CN110960555A

CN110960555A - 一种具有抗氧化作用的蜂蛹口服液

Info

Publication number: CN110960555A
Application number: CN201911367792.5A
Authority: CN
Inventors: 赵锋; 普江妮; 王坤美; 熊潇然; 赵芳
Original assignee: Puer University
Current assignee: Puer University
Priority date: 2019-12-26
Filing date: 2019-12-26
Publication date: 2020-04-07

Abstract

本发明公开一种具有抗氧化作用的蜂蛹口服液，属于口服液制备技术领域。本发明所述所述蜂蛹口服液由以下原料制备得到：蜂蛹匀浆液150～200重量份，蜂王浆90～120重量份，蜂蜜60～80重量份，羧甲基纤维素钠0.3～0.4重量份、β环胡精0.6～1.2重量份、柠檬酸0.3～1.2重量份。本发明所述蜂蛹口服液对由氧化应激引起的机体损伤起到保护作用，并且是安全无毒，且保护效果优于细胞保护剂氨磷汀。

Description

一种具有抗氧化作用的蜂蛹口服液

技术领域

本发明涉及一种具有抗氧化作用的蜂蛹口服液，属于口服液制备技术领域。

背景技术

氧化应激于1985年被Sies等首次提出，是指由于氧化剂生成异常增加导致内源性抗氧化剂相对不足而引起的消耗性代谢失调，导致重要细胞成分如DNA、蛋白质、脂质的氧化损伤，使机体发生多种病理变化，造成不可逆性损伤，如氧化应激能引起肾实质细胞和间质细胞发生空泡样变性、凋亡、坏死等一系列形态学的改变，降低肾小球，肾小管的功能，导致肾损伤；能够引起血管内皮细胞氧化损伤，导致血栓形成，栓子脱落后随血流方向移动堵塞血管可引起人体不同程度的血栓性疾病；能够导致DNA损伤，启动DDR激活p53并在转录水平活化p21,引起细胞衰老。

因此寻找外源性抗氧化剂对治疗疾病和保护人体健康是十分必要的，极有价值的。蜂蛹是民间喜食，医药钟爱的蜂产品，具有极高的营养价值和药用价值，也是优质天然抗氧化剂的来源，与人工合成的抗氧化剂相比安全，副作用小。蜂蛹营养丰富蛋白质中含有18种氨基酸，人体必需的8种氨基酸种类齐全经研究发现蜂蛹具有抗氧化、抗疲劳、抗衰老、抗炎症、抑制皮炎等功效是一种优质蛋白。但蜂蛹的开发利用程度较低，处于初级产品阶段，同时对蜂蛹的活性成分、药用、机体的保护作用的研究较少，因此对蜂蛹产品的深入研发，对其活性成分，机体保护作用的研究，与传统的蜂蛹利用方式相比，是一个极具活力，创新的领域。

发明内容

本发明的目的在于提供一种具有抗氧化作用的蜂蛹口服液，所述蜂蛹口服液由以下原料制备得到：蜂蛹匀浆液150～200重量份，蜂王浆90～120重量份，蜂蜜60～80重量份，羧甲基纤维素钠0.3～0.4重量份、β环胡精0.6～1.2重量份、柠檬酸0.3～1.2重量份。

优选的，本发明所述蜂蛹匀浆液的制备方法为：称取20～30g的蜂蛹，加入纯水100～150ml于胶体磨中均质，收集液体，经低温高速离心机离心5～10min，转速为3500～4000r/min，去沉淀收集上清液得到蜂蛹匀浆液。

本发明所述蜂蛹口服液的制备方法为常规方法，具体为：取蜂蛹匀浆液150～200重量份，蜂王浆90～120重量份，蜂蜜60～80重量份加入胶体磨中均质，加入羧甲基纤维素钠0.3～0.4重量份、β环胡精0.6～1.2重量份、柠檬酸0.3～1.2重量份充分混合均质，经低温高速离心去除泡沫(4℃，转速为3500～4000r/min，时间为3～5min)，分装存储，即得到蜂蛹口服液。

本发明所述口服液每10ml一支，每天3次，每次服用一支。

本发明的有益效果：

本发所述蜂蛹口服液对由氧化应激引起的机体损伤起到保护作用，并且安全无毒。通过构建果蝇的急性氧化损伤模型，顺铂诱导TCMK-1细胞(小鼠肾小管上皮细胞)的氧化损伤模型，证明口服液对由氧化应激所致损伤机体的保护作用，蜂蛹口服液能够有效的延长过氧化氢所致急性氧化损伤果蝇的寿命，对顺铂诱导氧化损伤的TCMK-1细胞起到有效的保护作用，且保护效果优于细胞保护剂氨磷汀。

附图说明

图1果蝇H₂O₂急性氧化损伤生存曲线；

图2果蝇H₂O₂急性氧化损伤的平均寿命；

图3果蝇从卵到化蛹的平均时间；

图4果蝇从蛹到羽化的平均时间；

图5毒性实验小鼠的体重；

图6蜂蛹口服液和合剂对TCMK-1细胞存活率的影响。

具体实施方式

下面结合具体实施例本发明作进一步的详细说明，但是本发明的保护范围并不限于所述内容。

实施例1

本实施例所述具有抗氧化作用的蜂蛹口服液，由以下原料制备得到：蜂蛹匀浆液150g，蜂王浆120g，蜂蜜60g，羧甲基纤维素钠0.3g、β环胡精0.6g、柠檬酸1.2g。

本实施例所述蜂蛹匀浆液的制备方法为：称取20g的蜂蛹，加入纯水100ml于胶体磨中均质，收集液体，经低温高速离心机离心5min，转速为3800r/min，去沉淀收集上清液得到蜂蛹匀浆液。

实施例2

本实施例所述具有抗氧化作用的蜂蛹口服液，由以下原料制备得到：蜂蛹匀浆液200g，蜂王浆90g，蜂蜜80g，羧甲基纤维素钠0.4g、β环胡精1.2g、柠檬酸0.3g。

本实施例所述蜂蛹匀浆液的制备方法为：称取30g的蜂蛹，加入纯水150ml于胶体磨中均质，收集液体，经低温高速离心机离心10min，转速为4000r/min，去沉淀收集上清液得到蜂蛹匀浆液。

实施例3

本实施例所述具有抗氧化作用的蜂蛹口服液，由以下原料制备得到：蜂蛹匀浆液180g，蜂王浆100g，蜂蜜70g，羧甲基纤维素钠0.35g、β环胡精1.0g、柠檬酸1.0g。

本实施例所述蜂蛹匀浆液的制备方法为：称取25g的蜂蛹，加入纯水130ml于胶体磨中均质，收集液体，经低温高速离心机离心8min，转速为3500r/min，去沉淀收集上清液得到蜂蛹匀浆液。

以实施例3为例对所制备得到的蜂蛹口服液的抗氧化损伤效果的进行验证：

1、动物模型试验：

(1)果蝇的急性氧化损伤模型：收集羽化8～12h的雄果蝇，随机分为空白组、100％口服液组、50％口服液组、25％口服液组、12.5％口服液组，每组3管，每管果蝇20只，于25摄氏度，光照12h，黑暗12h的恒温培养箱中培养20天，每3天更换一次培养基，第20天将各组的果蝇转移到干净的试管中，饥饿2h，向各试管中加入浸泡了30％的过氧化氢(含有6％的葡萄糖)滤纸片(湿润且无液滴低落)，每2h更换一次滤纸片，每4h记录一次果蝇的生存情况，直至果蝇全部死完为止，绘制生存曲线，计算其平均寿命。

H₂O₂诱导的果蝇急性氧化损伤在0～76h内的生存曲线如图1所示，由图1可以看出36h各口服液生存曲线与空白组明显分离，向右移动，至76h右移结束，其中100％的口服液组与空白组相比右移距离更为明显，这说明口服液对急性氧化损伤的果蝇具有延寿作用，具有浓度依赖性。图2为H₂O₂诱导果蝇急性氧化损伤在0～76h的平均生存寿命，从图2中可看出各口服液的果蝇H₂O₂急性氧化损伤的平均寿命高于空白组，100％的口服液组高于其他口服液组，这也说明了口服液对急性氧化损伤的果蝇具有延寿作用且与浓度有关。

图1为果蝇H₂O₂急性氧化损伤生存曲线、图2为果蝇H₂O₂急性氧化损伤平均寿命；口服液能够延长H₂O₂造成急性氧化损伤果蝇的寿命，与空白组相比，100％、50％、25％、12.5％的口服液对急性氧化损伤的果蝇具有延寿作用，但无显著差异(图1,2)。图3果蝇从卵到化蛹的平均时间；图4果蝇从蛹到羽化的平均时间。说明口服液组与空白组相比无显著差异,说明口服液对果蝇无毒副作用。

(2)口服液对果蝇生活史的影响：分别收集雄果蝇3只，雌果蝇5只于基础培养基组和100％口服液、50％口服液、25％口服液、12.5％口服液组中，24h后放走亲蝇，同时统计各培养基中果蝇卵的数量，此后每天定时观察记录各培养基中果蝇的发育情况，统计卵到化蛹，蛹到羽化的果蝇数量及时间，计算果蝇平均化蛹时间，平均羽化时间。

图3为口服液对果蝇蛹化的影响，图4为口服液对果蝇羽化的影响，结果经单因素方差分析，无显著性差异。从图3中可看出与空白组相比，各口服液组对果蝇从卵到化蛹时间的影响无明显差异，提示了口服液组不会阻碍果蝇的正常化蛹且不受口服液浓度影响，这说明口服液对果蝇幼虫的生长，发育无影响。从图4中可看出与空白组相比各口服液组对果蝇从蛹到羽化的平均时间的影响无明显差异，提示了口服液组不会阻碍果蝇幼虫的进一步发育羽化成虫，同样也不受口服液浓度的影响，这也再次说明了口服液对果蝇的生长、发育无影响，能够完成正常的生活史，是安全、无毒的。

2、口服液的毒性实验

随机选取昆明小鼠5只编号，灌胃口服液0.3ml/d,连续灌胃11天，记录小鼠体重，及生理反应情况。

TCMK-1细胞的氧化损伤模型

将TCMK-1细胞(小鼠肾小管上皮细胞)按适当浓度接种于96孔板中，待细胞70％～80％融合时，换成含有药物的DMEM/F12培养液并开始实验；实验分成9组，分别为：空白组：细胞培养液进行培养；模型组：用含30μmol/L顺铂的细胞培养液培养，诱导TCMK-1细胞损伤；10％口服液组：用含30μmol/L顺铂和10％(12.9mg/ml)口服液的培养液培养；5％口服液组：用含30μmol/L顺铂和5％(6.45mg/ml)口服液的培养液培养；2.5％口服液组：用含30μmol/L顺铂和2.5％(3.225mg/ml)口服液的培养液培养；10％合剂组：用含30μmol/L顺铂和10％(12.9mg/ml)合剂(成分是蜂蛹、蜂王浆和蜂蜜，设置目的是为了说明添加剂对细胞的毒性)的培养液培养；5％合剂组：用含30μmol/L顺铂和5％(6.45mg/ml)合剂的培养液培养；2.5％合剂组：用含30μmol/L顺铂和2.5％(3.225mg/ml)合剂的培养液培养；阳性对照组：用含30μmol/L顺铂和3.0mmol/L氨磷汀的细胞培养液培养；分别于3h、6h、24h取样用MTT比色法测定各组TCMK-1细胞活性。

口服液对小鼠的毒性实验：图5为口服液毒性实验小鼠体重变化图，分别为第1天到第11天的体重，从图中可以看出在实验周期内实验小鼠无死亡现，小鼠的体重存在着一定的波动，但波动的差异不明显，这可能是小鼠与小鼠的摄食情况有关，提示口服液对小鼠的正常生活，生理活动没有显著的影响，是安全的。

口服液对顺铂诱导TCMK-1细胞氧化损伤的保护作用：图6为各口服液组、氨磷汀祖对顺铂诱导TCMK-1细胞氧化损伤存活率的影响，分别为TCMK-1细胞在3h、6h、24h的存活率；由图可看出6h与3h的TCMK-1细胞存活率相比，各组(除空白组)的TCMK-1细胞的存活率明显下降，这说明顺铂诱导了TCMK-1细胞发生氧化损伤，24h与6h的TCMK-1细胞存活率相比，2.5％的口服液组、5％的口服液组的TCMK-1细胞存活率升高，高于10％的口服液组，氨磷汀组、模型组的细胞存活率；10％的口服液组，氨磷汀组、模型组的细胞存活率持续下降，但高于模型组的TCMK-1细胞存活率。这说明口服液对顺铂诱导氧化损伤的TCMK-1细胞具有的保护作用且效果优于细胞保护剂氨磷汀组。

常规抗氧化剂的筛选，主要是通过体外实验对羟基自由基、超氧阴离子自由基、DPPH自由基清除能力的评价，具有一定的局限性，不能直接作的反应出其体内的效果。本发明实施例所采用的技术，动物模型，不仅能有效的呈现出体内、体外的效果，而且易得，廉价。体外模型：通过顺铂诱导TCMK-1细胞氧化损伤，给与口服液治疗，以细胞的存活率作为指标，操作简单，效果明现，体内模型：通过过氧化氢诱导的果蝇急性氧化损伤，以生存率，平均寿命为指标，效果具有动态性，说服力强；所制备的口服液，对有由氧化应激所导致的机体损伤由明显的保护作用，能够延长由过氧化氢造成急性损伤果蝇的寿命，提高顺铂致TCMK-1细胞氧化损伤的存活率，并且是安全无毒的。

对实施例1和实施例2中的口服液进行相同的动物模型试验，也具有抗氧化损伤的效果。

Claims

1.一种具有抗氧化作用的蜂蛹口服液，其特征在于：所述蜂蛹口服液由以下原料制备得到：蜂蛹匀浆液150～200重量份，蜂王浆90～120重量份，蜂蜜60～80重量份，羧甲基纤维素钠0.3～0.4重量份、β环胡精0.6～1.2重量份、柠檬酸0.3～1.2重量份。

2.根据权利要求1所述具有抗氧化作用的蜂蛹口服液，其特征在于：蜂蛹匀浆液的制备方法为：称取20～30g的蜂蛹，加入纯水100～150ml于胶体磨中均质，收集液体，经低温高速离心机离心5～10min，转速为3500～4000r/min，去沉淀，收集上清液得到蜂蛹匀浆液。