CN114807376A

CN114807376A - 一种胶质瘤生物标志物及其应用

Info

Publication number: CN114807376A
Application number: CN202210673417.9A
Authority: CN
Inventors: 韩磊; 彭大钊; 魏成; 张晓阳
Original assignee: Tianjin Medical University General Hospital
Current assignee: Tianjin Medical University General Hospital
Priority date: 2022-06-15
Filing date: 2022-06-15
Publication date: 2022-07-29

Abstract

本发明提供了在胶质瘤中高表达并且具有编码功能的Circ‑SLC25A24及其编码的Circ‑SLC25A24‑19KD。通过siRNA，shRNA或AS O抑制Circ‑SLC25A24核苷酸，能显著抑制胶质瘤细胞的增殖、迁移、侵袭等。Circ‑SLC25A24或者Circ‑SLC25A24‑19KD可以作为胶质瘤诊断标志物和治疗的靶点。Circ‑SLC25A24跨剪接位点的ORF编码的Circ‑SLC25A24‑19KD氨基酸序列具有特异性，可作为分子靶向药物特异的靶点，为治疗胶质瘤的药物的研发提供了新思路，有重要的临床用药价值。

Description

一种胶质瘤生物标志物及其应用

技术领域

本发明创造属于肿瘤标志物领域，尤其是涉及一种胶质瘤生物标志物及其应用。

背景技术

胶质瘤是最常见的原发性中枢神经系统恶性肿瘤，约占所有中枢神经系统恶性肿瘤的80％。目前，胶质瘤的治疗以手术为主，结合放疗、化疗等综合治疗方法，但患者预后仍较差，生存期中位数仅为12.1-14.6个月，而仅仅3-5％的病人能存活超过3年。由于目前的治疗手段仍然不能显著改善病人生存期，因而发现并阐明胶质瘤的发生发展机制成为了目前胶质瘤研究领域的重点内容。我们期待通过揭示胶质瘤的发生发展过程来为临床治疗提供新的思路，为开发有效治疗方案奠定基础。

近年来，随着高通量测序技术以及生物信息学技术的发展，人体内发现了大量的环状RNA(circular RNA，circRNA)。环状RNA由前体RNA通过反向剪接形成，是闭合的环状结构，具有重要的生物学功能。由于没有暴露的末端结构，所以耐受核酸外切酶RNaseR的切割，相对于线性的RNA分子，环状RNA可比较稳定的存在于生物体内，发挥其生物学功能。环状RNA具有以下生物学功能，如在细胞核内调控基因的转录和剪接；作为“sponge”海绵吸附miRNA，抑制其功能；circRNA能与蛋白质结合,调控蛋白质的活性和功能。另外环状RNA也可以通过自身携带的核糖体介入位点，作为翻译的模板编码蛋白质，并且环状RNA编码的蛋白质同样具有重要的生物学功能。

发明内容

有鉴于此，本发明创造旨在克服现有技术中的缺陷，提出一种脑胶质瘤诊断或预后的生物标志物及其应用。

为达到上述目的，本发明创造的技术方案是这样实现的：

本发明的第一个目的是提供一种胶质瘤生物标志物，所述生物标志物为环状RNA和/或小分子蛋白，所述环状RNA命名为Circ-SLC25A24，其碱基序列如SEQ NO:1所示；所述小分子蛋白命名为Circ-SLC25A24-19KD，所述小分子蛋白由所述环状RNA编码，其氨基酸序列如SEQ NO:2所示。

本发明的第二个目的是提供一种扩增Circ-SLC25A24的特异性引物对，所述特异性引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示，或如SEQ ID NO.5和SEQ IDNO.6所示，或如SEQ ID NO.7和SEQ ID NO.8所示。

本发明的第三个目的是提供一种上述肿瘤生物标志物在制备用于诊断和/或筛查和/或预测和/或预后胶质瘤的产品中的应用。

优选的，所述产品包括用于诊断和/或筛查和/或预测和/或预后评估评估胶质瘤的检测试剂或试剂盒，所述检测试剂和试剂盒中均包括上述扩增Circ-SLC25A24的特异性引物对。

优选的，所述检测试剂和试剂盒中还包括内参引物，所述内参引物为以GAPDH为内参的引物，所述内参引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.9和SEQ IDNO.10所示。

本发明的第四个目的是提供一种Circ-SLC25A24表达抑制剂，所述表达抑制剂为用于抑制上述Circ-SLC25A24表达的siRNA、shRNA或ASO。

优选地，所述siRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.11或SEQ ID NO.12所示。

优选地，所述shRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.13或SEQ ID NO.14所示。

优选地，所述ASO的核苷酸序列如SEQ ID NO.15或SEQ ID NO.16所示。

本发明的第五个目的是提供一种上述Circ-SLC25A24表达抑制剂在制备预防和/或治疗胶质瘤药物中的应用。

SLC25A24可以编码线粒体内膜ATP-Mg/Pi载体，也被称为短Ca²⁺结合线粒体载体1(SCaMC1)。SCaMC-1是癌细胞中ATP-Mg/Pi载体的主要亚型，在一系列体内肿瘤和细胞系中高度过表达。线粒体通透性转变(mPT)在通透线粒体内膜(IMM)而导致细胞坏死中起核心作用。通过SCaMC-1，胞浆Ca²⁺([Ca²⁺]cyt)介导的ATP/ADP摄取增加了线粒体内Ca²⁺缓冲，从而有助于肿瘤细胞对mPT的抵抗。SLC25A24的下调导致线粒体Ca²⁺缓冲能力的大幅降低，并使细胞对氧化应激和Ca²⁺超载引发的mPT介导的坏死死亡敏感，促进癌细胞的死亡。

目前并未有相关技术公开SLC25A24的环状RNA亚型Circ-SLC25A24及其编码的小分子蛋白Circ-SLC25A24-19KD在具体肿瘤中的表达，也未有技术公开Circ-SLC25A24和小分子蛋白Circ-SLC25A24-19KD是否能够用于具体的肿瘤诊断和预后的相关研究。

相对于现有技术，本发明创造具有以下优势：

本发明创造所述的Circ-SLC25A24及Circ-SLC25A24-19KD可以作为胶质瘤的诊断/筛查/预测/预后的标志物，也可作为胶质瘤新的治疗靶点，也为胶质瘤患者提供了新的治疗思路和方案。

附图说明

图1A为本发明Circ-SLC25A24结构图谱示；图1B为Circ-SLC25A24的核苷酸序列及环状结构Sanger测序鉴定结果；图1C为SLC25A24环状RNA形成模式图；图1D为Circ-SLC25A24的核苷酸序列及环状结构Sanger测序鉴定结果；

图2A为Circ-SLC25A24在胶质瘤细胞系中的表达；图2B为Circ-SLC25A24在低级别和高级别胶质瘤中的表达差异；

图3A为Circ-SLC25A24翻译小分子蛋白模式图及小分子蛋白的序列；图3B为Circ-SLC25A24的IRES活性检测；图3C为Circ-SLC25A24-Flag的检测；

图4A为Circ-SLC25A24的siRNA敲低率检测结果，图4B为反义核苷酸ASO敲低率检测结果，图4C为shRNA敲低率检测结果。***:P<0.001,****:P<0.0001；

图5为CCK-8细胞增殖实验结果，****:P<0.0001；

图6为Edu检测结果；

图7为细胞侵袭分析实验结果；

图8为细胞划痕实验结果；

图9为动物成瘤实验结果，其中，图9A为各组大鼠肿瘤的肿瘤体积差异，图9B为各组大鼠肿瘤重量差异。

具体实施方式

除有定义外，以下实施例中所用的技术术语具有与本发明创造所属领域技术人员普遍理解的相同含义。以下实施例中所用的试验试剂，如无特殊说明，均为常规生化试剂；所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。

下面结合实施例来详细说明本发明创造。

实施例1差异表达Circ-SLC25A24及其验证

本发明利用芯片测序(Arraystar Human circRNA Array V2，康成生物，上海)技术，对四对胶质瘤组织和正常脑组织进行环状RNA表达差异分析。测序结果如图1A、1B所示，可以看出与正常组织相比，Circ-SLC25A24在胶质瘤样本中显著高表达。

如图1C、1D所示，通过UCSC(http://genome.ucsc.edu/)在线数据库软件分析发现Circ-SLC25A24基因定位于人的第1号染色体短臂chr1(p13.3)区域，基因组跨越13015bp，来源于人的SLC25A24基因的4-7号外显子；根据环状RNA权威数据库circBase(http://circrna.org/)收录的SLC25A24产生的环状RNA信息，Circ-SLC25A24的circRNA ID为hsa_circ_0004270，成熟环状RNA序列为532nt，命名为Circ-SLC25A24，其序列如下：CATTGATGTTGATGGGACAATGACAGTGGACTGGAATGAATGGAGAGACTACTTCTTATTTAATCCTGTTACAGACATTGAGGAAATTATCCGTTTCTGGAAACATTCTACAGGAATTGACATAGGGGATAGCTTAACTATTCCAGATGAATTCACGGAAGACGAAAAAAAATCCGGACAATGGTGGAGGCAGCTTTTGGCAGGAGGCATTGCTGGTGCTGTCTCTCGAACAAGCACTGCCCCTTTGGACCGTCTGAAAATCATGATGCAGGTTCACGGTTCAAAATCAGACAAAATGAACATATTTGGTGGCTTTCGACAGATGGTAAAAGAAGGAGGTATCCGCTCGCTTTGGAGGGGAAATGGTACAAACGTCATCAAAATTGCTCCTGAGACAGCTGTTAAATTCTGGGCATATGAACAGTACAAGAAGTTACTTACTGAAGAAGGACAAAAAATAGGAACATTTGAGAGATTTATTTCTGGTTCCATGGCTGGAGCAACTGCACAGACTTTTATATATCCAATGGAG；

通过在环状RNA反向连接位点两侧设计出3对PCR扩增引物，扩增环状RNA的环化位点两翼的序列，经过sanger DNA测序的方法，获得了Circ-SLC25A24的准确环化位点。设计特异性扩增Circ-SLC25A24的PCR扩增引物序列如下：

1.Circ-SLC25A24-F:5'TGGAGCAACTGCACAGACTT 3'，

Circ-SLC25A24-R:5'CCAGAAACGGATAATTTCCTCA 3'；

2.Circ-SLC25A24-F:5'CTGGAGCAACTGCACAGACTT 3'，

Circ-SLC25A24-R:5'CCAGAAACGGATAATTTCCTCA 3'；

3.Circ-SLC25A24-F：5'GGAGCAACTGCACAGACTTTT 3'，

Circ-SLC25A24-R：5'CCAGAAACGGATAATTTCCTCA 3'。

引物的扩增产物大小分别为137、138、136bp；选用GAPDH为内参矫正基因，引物序列如下：

GAPDH-F:5’GGTGGTCTCCTCTGACTTCAACA 3’

GAPDH-R:5’GTTGCTGTAGCCAAATTCGTTGT 3’

引物的扩增产物大小为127bp；

以脑胶质瘤细胞系U87 cDNA为模板，做PCR扩增；PCR扩增目标片段的反应体系及条件描述如下PCR为20微升总体系，具体是2×PCR MIX(biomark公司)10微升，上下游引物(10mM)各1微升，cDNA模板2微升，用灭菌水补足20微升体系。反应条件为：95℃3min预变性，循环内95℃15s变性，60℃40s退火，95℃延伸15s，共40个循环，PCR反应循环后72℃继续延伸5min，然后16℃保存。PCR产物经过纯化后做sanger DNA序列测定。通过sanger DNA测序的方法鉴定了环状RNA的准确剪接点。

实施例2Circ-SLC25A24的表达情况

采用RT-QPCR检测Circ-SLC25A24在胶质瘤细胞系(U87,LN229，U251，A172，SNB19，LN18)和人正常星型胶质细胞中的表达情况，结果如图2A所示，可以看出Circ-SLC25A24在胶质瘤细胞系(U87，LN229，U251，LN18)中均表达较高。采用RT-QPCR检测Circ-SLC25A24在不同级别胶质瘤中的表达情况。其中胶质瘤WHO分级Ⅰ-Ⅱ级为低级别胶质瘤(LGG),Ⅲ-Ⅳ为高级别胶质瘤(HGG),结果如图2B所示，可以看出Circ-SLC25A24在高级别胶质瘤中的表达更高。

实施例3Circ-SLC25A24翻译蛋白质预测分析及验证

通过环状RNA翻译数据库circRNADb(http://reprod.njmu.edu.cn/cgi-bin/circrnadb/circRNADb.php)预测Circ-SLC25A24可能具有编码蛋白质的潜力，预测发现Circ-SLC25A24成熟RNA序列532nt，包含一个核糖体进入位点(IRES)和开放阅读框(ORF)，理论上可以翻译出由172个氨基酸组成的小分子蛋白质。Circ-SLC25A24翻译的蛋白质的C羧基末端多出来1个氨基酸(H:组氨酸His)的尾巴，相较于SLC25A24翻译的蛋白质，是Circ-SLC25A24特有的末端氨基酸序列。通过蛋白质分子量预测软件(http://www.bio-soft.net/sms/prot_mw.html)预测Circ-SLC25A24翻译的新蛋白的分子量约19KD，将其命名为Circ-SLC25A24-19KD，如图3A所示，其序列如下所示：MTVDWNEWRDYFLFNPVTDIEEIIRFWKHSTGIDIGDSLTIPDEFTEDEKKSGQWWRQLLAGGIAGAVSRTSTAPLDRLKIMMQVHGSKSDKMNIFGGFRQMVKEGGIRSLWRGNGTNVIKIAPETAVKFWAYEQYKKLLTEEGQKIGTFERFISGSMAGATAQTFIYPMEH。

在Rluc和Luc报告基因之间克隆Circ-SLC25A24的IRES序列，从而构建双荧光素酶报告基因质粒，并以空白质粒作为对照。用5000个脑胶质瘤细胞U251接种于24孔板培养板中，24h细胞贴壁后进行转染。转染前，将25微升无血清培养基DMEM，0.3微克质粒和0.4微升的P3000制备成混合液；将25微升无血清培养基DMEM和0.8微升lipo3000脂质体均匀混合，做成脂质体混合液；将上述两种混合液等比例混合，室温放置10min；按照转染试剂(LipofectamineTM3000Transfection Reagent，ThermoFisher Scientific，#2367427)操作说明书操作；最终24孔板中的液体终体积为500毫升，转染8小时，换成正常培养基(10％胎牛血清加90％DMEM培养基)500毫升，细胞培养条件37度，5％二氧化碳。结果表明，见图3B，与空白质粒相比，Circ-SLC25A24的IRES诱导的Luc/Rluc活性较高。

构建带有Flag标签序列的Circ-SLC25A24-Flag质粒，转染至293T细胞和U87细胞。用RIPA裂解液提取细胞总蛋白，BCA蛋白定量法对提取的蛋白进行定量；配置5％SDS-PAGE浓缩胶、15％SDS-PAGE分离胶，上样总蛋白为30微克；采用80V 30分钟、120V 1h跑蛋白电泳；转膜采用360A转膜1h；5％的脱脂牛奶常温封闭2h；Flag兔单克隆抗体(AffinityBiosciences Cat#T0053,RRID:AB_2843447)(1:1000)、GAPDH抗体(Affinity BiosciencesCat#AF7021,RRID:AB_2839421)(1:3000)；4度孵育过夜；第二天采用小鼠二抗(1:10000)常温孵育1h，TBST洗涤5遍每次5min，然后发光，显影，定影。western检测到Flag的表达，见图3C。综上显示Circ-SLC25A24具有利用其IRES和ORF编码蛋白的潜力。

实施例4细胞培养及转染

1、siRNA、shRNA及反义核苷酸ASO设计及制备：

委托上海吉玛制药技术有限公司针对Circ-SLC25A24的剪接位点，设计和化学合成siRNA、shRNA及反义核苷酸ASO，并做核苷酸的2氧甲基和硫代磷酸的化学修饰，增强抗核酸酶活性的能力，提高小核酸的稳定性。

所述的siRNA、shRNA及反义核苷酸ASO的序列如下：

siRNA的序列如下：

siRNA-1CAAUGGAGCAUUGAUGUUGTT；

siRNA-2AUCCAAUGGAGCAUUGAUGTT；

shRNA的序列如下：

shRNA-1CAATGGAGCATTGATGTTG；

shRNA-2ATCCAATGGAGCATTGATG；

ASO的序列如下：

ASO-1CAUCAATGCTCCATTGGAUA；

ASO-2CAACATCAATGCTCCAUUGG；

2、细胞培养及转染

用30万个脑胶质瘤细胞U87接种于6孔板培养板中，细胞贴壁后可进行转染；转染前，将100微升无血清培养基DMEM和siRNA或ASO制备成混合液；将100微升无血清培养基DMEM和5微升RNAiMAX脂质体均匀混合，做成脂质体混合液；将上述两种混合液等比例混合，室温放置10min；按照转染试剂(Lipofectamine RNAiMAX，ThermoFisher Scientific，#13778150)操作说明书操作；最终6孔板中的液体终体积为2毫升，siRNA或ASO终浓度为100nM，转染8小时，换成正常培养基(10％胎牛血清加90％DMEM培养基)1毫升，细胞培养条件37度，5％二氧化碳。

用2万个脑胶质瘤细胞U87接种于24孔板培养板中，细胞贴壁后可进行转染。取1ug(50pmol)的shRNA，加入一定量无血清DMEM稀释液，充分混匀，制成RNA稀释液，终体积为25微升。取1.5微升的EntransterTM-R4000(Engreen Biosystem,北京,中国)，然后加入24微升无血清DMEM稀释液体，充分混匀，制成EntransterTM-R4000稀释液，终体积为25微升。室温静置5分钟。将EntransterTM-R4000稀释液和shRNA稀释液充分混合，室温静置15分钟。转染复合物制备完成。将50微升转染复合物滴加到有0.45ml正常培养基的细胞上，混合均匀。转染后6小时观察细胞状态，更换培养基，继续培养48小时。细胞培养条件37度，5％二氧化碳。

分别转染siRNA、反义核苷酸ASO及shRNA后，结果如图4A-4C所示，可以看出Circ-SLC25A24的含量均明显下降。

实施例5细胞增殖实验

构建Circ-SLC25A24过表达质粒、IRES删除的Circ-SLC25A24Del IRES质粒和表达Circ-SLC25A24-19KD的SLC225A24 172aa质粒，以空白质粒为对照，转染U87细胞。在96孔板中铺入不同分组的细胞，每孔2000细胞，每组5个复孔，细胞贴壁生长后，每天在相同时间换液为含有10％CCK-8的培养基，2小时后进行450nm的吸光度检测，最后将不同时间点的吸光度根据第一天的吸光度进行标准化。在不同时间点进行细胞活性检测(CCK-8实验)，结果如图5所示，可以看出与对照组和Circ-SLC25A24 Del IRES组相比，转染Circ-SLC25A24过表达质粒和SLC225A24 172aa质粒的U87细胞增殖能力明显上调，表明是Circ-SLC25A24-19KD而不是Circ-SLC25A24能促进胶质瘤细胞的增殖。

实施例6EdU摄取实验

在24孔板中铺入不同分组的细胞，每孔2万个细胞，每组3个复孔，待细胞贴壁后，使用ASO转染U87细胞，ASO终浓度为100nM，转染8小时，换成正常培养基(10％胎牛血清加90％DMEM培养基)1毫升，培养24小时，细胞培养条件37度，5％二氧化碳。按照BeyoClickTMEdU-594细胞增殖检测试剂盒(Beyotime)操作说明，进行EdU的孵育和荧光标记，最后在荧光显微镜下检测EdU的摄取情况。敲低Circ-SLC25A24，检测EdU摄取情况。结果如图6所示，可以看出敲低Circ-SLC25A24后细胞EdU摄取减少，说明增殖能力明显下降。

实施例7细胞侵袭实验

用30万个脑胶质瘤细胞U87接种于6孔板培养板中，细胞贴壁后转染siRNA终浓度为100nM，转染8小时，换成正常培养基(10％胎牛血清加90％DMEM培养基)1毫升，细胞培养条件37度，5％二氧化碳，培养24小时。在Transwell小室上室铺上30微克Martrigel胶，加入转染siRNA的脑胶质瘤U87细胞2万个；细胞培养条件37度，5％二氧化碳，培养12小时后，乙醇固定滤膜，PE染色，拍照观察统计穿过Martrigel的细胞数。结果如图7所示，可以看出添加siRNA后的U87细胞其转移能力明显减弱，siRNA对U87细胞转移能力有明显的抑制作用。

实施例8细胞划痕实验

脑胶质瘤U87细胞按照30万个细胞铺到6孔板中，培养让细胞贴壁，第二天进行细胞划痕，PBS洗细胞3次，加入细胞培养基(10％胎牛血清加90％DMEM培养基)1毫升，培养基中添加Circ-SLC25A24siRNA终浓度为100nM；细胞培养条件37度，5％二氧化碳，分别于培养0小时、12小时、24小时拍照。结果如图8所示，可以看出添加Circ-SLC25A24 siRNA的U87细胞其移动能力明显减弱，Circ-SLC25A24 siRNA对U87细胞移动能力有明显的抑制作用。提示Circ-SLC25A24可作为潜在靶基因。

实施例9动物成瘤实验

使用慢病毒感染的方法，将shRNA递送到胶质瘤细胞U87细胞内稳定表达，构建稳定转染细胞株，持续敲低Circ-SLC25A24。将转染shRNA的胶质瘤细胞U87细胞以400万的细胞量注射到4周龄BALB/c雌性裸鼠(北京恒福生物科技有限公司)的皮下，构建胶质瘤移植瘤动物模型。将9只裸鼠分为3组，每组3只，分别为NC组、shRNA#1组和shRNA#2组。随后，每2天测量肿瘤体积。21天后处死裸鼠，取皮下瘤组织，测定肿瘤的尺寸及重量，并进行多聚甲醛固定，石蜡包埋，HE染色切片。结果如图9所示，可以看出与NC组相比，转染shRNA组肿瘤的体积及肿瘤重量明显较小。

以上所述仅为本发明创造的较佳实施例而已，并不用以限制本发明创造，凡在本发明创造的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明创造的保护范围之内。

序列表

<110> 天津医科大学总医院

<120> 一种胶质瘤生物标志物及其应用

<141> 2022-06-08

<160> 16

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 532

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 1

cattgatgtt gatgggacaa tgacagtgga ctggaatgaa tggagagact acttcttatt 60

taatcctgtt acagacattg aggaaattat ccgtttctgg aaacattcta caggaattga 120

cataggggat agcttaacta ttccagatga attcacggaa gacgaaaaaa aatccggaca 180

atggtggagg cagcttttgg caggaggcat tgctggtgct gtctctcgaa caagcactgc 240

ccctttggac cgtctgaaaa tcatgatgca ggttcacggt tcaaaatcag acaaaatgaa 300

catatttggt ggctttcgac agatggtaaa agaaggaggt atccgctcgc tttggagggg 360

aaatggtaca aacgtcatca aaattgctcc tgagacagct gttaaattct gggcatatga 420

acagtacaag aagttactta ctgaagaagg acaaaaaata ggaacatttg agagatttat 480

ttctggttcc atggctggag caactgcaca gacttttata tatccaatgg ag 532

<210> 2

<211> 172

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<400> 2

Met Thr Val Asp Trp Asn Glu Trp Arg Asp Tyr Phe Leu Phe Asn Pro

1 5 10 15

Val Thr Asp Ile Glu Glu Ile Ile Arg Phe Trp Lys His Ser Thr Gly

20 25 30

Ile Asp Ile Gly Asp Ser Leu Thr Ile Pro Asp Glu Phe Thr Glu Asp

35 40 45

Glu Lys Lys Ser Gly Gln Trp Trp Arg Gln Leu Leu Ala Gly Gly Ile

50 55 60

Ala Gly Ala Val Ser Arg Thr Ser Thr Ala Pro Leu Asp Arg Leu Lys

65 70 75 80

Ile Met Met Gln Val His Gly Ser Lys Ser Asp Lys Met Asn Ile Phe

85 90 95

Gly Gly Phe Arg Gln Met Val Lys Glu Gly Gly Ile Arg Ser Leu Trp

100 105 110

Arg Gly Asn Gly Thr Asn Val Ile Lys Ile Ala Pro Glu Thr Ala Val

115 120 125

Lys Phe Trp Ala Tyr Glu Gln Tyr Lys Lys Leu Leu Thr Glu Glu Gly

130 135 140

Gln Lys Ile Gly Thr Phe Glu Arg Phe Ile Ser Gly Ser Met Ala Gly

145 150 155 160

Ala Thr Ala Gln Thr Phe Ile Tyr Pro Met Glu His

165 170

<210> 3

<211> 20

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 3

tggagcaact gcacagactt 20

<210> 4

<211> 22

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 4

ccagaaacgg ataatttcct ca 22

<210> 5

<211> 21

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 5

ctggagcaac tgcacagact t 21

<210> 6

<211> 22

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 6

ccagaaacgg ataatttcct ca 22

<210> 7

<211> 21

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 7

ggagcaactg cacagacttt t 21

<210> 8

<211> 21

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 8

ggagcaactg cacagacttt t 21

<210> 9

<211> 23

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 9

ggtggtctcc tctgacttca aca 23

<210> 10

<211> 23

<212> DNA

<213> Artificial Sequence

<400> 10

gttgctgtag ccaaattcgt tgt 23

<210> 11

<211> 21

<212> DNA/RNA

<213> Artificial Sequence

<400> 11

caauggagca uugauguugt t 21

<210> 12

<211> 21

<212> DNA/RNA

<213> Artificial Sequence

<400> 12

auccaaugga gcauugaugt t 21

<210> 13

<211> 19

<212> DNA/RNA

<213> Artificial Sequence

<400> 13

caatggagca ttgatgttg 19

<210> 14

<211> 19

<212> DNA/RNA

<213> Artificial Sequence

<400> 14

atccaatgga gcattgatg 19

<210> 15

<211> 20

<212> DNA/RNA

<213> Artificial Sequence

<400> 15

caucaatgct ccattggaua 20

<210> 16

<211> 20

<212> DNA/RNA

<213> Artificial Sequence

<400> 16

caacatcaat gctccauugg 20

Claims

1.一种胶质瘤生物标志物，其特征在于：所述生物标志物为环状RNA和/或小分子蛋白，所述环状RNA命名为Circ-SLC25A24，其碱基序列如SEQ NO:1所示；所述小分子蛋白命名为Circ-SLC25A24-19KD，所述小分子蛋白由所述环状RNA编码，其氨基酸序列如SEQ NO:2所示。

2.一种扩增Circ-SLC25A24的特异性引物对，其特征在于：所述特异性引物对的核苷酸序列如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示，或如SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6所示，或如SEQID NO.7和SEQ ID NO.8所示。

3.一种权利要求1所述的肿瘤生物标志物在制备用于诊断、筛查、预测或预后评估胶质瘤的产品中的应用。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述产品包括用于诊断和/或筛查和/或预测和/或预后评估胶质瘤的检测试剂或试剂盒，所述检测试剂和试剂盒中均包括权利要求2所述的扩增Circ-SL C25A24的特异性引物对。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：所述检测试剂和试剂盒中还包括内参引物，所述内参引物为以GAPDH为内参的引物，所述内参引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.9和SEQ ID NO.10所示。

6.一种Circ-SLC25A24表达抑制剂，其特征在于：所述表达抑制剂为用于抑制权利要求1所述的Circ-SLC25A24表达的siRNA、shRNA或ASO。

7.根据权利要求6所述的Circ-SLC25A24表达抑制剂，其特征在于：所述siRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.11或SEQ ID NO.12所示。

8.根据权利要求6所述的Circ-SLC25A24表达抑制剂，其特征在于：所述shRNA的核苷酸序列如SEQ ID NO.13或SEQ ID NO.14所示。

9.根据权利要求6所述的Circ-SLC25A24表达抑制剂，其特征在于：所述ASO的核苷酸序列如SEQ ID NO.15或SEQ ID NO.16所示。

10.一种权利要求6-9任一所述的Circ-SLC25A24表达抑制剂在制备预防和/或治疗胶质瘤药物中的应用。