CN110945028B - 用非岩藻糖基化促凋亡抗cd19抗体与抗cd20抗体或化疗剂联合治疗b细胞恶性肿瘤 - Google Patents

用非岩藻糖基化促凋亡抗cd19抗体与抗cd20抗体或化疗剂联合治疗b细胞恶性肿瘤 Download PDF

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Abstract

本发明涉及一种新型联合疗法，其涉及用于治疗表达CD19的癌症B细胞的抗CD19抗体。一种优选的方法是抗CD19促凋亡MAb或Fc优化的促凋亡人源化MAb。在本发明的方法中，一些抗CD20剂(如

Description

用非岩藻糖基化促凋亡抗CD19抗体与抗CD20抗体或化疗剂联 合治疗B细胞恶性肿瘤
技术领域
本发明涉及使用抗体或抗体和化疗剂的联合疗法领域。尤其是，本发明涉及优选非岩藻糖基化的(afucosylated)促凋亡抗CD19抗体，优选与另一种抗体和/或化疗剂的联合疗法在治疗CD19阳性B细胞恶性肿瘤(更具体地表达CD19的弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)和滤泡性淋巴瘤(FL))中的用途。
背景技术
手术、化疗、激素疗法和/或放射疗法是对抗癌症的一般治疗方法。在最近的几十年中，还采用了生物疗法或免疫疗法。尽管如此，许多肿瘤仅对现有疗法有部分响应，并且还会发生抗性的情况。因此，强烈需要替代的癌症治疗方法。
非霍奇金淋巴瘤(NHL)的B细胞类型包括：小淋巴细胞/B细胞慢性白血病(SLL/B-CLL)、淋巴浆细胞样淋巴瘤(LPL)、套细胞淋巴瘤(MCL)、滤泡性淋巴瘤(FL)、弥漫性大细胞淋巴瘤(DLBCL)和伯基特淋巴瘤(BL)(Armitage等人,2017,pii:S0140-6736(16)32407-2)。
滤泡性淋巴瘤(FL)是第二大最常见类型的非霍奇金淋巴瘤(NHL)，并且占所有淋巴瘤的10％～20％。FL通常会影响55～60岁的个体。FL的特征在于在几个淋巴结部位处无痛肿胀，其中约70％的病例中骨髓受累。作为单一药物或与一线化疗联合使用的利妥昔单抗是FL的护理标准。尽管FL常常对治疗有响应，但很少有疗法(如果有的话)可以治愈。
在改善预后的其他尝试中，MAb也已与其他分子组合进行了测试。例如，已评估了抗CD19 MAb在与嘌呤类似物(氟达拉滨)、布鲁顿酪氨酸激酶抑制剂(依鲁替尼)或磷酸肌醇3激酶抑制剂(艾代拉里斯)联合治疗非霍奇金淋巴瘤(分别为WO 2013024095、WO2016189014和WO 2017032679)时的协同作用。
在DLBCL的传播模型中研究了用抗CD19美登木素生物碱免疫偶联物(SAR3419)与利妥昔单抗联合治疗DLBCL(同族专利WO 2013017540)。对于SAR3419和利妥昔单抗治疗后观察到的存活改善，在单个治疗受试者中没有统计学意义。
在另一项研究(同族专利WO2012067981)中，研究了非岩藻糖基化的抗CD19 MAb(16C4-afuc MAb)单独的功效或与抗CD20抗体组合的功效。证实164-afuc Ab是通过ADCC(抗体依赖性细胞毒性)，而不是通过CDC(补体依赖性细胞毒性)诱导表达CD19的细胞死亡。研究了抗16C4-afuc MAb和抗CD20 MAb联合疗法治疗B细胞淋巴瘤。在某些但并非全部伯基特模型中，显著的是，联合疗法所赋予的抗肿瘤活性持续时间比任一种单一治疗都更长，而在提供的其他B细胞肿瘤(DLBCL和ALL)模型中，它更为适度。而且，实验结果没有证明用MAb抗CD19和抗CD20的联合治疗能够诱导肿瘤的完全缓解。
因此，能与抗CD20 Mab结合使用运作良好的抗CD19 MAb 19的鉴定用于能够在患有B细胞相关肿瘤的患者中诱导肿瘤消退和缓解的联合疗法会有所帮助。
基于基因表达谱的分析，可以确定弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)的两个主要亚型：生发中心B细胞样(GCB)亚型和活化B细胞样(ABC)亚型。GCB-DLBCL与CD10、BCL6和生发中心分化的其他标志物的表达增加有关。GCB-DLBLC的预后好于ABC-DLBCL的预后，但30％的GCB-DLBCL不能用疗法的主体R-CHOP方案(与利妥昔单抗、环磷酰胺、阿霉素、长春新碱、泼尼松的联合疗法)进行治疗。ABC DLBCL的特征在于NF-kB信号传导途径的组成性激活。几项临床试验表明：当将R-CHOP治疗与硼替佐米(蛋白酶体抑制剂，其可阻止NF-kB活化)或来那度胺(IFN-β产生的诱导剂)联合使用时，ABC DLBCL患者的预后得到改善(Khan N等人,2015,Blood 126(16):1869-70)。
仍然强烈需要能够在患有B细胞相关肿瘤(如FL和DLBCL)的患者中诱导肿瘤消退和/或缓解的联合疗法。
发明内容
本发明涉及抗CD19抗体，用于在有需要的患者中治疗表达CD19和可能的CD20的非霍奇金淋巴瘤，更具体地是表达CD19的弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)或表达CD19的滤泡性淋巴瘤(FL))。
在一种实施方式中，该抗体包含鼠抗体R005-1或R005-2的CDR，其VH和VL氨基酸序列描述于下表：
氨基酸序列VH 氨基酸序列VL
R005-1 SEQ ID NO:29 SEQ ID NO:31
R005-2 SEQ ID NO:33 SEQ ID NO:35
在一种个实施方式中，该抗体包含人源化抗体IDD001的CDR(由R005-1的人源化得到)，其VH和VL氨基酸序列描述于下表。更准确地，VL序列本身是SEQ ID NO:37上的氨基酸1-130，而VH序列本身是SEQ ID NO:39上的氨基酸1-121。
氨基酸序列重链 氨基酸序列轻链
IDD001 SEQ ID NO:39 SEQ ID NO:37
在一种实施方式中，该抗体包含变体人IgG1 Fc区。
这个变体区在人IgG Fc区的氨基酸位置243、292、300、305、396，或243、292、300、305、326、396，或243、292、300、305、326、333、396中的各氨基酸位置处的氨基酸取代。根据Kabat的编号系统对Fc区中的这些氨基酸残基进行编号。该抗CD19抗体用于治疗DLBCL或FL。本发明涉及的DLBCL和FL是其细胞表达CD19的那些。
在一种实施方式中，该抗体是非岩藻糖基化的。
在一种实施方式中，该抗体是促凋亡的。
在一种实施方式中，该抗体包含上述的CDR，和上述的变体人IgG1 Fc区之一。优选地，VH和VL序列是人源化的，具有人类框架区和可能的CDR改变。该抗体可以是非岩藻糖基化的。
在优选的实施方式中，这些抗体包含抗体R005-1的CDR，其VH和VL氨基酸序列分别为SEQ ID NO:29或SEQ ID NO:31。
在优选的实施方式中，VH和VL序列是人源化的，特别是它们包含上述CDR和人框架区或人源化框架区。在仍然优选的实施方式中，一些CDR也可以是人源化的，特别是如本文后面针对VL序列的CDR1和CDR2所公开的。在具有人源化框架区和VL CDR1和CDR2的典型实施方式中，抗体包含SEQ ID NO:39(aa 1-123)和37(aa 1-103)上所示的VH和VL序列。在优选的实施方式中，该抗体是IDD001，其整个重链和整个轻链的序列分别在图10的SEQ IDNO:39和37上。
本发明还涉及一种包含根据本发明的抗CD19抗体和合适的药物载体的药物，其用于治疗表达CD19和可能的CD20的非霍奇金淋巴瘤，特别是用于治疗表达CD19和可能的CD20的DLBCL或FL。
在一种实施方式中，这种抗CD19抗体用于治疗DLBCL、亚型ABC、GCB和/或ABC/GCB。更具体地，这种抗体用于与另一种试剂(如化疗药物)的联合疗法。所述化疗药物可以是长春花生物碱，特别是长春新碱。
在另一种实施方式中，这种抗CD19抗体用于治疗FL。更特别地，这种抗体与另一种试剂(如单克隆抗体)一起用于联合疗法。所述单克隆抗体可以是抗CD20抗体，特别是利妥昔单抗。
本发明还涉及特别是用于治疗表达CD19和可能的CD20的非霍奇金淋巴瘤(特别是用于治疗表达CD19和可能的CD20的DLBCL或FL)的试剂盒或药物组合物，其包括：第一组合物，其包含根据本发明的抗CD19抗体和合适的药物载体；和第二组合物，其包含本文公开的另一种抗体或化疗药物和合适的药物载体，其中，第一组合物和第二组合物用于同时、分别或依次给药于有需要的患者。
本发明的另一个目的是人源化单克隆抗CD19抗体，其具有如本文所公开的IDD001抗体的CDR，并且更具体地具有在SEQ ID NO:39上的VH序列1-121和在SEQ ID NO:37上的VL序列1-103。在一种实施方式中，该人源化抗体包含变体人IgG1 Fc区，其中该变体区优选在人IgG1 Fc区的每个氨基酸位置243、292、300、305、396，或243、292、300、305326、396、396，或243、292、300、305、326、333、396处包含氨基酸取代，其中Fc区中氨基酸残基的编号是Kabat之一。在下文中将给出若干实施方式。在一种实施方式中，人源化单克隆抗CD19抗体具有SEQ ID NO:39的重链和SEQ ID NO:37的轻链。这些人源化抗体用于治疗癌症，尤其是表达CD19的癌症。
本发明还涉及一种用于治疗表达CD19和可能的CD20的非霍奇金淋巴瘤的方法，特别是用于治疗表达CD19和可能的CD20的DLBCL或FL的方法，其中，将本文所公开的药物组合物或试剂盒以足够的量给药所述患者。
本发明涉及一种用于在有需要的患者中治疗弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)的方法，其包括给药有效量的根据本发明的药物组合物或本文公开的人源化抗CD19单克隆抗体。
本发明还涉及一种用于治疗滤泡性淋巴瘤(FL)的方法，其包括给药有效量的根据本发明的药物组合物和有效量的抗CD20单克隆抗体。
本发明甚至进一步涉及一种用于在有需要的患者中治疗滤泡性淋巴瘤(FL)的方法，其包括给药有效量的本文公开的人源化抗CD19单克隆抗体。
本发明还涉及一种用于在有需要的患者中治疗癌症的方法，其包括给药有效量的人源化单克隆抗CD19抗体，其具有如本文所公开的IDD001抗体的CDR，并且更具体地具有在SEQ ID NO:39上的VH序列1-121和在SEQ ID NO:37上的VL序列1-103。在一种实施方式中，该人源化抗体包含变体人IgG1 Fc区，其中，该变体区优选包含在所述人IgG1 Fc区的氨基酸位置243、292、300、305、396，或243、292、300、305、326、396，或243、292、300、305、326、333、396中的各氨基酸位置处的氨基酸取代，其中，Fc区中的氨基酸残基的编号为Kabat之一，在下文中将给出若干实施方式。在一种实施方式中，人源化单克隆抗CD19抗体具有SEQID NO:39的重链和SEQ ID NO:37的轻链。特别地，癌症表达CD19。
具体实施方式
抗CD19抗体
CD19是95kDA的I型跨膜糖蛋白，其在B细胞和滤泡树突状细胞中表达，而在干细胞、前B细胞和正常髓系细胞中不表达。B细胞中的CD19表达开始于前B细胞阶段，并且在其分化为浆细胞的整个过程中得以保留。作为B细胞受体(BCR)的一部分，CD19参与B细胞活化的调节和体液免疫的诱导。重要的是，CD19在绝大多数与B细胞相关的肿瘤病例中表达，并且该表达在肿瘤发展的整个过程中得以保留。在WO2012/1999中已经公开了具有修饰的人IgG1 Fc的抗CD19单克隆抗体。本公开进一步提供了嵌合的、人源化的和人的抗CD19抗体、抗CD19抗体融合蛋白及其片段。
更具体地，本发明涉及用于治疗其细胞表达CD19的弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)或滤泡性淋巴瘤(FL)的抗CD19抗体，其包含：
(i)抗体R005-1、R005-2或IDD001之一的CDR，其VH和VL氨基酸序列描述于下表，
氨基酸序列VH 氨基酸序列VL
R005-1 SEQ ID NO:29 SEQ ID NO:31
R005-2 SEQ ID NO:33 SEQ ID NO:35
IDD001 1-121SEQ ID NO:39 1-103SEQ ID NO:37
(2i)变体人IgG1 Fc区，其中，该变体区包含在所述人IgG1 Fc区的氨基酸位置243、292、300、305、396，或243、292、300、305、326、396，或243、292、300、305、326、333、396中的各氨基酸位置处的氨基酸取代，其中，Fc区中的氨基酸残基的编号为Kabat之一。
在一种实施方式中，Fc区在人IgG1 Fc区的氨基酸位置Phe243、Arg292、Tyr300、Val305、Lys326和Pro396(Kabat)的各氨基酸位置上被修饰。
根据本发明，在修饰的IgG1 Fc区中，Phe243被Leu、Trp、Tyr、Arg、Ile、Ala或Gln取代；Arg292被Pro、Ala或Gly取代；Tyr300被Leu、Lys、Phe、Ala或Ile取代；Val305被Leu，Ala或Ile取代；Lys326被Ala、Val、Glu、Asp、Met、Ser、Asn或Trp取代；Pro396被Leu、Ala或Ile取代。
根据本发明，该Fc区具有SEQ ID NO:1(Fc34)所示的氨基酸序列。编码该Fc区的核酸描述于SEQ ID NO:2。
在另一种实施方式中，Fc区在人IgG1 Fc区的氨基酸位置Phe243、Arg292、Tyr300、Val305、Lys326、Glu333和Pro396(Kabat)中的各氨基酸位置处被修饰。
根据本发明，在修饰的Fc IgG1 Fc区中，Phe243被Leu、Trp、Tyr、Arg、Ile、Ala或Gln取代；Arg292被Pro、Ala或Gly取代；Tyr300被Leu、Lys、Phe、Ala或Ile取代；Val305被Leu，Ala或Ile取代；Lys326被Ala、Val、Glu、Asp、Met、Ser、Asn或Trp取代；Pro396被Leu、Ala或Ile取代；并且Glu333被Val、Gly、Ala、Gln、Asp、Asn、Lys、Arg或Ser取代。
根据本发明，该Fc区具有SEQ ID NO:3(Fc24)所示的氨基酸序列。编码该Fc区的核酸描述于SEQ ID NO:4。变体是本文所称的Fc39区，其相对于Fc24具有一个差异，例如Val305被Ile取代。
在一种实施方式中，该抗体包含VH和VL氨基酸序列，VH和VL氨基酸序列描述于下表：
氨基酸序列VH 氨基酸序列VL
mR005-1 SEQ ID NO:29 SEQ ID NO:31
mR005-2 SEQ ID NO:33 SEQ ID NO:35
IDD001 SEQ ID NO:39的1-121 SEQ ID NO:37的1-103
在优选的实施方式中，抗体包含其VH和VL氨基酸序列分别为SEQ ID NO:29和SEQID NO:31的抗体mR005-1的CDR；或者它包含分别为SEQ ID NO:29和SEQ ID NO:31的VH和VL氨基酸序列。该抗体可包含变体人IgG1Fc区，其中，如本文所公开的，该变体区在人IgG1 Fc区的氨基酸位置243、292、300、305、396，或243、292、300、305、326、396，或243、292、300、305、326、333、396中的各氨基酸位置处的氨基酸取代。所述抗体可以是非岩藻糖基化的。
在优选的实施方式中，VH和VL序列是人源化的，特别是它们包含上述CDR和人框架区或人源化框架区。在典型的实施方式中，抗体包含图10中所示的VH和VL序列以及SEQ IDNO:39(VH)和37(VL)。
本发明的抗CD19抗体R005-1的CDR为：
本发明的抗CD19抗体R005-2的CDR为：
除了VL链的CDR1和CDR2，本发明的抗CD19人源化抗体IDD001的CDR与R005-1相同：
根据定义，这些CDR包括通过缺失、取代或添加一个或多个氨基酸而产生的变体CDR，该变体保持了原始CDR的特异性。通用编号系统提供了具有最短氨基酸序列的CDR定义或最小CDR定义。
在一种实施方式中，该抗体包含其序列描述于SEQ ID NO:16、6、13和/或8、9、10的CDR。在一种实施方式中，该抗体包含其序列描述于SEQ ID NO:5、6、7和/或8、9、10的CDR。在一种实施方式中，该抗体包含其序列描述于SEQ ID NO:11、12、13和/或14、15、10的CDR。在一种实施方式中，该抗体包含其序列描述于SEQ ID NO:28、18、25和/或20、21、22的CDR。在一种实施方式中，该抗体包含其序列描述于SEQ ID NO:17、18、19和/或20、21、22的CDR。在一种实施方式中，该抗体包含其序列描述于SEQ ID NO:23、24、25和/或26、27、22的CDR。在一种实施方式中，该抗体包含其序列描述于SEQ ID NO:17、18、19和/或20、21、22的CDR。在一种实施方式中，该抗体包含其序列描述于SEQ ID NO:23、24、25和/或26、27、22的CDR。
在一种实施方式中，该抗体包含其序列描述于SEQ ID NO:5、6、7和/或41、43、10的CDR。在一种实施方式中，该抗体包含其序列描述于SEQ ID NO:11、12、13和/或42、44、10的CDR。在一种实施方式中，该抗体包含其序列描述于SEQ ID NO:16、6、13和/或41、43、10的CDR。
根据一特征，已经在哺乳动物细胞中产生的本发明的抗CD19抗体，其沿着本发明的突变区产生了根据本发明的没有岩藻糖基化或非岩藻糖基化的抗体。哺乳动物细胞可以是野生型细胞。它可以是啮齿动物细胞，特别是CHO细胞。啮齿动物细胞可以是野生型的，如特别是野生型CHO。抗体具有在该细胞中产生的糖基化特征。野生型以其通常的含义使用，也就是说与天然存在的典型形式的物种表型有关。
特别是，来自转染的细胞，例如野生型CHO，本发明允许表达携带双天线型的普通N-连接寡糖结构的重组抗体，其包含半乳糖基化和没有岩藻糖基化的带有末端GlcNac的长链。根据优选特征，单克隆抗体具有低水平的岩藻糖，如WO2012/010562中所述。
在一种实施方式中，抗CD19抗体能够产生ADCC而没有CDC。具有这种特征的抗体的实例是具有在氨基酸位置243、292、300、305、396的各氨基酸位置处包含氨基酸取代的变体人IgG1 Fc区的抗体。此类抗体描述于US 9,120,856，其通过引用而并入本文。
在另一种实施方式中，抗CD19抗体能够产生CDC和ADCC活性。具有这种特征的抗体的实例是具有在氨基酸位置243、292、300、305、326、396，或243、292、300、305、326、333、396的各氨基酸位置处包含氨基酸取代的变体人IgG1 Fc区的抗体。这样的抗体在WO 2012/010562中公开。
在一种实施方式中，具有本文公开的可变区的这些抗体触发程序性细胞死亡或凋亡。
在一种实施方式中，这些抗体包含含有R005-1、R005-2或IDD001等的CDR或VH和VL区的一个Fab以及对另一种肿瘤抗原(尤其是癌细胞B细胞上的抗原，如下文所公开，例如CD20)具有特异性的一个Fab。
抗CD20抗体
本文所述的联合疗法可以还包含抗CD20抗体。
可以根据本文所述的方法和组合物使用任何合适的抗CD20抗体。合适的抗CD20抗体包括例如已知的抗CD20抗体、可商购获得的抗CD20抗体或使用本领域众所周知的方法开发的抗CD20抗体。
结合CD20抗原的抗体的实例包括：“C2B8”，现被称为“利妥昔单抗”(“RITUXANTM”)；钇[90]标记的2B8鼠抗体，被称为“Y2B8”或“替伊莫单抗”(ZEVALINTM)(美国专利号5,736,137，通过引用而明确地并入本文)；鼠IgG2a“B1”，也被称为“托西莫单抗(Tositumomab)”(贝克曼库尔特公司)，可选地用131I标记以生成“131I-B1”抗体(碘I131托西莫单抗，BEXXARTM)(美国专利号5,595,721，通过引用而明确地并入本文)；鼠单克隆抗体“1F5”(Press等人，Blood 69(2):584-591(1987))及其变体，包括“框架修补”或人源化的1F5(WO03/002607,Leung,S.)；ATCC保藏HB-96450；鼠2H7和嵌合2H7抗体(美国专利号5,677,180，通过引用而明确地并入本文)；人源化2H7；huMax-CD20(丹麦Genmab公司)；AME-133(应用分子进化公司)；A20抗体或其变体，如嵌合或人源化的A20抗体(分别为cA20，hA20)(US2003/0219433，Immunomedics公司)；以及单克隆抗体L27、G28-2、93-1B3、B-CI或NU-B2，可从国际白细胞分型研讨会(International Leukocyte Typing Workshop)(Valentine等人,In:Leukocyte Typing HI(McMichael,Ed.,p.440,Oxford University Press(1987))获得。在一示例性实施方式中，本发明的方法和组合物利用与抗CD19抗体或其片段组合的利妥昔单抗或其抗原结合片段。
轻链可变区和重链可变区或利妥昔单抗的完整核酸和氨基酸序列在美国专利号5,736,137中公开。特别地，利妥昔单抗的轻链可变区的核酸和氨基酸序列在美国专利号5,736,137的图4和SEQ ID NO:6中公开。利妥昔单抗的重链可变区的核酸和氨基酸序列在美国专利号5,736,137的图5和SEQ ID NO:9中公开。美国专利号5,736,137的SEQ ID NO:6和9以及图4和5的核酸和氨基酸序列通过引用而明确地并入本文。利妥昔单抗还可以由CHO细胞转染瘤制备，该CHO细胞转染瘤包含存在于保藏在美国典型培养物保藏中心(ATCC)的保藏号为69119的大肠杆菌宿主细胞中的载体DNA。利妥昔单抗也可以由保藏在ATCC的保藏号为HB 11388的杂交瘤2B8产生。
CD20抗体也可以是单克隆人类抗体、人源化抗体或嵌合抗CD20抗体。在本公开的组合物和方法中使用的抗CD20抗体可以是裸抗体、免疫缀合物或融合蛋白。在某些实施方式中，本公开的抗CD20抗体可以以足以耗尽循环B细胞的量介导人抗体依赖性细胞毒性(ADCC)、补体依赖性细胞介导的细胞毒性(CDC)和/或凋亡。在示例性实施方式中，本发明的抗CD20抗体是已经被改造为相对于亲本抗体具有增强的ADCC活性的抗CD20抗体。产生具有增强的ADCC活性的抗体变体的方法描述于上文。在某些实施方式中，本发明的抗CD20抗体是具有增强的ADCC活性的非岩藻糖基化抗体。
化疗剂
用于癌症治疗的药剂的其他实例是用于靶向治疗的药剂。这些试剂通过削弱参与肿瘤起始和/或进展的特异性分子机制来干扰肿瘤生长。用于靶向治疗的药剂是小分子或抗体，并且通常根据分子靶标进行分类。靶向治疗的分子靶标的实例是参与细胞信号传导、细胞凋亡、基因转录、DNA修复、细胞周期进程和/或检查点、血管生成、侵袭和转移的蛋白。
与单独的化疗相比，用本发明的抗体与现有的化疗相结合靶向CD19在杀死肿瘤细胞方面将更加有效。
多种药物已用于癌症的化疗中。
化疗剂根据其作用方式可被分为几类。以下是化疗类别的详尽清单：烷基化剂(例如环磷酰胺)、蒽环类药剂(例如阿霉素)、细胞骨架破坏剂(例如紫杉醇)、埃博霉素(例如伊沙匹隆)、组蛋白脱乙酰基酶抑制剂(例如伏立诺他)、拓扑异构酶的抑制剂(例如伊立替康)、激酶抑制剂(例如伊马替尼)、核苷酸类似物和前体类似物(例如氮杂胞苷)、肽抗生素(例如博来霉素)、铂类药剂(例如顺铂)、维A酸(例如维甲酸)、长春花生物碱和衍生物(例如长春新碱)。
用于癌症治疗的其他药剂通常被分类为用于激素治疗的药剂，包括激素、激素合成的抑制剂、激素受体拮抗剂。
在一种方法中，在治疗癌症患者时，将抗体治疗或方案(包括至少两种抗体的组合)增加至标准化疗方案。在一种实施方式中，另外的单克隆抗体针对癌性B细胞或淋巴细胞的抗原，如CD20。
对于抗体和另外的抗癌剂对癌细胞发挥协同作用的那些组合，与单独给药时第二种药剂的标准剂量相比，可以减少另外的药剂的剂量。该抗体可以与有效增强癌细胞敏感性的一定量的抗癌药物共同给药。
在本发明的一种方法中，用抗体组合或双特异性抗体靶向CD19和CD20在化疗剂的给药之前给药至患者。一种替代方法包括在替代方案中给药抗体组合物或双特异性抗体和化疗剂之前给药化疗剂。在另一种实施方式中，抗体组合或双特异性抗体和化疗剂同时给药。
因此，本发明包括针对CD19和由癌B细胞表达的另一种抗原(特别是CD20)的双特异性或多价单克隆抗体的用途。该抗体包含对CD19特异性的Fab和对其他靶标特异性的Fab。尤其是，对CD19特异性的Fab包含如本文所公开的VH和VL区，其由CDR或R005-1、R005-2或优选IDD001的整个VH和VL区限定。在双特异性抗体也靶向CD20的情况下，除了本文公开的对CD19特异性的Fab之外，还可以使用来自上文公开的任何抗CD20单克隆抗体(例如来自利妥昔单抗(Rituxan))的Fab。优选地，双特异性抗体包含人IgG1 Fc，尤其是如本文公开的突变的Fc，如Fc24、Fc34或Fc39。这样的双特异性抗体也被本发明涵盖在单克隆抗体上，并且也是本发明的目的。
本发明的方法可被包括在涉及使用至少一种其他治疗方法(如辐射，小分子或抗体的化疗)的治疗方案中。本发明的方法可直接包括给药足够量的针对另一靶标的至少一种其他抗体和/或至少一种化疗药物(如小分子)，以与本发明的抗体同时、分别或依次给药至哺乳动物(包括人)。该组合更通常用于对单独药物或单独本发明的多种抗体/一种抗体响应不佳并且该组合产生协同作用的癌症(特别是侵袭性癌症)有用。
抗体的修饰和改变
可以对本发明的多肽的结构进行修饰和改变，并且仍然获得具有相似特征的分子。换句话说，这些修饰和改变在技术人员的技术范围内。例如，某些氨基酸可以在不明显丧失活性的情况下取代序列中的其他氨基酸。因为决定多肽的生物学功能活性的是多肽的相互作用能力和性质，所以可以在多肽序列(或者，当然，其基础的DNA编码序列)中进行某些氨基酸序列取代，并且仍然获得具有类似性质的多肽。
基于其对氨基酸的一般知识，本领域技术人员能够(包括通过试验和分析的常规实验)确定在不显著改变抗体的Fc区或任何其他部分(包括结合域)的功能的情况下可以进行缺失、添加或取代的氨基酸和位置。
Phe243被Leu、Trp、Tyr、Arg、Ile、Ala或Gln取代；Arg292被Pro、Ala或Gly取代；Tyr300被Leu、Lys、Phe、Ala或Ile取代；Val305被Leu、Ala或Ile取代；Lys326被Ala、Val、Glu、Asp、Met、Ser、Asn或Trp取代；Pro396被Leu、Ala或Ile取代；和Glu333被Val、Gly、Ala、Gln、Asp、Asn、Lys、Arg、Ala或Ser取代全部已在chR005-1 Fc24单克隆抗体中一一测定，并被证明是提供用于人血清中的ADCC全血和CDC的可接受取代。
本发明的抗体可以是单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体、完整的人抗体、双特异性抗体(例如针对CD19和CD20的抗体)、缔合MAb、多价抗体组合物、抗体药物缀合物或至少具有一种或两种特异性(specities)的抗体片段。“人源化抗体”或“嵌合人源化抗体”是指源自非人抗体(通常为鼠抗体)的抗体，其保留或基本上保留亲本抗体的抗原结合特性，但在人中的免疫原性较低。
产生抗体的方法是技术人员已知的。
为了产生本发明的抗CD19抗体，可以用一种或几种表达载体转染哺乳动物细胞，优选啮齿动物细胞如CHO细胞，优选野生型细胞(例如野生型CHO细胞)。优选地，可以用轻链的表达载体和重链的表达载体共转染细胞。为了产生可用于本发明的抗体，本领域技术人员可以参考WO2012/010562，其通过引用而并入本文。
联合疗法
如本文所用，术语“组合”以其最广义的方式使用，并且意指用至少两种治疗方案治疗受试者。如本文所用，术语“药物”可以涵盖抗体和化疗剂。
因此，用于治疗FL的“组合抗体疗法”旨在表示用至少两种药物疗法来治疗受试者，更具体而言，用至少一种抗CD20抗体与至少一种抗CD19抗体的组合来治疗受试者，但是不同抗体方案的给药时机可以改变，只要实现这些抗体的组合的有益效果即可。抗CD20抗体与抗CD19抗体组合的治疗可以在同一时间(例如同时或并行)或在不同时间(例如连续或依次)，或者同一时间与不同时间的组合进行。
同样，用于治疗DLBCL的“联合疗法”旨在表示用至少两种药物方案来治疗受试者，更具体而言，用至少一种化疗剂(例如长春新碱)与至少一种抗CD19抗体的组合来治疗受试者，但是不同方案的给药时机可以改变，只要实现这些药物的组合的有益效果即可。化疗剂(例如长春新碱)与抗CD19抗体组合的治疗可以在同一时间(例如同时或并行)或在不同时间(例如连续或依次)，或者同一时间与不同时间的组合进行。
为了本公开的目的，同一时间(例如，同时)给药是指以相同制剂或分开的制剂的形式一起给药药物，其中给药可以间隔几分钟至几小时，但不超过一天。如本文所用，在不同时间(例如依次)给药是指相隔数小时至数天、数周甚至数月地给药组合疗法的药物。
因此，在某些实施方式中，经历联合疗法的受试者可以在同一时间(例如，同时)或在不同时间(例如，依次，以任何顺序，在同一天或在不同天)接受两种药物，只要在经历治疗的受试者中引起两种药物的组合的治疗效果即可。在一些实施方式中，对于一种给药，将同时给予药物组合，但是其他给药将包括以任意顺序(在同一天或不同天)依次给药。当两种药物同时给药时，它们可以以分开的药物组合物(每种药物组合物包含该组合的任一种药物)的方式给药；或者可以以单一药物组合物(包含这些药物中的两种)的方式给药。
治疗活性
还可以通过供临床医生和实验室使用的常规技术，诸如筛查技术，如磁共振成像(MBS)扫描、X射线成像、计算机断层扫描(CT)扫描、流式细胞术或荧光激活细胞分选仪(FACS)分析、生物发光成像(例如，荧光素酶成像)、骨扫描成像和包括骨髓穿刺(BMA)的肿瘤活检取样来评估肿瘤响应的肿瘤形态变化(例如，总体肿瘤负荷、肿瘤大小等)或肿瘤消失。本公开的方法包括使用对需要治疗B细胞疾病(如FL和DLBCL)的受试者赋予积极治疗响应的联合疗法。关于使用抗CD20抗体和抗CD19抗体(例如来治疗FL)或使用抗CD19抗体和化疗剂如长春新碱(例如来治疗DLBCL)的联合疗法的积极治疗响应旨在是指与这些药物的抗肿瘤活性相关的疾病改善和/或与疾病相关的症状改善。也就是说，可以观察到抗增殖作用、预防肿瘤进一步生长、减小肿瘤大小、减少癌细胞数量和/或减少由肿瘤性B细胞介导的一种或多种症状。因此，例如，疾病的改善可被表征为完全响应。
联合疗法将优选诱导表达CD19的非霍奇金淋巴瘤(尤其是表达CD19的FL或DLCBL)的消退或缓解。联合疗法还可以诱导对表达CD19的非霍奇金淋巴瘤(其对目前的抗体和/或化疗耐药)如某些DLBCL例如ABC亚型的治疗作用(包括细胞死亡或凋亡)。
术语“消退”是指肿瘤块大小减小；肿瘤的转移性侵袭性降低；肿瘤生长速度降低；患者生存率提高；和/或预后改善的观察到的临床相关性增加，如肿瘤浸润淋巴细胞增加和肿瘤血管形成减少等。消退可被视为“部分响应”，即，在没有新病变且持续至少一个月的情况下，所有可测量的肿瘤负荷(例如，受试者体内存在的肿瘤细胞数量)减少了至少约50％。
术语“缓解”是指不再可检测到肿瘤或肿瘤细胞。缓解可能被认为是“完全响应”，即没有临床可检测疾病，任何先前异常的影像学检查、骨髓和脑脊液(CSF)正常化。这种响应在根据本公开的方法治疗后必须持续至少一个月。
本发明的组合物可被用作抑制哺乳动物(特别是人类)癌细胞的生长的作为联合疗法的“治疗组合物”，和/或用于进一步与放射疗法组合。优选给药有效量的治疗组合物，以相对于对照组的治疗而言，抑制或逆转表达CD19的癌症的进展，或者统计学上显著增加缓解或无进展生存期(即，在患者患有所述目标癌症即DLBCL或FL的治疗期间和之后未恶化的时间长度)或总体生存(也被称为“生存率”，即，在被诊断出患有癌症或进行癌症治疗后还存活一段时间的人的百分比)。
药物组合物
本联合疗法中使用的药物以治疗有效剂量给药。术语“治疗有效剂量”、“治疗有效量”或“有效量”是指当与一定量的抗CD20抗体(例如在治疗FL中)或化疗剂(例如在治疗DLBCL中)联合给药时相对于包含肿瘤性B细胞的癌症如FL和DLBCL的受试者的治疗而言，带来了积极的治疗响应的抗CD19抗体的量。在一些实施方式中，每种药物的治疗有效剂量为约0.1mg/kg至约200mg/kg，例如约1mg/kg至高达约100mg/kg。在一些实施方式中，剂量可以是1、3、5、10、15、20、25或30mg/kg。本发明提供了与至少两种不同的抗体或者至少一种抗体和至少一种化疗剂的联合疗法或方案。由于这个结果，给定治疗效果所需的一种药物(抗体或化疗剂)的治疗有效剂量可能低于单独使用时的剂量，因此给定的低剂量值(例如等于或小于60mg/kg)可能是足够的量，例如1、3、5、10、15、20、25或30mg/kg。
这样的“治疗有效剂量”、“治疗有效量”或“有效量”可以由本领域技术人员常规地确定。实际给药的化合物的量通常将由医生根据相关情况来确定，包括要治疗的病症、选择的给药途径、实际给药的化合物、个体患者的年龄、体重和响应、患者症状的严重程度等。本领域技术人员还应理解，剂量可以取决于所给药的肽的稳定性。
药物组合物可以通过注射给药，即，静脉内、肌内、皮内、皮下、十二指肠内或腹膜内给药。也可以采用其他药物递送系统，例如脂质体。
本发明的抗CD19单克隆抗体可以在根据本发明的特异性第二单克隆抗体或化疗剂之前或之后给药(统称“依次治疗”)和/或同时给药(“并行治疗”)。该组合的依次治疗(如预处理、后处理或重叠治疗)还包括以下方案：药物交替使用，或者一种组分长期给药而另一种组分间歇给药。该组合的组分可以以相同或分开的组合物的方式并且通过相同或不同的给药途径来给药。
包含本发明的治疗组合物的药物组合物可以含有用于修饰、维持或保持例如该组合物的pH、渗透压、粘度、透明度、颜色、等渗性、气味、无菌性、稳定性、溶解或释放速率、吸附或渗透的制剂材料。药物组合物中的主要媒介物或载体本质上可以是水性或非水性的。例如，合适的媒介物或载体可以是注射用水或生理盐水，可能补充有肠胃外给药组合物中常见的其他物质。中性缓冲盐水或与血清白蛋白混合的盐水是其他示例性媒介物。其他示例性药物组合物包含约pH 7.0-8.5的Tris缓冲剂，或约pH 4.0-5.5的乙酸盐缓冲剂，因此其可进一步包括山梨糖醇或其合适的替代物。在本发明的一种实施方式中，可通过将具有所需纯度的所选组合物与冻干饼或水溶液形式的任选配制剂(Remington'sPharmaceutical Sciences,同上)混合来制备结合剂组合物以进行贮存。此外，可以使用适当的赋形剂如蔗糖将结合剂产物配制成冻干物。
制剂组分以给药的部位可接受的浓度存在。例如，使用缓冲剂将组合物维持在生理pH或稍低的pH，通常在约5至约8的pH范围内。用于肠胃外给药的特别合适的媒介物是无菌蒸馏水，其中将结合剂配制成适当保存的无菌等渗溶液。另一种制备可以涉及将所需分子与长效剂一起配制，该长效剂提供用于产品的可控或持续的释放，然后该产品可以通过积存注射(如可注射的微球、可生物蚀解的颗粒、聚合化合物(聚乳酸、聚乙醇酸)、微珠或脂质体)进行递送。
在另一方面，适合于肠胃外给药的药物制剂可以在水溶液中，优选在生理相容的缓冲液如汉克斯氏液、林格氏液或生理缓冲盐水中配制。水性注射混悬剂可含有增加混悬剂粘度的物质，如羧甲基纤维素钠、山梨糖醇或葡聚糖。其他药物组合物包括涉及在持续或控制递送制剂中的结合剂分子的制剂对于本领域技术人员而言将是显而易见的。
配制各种其他持续或控制递送方式的技术，如脂质体载体、可生物蚀解的微粒或多孔珠和积存注射，也是本领域技术人员已知的。用于体内给药的药物组合物通常必须是无菌的。这可以通过无菌过滤膜过滤来完成。当将组合物冻干时，可以在冻干和重构之前或之后使用该方法进行灭菌。肠胃外给药的组合物可以以冻干形式或溶液形式贮存。另外，肠胃外组合物通常被放入具有无菌进入口的容器，例如，具有被皮下注射针可刺穿的塞子的静脉内溶液袋或小瓶。
一旦配制了药物组合物，就可以将其以溶液、混悬剂、凝胶、乳剂、固体或脱水或冻干的粉末形式贮存在无菌小瓶中。这样的制剂可以以即用形式或在给药前需要重构的形式(例如冻干)进行贮存。
对于任何化合物，可以在细胞培养测定中或在动物模型如小鼠、大鼠、兔、狗、猪或猴子中最初估计治疗有效剂量。动物模型也可以用于确定合适的浓度范围和给药途径。然后可以将此类信息用于确定在人体内给药的有用剂量和途径。确切剂量将根据与需要治疗的受试者有关的因素来确定。调节剂量和给药以提供足够水平的活性化合物，或维持所需的效果。可以考虑的因素包括疾病状态的严重程度、受试者的总体健康状况、受试者的年龄、体重和性别、给药的时间和频率、药物组合、反应敏感性和对疗法的响应。长效药物组合物可以根据特定制剂的半衰期和清除率以每3至4天、每周或每两周一次的方式给药。给药频率将取决于所用制剂中分子的药代动力学参数。通常，给药组合物直至达到实现所需效果的剂量。因此，该组合物可以随着时间推移以单次剂量或以多次剂量(以相同或不同的浓度/剂量)的方式或以连续输注的方式进行给药。常规进行适当剂量的进一步精制。可以通过使用适当的剂量响应数据来确定合适的剂量。
附图说明
图1：鼠单克隆抗体R005-1 MAb和R005-2 MAb的核苷酸和氨基酸序列，(A):VH(B):VL。氨基酸显示为一个字母代码。
氨基酸序列VH 核酸序列VH 氨基酸序列VL 核酸序列VL
mR005-1 SEQ ID NO:29 SEQ ID NO:30 SEQ ID NO:31 SEQ ID NO:32
mR005-2 SEQ ID NO:33 SEQ ID NO:34 SEQ ID NO:35 SEQ ID NO:36
图2：嵌合Fc24(SEQ ID NO:3和4)或Fc34(SEQ ID NO:1和2)变体MAb的氨基酸和核酸序列。Fc39的序列与Fc24的序列相同，Ile位于305位。氨基酸显示为一个字母代码。根据文献，Fc区的氨基酸编号基于Kabat数据库(CH1：aa n°118至215；铰链：aa n°216至230；CH2：aa n°231至340；CH3：aa n°341至447)。
本发明中使用的各种Fc相对于天然Fc(Fc0)的变化：
突变体的名称 相对于天然人IgG1 Fc(Fc0)的突变
Fc34 F243L/R292P/Y300L/V305L/K326A/P396L
Fc24 F243L/R292P/Y300L/V305L/K326A/E333A/P396L
Fc39 F243L/R292P/Y300L/V305I/K326A/E333A/P396L
图3：MAb抗CD19/IDD001对DLBCL亚型ABC的肿瘤生长的体内抑制。3A：异种移植模型LY0257；3B：异种移植模型LY2264；3C：异种移植模型LY3604；3D：具有剂量变化的异种移植模型LY2264。
图4：MAb抗CD19/IDD001对DLBCL亚型GCB的肿瘤生长的体内抑制。4A：异种移植模型LY2214；4B：异种移植模型LY2318；4C：具有剂量变化的异种移植模型LY2214。
图5：MAb抗CD19/IDD001对DLBCL亚型ABC/GCB的肿瘤生长的体内抑制。5A：异种移植模型LY2345；5B：异种移植模型LY2266；5C：具有剂量变化的异种移植模型LY2345。
图6：MAb抗CD19/IDD001与长春新碱组合对DLBCL ABC亚型的肿瘤生长的体内抑制。
图7：MAb抗CD19/IDD001与阿霉素组合对DLBCL ABC亚型的肿瘤生长的体内抑制。
图8：MAb抗CD19/IDD001与MAb抗CD20(利妥昔单抗)组合FL的肿瘤生长的体内抑制。
图9：共同靶向CD19和CD20以较低的MAb浓度提高生存率。
图10：轻链和重链人源化序列，抗体IDD001。
实施例1：如WO 2012/010562或US 9,120,856中所描述的来生产抗CD19抗体。
进行了关于触发最高水平的程序性细胞死亡或凋亡的能力的鼠MAb筛选。选择了两种抗CD19的MAb，鼠单克隆抗体R005-1 MAb和R005-2 MAb的核苷酸和氨基酸序列如图1所示。
为了改善癌细胞的消耗，进行了Fc工程改造以增强依赖于ADCC和CDC的细胞毒性效力。优化的Fc编码的Fc24(SEQ ID NO:3和4)或Fc34(SEQ ID NO:1和2)变体MAb的氨基酸和核酸序列在图2中以一个字母代码描述。根据文献，Fc区的氨基酸编号基于Kabat数据库(CH1：aa n°118至215；铰链：aa n°216至230；CH2：aa n°231至340；CH3：aa n°341至447)。本发明中使用的各种Fc相对于天然Fc(Fc0)的变化。
Fc优化的人源化MAb IDD001的完整序列描述于图10中。
实施例2：Fc区中的不同氨基酸取代：
在这些实验中，基于实施例1的chR005-1 Fc24生成了几种替代的单克隆抗体。这种抗体具有结合至CD19的可变区和包含突变F243L/R292P/Y300L/V305L/K326A/E333A/P396L的IgG1 Fc区。由此制备了该抗体的变体，其中一个取代氨基酸已被改变。
针对在人血清中存在的CDC和全血中的ADCC，分析了这些变体。
所获得的结果呈现于根据美国申请13/811,134的文件历史中细则132的2016年1月11日的声明，其通过引用而并入本文。结果表明，以下变体取代对全血中的ADCC和人血清中的CDC具有功能，而没有观察到相对于IDD001的原始取代的显著影响：
-F243:L可以被W、Y、R、Q、I、A取代
-R292:P可以被G或A取代
-V305:L(或I)可以被A取代
-P396:L可以被I或A取代
-Y300:L可以被K、F、I、A取代
-K326:A可以被V、E、D、M、S、N、W取代
-E333:A可以被V、G、D、K、S、N、R、Q取代。
因此，本领域技术人员可以理解，可以在Fc区中进行取代，同时基本上保持Fc或包含Fc的抗体的效应子功能，并且这些取代被本发明所涵盖。
实施例3：(利妥昔单抗)商购自罗氏公司。
实施例4：(长春新碱)商购自Selleck(目录号：S1241)
实施例5：(阿霉素)商购自Selleck(目录号：S1208)
实施例6：对PDX模型的DLBCL的体内研究：每只小鼠在右侧皮下接种一个原发性人肿瘤异种移植模型(LY0257、LY2214、LY2264、LY2266、LY2318、LY2345或LY3604)肿瘤片段(直径2-3mm)以进行肿瘤发展。当平均或单个肿瘤大小达到100-250mm3时，将小鼠随机(如有必要，将涉及滚动入选)分为3组。每组含有1或2只小鼠。分组和给药开始的天数表示为第0天。调整给药体积以适应体重(给药体积＝5μL/g)。在接种肿瘤后，每天检查动物的发病率和死亡率。在常规监测时，检查动物的肿瘤生长和治疗对正常行为的任何影响，如活动能力、食物和水的消耗、体重增加/减少、眼睛/毛发光泽，以及任何其他异常影响。根据每个子集内的动物数量来记录死亡和观察到的临床体征。在最终治疗后应用两周的无给药观察。由于肿瘤体积(TV)超过3000mm3，因此在研究终止之前处死了媒介物组中的动物。每周两次通过卡尺在两个维度上测量肿瘤大小。使用以下公式以mm3表示肿瘤体积：TV＝0.5a×b2，其中a和b分别是肿瘤的长径和短径。每周两次测量体重。当单个小鼠的体重减轻≥15％时，对小鼠给予用药假期，直到其体重恢复到体重减轻为止。在以下条件下，在死亡之前或达到昏迷状态之前，通过人为安乐死来终止单个动物或整组的寿命实验。
患者衍生品的DLBCL体内概念证明(PDX模型)：选择了7个淋巴瘤异种移植模型(在cDNA的CRO细胞库CD19+中选择)，分别为LY0257、LY2214、LY2264、LY2266、LY2318、LY2345和LY3604。这些模型的癌症亚型列于下表。
模型命名 亚型
LY0257 NHL(DLBCL,ABC,MYD88 L265P)
LY2214 NHL(DLBCL,GCB)
LY2264 NHL(DLBCL,ABC,MYD88 L265P)
LY2266 NHL(B细胞,ABC/GCB)
LY2318 NHL(DLBCL,GCB)
LY2345 NHL(DLBCL,ABC/GCB)
LY3604 NHL(DLBCL,ABC)
表1：关于DLBCL亚型的MAb影响的研究设计
关于DLBCL亚型的MAb影响的研究设计测试了七个DLBCL淋巴瘤异种移植模型，分别为ABC(LY0257、LY2264、LY3604)、GCB(LY2214、LY2318)或ABC/GCB(LY2345、LY2266)。
表2：关于DLBCL亚型的MAb影响的研究设计
N：每组的动物数
根据DLBCL亚型的MAb剂量效应的研究设计
测试了三个DLBC淋巴瘤异种移植模型，分别为ABC(LY2264)、GCB(LY2214)或ABC/GCB(LY2345)。
表3：Nod SCID小鼠中ABC/LY2264和GCB/LY2214的Mab给药效力研究的研究设计
表4：NPG小鼠中ABC/GCB LY2345的MAb给药效力研究的研究设计
注意：N：每组的动物数
DLBCL ABC亚型的联合疗法的研究设计
测试了DLBCL淋巴瘤异种移植模型ABC(LY0257)。/>
表5：BALB/c裸鼠中LY0257的联合疗法的研究设计
MAb抗CD19对DLBCL亚型的肿瘤生长的体内抑制
结果显示在图3中，其表明DLBCL-ABC淋巴瘤部分减少，如在生产的PDX移植的小鼠中的三个独立的人肿瘤中所例证的。3A：异种移植模型LY0257；3B：异种移植模型LY2264；3C：异种移植模型LY3604。按照剂量依赖性方式，IDD001介导的LY2264 PDX模型的细胞毒性在10mg/kg的最高MAb剂量下非常敏感。3D：具有剂量变化的异种移植模型LY2264。
结果显示在图4中，其表明IDD001在不同程度的细胞杀伤作用下介导了对两种DLBCL-GCB淋巴瘤的细胞毒性。LY2214 PDX模型非常敏感，而LY2318 PDX模型中等敏感。4A：异种移植模型LY2214；4B：异种移植模型LY2318。按照剂量依赖性方式，IDD001介导的LY2214 PDX模型的细胞毒性在10mg/kg的最高MAb剂量下非常敏感。4C：具有剂量变化的异种移植模型LY2214。
结果显示在图5中，其表明部分减轻了DLBCL-ABC/GCB淋巴瘤，5A：异种移植模型LY2345；5B：异种移植模型LY2266。即使在最高MAb浓度(50mg/ml)下，也未观察到肿瘤完全消退。5C：具有剂量变化的异种移植模型LY2345。
基于MAb抗CD19和化学药物的联合疗法对弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)亚型的肿瘤生长的体内抑制
为了增强肿瘤消退，IDD001和长春新碱的组合的细胞毒性作用呈现于图6中。与任何一种药物相比，LY0257 DLBCL–ABC模型的IDD001和长春新碱的联合疗法产生了协同的细胞杀伤作用。
相比之下，结果显示在图7中，其表明在LY0257 DLBCL–ABC模型的IDD001和阿霉素的联合疗法之后，未观察到类似的更强的生长肿瘤控制。
实施例7：FL的CDX模型的体内研究
将人滤泡细胞系RL皮下注射入SCID小鼠，每次注射浓度为5.106个细胞(200μL)。当9组肿瘤的平均体积达到约100mm3时，将小鼠随机化(总共45只小鼠)。观察所有小鼠，以检测产物的任何毒性作用。根据动物伦理学，将该终点定义为肿瘤直径>18mm、体重明显减轻或动物福祉发生变化。为了评估化合物对肿瘤发生的有效性，每周两次测量肿瘤体积，使用卡尺测量原发肿瘤的大小，并且通过计算出两次测量结果的平均半径，使用公式TV＝4/3π×r3将肿瘤体积(TV)外推到球体。还计算每组的中值和标准差。为了排除极值，优选中值进行表示。在三周期间，通过以30、10或1mg/kg的剂量每周两次腹膜内注射给予MAb治疗。该产品是根据主办者的指南制备的，即在PBS中稀释。当肿瘤达到1600mm3的最大体积时，处死小鼠。通过临床试验伦理学将终点定义为肿瘤直径>18mm或体重减轻>体重的10％，或当肿瘤对小鼠有危险(坏死)时。使用GraphPad Prism软件进行统计分析。GraphPad Prism结合了科学制图、全面的曲线拟合、可以理解的统计学和数据组织。在处死的当天对所测量的肿瘤体积值(mm3)进行t检验(两尾检验)。
结果显示在图8中，MAb抗CD19/IDD001和MAb抗CD20(利妥昔单抗)的组合进行联合治疗导致了FL的肿瘤生长的附加细胞毒性。
共同靶向CD19和CD20可提高生存率。在第45天时，以1mg/kg的利妥昔单抗治疗的小鼠中有33％完全缓解，而利妥昔单抗和IDD001治疗的小鼠中有50％完全缓解。第55天的详细生存值示于下表：
现将通过以下编号的段落来描述本发明：
1.一种包含抗CD19抗体的药物组合物，所述抗CD19抗体包含：
(i)抗体R005-1、R005-2或IDD001之一的CDR，其VH和VL氨基酸序列描述于下表，
氨基酸序列VH 氨基酸序列VL
R005-1 SEQ ID NO:29 SEQ ID NO:31
R005-2 SEQ ID NO:33 SEQ ID NO:35
IDD001 SEQ ID NO:39 SEQ ID NO:37
(2i)变体人IgG1 Fc区，其中，该变体区包含在所述人IgG Fc区的氨基酸位置243、292、300、305、396，或243、292、300、305、326、396，或243、292、300、305、326、333、396中的各氨基酸位置处的氨基酸取代，其中，Fc区中的氨基酸残基的编号为Kabat之一，
所述组合物用于在有需要的患者中治疗表达CD19的弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)或表达CD19的滤泡性淋巴瘤(FL)。
2.一种(1)抗CD19抗体与(2)长春花生物碱类的化疗药物的组合物，所述抗CD19抗体包含：
(i)抗体R005-1、R005-2或IDD001之一的CDR，其VH和VL氨基酸序列描述于下表，
氨基酸序列VH 氨基酸序列VL
R005-1 SEQ ID NO:29 SEQ ID NO:31
R005-2 SEQ ID NO:33 SEQ ID NO:35
IDD001 SEQ ID NO:39 SEQ ID NO:37
(2i)变体人IgG1 Fc区，其中，该变体区包含在所述人IgG Fc区的氨基酸位置243、292、300、305、396，或243、292、300、305、326、396，或243、292、300、305、326、333、396中的各氨基酸位置处的氨基酸取代，其中，Fc区中的氨基酸残基的编号为Kabat之一，
所述组合物用于在有需要的患者中治疗表达CD19的弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)。
3.根据段落2所述的用于所述用途的组合物，其中，所述化疗药物是长春新碱。
4.根据段落2或3所述的用于所述用途的组合物，所述组合用于治疗DLBCL亚型GCB、ABC或ABC/GCB。
5.根据段落2至4中任一项所述的用于所述用途的组合物，所述组合用于与长春新碱组合以治疗DLBCL亚型ABC或GCB或ABC/GCB，其中，所述抗体与所述化疗药物的组合使用是同时、分开或依次的。
6.根据段落2至5中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中，所述抗CD19抗体与长春新碱的组合产生了与任一单一药剂相比更高的消退率。
7.一种(1)抗CD19抗体与(2)抗CD20抗体的组合物，所述抗CD19抗体包含：
(i)抗体R005-1、R005-2或IDD001之一的CDR，其VH和VL氨基酸序列描述于下表，
氨基酸序列VH 氨基酸序列VL
R005-1 SEQ ID NO:29 SEQ ID NO:31
R005-2 SEQ ID NO:33 SEQ ID NO:35
IDD001 SEQ ID NO:39 SEQ ID NO:37
(2i)变体人IgG1 Fc区，其中，这个变体区包含在所述人IgG Fc区的氨基酸位置243、292、300、305、396，或243、292、300、305、326、396，或243、292、300、305、326、333、396中的各氨基酸位置处的氨基酸取代，其中，Fc区中的氨基酸残基的编号为Kabat之一，
所述组合物用于治疗有需要的患者的表达CD19和CD20的滤泡性淋巴瘤(FL)。
8.根据段落8所述的用于所述用途的组合物，其中，所述抗CD20抗体是美罗华。
9.根据段落7所述的用于所述用途的组合物，其中，两种抗体的组合物产生了与任一单一药剂相比更高的消退率或缓解率。
10.根据段落2至9中任一项所述的用于所述用途的组合物，其中，所述抗CD19抗体包含VH和VL氨基酸序列，VH和VL氨基酸序列描述于下表，
氨基酸序列VH 氨基酸序列VL
R005-1 SEQ ID NO:29 SEQ ID NO:31
R005-2 SEQ ID NO:33 SEQ ID NO:35
IDD001 SEQ ID NO:39 SEQ ID NO:37
11.根据段落1至10中任一项所述的组合物或用于所述用途的组合物，其中，所述抗体包含Phe243被Leu取代、Arg292被Pro取代、Tyr300被Leu取代、Val305被Leu或Ile取代、Lys326被Ala取代并且Pro396被Leu取代的Fc区。
12.根据段落1至10中任一项所述的组合物或用于所述用途的组合物，其中，所述抗体包含Phe243被Leu取代、Arg292被Pro取代、Tyr300被Leu取代、Val305被Leu或Ile取代、Lys326被Ala取代并且Pro396被Leu取代且Glu333被Ala取代的Fc区。
13.人源化单克隆抗CD19抗体，其具有VH序列SEQ ID NO:39和VL序列SEQ ID NO:37。

Claims (15)

1.一种抗CD19抗体在制造用于治疗有需要的患者的表达CD19的弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)的药物中的用途，所述抗CD19抗体包含：
(i)抗体IDD001的CDR，其VH和VL氨基酸序列描述于下表，
氨基酸序列VH 氨基酸序列VL IDD001 1-121SEQ ID NO:39 1-103SEQ ID NO:37
其中，所述VH和VL氨基酸序列的编号系统为Kabat，
(2i)变体人IgG1 Fc区，其中，该变体区包含在所述人IgG Fc区的氨基酸位置243、292、300、305、396，或243、292、300、305、326、396，或243、292、300、305、326、333、396中的各氨基酸位置处的氨基酸取代，其中，Fc区中的氨基酸残基的编号为Kabat。
2.一种(1)抗CD19抗体与(2)长春花生物碱类化疗药物的组合物在制造用于治疗有需要的患者的表达CD19的弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)的药物中的用途，所述抗CD19抗体包含：
(i)抗体IDD001的CDR，其VH和VL氨基酸序列描述于下表，
氨基酸序列VH 氨基酸序列VL IDD001 1-121SEQ ID NO:39 1-103SEQ ID NO:37
其中，所述VH和VL氨基酸序列的编号系统为Kabat，
(2i)变体人IgG1 Fc区，其中，该变体区包含在所述人IgG Fc区的氨基酸位置243、292、300、305、396，或243、292、300、305、326、396，或243、292、300、305、326、333、396中的各氨基酸位置处的氨基酸取代，其中，Fc区中的氨基酸残基的编号为Kabat。
3.根据权利要求2所述的用途，其中，所述化疗药物是长春新碱。
4.根据权利要求2所述的用途，所述药物用于治疗DLBCL亚型GCB、ABC或ABC/GCB。
5.一种(1)抗CD19抗体与(2)抗CD20抗体的组合物在制造用于治疗有需要的患者的表达CD19和CD20的滤泡性淋巴瘤的药物中的用途，所述抗CD19抗体包含：
(i)抗体IDD001的CDR，其VH和VL氨基酸序列描述于下表，
氨基酸序列VH 氨基酸序列VL IDD001 1-121SEQ ID NO:39 1-103SEQ ID NO:37
其中，所述VH和VL氨基酸序列的编号系统为Kabat，
(2i)变体人IgG1 Fc区，其中，该变体区包含在所述人IgG Fc区的氨基酸位置243、292、300、305、396，或243、292、300、305、326、396，或243、292、300、305、326、333、396中的各氨基酸位置处的氨基酸取代，其中，Fc区中的氨基酸残基的编号为Kabat。
6.根据权利要求5所述的用途，其中，所述抗CD20抗体是美罗华。
7.根据权利要求2至6中任一项所述的用途，其中，所述抗CD19抗体包含VH和VL氨基酸序列，VH和VL氨基酸序列描述于下表，
氨基酸序列VH 氨基酸序列VL IDD001 1-121SEQ ID NO:39 1-103SEQ ID NO:37
。
8.根据权利要求1至6中任一项所述的用途，其中，所述抗体包含Phe243被Leu取代、Arg292被Pro取代、Tyr300被Leu取代、Val305被Leu或Ile取代、Lys326被Ala取代并且Pro396被Leu取代的Fc区。
9.根据权利要求1至6中任一项所述的用途，其中，所述抗体包含Phe243被Leu取代、Arg292被Pro取代、Tyr300被Leu取代、Val305被Leu或Ile取代、Lys326被Ala取代并且Pro396被Leu取代且Glu333被Ala取代的Fc区。
10.人源化单克隆抗CD19抗体，其具有以下CDR：
11.根据权利要求10所述的人源化单克隆抗CD19抗体，其具有SEQ ID NO:39的VH序列1-121和SEQ ID NO:37的VL序列1-103。
12.根据权利要求10所述的人源化单克隆抗CD19抗体，其具有SEQ ID NO:39的重链和SEQ ID NO:37的轻链。
13.权利要求10至12中任一项所述的人源化单克隆抗CD19抗体在制造用于治疗癌症的药物中的用途。
14.根据权利要求13所述的用途，其中，所述癌症为弥漫性大B细胞淋巴瘤。
15.根据权利要求13所述的用途，其中，所述癌症为滤泡性淋巴瘤。
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