CN110996977A - 用于缓解或治疗灼伤及褥疮的组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及包含动物肺组织提取物作为有效成分的用于缓解或治疗灼伤及褥疮的组合物，并且公开本发明的组合物与动物肺组织提取物和/或丙酸对皮肤损伤的保护效果不仅与炎症抑制有关，而且还与纤维组织的再生和血管生成有关，作为与皮肤创伤愈合有关的材料具有有效性并表现出与灼伤及褥疮治疗有关的产业上可利用的效果，因而可将其用作这些疾病的治疗剂。

Description

用于缓解或治疗灼伤及褥疮的组合物
技术领域
本发明涉及用于缓解及治疗灼伤及褥疮的组合物。
背景技术
褥疮是指组织的外周血管被从人体接触表面接收到的压力所阻塞而导致组织坏死的病态，其愈合通常需要很长时间。
因此，长期躺在床上的老人或长期疗养的患者容易出现褥疮(bedsore，所谓的压力性溃疡)，成了护理上的大问题。并且，褥疮是也会在人以外的动物中发作的疾病，例如，鞍伤(saddlesore)也是褥疮之一。
褥疮的治疗剂有含菠萝蛋白酶(bromelain)(诊疗和新药，1971年，第8卷，第967页)的软膏、含布拉地新钠(bucladesine Na)[Biological&Pharmaceutical Bulletin(生物逻辑和制药公报)，1995年，第18卷，第1539页至第1543页]的软膏等，但是已知上述治疗剂都有出血、疼痛等副作用。
同时，通常使用通过使用褥疮用床、床垫等来使褥疮部位通风顺畅的产品，但是这只是用于预防的物品，不能用作治疗剂。
因此，当前的褥疮治疗依赖于大多数患者的自然愈合能力，因此需要一种更安全的褥疮的治疗方法。
另一方面，灼伤是指主要是由事故引起的，根据原因可分为由热引起的灼伤、由电流引起的灼伤、由化学物质引起的灼伤、由放射线引起的灼伤等。灼伤的严重程度根据灼伤的宽度、深度、引起灼伤的物体的温度和接触时间、皮肤状态等分为Ⅰ度、Ⅱ度、Ⅲ度及Ⅳ度灼伤，从Ⅱ度灼伤开始可能留下疤痕，需要住院治疗。
Ⅰ度灼伤皮肤发红，并伴随刺痛等疼痛。作为皮肤层中的最外层的表皮受损，伴随疼痛和红斑并肿胀。症状在几天之内消失，但是在某些情况下，仍然会残留轻度的落屑和色素沉着。恢复后无疤痕(伤痕)残留。太阳灼伤(sun burn)是最常见的Ⅰ度灼伤的例子。
Ⅱ度灼伤会影响表皮和真皮，引起红斑、疼痛、水肿以及在事故后24小时内出现水泡。这种灼伤还会影响汗腺或毛孔。自觉得灼热感和疼痛严重。若水泡破裂，则出现糜烂面并出现大量分泌物。在受灼伤的面积为体表面积的约15％以上的情况下，需要特别注意。几周内可愈合，但是其部位留下色素沉着或色素脱失。若引起二次感染，则局部症状会更加严重并且持续时间更长。
Ⅲ度灼伤影响表皮、真皮及下皮，使皮肤变黑或呈半透明白色，并凝固皮肤表面下方的血管。其灼伤部位可能会变得麻木，但是患者或感到极度疼痛，皮肤组织和结构坏死，因此需要很长的时间才能治疗，并在以后留下疤痕。事故发生两周后，疮痂剥落并出现溃疡表面。分泌液较多，容易出血，但是逐渐形成新的组织，表皮再生，留下疤痕并愈合。在皮肤坏死或引发二次感染的情况下，愈合可能会延迟并且疤痕的表面可能会变得不规则，从而形成瘢痕瘤或变形或留下运动障碍。在受灼伤的面积影响身体表面积的10％以上的情况下，需要特别注意。
Ⅳ度灼伤是受灼伤的部位碳化或变黑的情况，位于皮肤层下面的脂肪层、韧带、筋膜、肌肉、骨组织等也受到灼伤的情况。主要发生在高压电灼伤，有时可出现在深度性Ⅱ-Ⅲ度灼伤中发生菌感染的情况中。在灼伤的范围在20％以上的情况下，可能发生全身性身体反应，可发生由于过多的体流失导致的低血压、休克、急性肾功能不全等，事后的伤口感染或肺炎、败血症、多发性器官功能障碍综合征等。
对于灼伤的治疗重要的是要尽快愈合早期的灼伤创伤或减少灼伤部位。在早期灼伤患处敷料中强调通过调节感染及验证、保持湿润环境、给药有助于皮肤再生的生长因子或细胞因子、使用局部肝素等防止转化为灼伤的早期治疗。
当考虑到这种灼伤和/或褥疮损伤的严重性时，若开发对灼伤和/或褥疮损伤的治疗或预防有用的治疗剂，则这将对患者的治疗、状态改善及疤痕的减少非常有帮助。
现有专利文献
韩国公开专利：10-2008-0058126
发明内容
本发明为了解决如上所述的问题并根据上述必要性而提出的，本发明的目的在于，提供新型褥疮治疗剂。
本发明的另一目的在于，提供新型灼伤治疗剂。
为了实现上述目的，本发明提供包含动物肺组织提取物作为有效成分的用于治疗褥疮的组合物。
在本发明的一实例中，优选地，上述动物为猪，但并不限定于此。
在本发明的再一实例中，优选地，上述肺组织提取物为磷脂分馏物，但并不限定于此。
在本发明的一实施例中，如图1所示，优选地，上述磷脂分馏物选自由磷脂酰肌醇(phosphatidylinositol)；1-棕榈酰-2-花生四烯酸磷脂酰胆碱(1-Palmitoyl-2-arachidony phosphatidylcholine)；1-棕榈酰基-2-亚油酰基磷脂酰胆碱(1-palmitoyl-2-linoleoyl phosphatidylcholine)；1-棕榈酰基-2-棕榈油酰基磷脂酰胆碱(1-palmitoyl-2-palmitoleonyl phosphatidylcholine)；1-棕榈酰基-2-油酰基磷脂酰胆碱(1-palmitoyl-2-oleoyl phosphatidylcholine)；二棕榈酰磷脂酰胆碱(dipalmitylphosphatidylcholine)；邻苯三酚胺(phsphatylethaolamine)；鞘磷脂(sphingomyelin)组成的组中，或者包含所有这些磷脂，但并不限定于此。
在本发明的另一实例中，优选地，上述组合物还包含有机酸或其盐，更优选地，上述有机酸为丙酸，但并不限定于此。
本发明还提供包含动物肺组织提取物作为有效成分的用于治疗灼伤的组合物。
在本发明的一实例中，优选地，上述动物为猪，但并不限定于此。
在本发明的再一实例中，优选地，上述肺组织提取物为磷脂分馏物，但并不限定于此。
在本发明的另一实例中，优选地，上述组合物还包含有机酸或其盐，更优选地，上述有机酸为丙酸，但并不限定于此。
可以适当选择发明的褥疮治疗剂或预防剂、灼伤治疗剂中的有效成分的浓度。
尽管本发明的褥疮治疗剂或预防剂、灼伤治疗剂可以作为口服剂给药，但是优选地，作为外用剂局部给药于创伤、褥疮或灼伤的患处。
并且，作为褥疮的预防药，也可以局部给药于可能具有褥疮的部位来防止褥疮或难以形成褥疮。
对于外用剂没特别限制，只要是通常使用的外用制剂即可，例如可列举软膏剂、膏剂、乳液剂、擦剂(liniment)、巴氏(pap)剂、膏药(plaster)剂、贴(patch)剂、硬膏剂、凝胶(gel)剂、液剂、胶带等。
在上述剂型为软膏剂或膏剂的情况下，基剂可使用油脂性基剂或乳剂性基剂。
上述油脂性基剂可列举例如烃、高级醇、高级脂肪酸、高级脂肪酸酯、乙二醇类、植物油、动物油等。上述油脂性基剂通常可以单独使用或者可以混合两种以上来使用。
上述烃可列举例如碳数为12～32的烃、作为多种烃的混合物的流动石蜡、分岐状石蜡、固体石蜡、白凡士林、黄凡士林、角鲨烯(squalene)、角鲨烷、液体石蜡和聚乙烯的复合软膏基质等。其中，白凡士林是尤其合适的。上述烃通常可以单独使用或可以混合两种以上来使用。
上述高级醇可列举例如碳数为12～30的脂肪族一元醇等。作为这种脂肪族一元醇的具体例可列举例如月桂醇(lauryl alcohol)、十三烷醇、肉豆蔻醇(myristyl alcohol)、十五烷醇、鲸蜡醇(十六醇(cetanol))、十六烷醇、十七烷醇、硬脂醇、油醇(oleylalcohol)、十八烷醇、二十烷醇、丝氨醇、甲硅醇(melissyl alcohol)、鲸蜡硬脂醇(cetostearyl alcohol)等。其中，优选地，上述高级醇为月桂醇、鲸蜡醇及硬脂醇，尤其优选地，上述高级醇为鲸蜡醇及硬脂醇。上述高级醇通常可以单独使用或者可以混合两种以上来使用。
上述高级脂肪酸可列举例如碳数为6～32的饱和或不饱和脂肪酸。具体地，可列举例如己酸(caproic acid)、庚酸(enanthic acid)、辛酸(caprylic acid)、壬酸(pelargonic acid)、癸酸(capric acid)、十一烷基酸、月桂酸(lauric acid)、十三烷基酸、肉豆蔻酸、十五烷基酸、棕榈酸(palmitic acid)、十七烷基酸、硬脂酸(stearic acid)、油酸(oleic acid)、十九烷酸、花生酸、花生四烯酸(arachidonic acid)、亚油酸、亚麻酸(linolenic acid)、二十二烷酸(behenic aicd)、二十四烷酸(lignoceric acid)、二十六烷酸(cerotic acid)、二十七烷酸、二十九烷酸(montanic acid)、三十烷酸(melissicaicd)、三十二烷酸、反油酸(elaidic acid)、巴惟酸等。其中，尤其，优选地，上述高级脂肪酸为棕榈酸酯和硬脂酸。上述高级脂肪酸通常可以单独使用或者可以混合使用两种以上。
上述高级脂肪酸酯可列举例如，脂肪酸酯，如十六烷酸十四烷基、十八烷酸十八烷基、十四烷酸十四烷基、二十四烷酸二十六烷基、二十六烷酸三十二烷基、三十二烷酸三十二烷基等；碳数为10～32的脂肪酸和碳数为14～32的脂肪族一元醇酯，诸如羊毛脂(lanolin)、蜂蜡(beeswax)、鲸蜡、虫胶(shellac)蜡等之类的动物天然蜡、诸如巴西棕榈蜡(carnauba wax)、小烛树蜡(candelila wax)等之类的植物天然蜡等；碳数为10～22的饱和或不饱和脂肪酸和甘油酯，如单月桂酸甘油酯、单肉豆蔻酸甘油酯、单油酸甘油酯、单硬脂酸甘油酯、单二月桂酸甘油酯、二月桂酸甘油酯、二硬脂酸甘油酯、三月桂酸甘油酯、三肉豆蔻酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯等或它们的氢添加物等。上述高级脂肪酸酯通常可以单独使用或可以混合两种以上来使用。
上述乙二醇类可列举例如乙二醇、二甘醇、丙二醇、1，3-丁二醇、聚乙二醇等。它们可以单独使用或可以混合两种以上来使用。并且，在本发明中，其中，例如，优选地，混合低聚合度的聚乙二醇和高聚合度的聚乙二醇来使用。上述乙二醇类通常可以单独使用或可以混合两种以上来使用。
上述植物油可列举例如山茶油、蓖麻油、橄榄油、可可油、椰子油、棕榈油、澳洲胡桃油(macadamia nut oil)、豆油、茶籽油(tea seed oil)、芝麻油、杏仁油、红花油(safflower oil)、棉籽油(cotton seed oil)、松脂油、这些植物油中添加氢的植物油脂类等。上述植物油通常可以单独使用或可以混合两种以上来使用。
上述动物油可列举例如貂油、蛋黄油、海鲛、鲨烯(squalene)、羊毛脂(lanoline)、上述动物油的衍生物等。上述动物通常可以单独使用或可以混合两种以上来使用。
部分上述高级醇还可用作吸收促进剂，在将这种高级醇用作基剂的情况下，不需要特别添加吸收促进剂。
上述乳剂性基剂可列举例如水中油型(oil in water，O/W)基剂、油中水型(waterin oil，W/O)基剂、悬浮型基剂等。
上述水中油型基剂可列举在表面活性剂的存在或不存在下，将上述羊毛脂、丙二醇、硬脂醇、凡士林、硅油、流动石蜡、单硬脂酸甘油酯、聚乙二醇等成分乳化(emulsification)、分散于水相中的基剂等。上述基剂可以在制备膏时适当地使用。
上述油中水型基剂可列举向凡士林、高级脂肪醇、流动石蜡等成分中，在非离子表面活性剂的存在下通过添加水来乳化、分散的基剂等。
优选地，上述水中油型基剂及油中水型基剂用于含水剂型，例如，含水液剂、乳液剂、巴氏(pap)剂、软膏剂等中。
上述悬浮性基剂可列举在水中添加淀粉、甘油、高粘度羧甲基纤维素(carboxymethyl cellulose)、羧基乙烯基聚合物(carboxy vinyl polymer)等悬浮剂来制成凝胶状(gel phase)的水性基剂等。
根据本发明的褥疮治疗剂或预防剂、灼伤治疗剂的外用剂可以通过通常采用的外用剂的制备方法来制备。例如，上述软膏剂或膏剂可以如下制备，即，根据各个剂型，通过混练(roll mixing milling)、乳化或悬浮基剂原来制备基剂后，添加有效成分及各种添加剂并进行混合。混合时可利用通常所利用的混合机，如螺旋混合机(screw mixer)、均质混合机(kneader)、捏合机、辊式捏合机(roll mill)等。
在上述剂型为乳液剂的情况下，剂型为悬浮型、乳剂型及溶液型中的任一种类型。
作为上述悬浮型乳液的基剂可列举橡胶类，如阿拉伯胶(gum arabic)、黄芪胶(gum tragacanth)等；纤维素类，如甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟乙基淀粉等；黏土类，如膨润土(bentonite)、硅酸铝镁(veegum)HV等的悬浮剂与水的混合物等。上述悬浮型乳液的基剂通常可以单独使用或可以混合两种以上来使用。
上述乳剂型乳液的基剂可列举乳化水与油性物质的基剂等，上述油性物质有脂肪酸，如硬脂酸、山萮酸、油酸等；高级醇，如硬脂醇、鲸蜡醇、山嵛醇(behenyl alcohol)等。上述乳剂型乳液的基剂通常可以单独使用或可以混合两种以上来使用。
上述溶液型乳液的基剂可列举醇等，如水、乙醇、甘油、丙二醇等。上述溶液型乳液的基剂通常可以单独使用或可以混合两种以上来使用。
上述乳液剂可以如下制备，例如，通过向纯净水中添加各种基极成分并进行混合、搅拌(agitation)后，添加有效成分及添加剂，可以根据需要进行过滤。
在剂型为上述擦剂(liniment)的情况下，作为其基剂可列举例如植物油类，如橄榄油、芝麻油、杏仁油、棉籽油(cotton seed oil)、松脂油等；醇类，如乙醇、丙醇(propanol)、异丙醇(isopropanol)等；其与水的混合物等。上述擦剂的基剂通常可以单独使用或可以混合两种以上来使用。
上述擦剂可以如下制备，即，通过向基剂中溶解有效成分后，添加所需的成分并进行混合。
在剂型为上述巴氏剂的情况下，作为其基剂可列举例如，水溶性高分子化合物，如聚丙烯酸及其盐、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮等；交联物，如将上述水溶性高分子化合物与明矾(alum)等多价金属盐交联的基剂、通过对水溶性高分子化合物进行辐射等物理处理而交联的基剂等。上述巴氏剂的基剂通常可以单独使用或可以混合两种以上来使用。
上述巴氏剂可以通过混合有效成分、基剂及所需的添加物，并且加热后冷却来如下制备。
在上述膏药(plaster)剂、贴(patch)剂及硬膏剂的情况下，可列举支撑体，如无纺布等；弹性体，如天然橡胶、丁苯橡胶(SBR)、丁基橡胶、聚异丁烯、聚乙烯基烷基醚、聚氨酯、二甲基聚硅氧烷、苯乙烯-异戊二烯-苯乙烯橡胶、异戊二烯橡胶等；填充剂，如锌化钛、氧化钛、二氧化硅等；增粘剂，如与弹性体具有良好的相容性的萜烯(terpene)树脂、松香(rosin)或其酯、酚醛树脂等；剥离(exfoliation)处理剂，如醋酸乙烯酯、硅树脂、聚氯乙烯等；软化剂，如流动石蜡、工艺油(process oil)等；抗老化剂，如二丁基羟基甲苯(BHT)等。这些成分可以单独使用或者可以混合两种以上来使用。
上述膏药剂、贴剂、硬膏剂等可通过常规的方法如溶液法或热压法来制备。
具体地，例如，当通过热压方式制备时，可通过如下方式制备，即，利用辊机器混练(roll mixing milling)有效成分及各成分，通过使用施加热量及压力的压延机以均匀的厚度涂敷于离型纸(release paper)上的方式形成含药物层后，将其层叠并粘附到支撑体表面。
在上述凝胶剂、液剂、胶带等的情况下，其基剂也不受特别限制，只要是用于常规的外用剂的即可。
下面，对本发明进行说明。
用于治疗本申请的褥疮及灼伤的组合物为通过破碎动物的肺组织来提取的总磷脂分馏物(total phospholipid fraction)，其特征在于，以二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)含量为25％以上(利用高效液相色谱-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)测定浓度的情况)的主要成分(图1)，并选择性地含有微摩尔(microM)浓度的有机酸。
在本发明中，总磷脂分馏物为从猪肺中提取纯化的磷脂分馏物，存在于肺泡中的包括二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC，dipalmitoyl phosphatidylcholine)在内的磷脂表面活性体具有很强的极性头基(head group)，因此可以很容易地与水混合，由于在分子中含有两个短的饱和脂肪酸，因此可起到清洗剂(detergent)作用。
即，同时防止使蛋白质成团的疏水键和极性键等，以解离积聚在褥疮患处的血清蛋白，并使其成为更小的单位体，并且可使这些蛋白质的血管再吸收、基于细胞的分解及外部排泄容易，同时，可以期待通过以在表面形成极性脂肪膜的方式减少水分蒸发的作用。
另外，具有羧基(carboxyl group)的作为碳短链的有机酸的丙酸(propionicacid，propionate，Pi)可以更有效地防止通过各种二价阳离子如包含在血浆中的钙的双向离子键合的蛋白质成团现象。
在本发明的实验例中，使用褥疮治疗候选物质总磷脂分馏物和丙酸，并利用小鼠动物模型非临床评估记载了褥疮治疗改善及其机制。
在本发明中，示出了总磷脂分馏物和添加有丙酸的总磷脂分馏物的处理显著抑制I/R之后的溃疡的形成。总磷脂分馏物敷料提高伤口部位的恢复速度，皮肤水分损失量因部分总磷脂分馏物而得到改善，与以往广泛用于褥疮治疗的磺胺嘧啶银(silversulfadiazine)相比，对炎症抑制、细胞凋亡抑制、纤维组织、血管的恢复及皮肤屏障改善具有相似或更好的效果。尤其，低浓度(2％)总磷脂分馏物+丙酸的效果与高浓度(4％)总磷脂分馏物的效果类似，并且在减少炎症和减少细胞凋亡方面更有效。
本发明的组合物对灼伤及褥疮治疗具有如下效果。
本发明确认总磷脂分馏物及丙酸介导的皮肤I/R损伤的保护机制。本发明的结果表明，总磷脂分馏物的处理抑制了M1巨噬细胞浸润，并抑制了M1巨噬细胞的促炎性介质(proinflammatory mediators)诱导的皮炎。并且，确认低浓度总磷脂分馏物的处理也因丙酸的添加而具有与高浓度总磷脂分馏物类似的效果。
本发明示出总磷脂分馏物及丙酸的处理减少了I/R诱导的细胞凋亡细胞数。这些结果表明，通过增加皮肤I/R后凋亡细胞的吞噬作用(phagocytosis)及清除率(clearance)来防止它们的积累，这显示了总磷脂分馏物及丙酸对I/R褥疮部位中的细胞凋亡和坏死的抑制及压迫性溃疡的保护效果。
在本发明中确认高浓度总磷脂分馏物及低浓度总磷脂分馏物+丙酸处理促进褥疮部位的伤口恢复，同时胶原蛋白含量增加。并且，确认真皮中I/III型胶原蛋白生成比例，从而确认总磷脂分馏物及丙酸的处理对I/R后皮肤褥疮部位的正常组织恢复起着重要的作用，并且，通过评估I/R褥疮部位的血管分布，发现I/R区域的血管周围细胞数明显大于对照组小鼠。本发明提出对皮肤I/R损伤的总磷脂分馏物及丙酸的保护效果不仅与炎症抑制有关，而且还与纤维组织的再生及血管生成促进有关。
综上所述，对本发明作出如下结论，即，总磷脂分馏物对褥疮愈合速度进行加速并有助于通过抗炎症、胶原蛋白生成诱导、血管生成及皮肤屏障恢复的组织再生活性，从而抑制由皮肤I/R损伤引起的压迫性溃疡的形成。并且，证明当添加丙酸时，也可用低浓度的总磷脂分馏物具有与高浓度的总磷脂分馏物类似的效果。总磷脂分馏物的持续治疗作为与包括褥疮(decubitus)溃疡及其他缺血性溃疡再被的皮肤创伤愈合有关的材料具有有效性并具有产业可利用性。
附图说明
图1为示出从猪肺组织中提取的磷脂分馏物的图，纯化的磷脂分馏物利用高效液相色谱-蒸发光散射检测器系统(Waterse 2695Waters 2424(ELSD))分析。柱使用了沃特世Xbridge柱C18 5.0μm(waters Xbridge column C18 5.0μm)(4.6mm*150mm)。#1：磷脂酰肌醇(phosphatidylinositol)；#2：1-棕榈酰-2-花生四烯酸磷脂酰胆碱(1-Palmitoyl-2-arachidony phosphatidylcholine)；#3：1-棕榈酰基-2-亚油酰基磷脂酰胆碱(1-palmitoyl-2-linoleoyl phosphatidylcholine)；#4：1-棕榈酰基-2-棕榈油酰基磷脂酰胆碱(1-palmitoyl-2-palmitoleonyl phosphatidylcholine)；#5：1-棕榈酰基-2-油酰基磷脂酰胆碱(1-palmitoyl-2-oleoyl phosphatidylcholine)；#6：二棕榈酰磷脂酰胆碱(dipalmityl phosphatidylcholine)；#7和#8：邻苯三酚(phsphatylethaolamine)；#9：鞘磷脂(sphingomyelin)。
图2为示出总磷脂分馏物和丙酸对皮肤I/R后压迫性溃疡形成的效果的图，其中，A为伤口愈合模型的简要图；剃除小鼠的背部皮肤，实施两个I/R循环(cycle)后，将对照组(磷酸盐缓冲液(PBS))和试验物质(磺胺嘧啶银(SS)、4％的总磷脂分馏物、2％的总磷脂分馏物+丙酸)每天敷两次，并评估褥疮愈合20天；B为C57BL/6小鼠中I/R损伤后褥疮部位的照片；C为C57BL/6小鼠中I/R损伤后褥疮面积的大小变化；将I/R诱导后的小鼠溃疡大小指定为100％值；D为C57BL/6小鼠中I/R损伤后伤口部位经皮失水率(TEWL)；E为处理试验物质后的小鼠体重变化。
图3为示出总磷脂分馏物和丙酸对由皮肤I/R引起的伤口部位炎症反应的效果的图，其中，A及B为C57BL/6小鼠中I/R损伤4天后伤口部位的组织照片；(红色箭头：肥大细胞(Red arrow：mast cell))，比例尺(Scale bar)，100μm。
图4为示出总磷脂分馏物和丙酸对I/R皮肤损伤后浸润的巨噬细胞抑制的效果的图，其中，A为用骨髓过氧化酶(MPO)及CD68抗体染色I/R皮肤损伤后第四天浸润的中性粒细胞和巨噬细胞的皮肤褥疮部位的组织照片；B为用一氧化氮合成酶(iNOS)(M1巨噬细胞)、精氨酸酶1(Arg-1)(M2巨噬细胞)抗体染色的皮肤褥疮部位的组织照片；C为I/R后4天通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫印迹(immunoblot)定量一氧化氮合成酶及精氨酸酶1(arginase-1)的表达水平；D为I/R后4天内单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)及肿瘤坏死因子α(TNFα)的信使核糖核酸(mRNA)表达水平定量；比例尺，100μm，*p<0.05，**p<0.01。
图5为总磷脂分馏物和丙酸对I/R皮肤损伤后细胞凋亡抑制的效果的图，其中，A为C57BL/6小鼠中I/R损伤4天后利用苏木精-伊红(H&E)、TUNEL(脱氧核苷酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记物)染色的皮肤褥疮部位的组织照片；B为I/R损伤4天后皮肤褥疮部位的凋亡细胞数；C为利用免疫印迹定量I/R后4天内Bax及裂解的凋亡蛋白酶3(cleavedcaspase-3)的表达水平；比例尺，100μm，*p<0.05，**p<0.01。
图6为总磷脂分馏物和丙酸对I/R皮肤损伤后纤维组织恢复的效果的图，其中，A为C57BL/6小鼠中I/R损伤12天后，利用苏木精-伊红、马森氏三色(Masson’s Trichome)、天狼猩红(picro-sirius red)、α平滑肌肌动蛋白(αSMA)抗体染色的皮肤褥疮部位的组织照片；B为C57BL/6小鼠中I/R损伤16天后利用苏木精-伊红、天狼猩红染色的皮肤褥疮部位的组织照片，比例尺，100μm。
图7为示出总磷脂分馏物和丙酸酯对I/R皮肤损伤后皮肤屏障改善的效果的图，C57BL/6小鼠中I/R损伤16天后利用苏木精-伊红、丝聚合蛋白(filaggrin)、外皮蛋白(involucrin)抗体染色的皮肤褥疮部位的组织照片，比例尺，100μm。
具体实施方式
下面，通过非限制性例来更详细地说明本发明。但是，下述实施例旨在用于例示本发明，本发明的范围不应解释为受下述实施例限制。
实施例1：猪肺中磷脂分馏物的纯化
提取方法使用了Moon等人(Mol Biol Rep.2012 39：4237-4247)中描述的方法。
简要地，在新鲜的猪肺组织中添加食盐水并用搅拌机破碎后，C添加CaCl2至5mM的浓度以促进水溶性破碎液中磷脂的沉淀。离心破碎的试样获得沉淀物后，将沉淀物溶解于氯仿：甲醇(1：2)有机溶剂并获得总脂肪分馏物(total lipid fraction)。将获得的总脂肪分馏物经硅胶开放柱，通过洗脱脂肪酸及中性脂肪来将其除去，单独收集磷脂分馏物。利用真空旋转蒸发仪浓缩纯化的磷脂分馏物后，在-70℃的温度下进行冷冻干燥。将试样储存在-20℃下直至使用。
为了在提取工序中轻松沉淀磷脂，通过使用CaCl2溶液来检查最终磷脂分馏物中是否存在残留钙的含量。Ca2+检测使用QuantichromTM钙含量测定试剂盒(QuantichromTMCalcium Assay Kit)(DICA-500，美国生物测定系统(BioAssy System，USA))，在有机溶剂提取过程中所有Ca2+离子均被去除。
实施例2：组合物的制备
将上述纯化的猪肺提取磷脂分馏物(TPF)浑浊于10微摩尔的丙酸/丙酸(pH 5.8)溶液中来使用。制备最终浓度为20mg/ml的总磷脂分馏物。
实验例：
1)试验材料
总磷脂分馏物、丙酸
2)实验方法
试验动物
种类及系列：C57BL/6(雌性(Female))
来源及生产商：小鼠接受通过(株)中央实验动物(韩国首尔)生产的品种。
获得及试验物质处理：6周龄时获得并适应7天后，使用磁铁(magnet)诱导褥疮。随后，每天将试验物质(磺胺嘧啶银(silver sulfadiazine)、4％的总磷脂分馏物、2％的总磷脂分馏物+丙酸)敷(dressing)2次，共处理3周。
组组成及试验设计
表1
Figure BDA0002358205380000131
表1为组组成及处理剂量设定试验评估项目
褥疮诱导部位恢复水平评估：肉眼评估、经皮失水率、体重变化、伤口大小(woundsize)
炎症反应改善评估：肥大细胞、中性粒细胞(neutrophil)、巨噬细胞(macrophage)浸润
纤维组织恢复评估：胶原蛋白形成及Ⅰ/Ⅲ构成比例
血管生成程度评估：α平滑肌肌动蛋白表达确认
皮肤屏障改善评估：丝聚合蛋白、外皮蛋白表达确认
细胞凋亡预防评估：凋亡细胞(apoptotic cell)确认
造成褥疮样损伤
磁板局部缺/再灌注(Magnetic plate Ischemia/Reperfusion model，I/R)。
I/R周期模型之前已报道过。麻醉小鼠后，剃除背部，轻轻拉动皮肤并将其放在平均重量为2.4g及磁力(magnetic force)为1000G(直径为12mm；厚度为5mm)的陶瓷磁铁之间。除肌肉外，真皮组织被放置在磁板之间，以承受2000mmHg的压力。每隔12小时重复一次缺血和灌注，并重复两次。根据每个实验时间表进行评估。
敷料
诱发褥疮后，用肉眼确认褥疮的发生，然后针对发生褥疮的部位，实验组和对照组均用生理食盐水先清洗褥疮部位。用浸有试验物质的湿纱布敷料盖上褥疮部位后，利用TegadermTM(3M Health Care，美国明尼苏达州圣保罗(St.Paul，MN，USA))进行缝合。为了固定用VetWrapTM(3M)再包裹一次。每天(早上/晚上)进行两次敷料替换，并持续3周。
皮肤病变的肉眼观察评估
评估缺血份上的皮肤组织的形状，并对其进行量化。通过观察期的程度来评估病变部位的恢复。通过近距离视觉摄影(DSLR，Dermascope)来测量褥疮面积。实验组和对照组均在褥疮诱发第二天用肉眼确认褥疮发生，然后在三周内共拍照10次。除了一些丢失的照片和难以用肉眼确认的小鼠以外，将8只小鼠用于资料分析。拍摄的褥疮发生部位使用imageJ软件v1.44(imageJ software v1.44)(美国贝塞斯达国家卫生研究所(NIH，Bethesda，USA))计算其面积。
组织病理学评估(苏木精-伊红、甲苯胺蓝(Toluidine blue)、马森氏三色、天狼星红(SiriusRed))
为了观察由于组织损伤引起的各种皮肤组织的恢复，在诱导褥疮后第四天、第八天、第十二天及第十六天从小鼠分离皮肤组织后，用10％的多聚甲醛(paraformaldehyde，PFA)固定，然后插入石蜡中。通过显微切片机将组织切片切成5μm的连续的横截面。将切割的组织转移到载玻片(美国宾夕法尼亚州飞世尔科学的Probe On PlusTM(Probe OnPlusTM，Fisher Scientific，PA，USA))，经脱脂、脱水并利用苏木精-伊红(皮肤组织变化)、甲苯胺蓝(mast cell infiltration)、马森氏三色和天狼星红(纤维组织恢复)染色进行组织学分析。通过各个染色法评估试验物质是否参与炎症反应及细胞浸润的减少和纤维组织恢复。
免疫组织化学染色法
分离浸润到皮肤组织中的炎性细胞，并使用用于改善皮肤屏障的特异性抗体来区分浸润的细胞的性质并确认皮肤的变化。利用参与诱发炎症反应改善(骨髓过氧化酶、CD68、一氧化氮合成酶、精氨酸酶1)、皮肤屏障改善(丝聚合蛋白、外皮蛋白)、血管生成(α平滑肌肌动蛋白)、细胞凋亡(TUNEL)等缺血损伤的特异性标记物进行免疫组织化学染色后，通过观察进行比较分析。使用共聚焦显微镜(Confocal microscopy)(德国耶拿蔡司的LSM700(LSM 700，ZEISS，Jena，Germany))获得荧光图像。
免疫印迹分析(Immunoblot assay)
将分离的皮肤组织溶解于PRO-PREP(韩国城南的iNtRON(iNtRON，Seongnam，Korea))后，在14000g条件下离心20分钟来将上清液用于实验。使用BCA试剂盒(BCAkit)(美国新罕布什尔州汉普顿的飞世尔科学(Fisher Scientific，hampton，NH，USA))对蛋白质浓度进行定量。将利用8～12％的凝胶十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(gel SDS-PAGE)从分离的上清液(总蛋白质量为30μg)电泳分离的蛋白质转化到(transfer)聚偏氟乙烯膜(PVDF membrane)(美国马塞诸塞州丹佛斯的密理博(Millipore，Danvers，MA，USA))。将转化的聚偏氟乙烯膜在5％的脱脂奶粉中封闭(blocking)1小时后，在4℃的温度下将第一抗体(Bax、裂解的凋亡蛋白酶3、甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH))与膜(membrane)反应12小时，并用TBST清洗(washing)，然后针对第一抗体的特异性第二抗体在室温下反应1小时。清洗膜后，用ECL溶液(密理博)显色之后，使用ChemiDocTMXRS+System(美国加利福尼亚州赫拉克勒斯的伯乐生命医学(Bio-RAD，Hercules，CA，USA))测定。
观察褥疮愈合中表达的炎症性细胞因子的变化
利用实时聚合酶链式反应(real-time PCR)比较分析参与伤口愈合过程的炎性细胞因子(单核细胞趋化蛋白1、白细胞介素1β、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α)的基因表达变化。使用TRIzol(美国加利福尼亚州卡尔斯巴德的Invitrogen(Invitrogen，Carlsbad，CA，USA))从分离的皮肤组织中提取总核糖核酸(RNA)。使用Prime ScriptTM RT反应混合物(日本东京宝日(Takara，Tokyo，Japan))从总核糖核酸模板合成单链互补脱氧核糖核酸(cDNA)合成。与CFX-96(美国加利福尼亚州赫拉克勒斯的伯乐生命医学)仪器使用qPCR 2x PreMIXSYBR(韩国首尔恩智生物科技(Enzynomics，Seoul，Korea))来对生成的互补脱氧核糖核酸进行实时聚合酶链式反应。用于扩增所有基因中所适用的聚合酶链式反应以如下条件进行：在95℃的温度下经变性(denaturation)过程10分钟后，并进行40个循环(在95℃的温度下10秒钟，在60℃的温度下15秒钟，在72℃的温度下30秒钟)。使用ΔCt定量方法将表达数据计算为循环阈值(Ct)。使用甘油醛-3-磷酸脱氢酶定量。
统计显著性检验
本发明的数据用“(平均±标准差)”表示，并且根据正态性分析对每个数据进行t检验。通过组之间的比较，以p<0.05水平判断显著性(*p<0.05，**p<0.01)。
上述实验例的结果如下。
总磷脂分馏物和丙酸对小鼠中缺血性皮肤损伤(cutaneous ischemia/reperfusion-I/R)后褥疮形成的保护效果评估
确认总磷脂分馏物对褥疮及皮肤压迫性溃疡(cutaneous pressure ulcer)产生的影响。对C57BL/6小鼠造成I/R损伤后形成的褥疮部位敷生理食盐水、磺胺嘧啶银、4％的总磷脂分馏物、2％的总磷脂分馏物+丙酸后，比较伤口面积。在本发明中，使用简单的、可再现的、非侵入性的实验小鼠模型来评估由体内(in vivo)I/R引起的皮肤压迫性溃疡的发病机理(图2的A)。确认添加4％的总磷脂分馏物的试验物质的敷料处理显著抑制I/R后皮肤压迫性溃疡的形成。并且，当处理在作为更低浓度的2％的总磷脂分馏物中添加丙酸的试验物质时，也与4％的总磷脂分馏物类似的水平抑制皮肤压迫性溃疡的形成。比较由I/R引起的褥疮部位的早期褥疮面积是否存在差异，其结果确认实验组(磺胺嘧啶银、4％的总磷脂分馏物、2％的总磷脂分馏物+丙酸)和对照组(Control)的形成面积均相似，表明实验前褥疮大小是均匀的(图2的B)。敷料处理4天后，4％的总磷脂分馏物、2％的总磷脂分馏物+丙酸处理小鼠的褥疮面积显示出更快的恢复，达到对照组小鼠的褥疮面积的约70～85％的水平(图2的B及C；磺胺嘧啶银：93％，4％的总磷脂分馏物：75％，2％的总磷脂分馏物+丙酸：85％)。但是，在处理2％的总磷脂分馏物+丙酸的组中，早期褥疮面积的减少率较低，6天(分别为25％、26％)后，减少率趋于相似。用4％的总磷脂分馏物敷料的小鼠的褥疮面积的大小在敷料后4天之后显著减少，用2％的总磷脂分馏物+丙酸敷料的小鼠在6天后褥疮面积大大减少，相反，对照组小鼠的伤口缝合(wound closure)时间长于处理总磷脂分馏物后的伤口缝合时间，因此褥疮的恢复速度具有显著差异。然后，测定了有关口部位皮肤的水分蒸发的经皮失水率(Transepidermal water loss，TEWL)(图2的D)。在褥疮或灼伤的情况下，角质的功能受损或完全不存在角蛋白的状态下，水分蒸发会增加。测定经皮失水率的结果显示，在敷料早期未发现其差异，但是，在伤口大小恢复到约50％以上之后，与对照组相比，总磷脂分馏物辅料的组的皮肤水分损失量趋于减少。尤其，未观察到4％的总磷脂分馏物和2％的总磷脂分馏物+丙酸之间的效果差异。并且，为了确认对各个试验物质的有害性而测定了小鼠的体重，结果未出现异常(图2的E)。本实验的结果表明，总磷脂分馏物在I/R之后可部分保护皮肤压迫性溃疡的形成。其中，高浓度(4％)总磷脂分馏物对褥疮的初始恢复速度具有更好的效果，但随后，低浓度(2％)总磷脂分馏物中添加有丙酸的试验物质也具有类似的恢复速度，两试验物质均显示出比磺胺嘧啶银更好的效果。
总磷脂分馏物和丙酸对小鼠中I/R损伤后伤口部位的炎症反应的效果
为了观察I/R损伤4天后炎症细胞的浸润，观察了组织学变化。在诸如治愈不佳的压迫性溃疡之类的条件下，活性氧(ROS)和各种酶所具有的中性粒细胞浸润被固着化，从而导致慢性炎症状态，这种溃疡的愈合在炎症得到控制后才开始。并且，异常的愈合过程通常还会导致纤维症(fibrosis)，通常，这些纤维性病变还参与肥大细胞(mast cell)的增加。一般而言，肥大细胞在伤口愈合过程中增加，并通过释放充满酶、组胺和几种活性胺(amine)的颗粒而引起炎症。从肥大细胞释放的活性胺成为周围血管渗漏的原因，因此可使单核细胞快速移动到受伤部位。在本实验中，利用甲苯胺蓝染色测定褥疮形成部位的肥大细胞浸润，从而观察到炎症反应的程度(图3)。在对照组的情况下，由I/R引起的皮肤损伤时肥大细胞的浸润显著增加。但是可见，在处理磺胺嘧啶银、4％的总磷脂分馏物及2％的总磷脂分馏物+丙酸的组中，肥大细胞的浸润程度显著减少(图3的A及B)。而且，统计学上，在处理2％的总磷脂分馏物+丙酸的组对肥大细胞的浸润的抑制效果最好。这些结果表明，总磷脂分馏物通过诱导介导炎症反应的脂肪细胞浸润的减少而降低了炎症反应，并表明通过添加丙酸增加了其效果。
总磷脂分馏物和丙酸对小鼠中I/R损伤后伤口部位巨噬细胞浸润的效果
中性粒细胞及巨噬细胞通过调节炎症及血管生成来参与I/R损伤。在本实验中，分析总磷脂分馏物及丙酸对皮肤I/R损伤后中性粒细胞及巨噬细胞的浸润及活性的影响。I/R损伤后并在敷料4天后，组织学观察到真皮水肿和皮下腺炎性细胞浸润(图4)。而且，利用骨髓过氧化酶和CD68抗体确认I/R后中性粒细胞和巨噬细胞的浸润的结果显示，与对照组相比，在处理试验组(磺胺嘧啶银、4％的总磷脂分馏物及2％的总磷脂分馏物+丙酸)的组中，中性粒细胞和巨噬细胞的数量显著减少。这表明，总磷脂分馏物可调节中性粒细胞及巨噬细胞的积累或功能，与低浓度(2％)的总磷脂分馏物一起处理丙酸时具有与高浓度(4％)的总磷脂分馏物相似或其以上的效果(图4的A及C)。皮肤中局部微环境促进经典激活的巨噬细胞(classically activated macrophage)(M1巨噬细胞)和替代活化的巨噬细胞(alternatively activated macrophage)(M2巨噬细胞)的发育。在早期组织损伤中观察到M1巨噬细胞，炎症是由包括单核细胞趋化蛋白1、一氧化氮(NO)、白细胞介素1(IL-1)、白细胞介素6、白细胞介素12(IL-12)及肿瘤坏死因子α在内的促炎性介质的分泌诱导的。相反，M2巨噬细胞在早期及中期阶段起到必要作用，诱导炎症的消失并促进组织修复。因此，本实验调查了I/R部位中M1及M2巨噬细胞的变化。我们首先确认了每组中一氧化氮合成酶(M1标记物)和精氨酸酶1(M2标记物)信使核糖核酸的表达(图4的C)。在处理磺胺嘧啶银、4％的总磷脂分馏物及2％的总磷脂分馏物+丙酸的组中I/R诱导后增加的一氧化氮合成酶信使核糖核酸水显著减少。但是，精氨酸酶1的信使核糖核酸水平趋于略有减少，但是统计学上不显著。免疫印迹分析确认的一氧化氮合成酶及精氨酸酶1表达变化也具有类似的倾向(图4的C)。接着，通过组织荧光染色确认组织中浸润。在I/R损伤早期M1及M2巨噬细胞显著增加。相反，当处理磺胺嘧啶银、4％的总磷脂分馏物及2％的总磷脂分馏物+丙酸时，总一氧化氮合成酶+M1巨噬细胞的数量显著减少，精氨酸酶1+M2巨噬细胞略有下降(图4的B)。但是，当比较一氧化氮合成酶及精氨酸酶1表达量的变化时，基于褥疮早期总磷脂分馏物的巨噬细胞减少量似乎更集中在M1巨噬细胞中。然后，利用实时聚合酶链式反应调查总磷脂分馏物及丙酸对I/R损伤部位中可能由M1巨噬细胞分泌的促炎细胞因子和趋化因子单核细胞趋化蛋白1、白细胞介素1β、白细胞介素6、肿瘤坏死因子α的信使核糖核酸水平的效果。磺胺嘧啶银、4％的总磷脂分馏物及2％的总磷脂分馏物+丙酸敷料显著抑制I/R损伤增加的炎症诱发性细胞因子及趋化因子的信使核糖核酸水平(图4的D)。但是，4％的总磷脂分馏物和2％的总磷脂分馏物+丙酸之间未出现显著差异。本实验表明4％的总磷脂分馏物及2％的总磷脂分馏物+丙酸可减少I/R后诱导的中性粒细胞及巨噬细胞的组织中浸润并缓解皮肤炎症，并表明低浓度(2％)的总磷脂分馏物中添加丙酸时可具有与高浓度(4％)的总磷脂分馏物相似的效果。
总磷脂分馏物和丙酸对小鼠中I/R损伤后细胞凋亡抑制的效果
I/R产生的活性氧(reactive oxygen species，ROS)可诱导皮肤细胞的细胞凋亡(apoptosis)，并可能引起由继发性坏死(necrosis)引起的炎症反应。为了确认总磷脂分馏物及丙酸对因I/R诱导而受损的皮肤的凋亡的效果，对皮肤组织进行了TUNEL染色。与对照组小鼠相比，在第四天皮肤组织的I/R诱导部位中敷料4％的总磷脂分馏物及2％、总磷脂分馏物+丙酸的组的凋亡的细胞数量显著减少(图5的A及B)。还确认了参与细胞凋亡的蛋白质的变化。Bax及裂解的凋亡蛋白酶3是在发生细胞凋亡时被激活的蛋白质，并被用作凋亡的处理物。4％的总磷脂分馏物及2％的总磷脂分馏物+丙酸减少I/R损伤时诱导的Bax及裂解的凋亡蛋白酶3的活性(图5的C)。但是，未发现两组之间的显著差异，但是，可通过在低浓度(2％)的总磷脂分馏物中添加丙酸来示出高浓度(4％)总磷脂分馏物的效果。这些结果表明，4％的总磷脂分馏物、2％的总磷脂分馏物+丙酸可抑制由皮肤I/R损伤诱导的凋亡细胞的形成及积累。
总磷脂分馏物和丙酸对小鼠中I/R损伤后伤口部位纤维组织恢复和血管生成的效果
在皮肤I/R损伤后第十二天、第十六天调查了总磷脂分馏物及丙酸对纤维组织的恢复的效果。在第十二天，表皮的再生在所有处理总磷脂分馏物的组中均已完成，但是在对照组和处理磺胺嘧啶银的组中表皮再生部分进行，水肿和出血几乎恢复(图6的A)。通过马森氏三色和天狼猩红比较了真皮中胶原蛋白的包含程度，由此掌握了纤维组织的恢复程度。与对照组相比，确认在处理磺胺嘧啶银、4％的总磷脂分馏物及2％的总磷脂分馏物+丙酸的所有组中真皮的纤维化的组织增加。正常真皮含有约80％的I型胶原蛋白和20％的Ⅲ型胶原蛋白。通常，受伤后经过24小时后，渗透的成纤维细胞(fibroblast)通过合成和分泌I型和III型胶原蛋白来开始形成新的基质(matrix)。与正常组织相比，肉芽肿组织(granuloma tissue)的Ⅲ型胶原蛋白增加的更多，然而，随着I型胶原蛋白是主要成分并更接近正常组织，I型胶原蛋白的比例越增加。为了观察I/R诱导后真皮内胶原蛋白生成比例，在第十六天用天狼猩红进行染色(图6的B)。可见在I/R诱导后仅处理磷酸盐缓冲液的对照组中，上层真皮中稀薄并呈绿色和淡黄色的III型胶原蛋白的比例相对较高。但是，在敷料磺胺嘧啶银、4％的总磷脂分馏物及2％的总磷脂分馏物+丙酸的试验组中，如在核心部位所见，形成了具有交联结构的较粗且成熟的红色、红黄色的I型胶原纤维。这表明，在由I/R引起的皮肤压迫性溃疡的愈合过程后半部分中，促进组织重塑(tissue remodeling)并诱导迅速恢复为正常皮肤。但是，在4％的总磷脂分馏物及2％的总磷脂分馏物+丙酸之间未发现显著差异，但是低浓度(2％)的总磷脂分馏物中添加丙酸可具有与高浓度(4％)总磷脂分馏物的处理相似的功效。
另外，为了观察皮肤再生过程中微血管密度，进行了α平滑肌肌动蛋白免疫染色，结果其出现在主要位于褥疮部位附近的真皮乳头层和核心部分(图6的A)。与对照组相比，试验组的α平滑肌肌动蛋白-阳性微血管密度显着增加，4％的总磷脂分馏物及2％的总磷脂分馏物+丙酸之间未发现显著差异。
总磷脂分馏物和丙酸对小鼠中I/R损伤后皮肤屏障改善的效果
在I/R损伤后第十六天，所有组的表皮再生均未完成，但是乎所有上皮重塑。为了确认I/R诱导后恢复的上皮的结构及状态，进行了免疫组织化学染色。从图7中可以确认，与对照组相比，磺胺嘧啶银、4％的总磷脂分馏物及2％的总磷脂分馏物+丙酸的处理的可增加作为上皮细胞分化标志物的丝聚合蛋白和外皮蛋白的表达。随着棘层(spinous layer)的细胞在粒层(granular layer)中最终分化为角质层，角质形成细胞(keratinocyte)通过从根本上改变其形态和生化特性来获得表皮保护功能。不溶性角化角蛋白(K1、K10)通过丝聚蛋白的作用聚集在一起，还通过在称为角蛋白图案的层上形成膜状结构，来起到以有效地保持角质层的保水性的功能。在细胞膜中，外皮蛋白、兜甲蛋白(loricrin)等后期角质化过程有效的蛋白质通过钙依赖性谷氨酰胺转氨酶(transglutaminase)等各种酶活性在来桥接细胞膜的内侧，形成不溶性心肌后，为了通过将角质形成细胞重构为难以剥离的坚硬层状结构来完成作为保护膜的功能，表皮层再生后通过分化表达它们对于正常表皮的组成很重要。在本研究中确认，I/R损伤后高浓度(4％)总磷脂分馏物、低浓度(2％)总磷脂分馏物+丙酸敷料可通过诱导角质形成细胞分化以及快速表皮再生来改善皮肤屏障，从而使正常皮肤得到有效恢复。

Claims (10)

1.一种用于治疗褥疮的组合物，其特征在于，包含动物肺组织提取物作为有效成分。
2.根据权利要求1所述的用于治疗褥疮的组合物，其特征在于，上述动物为猪。
3.根据权利要求1所述的用于治疗褥疮的组合物，其特征在于，上述肺组织提取物为磷脂分馏物。
4.根据权利要求1所述的用于治疗褥疮的组合物，其特征在于，上述组合物还包含有机酸或其盐。
5.根据权利要求4所述的用于治疗褥疮的组合物，其特征在于，上述有机酸为丙酸。
6.一种用于治疗灼伤的组合物，其特征在于，包含动物肺组织提取物作为有效成分。
7.根据权利要求6所述的用于治疗灼伤的组合物，其特征在于，上述动物为猪。
8.根据权利要求6所述的用于治疗灼伤的组合物，其特征在于，上述肺组织提取物为磷脂分馏物。
9.根据权利要求6所述的用于治疗灼伤的组合物，其特征在于，上述组合物还包含有机酸或其盐。
10.根据权利要求9所述的用于治疗灼伤的组合物，其特征在于，上述有机酸为丙酸。
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Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20230158688A (ko) 2022-05-12 2023-11-21 동의대학교 산학협력단 호박씨 성분을 포함하는 욕창 예방용 조성물 및 이를 포함하는 외용제

Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE4305553A1 (de) * 1992-12-18 1994-06-23 Rhone Poulenc Rorer Gmbh Pharmazeutisches und/oder kosmetisches Mittel
WO2001090304A2 (en) * 2000-05-19 2001-11-29 Human Genome Sciences, Inc. Nucleic acids, proteins, and antibodies
WO2005023287A1 (ja) * 2003-09-03 2005-03-17 Kringle Pharma Inc. ヒト組換えｈｇｆを含有する皮膚潰瘍予防治癒剤
CN101065130A (zh) * 2004-11-26 2007-10-31 大不列颠药品有限公司 磷脂用于伤口愈合的应用
CN102046178A (zh) * 2008-04-01 2011-05-04 安蒂博汀医药公司 用于皮肤护理的组合物和方法
JP5602891B2 (ja) * 2004-12-21 2014-10-08 ムスク・ファウンデイション・フォー・リサーチ・ディベロップメント 創傷治癒および組織再生を促進するための組成物および方法
WO2016059735A1 (ja) * 2014-10-16 2016-04-21 高田　任康 皮膚潰瘍の治療材
WO2016174269A1 (en) * 2015-04-30 2016-11-03 University Of Bremen A novel skin medical and cosmetic care product

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
IT1203873B (it) * 1987-04-08 1989-02-23 Chiesi Farma Spa Composizioni farmaceutiche che lo surfattante polmonare naturale, contengono. metodo di preparazione e
US6172203B1 (en) * 1996-02-07 2001-01-09 Alfredo Adolfo Hager Method for extracting and purifying pulmonary surfactant
KR100891595B1 (ko) * 2005-02-28 2009-04-03 주식회사 케이티앤지 혈액 단백질의 삼출을 감소시키는 조성물
KR20080058126A (ko) 2006-12-21 2008-06-25 닛세이 바이오 카부시키 가이샤 창상 치료제, 욕창 치료제 또는 예방제, 화상 치료제
KR101277630B1 (ko) * 2010-05-19 2013-06-21 주식회사 바이오피드 탈모방지 또는 육모 촉진용 조성물

Patent Citations (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE4305553A1 (de) * 1992-12-18 1994-06-23 Rhone Poulenc Rorer Gmbh Pharmazeutisches und/oder kosmetisches Mittel
WO2001090304A2 (en) * 2000-05-19 2001-11-29 Human Genome Sciences, Inc. Nucleic acids, proteins, and antibodies
WO2005023287A1 (ja) * 2003-09-03 2005-03-17 Kringle Pharma Inc. ヒト組換えｈｇｆを含有する皮膚潰瘍予防治癒剤
CN101065130A (zh) * 2004-11-26 2007-10-31 大不列颠药品有限公司 磷脂用于伤口愈合的应用
JP5602891B2 (ja) * 2004-12-21 2014-10-08 ムスク・ファウンデイション・フォー・リサーチ・ディベロップメント 創傷治癒および組織再生を促進するための組成物および方法
CN102046178A (zh) * 2008-04-01 2011-05-04 安蒂博汀医药公司 用于皮肤护理的组合物和方法
WO2016059735A1 (ja) * 2014-10-16 2016-04-21 高田　任康 皮膚潰瘍の治療材
WO2016174269A1 (en) * 2015-04-30 2016-11-03 University Of Bremen A novel skin medical and cosmetic care product

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
JEONG-SU MOON等: "Topical application of a phospholipid mixture purified from pig lungs ameliorates 2,4-dinitrofluorobenzene-induced allergic contact dermatitis in BALB/c mice" *
NAUMOV, A. A.等: "Effect of Liposomes Containing Antioxidant, Phospholipid, and Amino Acid on Skin Regeneration after Chemical Burn" *
张成: "磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号转导通路在急性坏死性胰腺炎中性粒细胞活化中的作用" *

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