CN112851689B - 一种具有特异选择性的荧光素探针的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本申请涉及具有特异选择性的荧光素探针的制备领域，具体公开了一种具有特异选择性的荧光素探针的制备方法。所述方法包括：(1)将4‑硝基邻苯二甲酸酐、间苯二酚、硝基环己烷和无水氯化钴混合，加热熔融，加入氯化锌，反应，之后加盐酸回流，过滤洗涤，干燥；(2)将包含Na2S和Na2SO3的还原溶液与步骤(1)的所得物混合，反应，之后滴加冰醋酸至沉淀完全，过滤洗涤，干燥；(3)将包含甲醇和三乙胺的混合溶剂与步骤(2)的所得物混合，滴加CS2，反应，之后滴加氯化铜水溶液，滴完继续反应，之后用盐酸调节体系pH值为1～2，减压蒸馏，洗涤，干燥，柱色谱纯化。所述方法极大提高了5‑异硫氰酸荧光素的转化率和产率。

Description

一种具有特异选择性的荧光素探针的制备方法
技术领域
本申请涉及具有特异选择性的荧光素探针的制备领域，更具体地，涉及一种具有特异选择性的荧光素探针的制备方法。
背景技术
荧光素探针是一类利用荧光素及其衍生物与目标分子作用后通过荧光光谱(包括荧光强度、荧光激发与发射波长、荧光寿命和荧光偏振/各向异性等)改变来实现对目标分子进行探测的有机荧光功能染料，其具有检出限极低和灵敏度极高等优点，特别适合于对某些低含量物质，特别是生物材料进行相关的特异性检测。
5-异硫氰酸荧光素(Fluorescein isothiocyanate，5-FITC)，是目前最为广泛应用的荧光标记探针之一，其最大吸收光波长为490～495nm，最大发射光波长为525～530nm，呈现出非常便于人眼观测的黄绿色明亮荧光，其结构式如下所示：
Figure BDA0002921575190000011
5-异硫氰酸荧光素以荧光素为荧光基团并以异硫氰酸为反应基团，通过异硫氰酸与蛋白质的自由氨基相结合形成硫脲衍生物，从而实现对蛋白质和多肽的衍生标记，特别是对各种抗体蛋白的标记，而标记后的抗体不会丧失与特定抗原相结合的特异性，并且在碱性溶液中具有强烈的黄绿色荧光，由此可以通过在荧光显微镜下观察或流式细胞仪分析对相应的抗原进行定性、定位或定量的检测。此外，5-异硫氰酸荧光素酯还可以应用于医学、农学和畜牧等方面，对由病毒、细菌和寄生虫等病原体所致疾病进行快速诊断。
目前，5-异硫氰酸荧光素的制备方法包括：使4-硝基邻苯二甲酸酐与间苯二酚反应生成5-硝基荧光素和6-硝基荧光素的混合物，之后分离纯化得到5-硝基荧光素，然后将硝基还原为氨基，经酰化和消除得到5-异硫氰酸荧光素。在上述反应中，由于反应后硝基的位置不同而得到两种异构体的混合中间产物，不得不分离纯化后进行下一步的反应，这极大地影响了5-异硫氰酸荧光素的转化率和产率。
因此，本领域技术人员希望能够开发出能够有效提高转化率和产率的特异选择性的荧光素探针5-异硫氰酸荧光素的制备方法。
发明内容
[技术问题]
针对现有技术存在的不足，本申请的一个目的在于提供一种特异选择性的荧光素探针5-异硫氰酸荧光素的制备方法，所述制备方法能够充分降低6-异硫氰酸荧光素的生成，极大地提高5-异硫氰酸荧光素的转化率和产率，并且条件温和、操作简便，应用前景广阔。
[技术方案]
为了实现上述目的，根据本申请的一个实施方式提供了一种亲特异选择性的荧光素探针的制备方法，其包括以下步骤：
Figure BDA0002921575190000021
(1)将重量比为1:(1.18～1.20):(0.50～0.55):(0.20～0.27)的4-硝基邻苯二甲酸酐、间苯二酚、硝基环己烷和无水氯化钴混合，加热熔融，向其中加入重量为4-硝基邻苯二甲酸酐重量的1.00～1.10倍的氯化锌，在135～145℃下反应4～5小时，之后加入盐酸加热回流30～45分钟，过滤，滤饼用水洗涤至中性，干燥；
(2)将Na2S和Na2SO3溶于水中制得浓度分别为0.6～0.8g/mL和0.15～0.20g/mL的还原溶液，以每克步骤(1)的所得物对应6～7mL所述还原溶液将二者混合，在70～80℃下反应8～9小时，之后滴加冰醋酸至沉淀完全，过滤，滤饼用水洗涤，干燥；
(3)将体积比为1:(0.5～0.7)的甲醇和三乙胺混合得到混合溶剂，以每克步骤(2)的所得物对应7～10mL所述混合溶剂的量将二者混合，在0～5℃下滴加重量为所述步骤(2)的所得物重量的0.25～0.35倍的CS2，室温反应7～8小时，之后向其中滴加浓度为0.6～0.8g/mL的氯化铜水溶液，滴完继续反应2～2.5小时，其中每克步骤(2)的所得物对应10～12mL所述氯化铜水溶液，之后用盐酸调节体系pH值为1～2，减压蒸馏，残留物用水分散洗涤，干燥，柱色谱纯化。
在本申请中，首先在硝基环己烷、氯化钴和氯化锌的存在下使得4-硝基邻苯二甲酸酐与间苯二酚定向反应生成5-硝基荧光素，之后利用Na2S和Na2SO3的组合将其硝基还原为氨基，最后顺序加入CS2和氯化铜以完成氨基向异硫氰酸基团的转变，由此即制得亲特异选择性的荧光素探针5-异硫氰酸荧光素。本申请的制备方法反应平稳，操作简单，产率高。
在所述步骤(1)中，为了提高5-硝基荧光素的转化率，采用了硝基环己烷和氯化钴来抑制6-硝基荧光素的产生。这其中，钴元素能够同时与硝基环己烷和4-硝基邻苯二甲酸酐的硝基配位，从而在4-硝基邻苯二甲酸酐的硝基处络合有硝基环己烷分子，极大地增加了生成6-硝基荧光素的空间位阻；与此同时，所述配位还影响了4-硝基邻苯二甲酸酐的电子密度分布，促使反应向更易于生成5-硝基荧光素的方向进行，这两方面因素的叠加，极大地提高了反应的定向选择性，使得产物中6-硝基荧光素的转化率降低至3.0％以下，由此可以不用去除6-硝基荧光素而直接投入下一步反应。此外，钴元素还具有提高氯化锌的催化活性的作用，促使反应在更温和的条件下进行。反应结束后，采用盐酸回流即可脱除5-硝基荧光素上的络合物，从而得到产物。
优选地，所述步骤(1)中加热熔融的温度为115～125℃。通过加热熔融，可以使得反应物充分混合，这有利于反应正常、平稳地进行。
优选地，所述步骤(1)中，盐酸的浓度为0.7～0.8mol/L，用量为每克4-硝基邻苯二甲酸酐对应10～12mL。通过加入盐酸，有利于除去反应后体系中存在的各种杂质。
优选地，所述步骤(1)中，滤饼采用50～60℃的水洗涤。采用温度较高的水洗涤，更有利于洗至中性，并进一步脱除其它杂质。
优选地，所述步骤(1)中，反应在搅拌速度为40～60rpm的搅拌下全程进行。由于反应物比较粘稠，因此需要在不停地搅拌下进行。
此外，所述步骤(1)中，所述干燥在80～90℃下进行2～3小时。
在所述步骤(2)中，通过采用特定配比的Na2S和Na2SO3的组合，能够将5-硝基荧光素的硝基还原为氨基，反应温和平稳，转化率高，副产物少。
优选地，所述步骤(2)中，滤饼采用0～5℃的水洗涤。通过低温水洗涤，既可以除去残留的醋酸，又有利于减少产物损失。
此外，所述步骤(2)中，所述干燥在60～70℃下进行3～4小时。
在所述步骤(3)中，5-硝基荧光素首先在三乙胺的存在下与CS2反应生成荧光素-5-二硫胺甲酸盐，之后在氯化铜的作用下进一步反应得到最终产物5-异硫氰酸荧光素。
优选地，所述步骤(3)中，所述减压蒸馏在70～80℃下进行。通过减压蒸馏，能够将体系中的各种低沸点物质蒸除。
此外，所述步骤(3)中，所述干燥在60～70℃下进行3～4小时。
优选地，所述步骤(3)中，所述柱色谱纯化的洗脱剂为甲醇:丙酮＝10:1。通过柱色谱纯化，从而能够获得纯度很高的特异选择性的荧光素探针5-异硫氰酸荧光素。
[有益效果]
综上所述，本申请具有以下有益效果：
根据本申请的特异选择性的荧光素探针5-异硫氰酸荧光素的制备方法能够充分降低6-异硫氰酸荧光素的生成，极大地提高了5-异硫氰酸荧光素的转化率和产率，并且条件温和、操作简便，应用前景广阔。
具体实施方式
为了使本领域技术人员能够更清楚地理解本申请，以下结合实施例对本申请作进一步详细说明，但应当理解的是，以下实施例仅为本申请的优选实施方式，而本申请要求保护的范围并不仅局限于此。
物料来源
4-硝基邻苯二甲酸酐、硝基环己烷、，购自北京百灵威科技有限公司；
间苯二酚、氯化钴、氯化锌、Na2S、Na2SO3、CS2、氯化铜，购自上海阿拉丁生化科技股份有限公司；
冰醋酸、盐酸、甲醇、丙酮、三乙胺，购自国药集团。
<实施例>
Figure BDA0002921575190000051
实施例1
采用以下根据本申请的制备方法来制备特异选择性的荧光素探针5-异硫氰酸荧光素：
(1)在搅拌速度为40rpm的持续搅拌下，将100g的4-硝基邻苯二甲酸酐、118g的间苯二酚、55g的硝基环己烷和20g的无水氯化钴混合，在125℃下加热熔融，向其中加入100g的氯化锌，在145℃下反应4小时，之后加入1000mL且浓度为0.75mol/L的盐酸，加热回流40分钟，过滤，滤饼用55℃的水洗涤至中性，在85℃下干燥2.5小时，得到192.59g的产物(其中包含91.52％的5-硝基荧光素和2.37％的6-硝基荧光素)；
(2)将Na2S和Na2SO3溶于水中制得浓度分别为0.80g/mL和0.15g/mL的还原溶液，将步骤(1)的所得物与1160mL的所述还原溶液混合，在75℃下反应8.5小时，之后滴加冰醋酸至沉淀完全，过滤，滤饼用0℃的水洗涤，在70℃下干燥3.5小时，得到154.78g的产物；
(3)将体积比为1:0.6的甲醇和三乙胺混合得到混合溶剂，将1240mL的所述混合溶剂与步骤(2)的所得物混合，在0℃下滴加54.17g的CS2，室温反应7.5小时，之后向其中滴加1700mL且浓度为0.26g/mL的氯化铜水溶液，滴完继续反应2小时，之后用盐酸调节体系pH值为1，在75℃下减压蒸馏，残留物用水分散洗涤，在65℃下干燥3.5小时，柱色谱纯化(甲醇:丙酮＝10:1)，由此获得161.25g的最终产物5-异硫氰酸荧光素(纯度99.83％，总收率79.83％)。
实施例2
采用以下根据本申请的制备方法来制备特异选择性的荧光素探针5-异硫氰酸荧光素：
(1)在搅拌速度为50rpm的持续搅拌下，将100g的4-硝基邻苯二甲酸酐、120g的间苯二酚、52g的硝基环己烷和27g的无水氯化钴混合，在115℃下加热熔融，向其中加入100g的氯化锌，在135℃下反应5小时，之后加入1200mL且浓度为0.75mol/L的盐酸，加热回流45分钟，过滤，滤饼用50℃的水洗涤至中性，在80℃下干燥2小时，得到193.45g的产物(其中包含92.38％的5-硝基荧光素和2.15％的6-硝基荧光素)；
(2)将Na2S和Na2SO3溶于水中制得浓度分别为0.60g/mL和0.20g/mL的还原溶液，将步骤(1)的所得物与1350mL的所述还原溶液混合，在80℃下反应8小时，之后滴加冰醋酸至沉淀完全，过滤，滤饼用5℃的水洗涤，在60℃下干燥3小时，得到160.26g的产物；
(3)将体积比为1:0.7的甲醇和三乙胺混合得到混合溶剂，将1130mL的所述混合溶剂与步骤(2)的所得物混合，在3℃下滴加40.06g的CS2，室温反应8小时，之后向其中滴加1610mL且浓度为0.28g/mL的氯化铜水溶液，滴完继续反应2.5小时，之后用盐酸调节体系pH值为2，在70℃下减压蒸馏，残留物用水分散洗涤，在70℃下干燥3小时，柱色谱纯化(甲醇:丙酮＝10:1)，由此获得167.74g的最终产物5-异硫氰酸荧光素(纯度99.94％，总收率83.14％)。
实施例3
采用以下根据本申请的制备方法来制备特异选择性的荧光素探针5-异硫氰酸荧光素：
(1)在搅拌速度为60rpm的持续搅拌下，将100g的4-硝基邻苯二甲酸酐、118g的间苯二酚、50g的硝基环己烷和25g的无水氯化钴混合，在120℃下加热熔融，向其中加入110g的氯化锌，在140℃下反应4.5小时，之后加入1000mL且浓度为0.7mol/L的盐酸，加热回流30分钟，过滤，滤饼用55℃的水洗涤至中性，在90℃下干燥3小时，得到193.04g的产物(其中包含90.89％的5-硝基荧光素和2.89％的6-硝基荧光素)；
(2)将Na2S和Na2SO3溶于水中制得浓度分别为0.80g/mL和0.20g/mL的还原溶液，将步骤(1)的所得物与1160mL的所述还原溶液混合，在70℃下反应9小时，之后滴加冰醋酸至沉淀完全，过滤，滤饼用3℃的水洗涤，在70℃下干燥4小时，得到155.81g的产物；
(3)将体积比为1:0.5的甲醇和三乙胺混合得到混合溶剂，将1550mL的所述混合溶剂与步骤(2)的所得物混合，在5℃下滴加54.53g的CS2，室温反应7小时，之后向其中滴加1860mL且浓度为0.24g/mL的氯化铜水溶液，滴完继续反应2.5小时，之后用盐酸调节体系pH值为2，在80℃下减压蒸馏，残留物用水分散洗涤，在60℃下干燥4小时，柱色谱纯化(甲醇:丙酮＝10:1)，由此获得160.44g的最终产物5-异硫氰酸荧光素(纯度99.81％，总收率79.42％)。
实施例4
采用以下根据本申请的制备方法来制备特异选择性的荧光素探针5-异硫氰酸荧光素：
(1)在搅拌速度为60rpm的持续搅拌下，将100g的4-硝基邻苯二甲酸酐、119g的间苯二酚、53g的硝基环己烷和27g的无水氯化钴混合，在115℃下加热熔融，向其中加入105g的氯化锌，在145℃下反应5小时，之后加入1200mL且浓度为0.7mol/L的盐酸，加热回流40分钟，过滤，滤饼用55℃的水洗涤至中性，在85℃下干燥2.5小时，得到191.11g的产物(其中包含94.73％的5-硝基荧光素和1.64％的6-硝基荧光素)；
(2)将Na2S和Na2SO3溶于水中制得浓度分别为0.60g/mL和0.15g/mL的还原溶液，将步骤(1)的所得物与1330mL的所述还原溶液混合，在75℃下反应9小时，之后滴加冰醋酸至沉淀完全，过滤，滤饼用3℃的水洗涤，在60℃下干燥4小时，得到163.02g的产物；
(3)将体积比为1:0.6的甲醇和三乙胺混合得到混合溶剂，将1470mL的所述混合溶剂与步骤(2)的所得物混合，在5℃下滴加48.91g的CS2，室温反应8小时，之后向其中滴加1950mL且浓度为0.26g/mL的氯化铜水溶液，滴完继续反应2小时，之后用盐酸调节体系pH值为2，在75℃下减压蒸馏，残留物用水分散洗涤，在70℃下干燥4小时，柱色谱纯化(甲醇:丙酮＝10:1)，由此获得168.79g的最终产物5-异硫氰酸荧光素(纯度99.85％，总收率83.59％)。
实施例5
采用以下根据本申请的制备方法来制备特异选择性的荧光素探针5-异硫氰酸荧光素：
(1)在搅拌速度为40rpm的持续搅拌下，将100g的4-硝基邻苯二甲酸酐、120g的间苯二酚、50g的硝基环己烷和20g的无水氯化钴混合，在125℃下加热熔融，向其中加入110g的氯化锌，在135℃下反应4小时，之后加入1100mL且浓度为0.8mol/L的盐酸，加热回流45分钟，过滤，滤饼用55℃的水洗涤至中性，在90℃下干燥2小时，得到190.60g的产物(其中包含88.95％的5-硝基荧光素和2.93％的6-硝基荧光素)；
(2)将Na2S和Na2SO3溶于水中制得浓度分别为0.70g/mL和0.17g/mL的还原溶液，将步骤(1)的所得物与1150mL的所述还原溶液混合，在80℃下反应9小时，之后滴加冰醋酸至沉淀完全，过滤，滤饼用5℃的水洗涤，在70℃下干燥3小时，得到150.98g的产物；
(3)将体积比为1:0.7的甲醇和三乙胺混合得到混合溶剂，将1500mL的所述混合溶剂与步骤(2)的所得物混合，在3℃下滴加45.29g的CS2，室温反应7小时，之后向其中滴加1510mL且浓度为0.28g/mL的氯化铜水溶液，滴完继续反应2.5小时，之后用盐酸调节体系pH值为1，在80℃下减压蒸馏，残留物用水分散洗涤，在60℃下干燥3小时，柱色谱纯化(甲醇:丙酮＝10:1)，由此获得152.93g的最终产物5-异硫氰酸荧光素(纯度99.96％，总收率75.82％)。
实施例6
采用以下根据本申请的制备方法来制备特异选择性的荧光素探针5-异硫氰酸荧光素：
(1)在搅拌速度为50rpm的持续搅拌下，将100g的4-硝基邻苯二甲酸酐、119g的间苯二酚、55g的硝基环己烷和23g的无水氯化钴混合，在120℃下加热熔融，向其中加入110g的氯化锌，在145℃下反应4.5小时，之后加入1100mL且浓度为0.75mol/L的盐酸，加热回流30分钟，过滤，滤饼用60℃的水洗涤至中性，在80℃下干燥3小时，得到191.91g的产物(其中包含92.91％的5-硝基荧光素和2.08％的6-硝基荧光素)；
(2)将Na2S和Na2SO3溶于水中制得浓度分别为0.70g/mL和0.20g/mL的还原溶液，将步骤(1)的所得物与1340mL的所述还原溶液混合，在70℃下反应8小时，之后滴加冰醋酸至沉淀完全，过滤，滤饼用0℃的水洗涤，在65℃下干燥3.5小时，得到160.46g的产物；
(3)将体积比为1:0.5的甲醇和三乙胺混合得到混合溶剂，将1130mL的所述混合溶剂与步骤(2)的所得物混合，在0℃下滴加40.11g的CS2，室温反应7.5小时，之后向其中滴加1760mL且浓度为0.24g/mL的氯化铜水溶液，滴完继续反应2.5小时，之后用盐酸调节体系pH值为1.5，在70℃下减压蒸馏，残留物用水分散洗涤，在65℃下干燥3小时，柱色谱纯化(甲醇:丙酮＝10:1)，由此获得163.93g的最终产物5-异硫氰酸荧光素(纯度99.89％，总收率81.21％)。
对比实施例1
除了在步骤(1)中不采用硝基环己烷和无水氯化钴之外，以与实施例1相同的方式在步骤(1)中得到187.85g的产物(其中包含48.32％的5-硝基荧光素和42.17％的6-硝基荧光素)，最终制得了86.96g的最终产物5-异硫氰酸荧光素(纯度99.96％，收率43.08％)和79.38g的最终产物6-异硫氰酸荧光素(纯度99.89％，收率39.32％)。
通过上述实施例1至6和对比实施例1可以看出，本申请通过优化各个步骤的反应和后处理条件，特别是改进了步骤(1)，从而大大提高了5-硝基荧光素的选择性，并且还获得了5-异硫氰酸荧光素的较好的收率；相比之下，对比实施例1对5-硝基荧光素和6-硝基荧光素的选择性很差，从而无法获得较高的5-异硫氰酸荧光素的收率。
本具体实施例仅仅是对本申请的解释，其并不是对本申请的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本申请的权利要求范围内都受到专利法的保护。

Claims (10)

1.一种特异选择性的荧光素探针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
Figure FDA0003576163980000011
(1)将重量比为1:(1.18～1.20):(0.50～0.55):(0.20～0.27)的4-硝基邻苯二甲酸酐、间苯二酚、硝基环己烷和无水氯化钴混合，加热熔融，向其中加入重量为4-硝基邻苯二甲酸酐重量的1.00～1.10倍的氯化锌，在135～145℃下反应4～5小时，之后加入盐酸加热回流30～45分钟，过滤，滤饼用水洗涤至中性，干燥；
(2)将Na2S和Na2SO3溶于水中制得浓度分别为0.6～0.8g/mL和0.15～0.20g/mL的还原溶液，以每克步骤(1)的所得物对应6～7mL所述还原溶液将二者混合，在70～80℃下反应8～9小时，之后滴加冰醋酸至沉淀完全，过滤，滤饼用水洗涤，干燥；
(3)将体积比为1:(0.5～0.7)的甲醇和三乙胺混合得到混合溶剂，以每克步骤(2)的所得物对应7～10mL所述混合溶剂的量将二者混合，在0～5℃下滴加重量为所述步骤(2)的所得物重量的0.25～0.35倍的CS2，室温反应7～8小时，之后向其中滴加浓度为0.6～0.8g/mL的氯化铜水溶液，滴完继续反应2～2.5小时，其中每克步骤(2)的所得物对应10～12mL所述氯化铜水溶液，之后用盐酸调节体系pH值为1～2，减压蒸馏，残留物用水分散洗涤，干燥，柱色谱纯化。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中加热熔融的温度为115～125℃。
3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，盐酸的浓度为0.7～0.8mol/L，用量为每克4-硝基邻苯二甲酸酐对应10～12mL。
4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，滤饼采用50～60℃的水洗涤。
5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，反应在搅拌速度为40～60rpm的搅拌下全程进行。
6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中，所述干燥在80～90℃下进行2～3小时。
7.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，滤饼采用0～5℃的水洗涤。
8.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中，所述干燥在60～70℃下进行3～4小时，以及所述减压蒸馏在70～80℃下进行。
9.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中，所述干燥在60～70℃下进行3～4小时。
10.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(3)中，所述柱色谱纯化的洗脱剂为甲醇:丙酮＝10:1。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Amol S. Chaudhari，等.Intrinsic catalytic activity of Brønsted acid ionic liquids for the synthesis of triphenylmethane and phthalein under microwave irradiation.《RSC Advances》.2012,第2卷第12112-12117页. *
Fluorescent Human EP3 Receptor Antagonists;Miriam Tomasch，等;《ACS Med. Chem. Lett.》;20120808;第3卷;第774-779页 *
High performance liquid chromatography of fluorescein isothiocyanate isomers and intermediate products;Muramoto, Koji，等;《Analytical Sciences》;19851231;第1卷(第5期);第447-450页 *
Synthesis and fluorescence properties of six fluorescein-nitroxide radical hybrid-compounds;Shingo Sato，等;《Spectrochimica Acta Part A: Molecular and Biomolecular Spectroscopy》;20160616;第169卷;第66-71页 *
Unstable Intermediates Part 114.-Solid-state Electron Spin Resonance Study of Pentacyanocobalt Phenyl Nitroxide;M. C. R. SYMOS,等;《Journal of the Chemical Society，Faraday Transactions 2：Molecular and Chemical Physics》;19720101;第1265-1273页 *

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