CN110662769B - 使用前胃泌素结合分子检测和治疗前列腺癌的组合物和方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及用于预防或治疗前列腺癌的组合物和方法，其中所述组合物包含结合前胃泌素的抗体，并且所述方法包括使用结合前胃泌素的抗体。
Description
前言
本发明涉及癌症的预防和治疗，更特别地其涉及用于预防或治疗前列腺癌的方法和组合物。根据本发明所述的组合物包含前胃泌素结合分子，特别是抗hPG抗体，而根据本发明所述的方法包括使用前胃泌素结合分子，并且特别是抗hPG抗体。
根据国际癌症研究机构，前列腺癌(PC)是男性中第二最常见的癌症，也是男性中与癌症相关的死亡的第五大诱因。2012年，其在110万男性中发生，造成307,000例死亡。在美国，它是美国男性中最常见的非皮肤癌症。估计有六分之一的白人男性和五分之一的非洲裔美国男性在其一生中将会被诊断出患有前列腺癌，并且可能性随着年龄的增长而增加。
大多数前列腺癌(95％)是腺癌或腺性癌症，其开始于正常分泌精液的前列腺细胞突变为癌细胞时。大约4％的前列腺癌病例具有移行性细胞形态，且被认为起因于前列腺尿道的尿道上皮内层。据信具有神经内分泌形态的少数情况起因于通常存在于前列腺中的神经内分泌干细胞或起因于细胞转化过程中异常的分化程序。鳞状细胞癌占所有前列腺癌的不到1％。前列腺癌最常见地转移到骨骼、淋巴结，并在局部进展后可能侵入直肠、膀胱和下输尿管。
治疗通常包括手术、化学疗法、放射疗法和靶向疗法，单独或联合使用。然而，结果往往是差的，5年整体生存率不到10％。这主要是因为大多数人仅在晚期疾病时被发现，这直接影响了生存率。在一些亚洲国家中，已经显示出筛选工作与更高的存活率相关联。
前列腺癌总人群的五年生存率非常高(约99％)。然而，当癌症转移时，此比率会显著降低(约28.5％)。幸运的是，约80％的患者被诊断出患有局部疾病(Surveillance E；EndResults Program(SEER).Surveillance,Epidemiology,and Ends Results Program.FastStats；2016[2016年9月12日引用的]。可在http://seer.cancer.gov/faststats/ selections.php获得)。这在很大程度上是由于筛选方法的改进。然而，由于其局限性，最常用的生物标志物前列腺特异性抗原(PSA)已被证明是有争议的诊断测定法。
因此，仍然存在对于新的用于预防或治疗前列腺癌的组合物和方法的需求。
这是本发明的目的。
说明
现在，本发明提供了特异性结合前胃泌素的抗体，用于预防或治疗前列腺癌。本发明还提供了用于预防或治疗前列腺癌的组合物，其中所述组合物包含结合前胃泌素的抗体，和用于预防或治疗前列腺癌的方法，所述方法包括单独使用包含结合前胃泌素的抗体的组合物或与任何其他已知的针对前列腺癌的预防或治疗方法组合使用。
本文所述的抗hPG抗体，特别是中和抗hPG抗体，抑制了前列腺肿瘤细胞的PG依赖性增殖，使其成为治疗前列腺癌的有用治疗剂。因此，还提供了包含抗hPG抗体的药物组合物，以及使用抗hPG抗体和/或药物组合物治疗前列腺癌的方法。可以将药物组合物配制成用于任何方便的给药途径，例如包括肠胃外、皮下或静脉内注射，并且所述药物组合物典型地将包括抗hPG抗体，以及一种或多种适用于所需的给药方式的可接受的载体、赋形剂和/或稀释剂，并且可以包括如下进一步所述的其他任选的成分。对于治疗用途，可以将组合物包装成单位剂型以便于使用。
所述治疗方法通常包括向需要治疗的受试者(例如被诊断患有前列腺癌的受试者)给予有效于提供治疗益处的一定量的抗PG抗体和/或其药物组合物。下文将详细描述的治疗益处包括前列腺癌的任何改善，例如，减缓或阻止前列腺癌的进展，降低前列腺癌的严重程度，抑制前列腺肿瘤的生长或前列腺癌细胞的增殖，减少前列腺肿瘤大小和/或降低前列腺癌患者的PG血清水平。所述受试者可以是人类或非人类，包括驯养的动物(例如，猫、狗、奶牛、猪、马)或非驯养的动物。优选地，待治疗的受试者是人。抗hPG抗体疗法有用的受试者可以是：处于疾病进展任何阶段(例如，前列腺癌0、I、II、III或IV期)的患者、接受过前列腺癌疗法(例如，化疗、放疗、手术切除)的患者或正在接受其他前列腺癌疗法的患者。
还提供了通过向需要抑制前列腺癌干细胞生长的患者给予有效于抑制所述前列腺癌干细胞的量的抗PG抗体和/或其药物组合物来抑制患者前列腺癌干细胞生长的方法。
在许多实施方案中，所述抗PG抗体可有效于减少前列腺癌干细胞的增殖或增加其分化或细胞死亡的速率，或者降低所治疗患者中前胃泌素的血药浓度。在其他实施方案中，可将所述抗PG抗体和/或其药物组合物与有效于抑制结肠直肠癌干细胞生长的第二治疗剂(例如，具有除针对前胃泌素以外的特异性的抗体)同时或在其后给药。
如本文所述的用抗hPG抗体的治疗可以与其他疗法组合或辅助其他疗法。如本文所述，其他前列腺癌疗法的非限制性例子包括化疗、放疗、手术切除和抗体疗法。在一个具体的例子中，抗hPG抗体与化学治疗剂组合给药。在另一个具体的例子中，抗hPG抗体是辅助于手术切除给药的。
本发明还涉及药物组合物，其包含抗PG抗体，优选地具有药学上可接受的载体和/或赋形剂。在一些实施方案中，该药物组合物还包含第二治疗剂。在一些实施方案中，该第二治疗剂是生物剂或化学治疗剂。生物剂的例子包括抗EGFR单克隆抗体和抗VEGF单克隆抗体，而化学治疗试剂包括诸如例如烷化剂、抗代谢物、抗肿瘤抗生素、有丝分裂抑制剂、染色质功能抑制剂、抗血管生成剂、抗雌激素、抗雄激素和免疫调节剂等的化合物。
人前胃泌素原，一种101个氨基酸的肽(氨基酸序列参考号：AAB19304.1)，其为胃泌素基因的初级翻译产物。前胃泌素通过从前胃泌素原切割前21个氨基酸(信号肽)而形成。前胃泌素的80个氨基酸的链被切割和修饰酶进一步加工成若干生物活性胃泌素激素形式：包含前胃泌素的第38-71位氨基酸的胃泌素34(G34)和甘氨酸延伸的胃泌素34(G34-Gly)，包含前胃泌素的第55-71位氨基酸的胃泌素17(G17)和甘氨酸延伸的胃泌素17(G17-Gly)。
抗人前胃泌素(抗hPG)单克隆抗体和其用于诊断或治疗的用途已经在以下文件中描述：关于结肠直肠癌的WO 2011/083 088，关于乳腺癌的WO 2011/083 090，关于胰腺癌的WO 2011/083 091，关于结肠直肠癌和胃肠癌的WO 2011/116 954，和关于肝脏病理的WO2012/013 609和WO 2011/083089。
从本文给出的详细描述和附图将会更加全面地理解本发明，其仅通过说明的方式给出，并且不限制本发明的预期范围。
在第一方面，本发明涉及用于预防或治疗前列腺癌的前胃泌素结合分子。本公开还提供了用于预防或治疗前列腺癌的组合物，其中所述组合物包含前胃泌素结合抗体或其抗原结合片段。
“前胃泌素结合分子”在本文中指结合前胃泌素但是不结合胃泌素-17(G17)、胃泌素-34(G34)、甘氨酸延伸的胃泌素-17(G17-Gly)或甘氨酸延伸的胃泌素-34(G34-Gly)的任何分子。本发明的前胃泌素结合分子可以是任何前胃泌素结合分子，诸如例如抗体分子或受体分子。优选地，前胃泌素结合分子是抗前胃泌素抗体(抗PG抗体)或其抗原结合片段。
术语“前胃泌素”是指哺乳动物前胃泌素肽，特别是人前胃泌素。为避免疑义，不需要任何说明，表述“人前胃泌素”或“hPG”是指序列SEQ ID No.1的人PG。人前胃泌素明显包含N末端和C末端结构域，该N末端和C末端结构域在上文提及的生物活性胃泌素激素形式中不存在。优选地，所述N末端结构域的序列由SEQ ID NO.2表示。在另一个优选的实施方案中，所述C末端结构域的序列由SEQ ID NO.3表示。
因此，在第一实施方案中，本发明涉及结合前胃泌素但不结合任何其他胃泌素基因衍生产物的抗体，用于治疗前列腺癌。
“结合(binding/bind)”及类似词语旨在抗体或其抗原结合片段与在生理条件下相对稳定的抗原形成复合物。用于确定两个分子是否结合的方法是本领域公知的并且包括，例如，平衡透析、表面等离子共振等。在一个特别的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段以比其与非特异性分子(诸如BSA或酪蛋白)结合的亲和力大至少两倍的亲和力与前胃泌素结合。在一个更特别的实施方案中，所述抗体或其抗原结合片段仅与前胃泌素结合。
表述“前列腺癌”是指起源于前列腺的任何类型的癌症。前列腺癌特别包括“前列腺腺癌”，还包括肉瘤、小细胞癌、神经内分泌肿瘤、也可能在前列腺内发展的移行性细胞癌。表述“前列腺癌”还涉及与转移相关联的前列腺癌，特别是转移至骨骼、淋巴结，以及转移至直肠、膀胱和下输尿管。
在一个具体的实施方案中，本发明提供了用于预防或治疗前列腺癌的抗PG抗体，所述抗体识别包括与前胃泌素的氨基酸序列相对应的氨基酸序列的表位。
在一个更具体的实施方案中，用于预防或治疗前列腺癌的所述抗PG抗体识别前胃泌素的表位，其中所述表位包含对应于前胃泌素N末端部分的氨基酸序列的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列可包含hPG的第10至14位残基、hPG的第9至14位残基、hPG的第4至10位残基、hPG的第2至10位残基或者hPG的第2至14位残基，其中hPG的氨基酸序列是SEQ ID N°1。
在一个更具体的实施方案中，用于预防或治疗前列腺癌的抗PG抗体识别前胃泌素的表位，其中所述表位包含对应于前胃泌素的C末端部分的氨基酸序列的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列可包含hPG的第71至74位残基、hPG的第69至73位残基、hPG的第71至80位残基(SEQ ID N°40)、hPG的第76至80位残基或hPG的第67至74位残基，其中hPG的氨基酸序列为SEQ ID N°1。
在一个更特别的实施方案中，如通过诸如上述的方法确定的，用于预防或治疗前列腺癌的抗PG抗体对前胃泌素的亲和力为至少5000nM、至少500nM、100nM、80nM、60nM、50nM、40nM、30nM、20nM、10nM、7nM、5nM、4nM、3nM、2nM、1nM、0.5nM、0.1nM、50pM、10pM、5pM、1pM或至少0.1pM。
优选地，用于预防或治疗前列腺癌的抗PG抗体是中和抗PG抗体。
表述“中和抗PG抗体”是指结合PG并且阻断PG依赖型信号传导而导致肿瘤细胞(特别是前列腺肿瘤细胞)中PG诱导的应答被抑制的抗体。抑制前列腺癌细胞的PG诱导的应答可以通过抑制细胞分化、抑制细胞死亡和/或刺激细胞增殖来介导。
如本文所用的术语“抗体”旨在包括多克隆和单克隆抗体。抗体(或“免疫球蛋白”)由糖蛋白组成，所述糖蛋白至少包含由二硫键互相连接的两条重(H)链和两条轻(L)链。每条重链包含重链可变区(或结构域)(本文缩写为HCVR或VH)和重链恒定区。重链恒定区包含三个结构域，CH1、CH2和CH3。每条轻链包含轻链可变区(本文缩写为LCVR或VL)和轻链恒定区。所述轻链恒定区包含一个结构域CL。VH和VL区可进一步细分为具有高变性的区域，称为“互补决定区”(CDR)或“高变区”，其主要负责结合抗原的表位，并且其散布有较保守的区域，称为框架区(FR)。用于鉴定抗体的轻链和重链中的CDR和用于确定其序列的方法是本领域技术人员公知的。为避免疑义，在上下文中不存在任何相反指示，表述CDR意指由IMGT定义的抗体的重链和轻链的高变区，其中所述IMGT唯一编号提供框架区和互补决定区(CDR1-IMGT：27至38，CDR2)的标准化界定。
已经定义IMGT唯一编号以比较可变结构域，无论抗原受体、链类型或种如何[Lefranc M.-P.,Immunology Today 18,509(1997)/Lefranc M.-P.,The Immunologist,7,132-136(1999)/Lefranc,M.-P.,Pommié,C.,Ruiz,M.,Giudicelli,V.,Foulquier,E.,Truong,L.,Thouvenin-Contet,V.and Lefranc,Dev.Comp.Immunol.,27,55-77(2003)]。在IMGT唯一编号中，保守氨基酸一直具有相同位点，例如半胱氨酸23(第一CYS)、色氨酸41(保守的TRP)、疏水性氨基酸89、半胱氨酸104(第二CYS)、苯丙氨酸或色氨酸118(J-PHE或J-TRP)。IMGT唯一编号提供了框架区(FR1-IMGT：第1-26位，FR2-IMGT：第39-55位，FR3-IMGT：第66-104位和FR4-IMGT：第118-128位)和互补决定区(CDR1-IMGT：第27-38位，CDR2-IMGT：第56-65位和CDR3-IMGT：第105-117位)的标准化界定。由于间隙表示未被占据的位置，CDR-IMGT长度(在括号之间显示并且由点隔开，例如[8.8.13])成为重要信息。IMGT唯一编号在二维图示中使用，被命名为IMGT Colliers de Perles[Ruiz,M.and Lefranc,M.-P.,Immunogenetics,53,857-883(2002)/Kaas,Q.and Lefranc,M.-P.,CurrentBioinformatics,2,21-30(2007)]，并且也在IMGT/3Dstructure-DB中的三维结构中使用[Kaas,Q.,Ruiz,M.和Lefranc,M.-P.,T cell receptor and MHC structuraldata.Nucl.Acids.Res.,32,D208-D210(2004)]。
每个VH和VL由三个CDR和四个FR组成，按照以下顺序从氨基末端到羧基末端排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。重链和轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区可以介导免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，所述宿主组织或因子包括免疫系统的各种细胞(例如，效应细胞)和经典补体系统的第一组分(Clq)。抗体可以是不同的同种型(即IgA、IgD、IgE、IgG或IgM)。
在一个特别的实施方案中，所述前胃泌素结合抗体或其抗原结合片段选自：多克隆抗体、单克隆抗体、嵌合抗体、单链抗体、骆驼化抗体、IgA1抗体、IgA2抗体、IgD抗体、IgE抗体、IgG1抗体、IgG2抗体、IgG3抗体、IgG4抗体和IgM抗体。
“多克隆抗体”是在一种或多种其他不相同的抗体中或在一种或多种其他不相同的抗体存在下产生的抗体。一般，在产生不相同的抗体的若干其他B淋巴细胞的存在下从一种B淋巴细胞中产生多克隆抗体。通常，直接从免疫动物中获得多克隆抗体。
术语“单克隆抗体”指从几乎同质的抗体群体中产生的抗体，其中群体包含除了可最小比例发现的少数可能天然存在的突变之外相同的抗体。单克隆抗体从单细胞克隆(诸如杂交瘤)的生长中产生，并且由一类和一个亚类的重链和一个类型的轻链表征。
表述抗体的“抗原结合片段”旨在指示任何肽、多肽或蛋白质，它们保持与所述抗体的靶标(一般还称为抗原)结合(一般是相同表位)的能力，并且包含具有抗体的氨基酸序列的至少5个连续氨基酸残基、至少10个连续氨基酸残基、至少15个连续氨基酸残基、至少20个连续氨基酸残基、至少25个氨基酸残基、至少40个连续氨基酸残基、至少50个连续氨基酸残基、至少60个连续氨基酸残基、至少70个连续氨基酸残基、至少80个连续氨基酸残基、至少90个连续氨基酸残基、至少100个连续氨基酸残基、至少125个连续氨基酸残基、至少150个连续氨基酸残基、至少175个连续氨基酸残基、或者至少200个连续氨基酸残基的氨基酸序列。
在一个特别的实施方案中，所述抗原结合片段包含其所源自的抗体的至少一个CDR。仍然在一个优选的实施方案中，所述抗原结合片段包含其所源自的抗体的2、3、4或5个CDR，更优选地6个CDR。
“抗原结合片段”可选自但不限于以下：Fv、scFv(sc指单链(single chain))、Fab、F(ab')2、Fab'、scFv-Fc片段或双抗体；或者与无序肽诸如XTEN(延伸的重组多肽)或PAS基序的融合蛋白；或者会通过化学修饰，诸如添加聚(亚烷基)醇诸如聚乙二醇(“PEG化”)(PEG化片段称为Fv-PEG、scFv-PEG、Fab-PEG、F(ab')2-PEG或Fab'-PEG)(“PEG”指聚(亚烷基)醇)，或者通过并入脂质体来增加半衰期的任何片段，所述片段具有根据本发明所述的抗体的至少一个特征性CDR。优选地，所述“抗原结合片段”是从它们所源自的抗体构建的，或包含它们所源自的抗体的重可变链或轻可变链的部分序列，所述部分序列足以保持与其所源自的抗体相同的结合特异性和足够的亲和力，对靶标的亲和力优选至少等于其所源于的抗体的亲和力的1/100，在更优选的方式中等于至少1/10。
在另一个特别的实施方案中，在根据本发明所述的用于诊断前列腺癌的方法中，使来自受试者的生物样品与结合前胃泌素的抗体接触，其中所述抗体已经通过本领域技术人员已知的免疫方法获得，其中所述免疫方法使用氨基酸序列包含前胃泌素的全部或部分氨基酸序列的肽作为免疫原。更特别地，所述免疫原包含选自以下的肽：
·肽，其氨基酸序列包含全长前胃泌素并且特别是序列SEQ ID N°1的全长人前胃泌素的氨基酸序列或由其组成；
·肽，其氨基酸序列对应于前胃泌素并且特别是序列SEQ ID N°1的全长人前胃泌素的氨基酸序列的一部分；
·肽，其氨基酸序列对应于前胃泌素的N末端部分的一部分或对应于前胃泌素的N末端部分的全部氨基酸序列，并且特别是如下的肽，其包含氨基酸序列SWKPRSQQPDAPLG(SEQ ID N°2)或由其组成；和
·肽，其氨基酸序列对应于前胃泌素的C末端部分的一部分或对应于前胃泌素的C末端部分的全部氨基酸序列，并且特别是如下的肽，其包含氨基酸序列QGPWLEEEEEAYGWMDFGRRSAEDEN(SEQ ID N°3)或由其组成；
·肽，其氨基酸序列对应于前胃泌素的C末端部分的氨基酸序列的一部分，并且特别是如下的肽，其包含对应于前胃泌素的第71-80位氨基酸的氨基酸序列FGRRSAEDEN(SEQID N°40)。
技术人员会认识到，需要时，可能使用这样的免疫来生成多克隆或单克隆抗体。用于获得这些类型的抗体中的每种的方法是本领域中公知的。因此，本领域技术人员会容易地选择和实施用于产生针对任何给定抗原的多克隆和/或单克隆抗体的方法。
如下表1至表4所述，通过使用包含对应于人前胃泌素的氨基酸序列1-14(N末端)的氨基酸序列“SWKPRSQQPDAPLG”的免疫原生成的单克隆抗体的例子包括但不限于命名为以下的单克隆抗体：mAb3、mAb4、mAb16和mAb19以及mAb20。已经描述了其他单克隆抗体，但是不清楚这些抗体实际上是否结合前胃泌素(WO 2006/032980)。表位作图的实验结果显示mAb3、mAb4、mAb16和mAb19以及mAb20确实特异性结合所述hPG N末端氨基酸序列内的表位。本领域中已经描述了特异性识别由SEQ ID NO.2表示的前胃泌素的N末端内的表位的多克隆抗体(参见例如WO 2011/083088)。
表1
表2
表3
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表4
可通过使用包含对应于人前胃泌素的氨基酸序列55-80的氨基酸序列“QGPWLEEEEEAYGWMDFGRRSAEDEN”(前胃泌素的C末端部分)的免疫原生成的单克隆抗体的例子包括但不限于命名为以下的抗体：下表5和6中的mAb8和mAb13。表位作图的实验结果显示mAb13确实特异性结合所述hPG C末端氨基酸序列中的表位。
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表5
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表6
其他例子包括通过使用包含SEQ ID N°40的氨基酸序列的免疫原生成的抗hPG单克隆和/或多克隆抗体。
术语“N末端抗hPG抗体”和“C末端抗hPG抗体”分别指与包含位于hPG的N末端部分的氨基酸的表位或与包含位于hPG的C末端部分的氨基酸的表位结合的抗体。优选地，术语“N末端抗hPG抗体”是指与位于序列由SEQ ID NO.2表示的前胃泌素的结构域中的表位结合的抗体。在另一个优选的实施方案中，术语“C末端抗hPG抗体”是指与位于序列由SEQ IDNO.3表示的前胃泌素的结构域中的表位结合的抗体。
术语“表位”是指抗体结合的抗原区域。表位可能被定义为结构性的或功能性的。功能性表位通常是结构性表位的子集，并且具有直接有助于相互作用的亲和力的那些氨基酸。表位还可能是构象性的。在某些实施方案中，表位可以包括决定簇，即分子的化学活性表面基团(诸如氨基酸、糖侧链、磷酰基或磺酰基)，并且在某些实施方案中，可具有特定的三维结构特征，和/或特定的电荷特征。可以通过由本领域技术人员已知的任何表位作图技术进行由抗体结合的表位的确定。表位可以包含顺序地位于蛋白质的氨基酸序列中的不同氨基酸。表位还可以包含并非顺序地位于蛋白质的氨基酸序列中的氨基酸。
在一个特别的实施方案中，所述抗体为单克隆抗体，所述单克隆抗体选自：
·包含如下重链和轻链的单克隆抗体，所述重链包含分别具有氨基酸序列SEQ IDN°4、5和6或者在最佳对齐后分别与序列SEQ ID N°4、5和6具有至少80％(优选85％、90％、95％和98％)同一性的序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少一个、优先地至少两个、优先地三个，所述轻链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID N°7、8和9或者在最佳对齐后分别与序列SEQ ID N°7、8和9具有至少80％(优选85％、90％、95％和98％)同一性的序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少一个、优先地至少两个、优先地三个；
·包含如下重链和轻链的单克隆抗体，所述重链包含分别具有氨基酸序列SEQ IDN°10、11和12或者在最佳对齐后分别与序列SEQ ID N°10、11和12具有至少80％(优选85％、90％、95％和98％)同一性的序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少一个、优先地至少两个、优先地三个，所述轻链分别具有氨基酸序列SEQ ID N°13、14和15或者在最佳对齐后分别与序列SEQ ID N°13、14和15具有至少80％(优选85％、90％、95％和98％)同一性的序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少一个、优先地至少两个、优先地三个；
·包含如下重链和轻链的单克隆抗体，所述重链包含分别具有氨基酸序列SEQ IDN°16、17和18或者在最佳对齐后分别与序列SEQ ID N°16、17和18具有至少80％(优选85％、90％、95％和98％)同一性的序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少一个、优先地至少两个、优先地三个，所述轻链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID N°19、20和21或者在最佳对齐后分别与序列SEQ ID N°19、20和21具有至少80％(优选85％、90％、95％和98％)同一性的序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少一个、优先地至少两个、优先地三个；
·包含如下重链和轻链的单克隆抗体，所述重链包含分别具有氨基酸序列SEQ IDN°22、23和24或者在最佳对齐后分别与序列SEQ ID N°22、23和24具有至少80％(优选85％、90％、95％和98％)同一性的序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少一个、优先地至少两个、优先地三个，所述轻链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID N°25、26和27或者在最佳对齐后分别与序列SEQ ID N°25、26和27具有至少80％(优选85％、90％、95％和98％)同一性的序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少一个、优先地至少两个、优先地三个；
·包含如下重链和轻链的单克隆抗体，所述重链包含分别具有氨基酸序列SEQ IDN°28、29和30或者在最佳对齐后分别与序列SEQ ID N°28、29和30具有至少80％(优选85％、90％、95％和98％)同一性的序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少一个、优先地至少两个、优先地至少三个，所述轻链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID N°31、32和33或者在最佳对齐后分别与序列SEQ ID N°31、32和33具有至少80％(优选85％、90％、95％和98％)同一性的序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少一个、优先地至少两个、优先地三个；和
·包含如下重链和轻链的单克隆抗体，所述重链包含分别具有氨基酸序列SEQ IDN°34、35和36或者在最佳对齐后分别与序列SEQ ID N°34、35和36具有至少80％(优选85％、90％、95％和98％)同一性的序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少一个、优先地至少两个、优先地三个，所述轻链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID N°37、38和39或者在最佳对齐后分别与序列SEQ ID N°37、38和39具有至少80％(优选85％、90％、95％和98％)同一性的序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少一个、优先地至少两个、优先地三个。
在本发明的意义上，两个核酸序列或两个氨基酸序列之间的“百分比同一性”或“％同一性”指最佳对齐后获得的待比较的两个序列之间的相同核苷酸或氨基酸残基的百分比，该百分比完全是统计的，并且两个序列之间的差异是沿着它们的长度随机分布的。两个核酸或氨基酸序列的比较传统上通过在将它们对齐之后比较序列来进行，所述比较能够通过区段进行或通过使用“对齐窗口”进行。除了通过手工比较之外，还可以通过本领域技术人员已知的方法进行序列的最佳对齐以用于比较。
对于展示出与参考氨基酸序列至少80％，优选85％、90％、95％和98％同一性的氨基酸序列，优选的例子包括含有参考序列、某些修饰(特别是至少一个氨基酸的缺失、添加或取代)、截短或延伸的那些。在取代一个或多个连续或非连续的氨基酸的情况下，如下的取代是优选的，其中被取代的氨基酸被“等效”氨基酸代替。这里，表述“等效氨基酸”意指可以取代结构性氨基酸之一而不修改相应抗体的生物活性的任何氨基酸以及下面定义的那些具体例子中的任何氨基酸。
等效氨基酸可由它们取代的氨基酸的结构同源性或由可能生成的多种抗体之间的生物活性的比较测试结果确定。
在一个更特别的实施方案中，所述抗体是单克隆抗体，所述单克隆抗体选自：
·单克隆抗体，其包含具有氨基酸序列SEQ ID N°41的重链和具有氨基酸序列SEQID N°42的轻链；
·单克隆抗体，其包含具有氨基酸序列SEQ ID N°43的重链和具有氨基酸序列SEQID N°44的轻链；
·单克隆抗体，其包含具有氨基酸序列SEQ ID N°45的重链和具有氨基酸序列SEQID N°46的轻链；
·单克隆抗体，其包含具有氨基酸序列SEQ ID N°47的重链和具有氨基酸序列SEQID N°48的轻链；
·单克隆抗体，其包含具有氨基酸序列SEQ ID N°49的重链和具有氨基酸序列SEQID N°50的轻链；和
·单克隆抗体，其包含具有氨基酸序列SEQ ID N°51的重链和具有氨基酸序列SEQID N°52的轻链。
在另一个特别的实施方案中，本发明的方法中使用的抗体是人源化抗体。
如本文所用的表述“人源化抗体”指含有源自非人源的抗体的CDR区的抗体，抗体分子的其他部分源自一种或若干种人抗体。另外，一些骨架区段残基(称为框架FR)可根据本领域技术人员已知的技术(Jones等人,Nature,321:522-525,1986)来修饰以保持结合亲和力。人源化的目的是降低异种抗体(诸如鼠抗体)的免疫原性，用于引入到人体内，同时保持抗体的全部抗原结合亲和力和特异性。
本发明的人源化抗体或其片段可以通过本领域技术人员已知的技术制备(诸如例如文件Singer等人,J.Immun.,150:2844-2857,1992中所述的那些)。这样的人源化抗体优选用于涉及体外诊断或体内预防性和/或治疗性治疗的方法中。其他人源化技术也是本领域技术人员已知的。事实上，可以使用多种技术对抗体进行人源化，所述技术包括CDR-移植(EP 0 451 261；EP 0 682040；EP 0 939 127；EP 0 566 647；US 5,530,101；US 6,180,370；US 5,585,089；US 5,693,761；US 5,639,641；US 6,054,297；US 5,886,152；和US 5,877,293)、镶饰或重塑(EP 0 592 106；EP 0 519 596；Padlan E.A.,1991,MolecularImmunology 28(4/5):489-498；Studnicka G.M.等人,1994,Protein Engineering7(6):805-814；Roguska M.A.等人,1994,Proc.Natl.Acad.ScL U.S.A.,91:969-973)、和链改组(美国专利号5,565,332)。人抗体可通过本领域中已知的多种方法(包括噬菌体展示方法)制成。还参见美国专利号4,444,887、4,716,111、5,545,806和5,814,318；和国际专利申请公开号WO 98/46645、WO 98/50433、WO 98/24893、WO 98/16654、WO 96/34096、WO 96/33735和WO 91/10741。
在一个更特别的实施方案中，所述抗体是人源化抗体，所述人源化抗体选自：
·包含如下重链和轻链的人源化抗体，所述重链包含分别具有氨基酸序列SEQ IDN°4、5和6或者在最佳对齐后分别与序列SEQ ID N°4、5和6具有至少80％(优选85％、90％、95％和98％)同一性的序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少一个、优先地至少两个、优先地三个，所述轻链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID N°7、8和9或者在最佳对齐后分别与序列SEQ ID N°7、8和9具有至少80％(优选85％、90％、95％和98％)同一性的序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少一个、优先地至少两个、优先地三个；
·包含如下重链和轻链的人源化抗体，所述重链包含分别具有氨基酸序列SEQ IDN°10、11和12或者在最佳对齐后分别与序列SEQ ID N°10、11和12具有至少80％(优选85％、90％、95％和98％)同一性的序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少一个、优先地至少两个、优先地三个，所述轻链分别具有氨基酸序列SEQ ID N°13、14和15或者在最佳对齐后分别与序列SEQ ID N°13、14和15具有至少80％(优选85％、90％、95％和98％)同一性的序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少一个、优先地至少两个、优先地三个；
·包含如下重链和轻链的人源化抗体，所述重链包含分别具有氨基酸序列SEQ IDN°16、17和18或者在最佳对齐后分别与序列SEQ ID N°16、17和18具有至少80％(优选85％、90％、95％和98％)同一性的序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少一个、优先地至少两个、优先地三个，所述轻链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID N°19、20和21或者在最佳对齐后分别与序列SEQ ID N°19、20和21具有至少80％(优选85％、90％、95％和98％)同一性的序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少一个、优先地至少两个、优先地三个；
·包含如下重链和轻链的人源化抗体，所述重链包含分别具有氨基酸序列SEQ IDN°22、23和24或者在最佳对齐后分别与序列SEQ ID N°22、23和24具有至少80％(优选85％、90％、95％和98％)同一性的序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少一个、优先地至少两个、优先地三个，所述轻链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID N°25、26和27或者在最佳对齐后分别与序列SEQ ID N°25、26和27具有至少80％(优选85％、90％、95％和98％)同一性的序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少一个、优先地至少两个、优先地三个；
·包含如下重链和轻链的人源化抗体，所述重链包含分别具有氨基酸序列SEQ IDN°28、29和30或者在最佳对齐后分别与序列SEQ ID N°28、29和30具有至少80％(优选85％、90％、95％和98％)同一性的序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少一个、优先地至少两个、优先地三个，所述轻链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID N°31、32和33或者在最佳对齐后分别与序列SEQ ID N°31、32和33具有至少80％(优选85％、90％、95％和98％)同一性的序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少一个、优先地至少两个、优先地三个；和
·包含如下重链和轻链的人源化抗体，所述重链包含分别具有氨基酸序列SEQ IDN°34、35和36或者在最佳对齐后分别与序列SEQ ID N°34、35和36具有至少80％(优选85％、90％、95％和98％)同一性的序列的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3中的至少一个、优先地至少两个、优先地三个，所述轻链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID N°37、38和39或者在最佳对齐后分别与序列SEQ ID N°37、38和39具有至少80％(优选85％、90％、95％和98％)同一性的序列的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3中的至少一个、优先地至少两个、优先地三个；
其中所述抗体还包含源自人抗体的轻链和重链的恒定区。
在另一个更特别的实施方案中，所述抗体是人源化抗体，所述人源化抗体选自：
·人源化抗体，其包含具有氨基酸序列SEQ ID N°53的重链可变区和具有氨基酸序列SEQ ID N°54的轻链可变区；
·人源化抗体，其包含具有氨基酸序列SEQ ID N°55的重链可变区和具有氨基酸序列SEQ ID N°56的轻链可变区；
·人源化抗体，其包含具有选自SEQ ID N°57、58和59之间的氨基酸序列的重链可变区和具有选自SEQ ID N°60、61和62之间的氨基酸序列的轻链可变区；
·人源化抗体，其包含具有选自SEQ ID N°63、64和65之间的氨基酸序列的重链可变区和具有选自SEQ ID N°66、67和68之间的氨基酸序列的轻链可变区；
·人源化抗体，其包含具有选自SEQ ID N°69和71之间的氨基酸序列的重链可变区和具有选自SEQ ID N°70和72之间的氨基酸序列的轻链可变区；和
·人源化抗体，其包含具有选自SEQ ID N°75和76之间的氨基酸序列的重链可变区和具有选自SEQ ID N°77和78之间的氨基酸序列的轻链可变区；
其中所述抗体还包含源自人抗体的轻链和重链的恒定区。
更优选地，所述抗体包含具有氨基酸序列SEQ ID N°71的重链可变区和具有氨基酸序列SEQ ID N°72的轻链可变区，所述抗体还包含源自人抗体的轻链和重链的恒定区。
甚至更优选地，所述抗体包含具有氨基酸序列SEQ ID N°73的重链和具有氨基酸序列SEQ ID N°74的轻链。
在另一方面，本发明还提供了包含如本文所述的前胃泌素结合抗体的免疫缀合物(可互换地称为“抗体-药物缀合物”或“ADC”)，所述抗体缀合至一种或多种细胞毒性剂，诸如化学治疗剂、药物、生长抑制剂、毒素(例如蛋白质毒素、细菌、真菌、植物或动物来源的酶活性毒素或其片段)或放射性同位素(即放射性缀合物)。
在癌症的治疗中，已将免疫缀合物用于局部递送细胞毒性剂，即杀死细胞或者抑制细胞生长或增殖的药物(Lambert,J.(2005)Curr.Opinion in Pharmacology 5:543-549；Wu等人(2005)Nature Biotechnology 23(9):1137-1146；Payne,G.(2003)i 3:207-212；Syrigos and Epenetos(1999)Anticancer Research 19:605-614；Niculescu-Duvazand Springer(1997)Adv.Drug Deliv.Rev.26:151-172；美国专利号4,975,278)。免疫缀合物可将药物部分靶向递送至肿瘤，并在其中进行细胞内累积，其中未缀合药物的全身给药可能导致对正常细胞以及要消除的肿瘤细胞的无法接受的水平的毒性(Baldwin等人,Lancet(Mar.15,1986)第603-05页；Thorpe(1985)“AntibodyCarriers Of CytotoxicAgents In Cancer Therapy:A Review,”,Monoclonal Antibodies'84:Biological AndClinical Applications(A.Pinchera等人编辑)第475-506页)。多克隆抗体和单克隆抗体均已被报道为可用于这些策略(Rowland等人,(1986)Cancer Immunol.Immunother.21:183-87)。这些方法中使用的药物包括柔红霉素、阿霉素、甲氨蝶呤和长春地辛(Rowland等人,(1986)同上)。抗体-毒素缀合物中使用的毒素包括细菌毒素(诸如白喉毒素)、植物毒素(蓖麻毒素)、小分子毒素(诸如格尔德霉素)(Mandler等人(2000)J.Nat.Cancer Inst.92(19):1573-1581；Mandler等人(2000)Bioorganic&Med.Chem.Letters 10:1025-1028；Mandler等人(2002)Bioconjugate Chem.13:786-791),maytansinoids(EP 1391213；Liu等人,(1996)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 93:8618-8623),和calicheamicin(Lode等人(1998)Cancer Res.58:2928；Hinman等人(1993)Cancer Res.53:3336-3342)。所述毒素可通过包括微管蛋白结合、DNA结合或拓扑异构酶抑制的机制发挥其细胞毒性和细胞抑制作用。当与大抗体或蛋白质受体配体缀合时，一些细胞毒性药物往往无活性或活性较低。
在某些实施方案中，免疫缀合物包含抗体和化学治疗剂或其他毒素。本文描述了可用于产生免疫缀合物的化学治疗剂(例如，上文)。可以使用的酶活性毒素以及其片段包括白喉A链、白喉毒素的非结合活性片段、外毒素A链(来自铜绿假单胞菌)、蓖麻毒素A链、相思豆毒素A链、蒴莲根毒素A链、α-八叠球菌素、油桐蛋白、石竹素蛋白、美洲商陆蛋白(PAPI、PAPII、以及PAP-S)、苦瓜抑制剂、麻风树毒蛋白、巴豆毒蛋白、肥皂草抑制剂、白树毒素、迈托毒素、局限曲菌素、酚霉素、伊诺霉素、以及单端孢霉烯类。参见，例如，1993年10月28日公开的WO 93/21232。多种放射性核素可用于产生放射性缀合的抗体。例子包括212Bi、131I、131In、90Y和186Re。使用多种双功能蛋白偶联剂如N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫基)丙酸酯(SPDP)、亚氨基硫杂环戊烷(IT)、亚氨酸酯的双功能衍生物(诸如二甲基二亚胺代己二酸酯HCl)、活性酯(诸如双琥珀酰亚胺辛二酸酯)、醛(诸如戊二醛)、双叠氮化合物(诸如双(对叠氮基苯甲酰基)己二胺)、双重氮基衍生物(诸如双-(对重氮基苯甲酰基)-乙二胺)、二异氰酸酯(诸如甲苯2,6-二异氰酸酯)和双活性氟化合物(诸如1,5-二氟-2,4-二硝基苯)制备抗体与细胞毒性剂的缀合物。例如，可以如Vitetta等人,Science,238:1098(1987)中所述制备蓖麻毒素免疫毒素。碳-14-标记的l-异硫氰酸基苄基-3-甲基二亚乙基三胺五乙酸(MX-DTPA)是用于将放射性核苷酸与抗体缀合的示例性螯合剂。参见WO 94/11026。
本文中还考虑了抗体与一种或多种小分子毒素(诸如卡奇霉素、美登素类化合物、海兔毒素、澳瑞他汀类、单端孢霉烯和CC 1065)的缀合物，以及这些毒素的具有毒素活性的衍生物。
本发明的免疫缀合物可以进一步包含接头。
“接头”、“接头单元”或“连接”是指包含共价键或原子链的化学部分，该共价键或原子链将结合蛋白共价附接至至少一种细胞毒性剂。
可以使用多种双功能蛋白偶联剂如N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫基)丙酸酯(SPDP)、琥珀酰亚胺基-4-(N-马来酰亚胺基甲基)环己烷-1-甲酸酯(SMCC)、亚氨基硫杂环戊烷(IT)、亚氨酸酯的双功能衍生物(诸如二甲基二亚胺代己二酸酯HCI)、活性酯(诸如双琥珀酰亚胺辛二酸酯)、醛(诸如戊二醛)、双叠氮化合物(诸如双(对叠氮基苯甲酰基)己二胺)、双重氮基衍生物(诸如双-(对重氮基苯甲酰基)-乙二胺)、二异氰酸酯(诸如甲苯2,6-二异氰酸酯)和双活性氟化合物(诸如1,5-二氟-2,4-二硝基苯)制备接头。碳-14-标记的1-异硫氰酸基苄基-3-甲基二亚乙基三胺五乙酸(MX-DTPA)是用于将细胞毒性剂与寻址系统缀合的示例性螯合剂。其他交联剂试剂可以是BMPS、EMCS、GMBS、HBVS、LC-SMCC、MBS、MPBH、SBAP、SIA、SIAB、SMCC、SMPB、SMPH、磺基-EMCS、磺基-GMBS、磺基-KMUS、磺基-MBS、磺基-SIAB、磺基-SMCC和磺基-SMPB以及SVSB(琥珀酰亚胺基-(4-乙烯砜)苯甲酸酯)，它们可商购获得(例如，来自美国伊利诺伊州罗克福德Pierce Biotechnology公司)。
所述接头可以是“不可切割的”或“可切割的”。
在另一方面，本发明提供了用于预防或治疗前列腺癌的组合物，所述组合物包含识别表位的抗体，所述表位包括对应于前胃泌素的氨基酸序列的氨基酸序列。
在一个更具体的实施方案中，用于预防或治疗前列腺癌的所述组合物包含识别前胃泌素表位的抗体，其中所述表位包含对应于前胃泌素N末端部分的氨基酸序列的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列可包含hPG的第10至14位残基、hPG的第9至14位残基、hPG的第4至10位残基、hPG的第2至10位残基或者hPG的第2至14位残基，其中hPG的氨基酸序列是SEQID N°1。
在一个更具体的实施方案中，用于预防或治疗前列腺癌的组合物包含识别前胃泌素表位的抗体，其中所述表位包含对应于前胃泌素C末端部分的氨基酸序列的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列可包含hPG的第71至74位残基、hPG的第69至73位残基、hPG的第71至80位残基(SEQ ID N°40)、hPG的第76至80位残基或hPG的第67至74位残基，其中hPG的氨基酸序列为SEQ ID N°1。
在一个更特别的实施方案中，用于预防或治疗前列腺癌的组合物包含前胃泌素结合抗体或其抗原结合片段，如通过上述方法所确定的，其对前胃泌素的亲和力为至少5000nM、至少500nM、100nM、80nM、60nM、50nM、40nM、30nM、20nM、10nM、7nM、5nM、4nM、3nM、2nM、1nM、0.5nM、0.1nM、50pM、10pM、5pM、1pM或至少0.1pM。
在一个甚至更特别的实施方案中，用于预防或治疗前列腺癌的组合物包含前胃泌素结合抗体，其中所述前胃泌素结合分子或其抗原结合片段是中和抗体。
在另一个特别的实施方案中，用于预防或治疗前列腺癌的组合物包含前胃泌素结合抗体，其中所述前胃泌素结合分子或其抗原结合片段是人源化抗体。
在一个特别的实施方案中，用于预防或治疗前列腺癌的组合物包含前胃泌素结合抗体，如上所述，其中所述前胃泌素结合分子或其抗原结合片段缀合至一种或多种细胞毒性剂，诸如化学治疗剂、药物、生长抑制剂、毒素(例如蛋白质毒素、细菌、真菌、植物或动物来源的酶活性毒素或其片段)或放射性同位素(即放射性缀合物)。
在另一个特别的实施方案中，用于预防或治疗患者的前列腺癌的组合物包含前胃泌素结合抗体，其中所述患者被诊断患有前列腺癌，其中来自所述患者的生物样品中前胃泌素的浓度高于参考样品。优选地，已经通过使抗PG抗体与所述患者的生物学样品接触而诊断出所述患者患有前列腺癌。
如本文所用的“生物样品”是含有核酸或多肽(例如前列腺癌蛋白质、多核苷酸或转录物)的生物组织或流体的样品。这样的样品必须允许确定前胃泌素的表达水平。已知前胃泌素为分泌性蛋白。因此，用于确定前胃泌素蛋白的水平的优选的生物样品包括生物流体。如本文所用的“生物流体”意指包含生物来源的物质的任何流体。用于本发明的优选的生物流体包括动物(例如哺乳动物，优选人受试者)的体液。体液可以是任何体液，包括但不限于血液、血浆、血清、淋巴液、脑脊髓液(CSF)、唾液、汗液和尿液。优选地，所述优选的液体生物样品包括诸如血液样品、血浆样品或血清样品等的样品。更优选地，所述生物样品是血液样品。实际上，这样的血液样品可通过完全无害地从患者中进行血液收集而获得，并且因此允许非侵入性评估受试者发生肿瘤的风险。
当癌症是实体癌时，如本文所用的“生物样品”还包括待测试的患者的实体癌样品。这样的实体癌样品允许本领域技术人员对本发明的生物标志物的水平进行任何类型的测量。在一些情况下，根据本发明所述的方法可进一步包括从患者中取得实体癌样品的预备步骤。“实体癌样品”指肿瘤组织样品。即使在癌患者中，肿瘤位置的组织仍包含非肿瘤健康组织。因此“癌症样品”应限于从患者中取得的肿瘤组织。所述“癌症样品”可以是活检样品或从外科手术切除疗法中取得的样品。
典型地从真核生物体获得生物样品，最优选从哺乳动物、鸟、爬行动物或鱼中获得。事实上，可以经受本文所述的方法的“受试者”可以是任何哺乳动物，包括人、狗、猫、牛、山羊、猪(pig/swine)、绵羊和猴子；或鸟；爬行动物；或鱼。优选地，受试者是人类；人受试者可以被称为“患者”。
在本文中“获得生物样品”意指获得用于本发明中所述的方法中的生物样品。最经常地，这会通过从动物中移出细胞样品来完成，但还可以通过使用以前分离的细胞(例如，由另一个人、在另一时间和/或用于另一目的分离的)或通过在体内进行本发明的方法来完成。具有治疗或结果历史的档案组织(Archival tissue)会是特别有用的。
该样品可以根据本领域技术人员已知的方法获得并且如果需要的话根据本领域技术人员已知的方法制备。特别地，本领域公知，样品应该从空腹受试者提取。
在一个更特别的方面，本发明涉及用于根据本发明所述的预防或治疗前列腺癌的组合物，其中所述前胃泌素结合抗体或其抗原结合片段选自N末端抗前胃泌素抗体和C末端抗前胃泌素抗体。
用于本发明的方法的抗体组合物可以制备成不同的配制品，包括但不限于用于通过多种途径给药的水性悬浮液，所述途径包括但不限于肠胃外、鞘内、皮下、静脉内、肌内、腹膜内、输注或推注给药。在一些实施方案中，所述组合物被制备成用于肠胃外给药，并且在一些具体的实施方案中，通过输注静脉内注射。
在一个特别的实施方案中，根据本发明所述的用于预防或治疗前列腺癌的组合物包含范围为0.001mg/kg至约250mg/kg的有效剂量的本发明的抗前胃泌素抗体，该剂量可以在一次给药中给予，或者在多次间隔给药中给予。
在一个特别的实施方案中，根据本发明所述的用于预防或治疗前列腺癌的组合物包含选自以下的前胃泌素结合抗体或其抗原结合片段：多克隆抗体、单克隆抗体、嵌合抗体、单链抗体、骆驼化抗体、IgA1抗体、IgA2抗体、IgD抗体、IgE抗体、IgG1抗体、IgG2抗体、IgG3抗体、IgG4抗体和IgM抗体。优选地，所述抗体是上文所述的那些。更优选地，所述抗体是人源化抗体。
优选地，本发明涉及一种药物组合物，其包含根据本发明所述的用于预防或治疗前列腺癌的组合物和药学上可接受的载体。更具体地，用于根据本发明所述的预防或治疗前列腺癌的药物组合物包含上文所述的抗体和药学上可接受的载体。
在一个更特别的方面，本发明涉及一种药物组合物，其包含根据本发明所述的用于预防或治疗前列腺癌的组合物和药学上可接受的载体，其中所述抗前胃泌素抗体以0.001mg/kg至250mg/kg的剂量，并且优选以至少0.005mg/kg、至少0.01mg/kg、至少0.05mg/kg、至少0.1mg/kg、至少0.5mg/kg、至少1mg/kg、至少5mg/kg、至少10mg/kg、至少50mg/kg或至少100mg/kg的剂量给药。在另一方面，本发明涉及一种多组分试剂盒(kit of part)，其包含根据本发明所述的用于预防或治疗前列腺癌的组合物和抗癌治疗分子。
事实上，使用如本文所述的抗PG单克隆抗体的治疗可以与其他疗法结合，或者辅助其他疗法。其他疗法的非限制性例子包括化疗、放疗、手术切除和抗体疗法。
在另一方面，本发明涉及一种多组分试剂盒，其包含根据本发明所述的用于预防或治疗前列腺癌的组合物和选自化疗分子和靶向治疗分子的抗癌治疗分子。
在一个特别的实施方案中，本发明涉及一种多组分试剂盒，其包含用于同时、顺次、或单独给药的根据本发明所述的用于治疗前列腺癌的组合物和化疗分子。用于该目的的有用的化疗分子包括但不限于叶酸拮抗剂、嘌呤拮抗剂、嘧啶拮抗剂、DNA烷化分子、DNA交联药、抗生素、铂配合物、蛋白酶体抑制剂、有丝分裂纺锤体毒素、拓扑异构酶抑制剂、酪氨酸激酶抑制剂和其他。
在另一个特别的实施方案中，本发明涉及多组分试剂盒，其包含用于同时、顺次或单独给药的根据本发明所述的组合物和包含另一靶向治疗分子的组合物。这样的靶向治疗分子包括但不限于靶向EGFR的抗体诸如西妥昔单抗或帕尼单抗，靶向VEGF的抗体诸如贝伐珠单抗，靶向HER2的抗体诸如曲妥珠单抗或帕妥珠单抗，靶向PD-1和PDL-1的抗体诸如派姆单抗，靶向CTLA-4的抗体诸如伊匹单抗，靶向EGFR的小分子药物诸如埃罗替尼，靶向BRAF的小分子药物诸如威罗菲尼或达拉菲尼，靶向VEGF的重组融合蛋白诸如阿柏西普。
在另一个特别的方面，本发明涉及前胃泌素结合抗体或其抗原结合片段用于诊断前列腺癌的用途。
在另一个特别的方面，本发明涉及前胃泌素结合抗体或其抗原结合片段用于预防或治疗前列腺癌的用途。
在一个更特别的方面，本发明涉及前胃泌素结合抗体或其抗原结合片段用于预防或治疗患者的前列腺癌的用途，其中所述患者的生物样品的前胃泌素浓度已经确定，并且高于参考生物样品的前胃泌素浓度。
在另一个特别的方面，本发明涉及本发明的药物组合物在预防前列腺癌复发中的用途。因此，本公开文本提供了可用于治疗包括人在内的动物的前列腺癌和预防前列腺癌复发的方法和组合物。所述治疗方法包括向被诊断患有前列腺癌的受试者给予有效于提供治疗益处的一定量的特异性结合前胃泌素的抗体。抗PG抗体可以作为单一疗法单独给药，也可以与其他治疗方式结合使用或辅助其他治疗方式，所述其他治疗方式诸如肿瘤切除、放疗、化疗、另一种抗体疗法等。
实体瘤不一定是同质组织。而是，一些肿瘤包括具有不同表型和功能特性的多种异常细胞类型。在这方面，此类肿瘤类似于异常器官。包含实体瘤的细胞在移植到同一宿主中的新位点或者相同或不同物种的新宿主中时，能够引发新肿瘤形成的程度有所不同。具有这种特性的细胞被称为肿瘤或癌症起始细胞，或者可替代地被称为肿瘤或癌症干细胞。参见例如Hardavella等人,2016,“Prostste cancer stem cells–characteristics,phenotype,”Transl Prostste Cancer Res.2016,5(3):272–279。这样的细胞是高度致瘤的。
通常，癌症干细胞由两个特性定义：自我更新的能力和产生会分化成非干细胞的子代细胞的能力。自我更新是经历细胞分裂的能力，从而一个或两个子代细胞保持未分化状态，从而保留了产生又另一种增殖能力与亲代细胞相似的癌症干细胞的能力。该特性使癌症干细胞最终产生大量的包含不断增长的肿瘤的细胞。癌症干细胞还具有产生如下子代细胞的能力，所述子代细胞分化从而产生了在许多实体瘤中发现的一系列更为分化的非干性肿瘤细胞或大量肿瘤细胞。因此，当移植时，即使在多次连续移植后，肿瘤干细胞也能重建其起源的肿瘤类型。此外，据认为癌症干细胞具有遗传突变和/或表观遗传变化，其导致改变的增殖模式和/或低凋亡率。
可以根据将它们与大量肿瘤细胞区分开的许多表型特征来鉴定癌症干细胞。用于评估肿瘤或细胞系是否含有癌干细胞的方法是本领域技术人员熟悉的。此类方法描述于例如Hardavella等人,2016,“Prostste cancer stem cells–characteristics,phenotype,”Transl Prostste Cancer Res.2016,5(3):272–279，以及WO 2012/013609。在本申请的例子中还描述了这些方法的特别例子。
在一个更特别的方面，本发明涉及前胃泌素结合抗体或其抗原结合片段用于预防或治疗患者的前列腺癌的用途，其中所述患者表现出转移。
在一个甚至更特别的方面，本发明涉及前胃泌素结合抗体或其抗原结合片段用于预防或治疗患者的前列腺癌的用途，其中所述患者表现出转移，并且其中所述患者的生物样品中前胃泌素浓度已经确定，并且高于参考生物样品的前胃泌素浓度。
可将组成所述组合的组分同时、单独或顺次给药，以获得组合的最大功效；对于每个组分的给药，其在从快速给药到连续输注的期间内改变是可能的。
如本文所用的“同时给药”是指以单一且唯一的药物形式给予所述组合物中的两种化合物。如本文所用的“单独给药”是指以不同的药物形式同时给予根据本发明所述的组合物的两种化合物。如本文所用的“顺次给药”是指分别以不同的药物形式连续给予根据本发明所述的组合物的两种化合物。
如本文所用的“治疗有效量”是指有效于预防、缓解、减少或改善疾病的症状或延长正在治疗的患者的存活期的一种或多种化合物的最小浓度或最小量。
在另一方面，本公开提供了一种预防前列腺癌复发的方法，该方法包括向需要预防的受试者给予有效量的抗PG抗体。通过将一种或多种如上所述的能够中和PG的抗PG抗体给予有前列腺癌复发风险的个体，来完成根据本公开文本的预防肝癌复发的方法。
需要预防前列腺癌复发的受试者是先前接受过前列腺癌治疗的个体，这些个体有再次患前列腺癌的风险但尚未被诊断出患有前列腺癌。合适的受试者包括先前已通过任何方式(包括手术切除、化疗或任何其他疗法)治疗前列腺癌的个体。
有效于预防前列腺癌复发包括但不限于完全且持续无前列腺癌复发。在一些实施方案中，通过从有前列腺癌复发风险的受试者获得的前列腺癌肿瘤或前列腺癌干细胞的缺失来测量有效预防。在一些实施方案中，通过有前列腺癌复发风险的受试者的PG的血药浓度没有增加来确定有效预防。
抗PG治疗可以作为单一疗法单独给予，或者与一种或多种其他治疗组合或辅助所述一种或多种其他治疗。其他治疗包括但不限于如上所述的手术切除和用第二治疗剂(诸如化学治疗剂或抗体)进行的治疗。本文提供的组合治疗涉及对患者给予至少两种治疗，其中一种是用至少一种抗PG抗体进行的抗PG治疗，而另一种是用治疗剂或程序进行的治疗。
可将所述抗PG抗体与第二药剂同时、连续或单独给药。如本文所用，如果将抗PG抗体与第二药剂在同一天例如在同一患者访视期间给予患者，则被称为是连续给予的。可以相隔1、2、3、4、5、6、7或8小时进行连续给药。相反，如果将所述抗PG抗体与所述第二药剂在不同的日期给予患者，例如，可以将所述抗PG抗体与所述第二治疗剂以1天、2天或3天、1周、2周或每月的间隔给予，则称它们是单独给予的。在本公开文本的方法中，可以在给予第二药剂之前或之后给予本公开文本的抗PG抗体。作为非限制性例子，可将所述抗PG抗体和所述第二药剂同时给予一段时间，随后交替给予抗PG抗体和第二药剂。
通过下面对例子的以下详细描述，本发明的实施方案的特征将变得更加明显。
附图说明
图1
DU145细胞增殖测定：用对照抗体或用抗hPG Hz 8CV2(PG Hz)(一种C末端抗hPG人源化抗体)处理细胞。
图2
用抗hPG Hz 8CV2(PG Hz)(一种C末端抗hPG人源化抗体)或用N末端抗hPG人源化抗体处理对LNCaP细胞的球形成的作用。
实施例
实施例1：抗hPG抗体在癌细胞系上的中和活性
1.1.抗hPG单克隆抗体的中和活性
测试了针对PG的单克隆抗体抑制若干种通常用于研究前列腺癌的细胞系的增殖的能力，这些细胞系产生并分泌前胃泌素。使用不同的抗hPG单克隆抗体测试这些细胞系各自的细胞存活。
对于每个实验，将50,000个细胞接种到6孔板的含有胎牛血清的培养基中，并且孵育8小时。将细胞血清饥饿过夜，并且在接种后24小时(时间“T0”)时开始，一式六份，不存在胎牛血清情况下，使用1-20μg/ml的单克隆对照抗体(抗嘌呤霉素的单克隆抗体)(CT mAb)或使用1-20μg/ml的抗hPG mAb处理细胞，每12h进行一次，持续48小时，其中所述mAb是C末端抗hPG单克隆抗体或N末端抗hPG单克隆抗体。
所述mAb是选自以下的C末端抗hPG抗体：
-包含如下重链和轻链的抗体，所述重链包含具有氨基酸序列SEQ ID N°28、29和30的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，所述轻链包含具有氨基酸序列SEQ ID N°31、32和33的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3，
-包含如下重链和轻链的抗体，所述重链包含具有氨基酸序列SEQ ID N°34、35和36的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，所述轻链包含具有氨基酸序列SEQ ID N°37、38和39的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3。
或选自以下的N末端抗hPG抗体：
-包含如下重链和轻链的单克隆抗体，所述重链包含分别具有氨基酸序列SEQ IDN°4、5和6的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，所述轻链包含具有氨基酸序列SEQ ID N°7、8和9的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；
-包含如下重链和轻链的抗体，所述重链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID N°10、11和12的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，所述轻链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID N°13、14和15的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3，
-包含如下重链和轻链的抗体，所述重链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID N°16、17和18的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，所述轻链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID N°19、20和21的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3，
-包含如下重链和轻链的抗体，所述重链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID N°22、23和24的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，所述轻链包含分别具有氨基酸序列SEQ ID N°25、26和27的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3，
对于每个实验，T0时计数对照孔中的细胞数。
具体地，在48小时对在对照和抗hPG mAb处理的孔二者中的活细胞数进行计数，然后计算每个细胞计数与在T0时确定的细胞计数之间的差值。然后将得到的抗hPG mAb处理的细胞数表示为对照mAb处理的细胞数的百分数。
与用对照抗体处理相比，用抗hPG单克隆抗体处理减少了细胞数。使用单因素ANOVA使用图基事后检验法确定统计学显著性：*＝p<0.05，**＝p<0.01，和***＝p<0.001。在每个细胞系中，抗hPG抗体降低了细胞存活。
1.2.抗hPG人源化抗体在细胞存活上的中和活性
测试了针对PG的人源化抗体抑制若干种通常用于研究前列腺癌的细胞系的增殖的能力，这些细胞系产生并分泌前胃泌素。使用不同的抗hPG单克隆抗体测试这些细胞系各自的细胞存活。
对于每个实验，将50,000个细胞接种到6孔板的含有胎牛血清的培养基中，并且孵育8小时。将细胞血清饥饿过夜，并且在接种后24小时(时间“T0”)时开始，一式六份，不存在胎牛血清，使用1-20μg/ml的人源化对照抗体(抗人FcG1，来自BioXCell)(CT Hz)或使用1-20μg/ml的抗hPG Hz处理细胞，每12h进行一次，持续48小时，其中所述Hz是C末端抗hPG人源化抗体或N末端抗hPG人源化抗体。对于每个实验，T0时计数对照孔中的细胞数。
具体地，在48小时对在对照和抗hPG Hz处理的孔二者中的活细胞数进行计数，然后计算每个细胞计数与在T0时确定的细胞计数之间的差值。然后将得到的抗hPG Hz处理的细胞数表示为对照mAb处理的细胞数的百分数。
与用对照抗体处理相比，用抗hPG Hz抗体处理减少了细胞数。使用单因素ANOVA使用图基(Tukey)事后检验法确定统计学显著性：*＝p<0.05，**＝p<0.01，和***＝p<0.001。在每个细胞系中，抗hPG抗体降低了细胞存活。
1.3.抗hPG单克隆抗体在癌症干细胞频率上的中和活性
使用极端有限稀释测定(ELDA)测试针对PG的单克隆抗体减少通常用于研究前列腺癌的若干种细胞系中癌症干细胞(CSC)频率的能力，这些细胞系产生并分泌前胃泌素。使用不同的抗hPG单克隆抗体测试来自这些细胞系中每个细胞系的CSC频率。
对于每个实验，使用FACS Aria流式细胞仪将细胞以固定的每孔细胞浓度接种在超低吸附(ULA)P96(96孔板)中，使用的浓度范围为从1至500个细胞/孔。将细胞培养在具有M11培养基(Macari等人,Oncogene,2015)的ULA板中长达11天，并且每3天或4天用1-20μg/ml的单克隆对照抗体(抗嘌呤霉素的单克隆抗体)(CT mAb)或用1-20μg/ml的抗hPG mAb处理，其中所述mAb是C末端抗hPG单克隆抗体或N末端抗hPG单克隆抗体。
具体地，在孵育阶段结束时，用相差显微镜观察板，评估每个细胞浓度的阳性孔的数量。最后，使用ELDA网页工具(http://www.bioinf.wehi.edu.au/software/elda/)计算每个处理组的CSC频率并且测试组之间的任何统计学差异(修正的卡方检验)。
与用对照抗体处理相比，用抗hPG单克隆抗体处理减少了CSC频率。
1.4.抗hPG人源化抗体在癌症干细胞频率上的中和活性
·球形成测定
使用球形成测定测试针对PG的人源化抗体减少通常用于研究前列腺癌的若干种细胞系中癌症干细胞(CSC)频率的能力，这些细胞系产生并分泌前胃泌素。
对于每个实验，将700个细胞接种在24孔超低吸附(ULA)板中。将细胞培养在具有M11培养基(Macari等人,Oncogene,2015)的ULA板中长达7天，并且每3天或4天用20μg/ml的人源化对照抗体(抗人FcG1，来自BioXCell)(CTHz)或用20μg/ml的抗hPG Hz(PG Hz)(其中所述Hz是C末端抗hPG人源化抗体或N末端抗hPG人源化抗体)处理。
具体地，在孵育阶段结束时，用明场显微镜对孔拍照，分析照片，并且对平均直径高于25μm的球进行计数。
与用对照抗体处理相比，用抗hPG人源化抗体处理减少了CSC频率。
·极端有限稀释测定
使用极端有限稀释测定(ELDA)测试抗PG的人源化抗体减少通常用于研究前列腺癌的若干种细胞系中癌症干细胞(CSC)频率的能力，这些细胞系产生并分泌前胃泌素。使用不同的抗hPG人源化抗体测试这些细胞系各自的CSC频率。
对于每个实验，使用FACS Aria流式细胞仪将细胞以固定的每孔细胞浓度接种在超低吸附(ULA)P96(96孔板)中，使用的浓度范围为从1至500个细胞/孔。将细胞培养在具有M11培养基(Macari等人,Oncogene,2015)的ULA板中长达11天，并且每3天或4天用1-20μg/ml的人源化对照抗体(抗人FcG1，来自BioXCell)(CT Hz)或用1-20μg/ml的抗hPG Hz(其中所述Hz是C末端抗hPG人源化抗体或N末端抗hPG人源化抗体)处理。
具体地，在孵育阶段结束时，用相差显微镜观察板，评估每个细胞浓度的阳性孔的数量。最后，使用ELDA网页工具(http://www.bioinf.wehi.edu.au/software/elda/)计算每个处理组的CSC频率并且测试组之间的任何统计学差异(修正的卡方检验)。
与用对照抗体处理相比，用抗hPG人源化抗体处理减少了CSC频率。
1.5.抗hPG单克隆抗体在WNT/β-连环蛋白途径上的中和活性
测试针对PG的单克隆抗体抑制通常用于研究前列腺癌的若干种细胞系中WNT/β-连环蛋白途径的能力，这些细胞系产生并分泌前胃泌素。使用蛋白质即存活蛋白(一种公知的WNT/β-连环蛋白途径靶向基因)的表达作为读出。使用不同的抗hPG单克隆抗体测试这些细胞系各自的存活蛋白表达。
对于每个实验，将50,000个细胞接种到6孔板的含有胎牛血清的培养基中，并且孵育8小时。将细胞血清饥饿过夜，并且在接种后24小时开始，一式四份，不存在胎牛血清情况下，使用1-20μg/ml的单克隆对照抗体(抗嘌呤霉素的单克隆抗体)(CT mAb)或使用1-20μg/ml的抗hPG mAb处理细胞，每12h进行一次，持续72小时，其中所述mAb是C末端抗hPG单克隆抗体或N末端抗hPG单克隆抗体。
具体地，处理72小时之后，收获细胞并且使用RIPA缓冲液提取总蛋白质。然后使用抗存活蛋白抗体(单克隆抗体，来自Cell Signaling的#2802)和抗肌动蛋白抗体(单克隆抗体，来自SIGMA的#A4700)作为上样对照，对来自CTmAb或抗hPGmAb处理的细胞的等量蛋白质进行蛋白质印迹。使用来自Syngene的GBOX化学系统进行定量。
与用对照抗体处理相比，用抗hPG单克隆抗体处理减少了存活蛋白表达。使用非配对学生T检验确定统计学显著性：*＝p<0.05，**＝p<0.01，和***＝p<0.001。
1.6.抗hPG人源化抗体在WNT/β-连环蛋白途径上的中和活性
测试针对PG的人源化抗体抑制通常用于研究前列腺癌的若干种细胞系中WNT/β-连环蛋白途径的能力，这些细胞系产生并分泌前胃泌素。使用蛋白质即存活蛋白(一种公知的WNT/β-连环蛋白途径靶向基因)的表达作为读出。使用不同的抗hPG人源化抗体测试这些细胞系各自的存活蛋白表达。
对于每个实验，将50,000个细胞接种到6孔板的含有胎牛血清的培养基中，并且孵育8小时。将细胞血清饥饿过夜，并且在接种后24小时开始，一式四份，在不存在胎牛血清情况下，使用1-20μg/ml的人源化对照抗体(抗人FcG1，来自BioXCell)(CT Hz)或使用1-20μg/ml的抗hPG Hz处理细胞，每12h进行一次，持续72小时，其中所述Hz是C末端抗hPG人源化抗体或N末端抗hPG人源化抗体。
具体地，处理72小时之后，收获细胞并且使用RIPA缓冲液提取总蛋白质。然后使用抗存活蛋白抗体(单克隆抗体，来自Cell Signaling的#2802)和抗肌动蛋白抗体(单克隆抗体，来自SIGMA的#A4700)作为上样对照，对来自CT Hz或抗hPG Hz处理的细胞的等量蛋白质进行蛋白质印迹。使用来自Syngene的GBOX化学系统进行定量。
与用对照抗体处理相比，用抗hPG人源化抗体处理减少了存活蛋白表达。使用非配对学生T检验确定统计学显著性：*＝p<0.05，**＝p<0.01，和***＝p<0.001。
实施例2：抗hPG抗体在癌细胞系上的中和活性
2.1抗hPG人源化抗体在细胞存活上的中和活性
测试了人源化抗PG抗体抑制若干种通常用于研究前列腺癌的细胞系(即，PC3、LNCAP、DU145等)的增殖的能力，所述细胞系产生并分泌前胃泌素。使用不同的抗hPG抗体测定这些细胞系中每种的细胞存活。
将125,000个DU145细胞接种到6孔板的含有胎牛血清的培养基中，并且孵育8小时。将细胞血清饥饿过夜，并在接种后24小时(时间“T0”)开始，在不存在胎牛血清的情况下，使用1-20μg/ml的人源化对照抗体(抗人FcG1，来自BioXCell)(CT Hz)或使用1-20μg/ml的抗hPG Hz 8CV2(PG Hz)处理细胞，每12h进行一次，持续48小时，其中所述Hz是C末端抗hPG人源化抗体。对于每个实验，T0时计数对照孔中的细胞数。
具体地，在48小时对在对照和抗hPG Hz处理的孔二者中的活细胞数进行计数。然后计算每个细胞计数与在T0时确定的细胞计数之间的差值。
与用对照抗体处理相比，用抗hPG Hz抗体处理减少了细胞数。使用t检验确定统计学显著性：*＝p<0.05。
2.2抗hPG人源化抗体在球形成上的中和活性
将150个LNCaP细胞接种在24孔超低吸附(ULA)中。在具有M11培养基(Macari等人,Oncogene,2015)的ULA板中培养该细胞11天，并且每3或4天用10μg/ml的人源化对照抗体(抗人FcG1，来自BioXCell)(CT Hz)，或用10μg/ml抗hPG Hz 8CV2(PG Hz)处理，其中所述Hz是C末端抗hPG人源化抗体或N末端抗hPG人源化抗体。
具体地，在孵育阶段结束时，经由明视野显微镜对孔拍照，分析图片并计数平均直径大于20μm的球。
在图2中显示的结果清楚地表明，与对照单克隆抗体相比，用前列腺癌细胞的抗hPG单克隆抗体处理显著减少了在低吸附培养条件下生长期间形成的球的数目。使用t检验确定统计学显著性：*＝p<0.05。
序列表
<110> 普莱戈斯瑞恩癌症有限责任公司
<120> 使用前胃泌素结合分子检测和治疗前列腺癌的组合物和方法
<130> B374275PCTD38250
<140> PCT/EP2018/058344
<141> 2018-03-30
<150> EP 17305381.0
<151> 2017-03-30
<160> 78
<170> PatentIn版本3.5
<210> 1
<211> 80
<212> PRT
<213> 智人
<400> 1
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<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 人前胃泌素的氨基酸1-14 N-末端
<400> 2
Ser Trp Lys Pro Arg Ser Gln Gln Pro Asp Ala Pro Leu Gly
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<210> 3
<211> 26
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 人前胃泌素的氨基酸55-80 C-末端
<400> 3
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1 5 10 15
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<400> 7
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<211> 3
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<400> 9
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<220>
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Phe Leu Pro Gly Ser Gly Ser Thr
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Leu Val Ser
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<223> 合成肽
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Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp Tyr Ala
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Ile Ser Phe Ser Gly Tyr Thr
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<212> PRT
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<223> 合成肽
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<223> 合成肽
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<211> 7
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<223> 合成肽
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<213> 人工的
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<223> 合成肽
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Gly Phe Thr Phe Thr Thr Tyr Ala
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<223> 合成肽
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<223> 合成肽
<400> 30
Ala Thr Gln Gly Asn Tyr Ser Leu Asp Phe
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Lys Ser Leu Arg His Thr Lys Gly Ile Thr Phe
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<223> 合成肽
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Gln Met Ser
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<223> 合成肽
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<223> 合成肽
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<223> 合成肽
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Leu Val Ser
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<223> 合成肽
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<213> 人工的
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<223> 人前胃泌素的氨基酸71-80 C-末端
<400> 40
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<213> 人工的
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<223> 合成肽
<400> 41
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Thr Val Leu Ala Arg Pro Gly Ala
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Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Ser Tyr
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<223> 合成肽
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Asp Val Leu Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Ser Leu Gly
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Asp Gln Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Ile Val His Ser
20 25 30
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<213> 人工的
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<223> 合成肽
<400> 43
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Met Lys Pro Gly Ala
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Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Thr Gly Tyr Thr Phe Ser Ser Ser
20 25 30
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50 55 60
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<223> 合成肽
<400> 44
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<213> 人工的
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<223> 合成肽
<400> 45
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala
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<223> 合成肽
<400> 46
Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Thr Leu Ser Val Thr Ile Gly
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<211> 121
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 47
Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
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Leu Gln Leu Thr Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys
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<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 48
Gln Leu Ala Leu Thr Gln Ser Ser Ser Ala Ser Phe Ser Leu Gly Ala
1 5 10 15
Ser Ala Lys Leu Thr Cys Thr Leu Ser Ser Gln His Arg Thr Tyr Thr
20 25 30
Ile Glu Trp Tyr Gln Gln Gln Ser Leu Lys Pro Pro Lys Tyr Val Met
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Glu Val Lys Lys Asp Gly Ser His Ser Thr Gly His Gly Ile Pro Asp
50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Ser Ser Gly Ala Asp Arg Tyr Leu Ser Ile Ser
65 70 75 80
Asn Ile Gln Pro Glu Asp Glu Ala Ile Tyr Ile Cys Gly Val Gly Asp
85 90 95
Ala Ile Lys Gly Gln Ser Val Phe Val Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val
100 105 110
Thr Val Leu
115
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<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 49
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Thr Tyr
20 25 30
Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Thr Ile Ser Ser Gly Gly Thr Tyr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
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100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
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<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 50
Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Arg His Thr
20 25 30
Lys Gly Ile Thr Phe Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
35 40 45
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50 55 60
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65 70 75 80
Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn
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100 105 110
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<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 51
Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Ile Phe Ser Ser Tyr
20 25 30
Gly Met Ser Trp Val Arg Gln Ser Pro Asp Arg Arg Leu Glu Leu Val
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Ser Ser
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<220>
<223> 合成肽
<400> 52
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<220>
<223> 合成肽
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<220>
<223> 合成肽
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<223> 合成肽
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<220>
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<223> 合成肽
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<220>
<223> 合成肽
<400> 60
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<220>
<223> 合成肽
<400> 61
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<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 62
Asp Val Val Met Thr Gln Ser Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Leu Gly
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Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asp Ser
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<212> PRT
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<220>
<223> 合成肽
<400> 63
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<211> 121
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 64
Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln
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Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp
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<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 65
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1 5 10 15
Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp
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<220>
<223> 合成肽
<400> 66
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<220>
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<400> 67
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Glu Ile Lys
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<220>
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<220>
<223> 合成肽
<400> 69
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<220>
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<212> PRT
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<220>
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<400> 72
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<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 73
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165 170 175
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<210> 74
<211> 219
<212> PRT
<213> 人工的
<220>
<223> 合成肽
<400> 74
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Lys Gly Ile Thr Phe Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser
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Claims (14)
1.一种组合物在制备用于抑制前列腺癌细胞的生长的药物中的用途，其中所述前列腺癌细胞是腺癌细胞，其中所述组合物包含前胃泌素结合抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体选自由以下组成的组：
-包含如下重链和轻链的抗体，所述重链包含分别为氨基酸序列SEQID NO:4、5和6的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，所述轻链包含分别为氨基酸序列SEQ ID NO:7、8和9的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；
-包含如下重链和轻链的抗体，所述重链包含分别为氨基酸序列SEQID NO:10、11和12的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，所述轻链包含分别为氨基酸序列SEQ ID NO:13、14和15的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；
-包含如下重链和轻链的抗体，所述重链包含分别为氨基酸序列SEQID NO:16、17和18的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，所述轻链包含分别为氨基酸序列SEQ ID NO:19、20和21的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；
-包含如下重链和轻链的抗体，所述重链包含分别为氨基酸序列SEQID NO:22、23和24的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，所述轻链包含分别为氨基酸序列SEQ ID NO:25、26和27的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；
-包含如下重链和轻链的抗体，所述重链包含分别为氨基酸序列SEQID NO:28、29和30的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，所述轻链包含分别为氨基酸序列SEQ ID NO:31、32和33的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3；和
-包含如下重链和轻链的抗体，所述重链包含分别为氨基酸序列SEQID NO:34、35和36的CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3，所述轻链包含分别为氨基酸序列SEQ ID NO:37、38和39的CDR-L1、CDR-L2和CDR-L3。
2.根据权利要求1所述的用途，其中所述前胃泌素结合抗体或其抗原结合片段选自单链抗体、骆驼化抗体、IgA1抗体、IgA2抗体、IgD抗体、IgE抗体、IgG1抗体、IgG2抗体、IgG3抗体、IgG4抗体和IgM抗体。
3.根据权利要求1所述的用途，其中所述前胃泌素结合抗体或其抗原结合片段选自N末端抗前胃泌素抗体和C末端抗前胃泌素抗体。
4.根据权利要求1所述的用途，其中所述前胃泌素结合抗体或其抗原结合片段是中和抗体。
5.根据权利要求1所述的用途，其中所述抗体选自：
·单克隆抗体，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:41的重链和氨基酸序列SEQ ID NO:42的轻链；
·单克隆抗体，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:43的重链和氨基酸序列SEQ ID NO:44的轻链；
·单克隆抗体，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:45的重链和氨基酸序列SEQ ID NO:46的轻链；
·单克隆抗体，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:47的重链和氨基酸序列SEQ ID NO:48的轻链；
·单克隆抗体，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:49的重链和氨基酸序列SEQ ID NO:50的轻链；和
·单克隆抗体，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:51的重链和氨基酸序列SEQ ID NO:52的轻链。
6.根据权利要求1所述的用途，其中所述抗体是人源化抗体。
7.根据权利要求6所述的用途，其中所述抗体选自由以下组成的组：
·人源化抗体，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:53的重链可变区和氨基酸序列SEQ IDNO:54的轻链可变区；
·人源化抗体，其包含氨基酸序列SEQ ID NO:55的重链可变区和氨基酸序列SEQ IDNO:56的轻链可变区；
·人源化抗体，其包含选自SEQ ID NO:57、58和59之间的氨基酸序列的重链可变区和选自SEQ ID NO:60、61和62之间的氨基酸序列的轻链可变区；
·人源化抗体，其包含选自SEQ ID NO:63、64和65之间的氨基酸序列的重链可变区和选自SEQ ID NO:66、67和68之间的氨基酸序列的轻链可变区；
·人源化抗体，其包含选自SEQ ID NO:69和71之间的氨基酸序列的重链可变区和选自SEQ ID NO:70和72之间的氨基酸序列的轻链可变区；和
·人源化抗体，其包含选自SEQ ID NO:75和76之间的氨基酸序列的重链可变区和选自SEQ ID NO:77和78之间的氨基酸序列的轻链可变区；
其中所述抗体还包含衍生自人抗体的轻链的恒定区和重链的恒定区。
8.根据权利要求6所述的用途，其中所述抗体包含氨基酸序列SEQ ID NO:71的重链可变区和氨基酸序列SEQ ID NO:72的轻链可变区，所述抗体还包含衍生自人抗体的轻链的恒定区和重链的恒定区。
9.根据权利要求6所述的用途，其中所述抗体包含氨基酸序列SEQ ID NO:73的重链和氨基酸序列SEQ ID NO:74的轻链。
10.一种药物组合物在制备用于抑制前列腺癌细胞生长的药物中的用途，其中所述前列腺癌细胞是腺癌细胞，
其中所述药物组合物包含根据权利要求1至9中任一项所定义的抗体，以及药学上可接受的载体和/或赋形剂。
11.根据权利要求10所述的用途，其进一步包含第二治疗剂。
12.根据权利要求11所述的用途，其中所述第二治疗剂是生物剂或化学治疗剂。
13.根据权利要求12所述的用途，其中所述生物剂是抗EGFR单克隆抗体或抗VEGF单克隆抗体。
14.根据权利要求12所述的用途，其中所述化学治疗剂选自下组：烷化剂、抗代谢物、抗肿瘤抗生素、有丝分裂抑制剂、染色质功能抑制剂、抗血管生成剂、抗雌激素、抗雄激素和免疫调节剂。
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