CN111096973A - 下调环状基因表达的试剂在制备预防和/或治疗肺纤维化的药物中的应用及药物 - Google Patents

下调环状基因表达的试剂在制备预防和/或治疗肺纤维化的药物中的应用及药物 Download PDF

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Abstract

本发明涉及下调环状RNA‑0007535表达的试剂在制备预防和/或治疗肺纤维化的药物中的应用及下调环状RNA‑0007535表达的药物，属于药物制备技术领域。本发明提供了下调环状RNA‑0007535表达的试剂在制备预防和/或治疗肺纤维化的药物中的应用，所述环状RNA‑0007535的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。下调环状RNA‑0007535表达的试剂制备得到的药物能够预防和/或治疗肺纤维化，环状RNA‑0007535作为潜在的治疗肺纤维化疾病的分子和药物靶点，为探索肺纤维化发生发展中基因表达的调控机制和寻找干预手段/药物提供全新的视角和领域，具有很好的应用前景。

Description

下调环状基因表达的试剂在制备预防和/或治疗肺纤维化的 药物中的应用及药物
技术领域
本发明涉及药物制备技术领域，具体涉及下调环状RNA-0007535表达的试剂在制备预防和/或治疗肺纤维化的药物中的应用及下调环状 RNA-0007535表达的药物。
背景技术
特发性肺纤维化(idiopathic pulmonary fibrosis，IPF)是指在缺乏明确病因的情况下出现肺损伤，且渐进性加重，最终导致呼吸衰竭和死亡的肺间质性疾病。IPF的发病机制尚不明确，可能与遗传因素、环境暴露等相互作用引起肺泡上皮细胞损伤、肺异常修复导致的纤维增生有关。表现为咳嗽、不可逆性呼吸困难、肺功能下降及呼吸衰竭等，影像检查示支气管扩张的双侧网状混浊及胸膜下的蜂窝状改变，影像检查不典型者需行肺活检确定其病性。该病尚无确切疗效的药物，肺移植是唯一治疗终末期肺纤维化的重要手段，但费用高昂和供体来源困难，限制了其应用。利用基因组学技术对肺纤维化的分子机制和新靶点进行研究，已成为目前的研究热点。
目前关于非编码RNA参与调控肺纤维化疾病的研究主要集中在 miRNA、lncRNA领域，对于circRNA的研究则少之又少，如ciR-012091、 circZC3H4 RNA，而circRNA在特发性肺纤维化中的研究则接近空白。
发明内容
本发明的目的在于提供下调环状RNA-0007535表达的试剂在制备预防和/或治疗肺纤维化的药物中的应用及下调环状RNA-0007535表达的药物。下调环状RNA-0007535表达的药物能够预防和/或治疗肺纤维化。
本发明提供了下调环状RNA-0007535表达的试剂在制备预防和/或治疗肺纤维化的药物中的应用，所述环状RNA-0007535的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
本发明还提供了下调环状RNA-0007535表达的试剂在制备通过吸附 miR-630调控Hippo信号通路来预防和/或治疗肺纤维化的药物中的应用，所述环状RNA-0007535的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
本发明还提供了下调环状RNA-0007535表达的试剂在制备抑制肺成纤维细胞分化的药物中的应用，所述环状RNA-0007535的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
本发明还提供了下调环状RNA-0007535表达的试剂在制备抑制肺成纤维细胞激活的药物中的应用，所述环状RNA-0007535的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
本发明还提供了下调环状RNA-0007535表达的试剂在制备抑制肺成纤维细胞增殖的药物中的应用，所述环状RNA-0007535的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
本发明还提供了下调环状RNA-0007535表达的试剂在制备抑制肺成纤维细胞迁移的药物中的应用，所述环状RNA-0007535的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
本发明还提供了一种下调环状RNA-0007535表达的药物，所述环状 RNA-0007535的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述药物包括干扰双链 RNA，所述干扰双链RNA根据核苷酸如SEQ ID NO.2所示的序列合成，所述干扰双链RNA具有下列结构：
Figure BDA0002353620230000021
其中，每个“|”表示碱基配对。
本发明提供了下调环状RNA-0007535表达的试剂在制备预防和/或治疗肺纤维化的药物中的应用。本发明发现环状RNA-0007535能够通过吸附 miR-630调控Hippo信号通路，是潜在的治疗肺纤维化疾病的分子和药物靶点，为探索肺纤维化发生发展中基因表达的调控机制和寻找干预手段/药物提供全新的视角和领域，具有很好的应用前景。试验结果表明， circRNA-0007535与肺纤维化的发生密切相关；降低circRNA-0007535的表达可抑制MRC-5细胞转分化；MRC-5/siRNA-0007535组细胞的增殖迁移能力明显减弱；降低circRNA-0007535表达能够抑制成纤维细胞的激活和增殖迁移，可作为肺纤维化治疗的分子和药物靶点。
附图说明
图1为本发明提供的circRNA-0007535在体外模型及体内的表达水平。
其中；
图2为本发明提供的circRNA-0007535对肌成纤维细胞的活化和功能的影响；
图3为本发明提供的circRNA-0007535调控肌成纤维细胞的增殖和迁移能力；
图4为本发明提供的miR-630与circRNA-0007535的靶向关系；
图5为本发明提供的miR-630对肌成纤维细胞的活化和功能的影响；
图6为本发明提供的miR-630调控肌成纤维细胞的增殖和迁移能力；
图7为本发明提供的技术路线。
具体实施方式
本发明提供了下调环状RNA-0007535表达的试剂在制备预防和/或治疗肺纤维化的药物中的应用，所述环状RNA-0007535的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明所述环状RNA-0007535基因序列如下所示：
TTTCAGAAAGTGCTTTCTCTCTGTGGACATGAGGATTGGATTAGAG GAGTGGAATGGGCAGCCTTTGGTAGAGATCTTTTCCTAGCAAGCTGTT CACAAGATTGCCTGATAAGAATATGGAAGCTGTATATAAAGTCAACATCTTTAGAAACTCAGGATGACGATAACATAAGACTGAAAGAAAATACTTTT ACCATAGAAAATGAAAGTGTTAAAATAGCATTTGCTGTTACTCTGGAGA CAGTGCTAGCCGGTCATGAAAACTGGGTAAATGCAGTTCACTGGCAAC CTGTGTTTTACAAAGATGGTGTCCTACAGCAGCCAGTGAGATTATTATC TGCTTCCATGGATAAAACCATGATTCTCTGGGCTCCAGATGAAGAGTCA GGAGTTTGGCTAGAACAGGTTCGAGTAGGTGAAGTAGGTGGGAATACT TTGGGATTTTATGATTGCCAGTTCAATGAAGATGGCTCCATGATCATTGC TCATGCTTTCCACGGAGCGTTGCACCTTTGGAAACAGAATACAGTTAA CCCAAGAGAGTGGACTCCAGAGATTGTCATTTCAGGACACTTTGATGG TGTCCAAGACCTAGTCTGGGATCCAGAAGGAGAATTTATTATCACTGTT GGTACTGATCAGACAACTAGACTTTTTGCTCCATGGAAGAGAAAAGAC CAATCACAGGTGACTTGGCATGAAATTGCAAGGCCTCAGATACATGGG TATGACCTGAAATGTTTGGCAATGATTAATCGGTTTCAGTTTGTATCTGG AGCAGATGAAAAAGTTCTTCGGGTTTTTTCTGCACCTCGGAATTTTGTG GAAAATTTTTGTGCCATTACAGGACAATCACTGAATCATGTGCTCTGTA ATCAAGATAGTGATCTTCCAGAAGGAGCCACTGTCCCTGCATTGGGATT ATCAAATAAAGCTGTCTTTCAGGGAGATATAGCTTCTCAGCCTTCTGAT GAAGAGGAGCTGTTAACTAGTACTGGTTTTGAGTATCAGCAGGTGGCC TTTCAGCCCTCCATACTTACTGAGCCTCCCACTGAGGATCATCTTCTGC AGAATACTTTGTGGCCTGAAGTTCAAAAACT。
本发明还提供了下调环状RNA-0007535表达的试剂在制备通过吸附 miR-630调控Hippo信号通路来预防和/或治疗肺纤维化的药物中的应用，所述环状RNA-0007535的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
本发明还提供了下调环状RNA-0007535表达的试剂在制备抑制肺成纤维细胞分化的药物中的应用，所述环状RNA-0007535的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
本发明还提供了下调环状RNA-0007535表达的试剂在制备抑制肺成纤维细胞激活的药物中的应用，所述环状RNA-0007535的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
本发明还提供了下调环状RNA-0007535表达的试剂在制备抑制肺成纤维细胞增殖的药物中的应用，所述环状RNA-0007535的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
本发明还提供了下调环状RNA-0007535表达的试剂在制备抑制肺成纤维细胞迁移的药物中的应用，所述环状RNA-0007535的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
本发明还提供了一种下调环状RNA-0007535表达的药物，所述环状 RNA-0007535的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，所述干扰双链RNA根据核苷酸如SEQ ID NO.2所示的序列合成，所述药物包括干扰双链RNA，所述干扰双链RNA具有下列结构：
Figure BDA0002353620230000051
其中，每个“|”表示碱基配对。
本发明针对circRNA-0007535基因得到上述干扰双链RNA(干扰序列)，具体为针对核苷酸序列如SEQ ID NO.2所述的靶基因： 5’-GAAGTTCAAAAACTTTTCA-3’合成，有19个碱基配对，第一链和第二链各自在3’末端设计有两个突出的碱基dT。
本发明通过上述设计的特异性的针对circRNA-0007535的干扰序列，将其转染至细胞中，起到下调circRNA-0007535表达的作用，从而实现防治肺纤维化的目的。
图7为本发明提供的技术路线流程图，本发明首先对circRNA-0007535 的特性进行鉴定，明确circRNA-0007535的临床价值。分别利用siRNA和过表达载体敲低和增加circRNA-0007535的表达，检测circRNA-0007535干预下成纤维细胞活化以及功能相关指标的变化。利用原位杂交检测 circRNA-0007535的细胞内定位，确定细胞的调控模式；明确circRNA-0007535与miR-630结合，应用RNApull down、Ago RIP和双荧光素酶报告基因实验进一步确定它们的结合关系。miR-630对肌成纤维细胞活化和功能的影响，研究circRNA-0007535对IPF调控机制，从而实现防治肺纤维化的目的。
下面结合具体实施例对本发明所述的下调环状RNA-0007535表达的试剂在制备预防和/或治疗肺纤维化的药物中的应用及下调环状RNA-0007535 表达的药物做进一步详细的介绍，本发明的技术方案包括但不限于以下实施例。
材料人体血液样本，依据美国呼吸学会颁发的特发性肺纤维化诊疗指南美国胸科协会/欧洲呼吸协会特发性肺纤维化(ATA/ERS/JRS/ALAT)诊治循证指南，选择符合诊断标准的肺纤维化病人作为研究对象，收集血液样本，并且根据性别、年龄平行选择对照。所有病人均签署知情同意书。成纤维细胞(MRC-5)、购自ATCC细胞库；MEM培养基、胎牛血清(fetalbovine serum， FBS)均购自美国Hyclone公司；TGF-β1购自Gibco ThermoFisher公司； riboFECTTM CP转染试剂(锐博生物科技有限公司，广州，中国)；SYBR GreenPCRMasterMix(TAKARA，大连，中国)。
实施例1
circRNA-0007535的表达情况
一、方法
1细胞培养及分组：MRC-5细胞于含10％胎牛血清的MEM培养液， A549细胞于含10％胎牛血清的F12培养液中，37℃、5％CO2饱和湿度的培养箱内培养。选取处于对数生长期的细胞，制成单个细胞悬液，接种于六孔培养板。设空白对照组、TGF-β1刺激组，待细胞生长至70～80％融合时，空白对照组无血清培养基培养，使细胞生长同步化。TGF-β1刺激组给予终浓度为5nM的TGF-β1刺激72h使细胞完成向成纤维细胞的转变。
2qRT-PCR验证分析circRNA-0007535的表达变化
(1)使用RNA抽提试剂Trizol提取细胞总RNA，使用NANO drop 2000spectrophotometer仪器测定RNA溶液在260nm和280nm波长下的吸光度值 (A)用来判断样品纯度。使用甲醛变性琼脂糖凝胶电泳检测RNA纯度及完整性。
(2)RT合成cDNA(反应液配制在冰上进行)，将提取的细胞RNA，定量 1ug，按照以下程序反转录：2.0μL 5×gDNAEraserBuffer、1.0μLgDNAEraser、 Total RNA、RNase FreedH2O共10μL，42℃，2min，等待反应完成后，立即置于冰板冰育；4.0μL 5×Prime ScritBuffer、1.0μL Prime Scrit RT Enzyme Mix I、1.0μL RTPrimerMix、4.0μLRNase FreedH2O，共20μL，37℃，15min； 85℃，5s；4℃，2min后冰上冷却，得到的cDNA可直接用于PCR扩增。
(3)PCR反应体系(反应混合液配制在冰上进行)，PCR反应体系：双蒸水7.2μL；cDNA为模板，2μL；上游引物(F:5’ CCTTTCAGCCCTCCATACTTACT3’，SEQ ID NO.3)0.4μL；下游引物(R:5’ CCATATTCTTATCAGGCAATCTTGT3’，SEQ ID NO.4)0.4μL；SYBR 10μL；终体积20μL。瞬时离心，数秒钟使混合溶液于Microtube管底部聚集，95℃， 30s；95℃，5s，60℃，20s，共45个循环，扩增产物4℃冰箱，保存，GAPDH 作为内参。
二、结果分析
1circRNA-0007535在TGF-β1诱导激活的MRC-5细胞中高表达，与正常细胞相比差异达4.88倍，可见，circRNA-0007535可能参与调控成纤维细胞的功能。IPF患者血液样本中显著高表达，与正常血液样本相比差异达1.30 倍(见图1，其中，A为通过qRT-PCR评估，从0小时到72小时，TGF-β1 诱导的MRC-5细胞中circRNA-0007535表达呈上升趋势，B为验证IPF病人和正常人血液样本中circRNA-0007535的表达水平)，可见， circRNA-0007535与肺纤维化的发生密切相关。
实施例2
特异针对circRNA-0007535的siRNA干扰片段对成纤维细胞转分化的影响
一、方法
1细胞培养及分组：选取处于对数生长期的MRC-5细胞，用0.25％的胰蛋白酶制成单细胞悬液，接种于6孔板。待细胞生长至70～80％融合时，转染组和转染对照组分别用riboFECTTM CP转染试剂将siRNA干扰片段及过表达质粒和对照转染细胞，终浓度为50nM，空白对照组给予无血清培养基培养，模型组给予5nM的TGF-β1刺激，培养72h后收集细胞。
2Westernblot检测肺纤维化相关蛋白的表达变化
严格按Western及IP细胞裂解液试剂盒说明书操作，提取各组细胞的蛋白，按BCA蛋白定量试剂盒说明书操作进行蛋白浓度测定，10％SDS-PAGE 电泳分离蛋白，将蛋白转至PVDF膜上，取出PVDF膜，放入配好的丽春红染液中，染色2min，观察转膜效果；TBST洗涤PVDF膜2次，每次5min， 7％的(脱脂奶粉+TBST)封闭液室温封闭2h，一抗4℃孵育过夜，TBST洗涤3次，每次5min；二抗(1：5000)室温孵育60min；TBST洗涤3次，每次 15min；加入ECL化学发光反应混合液，反应3min，进行曝光，拍照观察。
二、结果分析
TGF-β1刺激组与空白对照组相比，肺纤维化相关蛋白表达量显著上调，表明TGF-β1能够诱导细胞向肌成纤维细胞转变；与TGF-β1刺激组相比， MRC-5/siRNA-0007535组的肺纤维化相关蛋白表达量显著下调，表明降低 circRNA-0007535的表达可抑制MRC-5细胞转分化(见图2，其中，A为不同的si-circRNA-0007535转染后circRNA-0007535的表达水平，B为选定 si-circRNA-0007535的转染效率，C为circRNA-0007535过表达载体的转染效率，D为westernblot检测过表达circRNA-0007535后肺纤维化相关蛋白指标的变化，E为westernblot检测转染入干扰片段si-circRNA-0007535后肺纤维化相关蛋白指标的变化)。
实施例3
特异针对circRNA-0007535的siRNA干扰片段及过表达质粒对成纤维细胞增殖迁移的影响
一、方法
RTCA实时无标记细胞增殖迁移分析：选取处于对数生长期的MRC-5 细胞，用0.25％的胰蛋白酶制成单细胞悬液，接种于六孔板。待细胞生长至 70～80％融合时，转染组和转染对照组分别用riboFECTTM CP转染试剂将 siRNA干扰片段及过表达质粒和对照转染细胞，终浓度为50nM，空白对照组给与无血清培养基培养，模型组给予5nM的TGF-β1刺激，培养72h后收集细胞，将收集的细胞接种于E-Plate及CIM Plate测试板置于检测仪中，设定参数以检测80小时内细胞增殖迁移的实时动态，以获得增值迁移曲线。
二、结果分析
与TGF-β1刺激组相比，MRC-5/siRNA-0007535组细胞的增殖迁移能力明显减弱；与转染空质粒组相比，转染过表达质粒组细胞的增殖迁移能力明显增强(见图3，其中，A为使用RTCA系统检测过表达circRNA-0007535后肌成纤维细胞的增殖能力，B为使用RTCA系统检测转染入干扰片段 si-circRNA-0007535后肌成纤维细胞的增殖能力，C为使用RTCA系统检测过表达circRNA-0007535后肌成纤维细胞的迁移能力，D为使用RTCA系统检测转染入干扰片段si-circRNA-0007535后肌成纤维细胞的迁移能力)。
实施例4
circRNA-0007535调控成纤维细胞的功能的分子机制
一、方法
1萤光素酶报告基因检测：按70～80％的细胞汇合度，96孔板接种细胞，待24小时后，将报告基因质粒、RNA进行转染，并为每个样本设置6个副孔。检测报告基因。
2细胞培养及分组：选取处于对数生长期的MRC-5细胞，用0.25％的胰蛋白酶制成单细胞悬液，接种于六孔板。待细胞生长至70～80％融合时，转染组和转染对照组分别用riboFECTTM CP转染试剂将miR-630 mimic/inhibitor和对照转染细胞，终浓度为50nM，空白对照组给予无血清培养基培养，模型组给予5nM的TGF-β1刺激，培养72h后收集细胞。
3qRT-PCR分析miR-630在培养细胞中表达量：Trizol试剂提取细胞总 RNA，qRT-PCR运用SYBR GreenPCRMasterMix，GAPDH作为内参。
4Westernblot检测肺纤维化相关蛋白的表达变化
严格按Western及IP细胞裂解液试剂盒说明书操作，提取各组细胞的蛋白，按BCA蛋白定量试剂盒说明书操作进行蛋白浓度测定， 10％SDS-PAGE电泳分离蛋白，将蛋白转至PVDF膜上，取出PVDF膜，放入配好的丽春红染液中，染色2min，观察转膜效果；TBST洗涤PVDF膜2 次，每次5min，7％的(脱脂奶粉+TBST)封闭液室温封闭2h，一抗4℃孵育过夜，TBST洗涤3次，每次5min；二抗(1：5000)室温孵育60min；TBST 洗涤3次，每次15min；加入ECL化学发光反应混合液，反应3min，进行曝光，拍照观察。
5RTCA实时无标记细胞增殖迁移分析：选取处于对数生长期的MRC-5 细胞，用0.25％的胰蛋白酶制成单细胞悬液，接种于6孔板。待细胞生长至 70～80％融合时，转染组和转染对照组分别用riboFECTTM CP转染试剂将 miR-630mimic/inhibitor和对照转染细胞，终浓度为50nM，空白对照组给与无血清培养基培养，模型组给予5nM的TGF-β1刺激，培养72h后收集细胞，将收集的细胞接种于E-Plate及CIMPlate测试板置于检测仪中，设定参数以检测80小时内细胞增殖迁移的实时动态，以获得增殖迁移曲线。
二、结果分析
(1)萤火虫和海肾双荧光素酶基因报告显示miR-630可以抑制与 circRNA-0007535结合的荧光素酶的活性。在结合位点发生突变后，荧光素酶活性不能被miR-630抑制(见图4，其中，A为circRNA-0007535及其靶标 miRNA的相互作用以放大的网络呈现，B为双荧光素酶报告基因检测证明miR-630与circRNA-0007535直接结合)。
(2)miR-630在TGF-β1诱导激活的MRC-5细胞中低表达；加入miR-630 mimic后肺纤维化相关蛋白表达量显著下调；加入miR-630inhibitor后肺纤维化相关蛋白表达量显著上调(见图5，其中，A为通过qRT-PCR评估，从0 小时到72小时，TGF-β1诱导的MRC-5细胞中miR-630表达降低，B为通过qRT-PCR评估，加入miR-630mimic/inhibitor后miR-630的表达水平，C 为westernblot检测转染入miR-630mimic后肺纤维化相关蛋白指标的变化， D为westernblot检测转染入miR-630inhibitor后肺纤维化相关蛋白指标的变化)；表明与circRNA-0007535的表达密切相关。
(3)与TGF-β1刺激组相比，加入miR-630mimic组细胞的增殖迁移能力明显减弱；加入miR-630inhibitor组细胞的增殖迁移能力明显增强(见图6，其中，A为使用RTCA系统检测转染入miR-630mimic后肌成纤维细胞的增殖能力，B为使用RTCA系统检测转染入miR-630inhibitor后肌成纤维细胞的增殖能力，C为使用RTCA系统检测转染入miR-630mimic后肌成纤维细胞的迁移能力，D为使用RTCA系统检测转染入miR-630inhibitor后肌成纤维细胞的迁移能力)，表明与circRNA-0007535的表达密切相关。
上述结果表明，降低circRNA-0007535表达能够抑制成纤维细胞的活化和增殖迁移，可作为肺纤维化治疗的分子和药物靶点。本发明设计特异性的针对circRNA-0007535的干扰序列，将其转染至细胞中，起到下调 circRNA-0007535表达的作用，可实现防治肺纤维化的目的。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
序列表
<110> 滨州医学院
<120> 下调环状基因表达的试剂在制备预防和/或治疗肺纤维化的药物中的应用及药物
<160> 4
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 1100
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
tttcagaaag tgctttctct ctgtggacat gaggattgga ttagaggagt ggaatgggca 60
gcctttggta gagatctttt cctagcaagc tgttcacaag attgcctgat aagaatatgg 120
aagctgtata taaagtcaac atctttagaa actcaggatg acgataacat aagactgaaa 180
gaaaatactt ttaccataga aaatgaaagt gttaaaatag catttgctgt tactctggag 240
acagtgctag ccggtcatga aaactgggta aatgcagttc actggcaacc tgtgttttac 300
aaagatggtg tcctacagca gccagtgaga ttattatctg cttccatgga taaaaccatg 360
attctctggg ctccagatga agagtcagga gtttggctag aacaggttcg agtaggtgaa 420
gtaggtggga atactttggg attttatgat tgccagttca atgaagatgg ctccatgatc 480
attgctcatg ctttccacgg agcgttgcac ctttggaaac agaatacagt taacccaaga 540
gagtggactc cagagattgt catttcagga cactttgatg gtgtccaaga cctagtctgg 600
gatccagaag gagaatttat tatcactgtt ggtactgatc agacaactag actttttgct 660
ccatggaaga gaaaagacca atcacaggtg acttggcatg aaattgcaag gcctcagata 720
catgggtatg acctgaaatg tttggcaatg attaatcggt ttcagtttgt atctggagca 780
gatgaaaaag ttcttcgggt tttttctgca cctcggaatt ttgtggaaaa tttttgtgcc 840
attacaggac aatcactgaa tcatgtgctc tgtaatcaag atagtgatct tccagaagga 900
gccactgtcc ctgcattggg attatcaaat aaagctgtct ttcagggaga tatagcttct 960
cagccttctg atgaagagga gctgttaact agtactggtt ttgagtatca gcaggtggcc 1020
tttcagccct ccatacttac tgagcctccc actgaggatc atcttctgca gaatactttg 1080
tggcctgaag ttcaaaaact 1100
<210> 2
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
gaagttcaaa aacttttca 19
<210> 3
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
cctttcagcc ctccatactt act 23
<210> 4
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
ccatattctt atcaggcaat cttgt 25

Claims (7)

1.下调环状RNA-0007535表达的试剂在制备预防和/或治疗肺纤维化的药物中的应用，所述环状RNA-0007535的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
2.下调环状RNA-0007535表达的试剂在制备通过吸附miR-630调控Hippo信号通路来预防和/或治疗肺纤维化的药物中的应用，所述环状RNA-0007535的核苷酸序列如SEQ IDNO.1所示。
3.下调环状RNA-0007535表达的试剂在制备抑制肺成纤维细胞分化的药物中的应用，所述环状RNA-0007535的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
4.下调环状RNA-0007535表达的试剂在制备抑制肺成纤维细胞激活的药物中的应用，所述环状RNA-0007535的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
5.下调环状RNA-0007535表达的试剂在制备抑制肺成纤维细胞增殖的药物中的应用，所述环状RNA-0007535的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
6.下调环状RNA-0007535表达的试剂在制备抑制肺成纤维细胞迁移的药物中的应用，所述环状RNA-0007535的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
7.一种下调环状RNA-0007535表达的药物，所述环状RNA-0007535的核苷酸序列如SEQID NO.1所示，所述药物包括干扰双链RNA，所述干扰双链RNA根据核苷酸如SEQ ID NO.2所示的序列合成，所述干扰双链RNA具有下列结构：
Figure FDA0002353620220000011
其中，每个“|”表示碱基配对。
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