CN111132680B

CN111132680B - 新型braf抑制剂及其用于治疗皮肤反应的用途

Info

Publication number: CN111132680B
Application number: CN201880060593.7A
Authority: CN
Inventors: 诺阿·舍拉赫
Original assignee: Lutris Pharma Ltd
Current assignee: Lutris Pharma Ltd
Priority date: 2017-07-29
Filing date: 2018-07-26
Publication date: 2022-02-08
Anticipated expiration: 2038-07-26
Also published as: CA3070542A1; AU2018311538B2; US20190389862A1; WO2019026065A3; JP2020528933A; ZA202000354B; US20210070757A1; CN111132680A; EP3661515A4; JP6912667B2; IL272312A; KR20200035990A; HRP20220609T1; ES2908602T3; DK3661515T3; RU2020108782A3; EP3661515B1; WO2019026065A2; US10927112B2; SI3661515T1

Abstract

本发明公开了新型BRaf抑制剂，包含这些抑制剂的组合物及其用于皮肤反应的治疗、改善和/或预防的用途。

Description

新型BRAF抑制剂及其用于治疗皮肤反应的用途

相关申请的交叉引证

本申请申请主张2017年7月29日提交的美国临时专利申请序列号No.62/538,675的优先权，该专利申请以其全部内容作为参考并入本文。

技术领域

本发明涉及丝氨酸/苏氨酸-蛋白激酶B-Raf(在下文中称为“B-Raf”或者“BRaf”)的抑制剂及其组合物和用途。

背景技术

表皮生长因子受体(EGFR)的异常激活涉及多种疾病，具体地，涉及数种类型的癌症，如肺癌、结肠直肠癌、头颈癌和胰腺癌。EGFR拮抗剂，如单克隆抗体(例如，西妥昔单抗(cetuximab)、帕尼单抗(panitumumab))和小分子酪氨酸激酶抑制剂(例如，吉非替尼(gefitinib)、厄洛替尼(erlotinib)、拉帕替尼(lapatinib))用于治疗多种EGFR-介导的癌症。尽管这些EGFR拮抗剂对于癌症治疗有用，但是它们还与严重的副作用相关。EGFR拮抗剂的一种这种副作用是皮肤反应(cutaneous reactions)。皮肤对EGFR抑制剂的不良反应包括痤疮样(丘疹脓疱性)皮疹(acneiform(papulopustular)rash)、头皮、面部毛发和/或睫毛的异常生长、伴有或不伴有脓性肉芽肿的甲沟炎(paronychia with or withoutpyogenic granulomas)和毛细血管扩张(telangiectasia)。

多种激酶，如磷脂酰肌醇-3-激酶(PI 3-激酶)、有丝分裂原-激活的蛋白激酶(MAPK)和MAPK上游的激酶，如MEK和MKK起到EGFR和多种其它受体酪氨酸激酶下游效应因子的作用，并且参与细胞功能，如细胞生长、增殖、分化、运动性、存活和胞内运输。还在一些增殖性疾病，如黑素瘤、肺癌、结肠直肠癌、脑癌、多发性骨髓瘤、胰腺癌和神经纤维瘤的治疗中使用了靶向这些途径的治疗剂。靶向这些途径的示例性治疗剂包括激酶抑制剂，如曲美替尼(Trametinib)和考比替尼(Cobimetinib)。然而，这些激酶的抑制剂也与不良副作用有关。例如，已报道了MEK抑制剂引起的皮肤不良事件，并且包括痤疮样(丘疹脓疱性)皮疹、头皮、面部毛发和/或睫毛的异常生长、伴有或不伴有脓性肉芽肿的甲沟炎和毛细血管扩张。

BRaf是参与有丝分裂原激活的蛋白激酶(MAPK)信号通路调控的蛋白激酶。BRaf中的突变可以引起通过MAPK通路的组成型信号传导，其可以导致不受控制的细胞增殖。已表明BRaf抑制剂的使用与MAPK信号传导的抑制有关，如可以通过磷酸化ERK(它是BRaf下游效应因子)水平的降低所确定的。然而，已观察到BRaf抑制剂可以在BRaf野生型细胞中反常地引起激活MAPK信号传导的相反作用(如通过磷酸化ERK水平提高所确定的)。反常MAPK激活的潜在机制已归因于野生型BRaf和c-Raf的二聚化以及非抑制的Raf蛋白的反式激活(transactivation)，其导致了后续MAPK途径的激活。

尽管有导致皮肤不良反应的潜在机制，但是这些不良反应是使用EGFR、PI3K和/或MEK抑制剂治疗的严重缺陷，并且可能导致治疗终止和/或较差的患者顺应性。

Carnahan J.等人(Mol.Cancer Ther.9(8)August 2010)发现具有选择性且有效的Raf抑制剂可以反常地刺激正常细胞增殖。Smith A.L.等人,J.Med.Chem.2009,52,6189-6192所公开的一系列口服生物可用的激酶抑制剂显示出有效的生化活性。例如，所述系列的化合物1(C-1)显示出明显的效力(^WTB-Raf Ki＝1nmol/L，V600EB-Raf Ki＝1nmol/L和C-Raf Ki＝0.3nmol/L)。

Carnahan等人发现在具有野生型B-Raf和突变的K-ras的细胞中，暴露于Raf抑制剂导致了有丝分裂原-激活的蛋白激酶(MAPK)信号传导的剂量-依赖性和持续反常的激活作用。Raf抑制导致进入细胞周期和提高增殖。

N.Shelach在标题为“BRaf抑制剂用于治疗皮肤反应的使用(Use of BRafInhibitors for Treating Cutaneous Reactions)”的共同未决专利申请PCT/IL2017/050301中显示MAPK的这种反常激活作用可以用于治疗使用EGFR或PI3K抑制剂的治疗所引起的皮肤不良反应。

在本领域中仍需要开发新型治疗化合物、组合物和治疗方法以帮助减轻与EGFR抑制剂、PI3K抑制剂、MEK抑制剂或它们的组合的施用有关的上述皮肤不良反应。

发明内容

本发明公开提供了如本文所定义的式(I)、(II)和(III)的BRaf抑制剂。本发明公开还提供了包含式(I)、(II)和(III)化合物的组合物以及使用本发明公开所述的化合物和组合物治疗化疗剂，如EGFR抑制剂、PI3K抑制剂、MEK抑制剂或它们的组合所引起的皮肤学不良反应的方法。

附图说明

图1A-图1D显示了通过化合物-LUT014、LUT015和LUT017在HEKa细胞中所引起的ERK磷酸化。图1A显示了通过用0.3μΜ测试化合物处理的磷酸化-ERK(上图)和总ERK(下图)。图1B显示了基于磷酸化-ERK/总ERK比的计算，图1A中的印迹的密度分析。图1C显示了通过用1μΜ测试化合物处理的磷酸化-ERK(上图)和总ERK(下图)。图1D显示了基于磷酸化-ERK/总ERK比的计算，图1C中的印迹的密度分析。

图2A-图2D显示了通过化合物-LUT012、LUT016和C-1在HEKa细胞中所引起的ERK磷酸化。图2A显示了通过用0.3μΜ测试化合物处理的磷酸化-ERK(上图)和总ERK(下图)。图2B显示了基于磷酸化-ERK/总ERK比的计算，图2A中的印迹的密度分析。图2C显示了通过用1μΜ测试化合物处理的磷酸化-ERK(上图)和总ERK(下图)。图2D显示了基于磷酸化-ERK/总ERK比的计算，图2C中的印迹的密度分析。

图3A-图3D显示了通过化合物-LUT012、LUT013、LUT014、LUT015、LUT016、LUT017、LUT020和C-1在HEKa细胞中所引起的ERK磷酸化。图3A显示了通过用0.3μΜ测试化合物处理的磷酸化-ERK(上图)和总ERK(下图)。图3B显示了通过用1μΜ测试化合物处理的磷酸化-ERK(上图)和总ERK(下图)。图3C显示了基于磷酸化-ERK/总ERK比的计算，图3A中的印迹的密度分析。图3D显示了基于磷酸化-ERK/总ERK比的计算，图3B中的印迹的密度分析。

图4A-图4B显示了通过化合物-LUT014、LUT017和C-l在HEKa细胞中所引起的ERK磷酸化。图4A显示了通过用0.003μΜ、0.03μΜ和0.3μΜ的测试化合物处理的磷酸化-ERK(上图)和总ERK(下图)。图4B显示了基于磷酸化-ERK/总ERK比的计算，图4A中的印迹的密度分析。

图5A-图5J显示了化合物-C-1(图5A)、LUT-012(图5B)、LUT-014(图5C)、威罗非尼(Vemurafenib)(图5D)、LUT-013(图5E)、LUT-015(图5F)、LUT-016(图5G)、LUT-019(图5H)、LUT-017(图5I)和LUT-020(图5J)对MIA PaCa细胞增殖的影响。

图6显示了用于制备LUT014(C17071479-F)的改善的，放大的合成方法的流程图。

图7A-图7C显示了施用EGFR(体外结果)后，LU014对磷酸-ERK的影响。图7A显示了用测试化合物处理后的磷酸化-ERK，图7B显示了总ERK。图7C显示了基于磷酸化-ERK/总ERK比的计算，图7A和图7B中的印迹的密度分析。

具体实施方式

本文提供了式(I)、(II)和(III)的化合物以及包含它们的组合物。还提供了使用本发明公开所述的化合物和组合物治疗皮肤不良反应的方法。

化合物

在一个实施方式中，本文提供了式(I)的化合物：

其中R选自由以下各项组成的组：3-乙炔基苯基、3-氯-4-氟苯基、2-氟-4-碘苯基、4-氯-3-(三氟甲基)苯基、3-(1,1-二甲基乙基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基、3-(三氟甲氧基)苯基、3,5-二羟基苯基或苯基-3-磺酰胺，或其药物可用的盐或溶剂化物。

在另一个实施方式中，本文提供了式(II)的化合物：

其中R是NHR¹，其中R¹是2-氟-4-碘苯基，或其药物可用的盐或溶剂化物。

在另一个实施方式中，本文提供了式(III)的化合物：

其中R是NHR¹，其中R¹是3-乙炔基苯基、3-氯-4-氟苯基、2-氟-4-碘苯基或4-氯-3-(三氟甲基)苯基，或其药物可用的盐或溶剂化物。

在一个实施方式中，本发明公开所述的化合物抑制BRaf活性。在一个实施方式中，本发明公开所述的化合物可以对BRaf具有约0.5×10^-8M至约5×10^-8M，约1×10^-8M至约5×10^-8M，约1×10^-8M至约3.5×^10-8M或者约1×10^-8M至约3×10^-8M的IC50。

在一个实施方式中，本发明公开所述的化合物提高了有丝分裂原-激活的蛋白激酶(MAPK)的活性。

在一个实施方式中，本发明公开所述的化合物提高了MAPK的活性并且同时抑制BRaf的活性。

在一个实施方式中，通过测量胞外信号-调控激酶(ERK)的磷酸化并且计算磷酸化-ERK与总ERK的比来确定MAPK的活性。

在一个实施方式中，与未处理的或者对照-处理的细胞相比，本发明公开所述的化合物将磷酸化-ERK与总ERK的比提高了至少约1.025倍、1.05倍、1.10-倍、1.15-倍、1.20-倍、1.25-倍、1.30倍、1.35-倍、1.40-倍、1.45-倍、1.5-倍、1.6-倍、1.7-倍、1.8-倍、2-倍、2.25-倍、2.5-倍、2.75-倍、3-倍、3.25-倍、3.5-倍、3.75-倍、4-倍、4.25-倍、4.5-倍、4.75-倍、5-倍、5.25-倍、5.50-倍、5.75-倍、6-倍、6.25-倍、6.50-倍、6.75-倍、7-倍、7.25-倍、7.5-倍、8-倍、8.5-倍、9-倍、9.5-倍、10-倍、15-倍、20-倍、25-倍、30-倍、40-倍、50-倍、75-倍、100-倍、150-倍或者约200-倍，包括它们之间的值和范围。

在一个实施方式中，与未处理的或者对照-处理的细胞相比，本发明公开所述的化合物将磷酸化-ERK与总ERK的比提高了约1.5-倍至约50-倍、约1.5-倍至约25-倍、1.5-倍至约20-倍、约1.5-倍至约15-倍、约2.5-倍至约15-倍、约2.5-倍至约10-倍、约3-倍至约20-倍、约3-倍至约15-倍、约4-倍至约20-倍、约4-倍至约15-倍、约4-倍至约10-倍、约5-倍至约20-倍、约5-倍至约15-倍，包括它们之间的值和范围。

在一个实施方式中，与未处理的或者对照-处理的细胞相比，相对于总ERK，本发明公开所述的化合物将磷酸化-ERK的水平提高了至少约2.5％、5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、100％、125％、150％、175％、200％、225％、250％、275％、300％、325％、350％、375％、400％、425％、450％、475％、500％、550％、600％、650％、700％、750％、800％、850％、900％、950％、1000％、1100％、1200％、1300％、1400％、1500％、1600％、1700％、1800％、1900％、2000％、2250％、2500％、2750％、3000％、3250％、3500％、4000％、4500％、4750％、5000％、5500％、6,000％、6500％、7,000％、7500％、8,000％、9,000％或10,000％，包括它们之间的值和范围。

在一个实施方式中，本发明公开所述的化合物未显示出光毒性或者显示出低光毒性。可以通过测量光刺激因子(Photo-Irritation Factor)(PIF)或者平均光电效应(MeanPhoto Effect)(MPE)来确定光毒性水平。

在一个实施方式中，可以使用以下公式计算PIF：PIF＝IC50(-Irr)/IC50(+Irr)，其中PIF>5表示光毒性；2<PIF<5表示可能的光毒性；PIF<2表示无光毒性。在一个实施方式中，本发明公开所述的化合物具有小于5的PIF。在另一个实施方式中，本发明公开所述的化合物具有小于2的PIF。

在一个实施方式中，可以通过比较完整浓度-反应曲线(concentration-responsecurve)来计算MPE。MPE是通过IC50改变所归一化的当量剂量反应中的差异的加权平均。MPE>0.15表示光毒性；0.1<MPE<0.15表示可能的光毒性；MPE<0.1表示无光毒性。在一个实施方式中，本发明公开所述的化合物具有小于0.15的MPE。在另一个实施方式中，本发明公开所述的化合物具有小于0.1的MPE。

组合物

在一个实施方式中，本文提供了药物组合物，其包含式(I)的化合物：

其中R选自由以下各项组成的组：对-氯苯基、3-乙炔基苯基、3-氯-4-氟苯基、2-氟-4-碘苯基、4-氯-3-(三氟甲基)苯基、3-(1,1-二甲基乙基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基、3-(三氟甲氧基)苯基、3,5-二羟基苯基、苯基-3-磺酰胺或3-(三氟甲基)苯基，或其药物可用的盐或溶剂化物，或它们的组合；和药物可用的载体或赋形剂。

在一个实施方式中，本文提供了包含式(II)或(III)的化合物或其药物可用的盐或溶剂化物，和药物可用的载体或赋形剂的药物组合物。

在另一个实施方式中，本文提供了包含式(I)、(II)或(III)的化合物或其药物可用的盐或溶剂化物或它们的组合，和药物可用的载体或赋形剂的药物组合物。

在一个实施方式中，药物组合物可以包含基于所述组合物总重量的约1％w/w至约5％w/w的式(I)、(II)或(III)的化合物或其药物可用的盐或溶剂化物或它们的组合。例如，所述药物组合物可以包括约1％、1.1％、1.2％、1.3％、1.4％、1.5％、1.6％、1.7％、1.8％、1.9％、2.0％、2.1％、2.2％、2.3％、2.4％、2.5％、2.6％、2.7％、2.8％、2.9％、3.0％、3.1％、3.2％、3.3％、3.4％、3.5％、3.6％、3.7％、3.8％、3.9％、4％、4.1％、4.2％、4.3％、4.4％、4.5％、4.6％、4.7％、4.8％、4.9％或5％w/w，包括它们之间的值和范围的任何本文所公开的化合物。在一些实施方式中，所述药物组合物可以包括约1％至约3％，约1％至约4％，约1.5％至约5％，约1.5％至约4.5％，约1.5％至3.5％，约1.5％至约3％，约2％至约5％，约2％至约4.5％，约2％至约4％，约2.5％至约5％，约2.5％至约4.5％，约2.5％至约4％，约3％至约5％，约3.5％至约5％w/w，包括它们之间的值和范围的任何本文所公开的化合物。

在一个实施方式中，药物组合物可以包含基于所述组合物总重量的约5％w/w至约10％w/w的式(I)、(II)或(III)的化合物或其药物可用的盐或溶剂化物或它们的组合。例如，所述药物组合物可以包括约5％、5.1％、5.2％、5.3％、5.4％、5.5％、5.6％、5.7％、5.8％、5.9％、6％、6.1％、6.2％、6.3％、6.4％、6.5％、6.6％、6.7％、6.8％、6.9％、7％、7.1％、7.2％、7.3％、7.4％、7.5％、7.6％、7.7％、7.8％、7.9％、8％、8.1％、8.2％、8.3％、8.4％、8.5％、8.6％、8.7％、8.8％、8.9％、9％、9.1％、9.2％、9.3％、9.4％、9.5％、9.6％、9.7％、9.8％、9.9％或10％w/w，包括它们之间的值和范围的任何本文所公开的化合物。在一些实施方式中，所述药物组合物可以包括约5％至约9％，约5％至约8.5％，约5％至约8％，约5％至约7.5％，约5％至约7％，约6％至约10％，约6％至约9％，约6％至约8.5％，约6％至约8％，约7％至约10％，约7％至约9.5％，约7％至约8.5％，约7.5％至约10％，约8％至约10％w/w，包括它们之间的值和范围的任何本文所公开的化合物。

在一些其它实施方式中，所述药物组合物可以包括约1％至约10％，约1％至约8％，约1％至约7％，约2％至约8％，约2％至约7％，约2％至约6％，约2.5％至约7.5％，约2.5％至约5.5％，约3％至约8％，约3％至约7％，约4％至约8％，约4％至约7％，约4.5％至约7.5％，约4.5％至约7％或者约4.5％至约6.5％w/w，包括它们之间的值和范围的任何本文所公开的化合物。

在一个实施方式中，将包含本文所公开的化合物中的任一种的药物组合物配制用于全身施用。全身施用可以通过肠内或肠胃外施用途径。在一个实施方式中，全身施用是口服，并且所述药物组合物配制用于口服(口服药物组合物)。

在一个实施方式中，本文提供了包含式(I)、(II)或(III)的化合物或其药物可用的盐或溶剂化物或它们的组合，和药物可用的载体或赋形剂的口服药物组合物。本发明公开所述的口服药物组合物可以处于固体剂量形式或液体剂量形式并且可以以任何本文所述的量包括任何所公开的化合物。

在一个实施方式中，将包含本文所公开的化合物中的任一种的药物组合物配制用于局部施用。局部施用包括所述组合物向受试者的皮肤、指甲、眼、睫毛、眼睑和/或毛发的局部应用。

在一个实施方式中，本文提供了包含式(I)、(II)或(III)的化合物或其药物可用的盐或溶剂化物或它们的组合，和药物可用的载体或赋形剂的局部药物组合物。用于局部施用的组合物(局部组合物)可以处于凝胶剂、水凝胶剂、软膏剂、乳膏剂、泡沫剂、喷雾剂、洗剂、液体剂或皮肤贴片的形式并且可以以本文所述的任何量包括任何所公开的化合物。

在一个实施方式中，口服或局部药物组合物包括本文所公开的任何量的下式的化合物：

和药物可用的载体或赋形剂。

在一个实施方式中，本文提供了局部药物组合物，其包括处于本文所公开的任何的(w/w％)量的LUT014和药物可用的载体或赋形剂。包含LUT014的局部组合物可以以选自软膏剂、乳膏剂、凝胶剂、水凝胶剂、泡沫剂、喷雾剂、洗剂、液体剂或皮肤贴片的剂量形式配制。

在一个实施方式中，本文提供了口服药物组合物，其包括处于本文所公开的任何的(w/w％)量的LUT014和药物可用的载体或赋形剂。包含LUT014的口服药物组合物可以处于固体剂量形式或液体剂量形式。

用于口服的固体剂量形式包括胶囊剂、片剂、粉末剂和颗粒剂。在这些固体剂量形式中，所述活性化合物与至少一种惰性赋形剂(或载体)，如柠檬酸钠或磷酸二钙，或者(a)填充剂(filler)或补充剂(extender)，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、甘露糖醇和硅酸；(b)粘结剂，例如，羧甲基纤维素、海藻酸盐、明胶、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；(c)保湿剂，例如，甘油；(d)崩解剂，例如，琼脂、碳酸钙、马铃薯或木薯淀粉、海藻酸、某些复合硅酸盐和碳酸钠；(e)溶液缓凝剂(solution retarder)，例如，石蜡；(f)吸收加速剂，例如，季铵化合物；(g)润湿剂，例如，鲸蜡醇和甘油单硬脂酸酯；(h)吸附剂，例如，高岭土和膨润土；和(i)润滑剂，例如，滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、月桂基硫酸钠或其混合物混合。就胶囊剂和片剂而言，所述剂量形式还可以包含缓冲剂。

示例性的胶囊剂量形式可以包括包含本发明公开所述的一种或多种化合物和赋形剂，如乳糖(lactose)或乳糖(milk sugar)、高分子量聚乙二醇等的软或硬填充明胶胶囊剂。

用于口服的液体剂量形式包括药物可用的乳液、溶液、混悬液、糖浆和酏剂。除所述活性化合物之外，所述液体剂量形式可以含有在本领域中常用的惰性稀释剂，如水或其它溶剂、增溶剂和乳化剂，例如，乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸苄酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油剂，具体地，棉籽油、花生油、玉米胚芽油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油、甘油、四氢化糠醇、聚乙二醇和山梨聚糖的脂肪酸酯或者这些物质的混合物等。

除这些惰性稀释剂之外，所述液体剂量形式还可以包括佐剂，如润湿剂、乳化和悬浮剂、甜味剂、调味剂和芳香剂。除所述活性化合物之外，混悬液可以含有悬浮剂，例如，乙氧基化的异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇和山梨聚糖酯、微晶纤维素、铝氢氧化物(aluminummetahydroxide)、膨润土、琼脂和黄芪胶或者这些物质的混合物等。

用于口服的示例性液体剂量形式可以包含糖浆，其包括本发明公开的一种或多种化合物和赋形剂，如甘油、丙二醇和蔗糖。

在本发明公开中有用的局部组合物可以配制为溶液。这些组合物可以包含润肤剂(emollient)，优选地含有约1％至约50％的润肤剂。如本文所使用的，术语“润肤剂”是指用于预防或缓解干燥以及用于保护皮肤的材料。一些适合的润肤剂是已知的并且可以在本发明公开中使用。例如，Sagarin,Cosmetics,Science and Technology，第2版，第1卷,32-43页(1972)和International Cosmetic Ingredient Dictionary and Handbook,eds.Wenninger and McEwen,1656-61,1626,和1654-55页(The Cosmetic,Toiletry,andFragrance Assoc.,Washington,D.C.,第7版,1997)(在下文中"ICI Handbook")含有多种适合的材料的实例。

可以从这种溶液制备洗剂。洗剂通常包含约1％至约20％(例如，约5％至约10％)的润肤剂和约50％至约90％(例如，约60％至约80％)的水。

可以从溶液配制的另一种类型的产品是乳膏剂。乳膏剂通常包含约5％至约50％(例如，约10％至约20％)的润肤剂和约45％至约85％(例如，约50％至约75％)的水。

可以从溶液配制的另一种类型的产品是软膏剂。软膏剂可以包含动物或植物油或者半固态烃类的简单基底。软膏剂可以包含约2％至约10％的润肤剂加约0.1％至约2％的增稠剂。在本文中有用的增稠剂或增粘剂的更完全公开可见于Sagarin,Cosmetics,Science and Technology,第2版,第1卷,72-73页(1972)和ICI Handbook,1693-1697页。

在本发明公开中有用的局部组合物可以配制为乳液。如果局部组合物的载体是乳液，则约1％至约10％(例如，约2％至约5％)的载体包含乳化剂。乳化剂可以是非离子的、阴离子的或阳离子的。适合的乳化剂公开于(例如)McCutcheon's Detergents andEmulsifiers,North American Edition,317-324页(1986)和ICI Handbook,1673-1686页。

洗剂和乳膏剂可以配制为乳液。这些洗剂可以包含0.5％至约5％的乳化剂。乳膏剂可以包含约1％至约20％(例如，约5％至约10％)的润肤剂；约20％至约80％(例如，30％至约70％)的水；和约1％至约10％(例如，约2％至约5％)的乳化剂。

本发明公开所述的局部组合物还可以配制为凝胶剂(例如，使用适合的胶凝剂的水、醇、醇/水或者油性凝胶剂)。用于水凝胶剂的适合的胶凝剂包括(但不限于)天然树胶、丙烯酸和丙烯酸脂聚合物和共聚物以及纤维素衍生物(例如，羟甲基纤维素和羟丙基纤维素)。适合于油剂的胶凝剂包括(但不限于)氢化丁烯/乙烯/苯乙烯共聚物和氢化乙烯/丙烯/苯乙烯共聚物。凝胶组合物可以包含按重量计约0.1％至5％的这些胶凝剂。

除以上载体和赋形剂之外，可以将其它润肤剂和表面活性剂引入所述局部组合物，包括三油酸甘油酯、乙酰化蔗糖二硬脂酸酯、三油酸山梨聚糖酯、聚氧乙烯(1)单硬脂酸酯、甘油单油酸酯、蔗糖二硬脂酸酯、聚乙二醇(50)单硬脂酸酯、辛基苯氧基聚(乙烯氧基)乙醇、五异硬脂酸十甘油酯、倍半油酸山梨聚糖、羟基化的羊毛脂、羊毛脂、二异硬脂酸三甘油酯、聚氧乙烯(2)油基醚、硬脂酰-2-乳酸钙，甲基葡糖苷倍半硬脂酸酯、一棕榈酸山梨聚糖酯、甲氧基聚乙二醇-22/十二烷基二醇共聚物(Elfacos E200)、聚乙二醇-45/十二烷基二醇共聚物(Elfacos ST9)、聚乙二醇400二硬脂酸酯和羊毛脂来源的甾醇提取物、二醇硬脂酸酯和甘油硬脂酸酯；醇，如鲸蜡醇和羊毛脂醇；豆蔻酸酯，如豆蔻酸异丙酯；鲸蜡醇十六酸酯；胆固醇；硬脂酸；丙二醇；甘油、山梨醇等。

方法

本文提供了治疗、预防和/或改善皮肤学病况的方法。

在一个实施方式中，所述皮肤学病况是通过化疗剂，如EGFR抑制剂、PI3K抑制剂、MEK抑制剂或它们的组合所引起的皮肤学或皮肤不良反应。

在一个实施方式中，本文提供了用于治疗、改善和/或预防对其有需要的受试者中EGFR抑制剂、PI3K抑制剂、MEK抑制剂或它们的组合的皮肤不良反应的方法，其包括施用治疗有效量的组合物，所述组合物包含式(I)的化合物：

其中R选自由以下各项组成的组：对-氯苯基、3-乙炔基苯基、3-氯-4-氟苯基、2-氟-4-碘苯基、4-氯-3-(三氟甲基)苯基、3-(1,1-二甲基乙基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基、3-(三氟甲氧基)苯基、3,5-二羟基苯基、苯基-3-磺酰胺或3-(三氟甲基)苯基，或其药物可用的盐或溶剂化物；

式(II)的化合物：

其中R是NHR¹，其中R¹是2-氟-4-碘苯基，或其药物可用的盐或溶剂化物；

式(III)的化合物：

其中R是NHR¹，其中R¹是3-乙炔基苯基、3-氯-4-氟苯基、2-氟-4-碘苯基或4-氯-3-(三氟甲基)苯基，或其药物可用的盐或溶剂化物；

或其组合；和药物可用的载体或赋形剂。

在一个实施方式中，用于治疗、改善和/或预防对其有需要的受试者中EGFR抑制剂、PI3K抑制剂、MEK抑制剂或它们的组合的皮肤不良反应的方法包括施用治疗有效量的组合物，所述组合物包含式(I)的化合物，其中R选自由以下各项组成的组：对-氯苯基、3-乙炔基苯基、3-氯-4-氟苯基、2-氟-4-碘苯基、4-氯-3-(三氟甲基)苯基、3-(1,1-二甲基乙基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基、3-(三氟甲氧基)苯基、3,5-二羟基苯基、苯基-3-磺酰胺或3-(三氟甲基)苯基，或其药物可用的盐或溶剂化物，或它们的组合；和药物可用的载体或赋形剂。

在一个实施方式中，用于治疗、改善和/或预防对其有需要的受试者中EGFR抑制剂、PI3K抑制剂、MEK抑制剂或它们的组合的皮肤不良反应的方法包括施用治疗有效量的组合物，所述组合物包含式(II)的化合物，其中R是NHR¹，其中R¹是2-氟-4-碘苯基，或其药物可用的盐或溶剂化物；和药物可用的载体或赋形剂。

在一个实施方式中，用于治疗、改善和/或预防对其有需要的受试者中EGFR抑制剂、PI3K抑制剂、MEK抑制剂或它们的组合的皮肤不良反应的方法包括施用治疗有效量的组合物，所述组合物包含式(III)的化合物，其中R是NHR¹，其中R¹是3-乙炔基苯基、3-氯-4-氟苯基、2-氟-4-碘苯基或4-氯-3-(三氟甲基)苯基、或其药物可用的盐或溶剂化物，或它们的组合；和药物可用的载体或赋形剂。

在一个实施方式中，用于治疗、改善和/或预防对其有需要的受试者中EGFR抑制剂、PI3K抑制剂、MEK抑制剂或它们的组合的皮肤不良反应的方法包括施用治疗有效量的组合物，所述组合物包含任何本文所公开的化合物和药物可用的载体或赋形剂的组合。

在一个实施方式中，用于治疗、改善和/或预防对其有需要的受试者中EGFR抑制剂、PI3K抑制剂、MEK抑制剂或它们的组合的皮肤不良反应的方法包括施用治疗有效量的组合物，所述组合物包含本文所公开的任何w/w％量的下式的化合物：

和药物可用的载体或赋形剂。

通过化疗剂，如EGFR抑制剂、PI3K抑制剂、MEK抑制剂或它们的组合所引起的皮肤学或皮肤不良反应包括痤疮样皮疹(acneiform rash)、丘疹脓疱性皮疹(papulopustularrash)、头皮毛发异常生长(abnormal scalp hair growth)、面部毛发异常生长(abnormalfacial hair growth)、毛发异常生长(abnormal hair growth)、睫毛异常生长(abnormaleyelash growth)、干燥病(xerosis)、瘙痒(pruritus)、伴有或不伴有脓性肉芽肿的甲沟炎(paronychia with or without pyogenic granulomas)和毛细血管扩张(telangiectasia)。本文所述的方法治疗、改善和/或预防这些不良反应中的一种或多种。

在一个实施方式中，通过本发明公开所述的化合物/组合物治疗、改善和/或预防的EGFR抑制剂、PI3K抑制剂、MEK抑制剂或它们的组合的皮肤不良反应是痤疮样皮疹。

在一个实施方式中，所述受试者是哺乳动物，如人、狗和/或猫。

在一个实施方式中，所述受试者在施用本发明公开所述的化合物/组合物的时候接受EGFR抑制剂、PI3K抑制剂、MEK抑制剂或其组合。在另一个实施方式中，在EGFR抑制剂、PI3K抑制剂、MEK抑制剂或其组合施用之前或之后向所述受试者施用本发明公开所述的化合物/组合物。

在一些实施方式中，本文所公开的方法包括全身或局部施用治疗有效量的本发明公开所述的化合物/组合物。

包括局部施用的方法包括向受试者的皮肤、指甲、眼、睫毛、眼睑和/或毛发局部施用或应用本文所公开所述的任何组合物。在一些实施方式中，局部施用包括局部施用以选自凝胶剂、水凝胶剂、软膏剂、乳膏剂、喷雾剂、皮肤贴片、泡沫剂、洗剂和液体剂的剂量形式配制的组合物。

全身施用包括肠内施用或肠胃外施用。在本文所公开的方法的一些实施方式中，全身施用包括口服。在本文所公开的方法的一些实施方式中，口服包括选自片剂、胶囊剂、液体剂、混悬剂和粉末剂的口服剂量形式的施用。

在一个实施方式中，本文所公开的方法包括全身或局部施用约0.1mg/天至约1mg/天的一种或多种本发明公开所述的化合物。在一些实施方式中，本文所公开的方法包括全身或局部施用约0.1mg/天、约0.2mg/天、约0.3mg/天、约0.4mg/天、约0.5mg/天、约0.6mg/天、约0.7mg/天、约0.8mg/天、约0.9mg/天或约1mg/天，包括它们之间的值和范围的一种或多种本发明公开所述的化合物。在一些实施方式中，本文所公开的方法包括全身或局部施用约0.1mg/天至约0.5mg/天，约0.2mg/天至约0.8mg/天，约0.2mg/天至约0.5mg/天或者约0.5mg/天至约1mg/天，包括它们之间的值和范围的一种或多种本发明公开所述的化合物。

在一个实施方式中，本文所公开的方法包括全身或局部施用约1mg/天至约5mg/天的一种或多种本发明公开所述的化合物。在一些实施方式中，本文所公开的方法包括全身或局部施用约1mg/天、1.5mg/天、2mg/天、2.5mg/天、3mg/天、3.5mg/天、4mg/天、4.5mg/天或者5mg/天，包括它们之间的值和范围的一种或多种本发明公开所述的化合物。

在一个实施方式中，本文所公开的方法包括全身或局部施用约5mg/天至约10mg/天的一种或多种本发明公开所述的化合物。在一些实施方式中，本文所公开的方法包括全身或局部施用约5mg/天、约5.5mg/天、约6mg/天、约6.5mg/天、约7mg/天、约7.5mg/天、约8mg/天、约8.5mg/天、约9mg/天、约9.5mg/天或约10mg/天，包括它们之间的值和范围的一种或多种本发明公开所述的化合物。

在一些实施方式中，本文所公开的方法包括全身或局部施用约1mg/天至约10mg/天，约1mg/天至约8mg/天，约2mg/天至约8mg/天，约2.5mg/天至约7.5mg/天，约3mg/天至约8mg/天，约3mg/天至约6mg/天或者约4mg/天至约8mg/天，包括它们之间的值和范围的一种或多种本发明公开所述的化合物。

在一个实施方式中，所施用的化合物的量取决于化合物的性质、施用形式和/或皮肤反应的严重程度。可以通过本领域中已知的剂量-范围临床研究来确定需要施用于患者的治疗有效量。

在本文所公开的方法的一些实施方式中，EGFR抑制剂选自Iressa(吉非替尼(gefitinib))、Tarceva(厄洛替尼(erlotinib))、Tykerb(拉帕替尼(Lapatinib))、Erbitux(西妥昔单抗(cetuximab))、Vectibix(帕尼单抗(panitumumab))、Caprelsa(凡德他尼(vandetanib)、Portrazza(耐昔妥珠单抗(necitumumab))、Tagrisso(奥希替尼(osimertinib))及其组合。

在本文所公开的方法的一些实施方式中，PI3K抑制剂选自GDC-0980(Apitolisib)、GDC-0941(匹克替利昔布(Pictilisib))、BAY 80-6946(Copanlisib)、BKM120(Puparlisib)、NVP-BEZ235(达托里昔布(Dactolisib))、IPI 145(杜维里昔布(Duvelisib))、艾代拉里昔布(Idelalisib)(GS-1101或CAL-101)、渥曼青霉素(wortmannin)、LY294002及其组合。

在本文所公开的方法的一些实施方式中，MEK抑制剂选自曲美替尼(Trametinib)(GSK1120212)、考比替尼(Cobimetinib)(XL518)、比美替尼(Binimetinib)(MEK162)、司美替尼(Selumetinib)、PD-325901、CI-1040、PD035901、U0126、TAK-733及其组合。

在一个实施方式中，本文所公开的方法减轻了皮肤不良反应的严重程度。

对皮肤不良反应的严重程度分级的最常用的系统是美国国家癌症研究所的通用不良反应术语标准(National Cancer Institute’s Common Terminology Criteria forAdverse Events)(CTCAE)4.0版，其承认如下表1所示的4个等级。

表1

在一个实施方式中，本文所公开的方法将皮肤不良反应的严重程度从等级4降低至等级3、2、1或0，如通过美国国家癌症研究所通用不良反应术语标准(NCI-CTCAE)4.0版所定义的。

在一个实施方式中，本文所公开的方法将皮肤不良反应的严重程度从等级3降低至等级2、1或0，如通过NCI-CTCAE 4.0版所定义的。

在一个实施方式中，本文所公开的方法将皮肤不良反应的严重程度从等级2降低至等级1或0，如通过NCI-CTCAE 4.0版所定义的。

在一个实施方式中，本文所公开的方法将皮肤不良反应的严重程度从等级1降低至等级0，如通过NCI-CTCAE 4.0版所定义的。

在一个实施方式中，本文所公开的方法部分或完全预防了皮肤不良反应的发展。

在一个实施方式中，本文所公开的方法部分或完全预防了等级4、等级3、等级2或等级1的皮肤不良反应的发展，如通过NCI-CTCAE 4.0版所定义的。

在一个实施方式中，本文所公开的方法预防了皮肤不良反应的升级。例如，在一个实施方式中，本文所公开的方法预防皮肤不良反应从等级0升级至等级1、2、3或4，如通过NCI-CTCAE 4.0版所定义的。在另一个实施方式中，本文所公开的方法预防皮肤不良反应从等级1升级至等级2、3或4，如通过NCI-CTCAE 4.0版所定义的。在另一个实施方式中，本文所公开的方法预防皮肤不良反应从等级2升级至等级3或4，如通过NCI-CTCAE 4.0版所定义的。在另一个实施方式中，本文所公开的方法预防皮肤不良反应从等级3升级至等级4，如通过NCI-CTCAE 4.0版所定义的。

可以用于对皮肤不良反应的严重程度分级的另一种系统是如下表2所示的Lacouture分级量表。

表2

表2(续)

在一个实施方式中，本文所公开的方法将皮肤不良反应的严重程度从等级4降低至等级3B、3A、2B、2A、1B或1A，如通过Lacouture分级量表所定义的。

在一个实施方式中，本文所公开的方法将皮肤不良反应的严重程度从等级3B降低至等级3A、2B、2A、1B或1A，如通过Lacouture分级量表所定义的。

在一个实施方式中，本文所公开的方法将皮肤不良反应的严重程度从等级3A降低至等级2B、2A、1B或1A，如通过Lacouture分级量表所定义的。

在一个实施方式中，本文所公开的方法将皮肤不良反应的严重程度从等级2B降低至等级2A、1B或1A，如通过Lacouture分级量表所定义的。

在一个实施方式中，本文所公开的方法将皮肤不良反应的严重程度从等级2A降低至等级1B或1A，如通过Lacouture分级量表所定义的。

在一个实施方式中，本文所公开的方法将皮肤不良反应的严重程度从等级1B降低至等级1A，如通过Lacouture分级量表所定义的。

在一个实施方式中，本文所公开的方法部分或完全预防了等级4、等级3B、等级3A、等级2B、等级2A、等级1B或等级1A的皮肤不良反应的发展，如通过Lacouture分级量表所定义的。

在一个实施方式中，本文所公开的方法防止皮肤不良反应从等级1A升级至等级1B、2A、2B、3A、3B或4，如通过Lacouture分级量表所定义的。在一个实施方式中，本文所公开的方法防止皮肤不良反应从等级1B升级至等级2A、2B、3A、3B或4，如通过Lacouture分级量表所定义的。在一个实施方式中，本文所公开的方法防止皮肤不良反应从等级2A升级至等级2B、3A、3B或4，如通过Lacouture分级量表所定义的。在一个实施方式中，本文所公开的方法防止皮肤不良反应从等级2B升级至等级3A、3B或4，如通过Lacouture分级量表所定义的。在一个实施方式中，本文所公开的方法防止皮肤不良反应从等级3A升级至等级3B或4，如通过Lacouture分级量表所定义的。在一个实施方式中，本文所公开的方法防止皮肤不良反应从等级3B升级至等级4，如通过Lacouture分级量表所定义的。

实施例

以下实施例显示了本发明的某些实施方式，但是其不意味着以任何方式限制权利要求的范围。描述了以下实施例以向本领域技术人员提供如何实施和使用所述发明的完整公开和描述，并且以下实施例不意欲限制本发明人所认为的他们的发明的范围，也不意欲表示以下实验是全部或唯一所实施的实验。已进行了工作以确保相对于所使用数值的准确度(例如，量、温度等)，但是应说明一些实验误差和偏差。除非另外说明，否则份数是重量份数，分子量是重均分子量，温度是摄氏度，并且压力在大气压或附近。

在实施例1-9中公开了合成式I的化合物(LUT012-LUT017和LUT019-LUT020)的示例性方法。

根据Smith A.L.等人,J.Med.Chem.2009,52,6189-6192中详细描述的合成程序制备了已知化合物C-l。

实施例1

式I化合物的合成，R＝3-乙炔基苯基(化合物LUT012)

中间产物3B-2的制备

在20℃，氮气气氛下，向化合物3B-1(2.00g，8.98mmol，1.0当量)在异丙醇(20mL)中的混合物中添加化合物3B-3(1.26g，10.8mmol，1.2当量)和三氟乙酸(1.02g，8.98mmol，665uL，1.0当量)。将所得混合物加热至90℃并在90℃搅拌16h。TLC(石油醚：乙酸乙酯＝3：1，R_f-SM＝0.43，R_f-DP＝0.24)显示反应完成。将反应混合物过滤并用二氯甲烷(10mL)清洗滤饼，收集滤饼并真空干燥以作为黄色固体提供化合物3B-2(2.60g，8.57mmol，95.4％得率)，其在未进一步纯化的情况下用于下一步。

¹H NMR:ET15201-1-P1A 400MHz MeOD

δ8.74(d,J＝8.8Hz,1H),7.93(d,J＝8.8Hz,1H),7.71(s,1H),7.60-7.71(m,4H),7.10(d,J＝7.2Hz,1H),3.73(s,1H),2.61(s,3H).

中间产物3B的制备

在20℃，氮气气氛下，向化合物3B-2(2.60g，8.57mmol，1.0当量)在乙醇(26mL)中的混合物中添加SnCl₂.2H₂O(9.67g，42.9mmol，5.0当量)。将所得混合物加热至85℃并在85℃搅拌16h。TLC(石油醚：乙酸乙酯＝2：1，R_f-SM＝0.43，R_f-DP＝0.30)显示反应完成。将反应混合物冷却至20℃并倾倒至5N NaOH水溶液(50mL)中并搅拌5min，过滤并用二氯甲烷(50mL，20mL)萃取水相。用无水Na₂SO₄干燥合并的有机相，过滤并真空浓缩以作为棕色固体提供化合物3B(2.30g，粗产物)，其在未进一步纯化的情况下用于下一步。

1H NMR:ET15201-4-P1A400MHz DMSO_-d6

δ8.96(s,1H),8.12(s,1H),7.90-7.93(m,2H),7.64(d,J＝8.0Hz,1H),7.45(d,J＝6.0Hz,1H),7.25-7.31(m,2H),7.04(d,J＝6.0Hz,1H),5.51(s,2H),4.13(s,1H),2.26(s,3H).

中间产物4B的制备

在0℃，氮气气氛下，向化合物3(1.00g，3.34mmol，1.0当量)和化合物3B(913mg，3.34mmol，1.0当量)在四氢呋喃(10mL)中的混合物中添加LiHMDS(1M，16.7mL，5.0当量)。将所得混合物在0℃搅拌1h。TLC(石油醚：乙酸乙酯＝2：1，R_f-SM＝0.25，R_f-DP＝0.40)显示反应完成。通过在0℃滴加冰-水(2ml)使反应混合物淬灭，从而导致产生了以混悬液状态含有白色固体的浅橙色溶液。浓缩混合物以提供在乙酸乙酯(50mL)中混悬的黄色固体，用Na₂SO₄干燥，通过硅藻土塞过滤以提供黄色溶液并真空浓缩。用甲基叔丁基醚(20mL)清洗残余物，过滤以提供滤饼并将滤饼真空干燥以提供浅黄色固体状的化合物4B(1.10g，1.99mmol，59.6％得率)。

¹H NMR:ET15201-9-P1A 400MHz DMSO_-d6

δ11.69(s,1H),9.66(dd,J＝6.0,1.6Hz,1H),9.28(s,1H),9.12(s,1H),8.97(s,1H),8.42(d,J＝8.8Hz,1H),8.13(s,1H),8.06(dd,J＝2.8,1.6Hz,1H),7.93-7.96(m,2H),7.60(d,J＝8.8Hz,2H),7.33(t,J＝8.0Hz,1H),7.16(d,J＝6.0Hz,1H),7.08(d,J＝7.6Hz,1H),6.91(q,J＝3.2Hz,J＝0.8Hz,1H),5.89(d,J＝8.8Hz,1H),4.02-4.14(m,1H),3.74-3.79(m,1H),2.36(s,4H),1.99-2.08(m,2H),1.10(s,1H).

式I化合物的制备，R＝3-乙炔基苯基(化合物LUT012)

在20℃，氮气气氛下，将化合物4B(1.10g，1.99mmol，1.0当量)在HCl(0.5M，35.8mL，9.0当量)中混悬。将所述混合物加热至100℃并搅拌1小时。LCMS(ET15201-11-PlAl)显示反应完成。过滤热溶液，用沸水清洗(2×20mL)。将所得溶液在冰浴中冷却，并从溶液中结晶黄色固体状的产物。过滤固体并将其加入至饱和Na₂CO₃水溶液(100mL)。将混合物搅拌10min，然后过滤，用水清洗滤饼(50mL)并作为粗产物收集。通过制备-TLC(石油醚/乙酸乙酯＝1/1，R_f＝0.4)纯化粗产物以提供黄色固体状的LUT012(110mg，230umol，11.6％得率，98.1％纯度)。

¹HNMR:ET15201-11-P1A2 400MHz DMSO-_d6

δ13.84(br.s,1H),11.84(s,1H),9.76(d,J＝7.2Hz,1H),9.25(s,1H),9.06(s,1H),8.73(s,1H),8.41(d,J＝8.4Hz,1H),8.12(s,1H),8.05(d,J＝4.8Hz,1H),7.94(d,J＝6.4Hz,2H),7.61(d,J＝8.4Hz,1H),7.31(q,J＝7.6Hz,1H),7.16(d,J＝5.6Hz,1H),7.08(d,J＝7.6Hz,1H),6.92(q,J＝4.8Hz,J＝3.2Hz,1H),4.14(s,1H),2.37(s,3H).

实施例2

式I化合物的合成，R＝1,1-二甲基乙基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基(LUT013)

中间产物3C-2的制备

将化合物3B-1(1.00g，4.49mmol，1.0当量)、5-叔-丁基-2-甲基-吡唑-3-胺(1.38g，8.98mmol，2.0当量)、Pd₂(dba)₃(82.3mg，89.8umol，0.02当量)、DavePhos(70.7mg，180umol，0.04当量)和LiHMDS(1M，9.10mL，2.0当量)吸收至微波管中的二噁烷(10mL)中。将密封管在微波下在150℃加热30min。TLC(石油醚：乙酸乙酯＝1:1，R_f＝0.71)、LCMS(ET15300-11-P1A，产物RT＝0.972)、LCMS(ET15300-11-P1B，产物RT＝0.973)显示起始材料完全消耗。将两种反应混合物合并并在40℃减压浓缩。通过硅胶色谱法(100-200目硅胶)纯化残余物，用石油醚：乙酸乙酯(80：1～0：1)洗脱以提供黄色固体状化合物3C-2(1.00g，2.95mmol，32.8％得率)。

¹H NMR:ET15300-11-P1A 400MHz CDCl₃

δ8.16(d,J＝6.0Hz,1H),7.90(d,J＝8.4Hz,1H),7.45(d,J＝8.8Hz,1H),7.01(d,J＝6.0Hz,1H),6.08(s,1H),3.72(s,3H),2.55(s,3H),1.34(s,9H).

中间产物3C的制备

在20℃，氮气气氛下，向化合物3C-2(1.00g，2.95mmol，1.0当量)在乙醇(20mL)中的混合物中一次性加入SnCl₂.2H₂O(3.32g，14.7mmol，5.0当量)。然后，将反应混合物加热至80℃，12小时。TLC(石油醚：乙酸乙酯＝0：1，R_f＝0.24)和LCMS(ET15300-12-P1A，产物：RT＝0.793)显示反应完成。将混合物冷却至40℃，并在40℃减压浓缩。将残余物倾倒至二氯甲烷(20mL)中。用5N NaOH水溶液(10mL)清洗合并的有机相并搅拌5min，过滤混合物并真空浓缩。用二氯甲烷(20mL，10mL)萃取水相。用盐水(15mL)清洗合并的有机相，用无水Na₂SO₄干燥，过滤并真空浓缩。通过硅胶色谱法(100-200目硅胶)纯化残余物，用石油醚：乙酸乙酯(50：1～0：1)洗脱以提供黄色固体状粗化合物3C(700mg，2.26mmol，76.8％得率)。

¹H NMR:ET15300-12-P1A 400MHz CDCl₃

δ7.95(d,J＝6.0Hz,1H),7.22(d,J＝8.4Hz,1H),7.13(d,J＝8.8Hz,1H),6.97(d,J＝6.0Hz,1H),6.58(s,1H),4.08(s,2H),3.65(s,3H),2.29(s,3H),1.27(s,9H).

中间产物4C的制备

在0℃，氮气气氛下，在60min的一段时间内，向化合物3C(310mg，1.00mmol，1.0当量)和化合物3(300mg，1.00mmol，1.0当量)在四氢呋喃(4.0mL)中的溶液滴加Li-HMDS(1M，5.0mL，5.0当量)。TLC(石油醚：乙酸乙酯＝0：1，R_f＝0.34)和LCMS(ET15300-15-P1A，产物RT＝0.922)显示反应完成。将混合物在40℃减压浓缩以提供黄色固体状的粗化合物4C(1.00g，粗产物)。

注意：避免与水接触。

¹H NMR:ET15300-15-P1A 400MHz MeOD

δ9.72(dd,J＝1.6Hz,J＝7.6Hz,1H),9.04(s,1H),8.71(s,1H),8.20(d,J＝8.4Hz,1H),7.98-8.00(m,1H),7.70(d,J＝6.4Hz,1H),7.59(d,J＝8.8Hz,1H),7.19(d,J＝6.0Hz,1H),6.90(q,J＝5.2Hz,1H),6.07(s,1H),5.92(dd,J＝10.8Hz,J＝13.2,1H),4.15-4.18(m,1H),3.65(s,3H),2.43(s,3H),2.14-2.17(m,2H),1.84-2.14(m,2H),1.64-1.70(m,2H),1.33(s,9H).

式I化合物的制备，R＝1,1-二甲基乙基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基(LUT013)

将化合物4C(250mg，425umol，1.0当量)在HCl/MeOH(4mL，4M)中的混合物在20℃搅拌1小时。TLC(二氯甲烷：甲醇＝10：1，R_f＝0.24)和LCMS(ET15300-18-P1A，产物RT＝2.384)显示起始材料完全消耗。将混合物在40℃减压浓缩。用NaHCO₃水溶液将pH值调节至9，并将水相倾倒至乙酸乙酯(10mL)中。将混合物搅拌5min。过滤混合物并用10mL H₂O清洗滤饼，真空干燥。用乙酸乙酯(10mL，6mL)萃取滤液。用盐水(20mL)清洗合并的有机相，用无水Na₂SO₄干燥，过滤并真空浓缩。通过制备-HPLC(柱：YMC-Actus Triart C18 100*30mm*5um；流动相：[水(10mM NH₄HCO₃)-ACN]；B％：40％-60％，12min)纯化残余物以提供黄色固体状的LUT013(150mg，295umol，69.6％得率，99.4％纯度)。

¹H NMR:ET15300-18-P1A 400MHz DMSO-d₆

δ13.83(br.s,1H),11.80(s,1H),9.71(s,1H),9.09(s,1H),9.05(s,1H),8.73(s,1H),8.26(d,J＝8.8Hz,1H),8.04(d,J＝2.8Hz,1H),7.80(d,J＝2.0Hz,1H),7.57(d,J＝8.4Hz,1H),7.08(d,J＝6.0Hz,1H),6.89-6.92(m,1H),6.05(s,1H),3.54(s,3H),2.36(s,3H),1.26(s,9H).

实施例3

式I化合物的合成，R＝3-(三氟甲氧基)苯基(LUT014)，实验室规模的过程

中间产物3D-2的制备

在20℃，氮气气氛下，向化合物3B-1(2.00g，8.98mmol，1.0当量)和化合物3D-1(1.91g，10.8mmol，1.2当量)在异丙醇(20mL)中的混合物中一次性添加TFA(1.02g，8.98mmol，1.0当量)。将混合物在90℃搅拌18小时。LC-MS(ET15060-21-P1A1)显示反应完成。将所得混悬液冷却，并过滤出产物，用少量体积的二氯甲烷(10mL)清洗以提供黄色固体状的化合物3D-2(3.00g，8.26mmol，91.9％得率)，其直接用于下一步。

¹H NMR:ET15060-21-P1A1 400MHz DMSO-d₆

9.68(s,1H),8.71(d,J＝8.8Hz,1H),8.15(d,J＝6.0Hz,1H),8.03(s,1H),7.91(dd,J＝8.4,1.2Hz,1H),7.71(d,J＝8.4,Hz,1H),7.45(t,J＝8.4Hz,1H),6.98(d,J＝8.0Hz,1H),6.90(d,J＝6.0Hz,1H),2.48(s,3H).

中间产物3D的制备

在20℃，氮气气氛下，向化合物3D-2(3.00g，8.26mmol，1.0当量)在乙醇(30mL)中的混合物中一次性添加SnCl₂.2H₂O(9.32g，41.3mmol，5.0当量)。将混合物在85℃搅拌16小时。LC-MS(ET15060-24-P1A)显示反应完成。将深色溶液浓缩，用DCM(30mL)稀释，用NaOH水溶液(1.30mol/L，40mL)清洗。将混合物搅拌10min并过滤。分离过滤物，并用DCM(20mL)萃取水相。用盐水(30mL)清洗合并的有机相，用无水Na₂SO₄干燥，过滤并真空浓缩以提供红色固体状的化合物3D(2.20g，6.60mmol，79.9％得率)，其直接用于下一步而无需进一步纯化。

¹H NMR:ET15060-24-P1A1 400MHz DMSO-d₆

9.14(s,1H),8.13(s,1H),7.92-7.99(m,2H),7.66(d,J＝8.4Hz,1H),7.50(d,J＝6.0,Hz,1H),7.39(t,J＝8.4,Hz,1H),7.29(s,J＝8.4,1H),6.88(d,J＝7.6,1H),5.53(d,2H),2.28(s,3H).

中间产物4D的制备

在0℃，氮气气氛下，向化合物3(850mg，2.84mmol，1.0当量)和化合物3D(947mg，2.84mmol，1.0当量)在四氢呋喃(8.50mL)中的混合物中滴加LiHMDS(1M，14.2mL，5.0当量)。将混合物在0℃搅拌1小时。TLC(石油醚/乙酸乙酯＝1/1，R_f＝0.48)显示反应完成。通过滴加水(1mL-冰浴冷却)使深红色反应混合物淬灭，从而导致产生了以混悬液状态含有白色固体的浅橙色溶液。浓缩混合物以提供在乙酸乙酯(80mL)中混悬的黄色固体，干燥(MgSO₄)，并通过硅藻土塞过滤以提供黄色溶液并真空浓缩。将残余物在MTBE(15mL)中混悬，并搅拌12小时。过滤混合物，并将滤饼真空干燥以提供黄色固体状化合物4D(1.50g，2.45mmol，86.2％得率)。

¹H NMR:ET15060-38-p1a1 400MHz DMSO-d₆

11.77(s,1H),9.75(d,J＝6.4Hz,1H),9.64(s,1H),9.19(s,1H),9.06(s,1H),8.54(d,J＝8.4Hz,1H),8.20(s,1H),8.13(dd,J＝4.4,1.6Hz,1H),8.03(d,J＝6.0Hz,2H),7.69(d,J＝8.8Hz,1H),7.49(t,J＝8.0Hz,1H),7.26(d,J＝6.0Hz,1H),6.99(dd,J＝8.0,4.4Hz,2H),5.97(d,J＝10.0Hz,1H),4.15(d,J＝12.0Hz,1H),3.81-3.88(m,1H),2.40-2.47(m,4H),2.06-2.16(m,3H),1.83-1.86(m,1H).

式I化合物的制备，R＝3-(三氟甲氧基)苯基(LUT014)

将化合物4D(1.50g，2.45mmol，1.0当量)在HCl水溶液(0.5M，44.1mL，9.0当量)中混悬，加热至100℃并搅拌2小时。将大块固体溶解以提供黄色溶液。LC-MS(ET15060-42-P1A2)显示反应完成。过滤热溶液，用沸水清洗(2×5.0mL)。将所得溶液在冰浴中冷却，并从溶液中结晶得到黄色固体状的产物。用Na₂CO₃(固体)将pH值调节至9。将混合物搅拌10min并过滤，并且用水(5.0mL)清洗滤饼并收集。将固体加入二氯甲烷：甲醇(10:1，15mL)并搅拌5min。过滤混合物，并收集滤饼以提供黄色固体状的LUT014(150mg，274umol，11.2％得率，96.7％纯度)。

¹H NMR:ET15060-42-P1A2 400MHz DMSO-d₆

13.84(s,1H),11.85(s,1H),9.76(s,1H),9.43(s,1H),9.06(s,1H),8.74(s,1H),8.43(d,J＝8.8Hz,1H),8.12(s,1H),8.05(dd,J＝4.4,1.6Hz,1H),7.94-7.97(m,2H),7.64(d,J＝8.8Hz,1H),7.43(t,J＝8.4Hz,1H),7.21(d,J＝6.0Hz,1H),6.92(dd,J＝8.0,4.8Hz,2H),2.38(s,3H).

实施例4

通过改善的，放大的方法合成式I的化合物，R＝3-(三氟甲氧基)苯基(LUT014或 C17071479-F)

实施例3公开了以实验室规模合成LUT014化合物的方法。

以数-kg的规模实施了用于制备LUT014的改善，放大的合成方法，以验证大规模生产的改善方法并且提供用于临床研究的材料。在该实施例中公开了所述改善，放大的方法。

所述改善，放大的合成方法生产了4,015Kg LUT014，与以上产生150mg的实施例3的实验室规模的方法相比，这是非常大的放大。图6中的流程图显示了用于制备LUT014(C17071479-F)的改善，放大的方法，它的阶段，中间产物和LUT014(C17071479-F)产物的量、得率和纯度。

该实施例验证了在多阶段方法中，千克级规模的LUT014化合物的改善、放大的合成，然后通过结晶纯化获得了纯度99.3％的纯化产物。

用于式I化合物的生产的改善的，放大的方法的合成阶段，R＝3-(三氟甲氧基)苯基(LUT014或C17071479-F)

阶段1

阶段2

阶段3

阶段4

阶段5

阶段6

通过该方法获得了具有高纯度(99.3％)和测定纯度(99.9％)的C17071479-F(化合物LUT014)。

实施例5

式I化合物的合成，R＝3-氯-4-氟苯基(LUT015)

中间产物3E-2的制备

在20℃，氮气气氛下，向化合物3B-1(2.00g，8.98mmol，1.0当量)和化合物3B-2(1.57g，10.8mmol，1.2当量)在异丙醇(20mL)中的混合物中一次性添加TFA(1.02g，8.98mmol，1.0当量)。将混合物在90℃搅拌18小时。TLC(石油醚：乙酸乙酯＝3：1，R_f＝0.43)显示反应完成。使所述混合物冷却并过滤混合物。用少量体积的二氯甲烷(10mL)清洗滤饼以提供黄色固体状的化合物3E-2(3.10g，粗产物)，其直接用于下一步。

¹H NMR:ET15060-4-P1A1 400MHz DMSO-d₆

10.75(br.s,1H),8.91(d,J＝8.8Hz,1H),7.96(dd,J＝6.4,3.2Hz,1H),7.95(d,J＝6.4Hz,1H),7.83(d,J＝8.8,Hz,1H),7.72-7.76(m,1H),7.49-7.55(m,1H),6.95(d,J＝6.4Hz,1H),2.50(s,3H).

中间产物3E的制备

在20℃，氮气气氛下，向化合物3E-2(3.10g，9.34mmol，1.0当量)在乙醇(30mL)中的混合物中一次性添加SnCl₂.2H₂O(10.5g，46.7mmol，5.0当量)。将混合物在85℃搅拌16小时。LCMS(ET15060-34-P1A1)显示反应完成。将深色溶液浓缩，用二氯甲烷稀释(30mL)，用NaOH水溶液(1.30mol/L，25.0mL)清洗。将混合物搅拌10min并过滤。分离有机相，并用二氯甲烷(20mL)萃取水相。用盐水(15mL)清洗合并的有机相，用无水Na₂SO₄干燥，过滤并真空浓缩以提供红色固体状的化合物3E(2.50g，8.29mmol，88.7％得率)，其直接用于下一步而无需进一步纯化。

¹H NMR:ET15060-34-P1A1 400MHz DMSO-d₆

9.01(s,1H),8.26(dd,J＝6.8,2.4Hz,1H),7.89(d,J＝6.0Hz,1H),7.81-7.87(m,1H),7.61(d,J＝8.4Hz,1H),7.45(d,J＝6.0,Hz,1H),7.30(t,J＝8.8Hz,1H),7.27(d,J＝8.4,1H),5.50(s,2H),2.32(s,3H).

中间产物4E的制备

在0℃，氮气气氛下，向化合物3(2.00g，6.68mmol，1.0当量)和化合物3E(2.02g，6.68mmol，1.0当量)在四氢呋喃(20mL)中的混合物中滴加LiHMDS(1M，33.4mL，5.0当量)。将混合物在0℃搅拌1小时。TLC(石油醚：乙酸乙酯，R_f＝0.43)显示反应完成。通过滴加水(2mL-冰浴冷却)使深红色反应混合物淬灭，从而导致产生了以混悬液状态含有白色固体的浅橙色溶液。浓缩混合物以提供在乙酸乙酯(200mL)中混悬的黄色固体，干燥(MgSO₄)，并通过硅藻土塞过滤以提供黄色溶液并真空浓缩。将残余物在MTBE(30.0mL)中混悬，并搅拌12h。过滤混合物，并将滤饼真空干燥以提供黄色固体状化合物4E(2.00g，3.44mmol，51.5％得率)。

¹H NMR:ET15060-39-P1A1 400MHz DMSO-d₆

11.69(s,1H),9.68(d,J＝1.6Hz,1H),9.66(s,1H),9.12(s,1H),9.11(s,1H),8.44(d,J＝8.8Hz,1H),8.30(d,J＝6.8Hz,1H),8.07(d,J＝2.8Hz,1H),7.93-7.95(m,2H),7.61-7.63(m,1H),7.49(t,J＝8.0Hz,1H),7.37(t,J＝1.2Hz,1H),7.16(d,J＝6.0Hz,1H),6.93(d,J＝4.8Hz,1H),5.91(d,J＝9.2Hz,1H),4.04-4.06(m,1H),3.77(t,J＝12.0Hz,1H),2.34-2.41(m,6H),2.02-2.10(m,3H),1.76-1.79(m,1H).

式I化合物的制备，R＝3-氯-4-氟苯基(LUT015)

将化合物4E(2.00g，3.44mmol，1.0当量)在HCl水溶液(0.5M，62.0mL，9.0当量)中混悬，加热至100℃并搅拌2小时。将大块固体溶解以提供黄色溶液。LCMS(ET15060-43-P1A2)显示反应完成。过滤热溶液，用沸水清洗(2×10mL)。用Na₂CO₃(固体)将pH值调节至9。过滤混合物，并通过制备-TLC(石油醚：乙酸乙酯＝0：1，R_f＝0.46)纯化滤饼以提供黄色固体状的LUT015(170mg，332umol，9.64％得率，97.0％纯度)。

¹H NMR:ET15060-43-P1A1 400MHz DMSO-d₆

13.84(s,1H),11.84(s,1H),9.75(s,1H),9.34(s,1H),9.06(s,1H),8.74(s,1H),8.39(d,J＝8.4Hz,1H),8.28(dd,J＝6.8,2.8Hz,1H),8.05(dd,J＝4.4,1.6Hz,1H),7.94(d,J＝6.0Hz,1H),7.85-7.88(m,1H),7.63(d,J＝8.8Hz,1H),7.38(t,J＝9.2Hz,1H),7.18(d,J＝6.0Hz,1H),6.92(dd,J＝8.0,4.8Hz,1H),2.38(s,3H).

实施例6

式I化合物的合成，R＝2-氟-4-碘苯基(LUT016)

中间产物3F-2的制备

在20℃，氮气气氛下，向化合物3B-1(2.00g，8.98mmol，1.0当量)在异丙醇(20mL)中的混合物中添加化合物3F-3(2.55g，10.8mmol，1.2当量)和三氟乙酸(1.02g，8.98mmol，665uL，1.0当量)。将所得混合物加热至90℃并在90℃搅拌16h。TLC(石油醚：乙酸乙酯＝3：1，R_f-SM＝0.43，R_f-DP＝0.24)显示反应完成。将反应混合物过滤，并用二氯甲烷(10mL)清洗滤饼，收集滤饼并真空干燥以作为淡黄色固体提供化合物3F-2(2.80g，6.62mmol，73.7％得率)，其在未进一步纯化的情况下用于下一步。

¹H NMR:ET15201-2-P1A 400MHz MeOD

δ8.71(d,J＝8.8Hz,1H),7.91-7.95(m,2H),7.84(d,J＝8.4Hz,1H),7.74(d,J＝7.2Hz,1H),7.41(t,J＝8.0Hz,1H),7.18(d,J＝7.2Hz,1H),2.62(s,3H).

中间产物3F的制备

在20℃，氮气气氛下，向化合物3F-2(2.80g，6.62mmol，1.0当量)在乙醇(28mL)中的混合物中添加SnCl₂.2H₂O(7.47g，33.1mmol，5.0当量)。将所得混合物加热至85℃并在85℃搅拌16h。TLC(石油醚：乙酸乙酯＝2：1，R_f-SM＝0.43，R_f-DP＝0.30)显示反应完成。将反应混合物冷却至20℃并倾倒至5N NaOH水溶液(20mL)中并搅拌3min，过滤并用二氯甲烷(20mL，15mL)萃取滤液。用无水Na₂SO₄干燥合并的有机相，过滤并真空浓缩以作为红色固体提供化合物3F(2.20g，粗产物)，其在未进一步纯化的情况下用于下一步。

¹H NMR:ET15201-6-P1A 400MHz DMSO_-d6

δ7.74(d,J＝6.4Hz,1H),7.61(dd,J＝8.0,2.4Hz,1H),7.44-7.52(m,3H),7.37(d,J＝6.8Hz,1H),7.21(d,J＝6.8Hz,1H),5.47(s,2H),2.25(s,3H).

中间产物3F的制备

在0℃，氮气气氛下，向化合物3(1.00g，3.34mmol，1.0当量)和化合物3F(1.31g，3.34mmol，1.0当量)在四氢呋喃(10mL)中的混合物中添加LiHMDS(1M，16.7mL，5.0当量)。将所得混合物在0℃搅拌1h。TLC(石油醚：乙酸乙酯＝2：1，R_f-SM＝0.25，R_f-DP＝0.40)显示反应完成。通过在0℃滴加冰-水(2ml)使反应混合物淬灭，从而导致产生了以混悬液状态含有白色固体的浅橙色溶液。浓缩混合物以提供在乙酸乙酯(50mL)中混悬的黄色固体，用Na₂SO₄干燥，通过硅藻土塞过滤以提供黄色溶液并真空浓缩。用甲基叔丁基醚(20mL)清洗残余物，过滤以提供滤饼并将滤饼真空干燥以提供浅黄色固体状的化合物4F(1.10g，1.64mmol，49.0％得率)。

¹H NMR:ET15201-10-P1A1 400MHz DMSO_-d6

δ11.68(s,1H),9.63-9.67(m,1H),9.08-9.12(m,2H),8.98(s,1H),8.30(d,J＝8.8Hz,1H),8.05-8.06(m,1H),7.79(d,J＝6.0Hz,1H),7.66(dd,J＝8.2,2.0Hz,1H),7.54-7.60(m,2H),7.44-7.46(m,2H),7.11(d,J＝6.0Hz,1H),6.91(q,J＝4.4Hz,1H),5.89(d,J＝11.2Hz,1H),4.07(d,J＝12.8Hz,1H),3.74-3.80(m,1H),2.36(s,3H),2.05(t,J＝13.6Hz,2H),1.63-1.68(m,3H),1.11(s,2H).

式I化合物的制备，R＝2-氟-4-碘苯基(LUT016)

在20℃，氮气气氛下，将化合物4F(1.10g，1.64mmol，1.0当量)在HCl(0.5M，29mL，9.0当量)中混悬。将所述混合物加热至100℃并在100℃搅拌1h。LCMS(ET15201-12-P1A1)显示反应完成。过滤热溶液，用沸水清洗(2×20mL)。将所得溶液在冰浴中冷却，并从溶液中结晶得到黄色固体状的产物。过滤固体并将其加入至饱和Na₂CO₃水溶液(100mL)。将混合物搅拌10min并过滤，用水(50mL)清洗滤饼并作为粗产物收集。通过制备-HPLC(柱：WatersXbridge 150*25 5u；流动相：[水(10mM NH₄HCO₃)-ACN]；B％：50％-80％，11min)纯化所述粗产物以提供黄色固体状LUT016(125mg，212umol，12.9％得率，99.6％纯度)。

¹HNMR:ET15201-12-P1A1 400MHz DMSO_-d6

δ13.81(s,1H),11.79(s,1H),9.71(s,1H),9.04(s,2H),8.72(s,1H),8.24(d,J＝8.4Hz,1H),8.04(q,J＝2.0Hz,1H),7.78(d,J＝6.0Hz,1H),7.65(d,J＝9.6Hz,1H),7.57(q,J＝8.4Hz,2H),7.44(t,J＝8.4Hz,1H),7.11(d,J＝6.0Hz,1H),6.90(d,J＝4.8Hz,J＝2.8Hz,1H),2.36(s,3H).

实施例7

式I化合物的合成，R＝4-氯-3-(三氟甲基)苯基(LUT017)

中间产物3G-2的制备

在20℃，氮气气氛下，向化合物3B-1(2.00g，8.98mmol，1.0当量)和化合物3G-1(2.11g，10.8mmol，1.2当量)在异丙醇(20mL)中的混合物中一次性添加TFA(1.02g，8.98mmol，1.0当量)。将混合物在90℃搅拌18小时。LCMS(ET15060-19-P1A1)显示反应完成。使所述混合物冷却至20℃并过滤混合物。用二氯甲烷(10mL)清洗滤饼并作为白色固体状产物(3.20g，8.38mmol，93.3％得率)收集，其直接用于下一步而无需进一步纯化。

¹H NMR:ET15060-3-P1A1 400MHz DMSO-d₆

10.21(s,1H),8.81(d,J＝8.8Hz,1H),8.42(dd,J＝2.4Hz,1H),8.28(d,J＝2.0Hz,1H),8.26(d,J＝2.0Hz,1H),8.12(d,J＝6.0Hz,1H),7.79(d,J＝8.8Hz,1H),7.73(d,J＝8.8Hz,1H),6.98(d,J＝6.0Hz,1H),2.50(s,3H).

中间产物3G的制备

在20℃，氮气气氛下，向化合物3G-2(3.20g，8.38mmol，1.0当量)在乙醇(30mL)中的混合物中一次性添加SnCl₂.2H₂O(9.46g，41.9mmol，5.0当量)。将混合物在85℃搅拌16小时。LCMS(ET15060-22-P1A)显示反应完成。将深色溶液浓缩，用二氯甲烷稀释(50mL)，用NaOH水溶液(1.30mol/L，50mL)清洗。将混合物搅拌10min并过滤。分离过滤物，并用二氯甲烷(20mL)萃取水相。用盐水(30mL)清洗合并的有机相，用无水Na₂SO₄干燥，过滤并真空浓缩以提供黄色固体状的化合物3G(2.50g，7.11mmol，84.8％得率)。

¹H NMR:ET15060-22-p1a1 400MHz DMSO-d₆

9.34(s,1H),8.58(d,J＝8.8,1H),8.37(d,J＝8.8Hz,1H),7.99(d,J＝6.0Hz,1H),7.65-7.70(m,1H),7.57(d,J＝6.0Hz,1H),7.35(d,J＝8.4,1H),5.60(s,2H),2.30(s,3H).

中间产物4G的制备

在0℃，氮气气氛下，向化合物3(2.00g，6.68mmol，1.0当量)和化合物3G(2.35g，6.68mmol，1.0当量)在四氢呋喃(20mL)中的混合物中滴加LiHMDS(1M，33.4mL，5当量)。将混合物在0℃搅拌1小时。TLC(石油醚：乙酸乙酯＝1：1，R_f＝0.45)显示反应完成。通过滴加冰-水(3mL)使深红色反应混合物淬灭，从而导致产生了以混悬液状态含有白色固体的浅橙色溶液。浓缩混合物以提供在乙酸乙酯(150mL)中混悬的黄色固体，干燥(MgSO₄)，并通过硅藻土塞过滤以提供黄色溶液并真空浓缩。将残余物在MTBE(150mL)中混悬，并搅拌12小时。过滤混合物，并将滤饼真空干燥以提供红色固体状化合物4G(1.50g，1.47mmol，22.1％得率，62.0％纯度)。

(LCMS：ET15060-32-PlAl)

¹H NMR:ET15060-32-P1A1 400MHz DMSO-d₆

11.69(s,1H),9.66(d,J＝2.0Hz,1H),9.64(s,1H),9.10(s,1H),8.96(s,1H),8.50(d,J＝2.4Hz,1H),8.33-8.41(m,2H),8.05(d,J＝2.8Hz,1H),7.96(d,J＝6.0Hz,1H),7.62-7.64(m,2H),7.20-7.22(m,1H),6.94(d,J＝4.8Hz,1H),5.88(d,J＝10.8Hz,1H),4.03-4.06(m,1H),3.73-3.79(m,1H),2.37(s,3H),1.99-2.07(m,2H),1.62-1.80(m,3H).

式I化合物的制备，R＝4-氯-3-(三氟甲基)苯基(LUT017)

将化合物4G(1.50g，2.38mmol，1.0当量)在HCl水溶液(0.5M，28.5mL，6.0当量)中混悬，加热至100℃并搅拌2小时。将大块固体溶解以提供黄色溶液。LCMS(ET15060-36-P1A2)显示反应完成。过滤热溶液，用沸水清洗(2×10mL)。用Na₂CO₃(固体)将pH值调节至9。过滤混合物，并通过制备-TLC(石油醚：乙酸乙酯＝0：1，R_f＝0.65)纯化滤饼以提供0.3g固体。通过制备-HPLC(柱：YMC-Actus Triart C18 100*30mm*5um；液相：[A-10mM NH₄HCO₃的水溶液；B-ACN]；B％：50％-95％，12min)纯化固体以提供黄色固体状的LUT017(150mg，269umol，11.3％得率，98.0％纯度)。

¹H NMR:ET15060-36-P1A1 400MHz DMSO-d₆

13.84(br.s,1H),11.83(br.s,1H),9.73(s,1H),9.60(s,1H),9.06(s,1H),8.74(s,1H),8.52(d,J＝2.4Hz,1H),8.42(d,J＝8.8Hz,1H),8.36(d,J＝2.4Hz,1H),8.05(dd,J＝4.8,1.2Hz,1H),7.98(d,J＝6.0Hz,1H),7.66(dd,J＝8.8,2.8Hz,1H),7.23(d,J＝6.0Hz,1H),6.92(dd,J＝7.6,4.8Hz,2H),2.39(s,3H).

实施例8

式I化合物的合成，R＝3,5-二羟苯基(LUT019)

中间产物3H-2的制备

在20℃，氮气气氛下，向化合物3B-1(3.00g，13.5mmol，1.0当量)在异丙醇(30mL)中的混合物中添加化合物3H-3(2.48g，16.2mmol，1.2当量)和三氟乙酸(1.54g，13.5mmol，996mL，1.0当量)。将所得混合物加热至90℃并在90℃搅拌16h。TLC(石油醚：乙酸乙酯＝3：1，R_f-SM＝0.43，R_f-DP＝0.24)显示反应完成。将反应混合物过滤，并用二氯甲烷(10mL)清洗滤饼，收集滤饼并真空干燥以作为淡黄色固体提供化合物3H-2(4.50g，13.3mmol，98.4％得率)，其在未进一步纯化的情况下用于下一步。

¹H NMR:ET15201-5-P1A 400MHz MeOD

δ8.75(d,J＝8.4Hz,1H),7.91(d,J＝8.8Hz,1H),7.62(d,J＝7.2Hz,1H),7.06(d,J＝7.2Hz,1H),6.74(s,2H),6.67(s,1H),3.86(s,6H),2.6(s,3H).

中间产物3H的制备

在20℃，氮气气氛下，向化合物3H-2(4.50g，13.3mmol，1.0当量)在乙醇(45mL)中的混合物中添加SnCl₂.2H₂O(15.0g，66.3mmol，5.0当量)。将所得混合物加热至85℃并在85℃搅拌16h。TLC(石油醚：乙酸乙酯＝3：1，R_f-SM＝0.43，R_f-DP＝0.30)显示反应完成。将反应混合物冷却至20℃并倾倒至5N NaOH水溶液(20mL)中并搅拌5min，过滤并用二氯甲烷(20mL，15mL)萃取滤液。用无水Na₂SO₄干燥合并的有机相，过滤并真空浓缩以作为红色固体提供化合物3H(3.80g，粗产物)，其在未进一步纯化的情况下用于下一步。

¹H NMR:ET15201-7-P1A 400MHz DMSO-_d6

δ8.77(s,1H),8.15(s,1H),7.90(d,J＝6.0Hz,1H),7.63(d,J＝8.4Hz,1H),7.41(d,J＝6.4Hz,1H),7.23-7.27(m,3H),6.12(t,J＝2.0Hz,1H),5.48(s,2H),3.74(s,6H),2.26(s,3H).

中间产物4H的制备

在0℃，氮气气氛下，向化合物3(2.00g，6.68mmol，1.0当量)和化合物3H(2.07g，6.68mmol，1.0当量)在四氢呋喃(10mL)中的混合物中添加LiHMDS(1M，33mL，5.0当量)。将所得混合物在0℃搅拌1h。TLC(石油醚：乙酸乙酯＝2：1，R_f-SM＝0.43，R_f-DP＝0.30)显示反应完成。通过在0℃滴加冰-水(2.0mL)使反应混合物淬灭，从而导致产生了以混悬液状态含有白色固体的浅橙色溶液。浓缩混合物以提供在乙酸乙酯(50mL)中混悬的黄色固体，用Na₂SO₄干燥，通过硅藻土塞过滤以提供黄色溶液并真空浓缩。用甲基叔丁基醚(20mL)清洗残余物，过滤以提供滤饼并将滤饼真空干燥以提供棕色固体状的化合物4H(2.30g，粗产物)。

¹H NMR:ET15201-13-P1A 400MHz DMSO_-d6

δ11.69(s,1H),9.66(dd,J＝6.0,2.0Hz,1H),9.11(d,J＝8.0Hz,1H),8.98(s,1H),8.41(d,J＝8.4Hz,1H),8.04-8.07(m,1H),7.94(d,J＝6.0Hz,1H),7.59(d,J＝8.8Hz,1H),7.27(d,J＝2.0Hz,2H),7.13(d,J＝5.6Hz,1H),6.89-6.93(m,1H),6.15(d,J＝2.0Hz,1H),5.89(dd,J＝9.2,2.0Hz,1H),4.07(d,J＝13.2Hz,1H),3.77(s,6H),2.36(s,3H),1.99-2.08(m,2H),1.63-1.81(m,3H),1.10(s,1H).

式I化合物的制备，R＝3,5-二羟苯基(LUT019)

在0℃，氮气气氛下，向化合物4H(1.20g，2.04mmol，1.0当量)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中添加BBr₃(5.11g，20.4mmol，2.0mL，10.0当量)。将所得混合物加热到25℃并搅拌16h。LCMS(ET15201-18-P1A2)显示反应完成。真空浓缩反应混合物并倾倒至饱和NH₄Cl水溶液(10mL)，用无水Na₂SO₄干燥，过滤并真空浓缩。通过制备-HPLC(柱：Waters Xbridge150*255u；流动相：[水(0.05％氢氧化氨v/v)-MeOH]；B％：15％-50％，11min)纯化所述残余物以提供黄色固体状产物LUT019(20.0mg，40.8umol，2.00％得率，97.1％纯度)。

¹HNMR:ET15201-18-P1A2 400MHz MeOD

δ9.60(br.s,1H),9.02(s,1H),8.53(s,1H),8.23(d,J＝8.8Hz,1H),7.98(dd,J＝3.2,1.6Hz,1H),7.74(d,J＝6.0Hz,1H),7.59(d,J＝8.4Hz,2H),7.23(d,J＝7.2Hz,1H),6.90-6.93(m,1H),6.61(d,J＝2.4Hz,2H),6.07(q,J＝2.0Hz,1H),2.43(s,3H).

实施例9

式I化合物的制备，R＝苯基-3-磺酰胺(LUT020)

中间产物3I-2的制备

在20℃，氮气气氛下，向化合物3B-1(2.00g，8.98mmol，1.0当量)和3I-1(1.86g，10.8mmol，1.2当量)在异丙醇(50mL)中的混合物中一次性添加TFA(3.07g，26.9mmol，3.0当量)。将混合物在90℃搅拌18小时。LCMS(ET15060-20-P1A1)显示反应完成。使所述混合物冷却至20℃并过滤混合物。用二氯甲烷(10mL)清洗滤饼并收集以提供白色固体状产物化合物3I-2(3.20g，8.93mmol，99.4％得率)，其直接用于下一步而无需进一步纯化。

¹H NMR:ET15060-5-P1A1 400MHz DMSO-d₆

10.19(s,1H),8.82(d,J＝8.8Hz,1H),8.31(s,1H),8.06(d,J＝6.4Hz,1H),7.79(d,J＝8.8,Hz,1H),7.54-7.59(m,1H),7.40(s,1H),6.95(d,J＝6.4Hz,1H),2.50(s,3H).

中间产物3I的制备

在20℃，氮气气氛下，向化合物3I-2(3.20g，8.93mmol，1.0当量)在乙醇(32mL)中的混合物中一次性添加SnCl₂.2H₂O(10.1g，44.7mmol，5.0当量)。将混合物在85℃搅拌16小时。LCMS(ET15060-23-P1A)显示反应完成。将深色溶液浓缩，用二氯甲烷稀释(50mL)，用NaOH水溶液(1.30mol/L，20mL)清洗。将混合物搅拌10min并过滤。分离过滤物，并真空浓缩水相。将固体溶于二氯甲烷：甲醇(8：1，200mL)。过滤混合物，并真空浓缩滤液以提供红色固体状的化合物3I(2.50g，7.61mmol，85.3％得率)。

¹H NMR:ET15060-23-P1A1 400MHz DMSO-d₆

8.98(s,1H),8.20(s,1H),7.94(s,J＝6.8Hz,1H),7.84(d,J＝6.0Hz,1H),7.66(dd,J＝8.8Hz,1H),7.38(d,J＝6.0,Hz,1H),7.26-7.28(m,2H),7.21(d,J＝8.4,1H),5.43(s,2H),2.23(s,3H).

中间产物4I的制备

在0℃，氮气气氛下，向化合物3(2.00g，6.68mmol，1.0当量)和化合物3I(2.19g，6.68mmol，1.0当量)在四氢呋喃(20mL)中的混合物中滴加LiHMDS(1M，33.4mL，5.0当量)。将混合物在0℃搅拌1小时。TLC(石油醚：乙酸乙酯＝0：1，R_f＝0.20)显示反应完成。通过滴加水(3mL-冰浴冷却)使深红色反应混合物淬灭，从而导致产生了以混悬液状态含有白色固体的浅橙色溶液。浓缩混合物以提供在乙酸乙酯(100mL)中混悬的黄色固体，干燥(MgSO₄)，并通过硅藻土塞过滤以提供黄色溶液并真空浓缩。将残余物在MTBE(30mL)中混悬，并搅拌12h。过滤混合物，并将滤饼真空干燥以提供黄色固体状化合物4I(2.20g，粗产物)。

¹H NMR:ET15060-40-P1A1 400MHz DMSO-d₆(粗产物)

式I化合物的制备，R＝苯基-3-磺酰胺(LUT020)

将化合物4I(2.00g，3.29mmol，1.0当量)在HCl/EtOAc(4M，41.1mL，50当量)中混悬，并在30℃搅拌2小时。LCMS(ET15060-45-P1A1)显示反应完成。过滤溶液，用乙酸乙酯清洗(2×10mL)。向固体中加入水(15mL)。用Na₂CO₃(固体)将pH值调节至9。过滤混合物，并通过制备-TLC(石油醚：乙酸乙酯＝0：1，R_f＝0.10)纯化滤饼以提供0.19g固体。通过制备-HPLC(柱：YMC-Actus Triart C18 100*30mm*5um；液相：[A-10mM NH₄HCO₃的水溶液；B-ACN]；B％：25％-55％，12min)纯化固体以提供黄色固体状的LUT020(85.0mg，159umol，4.83％得率，98.0％纯度)。

¹H NMR:ET15060-45-P1A2 400MHz DMSO-d₆

13.83(s,1H),11.82(s,1H),9.73(s,1H),9.49(s,1H),9.07(s,1H),8.74(s,1H),8.45-8.47(m,2H),8.16(d,J＝8.8Hz,1H),8.05(dd,J＝4.8,1.6Hz,1H),7.95(d,J＝6.0Hz,1H),7.63(d,J＝8.8Hz,1H),7.51(t,J＝8.0Hz,1H),7.43(d,J＝8.0Hz,1H),7.33(s,2H),7.19(d,J＝6.0Hz,1H),6.91(dd,J＝8.0,4.8Hz,1H),2.38(s,3H).

实施例10

本发明公开所述的化合物的BRaf抑制活性

在该测定中，对野生型BRaf和含有V600E突变的BRAF测试了式I的化合物，其中R是3-(三氟甲氧基)苯基(LUT014)和威罗非尼(Vemurafenib)(已知的含有V600E突变的BRAF的抑制剂)的BRaf抑制活性。在所述测定中作为对照包括了已知的BRaf和CRaf的抑制剂GW5074。使用从10μΜ起始的3-倍连续稀释，以10-剂量IC50模式测试了LUT014和威罗非尼。使用从20μΜ起始的3-倍连续稀释，以10-剂量IC50模式测试了对照化合物GW5074。以10μΜATP进行反应。

下表显示了该测定中获得的IC50值。

表3

实施例11

原代人角化细胞中的ERK磷酸化

一般程序

不希望受理论束缚，本发明人相信角化细胞可能是皮肤副作用的位点，并且角化细胞中EGFR和/或其下游效应因子(MAPK、MEK、PI3K等)的抑制可能是这种副作用的潜在机制。在该实验中，研究了本发明公开所述的化合物对人角化细胞中ERK磷酸化的影响。ERK的磷酸化指示了其激活作用。

人正常角化细胞HEKa购自Gibco Rhenium并且接种至10cm培养皿中(300,000个细胞/皿)并且在37℃，5％CO₂的条件下培育过夜。次日早晨，将培养基更换为饥饿培养基2小时，然后用所述测试化合物另外处理细胞2小时。培育后，用RIPA使细胞裂解，并且通过蛋白印迹分析蛋白提取物的磷酸化-ERK和总ERK。将未处理的细胞和0.1％DMSO处理的细胞用作阴性对照。将HKGS生长因子用作阳性对照。

蛋白免疫印迹：将7.5μg的总提取物加载至10％的丙烯酰胺凝胶上。转移后，用TBST/5％脱脂乳封闭所述膜，然后与小鼠抗磷酸化-ERK(1：1000在TBST 5％BSA中，ON，4℃)和山羊抗小鼠HRP(1：10,000在TBST 5％BSA中，1-小时，RT)一起培育。使用SuperSignalWest Pico化学发光底物使膜暴露。

然后，通过将膜与0.5％叠氮化钠培育1小时使HRP失活。在清洗和ECL暴露以确保不存在信号后，用TBST/5％脱脂乳对膜再封闭15min，然后与兔抗总ERK2(1：500在TBST 5％BSA中，ON，4℃)、山羊抗兔HRP(1：5,000在TBST 5％BSA中，1-小时，RT)一起培育，并最终使用SuperSignal West Pico化学发光底物进行暴露。扫描胶片并使用ImageJ软件定量信号。结果计算为磷酸化-ERK/总ERK。

实施例12

通过本发明公开所述的化合物-LUT014、LUT015、LUT017所引起的ERK磷酸化。

如实施例11所述，使用0.3μΜ和1μΜ的LUT014、LUT015、LUT017和威罗非尼处理HEKa细胞，并且进行HEKa细胞裂解液的蛋白印迹分析。将HKGS生长因子用作阳性对照。图1A显示了通过用0.3μΜ测试化合物处理的磷酸化-ERK(上图)和总ERK(下图)。图1B显示了基于磷酸化-ERK/总ERK比的计算，图1A中的印迹的密度分析。图1C显示了通过用1μΜ测试化合物处理的磷酸化-ERK(上图)和总ERK(下图)。图1D显示了基于磷酸化-ERK/总ERK比的计算，图1C中的印迹的密度分析。

实施例13

通过化合物LUT012、LUT016和C-1所引起的ERK磷酸化

如实施例11所述，使用0.3μΜ和1μΜ的LUT012、LUT016和已知的化合物-威罗非尼和C-1(旧批次和新批次)处理HEKa细胞，并且进行HEKa细胞裂解液的蛋白印迹分析。将HKGS生长因子用作阳性对照。化合物C-1具有以下结构：

图2A显示了通过用0.3μΜ测试化合物处理的磷酸化-ERK(上图)和总ERK(下图)。图2B显示了基于磷酸化-ERK/总ERK比的计算，图2A中的印迹的密度分析。图2C显示了通过用1μΜ测试化合物处理的磷酸化-ERK(上图)和总ERK(下图)。图2D显示了基于磷酸化-ERK/总ERK比的计算，图2C中的印迹的密度分析。

实施例14

通过化合物LUT012、LUT013、LUT014、LUT015、LUT016、LUT017、LUT020和C-1所引起的ERK磷酸化

如实施例11所述，用0.3μΜ和1μΜ的威罗非尼、C-1、LUT012、LUT013、LUT014、LUT015、LUT016、LUT017和LUT020处理HEKa细胞，并且进行HEKa细胞裂解液的蛋白印迹分析。将HKGS生长因子用作阳性对照。图3A显示了通过用0.3μΜ测试化合物处理的磷酸化-ERK(上图)和总ERK(下图)。图3B显示了通过用1μΜ测试化合物处理的磷酸化-ERK(上图)和总ERK(下图)。图3C和图3D显示了基于磷酸化-ERK/总ERK比的计算，图3A和图3B中的印迹的密度分析。

实施例15

相对于C-1，通过新型化合物LUT014、LUT017所引起的ERK磷酸化

如实施例11所述，用浓度0.003μΜ、0.03μΜ和0.3μΜ的C-1、LUT014和LUT017处理HEKa细胞，并且进行HEKa细胞裂解液的蛋白印迹分析。将HKGS生长因子用作阳性对照。图4A显示了通过用0.003μΜ、0.03μΜ和0.3μΜ的测试化合物处理的磷酸化-ERK(上图)和总ERK(下图)。图4B显示了基于磷酸化-ERK/总ERK比的计算，图4A中的印迹的密度分析。

实施例16

化合物-LUT012、LUT013、LUT014、LUT015、LUT016、LUT017、LUT-019、LUT020、C-1和威罗非尼-对MIA PaCa细胞增殖的影响

在本实施例中，研究了所述化合物对MIA PaCa2 K-ras细胞增殖的影响。预期引起ERK磷酸化的所述化合物还将引起Mia PaCa细胞的增殖。

在37℃，5％CO₂的条件下，将所述细胞以5000个细胞/孔接种到96孔板中的饥饿培养基中24小时。在0.002μΜ至10μΜ的不同浓度范围添加所述测试化合物。所述对照是未处理的细胞和0.1％DMSO的运载体(vehicle)。将所述细胞在37℃，5％CO₂培育72小时，然后使用ATPlite增殖试剂盒(Perkin-Elmer)测试增殖。每个结果代表6个孔的平均值。结果表示为与DMSO对照相比的过度增殖％。参见图5A-图5J。

将提供最高增殖的所述化合物的浓度与DMSO相比。作为100％计算DMSO。72小时后，与DMSO对照相比，通过C-1所引起的增殖％是30％，LUT013为173％，LUT014为116％，LUT015为29％，LUT016为110％，LUT017为174％，LUT012为20％，LUT019为7％并且LUT020为12％。威罗非尼显示与DMSO相比，12％的增殖。

实施例17

化合物I，R＝3-(三氟甲氧基)苯基(LUT014)的激酶选择性测定研究

化合物制备和测定对照

将所有化合物在100％DMSO中制备为50×最终测定浓度。将所述化合物的这种工作储液作为反应中的第一组分加入至测定孔，然后加入其余组分。在标准KinaseProfiler^TM服务中，在反应开始前，在化合物和激酶之间无预培育步骤。阳性对照孔含有除所关心的化合物之外的所有反应组分；然而，在这些孔中包含DMSO(最终浓度2％)以控制溶剂影响。空白孔含有所有反应组分，其中用参考抑制剂替换所关心的化合物。这消除了激酶活性并且建立了基线(剩余0％的激酶活性)。结果如表4所示。

表4-式I化合物，R＝3-(三氟甲氧基)苯基(LUT014)的激酶选择性测定研究

	Lut014@0.01uM	Lut014@1μM
			Ab1(h)	92	25
ALK(h)	150	83
			AMPKα1(h)	106	114
ASK1(h)	109	99
			Aurora-A(h)	95	97
CaMKI(h)	100	97
			CDK1/细胞周期蛋白B(h)	113	102
CDK2/细胞周期蛋白A(h)	106	95
			CDK6/细胞周期蛋白D3(h)	100	103
CDK7/细胞周期蛋白H/MAT1(h)	105	109
			CDK9/细胞周期蛋白T1(h)	110	98
CHK1(h)	100	114
			CK1γ1(h)	94	101
CK2α2(h)	98	92
			c-RAF(h)	105	30
DRAK1(h)	99	117
			eEF-2K(h)	95	106
EGFR(h)	98	100
			EphA5(h)	99	56
EphB4(h)	93	38
			Fyn(h)	103	95
GSK3β(h)	105	98
			IGF-1R(h)	88	86
IKKα(h)	105	105
			IRAK4(h)	94	109
JAK2(h)	126	118
			KDR(h)	96	79
LOK(h)	98	83
			Lyn(h)	101	46
MAPKAP-K2(h)	110	103
			MEK1(h)	98	105
MKK7β(h)	100	103
			MLK1(h)	109	112
Mnk2(h)	112	107
			MSK2(h)	92	96
MST1(h)	98	112
			mTOR(h)	100	96
NEK2(h)	98	125
			p70S6K(h)	108	97
PAK2(h)	95	111
			PDGFRβ(h)	98	103
Pim-1(h)	96	89
			PKA(h)	114	106
PKBα(h)	102	105
			PKCα(h)	102	107
PKCθ(h)	106	109
			PKGlα(h)	99	111
PIk3(h)	85	87
			PRAK(h)	101	103
ROCK-I(h)	107	107
			Rse(h)	106	113
Rsk1(h)	106	112
			SAPK2a(h)	97	54
SRPK1(h)	105	100
			TAK1(h)	91	97
PI3激酶(p110β/p85α)(h)	101	95
			PI3激酶(p120γ)(h)	96	83
PI3激酶(p110δ/p85α)(h)	96	94
			PI3激酶(p110α/p85α)(h)	92	84

实施例18

化合物的光毒性筛选

已知某些BRaf抑制剂显示出光毒性。因此，使用3T3自然红吸收测定对本发明公开的化合物筛选了光毒性。

简言之，将BALB/c-3T3小鼠成纤维细胞(最初得自ATCC)以12,000个细胞每孔接种至96-孔板并生长24小时。将测试化合物和阳性对照(氯丙嗪)溶解并在DMSO中连续稀释。将阴性对照(组氨酸)溶解并在HBSS中稀释。然后，在HBSS中将所有测试制品的稀释液制备为最终测试浓度。在测定开始时，从板中除去生长培养基并更换为测试剂稀释液。将6个重复用于每个浓度。将细胞在黑暗中与测试制品培育1h，暴露于UVA光(2.5J/cm²，18min内)并在黑暗中培育24小时。除将其保存在黑暗中而不是照射之外，类似地处理平行非辐照板。

对于中性红染色，除去培养基并加入含有25μg/mL中性红(Sigma)的新鲜培养基。在3小时培育后，用PBS清洗细胞，并且用1％乙酸在50％乙醇中的溶液溶解细胞染料。通过其在540nm的吸光度测量细胞中性红。

数据分析：通过线性插值对每个条件计算IC50(引起存活性降低50％的浓度)。

计算光刺激因子(Photo-Irritation Factor)(PIF)：PIF＝IC50(-Irr)/IC50(+Irr)

PIF>5表示光毒性；2<PIF<5表示可能的光毒性；PIF<2表示无光毒性

另外，通过完全浓度-反应曲线的比较计算平均光电效应(MPE)。MPE是通过IC50改变所归一化的当量剂量反应中的差异的加权平均。

MPE>0.15表示光毒性；0.1<MPE<0.15表示可能的光毒性；MPE<0.1表示无光毒性。

表5：光毒性的评价

C-15和C-19显示出光毒性。C-1和LUT-104未显示出光毒性。

实施例19

EGFR抑制剂施用后，LUT014对磷酸化-ERK的体外影响

如实施例11所述，用LUT014和EGFR抑制剂，厄洛替尼(erlotinib)和西妥昔单抗(cetuximab)处理HEKa细胞。将HKGS用作阳性对照。如实施例11所述，通过蛋白印迹测量LUT014和EGFR抑制剂对磷酸化-ERK的影响。

图7A-图7C和表6显示了在EGFR抑制剂施用后，LUT014对磷酸化-ERK的影响的结果。

表6-LUT014和EGFRI对磷酸化-ERK的影响

与DMSO处理的细胞相比，LUT014将磷酸化-ERK提高了200-800％。与HKGS处理的细胞相比，厄洛替尼降低了磷酸化ERK。当加入到用厄洛替尼处理的细胞中时，LUT014提高了磷酸化-ERK。当加入到用西妥昔单抗处理的细胞中时，LUT014提高了磷酸化-ERK。

实施例20

使用包含LUT014的局部组合物的渗透研究

使用MedFlux-HT^TM连续流通扩散池对包含LUT-014的局部组合物实施了离体渗透和穿透实验。将皮肤样品放置在扩散池的供体和受体隔室之间。以0.01％的Brij作为受体溶液，使用柠檬酸盐/磷酸盐缓冲液(pH 4.0)测量局部组合物的扩散。使用90/10的乙腈/水作为提取溶剂提取渗透到皮肤样品中的LUT014。

24小时后，受体溶液中所观察到的LUT014的最大积累水平为小于2ng/mL。

实施例21

使用LUT014作为示例性化合物进行了本发明化合物的毒性研究。结果总结如下。

在Wistar大鼠中以250、500和1000mg/kg/天的剂量水平口服施用LUT014，7天不会导致死亡。

在小型猪中，以5mg/kg/天的水平皮肤施用LUT014良好耐受最长达6天。

体外艾姆斯测试(Ames test)结果显示LUT014在鼠伤寒沙门氏菌(Salmonellatyphimurium)回复突变测定(reverse mutation assay)中和在大肠杆菌(Escherichiacoli)回复突变测定中不是致突变的。

由于LUT014引起了IVIS<3，因此不需要对眼部刺激或严重眼睛损伤进行分类，如通过BCOP研究所观察到的。

LUT014分类为非光毒性的(3T3 NRU)

表7：毒性研究

实施例22

设计了1/2期多中心二期研究。

主要目标：

评价LUT014在接受EGFR抑制剂的结肠直肠癌患者中的安全性和药物动力学。

次要目标：

估计LUT014在接受EGFR抑制剂的结肠直肠癌患者中所发生的等级1和2痤疮样病变的治疗中的效力。

患者群体：

已发展痤疮样病变的接受EGFR抑制剂的结肠直肠癌患者。

方法：

这是多中心，开放标签，剂量升高研究，其将确定最大耐药量(MTD)，建立LUT014的药物动力学和估计LUT014在治疗接受EGFR抑制剂疗法并且已发展痤疮样病变的患者中的效力。

在常规3+3剂量升高设计中，最开始在3位受试者的群组中发生招募。将用LUT014治疗接收EGFR抑制剂并且已发展等级1或2的痤疮样病变的患者4周。每天早上在盆浴或淋浴之后将应用LUT014凝胶剂。将应用于面部以及前胸和后胸的上部部分。将应用凝胶薄层。

在LUT014的初始群组中，如果在初始3位患者中未发生剂量限制性毒性(DLT)，或者如果在4周疗法期间，该群组增至6位患者，则在6位患者中的1位中发生，则将开始第二群组。对于该第二剂量施用方案，在盆浴之后，患者将再次每天将LUT014应用于他们的面部加上它们的前胸和后胸上部4周。如果在该群组中治疗的初始3位患者中未观察到DLT，或者如果该第二群组增至6位患者，则在6位患者中的1位中发生，则将治疗第三群组的3位患者，或者如果该第三群组增至6位患者，则治疗6位患者。在盆浴之后，这些患者还将每天将LUT014应用于他们的面部、前胸和后胸4周。

对于每个剂量施用群组，基于美国国家癌症研究所(NCI)的通用不良反应术语标准(CTCAE)v4.03，如果无受试者经历DLT，其构成等级3或更高的毒性，则后续3位受试者的组将接受下一个更高的LUT014剂量施用方案。然而，如果3位初始患者之一经历DLT，则该剂量施用方案中的受试者群组将扩大为6位受试者。如果6位受试者中的至少2位经历DLT，则这将考虑为非耐受剂量。

将MTD定义为少于2位(最多6位受试者的群组)受试者经历DLT的LUT014的最高剂量施用浓度。

DLT的确定将需要等级3或更大的毒性发生并且通过独立的安全审查委员会确定为可能、大概或明确与研究药物有关。

在研究的剂量升高期完成后，将招募最多至60位患者并随机分配以在MTD或者发起人所选择的较小剂量接受LUT014或者将用相同外观的运载体(vehicle)治疗患者。将LUT014或运载体应用于具有痤疮样病变迹象的所有区域内的皮肤上。患者将治疗4周。

Claims

1.一种式(I)的化合物：

其中R选自由3-氯-4-氟苯基、2-氟-4-碘苯基、4-氯-3-(三氟甲基)苯基、3-(1,1-二甲基乙基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基、3-(三氟甲氧基)苯基组成的组，或其药物可用的盐或溶剂化物。

2.根据权利要求1所述的化合物，其中R是3-(三氟甲氧基)苯基。

3.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物抑制BRaf的活性。

4.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物具有小于5的光刺激因子。

5.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物具有小于0.15的平均光电效应。

6.一种药物组合物，包含：

式(I)的化合物：

其中R选自由3-氯-4-氟苯基、2-氟-4-碘苯基、4-氯-3-(三氟甲基)苯基、3-(1,1-二甲基乙基)-1-甲基-1H-吡唑-5-基、3-(三氟甲氧基)苯基组成的组，或其药物可用的盐或溶剂化物；以及

药物可用的载体或赋形剂，

其中与包含其中R是对-氯苯基的式(I)的化合物的药物组合物的有丝分裂原-激活的蛋白激酶的活性相比，足够量的所述药物组合物提高了有丝分裂原-激活的蛋白激酶的活性至少2倍。

7.根据权利要求6所述的药物组合物，其中R是3-(三氟甲氧基)苯基。

8.根据权利要求6所述的药物组合物，其中所述药物组合物配制成用于全身施用。

9.根据权利要求6所述的药物组合物，其中所述药物组合物配制成用于局部施用。

10.根据权利要求6所述的药物组合物，其中所述药物组合物以片剂、胶囊剂、液体剂、混悬剂或粉末剂的形式口服施用。

11.根据权利要求6所述的药物组合物，其中所述药物组合物的形式为凝胶剂、软膏剂、乳膏剂、泡沫剂、喷雾剂、液体剂或皮肤贴片。

12.根据权利要求6所述的药物组合物，其中所述药物组合物的形式为水凝胶剂或洗剂。

13.根据权利要求6所述的药物组合物，其中所述化合物以所述药物组合物总重量的1％w/w至5％w/w的浓度存在。

14.根据权利要求6所述的药物组合物，其中所述化合物以所述药物组合物总重量的5％w/w至10％w/w的浓度存在。

15.权利要求6所述的药物组合物在制备用于治疗和/或改善对其有需要的受试者中对于EGFR抑制剂、PI3K抑制剂、MEK抑制剂或它们的组合的皮肤不良反应的药物中的用途，

其中与包含其中R是对-氯苯基的式(I)的化合物的药物组合物的有丝分裂原-激活的蛋白激酶的活性相比，足够量的所述药物组合物提高了有丝分裂原-激活的蛋白激酶的活性至少2倍，并且

其中所述皮肤不良反应选自痤疮样皮疹、丘疹脓疱性皮疹、头皮毛发异常生长、面部毛发异常生长、睫毛异常生长、伴有或不伴有脓性肉芽肿的甲沟炎和毛细血管扩张以及它们的组合。

16.根据权利要求15所述的用途，其中R是3-(三氟甲氧基)苯基。

17.根据权利要求15所述的用途，其中所述皮肤不良反应是痤疮样皮疹。

18.根据权利要求15所述的用途，其中在施用所述药物组合物之前，用EGFR抑制剂、PI3K抑制剂、MEK抑制剂、或其组合治疗所述受试者。

19.根据权利要求15所述的用途，其中所述EGFR抑制剂选自：

(吉非替尼)、

(厄洛替尼)、

(拉帕替尼)、

(西妥昔单抗)、

(帕尼单抗)、

(凡德他尼)、

(耐昔妥珠单抗)、

(奥希替尼)及其组合。

20.根据权利要求15所述的用途，其中所述PI3K抑制剂选自GDC-0980(Apitolisib)、GDC-0941(匹克替利昔布)、BAY 80-6946(Copanlisib)、BKM120(Buparlisib)、NVP-BEZ235(达托里昔布)、IPI 145(杜维里昔布)、艾代拉里昔布(GS-1101或CAL-101)、渥曼青霉素和LY294002及其组合。

21.根据权利要求15所述的用途，其中所述MEK抑制剂选自曲美替尼(GSK1120212)、考比替尼(XL518)、比美替尼(MEK162)、司美替尼、PD-325901、CI-1040、PD035901、UO126、TAK-733及其组合。

22.根据权利要求15所述的用途，其中所述药物组合物为局部形式。

23.根据权利要求15所述的用途，其中所述药物组合物的形式为凝胶剂、软膏剂、乳膏剂、喷雾剂、皮肤贴片、泡沫剂或液体剂。

24.根据权利要求15所述的用途，其中所述药物组合物的形式为水凝胶剂或洗剂。

25.根据权利要求15所述的用途，其中所述药物组合物为全身施用形式并且所述全身施用形式选自肠内施用和肠胃外施用。

26.根据权利要求15所述的用途，其中治疗和/或改善皮肤不良反应包括降低所述皮肤不良反应的严重程度或防止所述皮肤不良反应的升高。