CN111100178B - 一种药用级胆固醇硫酸酯钠的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种药用级胆固醇硫酸酯钠及其制备方法。本发明通过控制胆固醇、氨基磺酸、氢氧化钠的加入比例，使得产品中钠离子含量在4.5％‑4.9％范围内，保证反应终产物基本为纯的胆固醇硫酸酯钠，几乎不含胆固醇硫酸酯，为安全有效的应用胆固醇硫酸酯钠提供合格原料。

Description

一种药用级胆固醇硫酸酯钠的制备方法

技术领域

本专利涉及药物合成领域，具体涉及一种药用级胆固醇硫酸酯钠的制备方法。

背景技术

胆固醇硫酸酯钠，化学名为5-胆甾烯-3β醇硫酸钠，CAS号为2864-50-8，结构如下：

胆固醇硫酸酯钠是一种极性较大的类脂化合物，极性接近皮肤。它是一种负电性脂质，适用于作为带正电荷的药物制备脂质体的膜材。其参与组成的脂质体，由于与角质层有相同的脂质，易互相融合，可使药物有较大的皮肤透过性和稳定性。胆固醇硫酸酯钠是制备两性霉素B的一种药用辅料，由于目前上市的两性霉素B是注射剂，所以需要胆固醇硫酸酯钠成品，达到药用级或注射级。

目前，现有技术中胆固醇硫酸酯钠主要采用两步合成：

步骤1：以胆固醇(式1)为底物制备胆固醇硫酸酯(式2)；

步骤2：胆固醇硫酸酯(式2)与含钠的碱成盐制备胆固醇硫酸酯钠(式3)。

针对第一步反应，现有技术公开的化学合成方法多以胆固醇为原料，与S0₃、H₂S0₄、H₂SO₄-HAc、磺基乙酸、发烟硫酸或氯磺酸反应制备胆固醇硫酸酯钠。例如，DE19642875A公开了一种制备胆固醇硫酸酯钠的方法，其在生成胆固醇硫酸酯的过程中使用了氯磺酸作为反应物。WO2013154752A公开的方法使用吡啶、三氧化硫等试剂与胆固醇进行酯化反应制备胆固醇硫酸酯。Gilbert等(Recent Developments in Preparative Sulfonation andSulfationSynthesis，1969,1(1),3-10)报道了胆固醇与DCC/H₂SO₄反应制备胆固醇硫酸酯的方法。这些现有技术文件使用的原料毒性大、腐蚀性强、价格昂贵，反应温度高，不适用于工业化生产。因此，有必要研究一种反应条件温和、容易控制的制备胆固醇硫酸酯钠的方法。

杨治旻等(“胆固醇硫酸酯钠的合成及分析方法研究”，《西北药学杂志》，2007年10月，第22卷第5期，266-267页)报道了胆固醇与氨基磺酸在60-65℃反应制备胆固醇硫酸酯，之后胆固醇硫酸酯与NaHCO₃反应制备胆固醇硫酸酯钠的方法。该论文声称，所述方法制备胆固醇硫酸酯钠的收率高达92％(以氨基磺酸或NaHCO₃的投料量为基础计算；如果按照胆固醇的投料量为基础计算，经换算为83.71％)，终产物HPLC测定的纯度99.16％。该方法工艺简单，反应条件温和，据记载收率高达90％以上，看起来非常适合工业生产。本申请发明人重复杨治旻论文方法，但是胆固醇硫酸酯钠的摩尔收率仅44.0％(以胆固醇的投料量为基础计算)。因此，杨治旻论文报道的结果数据的准确性和真实性存疑。

本申请发明人进一步分析了杨治旻论文，发现，该论文反应步骤2中使用8.5g(0.1mol)的碳酸氢钠作为Na⁺离子的来源，最终反应生成了45g胆固醇硫酸酯钠(分子量488.70，换算即0.092mol)，那么，考虑到第一步反应的损耗，以Na⁺离子计，第二步的反应的收率必须大于等于92％才能使得整个制备方法的整体收率达到92％。然而，根据现有技术的记载(黄上峰，“胆甾醇硫酸酯钠及其类似物的合成研究”，《广西科学》，2008年，第15卷第4期,414-418，参见表5)，以饱和NaHCO₃反应作为Na⁺离子的来源制备胆固醇硫酸酯钠，收率仅为60％。杨治旻论文报道的收率与现有技术公开的常规收率严重不符。

根据杨治旻论文的记载，制备方法的步骤2以胆固醇硫酸酯与NaHCO₃反应制备胆固醇硫酸酯钠，如果反应不完全，终产物中胆固醇硫酸酯与胆固醇硫酸酯钠将并存。胆固醇硫酸酯与胆固醇硫酸酯钠性质相近，该论文使用乙醚浸泡洗涤粗品，仅能去除未发生反应的胆固醇，而不能分离胆固醇硫酸酯与胆固醇硫酸酯钠。因此，该论文获得的终产物，极有可能是胆固醇硫酸酯与胆固醇硫酸酯钠并存的混合物。杨志旻文献以0.01mol/L的醋酸铵溶液-乙腈(7：33)作为流动相、HPLC定量检测终产物中胆固醇硫酸酯钠的含量。众所周知，HPLC检测条件下，胆固醇硫酸酯与胆固醇硫酸酯钠的出峰时间相同，无法分开。本申请发明人参照杨志旻论文公开的HPLC检测条件进行了实验，证实在所述检测条件下，胆固醇硫酸酯与胆固醇硫酸酯钠的出峰时间相同。因此HPLC检测并不能区分胆固醇硫酸酯和胆固醇硫酸酯钠，HPLC的检测结果并不能代表终产物胆固醇硫酸酯钠的纯度。因此，该论文提供的含量测定试验不能证明其产物即为胆固醇硫酸酯钠，该文件记载的收率(92％)是不准确的。需要重新验证检视该方法生成胆固醇硫酸酯钠的准确收率。

胆固醇硫酸酯钠分子由金属钠正离子与胆固醇硫酸酯的负离子1:1组成，分子量为488.60，其中金属钠正离子的分子量为23.21。因此在整个胆固醇硫酸酯钠分子中，钠离子的理论含量应参照下列公式计算，

以钠离子理论含量4.7％为基准，检测限误差±5％，钠离子含量范围应为4.5％～4.9％(4.7±4.7*5％)。可见，在HPLC定量分析的基础之上，必须进一步检测终产品中钠离子的含量，才能准确反映终产品中胆固醇硫酸酯钠的含量，准确评价制备方法的收率。

本申请的发明人按照杨治旻论文所述方法，制备了胆固醇硫酸酯钠，检测终产品中的钠离子，发现其含量仅为1.4％，远低于胆固醇硫酸酯钠中Na⁺离子的理论含量。这进一步证明了杨治旻论文提供的收率数据是不准确的。

另外，上述制备方法中，理论上，胆固醇与氨基磺酸按摩尔比例1:1发生反应。杨治旻论文所述方法步骤1中胆固醇与氨基磺酸投料的摩尔比例为1.1:1，氨基磺酸投料不足，胆固醇反应并不完全。由于胆固醇为羊毛或动物肝脏提取物，而动物来源物料有动物的可传染性海绵状脑病(TSE)的风险。为保证药用辅料胆固醇硫酸酯钠的质量，制备时需使用药用级或注射级胆固醇为原料。药用级或注射级胆固醇市售价格约4-7万元/公斤，而氨基磺酸的市售价格约为25元/公斤，胆固醇反应不完全会造成原料的浪费，极大地增加反应成本。另一方面，未反应的胆固醇随反应进行残留至胆固醇硫酸酯钠中，容易造成终产品中胆固醇含量超标，不仅影响胆固醇硫酸酯钠的性能，用作药物辅料还可能导致人体胆固醇摄入超标。

上述步骤二，由胆固醇硫酸酯制备成钠盐，现有技术报道的钠离子来源包括各种含钠碱或含钠阳离子交换树脂。然而，根据现有技术(黄上峰，“胆甾醇硫酸酯钠及其类似物的合成研究”，《广西科学》,2008,15(4),414-418)的记载，以NaHCO₃反应作为Na⁺离子的来源制备胆固醇硫酸酯钠，收率较低。使用NaOH溶液，浓度太大容易发生消除反应。阳离子(钠型)交换树脂是较好的钠离子来源，所述实验条件下，胆固醇硫酸酯钠的产率高达95％。然而，一方面，离子交换树脂的工业产品中常含有少量低聚合物和未参加反应的单体，还含有铁、铅、铜等无机杂质，会对药用原料的安全性产生不良影响。并且阳离子(钠型)交换树脂的价格昂贵、使用条件较为苛刻，不适用于工业化大生产。另一方面，该文献同样没有检测终产物的钠离子含量，无法评价终产物中胆固醇硫酸酯钠的确切含量。本申请发明人重复了黄上峰论文方法，并检测终产物钠离子含量，发现其远低于胆固醇硫酸酯钠纯品的钠离子理论含量。因此，该论文报道的终产物也是胆固醇硫酸酯钠与胆固醇硫酸酯的混合物，报道的收率也不是胆固醇硫酸酯钠的准确收率。

针对现有技术存在的问题，目前急需一种制备药用级胆固醇硫酸酯钠的方法，以获得钠离子含量符合要求的高纯度的胆固醇硫酸酯钠。

发明内容

针对上述现有技术缺陷，本发明的目的在于解决上述技术问题，提供一种药用级胆固醇硫酸酯钠的制备方法，该方法制得的胆固醇硫酸酯钠中钠离子含量符合规定，终产品几乎不含胆固醇硫酸酯。

本发明提供如下技术方案：

一种药用级胆固醇硫酸酯钠的制备方法，包括如下步骤：

步骤1：在反应温度下，胆固醇和氨基磺酸以1:2～2.5的摩尔比例加入有机溶剂A中，反应完全后析晶，过滤，洗涤，得胆固醇硫酸酯；

步骤2：在反应温度下，将步骤1制得的胆固醇硫酸酯加入到无水有机溶剂B中，并加入无水有机溶剂B溶解的氢氧化钠溶液，其中胆固醇：氢氧化钠的摩尔比为1:(2.5～3.5)，反应完全后析晶，过滤，洗涤，得胆固醇硫酸酯钠；

其中，步骤1所述的有机溶剂A选自N，N-二甲基甲酰胺，N，N-二甲基乙酰胺，二甲亚砜；

其中，步骤2所述的无水有机溶剂B选自吡啶、甲醇、乙醇、甲苯。

进一步地，所述药用级胆固醇硫酸酯钠的制备方法，其中步骤1所述反应温度为60-75℃，步骤2所述反应温度≥55℃，优选≥65℃。

进一步地，所述药用级胆固醇硫酸酯钠的制备方法，其中步骤1所述有机溶剂A为N，N-二甲基甲酰胺，步骤2所述的无水有机溶剂B为甲醇或乙醇。

进一步地，所述药用级胆固醇硫酸酯钠的制备方法，其中步骤1中胆固醇和氨基磺酸的摩尔比为1:2，反应温度为68℃，步骤2中胆固醇与有机溶剂B的质量体积比为1：(35～45)。

进一步地，所述药用级胆固醇硫酸酯钠的制备方法，其中步骤2中胆固醇：氢氧化钠的摩尔比为1：2.5，胆固醇与无水有机溶剂B的质量体积比为1：35。

进一步地，所述药用级胆固醇硫酸酯钠的制备方法，其中步骤2中胆固醇：氢氧化钠的摩尔比为1：3.5，胆固醇与无水有机溶剂B的质量体积比为1：35或1:45。

本发明还提供一种药用级胆固醇硫酸酯钠，其特征在于，使用上述方法制备得到。

进一步地，所述药用级胆固醇硫酸酯钠的制备方法所得的产品的钠离子含量在4.5％～4.9％范围之内。

本发明还提供一种药用级胆固醇硫酸酯钠组合物，其特征在于，钠离子含量在4.5％～4.9％范围之内。

本发明还提供一种药物组合物，其特征在于包含上述药用级胆固醇硫酸酯。

本发明具有的有益效果：

1、步骤1中，加入过量的氨基磺酸使胆固醇充分反应，大大降低了反应成本。

2、本申请通过控制反应条件，所得胆固醇硫酸酯钠的钠离子含量在4.5％～4.9％范围之内，保证终产物完全为胆固醇硫酸酯钠，几乎无胆固醇硫酸酯的残留。

3、现有技术报道的胆固醇硫酸酯钠的制备方法得到的产物，均为化学纯。本申请的制备方法的原料采用药用级胆固醇，得到的产品为药用级，进一步去除特定微生物并控制热原，即可成为注射级辅料。例如满足两性霉素B注射剂的处方需要。

4、第一步反应结束后，析晶纯化胆固醇硫酸酯，可以去除残留氨基磺酸，避免其对第二步反应中加入的含钠碱的影响，可以更精确的控制第二步反应含钠碱的加入量，确保终产物钠离子含量符合要求。

5、本发明选用的第二步反应的反应溶剂，不仅容易从终产品中除去，并且毒性较小，有利于保障终产品的安全。

附图说明

图1为胆固醇硫酸酯的液相色谱图。

图2为胆固醇硫酸酯钠的液相色谱图。

具体实施方式

下面通过部分实施例对本发明所提供的胆固醇硫酸酯钠的制备方法进行详细说明，但本发明并不限于下述实施例。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域技术人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅做示范之用。

以下除非特别说明，所述的中间产物“摩尔收率”均假设终产物为100％胆固醇硫酸酯，以胆固醇的投料量为基准，按照胆固醇硫酸酯分子量计算摩尔收率。所述的终产物“摩尔收率”均假设终产物为100％胆固醇硫酸酯钠，以胆固醇硫酸酯的投料量为基准，按照胆固醇硫酸酯钠分子量计算摩尔收率。

本发明所述的二甲基甲酰胺即为N，N-二甲基甲酰胺。

1.本发明使用的胆固醇的HPLC检测方法：

色谱条件：用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂(规格Agilent XDB C8，250mm×4.6mm，5μm)；

流动相：0.01mol/磷酸二氢钾：甲醇(体积比15：85)；

流速：1.0ml/min；

柱温为30℃；

检测器：紫外检测器；

检测波长：220nm。

对照品溶液：取胆固醇对照品20mg，精密称定，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。取其1ml至10ml量瓶中，加甲醇溶解定容至刻度，作为对照溶液。

供试品溶液：取本品100mg，精密称定，置25ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液。

精密量取对照品溶液20μl，注入液相色谱仪，理论塔板数按胆固醇峰计算应不低于2000。

测定法精密量取供试品和对照品溶液20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。

2.本发明使用的Na+定量检测方法：

色谱条件：用阳离子交换色谱柱(型号：IonPac CS17A，长250mm，内径4mm)；

检测器：电导检测器；

洗脱液：0.436％甲基磺酸水溶液；

流速：1.0ml/min。

系统适用性：称取氯化钠约0.01g，置100ml量瓶中，用去离子水溶解稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液，取对照溶液10ml注入离子色谱仪，记录色谱图；理论板数以钠离子计应不低于2000钠离子与各相邻杂质峰的分离度大于1.5。

具体操作方法：称取样品约0.1g，精密称定，置于坩埚中灼烧，将炽灼残渣置100ml量瓶中，加去离子水适量，超声10分钟，稀释至刻度，摇匀，滤过，作为供试品溶液；取供试品溶液和对照品溶液各10ml分别注入离子色谱仪，记录色谱图。

实验例1：胆固醇硫酸酯和胆固醇硫酸酯钠的HPLC测定

按杨治旻等(“胆固醇硫酸酯钠的合成及分析方法研究”，《西北药学杂志》，2007年10月，第22卷第5期，266-267页)的HPLC方法分别检测胆固醇硫酸酯和胆固醇硫酸酯钠：

色谱条件：液相色谱仪，紫外检测器，色谱柱为Kromasil C8(250mm×4.6mm，5μm)，以0.01mol/L醋酸铵溶液-乙腈(7:33)为流动相，检测波长210nm。

分别取50mg胆固醇硫酸酯和胆固醇硫酸酯钠，精密称定，分别置于不同的100mL量瓶中，加流动相溶解稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。分别精密量取20μL注入液相色谱仪，记录色谱图。其中图1为胆固醇硫酸酯，图2为胆固醇硫酸酯钠。

由图可以看出，胆固醇硫酸酯和胆固醇硫酸酯钠的出峰时间相同。杨治旻论文中提供的液相色谱方法无法区分胆固醇硫酸酯和胆固醇硫酸酯钠。

对比例1：胆固醇硫酸酯钠的制备

按杨治旻等论文(“胆固醇硫酸酯钠的合成及分析方法研究”，《西北药学杂志》，2007年10月，第22卷第5期，266-267页)的方法制备胆固醇硫酸酯：

步骤1：将胆固醇42g(0.11mol)、二甲基甲酰胺200ml放入500ml三口瓶中，加热搅拌，胆固醇完全溶解后，加入氨基磺酸10g(0.10mol)，63℃强烈搅拌反应约2h。

步骤2：将碳酸氢钠8.5g(0.1mol)加入到上述反应瓶中，继续搅拌至不再产生泡沫，停止反应。冷却，抽滤，水洗，干燥得粗品。粗品用100ml乙醚浸泡，过滤，干燥，得终产物23.32g，摩尔收率44.0％(以胆固醇的投料量为基准计算，终产物以胆固醇硫酸酯钠计)，钠离子的含量1.4％，胆固醇的残留量3.02％。

结果表明反应终产物中存在胆固醇残留，钠离子含量也不符合规定。为了得到较纯的胆固醇硫酸酯钠，将步骤1和步骤2分别进行研究。

对比例2：胆固醇硫酸酯的制备

按杨治旻等(西北药学杂志，2007年第5期第22卷)发表的文献中步骤1的方法制备胆固醇硫酸酯：

将胆固醇42g(0.11mol)、二甲基甲酰胺200ml放入500ml三口瓶中，加热搅拌，胆固醇完全溶解后，加入氨基磺酸10g(0.10mol)，63℃强烈搅拌反应约2h。

为考察该步骤的收率情况，待上述步骤1反应完全后降温至25℃搅拌析晶至析晶完全，过滤，加入无水甲醇洗涤滤饼，抽干得到中间产物30.52g，摩尔收率60.3％，HPLC含量测定显示胆固醇的残留量为30.27％，胆固醇残留量过大，造成胆固醇的浪费。因此，有必要对胆固醇与氨基磺酸的投料比例进行研究，以充分利用原料，节约生产成本和资源。

实施例1：胆固醇硫酸酯的制备

将胆固醇、二甲基甲酰胺(80mL)放入三口瓶中，加热搅拌，胆固醇完全溶解后，加入氨基磺酸，加热至反应温度，强烈搅拌反应约2h。待反应完全后降温至25℃搅拌析晶至析晶完全，过滤，加入无水甲醇洗涤滤饼，抽干得到中间产物，计算摩尔收率和胆固醇残留量。在上述其他条件相同时，改变原料加入量、反应温度，观察其对摩尔收率和胆固醇残留量的影响，结果见表1。

表1.原料加入量和反应温度对胆固醇硫酸酯的制备的影响

表1结果显示，当胆固醇与氨基酸的投料比大于等于1：1时，中间产物残留的胆固醇较多，将近30％的胆固醇未发生酯化反应。随着氨基磺酸加入量的增加，化学反应率提高，胆固醇的残留量减少。当胆固醇：氨基磺酸的摩尔比为1:2，中间产物未检出胆固醇残留，提示胆固醇反应完全。进一步增加氨基磺酸的加入量，反应溶液酸性过高，生成的胆固醇硫酸酯会分解，重新生成胆固醇，收率降低，胆固醇的残留量增加。因此优选的反应条件为，胆固醇与氨基磺酸的摩尔比为1:1.5～2.5。

保持胆固醇与氨基磺酸的比例1：2，考察反应温度对收率和胆固醇残留量的影响。结果显示，63℃-78℃范围内，微调温度，对收率影响不显著。但是，温度过高会加速胆固醇硫酸酯的降解，导致胆固醇残留量增加。68℃胆固醇反应最完全，收率最佳，中间产物胆固醇硫酸酯中未检出胆固醇残留。

随后，本申请发明人进一步考察了胆固醇硫酸酯生成胆固醇硫酸酯钠的工艺。

对比例3：胆固醇硫酸酯钠的制备

按杨治旻等发表的文献(“胆固醇硫酸酯钠的合成及分析方法研究”，《西北药学杂志》，2007年10月，第22卷第5期，266-267页)中步骤2的方法制备胆固醇硫酸酯钠，胆固醇：碳酸氢钠＝1.1：1(摩尔比)。

按照实施例1-4方法制备中间产物胆固醇硫酸酯(10g胆固醇，25.86mmol)，在反应瓶中加入上述中间产物，并按文献报道的比例加入碳酸氢钠1.98g(23.51mmol)、二甲基甲酰胺48ml，60-65℃继续搅拌至不再产生泡沫，停止反应。冷却，抽滤，水洗，干燥得粗品。粗品用100ml乙醚浸泡，过滤，干燥，得终产物9.95g，摩尔收率为87.2％，钠离子的含量1.5％。

结果表明，钠离子含量明显低于理论含量，终产物中含有大量未成盐的胆固醇硫酸酯，怀疑是由于碳酸氢钠加入量过少导致。因此，增加碳酸氢钠加入量重复实验。

对比例4：胆固醇硫酸酯钠的制备

按对比例3的实验方法，提高碳酸氢钠的投料量，胆固醇：碳酸氢钠＝1：2。

按照实施例1-4方法制备中间产物胆固醇硫酸酯(10g胆固醇，25.86mmol)，在反应瓶中加入上述中间产物，并加入碳酸氢钠4.34(51.72mmol)g、二甲基甲酰胺48ml，加入到上述反应瓶中，继续搅拌至不再产生泡沫，停止反应。冷却，抽滤，水洗，干燥得粗品。粗品用100ml乙醚浸泡，过滤，干燥，得终产物10.04g，摩尔收率88.0％，钠离子的含量1.8％。

结果表明：步骤2中采用碳酸氢钠进行反应生成钠盐，增加碳酸氢钠的投料量，终产物的钠离子含量虽然有所增加，但仍远低于理论值4.7％。究其原因，由于碳酸氢钠为弱碱，易造成反应不完全，致使钠离子含量不符合规定。因此，改用强碱进行成盐反应。

对比例5：胆固醇硫酸酯钠的制备

按照实施例1-4方法制备中间产物胆固醇硫酸酯(10g胆固醇，25.86mmol)。

按照黄上峰(“胆甾醇硫酸酯钠及其类似物的合成研究”，《广西科学》,2008,15(4),414-418)文章中1.2.3方法3的方法制备胆固醇硫酸酯钠：

在反应瓶中加入上述中间产物胆固醇硫酸酯，900ml水，并滴加30％NaOH溶液至pH为9，搅拌0.5h，停止反应，抽滤，固体分别用3×300mL蒸馏水、200mL乙醚和200mL丙酮洗涤，干燥，得到暗黄色固体粗品，用50％甲醇重结晶，得到终产物8.4g，摩尔收率73.7％(终产物以胆固醇硫酸酯钠计)，钠离子含量3.2％，胆固醇残留为1.0％。

结果证实，钠离子含量为3.2％，不符合标准4.5％-4.9％的规定，即终产物不完全是胆固醇硫酸酯钠，还存在胆固醇硫酸酯，换算可知，胆固醇硫酸酯的含量约为1-3.2/4.7＝32％。同时，检测产物中胆固醇残留为1.0％，提示当使用水溶液作为反应体系时，30％NaOH浓度较高，会使胆固醇硫酸酯和胆固醇硫酸酯钠水解产生胆固醇。

实施例2：胆固醇硫酸酯钠的制备

按照实施例1-4方法制备中间产物胆固醇硫酸酯(10g胆固醇，25.86mmol)。

将实施例1-4制得的中间产物胆固醇硫酸酯加入无水甲醇中，搅拌升温至反应温度，回流1h。加入氢氧化钠的无水甲醇溶液(氢氧化钠溶于30mL无水甲醇)，控制温度继续回流3h，搅拌降温至25℃，然后于25℃搅拌析晶，过滤至无液体流出。加入纯化水洗涤滤饼，抽滤至无液体流出，再用无水甲醇洗滤饼，抽滤至无液体流出，滤饼干燥得终产物，以胆固醇的投料量为基础，计算总摩尔收率。在上述其他条件相同时，改变氢氧化钠、无水甲醇(不包含溶解氢氧化钠所用无水甲醇)的用量和反应温度，对收率和钠离子含量的影响，见表2。

表2.胆固醇硫酸酯钠制备的数据汇总如下表所示

结果显示，保持胆固醇投料、氢氧化钠、无水甲醇的加入量不变，化学反应的摩尔收率和产物纯度随着反应温度的升高而提高，终产物中的钠离子含量也相应增高，并且当温度为65℃时，钠离子含量(4.67％)接近理论值(4.7％)，终产物的钠离子含量符合规定。甲醇的沸点为65℃，因此该反应的温度最高升至为此温度。

保持反应温度(65℃)不变，调整钠离子的加入量，由胆固醇硫酸酯反应生成胆固醇硫酸酯钠的反应率随着氢氧化钠浓度的增大而提高。氢氧化钠加入量过少，成盐反应不完全，终产品钠离子含量不合格；氢氧化钠加入量过高，终产物残留的钠离子含量超出标准。

实施例3

将胆固醇10.0g、二甲基甲酰胺(80mL)放入三口瓶中，加热搅拌，胆固醇完全溶解后，加入氨基磺酸2.59g，加热至68℃，强烈搅拌反应约3h。待反应完全后降温至25℃搅拌析晶至析晶完全，过滤，加入无水甲醇洗涤滤饼，抽干得到中间产物胆固醇硫酸酯。将中间产物胆固醇硫酸酯加380ml无水甲醇中，搅拌升温至反应温度65℃，回流1.5h。加入氢氧化钠的无水甲醇溶液(3.10g氢氧化钠溶于30mL无水甲醇)，控制温度继续回流3h，搅拌降温至25℃，然后于25℃搅拌析晶，过滤至无液体流出。加入纯化水洗涤滤饼，抽滤至无液体流出，再用无水甲醇洗滤饼，抽滤至无液体流出，滤饼干燥得终产物胆固醇硫酸酯钠。

实施例4

将胆固醇10.0g、二甲亚砜(80mL)放入三口瓶中，加热搅拌，胆固醇完全溶解后，加入氨基磺酸2.81g，加热至72℃，强烈搅拌反应约3h。待反应完全后降温至25℃搅拌析晶至析晶完全，过滤，加入无水吡啶洗涤滤饼，抽干得到中间产物胆固醇硫酸酯。将中间产物胆固醇硫酸酯加入380ml无水吡啶中，搅拌升温至反应温度61℃，回流1h。加入氢氧化钠的无水吡啶溶液(2.59g氢氧化钠溶于32mL无水吡啶)，控制温度继续回流3h，搅拌降温至25℃，然后于25℃搅拌析晶，过滤至无液体流出。加入纯化水洗涤滤饼，抽滤至无液体流出，再用无水甲醇洗滤饼，抽滤至无液体流出，滤饼干燥得终产物胆固醇硫酸酯钠。

实施例5

将胆固醇11.0g、N，N-二甲基甲酰胺(100mL)放入三口瓶中，加热搅拌，胆固醇完全溶解后，加入氨基磺酸2.95g，加热至75℃，强烈搅拌反应约3h。待反应完全后降温至20℃搅拌析晶至析晶完全，过滤，加入无水甲苯洗涤滤饼，抽干得到中间产物胆固醇硫酸酯。将中间产物胆固醇硫酸酯加入420ml无水甲苯中，搅拌升温至反应温度60℃，回流2h。加入氢氧化钠的无水甲苯溶液(3.10g氢氧化钠溶于30mL无水甲苯)，控制温度继续回流3.5h，搅拌降温至20℃，然后于20℃搅拌析晶，过滤至无液体流出。加入纯化水洗涤滤饼，抽滤至无液体流出，再用无水甲苯洗滤饼，抽滤至无液体流出，滤饼干燥得终产物胆固醇硫酸酯钠。

Claims (6)

1.一种药用级胆固醇硫酸酯钠的制备方法，包括如下步骤：

步骤1：在反应温度60-75℃下，胆固醇和氨基磺酸以1:2的摩尔比例加入有机溶剂A中，反应完全后析晶，过滤，洗涤，得胆固醇硫酸酯；

步骤2：在反应温度65℃下，将步骤1制得的胆固醇硫酸酯加入到无水有机溶剂B中，并加入无水有机溶剂B溶解的氢氧化钠溶液，其中胆固醇：氢氧化钠的摩尔比为1:(2.5～3.5)，反应完全后析晶，过滤，洗涤，得胆固醇硫酸酯钠；

其中，步骤1所述的有机溶剂A选自N，N-二甲基甲酰胺；步骤2所述的无水有机溶剂B选自甲醇；胆固醇与无水有机溶剂B的质量体积比为1：(35～45)。

2.如权利要求1所述药用级胆固醇硫酸酯钠的制备方法，其特征在于，步骤1中胆固醇和氨基磺酸的摩尔比为1:2，反应温度为68℃。

3.如权利要求1或2所述药用级胆固醇硫酸酯钠的制备方法，其特征在于，步骤2中胆固醇与无水有机溶剂B的质量体积比为1：35。

4.如权利要求1或2所述药用级胆固醇硫酸酯钠的制备方法，其特征在于，步骤2中胆固醇：氢氧化钠的摩尔比为1：2.5，胆固醇与无水有机溶剂B的质量体积比为1：35。

5.如权利要求1或2所述药用级胆固醇硫酸酯钠的制备方法，其特征在于，步骤2中胆固醇：氢氧化钠的摩尔比为1：3.5，胆固醇与无水有机溶剂B的质量体积比为1：35。

6.如权利要求1或2所述药用级胆固醇硫酸酯钠的制备方法，其特征在于，步骤2中胆固醇：氢氧化钠的摩尔比为1：3，胆固醇与无水有机溶剂B的质量体积比为1:35或1:45。

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