CN110964792B - 一种评价试剂管生物相容性的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种评价试剂管生物相容性的方法，属于化学仪器技术领域。所述方法为取一定体积的溶液，测量并记录溶液的初始荧光值S0，然后将溶液放入待测试剂管中，在一定温度下放置一段时间后再测量并记录溶液的荧光值S1，根据荧光变化值△S与阈值之间的关系对试剂管的生物相容性进行判断。本发明评价试剂管生物相容剂的方法，将荧光引物、以及同时带有荧光基团和淬灭基团的引物放置入待测的试剂管进行加速试验，用试验前后荧光信号进行比较，检测荧光信号的增减，从而评价试剂管的生物相容性。

Description

一种评价试剂管生物相容性的方法
技术领域
本发明属于化学仪器技术领域，具体为一种评价试剂管生物相容性的方法。
背景技术
商品化的试剂管主要用于盛放各种生物试剂，其生物试剂的主要成分包括蛋白、核酸、脂肪以及其他化学物质。但是，蛋白、核酸等生物大分子物质存在固有的不稳定性和脆弱性，极易受到外界因素的影响，如温度、内包材、光照、微生物、酶等，易发生分解、降解或化学反应，最终导致其生物试剂的功能被破坏，无法发挥试剂盒应有的性能。
目前针对试剂管常用的检测方式包括微生物检测、热源检测、洁净度检测、酶活检测等，这些检测方式能够对相应的指标起到严格的把控。但是，即使能够通过这些检测，在实际使用过程中，也仍然出现各种因保存在其中的试剂性能降低甚至失效的质量问题。这种情况说明，现有的常规检测方法并不能有效地防止试剂管对生物试剂的影响。
试剂管的主要成分为聚氯乙烯(PVC)、聚乙烯(PE)、聚丙烯(PP)、聚酯树脂(PET)等，本身具有优良的耐酸耐碱、抗腐蚀等优良特性，难以和生物大分子发生反应。但加工商在进行注塑时，为了保证加工过程的顺利、物理上的强度或柔韧性，或为了增加美观程度等，往往会加入脱模剂、增塑剂、热稳定剂、色素等多种添加剂，而这些添加剂对生物大分子的影响，常规的微生物检测、热源检测、洁净度检测等，都无法进行验证。
发明内容
本发明的目的在于提供一种评价试剂管生物相容性的方法，利用不同荧光引物被降解后发生的荧光的变化值来评估导致荧光变化的因素，解决现有的常规试剂管检测方法无法有效把控其生物相容性的问题。
本发明目的通过以下技术方案来实现：
一种评价试剂管生物相容性的方法，所述方法为取一定体积的溶液，测量并记录溶液的初始荧光值S0，然后将溶液放入待测试剂管中，在一定温度下放置一段时间后再测量并记录溶液的荧光值S1，根据荧光变化值△S与阈值之间的关系对试剂管的生物相容性进行判断。
进一步，当荧光变化值△S＞阈值时，则表明试剂管的生物相容性不好；当荧光变化值△S≤阈值时，则表明试剂管的生物相容性良好。
初始荧光值S0和荧光值S1可采用市面上多种荧光检测设备进行检测，优选使用ABI7300/7500进行荧光值的测定；阈值判定标准可以根据生产企业、实验室以及荧光定量仪器的实际情况进行相应的调整，对于本领域技术人员很容易实现。
进一步，所述温度为-30～60℃，优选为16～40℃；所述放置时间为0.1～30天，优选为1～7天。在设定放置时间T时，应同时考虑荧光引物的衰减问题，可适当设立如合格对照等，作为检验的对照或参考。
进一步，所述溶液为无荧光信号的溶液，其荧光变化值△S＝|S1-S0|。此时，阈值可以优选为大于0。
进一步，所述无荧光信号的溶液为纯化水、氯化钠溶液、氯化钾溶液、磷酸缓冲液中的一种或几种。
进一步，所述溶液为带有修饰基因的引物经溶解稀释后得到的溶液。引物溶解稀释后得到的溶液的浓度优选为10μM～100μM。
进一步，所述引物的5’连接有一个荧光基团，其溶解稀释后溶液的荧光变化值△S＝|S0-S1|/S0％。此时，阈值可以优选为10％～100％。
进一步，所述荧光基团为FAM、HEX、ROX、CY3、CY5、TET、Texas Red、VIC、TAMRA、triple SH、JOE、Oregon Green、Pacific Blue、Light Cycler中的一种或几种。
进一步，所述引物的5’连接有一个荧光基团，3’连接有一个荧光基团对应的淬灭基团，其溶解稀释后溶液的荧光变化值△S＝|S1-S0|。此时，阈值可以优选为大于0。
进一步，所述荧光基团为FAM、TAMRA、HEX、JOE、ROX、TET、CY5、CY3、Texas Red中的一种或几种，所述淬灭基团为Eclips、BHQ1、BHQ2、BHQ3、Dabcyl、MGB中的一种或几种。
生产企业、实验室可按照实际情况选择以上三种方案的任意一种、两种或全部，也可和其他试剂管的检测方法配合进行检测。本发明评价方法基于一批试剂管的物理化学性状都比较接近，未考虑批内差异，而在实际检验中，应增大抽检量，通过统计学方法计算平均值、标准差以及变异系数等，评价一批试剂管的整体生物相容性情况。
与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：
本发明提供一种新的评价试剂管生物相容剂的方法，将荧光引物、以及同时带有荧光基团和淬灭基团的引物放置入待测的试剂管进行加速试验，用试验前后荧光信号进行比较，检测荧光信号的增减，从而评价试剂管的生物相容性。
通过本发明试剂管生物相容性的评价方法，可以作为试剂管的不合格标准，为科研实验，以及生化试剂盒、分子诊断试剂盒的大规模生产中出现异常情况提供解决办法的依据。
附图说明
图1为方案一测试及判断示意图；
图2为方案二测试及判断示意图；
图3为方案三测试及判断示意图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
下面结合具体原理及实施方式对本发明一种评价试剂管生物相容性的方法进行详细说明。
本发明评价试剂管生物相容性的方法根据溶液种类可以分为三个方案，三种方案对应的溶液分别为无荧光信号的溶液，5’连接有一个荧光基团的引物经溶解稀释后得到的溶液，以及5’连接有一个荧光基团，3’连接有一个荧光基团对应的淬灭基团的引物经溶解稀释后得到的溶液。分别利用这三种不同的溶液实现试剂管生物相容性的评价。具体操作过程如下：
引物的设计及引物溶解溶液的制备：
设计两条带有修饰基团的引物，两条引物的序列可以随机设计(具体序列不做要求)，其中一条引物(以下称为引物A)的5’连接有一个荧光基团，另一条引物(以下称为引物B)的5’连接有一个荧光基团，3’连接有一个荧光基团对应的淬灭基团。两条引物溶解定量，稀释到一定浓度后分别移取相同的体积备用。
通过以下三种方案实现试剂管生物相容性的检测。
方案一、进行空白测试：
取一定体积的无荧光信号的溶液，用荧光定量仪器测量荧光值并记录荧光值S0，同时加入到待测管中，在一定温度下放置一定的时间，再用荧光定量仪器测量荧光值S1。计算荧光变化值△S＝|S1-S0|，如△S≤ThBL(ThBL为阈值判定标准)，方案一测试通过，如△S>ThBL，则可判定待测管有物质析出，增强了溶液的荧光信号，方案一测试不通过。方案一测试及判断示意图如图1所示。
方案二，进行引物A的测试：
取一定体积的稀释好的引物A用荧光定量仪器测量荧光值并记录荧光值S0，同时加入到待测管中，在一定温度下放置一定的时间，再用荧光定量仪器测量荧光值S1。计算荧光变化值△S＝|S0-S1|/S0％，如△S≤ThPA(ThPA为阈值判定标准)，则方案二测试通过，如△S＞ThPA，则可判定引物A的荧光基团发生了降解，荧光信号减弱，方案二测试不通过。方案二测试及判断示意图如图2所示。
方案三，进行引物B的测试：
取一定体积的稀释好的引物B用荧光定量仪器测量荧光值并记录荧光值S20，同时加入到待测管中，在一定温度C下放置一定的时间T，再用荧光定量仪器测量荧光值S2-1。计算荧光变化比值△S＝|S1-S0|，如△S≤ThPB(ThPB为阈值判定标准)，则方案三测试通过，如△S>ThPB，则可判定引物降解，导致荧光基团和淬灭基团分离，荧光信号释放，方案三测试不通过。
生产企业、实验室可按照实际情况选择以上三种方案的任意一种、两种或全部，也可和其他试剂管的检测方法配合进行检测，对试剂管生物相容性进行判断。
另外，本申请引物溶液采用的引物为核酸类物质，属于生物类物质的一种，可以判定试剂管对核酸类物质的生物相容性，但对于判断试剂管与其他生物类物质，如蛋白、脂肪等的相容性，也有一定指导性。
实施例以某公司生产的两个不同批次0.5mL螺口离心管为例进行相容性的测定。
实施例1
本实施例采用无荧光信号溶液进行试剂管的生物相容性评价，具体无荧光信号溶液选用纯化水。具体评价方法为：
取25μL纯化水加入到两个批次(批号001和002)的待测试剂管中，每个批次三个试剂管，室温放置3天，放置前后的荧光值，计算过程及结果如下表1所示；本方案阈值判定标准ThBL为300。
表1实施例1放置试验前后纯化水的荧光值、计算过程及结果
Figure BDA0002316420410000061
实施例2
本实施例采用5’连接有一个荧光基团的引物进行试剂管的生物相容性评价，具体引物信息如下表2所示。
表2引物信息
引物名称 序列信息(5’→3’)
引物A TAMARA-GACATGGGGTTCGTAG
具体评价方法为：
将引物A用纯化水溶解稀释成浓度为100nM的溶液，取25μL稀释后的溶液加入到两个批次(批号001和002)的待测试剂管中，每个批次三个试剂管，室温放置3天，放置前后的荧光值，计算过程及结果如下表3所示；本实施例阈值判定标准ThPA为20％。
表3实施例2放置试验前后引物A溶液的荧光值、计算过程及结果
Figure BDA0002316420410000062
对于本实施例，当荧光基团替换成FAM、HEX、ROX、CY3、CY5、TET、Texas Red、VIC、triple SH、JOE、Oregon Green、Pacific Blue、Light Cycler中的其它种类或组合时，也能达到和本实施例TAMARA荧光基团相同的技术效果。
实施例3
本实施例采用5’连接有一个荧光基团，3’连接有一个荧光基团对应的淬灭基团的引物进行试剂管的生物相容性评价，具体引物信息如下表4所示。
表4引物信息
引物名称 序列信息(5’→3’)
引物B FAM-CCACAGCCCGTCCCGCCGATCTCG-Eclips
具体评价方法为：
将引物A用纯化水溶解稀释成浓度为100nM的溶液，取25μL稀释后的溶液加入到两个批次(批号001和002)的待测试剂管中，每个批次三个试剂管，室温放置3天，放置前后的荧光值，计算过程及结果如下表5所示；本实施例阈值判定标准ThPA为2000。
表5实施例3放置试验前后引物B溶液的荧光值、计算过程及结果
Figure BDA0002316420410000071
对于本实施例，当荧光基团替换成TAMRA、HEX、JOE、ROX、TET、CY5、CY3、Texas Red中的其它种类或组合时，淬灭基团替换成BHQ1、BHQ2、BHQ3、Dabcyl、MGB中的其它种类或组合时(需要保证相应的淬灭基团是和荧光基团对应的)，也能和本实施例FAM荧光基团、Eclips淬灭基团相同的技术效果。
从实施例1至3的结果可以判断，待测试剂管(批号001)经三个方案测试全部通过，说明其对核酸类物质具有较好的生物相容性；待测试剂管(批号002)中有部分试剂管能通过测试，有部分试剂管用实施例2和实施例3的引物测试不合格，测试未通过，说明其对核酸类物质的生物相容性较弱。技术人员可以根据实际应用过程中，对试剂管生物相容性要求来判断待测试剂管(批号002)是否能满足其生物相容性要求。
在具体应用实施中，我们同时从这两个批次的试剂管中各抽取三管，量取相同体积的PCR扩增试剂进行加速保存(在37℃下放置一周)，然后加入DNA模板在实时荧光定量PCR上进行扩增，结果如下表6：
表6两个批次的试剂管PCR扩增结果
Figure BDA0002316420410000081
结果可证明，用本发明方法检测不合格的试剂管存放扩增试剂后，造成CT值延后3～4个循环，已严重影响存放试剂的质量，说明本发明方法能实现试剂管生物相容性的评价。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (3)

1.一种评价试剂管生物相容性的方法，其特征在于，所述方法为取带有修饰基团的引物经溶解稀释后得到的溶液，测量并记录溶液的初始荧光值S0，然后将溶液放入待测试剂管中，再测量并记录溶液的荧光值S1，根据荧光变化值△S与阈值之间的关系对试剂管的生物相容性进行判断；
所述引物的5’连接有一个荧光基团，其溶解稀释后溶液的荧光变化值△S = |S0- S1|/S0%，阈值为10%~100%；或者所述引物的5’连接有一个荧光基团，3’连接有一个荧光基团对应的淬灭基团，其溶解稀释后溶液的荧光变化值△S=|S1-S0|，阈值大于0；
当荧光变化值△S＞阈值时，则表明试剂管的生物相容性不好；当荧光变化值△S≤阈值时，则表明试剂管的生物相容性良好。
2.如权利要求1所述一种评价试剂管生物相容性的方法，其特征在于，所述荧光基团为FAM、HEX、ROX、CY3、CY5、TET、Texas Red、VIC、TAMRA、triple SH、JOE、Oregon Green、Pacific Blue、Light Cycler中的一种或几种。
3.如权利要求2所述一种评价试剂管生物相容性的方法，其特征在于，所述淬灭基团为Eclips、BHQ1、BHQ2、BHQ3、Dabcyl、MGB中的一种或几种。
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Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105109185A (zh) * 2015-09-17 2015-12-02 江苏金材科技有限公司 一种药用包装材料制备方法
CN110317388A (zh) * 2019-07-18 2019-10-11 奥星衡迅生命科技（上海）有限公司 一种与药品直接接触的包装材料及其制备方法和应用

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105109185A (zh) * 2015-09-17 2015-12-02 江苏金材科技有限公司 一种药用包装材料制备方法
CN110317388A (zh) * 2019-07-18 2019-10-11 奥星衡迅生命科技（上海）有限公司 一种与药品直接接触的包装材料及其制备方法和应用

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
SHINYA,K.等.Evaluation of biological responses to polymeric biomaterial by RT-PCR analysis.IV:study of c-myc,c-fos and p53 mRNA expression.2000,521-527. *
张竹等.小容量注射剂内包材相容性试验.药物研究.2017,22-26,31. *
戴建国.生物材料生物相容性的分子生物学研究进展.国外医学生物医学工程分册.2004,360-364. *

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