CN110945025A - 用于检测前列腺癌的组合物和方法 - Google Patents

用于检测前列腺癌的组合物和方法 Download PDF

Info

Publication number
CN110945025A
CN110945025A CN201880034255.6A CN201880034255A CN110945025A CN 110945025 A CN110945025 A CN 110945025A CN 201880034255 A CN201880034255 A CN 201880034255A CN 110945025 A CN110945025 A CN 110945025A
Authority
CN
China
Prior art keywords
ser
gly
thr
leu
val
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201880034255.6A
Other languages
English (en)
Other versions
CN110945025B (zh
Inventor
A·普里厄
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Ecs Gastrin Ltd By Share Ltd
Original Assignee
Ecs Gastrin Ltd By Share Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ecs Gastrin Ltd By Share Ltd filed Critical Ecs Gastrin Ltd By Share Ltd
Publication of CN110945025A publication Critical patent/CN110945025A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN110945025B publication Critical patent/CN110945025B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39541—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against normal tissues, cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/22—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against growth factors ; against growth regulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/26—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against hormones ; against hormone releasing or inhibiting factors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3069—Reproductive system, e.g. ovaria, uterus, testes, prostate
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/57407—Specifically defined cancers
    • G01N33/57434—Specifically defined cancers of prostate
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/574—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/5748—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving oncogenic proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A61K2039/507—Comprising a combination of two or more separate antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/22—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from camelids, e.g. camel, llama or dromedary
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/51—Complete heavy chain or Fd fragment, i.e. VH + CH1
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/515—Complete light chain, i.e. VL + CL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/60—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments
    • C07K2317/62—Immunoglobulins specific features characterized by non-natural combinations of immunoglobulin fragments comprising only variable region components
    • C07K2317/622—Single chain antibody (scFv)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
    • G01N2333/914—Hydrolases (3)
    • G01N2333/948—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • G01N2333/95—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99)
    • G01N2333/964—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue
    • G01N2333/96402—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from non-mammals
    • G01N2333/96405—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from non-mammals in general
    • G01N2333/96408—Proteinases, i.e. endopeptidases (3.4.21-3.4.99) derived from animal tissue from non-mammals in general with EC number
    • G01N2333/96411—Serine endopeptidases (3.4.21)

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Gynecology & Obstetrics (AREA)
  • Pregnancy & Childbirth (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)

Abstract

本发明涉及用于体外诊断前列腺癌的组合物和方法，其中所述组合物包含结合前胃泌素的抗体，并且所述方法包括使用结合前胃泌素的抗体。

Description

用于检测前列腺癌的组合物和方法
前言
本发明涉及癌症的体外诊断，更特别地其涉及用于体外诊断前列腺癌的方法。根据本发明所述的组合物包含前胃泌素结合分子，特别是抗hPG抗体，而根据本发明所述的方法包括使用前胃泌素结合分子，并且特别是抗hPG抗体。
根据国际癌症研究机构，前列腺癌(PC)是男性中第二最常见的癌症，也是男性中与癌症相关的死亡的第五大诱因。2012年，其在110万男性中发生，造成307,000例死亡。在美国，它是美国男性中最常见的非皮肤癌症。估计有六分之一的白人男性和五分之一的非洲裔美国男性在其一生中将会被诊断出患有前列腺癌，并且可能性随着年龄的增长而增加。
大多数前列腺癌(95％)是腺癌或腺性癌症，其开始于正常分泌精液的前列腺细胞突变为癌细胞时。大约4％的前列腺癌病例具有移行性细胞形态，且被认为起因于前列腺尿道的尿道上皮内层。据信具有神经内分泌形态的少数情况起因于通常存在于前列腺中的神经内分泌干细胞或起因于细胞转化过程中异常的分化程序。鳞状细胞癌占所有前列腺癌的不到1％。前列腺癌最常见地转移到骨骼、淋巴结，并在局部进展后可能侵入直肠、膀胱和下输尿管。
治疗通常包括手术、化学疗法、放射疗法和靶向疗法，单独或联合使用。然而，结果往往是差的，全世界5年生存率不到10％。这主要是因为大多数人仅在晚期疾病时被检测到，这对生存率产生直接后果。在一些亚洲国家中，已经显示出筛选工作与更高的存活率相关联。
前列腺癌总人群的五年生存率非常高(约99％)。然而，当癌症转移时，该比率会显著降低(约28.5％)。幸运的是，约80％的患者被诊断出患有局部疾病(Surveillance E；EndResults Program(SEER).Surveillance,Epidemiology,and Ends Results Program.FastStats；2016[2016年9月12日引用的]。可在http://seer.cancer.gov/faststats/ selections.php获得)。这在很大程度上是由于筛选方法的改进。但是，由于其局限性，最常用的生物标志物前列腺特异性抗原(PSA)已被证明是有争议的诊断测定法。
因此，仍然存在对于允许快速、可靠和有成本效益的前列腺癌诊断的方法的需求。
这是本发明的目的。
说明
现在，本发明提供了用于体外诊断前列腺癌的方法，其中所述方法包括在来自受试者的生物样品中检测前胃泌素。优选地，确定所述样品中前胃泌素的量，因此允许前胃泌素的量化。
人前胃泌素原，一种101个氨基酸的肽(氨基酸序列参考号：AAB19304.1)，其为胃泌素基因的初级翻译产物。前胃泌素通过从前胃泌素原切割前21个氨基酸(信号肽)而形成。前胃泌素的80个氨基酸的链被切割和修饰酶进一步加工成若干生物活性胃泌素激素形式：包含前胃泌素的第38-71位氨基酸的胃泌素34(G34)和甘氨酸延伸的胃泌素34(G34-Gly)，包含前胃泌素的第55-71位氨基酸的胃泌素17(G17)和甘氨酸延伸的胃泌素17(G17-Gly)。
抗人前胃泌素(抗hPG)单克隆抗体和其用于治疗的用途已经在以下文件中描述：关于结肠直肠癌的WO 2011/083 088，关于乳腺癌的WO 2011/083090，关于胰腺癌的WO2011/083 091，关于结肠直肠癌和胃肠癌的WO 2011/116 954，和关于肝脏病理的WO2012/013 609和WO 2011/083089。
从本文给出的详细描述和附图将会更加全面地理解本发明，其仅通过说明的方式给出，并且不限制本发明的预期范围。
在第一方面，本发明涉及一种用于体外评价存在前列腺癌的风险的方法，其中所述方法包括检测来自受试者的生物样品中的前胃泌素的步骤。样品中存在前胃泌素指示有存在前列腺癌的风险。
因此，在第一个实施方案中，本发明涉及一种用于评价受试者中存在前列腺癌的风险的体外方法，所述方法包括以下步骤：
a)使来自所述受试者的生物样品与至少一种前胃泌素结合分子接触，和
b)检测所述前胃泌素结合分子与所述样品中的前胃泌素的结合，其中所述结合指示有存在前列腺癌的风险。
可以通过本领域技术人员可用的多种测定检测前胃泌素结合分子的结合。虽然任何适当的用于执行该测定的方法都包括在本发明中，但是可以特别提到的是FACS、ELISA、RIA、蛋白质印迹和IHC。
在一个优选的实施方案中，根据本发明所述的用于体外评价受试者中存在前列腺癌的风险的方法包括以下步骤：
a)使来自所述受试者的所述生物样品与至少一种前胃泌素结合分子接触，
b)确定所述生物样品中前胃泌素的浓度，其中所述生物样品中至少10pM浓度的前胃泌素指示有存在前列腺癌的风险。
一旦确定了样品中存在的前胃泌素的浓度，可将该结果与以与测试样品类似的方式获得的但是来自已知不患有前列腺癌的个体的对照样品中的前胃泌素浓度进行比较。如果测试样品中的前胃泌素的浓度显著更高，可以得出结论，该样品所源自的受试者患有前列腺癌的可能性增加。
因此，在一个更优选的实施方案中，本发明的方法包括以下另外的步骤：
c)确定参考样品中前胃泌素的参考浓度，
d)比较所述生物样品中前胃泌素的浓度与所述前胃泌素参考浓度，
e)由步骤d)的比较来评价存在前列腺癌的风险。
根据另一方面，本发明涉及一种用于诊断受试者的前列腺癌的体外方法，所述方法包括以下步骤：
a)使来自所述受试者的生物样品与至少一种前胃泌素结合分子接触，和
b)检测所述前胃泌素结合分子与所述样品中的前胃泌素的结合，其中所述结合指示所述受试者中前列腺癌的存在。
在一个优选的实施方案中，本发明涉及一种用于体外诊断受试者的前列腺癌的方法，其包括以下步骤：
a)使来自所述受试者的所述生物样品与至少一种前胃泌素结合分子接触，
b)确定所述生物样品中前胃泌素的浓度，其中所述生物样品中至少10pM浓度的前胃泌素指示所述受试者中前列腺癌的存在。
在根据本发明所述的方法的一个更特别的实施方案中，所述生物样品中至少10pM、至少20pM、至少30pM浓度的前胃泌素指示所述受试者中前列腺癌的存在。
在一个更优选的实施方案中，本发明的方法包括以下另外的步骤：
a)确定参考样品中的前胃泌素的参考浓度，
b)比较所述生物样品中前胃泌素的浓度与所述前胃泌素的参考水平或浓度，
c)由步骤d)的比较来诊断前列腺癌的存在。
根据另一方面，本发明涉及一种用于诊断受试者的转移的前列腺癌的体外方法，所述方法包括以下步骤：
a)使来自所述受试者的生物样品与至少一种前胃泌素结合分子接触，和
b)检测所述前胃泌素结合分子与所述样品中的前胃泌素的结合，其中所述结合指示所述受试者中转移的前列腺癌的存在。
在一个优选的实施方案中，本发明涉及一种用于从受试者的生物样品体外诊断所述受试者的转移的前列腺癌的方法，其包括以下步骤：
a)使所述生物样品与至少一种前胃泌素结合分子接触，
b)通过生物化学测定确定所述生物样品中前胃泌素的水平或浓度，其中所述生物样品中至少10pM或更高浓度的前胃泌素指示所述受试者中转移的前列腺癌的存在。
在根据本发明所述的方法的一个更特别的实施方案中，在所述生物样品中至少10pM、至少20pM、至少30pM、至少40pM或至少50pM浓度的前胃泌素指示所述受试者中转移的前列腺癌的存在。
在一个更优选的实施方案中，本发明的方法包括以下另外的步骤：
a)确定参考样品中的前胃泌素的参考浓度，
b)比较所述生物样品中前胃泌素的浓度与所述前胃泌素的参考浓度或水平，
c)由步骤d)的比较来诊断转移的前列腺癌的存在。
在一个特别的实施方案中，本发明涉及一种用于体外诊断受试者的前列腺癌的方法，其包括确定生物样品中前胃泌素的浓度和比较所述获得的值与参考样品中前胃泌素的浓度。
在一个更特别的实施方案中，在根据本发明所述的用于诊断前列腺癌的方法中，使所述受试者的生物样品与至少一种前胃泌素结合分子接触，其中所述前胃泌素结合分子是抗体或其抗原结合片段。
表述“评价受试者中存在前列腺癌的风险”是指当与参考受试者或参考值相比时，确定给定受试者患前列腺癌的相对概率。根据本发明所述的方法表示评价所述风险的工具，其与其他方法或指标例如临床检查、活检和确定前列腺癌的已知生物标志物(诸如，例如前列腺特异性抗原(PSA))的水平相结合。
表述“体外诊断”意指确定受试者是否患有特定感染。众所周知，前列腺癌的诊断至少涉及所述受试者症状的临床观察和PSA的检测。PSA测试目前被用作生物标志物。然而，PSA并不代表理想的生物标志物，值得注意的是由于其显著性方面存在普遍不确定性，这导致美国预防服务工作组(US Preventive Services Task Force)在2012年建议不要使用PDA水平进行筛查(Gaudreau等,Biomark Cancer.2016,8(Suppl 2):15-33)。尽管在发现阶段鉴定了一些生物标志物，但将其转移到临床仍然是一项重大挑战，主要是因为缺乏系统的评价过程(McGrath等,Prostate Int.2016,4(4):130-135；Gaudreau et al,BiomarkCancer.2016,8(Suppl 2):15-33；Saini,Cell Oncol(Dordr).2016,39(2):97-106)。
因此，根据本发明所述的用于体外诊断前列腺癌的方法可以被认为是诊断过程中的一个工具。
在一个更特别的实施方案中，本发明涉及用于体外诊断受试者的前列腺癌的方法，其包括确定所述生物样品中前胃泌素的浓度，和确定前列腺癌的已知的生物标志物，优选为PSA。
表述“前列腺癌”是指源自前列腺的任何类型的癌症。前列腺癌特别包括“前列腺腺癌”，还包括肉瘤、小细胞癌、神经内分泌肿瘤、也可能在前列腺内发展的移行性细胞癌。表述“前列腺癌”还涉及与转移相关联的前列腺癌，特别是转移至骨骼、淋巴结，以及转移至直肠、膀胱和下输尿管。
术语“前胃泌素”是指哺乳动物前胃泌素肽，特别是人前胃泌素。为避免疑义，不需要任何说明，表述“人前胃泌素”是指序列SEQ ID No.1的人PG。人前胃泌素明显包含N末端和C末端结构域，该N末端和C末端结构域在上文提及的生物活性胃泌素激素形式中不存在。优选地，所述N末端结构域的序列由SEQ ID NO.2表示。在另一个优选的实施方案中，所述C末端结构域的序列由SEQ ID NO.3表示。
在根据本发明所述的方法中，通过生物化学领域的普通技术人员已知的任何方法力来确定前胃泌素浓度。
优选地，确定样品中前胃泌素的水平包括使所述样品与前胃泌素结合分子接触并测量所述前胃泌素结合分子与前胃泌素的结合。
当在蛋白质水平测量表达水平时，尤其可以使用特异性前胃泌素结合分子(诸如例如抗体)，特别地使用公知的技术(诸如使用生物素化的细胞膜染色或其他相当的技术)，随后使用特异性抗体免疫沉淀、蛋白质印迹、ELISA或ELISPOT、酶联免疫吸附测定(ELISA)、放射免疫测定(RIA)、免疫组织化学(IHC)、免疫荧光(IF)、抗体微阵列或组织微阵列偶联免疫组织化学进行。其他合适的技术包括FRET或BRET，单细胞显微镜检或使用单个或多个激发波长并应用任何适合的光学方法诸如电化学方法(伏安法和电流法技术)的组织化学方法，原子力显微镜检和射频方法例如多极共振谱，荧光、发光、化学发光、吸光度、反射率、透射率和双折射率或折射率的共焦和非共焦检测(例如，表面等离子共振、椭圆偏振法、共振镜面法、光栅耦合器波导法或干涉测量法)，细胞ELISA，流式细胞术，放射性同位素，磁共振成像，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)分析；HPLC-质谱；液相色谱/质谱/质谱(LC-MS/MS)。所有这些技术是本领域公知的，并且在此不需要进一步详述。这些不同技术可用来测量前胃泌素水平。
特别地，所述方法可以选自：基于免疫检测的方法、基于蛋白质印迹的方法、基于质谱的方法、基于色谱的方法和基于流式细胞术的方法。虽然任何合适的用于实施该测定的方法都包括在本发明中，但是诸如FACS、ELISA、RIA、蛋白质印迹和IHC等的方法对于执行本发明的方法是特别有用的。
在一个更特别的实施方案中，根据本发明所述的用于体外诊断前列腺癌的方法包括使用免疫酶测定(优选基于选自RIA和ELISA的技术)，使来自受试者的生物样品与前胃泌素结合分子接触。
如本文所用的“生物样品”是含有核酸或多肽(例如前列腺癌蛋白质、多核苷酸或转录物)的生物组织或流体的样品。这样的样品必须允许确定前胃泌素的表达水平。已知前胃泌素为分泌性蛋白。因此，用于确定前胃泌素蛋白的水平的优选的生物样品包括生物流体。如本文所用的“生物流体”意指包含生物来源的物质的任何流体。用于本发明的优选的生物流体包括动物(例如哺乳动物，优选人受试者)的体液。体液可以是任何体液，包括但不限于血液、血浆、血清、淋巴液、脑脊髓液(CSF)、唾液、汗液和尿液。优选地，所述优选的液体生物样品包括诸如血液样品、血浆样品或血清样品等的样品。更优选地，所述生物样品是血液样品。实际上，这样的血液样品可通过完全无害地从患者中进行血液收集而获得，并且因此允许非侵入性评估受试者发生肿瘤的风险。
当癌症是实体癌时，如本文所用的“生物样品”还包括待测试的患者的实体癌样品。这样的实体癌样品允许本领域技术人员对本发明的生物标志物的水平进行任何类型的测量。在一些情况下，根据本发明所述的方法可进一步包括从患者中取得实体癌样品的预备步骤。“实体癌样品”指肿瘤组织样品。即使在癌患者中，肿瘤位置的组织仍包含非肿瘤健康组织。因此，“癌症样品”应该局限于从患者中取得的肿瘤组织。所述“癌症样品”可以是活检样品或从手术切除治疗中取得的样品。
典型地从真核生物体获得生物样品，最优选从哺乳动物、鸟、爬行动物或鱼中获得。事实上，可以经受本文所述的方法的“受试者”可以是任何哺乳动物，包括人、狗、猫、牛、山羊、猪(pig/swine)、绵羊和猴子；或鸟；爬行动物；或鱼。优选地，受试者是人类；人受试者可以被称为“患者”。
在本文中“获得生物样品”意指获得用于本发明中所述的方法中的生物样品。最经常地，这会通过从动物中移出细胞样品来完成，但还可以通过使用以前分离的细胞(例如，由另一个人、在另一时间和/或用于另一目的分离的)或通过在体内进行本发明的方法来完成。具有治疗或结果历史的档案组织会是特别有用的。
该样品可以根据本领域技术人员已知的方法获得并且如果需要的话根据本领域技术人员已知的方法制备。特别地，本领域公知，样品应该从空腹受试者提取。
前胃泌素浓度的确定涉及确定已知体积的样品中前胃泌素的量。前胃泌素浓度可以相对于参考样品来表示，例如表示为比率或百分数。该浓度还可以表示为信号的强度或定位，这取决于用于确定所述浓度的方法。优选地，在标准化样品中相关化合物的总浓度之后对所述样品中一种化合物的浓度进行表示，例如在标准化样品中蛋白质的总浓度之后对一种蛋白质的水平或浓度进行表示。
优选地，通过将在所述生物样品中测量的前胃泌素的水平与参考水平进行比较，来确定所述受试者患前列腺癌的风险。
如本文所用的术语“参考水平”是指在参考样品中考虑的前列腺癌标志物(即前胃泌素)的表达水平。如本文所用的“参考样品”意指从已知不患有所述疾病的受试者(优选两个或更多个受试者)，或可替代地从一般群体中获得的样品。前胃泌素的合适的参考表达水平可通过测量若干合适的受试者中所述标志物的表达水平来确定，并且这样的参考水平可被调整到特定受试者群体。参考值或参考水平可以是绝对值；相对值；具有上限或下限的值；值的范围；平均值；中位值、均值或与特定对照或基线值比较的值。参考值可以基于个体样品值，诸如例如从来自正在被测试的受试者但处于更早的时间点的样品中获得的值。参考值可以基于大量样品，诸如来自实足年龄匹配组的受试者的群体，或基于包括或排除待测样品的样品池。
有利地，“参考水平”是从来自具有已知有关癌症的特定状态的受试者的生物样品中获得的预定前胃泌素水平。在特别的实施方案中，用于与步骤(b)中的测试样品比较的参考水平可从来自健康受试者的生物样品或从来自患有癌症的受试者的生物样品获得；应该理解的是参考表达谱也可以从健康受试者的生物样品池或从来自患有癌症的受试者的样品池中获得。
在本发明的方法的一个特别的实施方案中，从免除任何癌症的受试者中，并且优选地从免除任何病理的受试者中，采集参考样品。将会理解的是，根据从患者中采集的生物样品的性质，参考样品会是具有所述生物样品相同性质的生物样品。
在本方法中，前胃泌素的水平通过确定被前胃泌素结合分子(优选被识别前胃泌素的抗体)结合的前胃泌素的量来确定。
“前胃泌素结合分子”在本文中指结合前胃泌素但是不结合胃泌素-17(G17)、胃泌素-34(G34)、甘氨酸延伸的胃泌素-17(G17-Gly)或甘氨酸延伸的胃泌素-34(G34-Gly)的任何分子。本发明的前胃泌素结合分子可以是任何前胃泌素结合分子，诸如例如抗体分子或受体分子。优选地，所述前胃泌素结合分子是抗前胃泌素抗体或其抗原结合片段。
根据一个特别的实施方案，本发明涉及一种前列腺癌的体外诊断方法，所述方法包括确定来自受试者的生物样品中前胃泌素的浓度，其中所述受试者表现出前列腺癌的至少一种临床症状。
根据另一个特别的实施方案，本发明涉及一种前列腺癌的体外诊断方法，所述方法包括确定来自受试者的生物样品中前胃泌素的浓度，其中所述受试者表现出癌症和/或转移的至少一种临床症状。
“结合(binding/bind)”及类似词语旨在抗体或其抗原结合片段与在生理条件下相对稳定的抗原形成复合物。用于确定两个分子是否结合的方法是本领域公知的并且包括，例如，平衡透析、表面等离子共振等。在一个特别的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段以比其与非特异性分子(诸如BSA或酪蛋白)结合的亲和力大至少两倍的亲和力与前胃泌素结合。在一个更特别的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段仅与前胃泌素结合。
在一个特别的实施方案中，在根据本发明所述的用于诊断前列腺癌的方法中，使来自受试者的生物样品与至少一种前胃泌素结合分子接触，其中如通过诸如上述方法确定的，所述分子对前胃泌素的亲和力是至少100nM、至少90nM、至少80nM、至少70nM、至少60nM、至少50nM、至少40nM、至少30nM、至少20nM、至少10nM、至少5nM、至少1nM、至少100pM、至少10pM或至少1pM。
在一个特别的实施方案中，本发明涉及一种用于诊断前列腺癌的方法，所述方法包括检测来自受试者的生物样品中前胃泌素的浓度，其中使所述生物样品与抗hPG抗体或其抗原结合片段接触。
如本文所用的术语“抗体”旨在包括多克隆和单克隆抗体。抗体(或“免疫球蛋白”)由糖蛋白组成，所述糖蛋白至少包含由二硫键互相连接的两条重(H)链和两条轻(L)链。每条重链包含重链可变区(或结构域)(本文缩写为HCVR或VH)和重链恒定区。重链恒定区包含三个结构域，CH1、CH2和CH3。每条轻链包含轻链可变区(本文缩写为LCVR或VL)和轻链恒定区。所述轻链恒定区包含一个结构域CL。VH和VL区可进一步细分为具有高变性的区域，称为“互补决定区”(CDR)或“高变区”，其主要负责结合抗原的表位，并且其散布有较保守的区域，称为框架区(FR)。用于鉴定抗体的轻链和重链中的CDR和用于确定其序列的方法是本领域技术人员公知的。为避免疑义，在上下文中不存在任何相反指示，表述CDR意指由IMGT定义的抗体的重链和轻链的高变区，其中IMGT唯一编号提供框架区和互补决定区(CDR1-IMGT：27至38，CDR2)的标准化界定。
已经定义IMGT唯一编号以比较可变结构域，无论抗原受体、链类型或种如何[Lefranc M.-P.,Immunology Today 18,509(1997)/Lefranc M.-P.,The Immunologist,7,132-136(1999)/Lefranc,M.-P.,Pommié,C,Ruiz,M.,Giudicelli,V.,Foulquier,E.,Truong,L.,Thouvenin-Contet,V.and Lefranc,Dev.Comp.Immunol.,27,55-77(2003)]。在IMGT唯一编号中，保守的氨基酸一直具有相同位点，例如半胱氨酸23(第一CYS)、色氨酸41(保守的TRP)、疏水性氨基酸89、半胱氨酸104(第二CYS)、苯丙氨酸或色氨酸118(J-PHE或J-TRP)。所述IMGT唯一编号提供了框架区(FR1-IMGT：第1-26位，FR2-IMGT：第39-55位，FR3-IMGT：第66-104位和FR4-IMGT：第118-128位)和互补决定区(CDR1-IMGT：第27-38位，CDR2-IMGT：第56-65位和CDR3-IMGT：第105-117位)的标准化界定。由于间隙表示未被占据的位置，CDR-IMGT长度(在括号之间显示并且由点隔开，例如[8.8.13])成为重要信息。所述IMGT唯一编号在二维图示中使用，被命名为IMGT Colliers de Perles[Ruiz,M.and Lefranc,M.-P.,Immunogenetics,53,857-883(2002)/Kaas,Q.and Lefranc,M.-P.,CurrentBioinformatics,2,21-30(2007)]，并且也在IMGT/3Dstructure-DB中的三维结构中使用[Kaas,Q.,Ruiz,M.and Lefranc,M.-P.,T cell receptor and MHC structuraldata.Nucl.Acids.Res.,32,D208-D210(2004)]。
每个VH和VL由三个CDR和四个FR组成，按照以下顺序从氨基末端到羧基末端排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重链和轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区可以介导免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，所述宿主组织或因子包括免疫系统的各种细胞(例如，效应细胞)和经典补体系统的第一组分(Clq)。抗体可以是不同的同种型(即IgA、IgD、IgE、IgG或IgM)。
在一个特别的实施方案中，所述前胃泌素结合抗体或其抗原结合片段选自：多克隆抗体、单克隆抗体、嵌合抗体、单链抗体、骆驼化抗体、IgA1抗体、IgA2抗体、IgD抗体、IgE抗体、IgG1抗体、IgG2抗体、IgG3抗体、IgG4抗体和IgM抗体。
“多克隆抗体”是在一种或多种其他不相同的抗体中或在一种或多种其他不相同的抗体存在下产生的抗体。一般，在产生不相同的抗体的若干其他B淋巴细胞的存在下从一种B淋巴细胞中产生多克隆抗体。通常，直接从免疫动物中获得多克隆抗体。
术语“单克隆抗体”指从几乎同种的抗体群体中产生的抗体，其中除了可最小比例发现的少数可能天然存在的突变之外，群体包含相同抗体。单克隆抗体从单细胞克隆(诸如杂交瘤)的生长产生，并且由一类和一个亚类的重链和一个类型的轻链表征。
表述抗体的“抗原结合片段”旨在指示任何肽、多肽或蛋白质，它们保持与所述抗体的靶标(一般还称为抗原)结合(一般是相同表位)的能力，并且包含具有抗体的氨基酸序列的至少5个连续氨基酸残基、至少10个连续氨基酸残基、至少15个连续氨基酸残基、至少20个连续氨基酸残基、至少25个氨基酸残基、至少40个连续氨基酸残基、至少50个连续氨基酸残基、至少60个连续氨基酸残基、至少70个连续氨基酸残基、至少80个连续氨基酸残基、至少90个连续氨基酸残基、至少100个连续氨基酸残基、至少125个连续氨基酸残基、至少150个连续氨基酸残基、至少175个连续氨基酸残基、或者至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
在一个特别的实施方案中，所述抗原结合片段包含其所源自的抗体的至少一个CDR。仍然在一个优选的实施方案中，所述抗原结合片段包含其所源自的抗体的2、3、4或5个CDR，更优选地6个CDR。
“抗原结合片段”可选自但不限于以下：Fv、scFv(sc指单链(single chain))、Fab、F(ab')2、Fab'、scFv-Fc片段或双抗体；或者与无序肽诸如XTEN(延伸的重组多肽)或PAS基序的融合蛋白；或者会通过化学修饰，诸如添加聚(亚烷基)醇诸如聚乙二醇(“PEG化”)(PEG化片段称为Fv-PEG、scFv-PEG、Fab-PEG、F(ab')2-PEG或Fab'-PEG)(“PEG”指聚(亚烷基)醇)，或者通过并入脂质体来增加半衰期的任何片段，所述片段具有根据本发明所述的抗体的至少一个特征性CDR。优选地，所述“抗原结合片段”是从它们所源自的抗体构建的，或包含它们所源自的抗体的重可变链或轻可变链的部分序列，所述部分序列足以保持与其所源自的抗体相同的结合特异性和足够的亲和力，对靶标的亲和力优选至少等于其所源于的抗体的亲和力的1/100，在更优选的方式中等于至少1/10。
在另一个特别的实施方案中，在根据本发明所述的用于诊断前列腺癌的方法中，使来自受试者的生物样品与结合前胃泌素的抗体接触，其中所述抗体已经通过本领域技术人员已知的免疫方法获得，其中所述免疫方法使用氨基酸序列包含前胃泌素的全部或部分氨基酸序列的肽作为免疫原。更特别地，所述免疫原包含选自以下的肽：
·肽，其氨基酸序列包含全长前胃泌素并且特别是SEQ ID N°1的全长人前胃泌素的氨基酸序列或由其组成；
·肽，其氨基酸序列对应于前胃泌素并且特别是SEQ ID N°1的的全长人前胃泌素的氨基酸序列的一部分；
·肽，其氨基酸序列对应于前胃泌素的N末端部分的一部分或全部氨基酸序列，并且特别是如下的肽，其包含氨基酸序列SWKPRSQQPDAPLG(SEQ ID N°2)或由其组成；和
·肽，其氨基酸序列对应于前胃泌素的C末端部分的一部分或全部氨基酸序列，并且特别是如下的肽，其包含氨基酸序列QGPWLEEEEEAYGWMDFGRRSAEDEN(SEQ ID N°3)或由其组成；
·肽，其氨基酸序列对应于前胃泌素的C末端部分的氨基酸序列的一部分，并且特别是如下的肽，其包含对应于前胃泌素的第71-80位氨基酸的氨基酸序列FGRRSAEDEN(SEQID N°40)。
技术人员会认识到，需要时，可能使用这样的免疫来生成多克隆或单克隆抗体。用于获得这些类型的抗体中的每种的方法是本领域中公知的。因此，本领域技术人员会容易地选择和实施用于产生针对任何给定抗原的多克隆和/或单克隆抗体的方法。
如下表1至表4所述，通过使用包含对应于人前胃泌素的氨基酸序列1-14(N末端)的氨基酸序列“SWKPRSQQPDAPLG”的免疫原生成的单克隆抗体的例子包括但不限于命名为以下的单克隆抗体：mAb3、mAb4、mAb16和mAb19以及mAb20。已经描述了其他单克隆抗体，但是不清楚这些抗体实际上是否结合前胃泌素(WO 2006/032980)。表位作图的实验结果显示mAb3、mAb4、mAb16和mAb19以及mAb20确实特异性结合所述hPG N末端氨基酸序列内的表位。本领域中已经描述了特异性识别由SEQ ID NO.2表示的前胃泌素的N末端内的表位的多克隆抗体(参见例如WO 2011/083088)。
Figure BDA0002285452550000121
Figure BDA0002285452550000131
表1
Figure BDA0002285452550000132
Figure BDA0002285452550000141
表2
Figure BDA0002285452550000142
Figure BDA0002285452550000151
Figure BDA0002285452550000161
表3
Figure BDA0002285452550000162
Figure BDA0002285452550000171
Figure BDA0002285452550000181
表4
可通过使用包含对应于人前胃泌素的氨基酸序列55-80的氨基酸序列“QGPWLEEEEEAYGWMDFGRRSAEDEN”(前胃泌素的C末端部分)的免疫原生成的单克隆抗体的例子包括但不限于命名为以下的抗体：下表5和6中的mAb8和mAb13。表位作图的实验结果显示mAb13确实特异性结合所述hPG C末端氨基酸序列中的表位。可以因此由其产生的单克隆抗体的另一个例子是由杂交瘤2H9F4B7产生的抗体Mab14，如在WO 2011/083088中所述。杂交瘤2H9F4B7在布达佩斯条约下于2016年12月27日保藏在法国75724巴黎CEDEX 15的25-28rue du Docteur Roux巴斯德研究所(Institut Pasteur,25-28rue du Docteur Roux,75724Paris CEDEX 15,France)的CNCM，参考号为I-5158(参见WO 2017/114973)。
Figure BDA0002285452550000191
Figure BDA0002285452550000201
Figure BDA0002285452550000211
表5
Figure BDA0002285452550000212
Figure BDA0002285452550000221
Figure BDA0002285452550000231
表6
其他例子包括通过使用包含SEQ ID N°40的氨基酸序列的免疫原生成的抗hPG单克隆和/或多克隆抗体。
在一个更特别的实施方案中，在根据本发明所述的方法中，使所述生物样品与抗hPG抗体或其抗原结合片段接触，其中所述抗hPG抗体在N末端抗hPG抗体和C末端抗hPG抗体中选择。
术语“N末端抗hPG抗体”和“C末端抗hPG抗体”分别指与包含位于hPG的N末端部分的氨基酸的表位，或与包含位于hPG的C末端部分的氨基酸的表位结合的抗体。优选地，术语“N末端抗hPG抗体”是指与位于序列由SEQ ID NO.2表示的前胃泌素的结构域中的表位结合的抗体。在另一个优选的实施方案中，术语“C末端抗hPG抗体”是指与位于序列由SEQ IDNO.3表示的前胃泌素的结构域中的表位结合的抗体。
术语“表位”是指由抗体结合的抗原区域。表位可能被定义为结构性的或功能性的。功能性表位通常是结构性表位的子集，并且具有直接有助于相互作用的亲和力的那些氨基酸。表位还可能是构象性的。在某些实施方案中，表位可以包括决定簇，即分子的化学活性表面基团(诸如氨基酸、糖侧链、磷酰基或磺酰基)，并且在某些实施方案中，可具有特定的三维结构特征，和/或特定的电荷特征。可以通过由本领域技术人员已知的任何表位作图技术进行由抗体结合的表位的确定。表位可以包含顺序地位于蛋白质的氨基酸序列中的不同氨基酸。表位还可以包含并非顺序地位于蛋白质的氨基酸序列中的氨基酸。
在一个特别的实施方案中，所述抗体为单克隆抗体，所述单克隆抗体选自：
·包含如下重链和轻链的单克隆抗体，所述重链包含分别具有氨基酸序列SEQ IDN°4、5和6或者在最佳对齐后分别与序列SEQ ID N°4、5和6具有至少80％(优选85％、90％、95％和98％)同一性的序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少一个、优先地至少两个、优先地三个，所述轻链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID N°7、8和9或者在最佳对齐后分别与序列SEQ ID N°7、8和9具有至少80％(优选85％、90％、95％和98％)同一性的序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少一个、优先地至少两个、优先地三个；
·包含如下重链和轻链的单克隆抗体，所述重链包含分别具有氨基酸序列SEQ IDN°10、11和12或者在最佳对齐后分别与序列SEQ ID N°10、11和12具有至少80％(优选85％、90％、95％和98％)同一性的序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少一个、优先地至少两个、优先地三个，所述轻链分别具有氨基酸序列SEQ ID N°13、14和15或者在最佳对齐后分别与序列SEQ ID N°13、14和15具有至少80％(优选85％、90％、95％和98％)同一性的序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少一个、优先地至少两个、优先地三个；
·包含如下重链和轻链的单克隆抗体，所述重链包含分别具有氨基酸序列SEQ IDN°16、17和18或者在最佳对齐后分别与序列SEQ ID N°16、17和18具有至少80％(优选85％、90％、95％和98％)同一性的序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少一个、优先地至少两个、优先地三个，所述轻链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID N°19、20和21或者在最佳对齐后分别与序列SEQ ID N°19、20和21具有至少80％(优选85％、90％、95％和98％)同一性的序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少一个、优先地至少两个、优先地三个；
·包含如下重链和轻链的单克隆抗体，所述重链包含分别具有氨基酸序列SEQ IDN°22、23和24或者在最佳对齐后分别与序列SEQ ID N°22、23和24具有至少80％(优选85％、90％、95％和98％)同一性的序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少一个、优先地至少两个、优先地三个，所述轻链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID N°25、26和27或者在最佳对齐后分别与序列SEQ ID N°25、26和27具有至少80％(优选85％、90％、95％和98％)同一性的序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少一个、优先地至少两个、优先地三个；
·包含如下重链和轻链的单克隆抗体，所述重链包含分别具有氨基酸序列SEQ IDN°28、29和30或者在最佳对齐后分别与序列SEQ ID N°28、29和30具有至少80％(优选85％、90％、95％和98％)同一性的序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少一个、优先地至少两个、优先地至少三个，所述轻链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID N°31、32和33或者在最佳对齐后分别与序列SEQ ID N°31、32和33具有至少80％(优选85％、90％、95％和98％)同一性的序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少一个、优先地至少两个、优先地三个；和
·包含如下重链和轻链的单克隆抗体，所述重链包含分别具有氨基酸序列SEQ IDN°34、35和36或者在最佳对齐后分别与序列SEQ ID N°34、35和36具有至少80％(优选85％、90％、95％和98％)同一性的序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少一个、优先地至少两个、优先地三个，所述轻链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID N°37、38和39或者在最佳对齐后分别与序列SEQ ID N°37、38和39具有至少80％(优选85％、90％、95％和98％)同一性的序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少一个、优先地至少两个、优先地三个。
在本发明的意义上，两个核酸序列或两个氨基酸序列之间的“百分比同一性”或“％同一性”指最佳对齐后获得的待比较的两个序列之间相同核苷酸或氨基酸残基的百分比，该百分比完全是统计的，并且两个序列之间的差异是沿着它们的长度随机分布的。两个核酸或氨基酸序列的比较传统上通过在将它们对齐之后比较序列来进行，所述比较能够通过区段进行或通过使用“对齐窗口”。除了通过手工比较之外，还可以通过本领域技术人员已知的方法进行序列的最佳对齐以用于比较。
对于展示出与参考氨基酸序列至少80％，优选85％、90％、95％和98％同一性的氨基酸序列，优选的例子包括含有参考序列、某些修饰(特别是至少一个氨基酸的缺失、添加或取代)、截短或延伸的那些。在取代一个或多个连续或非连续的氨基酸的情况下，如下的取代是优选的，其中被取代的氨基酸被“等效”氨基酸代替。这里，表述“等效氨基酸”意指可以取代结构性氨基酸之一而不修改相应抗体的生物活性的任何氨基酸以及下面定义的那些具体例子中的任何氨基酸。
等效氨基酸可由它们取代的氨基酸的结构同源性或由可能生成的多种抗体之间的生物活性的比较测试结果确定。
在一个更特别的实施方案中，所述抗体是单克隆抗体，所述单克隆抗体选自：
·单克隆抗体，其包含具有氨基酸序列SEQ ID N°41的重链和具有氨基酸序列SEQID N°42的轻链；
·单克隆抗体，其包含具有氨基酸序列SEQ ID N°43的重链和具有氨基酸序列SEQID N°44的轻链；
·单克隆抗体，其包含具有氨基酸序列SEQ ID N°45的重链和具有氨基酸序列SEQID N°46的轻链；
·单克隆抗体，其包含具有氨基酸序列SEQ ID N°47的重链和具有氨基酸序列SEQID N°48的轻链；
·单克隆抗体，其包含具有氨基酸序列SEQ ID N°49的重链和具有氨基酸序列SEQID N°50的轻链；和
·单克隆抗体，其包含具有氨基酸序列SEQ ID N°51的重链和具有氨基酸序列SEQID N°52的轻链。
在另一个特别的实施方案中，本发明的方法中使用的抗体是人源化抗体。
如本文所用的表述“人源化抗体”指含有源自非人源的抗体的CDR区的抗体，抗体分子的其他部分源自一种或若干种人抗体。另外，一些骨架区段残基(称为框架FR)可根据本领域技术人员已知的技术(Jones等人,Nature,321:522-525,1986)来修饰以保持结合亲和力。人源化的目的是降低异种抗体(诸如鼠抗体)的免疫原性，用于引入到人体内，同时保持抗体的全部抗原结合亲和力和特异性。
本发明的人源化抗体或其片段可以通过本领域技术人员已知的技术制备(诸如例如文件Singer等人,J.Immun.,150:2844-2857,1992中所述的那些)。这样的人源化抗体优选用于涉及体外诊断或体内预防性和/或治疗性治疗的方法中。其他人源化技术也是本领域技术人员已知的。事实上，可以使用多种技术对抗体进行人源化，所述技术包括CDR-移植(EP 0 451 261；EP 0 682 040；EP 0 939 127；EP 0 566 647；US 5,530,101；US 6,180,370；US 5,585,089；US 5,693,761；US 5,639,641；US 6,054,297；US 5,886,152；和US 5,877,293)、镶饰或重塑(EP 0 592 106；EP 0 519 596；Padlan E.A.,1991,MolecularImmunology 28(4/5):489-498；Studnicka G.M.等人,1994,Protein Engineering 7(6):805-814；Roguska M.A.等人,1994,Proc.Natl.Acad.ScL U.S.A.,91:969-973)、和链改组(美国专利号5,565,332)。人抗体可通过本领域中已知的多种方法(包括噬菌体展示方法)制成。另参见美国专利号4,444,887、4,716,111、5,545,806和5,814,318；和国际专利申请公开号WO98/46645、WO 98/50433、WO 98/24893、WO 98/16654、WO 96/34096、WO 96/33735和WO 91/10741。
在一个更特别的实施方案中，所述抗体是人源化抗体，所述人源化抗体选自：
·包含如下重链和轻链的人源化抗体，所述重链包含分别具有氨基酸序列SEQ IDN°4、5和6或者在最佳对齐后分别与序列SEQ ID N°4、5和6具有至少80％(优选85％、90％、95％和98％)同一性的序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少一个、优先地至少两个、优先地三个，所述轻链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID N°7、8和9或者在最佳对齐后分别与序列SEQ ID N°7、8和9具有至少80％(优选85％、90％、95％和98％)同一性的序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少一个、优先地至少两个、优先地三个；
·包含如下重链和轻链的人源化抗体，所述重链包含分别具有氨基酸序列SEQ IDN°10、11和12或者在最佳对齐后分别与序列SEQ ID N°10、11和12具有至少80％(优选85％、90％、95％和98％)同一性的序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少一个、优先地至少两个、优先地三个，所述轻链分别具有氨基酸序列SEQ ID N°13、14和15或者在最佳对齐后分别与序列SEQ ID N°13、14和15具有至少80％(优选85％、90％、95％和98％)同一性的序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少一个、优先地至少两个、优先地三个；
·包含如下重链和轻链的人源化抗体，所述重链包含分别具有氨基酸序列SEQ IDN°16、17和18或者在最佳对齐后分别与序列SEQ ID N°16、17和18具有至少80％(优选85％、90％、95％和98％)同一性的序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少一个、优先地至少两个、优先地三个，所述轻链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID N°19、20和21或者在最佳对齐后分别与序列SEQ ID N°19、20和21具有至少80％(优选85％、90％、95％和98％)同一性的序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少一个、优先地至少两个、优先地三个；
·包含如下重链和轻链的人源化抗体，所述重链包含分别具有氨基酸序列SEQ IDN°22、23和24或者在最佳对齐后分别与序列SEQ ID N°22、23和24具有至少80％(优选85％、90％、95％和98％)同一性的序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少一个、优先地至少两个、优先地三个，所述轻链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID N°25、26和27或者在最佳对齐后分别与序列SEQ ID N°25、26和27具有至少80％(优选85％、90％、95％和98％)同一性的序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少一个、优先地至少两个、优先地三个；
·包含如下重链和轻链的人源化抗体，所述重链包含分别具有氨基酸序列SEQ IDN°28、29和30或者在最佳对齐后分别与序列SEQ ID N°28、29和30具有至少80％(优选85％、90％、95％和98％)同一性的序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少一个、优先地至少两个、优先地三个，所述轻链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID N°31、32和33或者在最佳对齐后分别与序列SEQ ID N°31、32和33具有至少80％(优选85％、90％、95％和98％)同一性的序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少一个、优先地至少两个、优先地三个；和
·包含如下重链和轻链的人源化抗体，所述重链包含分别具有氨基酸序列SEQ IDN°34、35和36或者在最佳对齐后分别与序列SEQ ID N°34、35和36具有至少80％(优选85％、90％、95％和98％)同一性的序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少一个、优先地至少两个、优先地三个，所述轻链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID N°37、38和39或者在最佳对齐后分别与序列SEQ ID N°37、38和39具有至少80％(优选85％、90％、95％和98％)同一性的序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少一个、优先地至少两个、优先地三个；
其中所述抗体还包含源自人抗体的轻链和重链的恒定区。
在另一个更特别的实施方案中，所述抗体是人源化抗体，所述人源化抗体选自：
·人源化抗体，其包含具有氨基酸序列SEQ ID N°53的重链可变区和具有氨基酸序列SEQ ID N°54的轻链可变区；
·人源化抗体，其包含具有氨基酸序列SEQ ID N°55的重链可变区和具有氨基酸序列SEQ ID N°56的轻链可变区；
·人源化抗体，其包含具有选自SEQ ID N°57、58和59之间的氨基酸序列的重链可变区和具有选自SEQ ID N°60、61和62之间的氨基酸序列的轻链可变区；
·人源化抗体，其包含具有选自SEQ ID N°63、64和65之间的氨基酸序列的重链可变区和具有选自SEQ ID N°66、67和68之间的氨基酸序列的轻链可变区；
·人源化抗体，其包含具有选自SEQ ID N°69和71之间的氨基酸序列的重链可变区和具有选自SEQ ID N°70和72之间的氨基酸序列的轻链可变区；和
·人源化抗体，其包含具有选自SEQ ID N°75和76之间的氨基酸序列的重链可变区和具有选自SEQ ID N°77和78之间的氨基酸序列的轻链可变区；
其中所述抗体还包含源自人抗体的轻链和重链的恒定区。
在第一个实施方案中，根据本发明所述的方法包括使生物样品与结合hPG的表位的抗hPG抗体接触，其中所述表位位于hPG的C末端部分或位于NPG的hPG的N末端部分。
在一个更具体的实施方案中，根据本发明所述的方法包括使生物样品与结合hPG的表位的抗hPG抗体接触，其中所述表位包括选自以下的对应于前胃泌素的N末端部分的氨基酸序列的氨基酸序列：对应于hPG的第10至14位氨基酸、hPG的第9至14位氨基酸、hPG的第4至10位氨基酸、hPG的第2至10位氨基酸和hPG的第2至14位氨基酸的氨基酸序列，其中hPG的氨基酸序列为SEQ ID N°1。
在一个更具体的实施方案中，根据本发明所述的方法包括使生物样品与结合hPG的表位的抗hPG抗体接触，其中所述表位包括选自以下的对应于前胃泌素的C末端部分的氨基酸序列的氨基酸序列：对应于hPG的第71至74位氨基酸、hPG的第69至73位氨基酸、hPG的第71至80位氨基酸(SEQ ID N°40)、hPG的第76至80位氨基酸和hPG的第67至74位氨基酸的氨基酸序列，其中hPG的氨基酸序列为SEQ ID N°1。
在第一个实施方案中，根据本发明所述的组合物包含识别表位的抗体，所述表位包含对应于前胃泌素的氨基酸序列的氨基酸序列。
在一个更具体的实施方案中，根据本发明所述的组合物包含识别前胃泌素的表位的抗体，其中所述表位包含对应于前胃泌素的N末端部分的氨基酸序列的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列可包含hPG的第10至14位残基、hPG的第9至14位残基、hPG的第4至10位残基、hPG的第2至10位残基或hPG的第2至14位残基，其中hPG的氨基酸序列为SEQ ID N°1。
在一个更具体的实施方案中，根据本发明所述的组合物包含识别前胃泌素的表位的抗体，其中所述表位包含对应于前胃泌素的C末端部分的氨基酸序列的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列可包含hPG的第71至74位残基、hPG的第69至73位残基、hPG的第71至80位残基(SEQ ID N°40)、hPG的第76至80位残基或hPG的第67至74位残基，其中hPG的氨基酸序列为SEQ ID N°1。
在根据本发明所述的用于体外诊断前列腺癌的方法的一个特别的实施方案中，所述方法包括使来自受试者的生物样品与结合前胃泌素的第一部分的第一分子以及与结合前胃泌素的第二部分的第二分子接触的步骤。在一个更特别的实施方案中，其中所述前胃泌素结合分子是抗体，使来自受试者的生物样品与结合前胃泌素的第一表位的抗体以及与结合前胃泌素的第二表位的第二抗体接触。
在本发明方法的特别实施方案中，所述方法包括以下步骤：使来自受试者的生物样品与结合前胃泌素的第一部分的第一种药剂和与结合前胃泌素的第二部分的第二药剂接触。在一个更特别的实施方案中，其中所述前胃泌素结合分子是抗体，使来自受试者的生物样品与结合前胃泌素的第一表位的抗体以及与结合前胃泌素的第二表位的第二抗体接触。
根据一个优选的实施方案，所述第一抗体与不溶性或部分可溶性载体结合。通过所述第一抗体结合前胃泌素导致从所述生物样品中捕获前胃泌素。优选地，所述第一抗体为结合hPG的表位的抗体，其中所述表位包括如上所述的对应于前胃泌素的C末端部分的氨基酸序列的氨基酸序列。更优选地，所述第一抗体是在WO 2011/083088中描述的由杂交瘤2H9F4B7产生的单克隆抗体Mab14。杂交瘤2H9F4B7在布达佩斯条约下于2016年12月27日保藏在法国75724巴黎CEDEX 15的25-28rue du Docteur Roux巴斯德研究所的CNCM，参考号为I-5158(参见WO 2017/114973)。
根据另一个优选的实施方案，所述第二抗体用可检测的部分标记，如下所述。通过第二抗体结合前胃泌素使得能够检测存在于生物样品中的前胃泌素分子。此外，通过第二抗体结合前胃泌素使得能够对存在于生物样品中的前胃泌素分子进行定量。优选地，所述第二抗体是结合hPG的表位的抗体，其中所述表位包括如上所述的对应于前胃泌素的N末端部分的氨基酸序列的氨基酸序列。更优选地，所述N末端抗体为如上所述的多克隆抗体。可替代地，还可以使用结合前胃泌素的N末端内的表位的单克隆抗体，诸如例如上述N末端单克隆抗体，特别是包含如下重链和轻链的单克隆抗体，所述重链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID N°16、17和18的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，所述轻链包含具有氨基酸序列SEQ ID N°19、20和21的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3。
在一个特别优选的实施方案中，第一抗体与不溶性或部分可溶性载体结合，并且第二抗体用可检测的部分标记。
在一个优选的实施方案中，本发明的用于诊断前列腺癌的方法包括检测来自人受试者的生物样品中的前胃泌素。
在一个更优选的实施方案中，本发明的用于诊断前列腺癌的方法包括确定来自人受试者的生物样品中前胃泌素的浓度。
在另一个特别的实施方案中，本发明的用于诊断前列腺癌的方法包括检测来自人受试者的生物样品中前胃泌素的浓度，其中所述生物样品选自血液、血清和血浆。
在一个另外的优选的实施方案中，本发明的方法包括使来自所述受试者的样品与上文所述的抗hPG抗体接触，其中所述抗hPG抗体在所述样品中的结合指示所述受试者中前列腺癌的存在。
在一个更特别的实施方案中，本发明的方法包括使来自所述受试者的样品与如上所述的抗hPG抗体接触，其中在所述血浆中高于10pM浓度的前胃泌素指示所述受试者中前列腺癌的存在。
更优选地，本发明的方法包括使来自所述受试者的样品与上文所述的抗hPG抗体接触，其中所述样品中高于10pM、20pM、30pM或40pM浓度的前胃泌素指示所述受试者中前列腺癌的存在。
仍然更优选地，本发明的方法包括使来自所述受试者的样品与上文所述的抗hPG抗体接触，其中所述样品中高于10pM、优选高于20pM、更优选高于30pM、仍然更优选高于40pM、甚至更优选高于50pM浓度的前胃泌素指示所述受试者中转移的前列腺癌的存在。
本发明还涉及用于监测患者中前列腺癌治疗功效的方法，所述前列腺癌治疗诸如化疗、生物治疗、免疫治疗或抗体治疗，所述方法通过确定在治疗前列腺癌之前从患者获得的第一样品(诸如体液或前列腺癌的活检)中前胃泌素的浓度，然后将所述第一样品中前胃泌素的浓度与在治疗后从同一患者获得的第二样品中前胃泌素的浓度进行比较，其中与所述第一样品相比，所述第二样品中前胃泌素浓度的降低指示治疗是有效的。
在一个特别的实施方案中，根据本发明所述的方法包括将从患者获得的生物样品中前胃泌素浓度与所述样品中前胃泌素浓度的预定值进行比较，在一个特别的实施方案中，所述预定值选自：样品值的均值或平均值，基于无前列腺癌群体中确定的均值或平均值；当已知患者无前列腺癌时获得的前胃泌素浓度值。
在一个特别的实施方案中，根据本发明所述的用于体外诊断前列腺癌的方法包括确定来自所述患者的样品中前胃泌素的浓度和前列腺癌的第二诊断测试。在一个更特别的实施方案中，根据本发明所述的用于体外诊断前列腺癌的方法包括确定来自所述患者的样品中前胃泌素的浓度和前列腺癌的第二诊断测试，其中所述第二诊断测试包括检测特定生物标志物，诸如，例如，PSA、激肽释放酶、PCa抗原3(PCa3)、TMPRSS2-ERG、SChLAP1、三种外泌体基因(ERG、PCA3、SPDEF)、泌尿两种基因组合(HOXC6和DLX1)，以及技术人员已知的任何其它前列腺癌生物标志物(参见例如，McGrath等人,Prostate Int.2016,4(4):130-135)。
在本发明的一个特别实施方案中，根据本发明所述的方法包括确定来自已经或正在接受前列腺癌治疗的患者的样品中随时间的前胃泌素水平。
通过下面对例子的以下详细描述，本发明的实施方案的特征将变得更加明显。
附图说明
图1
使用ELISA试剂盒DECODE Lab(捕获抗体：Mab14，检测抗体：抗hPG多克隆抗体)测量来自前列腺癌患者的40个血浆样品和来自健康供体的119个血浆样品中前胃泌素的浓度。
实施例
实施例1：使用多克隆抗体检测血浆前胃泌素浓度
通过使用两种特异性抗前胃泌素抗体利用ELISA定量血浆前胃泌素水平：将捕获抗体涂布在板的孔上，而使用披露抗体来检测前胃泌素并且介导信号的披露(revelation)。
在本实施例中，定量基于ELISA方法，其允许通过使用反应发光的底物来分配与结合由捕获抗体保持的抗原的抗体的发光量成比例的值。
材料
试剂和仪器列于表7：
名称 供应商 参考号
板MaxiSORP white Nunc，96孔 Dutscher #055221
碳酸钠/碳酸氢钠 Sigma #21851
DPBS 1X Lonza #P04-36500
Tween-20 Biosolve #20452335
BSA Euromedex #04-100-810-C
链霉亲和素-HRP Pierce(Thermo) #21130
SuperSignal ELISA Femto最大灵敏度底物 Pierce(Thermo) #37074
抗前胃泌素多克隆抗体 Eurogentec /
表7
根据标准方案，通过用N末端前胃泌素(SEQ ID N°2)或用对应于hPG的第71至80位氨基酸并具有序列FGRRSAEDEN(SEQ ID N°40)的C末端前胃泌素免疫兔子，来获得多克隆抗体。
本测定中使用的针对前胃泌素的多克隆抗体的结合特征如下：不结合G34-Gly、G34、G17-Gly、G17，结合全长前胃泌素。
通过将一个胶囊的内容物溶解于100ml的MilliQ水中，通过制备50mM pH 9.6的碳酸盐-碳酸氢钠的溶液来涂布96孔板。在碳酸盐缓冲液中制备捕获抗体(3μg/ml)的溶液，所述捕获抗体对应于通过使用前胃泌素的C末端FGRRSAEDEN(SEQ ID N°40)获得的多克隆抗体。将100微升的抗体溶液添加至各孔并在4℃孵育16小时(一夜)。然后通过去除抗体溶液来封闭板并用300μl 1X PBS/0.1％Tween-20洗涤3次，然后每个孔添加200μl的封闭缓冲液(1X PBS/0.1％Tween-20/0.1％BSA)，并在22℃孵育2小时。然后去除封闭缓冲液，用300μl1X PBS/0.1％Tween-20洗涤孔3次。
如下进行血浆稀释：使用纯的、稀释1/2、1/5和1/10的血浆。由纯的血浆在1X PBS/0.1％Tween 20/0.1％BSA中制备稀释液。
对于对照测试，在已知浓度的前胃泌素的存在下进行ELISA，如下制备前胃泌素稀释液：以0.45mg/ml(45microM)的浓度制备储备重组PG(在大肠杆菌中产生并用谷胱甘肽琼脂糖/标签去除(Tev)/IMAC Counter纯化/透析亲和纯化的全长人前胃泌素，来自法国巴黎巴斯德研究所)，一式三份。如下制备浓度范围的前胃泌素：
-溶液A：预稀释1/10，2μl的储备液+18μl的缓冲液
-溶液B：预稀释1/100，10μl的A+90μl的缓冲液
-溶液C：预稀释1/1000，10μl的B+90μl的缓冲液
-溶液D：500pM，5.55μl的C+494.5μl的稀释剂
-溶液E：250pM，250μl的D+250μl的稀释剂
-溶液F：100pM，200μl的E+300μl的稀释剂
-溶液G：50pM，250μl的F+250μl的稀释剂
-溶液H：25pM，200μl的G+200μl的稀释剂
-溶液I：10pM，100μl的H+150μl的稀释剂
重组PG的范围是线性的并且因此可以根据使用的抗体或多或少地扩展。
对于测试样品的制备，留出大约500μl的每个样品并储存直到分析(并且在需要时确认)结果。测定100μl的所述范围的每一点和/或血浆：纯的、稀释至1/2、1/5和1/10，并在22℃在板上孵育2小时。
对于测试的披露，将板用300μl 1X PBS/0.1％Tween-20洗涤3次。通过在1X PBS/0.1％Tween-20/0.1％BSA中稀释来制备0.5μg/ml的与生物素结合的兔抗前胃泌素多克隆抗体的溶液，其中所述抗体已经通过使用作为免疫原的前胃泌素的N-末端部分而获得。将100μl的该溶液添加至各孔。在22℃孵育1小时。使用链霉亲和素-HRP进行的披露通过以下步骤进行：去除检测抗体，并且用300μl 1X PBS/0.1％Tween-20洗涤3次，然后制备在1XPBS/0.1％Tween-20/0.1％BSA中稀释的20ng/ml的链霉亲和素-HRP的溶液，其中将100加100μl的该溶液添加至各孔，然后在22℃孵育1小时。
检测由以下步骤组成：去除链霉亲和素-HRP，并且用300μl 1X PBS/0.1％Tween-20洗涤3次，然后每孔添加100μl的化学发光底物溶液。在使用前30分钟，通过混合等体积的两种溶液(SuperSignal ELISA Femto试剂盒，20ml+20ml)来制备底物溶液，并在黑暗中在室温下保存。在黑暗中在室温下孵育5分钟后读取发光。
对于每种条件，一式三份进行测试，并且该范围的结果会作为图表呈现，该图表显示出取决于前胃泌素浓度的发光变化。对于每种血浆稀释液，使用相应范围(范围1/10指稀释到1/10的样品)的线性回归线的方程，来确定前胃泌素的浓度。
方法和结果
在对照患者中，前胃泌素的血浆中值浓度为0pM，而在患有前列腺癌的患者(n＝103)中可以检测到显著的血浆前胃泌素浓度。因此，与健康对照个体相比，患有前列腺癌的患者在其血浆中具有更高的前胃泌素水平。
实施例2：使用单克隆抗前胃泌素抗体检测前胃泌素浓度
将Nunc MaxiSORP 96孔板的孔用如下的第一前胃泌素特异性抗体涂布。在MilliQ水中的50mM，pH 9.6的碳酸钠/碳酸氢钠缓冲溶液中，将对前胃泌素的羧基末端区域具有特异性的抗前胃泌素单克隆抗体稀释到3μg/ml的浓度。
然后将总共100μl的该抗体溶液添加到96孔板的每个孔中，并且在4℃下孵育过夜。结合后，从孔中去除该抗体溶液，然后将孔用100μl洗涤缓冲液(IX PBS/0.1％Tween-20)洗涤三次。然后将总共100μl封闭缓冲液(IXPBS/0.1％Tween-20/0.1％BSA)添加到每个孔，并且在22℃孵育2小时。然后去除封闭缓冲液，并用洗涤缓冲液将孔洗涤三次。然后将从患者分离的血浆或血清样品以100μl体积按如下稀释系列添加到孔中：典型地1:1、1:2、1:5和1:10稀释，并且然后在22℃孵育2小时。一式两份分析血浆或血清样品。
测定还包括两个标准曲线。第一标准曲线是使用最终量为每孔1ng、0.5ng、0.25ng、0.1ng、0.05ng、0.01ng和0ng的重组前胃泌素的稀释度制备的。作为阴性对照的第二标准曲线是由在封闭缓冲液中稀释的前胃泌素阴性人血清以与测试样品相同的稀释度(即1:1、1:2、1:5和1:10)制备的。可替代地，当对血浆样品进行测定时，作为阴性对照的第二标准曲线是由在封闭缓冲液中稀释的前胃泌素阴性人血浆以与测试样品相同的稀释度(即1:1、1:2、1:5和1:10)制备的。
与血浆或血清样品一起孵育完成后，去除孔的内容物，并且用洗涤缓冲液以100μl/孔将孔洗涤三次，之后使用对前胃泌素具有特异性的第二抗体检测与第一抗体结合的前胃泌素，如下所述。
在封闭缓冲液中将对前胃泌素的氨基末端区域具有特异性的生物素偶联的抗前胃泌素单克隆抗体稀释至0.1-10μl g/ml的浓度，这取决于该抗体。然后将总共100μl的抗体溶液添加到每个孔，并且在22℃孵育1小时。
在第二抗体结合完成后，将板用洗涤缓冲液100μl/孔洗涤三次，之后将100μl的链霉亲和素-HRP(在封闭缓冲液中25ng/ml)添加到每个孔，在22℃孵育1小时。与链霉亲和素-HRP溶液一起孵育完成后，将板用洗涤缓冲液100μl/孔洗涤三次。此后，将100μl的用PierceSuperSignal ELISA Femto最大灵敏度化学发光底物试剂盒制备的化学发光底物添加到每个孔，在黑暗中在室温下孵育5min，然后在光度计上读数。
基于光度计读数，使用线性回归分析获得对应于标准曲线数据的线性方程。然后使用该方程计算不同患者样品中的前胃泌素浓度。
计算患有前列腺癌的患者中的血浆前胃泌素中值浓度，并且将其与对照患者血浆中的血浆前胃泌素中值浓度比较。这些数据证明了与健康对照个体相比，患有前列腺癌的患者在其血浆中具有升高的前胃泌素水平。
实施例3：使用多克隆抗体和单克隆抗体的组合检测血浆前胃泌素浓度。
在本实施例中，通过使用预先涂布在96孔板上的对人前胃泌素(hPG)具有特异性的抗体，通过ELISA对血浆前胃泌素水平进行定量。将标准品和样品添加到孔中，并且任何存在的hPG均与固定的捕获抗体结合。洗涤孔并添加抗hPG检测抗体辣根过氧化物酶(HRP)缀合物，产生抗体-抗原-抗体“三明治”。第二次洗涤后，添加TMB底物溶液，其产生的蓝色与初始样品中存在的hPG的量成正比。终止溶液的颜色从蓝色变为黄色，并使用酶标仪在450nm处读取孔。
根据标准方案，通过用N末端前胃泌素(SEQ ID N°2)或用对应于hPG的第71至80位氨基酸并具有序列FGRRSAEDEN(SEQ ID N°40)的C末端前胃泌素免疫兔子，来获得多克隆抗体。
根据标准方案，通过使用杂交瘤产生针对N末端前胃泌素(SEQ ID N°2)或针对对应于hPG的第71至80位氨基酸并具有序列FGRRSAEDEN(SEQ IDN°40)的C末端前胃泌素的抗体来获得单克隆抗体。
本测定中使用的针对前胃泌素的多克隆抗体和单克隆抗体的结合特征如下：不结合G34-Gly、G34、G17-Gly、G17，结合全长前胃泌素。
对于对照测试，在已知浓度的前胃泌素的存在下进行ELISA，如下制备前胃泌素稀释液：以0.45mg/ml(45microM)的浓度制备储备重组PG(在大肠杆菌中产生并用谷胱甘肽琼脂糖/标签去除(Tev)/IMAC Counter纯化/透析亲和纯化的全长人前胃泌素，来自法国巴黎巴斯德研究所)，一式三份。如下制备浓度范围的前胃泌素：
·溶液A：预稀释1/10，2μl的储备液+18μl的缓冲液
·溶液B：预稀释1/100，10μl的A+90μl的缓冲液
·溶液C：预稀释1/1000，10μl的B+90μl的缓冲液
·溶液D：500pM，5.55μl的C+494.5μl的稀释剂
·溶液E：250pM，250μl的D+250μl的稀释剂
·溶液F：100pM，200μl的E+300μl的稀释剂
·溶液G：50pM，250μl的F+250μl的稀释剂
·溶液H：25pM，200μl的G+200μl的稀释剂
·溶液I：10pM，100μl的H+150μl的稀释剂
重组PG的范围是线性的并且因此可以根据使用的抗体或多或少地扩展。
方法和结果
在已知后来发展了前列腺癌的受试者的血浆样品中确定前胃泌素水平。将前胃泌素用WO 2011/083088中所述的由杂交瘤2H9F4B7产生的C末端单克隆抗体mAb 14进行捕获(杂交瘤2H9F4B7在布达佩斯条约下于2016年12月27日保藏在法国75724巴黎CEDEX 15的25-28rue du Docteur Roux巴斯德研究所的CNCM，参考号为I-5158)。用经标记的N末端特异性多克隆抗体进行检测。
对照由来自一般群体的血浆样品构建。
数据证明，前列腺癌患者的血浆中具有可检测的前胃泌素水平，而健康对照个体则没有。
实施例4：使用DECODE Lab试剂盒检测血浆前胃泌素浓度
所述测试允许通过ELISA测量血浆EDTA中的hPG。
所述试剂盒利用了预涂布在96孔板上的对hPG具有特异性的捕获抗体。存在于添加到孔中的标准品和样品中的hPG与固定的捕获抗体结合。洗涤孔并添加抗hPG检测抗体辣根过氧化物酶(HRP)缀合物，得到抗体-抗原-抗体复合物。第二次洗涤后，将3,3',5,5'-四甲基联苯胺(TMB)底物溶液添加到孔中，其产生的蓝色与初始样品中存在的hPG的量成正比。终止溶液的颜色从蓝色变为黄色，并使用酶标仪在450nm处读取孔。
方法和结果
根据制造商的建议，使用ELISA试剂盒DECODE Lab(捕获抗体：Mab14，检测抗体：抗hPG多克隆)，使用来自前列腺癌患者的40份血浆样品和来自健康供体的119份血浆样品来测量前胃泌素的浓度。
简要地：
1.按照上一节的指示准备所有试剂、对照和样品，除了1x缀合物。
2.从微量滴定板框架上移走多余的条形板，将它们放回板盒中并在2-8℃下保存。
3.样品和对照必须一式两份进行测试。通过在96孔深孔聚丙烯微孔板的孔中添加65μl/重复，准备对照和样品的预加载。
4.将50μl样品稀释缓冲液添加到试剂盒中包含的96个预涂孔条形板中将要使用的所有孔中。
5.用多通道移液器(8个通道)将50μl对照和样品从预装的96孔深孔聚丙烯微孔板转移到试剂盒中包含的96个预涂孔条形板中。下面给出了控制布局的实例。加载时间不应超过10分钟。
1 2 3 4 5 6 7 8
A NC NC
B PC1 PC1
C PC2 PC2
D
E
F
G
H
6.用塑料石蜡覆盖板，并在37℃(±2℃)下孵育3h±5min。
7.按照10.2节所述准备1x缀合物。
8.在孵育步骤结束时，通过倒转板将孔中的所有液体丢弃。通过每孔添加300μl1X洗涤溶液进行彻底的洗涤步骤。通过倒转板丢弃1x洗涤溶液，并且将微量滴定板框架倒置在吸水纸上彻底拍干。重复所述洗涤步骤6次。在所述洗涤步骤结束时，确保从孔中完全去除液体：当纸巾上没有液体迹象时，所有液体均已被成功去除。洗涤程序至关重要。洗涤不充分可能会导致精度的下降和吸光度读数的错误升高。
9.向每个孔中添加100μl 1X缀合物。
10.用塑料石蜡覆盖板，并在21℃(±5℃)下孵育30min±3min。
11.在孵育步骤结束时，通过倒转板将孔中的所有液体丢弃。通过每孔添加300μl1X洗涤溶液进行彻底的洗涤步骤。通过倒转板丢弃1x洗涤溶液，并且将微量滴定板框架倒置在吸水纸上彻底拍干。重复所述洗涤步骤6次。在所述洗涤步骤结束时，确保从孔中完全去除液体：当纸巾上没有液体迹象时，所有液体均已被成功去除。洗涤程序至关重要。洗涤不充分会导致精度较差和吸光度读数的错误升高。
12.向每个孔中添加100μl底物溶液。添加底物溶液后，阳性对照1和阳性对照2孔的内容物应变为蓝色。
13.在黑暗中于21℃(±5℃)孵育15min±2min。
14.在不去除孔内容物的情况下，向每个孔中添加100μl所述终止溶液，以终止反应。添加所述终止溶液后，阳性对照1和阳性对照2孔的内容物应变为黄色。
15.读取并记录450nm的O.D.。
如图1所示，在对照患者(n＝119)中，测量的前胃泌素的血浆中值浓度为0pM，而在患有前列腺癌的患者(n＝40)中可以检测到显著的前胃泌素的血浆浓度。因此，患有前列腺癌的患者在其血浆中具有比健康对照个体高的前胃泌素水平。
序列表
<110> ECS前胃泌素股份有限公司
<120> 用于检测前列腺癌的组合物和方法
<130> B374172PCTD37035
<140> PCT/EP2018/058330
<141> 2017-03-30
<150> EP 17305381.0
<151> 2018-03-30
<160> 78
<170> PatentIn版本3.5
<210> 1
<211> 80
<212> PRT
<213> 智人
<400> 1
Ser Trp Lys Pro Arg Ser Gln Gln Pro Asp Ala Pro Leu Gly Thr Gly
1 5 10 15
Ala Asn Arg Asp Leu Glu Leu Pro Trp Leu Glu Gln Gln Gly Pro Ala
20 25 30
Ser His His Arg Arg Gln Leu Gly Pro Gln Gly Pro Pro His Leu Val
35 40 45
Ala Asp Pro Ser Lys Lys Gln Gly Pro Trp Leu Glu Glu Glu Glu Glu
50 55 60
Ala Tyr Gly Trp Met Asp Phe Gly Arg Arg Ser Ala Glu Asp Glu Asn
65 70 75 80
<210> 2
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 人前胃泌素的氨基酸1-14 N-末端
<400> 2
Ser Trp Lys Pro Arg Ser Gln Gln Pro Asp Ala Pro Leu Gly
1 5 10
<210> 3
<211> 26
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 人前胃泌素的氨基酸55-80 C-末端
<400> 3
Gln Gly Pro Trp Leu Glu Glu Glu Glu Glu Ala Tyr Gly Trp Met Asp
1 5 10 15
Phe Gly Arg Arg Ser Ala Glu Asp Glu Asn
20 25
<210> 4
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 4
Gly Tyr Ile Phe Thr Ser Tyr Trp
1 5
<210> 5
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 5
Phe Tyr Pro Gly Asn Ser Asp Ser
1 5
<210> 6
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 6
Thr Arg Arg Asp Ser Pro Gln Tyr
1 5
<210> 7
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 7
Gln Ser Ile Val His Ser Asn Gly Asn Thr Tyr
1 5 10
<210> 8
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 8
Lys Val Ser
1
<210> 9
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 9
Phe Gln Gly Ser His Val Pro Phe Thr
1 5
<210> 10
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 10
Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Trp
1 5
<210> 11
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 11
Phe Leu Pro Gly Ser Gly Ser Thr
1 5
<210> 12
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 12
Ala Thr Asp Gly Asn Tyr Asp Trp Phe Ala Tyr
1 5 10
<210> 13
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 13
Gln Ser Leu Val His Ser Ser Gly Val Thr Tyr
1 5 10
<210> 14
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 14
Lys Val Ser
1
<210> 15
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 15
Ser Gln Ser Thr His Val Pro Pro Thr
1 5
<210> 16
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 16
Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Tyr
1 5
<210> 17
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 17
Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr
1 5
<210> 18
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 18
Thr Arg Gly Gly Tyr Tyr Pro Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 19
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 19
Gln Ser Leu Leu Asp Ser Asp Gly Lys Thr Tyr
1 5 10
<210> 20
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 20
Leu Val Ser
1
<210> 21
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 21
Trp Gln Gly Thr His Ser Pro Tyr Thr
1 5
<210> 22
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 22
Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp Tyr Ala
1 5
<210> 23
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 23
Ile Ser Phe Ser Gly Tyr Thr
1 5
<210> 24
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 24
Ala Arg Glu Val Asn Tyr Gly Asp Ser Tyr His Phe Asp Tyr
1 5 10
<210> 25
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 25
Ser Gln His Arg Thr Tyr Thr
1 5
<210> 26
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 26
Val Lys Lys Asp Gly Ser His
1 5
<210> 27
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 27
Gly Val Gly Asp Ala Ile Lys Gly Gln Ser Val Phe Val
1 5 10
<210> 28
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 28
Gly Phe Thr Phe Thr Thr Tyr Ala
1 5
<210> 29
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 29
Ile Ser Ser Gly Gly Thr Tyr Thr
1 5
<210> 30
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 30
Ala Thr Gln Gly Asn Tyr Ser Leu Asp Phe
1 5 10
<210> 31
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 31
Lys Ser Leu Arg His Thr Lys Gly Ile Thr Phe
1 5 10
<210> 32
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 32
Gln Met Ser
1
<210> 33
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 33
Ala Gln Asn Leu Glu Leu Pro Leu Thr
1 5
<210> 34
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 34
Gly Phe Ile Phe Ser Ser Tyr Gly
1 5
<210> 35
<211> 8
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 35
Ile Asn Thr Phe Gly Asp Arg Thr
1 5
<210> 36
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 36
Ala Arg Gly Thr Gly Thr Tyr
1 5
<210> 37
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 37
Gln Ser Leu Leu Asp Ser Asp Gly Lys Thr Tyr
1 5 10
<210> 38
<211> 3
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 38
Leu Val Ser
1
<210> 39
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 39
Trp Gln Gly Thr His Phe Pro Gln Thr
1 5
<210> 40
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 人前胃泌素的氨基酸71-80 C-末端
<400> 40
Phe Gly Arg Arg Ser Ala Glu Asp Glu Asn
1 5 10
<210> 41
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 41
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Thr Val Leu Ala Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Val His Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Gly Phe Tyr Pro Gly Asn Ser Asp Ser Arg Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Ala Val Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Asp Leu Ser Ser Leu Thr Asn Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys
85 90 95
Thr Arg Arg Asp Ser Pro Gln Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 42
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 42
Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Leu Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Ser His Val Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 43
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 43
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Met Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Thr Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Ser
20 25 30
Trp Ile Glu Trp Leu Lys Gln Arg Pro Gly His Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Phe Leu Pro Gly Ser Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Lys Ala Thr Phe Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asp Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Leu Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Asp Gly Asn Tyr Asp Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 44
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 44
Asp Leu Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Ser Gly Val Thr Tyr Leu His Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Phe Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr His Val Pro Pro Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 45
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 45
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met Tyr Trp Val Lys Gln Arg Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Glu Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Phe Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Ser Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Gly Gly Tyr Tyr Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Leu Thr Val Ser Ser
115
<210> 46
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 46
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Thr Leu Ser Val Thr Ile Gly
1 5 10 15
Arg Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Tyr Trp Leu Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Glu Leu Asp Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Ile Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly
85 90 95
Thr His Ser Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 47
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 47
Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp
20 25 30
Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp
35 40 45
Met Gly Tyr Ile Ser Phe Ser Gly Tyr Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Ser Arg Ile Ser Val Thr Arg Asp Thr Ser Arg Asn Gln Phe Phe
65 70 75 80
Leu Gln Leu Thr Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Val Asn Tyr Gly Asp Ser Tyr His Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Ile Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 48
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 48
Gln Leu Ala Leu Thr Gln Ser Ser Ser Ala Ser Phe Ser Leu Gly Ala
1 5 10 15
Ser Ala Lys Leu Thr Cys Thr Leu Ser Ser Gln His Arg Thr Tyr Thr
20 25 30
Ile Glu Trp Tyr Gln Gln Gln Ser Leu Lys Pro Pro Lys Tyr Val Met
35 40 45
Glu Val Lys Lys Asp Gly Ser His Ser Thr Gly His Gly Ile Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Ser Ser Gly Ala Asp Arg Tyr Leu Ser Ile Ser
65 70 75 80
Asn Ile Gln Pro Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Ile Cys Gly Val Gly Asp
85 90 95
Ala Ile Lys Gly Gln Ser Val Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val
100 105 110
Thr Val Leu
115
<210> 49
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 49
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Gln Gly Asn Tyr Ser Leu Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 50
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 50
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Arg His Thr
20 25 30
Lys Gly Ile Thr Phe Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Ser Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn
85 90 95
Leu Glu Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 51
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 51
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ser Pro Asp Arg Arg Leu Glu Leu Val
35 40 45
Ala Ser Ile Asn Thr Phe Gly Asp Arg Thr Tyr Tyr Pro Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Thr Ser Leu Lys Ser Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Thr Gly Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 52
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 52
Asp Val Val Leu Thr Gln Thr Pro Leu Thr Leu Ser Val Thr Ile Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly
85 90 95
Thr His Phe Pro Gln Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 53
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 53
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Trp Val His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Arg Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Phe Tyr Pro Gly Asn Ser Asp Ser Arg Tyr Ser Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Arg Asp Thr Ser Ala Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Arg Asp Ser Pro Gln Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr
100 105 110
Val Ser Ser
115
<210> 54
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 54
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser
20 25 30
Asn Gly Asn Thr Tyr Leu Glu Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Phe Gln Gly
85 90 95
Ser His Val Pro Phe Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 55
<211> 118
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 55
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Ser
20 25 30
Trp Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Phe Leu Pro Gly Ser Gly Ser Thr Asp Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Asp Gly Asn Tyr Asp Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr
100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 56
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 56
Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Val His Ser
20 25 30
Ser Gly Val Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ser Gln Ser
85 90 95
Thr His Val Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 57
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 57
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Gly Gly Tyr Tyr Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 58
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 58
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Ile Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Gly Gly Tyr Tyr Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 59
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 59
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Tyr Met Tyr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Glu Ile Asn Pro Ser Asn Gly Gly Thr Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Gly Gly Tyr Tyr Pro Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 60
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 60
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Tyr Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Asn Arg Asp Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly
85 90 95
Thr His Ser Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 61
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 61
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Asn Arg Asp Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly
85 90 95
Thr His Ser Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 62
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 62
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Tyr Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Glu Arg Asp Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly
85 90 95
Thr His Ser Pro Tyr Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 63
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 63
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp
20 25 30
Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Gly Tyr Ile Ser Phe Ser Gly Tyr Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser
65 70 75 80
Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Val Asn Tyr Gly Asp Ser Tyr His Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 64
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 64
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp
20 25 30
Tyr Ala Trp Ser Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Gly Tyr Ile Ser Phe Ser Gly Tyr Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser
65 70 75 80
Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Val Asn Tyr Gly Asp Ser Tyr His Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 65
<211> 121
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 65
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp
20 25 30
Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln His Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp
35 40 45
Ile Gly Tyr Ile Ser Phe Ser Gly Tyr Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu
50 55 60
Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Ser
65 70 75 80
Leu Lys Leu Ser Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Val Asn Tyr Gly Asp Ser Tyr His Phe Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 66
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 66
Gln Leu Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ala Ser Ala Ser Leu Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Thr Cys Thr Leu Ser Ser Gln His Arg Thr Tyr Thr
20 25 30
Ile Glu Trp His Gln Gln Gln Pro Glu Lys Gly Pro Arg Tyr Leu Met
35 40 45
Lys Val Lys Lys Asp Gly Ser His Ser Lys Gly Asp Gly Ile Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Ser Ser Gly Ala Glu Arg Tyr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Val Gly Asp
85 90 95
Ala Ile Lys Gly Gln Ser Val Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val
100 105 110
Glu Ile Lys
115
<210> 67
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 67
Gln Leu Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ala Ser Ala Ser Leu Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Thr Cys Thr Leu Ser Ser Gln His Arg Thr Tyr Thr
20 25 30
Ile Ala Trp His Gln Gln Gln Pro Glu Lys Gly Pro Arg Tyr Leu Met
35 40 45
Lys Val Lys Lys Asp Gly Ser His Ser Lys Gly Asp Gly Ile Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Ser Ser Gly Ala Glu Arg Tyr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Val Gly Asp
85 90 95
Ala Ile Lys Gly Gln Ser Val Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val
100 105 110
Glu Ile Lys
115
<210> 68
<211> 115
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 68
Gln Leu Val Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ala Ser Ala Ser Leu Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Leu Thr Cys Thr Leu Ser Ser Gln His Arg Thr Tyr Thr
20 25 30
Ile Glu Trp His Gln Gln Gln Pro Glu Lys Gly Pro Arg Tyr Leu Met
35 40 45
Glu Val Lys Lys Asp Gly Ser His Ser Lys Gly Asp Gly Ile Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Ser Ser Gly Ala Glu Arg Tyr Leu Thr Ile Ser
65 70 75 80
Ser Leu Gln Ser Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gly Val Gly Asp
85 90 95
Ala Ile Lys Gly Gln Ser Val Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val
100 105 110
Glu Ile Lys
115
<210> 69
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 69
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ser Ser Ile Ser Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Gln Gly Asn Tyr Ser Leu Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 70
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 70
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Arg His Thr
20 25 30
Lys Gly Ile Thr Phe Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Arg Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn
85 90 95
Leu Glu Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 71
<211> 117
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 71
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Gln Gly Asn Tyr Ser Leu Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
<210> 72
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 72
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Arg His Thr
20 25 30
Lys Gly Ile Thr Phe Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Ser Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn
85 90 95
Leu Glu Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 73
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 73
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Gln Gly Asn Tyr Ser Leu Asp Phe Trp Gly Gln Gly Thr Thr
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu
115 120 125
Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly Cys
130 135 140
Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser
145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser
165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser
180 185 190
Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn
195 200 205
Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His
210 215 220
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
435 440 445
<210> 74
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 74
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Arg His Thr
20 25 30
Lys Gly Ile Thr Phe Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Ser Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn
85 90 95
Leu Glu Leu Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
115 120 125
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
130 135 140
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
145 150 155 160
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
165 170 175
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
180 185 190
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
195 200 205
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 75
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 75
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Asn Ile Asn Thr Phe Gly Asp Arg Thr Tyr Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Thr Gly Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 76
<211> 114
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 76
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Asn Thr Phe Gly Asp Arg Thr Tyr Tyr Val Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Gly Thr Gly Thr Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val
100 105 110
Ser Ser
<210> 77
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 77
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Asn Arg Asp Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly
85 90 95
Thr His Phe Pro Gln Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
<210> 78
<211> 112
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 78
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
1 5 10 15
Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
20 25 30
Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Phe Gln Gln Arg Pro Gly Gln Ser
35 40 45
Pro Arg Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Arg Asp Ser Gly Val Pro
50 55 60
Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile
65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Trp Gln Gly
85 90 95
Thr His Phe Pro Gln Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110

Claims (10)

1.一种用于体外诊断受试者的前列腺癌的方法，其包括以下步骤：
a)使来自所述受试者的生物样品与至少一种前胃泌素结合分子接触，
b)检测所述前胃泌素结合分子与所述样品中的前胃泌素的结合，其中所述结合指示所述受试者中前列腺癌的存在。
2.根据权利要求1所述的方法，其中步骤b)进一步包括确定前胃泌素的浓度，并且其中所述生物样品中至少10pM浓度的前胃泌素指示所述受试者中前列腺癌的存在。
3.根据权利要求2所述的方法，其包括以下另外的步骤：
c)确定参考样品中前胃泌素的参考浓度，
d)比较所述生物样品中前胃泌素的浓度与所述前胃泌素参考浓度，
e)由步骤d)的比较来确定前列腺癌的存在。
4.根据权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述前胃泌素结合分子是抗体或其抗原结合片段。
5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述抗体或其抗原结合片段选自N末端抗前胃泌素单克隆抗体和C末端抗前胃泌素单克隆抗体。
6.根据权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述结合前胃泌素的抗体是单克隆抗体，所述单克隆抗体选自：
-包含如下重链和轻链的单克隆抗体，所述重链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID N°4、5和6的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少一个、优先地至少两个、优先地三个，所述轻链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID N°7、8和9的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少一个、优先地至少两个、优先地三个；
-包含如下重链和轻链的单克隆抗体，所述重链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID N°10、11和12的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少一个、优先地至少两个、优先地三个，所述轻链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID N°13、14和15的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少一个、优先地至少两个、优先地三个；
-包含如下重链和轻链的单克隆抗体，所述重链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID N°16、17和18的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少一个、优先地至少两个、优先地三个，所述轻链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID N°19、20和21的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少一个、优先地至少两个、优先地三个；
-包含如下重链和轻链的单克隆抗体，所述重链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID N°22、23和24的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少一个、优先地至少两个、优先地三个，所述轻链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID N°25、26和27的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少一个、优先地至少两个、优先地三个；
-包含如下重链和轻链的单克隆抗体，所述重链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID N°28、29和30的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少一个、优先地至少两个、优先地三个，所述轻链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID N°31、32和33的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少一个、优先地至少两个、优先地三个；和
-包含如下重链和轻链的单克隆抗体，所述重链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID N°34、35和36的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少一个、优先地至少两个、优先地三个，所述轻链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID N°37、38和39的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少一个、优先地至少两个、优先地三个。
7.根据权利要求1至6中任一项所述的方法，其中所述生物样品与第一分子和第二分子接触，该第一分子结合前胃泌素的第一部分，该第二分子结合前胃泌素的第二部分。
8.根据权利要求1至7中任一项所述的方法，其中所述生物样品选自：血液、血清和血浆。
9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其中所述生物样品是血浆，且其中至少10pM的前胃泌素浓度指示所述受试者中前列腺癌的存在。
10.根据权利要求1至6中任一项所述的前胃泌素结合抗体或其抗原结合片段用于体外诊断前列腺癌的用途。
CN201880034255.6A 2017-03-30 2018-03-30 用于检测前列腺癌的组合物和方法 Active CN110945025B (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP17305381.0 2017-03-30
EP17305381 2017-03-30
PCT/EP2018/058330 WO2018178352A1 (en) 2017-03-30 2018-03-30 Compositions and methods for detecting prostate cancer

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN110945025A true CN110945025A (zh) 2020-03-31
CN110945025B CN110945025B (zh) 2023-11-03

Family

ID=58501413

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201880034272.XA Active CN110662769B (zh) 2017-03-30 2018-03-30 使用前胃泌素结合分子检测和治疗前列腺癌的组合物和方法
CN201880034255.6A Active CN110945025B (zh) 2017-03-30 2018-03-30 用于检测前列腺癌的组合物和方法

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201880034272.XA Active CN110662769B (zh) 2017-03-30 2018-03-30 使用前胃泌素结合分子检测和治疗前列腺癌的组合物和方法

Country Status (12)

Country Link
US (2) US11644468B2 (zh)
EP (2) EP3601347B1 (zh)
JP (2) JP7071994B2 (zh)
KR (2) KR102351556B1 (zh)
CN (2) CN110662769B (zh)
AU (2) AU2018242156B2 (zh)
BR (2) BR112019020414A2 (zh)
CA (2) CA3058263C (zh)
EA (2) EA201992318A1 (zh)
ES (2) ES2921775T3 (zh)
SG (2) SG11201908998XA (zh)
WO (2) WO2018178363A1 (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111518908A (zh) * 2020-05-18 2020-08-11 奥尔文泰生物科技(杭州)有限公司 尿液前列腺癌标志物组合及其在制备精准诊断试剂中的用途

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2019110662A1 (en) * 2017-12-05 2019-06-13 Progastrine Et Cancers S.À R.L. Combination therapy between anti-progastrin antibody and immunotherapy to treat cancer
CN112004560A (zh) 2017-12-08 2020-11-27 Ecs生物识别系统有限公司 癌症诊断中的放射性标记的前胃液素
TW201940881A (zh) 2018-01-26 2019-10-16 瑞士商Ｅｃｓ前胃泌激素公司 在癌症診斷中結合前胃泌激素檢測與其他癌症生物標記的技術
EP3759492A1 (en) 2018-02-27 2021-01-06 ECS-Progastrin SA Progastrin as a biomarker for immunotherapy

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999018210A2 (en) * 1997-10-07 1999-04-15 Corixa Corporation Compounds and methods for immunotherapy and immunodiagnosis of prostate cancer
JP2003111595A (ja) * 2001-06-25 2003-04-15 Kyogo Ito 腫瘍抗原
JP2003261460A (ja) * 2002-03-08 2003-09-16 Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd 肺選択的癌転移の診断薬および治療薬
CN101160526A (zh) * 2005-04-13 2008-04-09 株式会社先端生命科学研究所 针对胃泌素释放肽前体的抗体及其应用
WO2011045080A2 (en) * 2009-10-16 2011-04-21 Biorealites S.A.S. Monoclonal antibodies to progastrin and their uses

Family Cites Families (39)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4444887A (en) 1979-12-10 1984-04-24 Sloan-Kettering Institute Process for making human antibody producing B-lymphocytes
US4716111A (en) 1982-08-11 1987-12-29 Trustees Of Boston University Process for producing human antibodies
US4975278A (en) 1988-02-26 1990-12-04 Bristol-Myers Company Antibody-enzyme conjugates in combination with prodrugs for the delivery of cytotoxic agents to tumor cells
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
IL162181A (en) 1988-12-28 2006-04-10 Pdl Biopharma Inc A method of producing humanized immunoglubulin, and polynucleotides encoding the same
GB8924581D0 (en) 1989-11-01 1989-12-20 Pa Consulting Services Bleaching of hair
DK0710719T3 (da) 1990-01-12 2007-07-09 Amgen Fremont Inc Frembringelse af xenogene antistoffer
GB9014932D0 (en) 1990-07-05 1990-08-22 Celltech Ltd Recombinant dna product and method
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5814318A (en) 1990-08-29 1998-09-29 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
EP0519596B1 (en) 1991-05-17 2005-02-23 Merck & Co. Inc. A method for reducing the immunogenicity of antibody variable domains
WO1994004679A1 (en) 1991-06-14 1994-03-03 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
US5565332A (en) 1991-09-23 1996-10-15 Medical Research Council Production of chimeric antibodies - a combinatorial approach
JPH05244982A (ja) 1991-12-06 1993-09-24 Sumitomo Chem Co Ltd 擬人化ｂ−ｂ１０
ZA932522B (en) 1992-04-10 1993-12-20 Res Dev Foundation Immunotoxins directed against c-erbB-2(HER/neu) related surface antigens
US5639641A (en) 1992-09-09 1997-06-17 Immunogen Inc. Resurfacing of rodent antibodies
PL174721B1 (pl) 1992-11-13 1998-09-30 Idec Pharma Corp Przeciwciało monoklonalne anty-CD20
WO1994025060A1 (en) * 1993-04-27 1994-11-10 Ladd Anna E Immunogenic lhrh peptide constructs and synthetic universal immune stimulators for vaccines
ATE390933T1 (de) 1995-04-27 2008-04-15 Amgen Fremont Inc Aus immunisierten xenomäusen stammende menschliche antikörper gegen il-8
EP0823941A4 (en) 1995-04-28 2001-09-19 Abgenix Inc HUMAN ANTIBODIES DERIVED FROM IMMUNIZED XENO MOUSES
US5916771A (en) 1996-10-11 1999-06-29 Abgenix, Inc. Production of a multimeric protein by cell fusion method
EP0942968B1 (en) 1996-12-03 2008-02-27 Amgen Fremont Inc. Fully human antibodies that bind EGFR
PL193780B1 (pl) 1997-04-14 2007-03-30 Micromet Ag Sposób wytwarzania receptora przeciw ludzkim antygenom, ludzkie przeciwciało i środek farmaceutyczny
US6235883B1 (en) 1997-05-05 2001-05-22 Abgenix, Inc. Human monoclonal antibodies to epidermal growth factor receptor
EP1210374B1 (en) * 1999-07-29 2006-10-11 Medarex, Inc. Human monoclonal antibodies to prostate specific membrane antigen
US20030232399A1 (en) 2000-06-14 2003-12-18 Robertson John Forsyth Russell Cancer detection methods and reagents
EP1391213A1 (en) 2002-08-21 2004-02-25 Boehringer Ingelheim International GmbH Compositions and methods for treating cancer using maytansinoid CD44 antibody immunoconjugates and chemotherapeutic agents
JP2008502738A (ja) * 2004-06-10 2008-01-31 リジェネロン・ファーマシューティカルズ・インコーポレイテッド ヒトの癌を処置するための、ｖｅｇｆインヒビターの使用
JP2008513536A (ja) * 2004-09-22 2008-05-01 レセプター バイオロジックス インコーポレイテッド プロガストリンに対するモノクローナル抗体
US20130095503A1 (en) * 2010-01-05 2013-04-18 University Of Cincinnati Serum spla2-iia as diagnosis marker for prostate and lung cancer
US9487582B2 (en) 2010-01-08 2016-11-08 Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale (Inserm) Methods for treating pancreatic cancer
US9217032B2 (en) * 2010-01-08 2015-12-22 Les Laboratoires Servier Methods for treating colorectal cancer
US8900817B2 (en) 2010-01-08 2014-12-02 Les Laboratories Servier Progastrin and liver pathologies
KR101570404B1 (ko) 2010-03-24 2015-11-20 르 라보레또레 쎄르비에르 결장직장암 및 위창자암의 예방
KR101576174B1 (ko) 2010-07-26 2015-12-09 르 라보레또레 쎄르비에르 간암 요법을 위한 방법 및 조성물
PL3071595T3 (pl) 2013-11-19 2019-09-30 Fredax Ab Humanizowane przeciwciało przeciw kalikreinie-2
WO2016066671A1 (en) * 2014-10-29 2016-05-06 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Method for treating resistant cancers using progastrin inhibitors
AR104484A1 (es) 2015-03-10 2017-07-26 Sorrento Therapeutics Inc Anticuerpos anti-psma como agentes terapéuticos
CN114705858A (zh) * 2015-12-31 2022-07-05 Syncerus有限责任公司 用于评估癌症发生的风险的组合物和方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1999018210A2 (en) * 1997-10-07 1999-04-15 Corixa Corporation Compounds and methods for immunotherapy and immunodiagnosis of prostate cancer
JP2003111595A (ja) * 2001-06-25 2003-04-15 Kyogo Ito 腫瘍抗原
JP2003261460A (ja) * 2002-03-08 2003-09-16 Kyowa Hakko Kogyo Co Ltd 肺選択的癌転移の診断薬および治療薬
CN101160526A (zh) * 2005-04-13 2008-04-09 株式会社先端生命科学研究所 针对胃泌素释放肽前体的抗体及其应用
WO2011045080A2 (en) * 2009-10-16 2011-04-21 Biorealites S.A.S. Monoclonal antibodies to progastrin and their uses

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
孙学健等: "前列腺癌标志物的新进展", 《医学综述》 *
罗冰等: "前列腺癌标志物研究进展", 《中华男科学杂志》 *
高晓天等: "抗前胃泌素释放肽单克隆抗体在小细胞肺癌诊断应用", 《中国热带医学》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111518908A (zh) * 2020-05-18 2020-08-11 奥尔文泰生物科技(杭州)有限公司 尿液前列腺癌标志物组合及其在制备精准诊断试剂中的用途
CN111518908B (zh) * 2020-05-18 2023-10-17 奥尔文泰生物科技(杭州)有限公司 尿液前列腺癌标志物组合及其在制备精准诊断试剂中的用途

Also Published As

Publication number Publication date
CN110945025B (zh) 2023-11-03
CA3058263C (en) 2023-08-01
CA3058267A1 (en) 2018-10-04
AU2018242152B2 (en) 2022-05-12
EA201992318A1 (ru) 2020-03-05
CA3058263A1 (en) 2018-10-04
SG11201908998XA (en) 2019-10-30
KR20190133219A (ko) 2019-12-02
JP7156622B2 (ja) 2022-10-19
EP3601343B1 (en) 2022-05-04
CN110662769B (zh) 2023-10-20
EP3601347B1 (en) 2021-11-03
US11614448B2 (en) 2023-03-28
ES2904939T3 (es) 2022-04-06
JP2020515875A (ja) 2020-05-28
BR112019020413A2 (pt) 2020-06-09
BR112019020414A2 (pt) 2020-06-09
KR20190141144A (ko) 2019-12-23
KR102317805B1 (ko) 2021-10-27
KR102351556B1 (ko) 2022-01-14
EP3601347A1 (en) 2020-02-05
AU2018242156B2 (en) 2021-07-29
AU2018242156A1 (en) 2019-10-31
EP3601343A1 (en) 2020-02-05
WO2018178363A1 (en) 2018-10-04
ES2921775T3 (es) 2022-08-31
US11644468B2 (en) 2023-05-09
WO2018178352A1 (en) 2018-10-04
US20210087265A1 (en) 2021-03-25
CN110662769A (zh) 2020-01-07
US20200200751A1 (en) 2020-06-25
AU2018242152A1 (en) 2019-10-17
SG11201908997UA (en) 2019-10-30
JP7071994B2 (ja) 2022-05-19
JP2020515580A (ja) 2020-05-28
EA201992316A1 (ru) 2020-03-05
CA3058267C (en) 2023-07-25

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN110945025B (zh) 用于检测前列腺癌的组合物和方法
JP6180931B2 (ja) 癌の診断および／または予後のための新規な抗体
JP7251541B2 (ja) 肺癌検出のための組成物と方法
US20210373027A1 (en) Compositions and methods for assessing the risk of cancer occurrence
JP6977105B2 (ja) Ｉｇｆ−１ｒ抗体および癌の診断のためのその使用
JP6962920B2 (ja) 卵巣癌の検出および治療のための組成物および方法
EA041328B1 (ru) Композиции и способы для диагностики рака предстательной железы
EA042821B1 (ru) Композиции и способы для диагностики рака легких
WO2019145537A1 (en) Combination of progastrin detection with other cancer biomarkers in cancer diagnosis
EA043033B1 (ru) Способ оценки риска возникновения рака, соответствующие набор, блок хранения данных и обрабатывающая система

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant