CN111096985A - 血压与血糖调降组合物与一叶草萃取物的用途 - Google Patents

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Abstract

目前用于治疗高血压的药物主要可分为利尿剂、交感神经阻断剂、血管收缩素受体阻断剂、以及血管收缩素转化酵素抑制剂，然而医疗报告指出上述各种高血压治疗药物具有各自的临床缺陷。本发明以获取自一叶草(Ophioglossum vulgatum)的酒水萃取物作为主要的功效物质，制成一种组合物。并且，多组动物实验的数据证实，成人经口服包含成人剂量仅需3mg/60kg的该酒水萃取物的该组合物30分钟以内，立即显示血压调降的功效。同时，动物实验也同步证实，成人经口服包含成人剂量仅需54.6mg/60kg的该酒水萃取物的该组合物30分钟以内，立即显示血糖调降的功效。

Description

血压与血糖调降组合物与一叶草萃取物的用途
技术领域
本发明是关于生物技术的技术领域，尤指一种血压与血糖调降组合物与一种一叶草萃取物于制备血压与血糖调降组合物的用途。
背景技术
血压指的是血液在血管内流动时对血管壁所形成的压力，因此，当心脏送出的血液量增多或是血液循环的阻力增加时，即会造成血压的升高。血液循环的阻力增加的主要原因在于血管壁上形成有斑块(plaque)，如脂肪或胆固醇；此外，过度紧张的精神状态亦会导致血压升高，其中，精神紧张会刺激大脑皮质并同时促进交感神经的活化，而活化的交感神经也会使得心跳加速以及心脏收缩力增加，导致心脏送出的血量增多，进而引起血压的升高。
高血压成为现代人常见的慢性疾病之一，其诊断标准为收缩血压大于140mmHg或舒张血压大于90mmHg，且其引起的病征为头晕、头痛、心悸、呼吸困难…等。人体若长期处于高血压的情况下，将会引起许多的并发症，例如：中风、冠状动脉心脏病、肾功能失调等。目前用于治疗高血压的药物主要可分为利尿剂、交感神经阻断剂、血管收缩素受体阻断剂、以及血管收缩素转化酵素抑制剂，其中，医疗报告指出上述各种高血压治疗药物具有各自的缺陷。
首先，利尿剂是通过抑制钠离子再吸收的方式达到防止人体水分滞留进而完成降低血压的目的；然而，由于利尿剂抑制钠离子再吸收的同时也抑制了钾离子的吸收，使得长期服用利尿剂的高血压患者会并发低钾血症。再者，交感神经阻断剂则是通过阻断交感神经的受体而减低交感神经的受体接收活化交感神经的分子的机率，达到降低心跳次数与血压的目的；然而，长期服用交感神经阻断剂的高血压患者会并发心跳过慢、姿态性低血压及阳痿等副作用。另一方面，血管收缩素受体阻断剂与血管收缩素转化酵素抑制剂都是用以防止活化肾酵素-血管收缩素系统(Renin–angiotensin system,RAS)过度活化，达到降低血压的目的；然而，长期使用这两种药物会引发肾衰竭。
经由上述说明，可以得知目前用于降低血压的药物皆会对人体产生副作用或者并发症；有鉴于此，本案发明人极力加以研究发明，终于研发完成本发明的一种血压与血糖调降组合物与一种一叶草萃取物于制备血压与血糖调降组合物的用途。
发明内容
目前用于治疗高血压的药物主要可分为利尿剂、交感神经阻断剂、血管收缩素受体阻断剂、以及血管收缩素转化酵素抑制剂，然而医疗报告指出上述各种高血压治疗药物具有各自的临床缺陷。本发明的主要目的在于提出一种降血压组合物与一种一叶草萃取物于制备血压与血糖调降的用途。特别地，本发明以获取自一叶草(Ophioglossum vulgatum)的酒水萃取物作为主要的功效物质，制成一种组合物。并且，多组动物实验的数据证实，成人经口服包含成人剂量仅需3mg/60kg的该酒水萃取物的该组合物30分钟以内，立即显示显著的血压调降功效，但对正常血压者的血压无显著影响。同时，动物实验也同步证实，成人经口服包含成人剂量仅需54.6mg/60kg的该酒水萃取物的该组合物30分钟以内，立即显示持续的血糖调降功效。
为了达成上述本发明的主要目的，本案发明人提供所述血压与血糖调降的一实施例，其包括：
一亲脂性载体；以及
一功效物质，为获取自一叶草(Ophioglossum vulgatum)的一萃取物；其中，该亲脂性载体仅需携载3mg/60kg的该功效物质；其中，该功效物质与该亲脂性载体之间具有一体积重量比值(v/w)，且该体积重量比值介于2至10之间。
在上述血压与血糖调降的实施例中，该亲脂性载体为一可食用油，且该可食用油例如是：玉米油、菜籽油、向日葵油、花生油、大豆油、棕榈油、椰子油、葡萄籽油、或其它动物性油脂。
同时，为了达成上述本发明的主要目的，本案发明人提供所述一叶草萃取物于制备血压与血糖调降的用途的一实施例，其中，所述一叶草萃取物为获取自一叶草(Ophioglossum vulgatum)的一萃取物，且成人经口服包含成人剂量仅需3mg/60kg的该萃取物的所述血压与血糖调降30分钟以内，显示血压调降的功效，且对正常血压者无显著影响。并且，成人经口服包含成人剂量至少54.6mg/60kg的该酒水萃取物的该血压与血糖调降30分钟以内，立即显示血糖调降的功效。
在上述的用途实施例中，获取自一叶草的该萃取物利用下列任一种萃取制程制得：水萃制程、酒萃制程、超临界二氧化碳萃取制程、或流体低温萃取。
附图说明
图1显示雄性SD大鼠与雌性SD大鼠的血压量测资料的统计直方图；
图2所有实验动物的血压量测资料的统计直方图；
图3显示所有SHR大鼠的血压量测资料的统计直方图；
图4显示雄性P1-HT SD大鼠与雌性P1-HT SD大鼠的血压量测资料的统计直方图；
图5显示所有实验动物的血压量测数据的统计直方图；
图6显示时间-血糖浓度的数据曲线；
图7显示血糖变化曲线下面积(Area Under Curve,AUC)的统计直方图；
图8显示时间-血糖浓度的数据曲线；以及
图9显示血糖变化曲线下面积(Area Under Curve,AUC)的统计直方图。
图中主要符号说明：
具体实施方式
为了能够更清楚地描述本发明所提出的一种血压与血糖调降组合物与一种一叶草萃取物于制备降血压与血糖调降组合物的用途，以下将配合图式，详尽说明本发明的较佳实施例。
开始说明本发明的降血压组合物与一叶草萃取物于制备血压与血糖调降组合物的用途之前，必须先介绍一叶草。顾名思义，一叶草只拥有一片叶子。一叶草又称瓶尔小草，生于林下或山坡阴凉稍潮湿的土中，主要产于湖北、四川、陕西南部、贵州、云南、西藏、及台湾。生林下，垂直分布高达3000米。欧洲、亚洲、美洲等地广泛分布。一叶草可用于入药，主治喉痛、口腔疾患、小儿肺炎、脘腹胀痛、毒蛇咬伤、疗疮肿毒、急性结膜炎、角膜云翳、与眼睑缘炎。
本发明利用酒水萃取一叶草(Ophioglossum vulgatum)而获得一叶草的酒水萃取物。进一步地，以一叶草的酒水萃取物作为一功效物质，并使用一亲脂性载体携载该功效物质以获得本发明的一种血压与血糖调降组合物。例如，以玉米油溶解所述一叶草的酒水萃取物。其中，该亲脂性载体仅需携载3mg/60kg的该功效物质，且该功效物质与该亲脂性载体之间具有范围介于2至10之间的一体积重量比值(v/w)。必须补充说明的是，除了玉米油之外，所述亲脂性载体也可以是其它可食用油，像是菜籽油、向日葵油、花生油、大豆油、棕榈油、椰子油、葡萄籽油、或其它动物性油脂。
制造方法
本发明通过包括以下制程步骤获得所述血压与血糖调降组合物：
步骤(1)：备好一叶草；
步骤(2)：将一叶草清洗后放在阴凉处风干凉干；
步骤(3)：将1公斤的一叶草(全株)放入盛有5公斤乙醇(75％,v/v)的不锈钢蒸馏桶中，接着将该不锈钢蒸馏桶加热至25-37℃；
步骤(4)：以乙醇(75％,v/v)萃取一叶草120分钟之后，经冷却后收集一叶草的酒水萃取物；以及
步骤(5)：将1.2mg/kg*body weight的一叶草的酒水萃取物溶于0.2mL的玉米油之中以作为所述血压与血糖调降组合物。
基于上述制造方法示范性地利用酒水处理一叶草的方式获得所述一叶草的酒水萃取物，即涵盖一叶草植株所含的亲水性及亲脂性成分。然而，熟悉纯物质、特定功效成分、或天然有机化合物的纯化技术的生技工程师应该都知道，水萃取或酒萃法也经常用于自植物或中草药之中萃取出不特定极性的功效成分。简单地说，在实务上也可利用酒水处理一叶草以获得一叶草的酒水萃取物(water-alcohol extract)。另一方面，也可以利用其他不同极性溶剂萃取制程、超临界二氧化碳萃取制程或流体低温萃取对一叶草进行萃取。当然，所获得的一叶草的酒水萃取物还可以进行进一步的加工，例如利用真空减压浓缩加工成膏状物；或者，也可以对一叶草的酒水萃取物进一步地执行一固体发酵加工或一液体发酵加工。
第一组验证实验
为了证实包含亲脂性载体与一叶草(Ophioglossum vulgatum)的酒水萃取物的组合物的确具调降血压的功效，发明人首先管喂SD大鼠本发明的降血压组合物，进以确认此组合物对于具正常血压表现的SD大鼠是否造成影响。第一组实验中，共选用6只雄性SD大鼠与5只雌性SD大鼠。开始实验前8小时移除饲料，并提供充足饮水。实验进行时，首先以5％气体麻醉剂(isoflurane)对SD大鼠进行诱导麻醉2分钟；接着，再以2％isoflurane持续麻醉SD大鼠直至完成第一组实验的所有程序。
实验动物于麻醉后被装设股动脉内装置的PE50导管，导管内充满含200单位肝素(heparin)的生理食盐水。实验过程中，通过血压转换器将血压讯号链接至多功能生理纪录仪(PowerLab 4ST)。值得特别说明的是，每只实验动物进行血压记录前均以水银血压计对血压转换器校准。喂食本发明的组合物之前，先以多功能生理纪录仪量测并记录所有SD大鼠的给药前血压状态，持续至少3分钟，以确认实验动物血压稳定状态。之后，将溶解于2mL玉米油之中的一叶草的酒水萃物(1.2mg/kg)管喂所有SD大鼠，接着再先以多功能生理纪录仪量测并持续记录所有SD大鼠的给药前、后血压状态。
图1显示雄性SD大鼠与雌性SD大鼠的血压量测资料的统计直方图，且图2显示所有实验动物的血压量测数据的统计直方图。并且，数值化的实验资料整理于下表(1)中。由实验数据可以得知，喂食一叶草的酒水萃物(1.2mg/kg)对具正常血压表现得SD大鼠并无显著的血压影响。
表(1)
Figure BDA0001822457120000061
第二组验证实验
在第二组实验中，选用自发性高血压品系的雄性SHR大鼠共5只。同样地，开始实验前8小时移除饲料，并提供充足饮水。实验进行时，首先以5％气体麻醉剂(isoflurane)对SHR大鼠进行诱导麻醉2分钟；接着，再以2％isoflurane持续麻醉SHR大鼠直至完成第一组实验的所有程序。此外，实验动物的血压量测与纪录是利用股动脉内装置的PE50导管、血压转换器、与多功能生理纪录仪(PowerLab 4ST)完成。
同样地，喂食本发明的组合物之前，先以多功能生理纪录仪量测并记录所有SHR大鼠的给药前血压状态，持续至少3分钟，以确认实验动物血压稳定状态。之后，将溶解于2mL玉米油之中的一叶草的酒水萃物(1.2mg/kg)管喂所有SHR大鼠，接着再先以多功能生理纪录仪量测并记录所有SHR大鼠的给药后血压状态。图3显示所有SHR大鼠的血压量测资料的统计直方图。并且，数值化的实验资料整理于下表(2)中。由实验数据可以得知，喂食一叶草的酒水萃物(1.2mg/kg)对于自发性高血压品系SHR大鼠显示出非常显著的调降血压功效。
表(2)
Figure BDA0001822457120000071
第三组验证实验
在第三组实验中，选用自发性第一型高血压品系的P1-HT SD大鼠共14只，包括9只雄性大鼠与5只雌性大鼠。同样地，开始实验前8小时移除饲料，并提供充足饮水。实验进行时，首先以5％气体麻醉剂(isoflurane)对P1-HT SD大鼠进行诱导麻醉2分钟；接着，再以2％isoflurane持续麻醉P1-HT SD大鼠直至完成第一组实验的所有程序。此外，实验动物的血压量测与纪录是利用股动脉内装置的PE50导管、血压转换器、与多功能生理纪录仪(PowerLab 4ST)完成。
喂食本发明的组合物之前，先以多功能生理纪录仪量测并记录所有P1-HT SD大鼠的给药前血压状态，持续至少3分钟，以确认实验动物血压稳定状态。之后，将溶解于2mL玉米油之中的一叶草的酒水萃物(1.2mg/kg)管喂所有P1-HT SD大鼠，接着再先以多功能生理纪录仪量测并记录所有P1-HT SD大鼠的给药后血压状态。图4显示雄性P1-HT SD大鼠与雌性P1-HT SD大鼠的血压量测资料的统计直方图，且图5显示所有实验动物的血压量测数据的统计直方图。并且，数值化的实验资料整理于下表(3)中。由实验数据可以得知，喂食一叶草的酒水萃物(1.2mg/kg)对于自发性高血压品系P1-HT SD大鼠显示出非常显著的调降血压功效。且在降低为1/4剂量的实验结果显示，喂食一叶草的酒水萃物(0.3mg/kg)对于自发性高血压品系P1-HT SD大鼠也有调降血压的功效。
表(3)
Figure BDA0001822457120000081
显然地，可由三组实验数据得知，包含亲脂性载体(0.2mL)与一叶草(Ophioglossum vulgatum)的酒水萃取物(1.2mg/kg*body weight)的组合物的确具备降血压功效。因此，基于动物实验的支持，生技工程师可以根据美国食品药物管理局所公告的实验初期估算方法(Estimating the maximum safe starting dose in initial clinicaltrials for therapeutics in adult healthy volunteers)进行试验样品的成人剂量与大鼠剂量的换算。计算式表示如下所示：大鼠每公斤体重的摄取剂量＝(人体建议摄取量÷60kg)×6.3。经换算后获得成人有效剂量为12mg/60kg。然而，考虑到实务上剂量减量的问题，经完成相关的减量实验后，在此建议成人有效剂量为3mg/60kg(为原剂量的1/4)。换句话说，基于动物实验的支持，生技工程师可以自行推算的是，成人经口服本发明的血压与血糖调降组合物30分钟以内，显示血压调降的功效。同时，生技工程师也可以将包括亲脂性载体与一叶草的酒水萃取物的该血压与血糖调降组合物进一步地与任一种医药学上可接收的辅剂加以组合，由此方式将该血压与血糖调降组合物加工成不特定剂型，例如:口服粉剂、口服液、口服胶囊、口服锭、或口服丸。
第四组验证实验
为了证实包含亲脂性载体与一叶草(Ophioglossum vulgatum)的酒水萃取物的组合物同时具调控血糖的功效，发明人继续地完成第四组实验。本案发明人选用6周龄的ICR雄性小鼠以完成相关验证实验。请参阅下表(4)，动物实验的组别包含：葡萄糖溶液(Groupglucose)、腹腔内胰岛素组(Group IP insulin)、降血糖药组(Group metformin)、与一叶草组(Group一叶草)。
表(4)
Figure BDA0001822457120000091
开始实验前先以60％果糖水与高油饲料喂食实验动物10周，接着进行口服葡萄糖耐受性测试，以确认实验动物已经被诱发第二型糖尿病(Diabetes mellitus type 2,T2DM)。实验进行时，先让ICR雄性小鼠断食10小时。接着以血糖机量测ICR雄性小鼠的基础血糖数值。之后，在灌食各组小鼠对应的试验样品之后，每30分钟进行一次血糖测量，重复三次。必须特别说明的是，若在第120分钟所测得的血糖值高于160-180mg/dL，表示实验动物已经成功被诱发第二型糖尿病。
完成口服葡萄糖耐量试验(oral glucose tolerance test,OGTT)之后，绘制如图6所示的时间-血糖浓度的数据曲线，以及图7所示血糖变化曲线下面积(Area UnderCurve,AUC)的统计直方图。特别说明的是，Metformin是临床上普遍使用的双胍类口服降血糖药，其主要由降低肝脏制造葡萄糖的量、减少肠道吸收葡萄糖、及增加人体对糖分的利用，来达到降血糖的作用。并且，实验数据指出，与glucose组的小鼠比较，Metformin组别、IP insulin组、与一叶草组的小鼠的血糖值显著下降。换句话说，基于动物实验的支持，生技工程师可以自行推算的是，成人经口服本发明的血压与血糖调降组合物30分钟之后，显示持续血糖调降的功效。
表(5)
Figure BDA0001822457120000101
完成口服淀粉耐量试验(oral starch tolerance test,OSTT)之后，绘制如图8所示的时间-血糖浓度的数据曲线，以及图9所示血糖变化曲线下面积(Area Under Curve,AUC)的统计直方图。特别说明的是，Acarbose属于α-glucosidase抑制剂，主要作用为抑制肠道中的双醣及多醣分解为单醣，故可延迟肠道中糖分的吸收，主要用于控制饭后血糖。并且，实验数据指出，与Starch组的小鼠比较，Acarbose组别与一叶草组的小鼠的血糖值显著下降。换句话说，基于动物实验的支持，生技工程师可以自行推算的是，成人经口服本发明的血压与血糖调降组合物30分钟以内，显示持续血糖调降的功效。
因此，基于动物实验的支持，生技工程师可以根据美国食品药物管理局所公告的实验初期估算方法进行试验样品的成人剂量与小鼠剂量的换算。并且，经换算后获得成人有效剂量为54.6mg/60kg。考虑到实务上剂量减量的问题，经完成相关的减量实验之后，在此建议成人有效剂量为13.65mg/60kg(为原剂量的1/4)。换句话说，基于动物实验的支持，生技工程师可以自行推算的是，成人经口服本发明的血压与血糖调降组合物30分钟以内，显示持续血糖调降的功效。
必须加以强调的是，上述的详细说明是针对本发明可行实施例的具体说明，惟该实施例并非用以限制本发明的专利范围，凡未脱离本发明技艺精神所为的等效实施或变更，均应包含于本案的专利范围中。

Claims (14)

1.一种血压与血糖调降组合物，包括：
一功效物质，为获取自一叶草(Ophioglossum vulgatum)的一萃取物；以及
一可食性载体，用以携载该功效物质，可将该功效物质传递进入人体内；其中，该亲脂性载体携载至少3mg/60kg的该功效物质。
2.如权利要求1所述的血压与血糖调降组合物，其中，该萃取物为利用萃取制程自所述一叶草的植株或细胞中所获得的一亲水性萃取物或一亲脂性萃取物。
3.如权利要求1所述的血压与血糖调降组合物，其中，该萃取物利用下列任一种萃取制程制得：水萃制程、酒萃制程、超临界二氧化碳萃取制程、流体低温萃取制程、或极性溶剂萃取制程。
4.如权利要求1所述的血压与血糖调降组合物，其中，该可食性载体可为下列任一者：玉米油、菜籽油、向日葵油、花生油、大豆油、棕榈油、椰子油、葡萄籽油、或动物性油。
5.如权利要求1所述的血压与血糖调降组合物，其中，该可食性载体为一可食性辅剂。
6.如权利要求1所述的血压与血糖调降组合物，其中，可对该萃取物进一步地执行一真空减压浓缩加工、一固体发酵加工或一液体发酵加工。
7.如权利要求1所述的血压与血糖调降组合物，其中，所述血压与血糖调降组合物进一步包含医药学上可接收的辅剂，进而被加工成一口服剂型或有助于将该功效物质传递进入体内的一非口服剂型。
8.如权利要求1所述的血压与血糖调降组合物，其中，成人经口服所述血压与血糖调降组合物30分钟以内，显示血压调降的功效。
9.如权利要求1所述的血压与血糖调降组合物，其中，成人经口服所述血压与血糖调降组合物30分钟以内，显示血糖调降的功效。
10.一种一叶草萃取物于制备血压与血糖调降组合物的用途，其中，所述一叶草萃取物为获取自一叶草(Ophioglossum vulgatum)的一萃取物，且成人经口服包含成人剂量至少3mg/60kg的该萃取物的所述血压与血糖调降30分钟以内，显示血压调降的功效。
11.如权利要求10所述的用途，其中，该成人经口服包含成人剂量至少54.6mg/60kg的该萃取物的所述血压与血糖调降30分钟以内，显示血糖调降的功效。
12.如权利要求10所述的用途，其中，该萃取物利用下列任一种萃取制程制得：水萃制程、酒萃制程、超临界二氧化碳萃取制程、流体低温萃取制程、或极性溶剂萃取制程。
13.如权利要求10所述的用途，其中，可对该萃取物进一步地执行一真空减压浓缩加工、一固体发酵加工或一液体发酵加工。
14.如权利要求10所述的用途，其中，所述血压与血糖调降组合物进一步包含医药学上可接收的辅剂，进而被加工成一口服剂型或有助于将该功效物质传递进入体内的一非口服剂型。
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