)穿过喷淋层(33)，搅拌螺杆(341)与喷淋层(33)转动连接，搅拌叶片(342)的直径与出料口(22)的口径相同。

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