CN110934041A

CN110934041A - 一种银丝草菇食用菌菌种及其菌丝体培养方法与应用

Info

Publication number: CN110934041A
Application number: CN201911206547.6A
Authority: CN
Inventors: 魏生龙; 陈艳霞; 席亚丽; 陈霞霞
Original assignee: Hexi University
Current assignee: Hexi University
Priority date: 2019-11-29
Filing date: 2019-11-29
Publication date: 2020-03-31

Abstract

本发明提供了一种银丝草菇食用菌菌种及其菌丝体培养方法与应用，其生物保藏号为CGMCC No：18586。本发明通过对温度、pH、碳源、氮源、碳氮比、光照条件对银丝草菇的生长和发育的影响进行了测定。银丝草菇菌丝体生长的温度以35℃最适、pH7.0~9.0长势最佳、菌丝体以蔗糖为碳源时生长势强、以蛋白胨为氮源时菌丝体生长速度最快、在C/N比为15/1时生长速度最快。此外，银丝草菇在光暗交替条件下菌丝体的生长较其他两者优越。通过本发明加快了对银丝草菇的研究，一方面可以深入了解其营养成分和功效，促进产业发展；另一方面银丝草菇耐低温的属性可以为食用菌低温自溶提供模型，以便进一步探索低温自溶的分子机制。

Description

一种银丝草菇食用菌菌种及其菌丝体培养方法与应用

技术领域

本发明属于食用菌技术领域，涉及一种仿野生食用菌，具体涉及一种银丝草菇食用菌菌种及其菌丝体培养方法与应用。

背景技术

银丝草菇（Volvariella bombycina）是种十分珍费的野生食用菌，它具有良好的抗氧化活性的食用菌株，营养价值高，子实体含有丰富的粗蛋白，维生素和多种氨基酸，低脂肪，味道鲜美，脆嫩可口。然银丝草菇属野生菌种，数量极少，如能进行大规模的人工栽培，其必定成为人们餐桌上的佳肴，食用菌大家庭的新秀，能带来巨大的食用价值，市场前景广阔。

发明内容

本发明的目的是提供一种银丝草菇食用菌菌种，并对其进行了其生理、生化特性测定，进行了温度、pH、碳源、氮源、碳氮比、及光照条件对银丝草菇生长和发育影响进行了测定。

本发明采用的技术方案如下:一种银丝草菇（Volvariella bombycina）食用菌菌种，保藏号为CGMCC No：18586，保藏日期为2019年10月11日，保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（简称CGMCC），保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮编：100101。

本发明所述银丝草菇（Volvariella bombycina）食用菌菌种，采集于祁连山野生银丝草菇，通过组织分离或孢子分离，在培养基上培养而获得。

其形态特征:子实体中等至较大。菌体外观形态近半球形，钟形至稍平展，边缘延伸，内卷，带有银丝状柔毛。菌盖直径5-15厘米，菌肉白色，较薄。菌褶离生，密集，不等长，中部宽两端窄，初白色后为棕褐色。菌柄白色，近圆柱形，长15-18厘米，光滑，实心，略弯曲，内实纤维质。菌托宿存，菌状，污白色或略带浅褐色，具裂纹或绒毛状鳞片。孢子印粉红色。孢子近无色，光滑，宽椭圆形至卵圆形。褶缘囊体近纺锤形，顶端钝或尾状，褶侧囊体近似褶缘囊体。

本发明所述的银丝草菇食用菌菌种的菌丝体培养方法，以PDA 液体培养基为基础培养基，加入碳源、氮源，控制碳氮比，在温度为15~39℃，pH为4.0~12.0的条件下，接入银丝草菇菌丝恒温培养6-8d获得。

其生理、生化特征：

祁连山银丝草菇菌丝生长的温度范围为15~39℃，以 35℃最适（优选）；pH4.0~12.0 范围内均能生长，但在pH7.0~9.0 长势最佳，最适pH为8（优选），过酸过碱都会抑制菌丝体的生长。

1.不同碳源对菌丝体的生长有明显的影响：

菌丝在蔗糖培养基中长势最佳、生长速率最快，果糖培养基中最差，试验结果中蔗糖培养与常见葡萄糖培养对菌丝生长影响差异极显著。因此，优选培养基碳源为蔗糖。

2.不同氮源处理对菌丝生长有明显的影响：

菌丝体在复合氮源蛋白胨中长势最好、生长速率最快，该氮源中营养物质丰富，所含核苷酸类、矿物质类水溶性物质能够满足菌丝生长的营养需求。在无机氮源（硝酸铵、硫酸铵）中长势较弱，因为无机氮源成分单一，不能有效提供菌丝合成蛋白质、核酸等含氮大分子的必需元素。

3.不同碳氮比处理对菌丝生长也有影响：

碳氮比为15∶1时能最大满足菌丝生长对碳氮的要求，菌丝长势最好。优选的，以PDA 液体培养基为基础培养基，加入碳源蔗糖、氮源复合氮源蛋白胨，且碳、氮质量比为15∶1。

4.光照对菌丝生长也有影响：

祁连山银丝草菇在连续光照、光暗交替、及完全黑暗条件下都能生长，但在光暗交替12h条件下菌丝体生长趋势较其他两者优越，优选光暗交替12h。

本发明所述的一种银丝草菇食用菌菌种在培育可食用银丝草菇中的应用。

本发明的优点在于：目前对银丝草菇的报道比较少，本发明提供了一种银丝草菇（Volvariella bombycina）食用菌菌种，通过本发明加快了对银丝草菇的研究，一方面可以深入了解其营养成分和功效，促进产业发展；另一方面银丝草菇耐低温的属性可以为食用菌低温自溶提供模型，以便进一步探索低温自溶的分子机制。

附图说明

图1 温度对银丝草菇菌丝体生长的影响图；

图2 不同温度下银丝草菇菌丝体的生长情况；

图3 不同pH下银丝草菇菌丝体的生长情况；

图4 不同pH下银丝草菇菌丝体的生长情况；

图5 不同碳源下银丝草菇菌丝体的生长情况；

图6 不同碳源下银丝草菇菌丝体的生长情况；

图7 不同氮源下银丝草菇菌丝体的生长情况；

图8 不同氮源下银丝草菇菌丝体的生长情况；

图9 不同碳氮比下银丝草菇菌丝体的生长情况；

图10不同碳氮比下银丝草菇菌丝体的生长情况。

具体实施方式

下面结合具体实施例、及集合附图对进一步详细描述本发明的技术方案；

本发明所用的PDA 液体培养基：土豆200g，KH2PO4 1g，葡萄糖20 g，蛋白胨5g，磷酸二氢钾3g，硫酸镁1.5g，水1000mL，采用湿热灭菌法灭菌，置于冰箱保存备用。

本发明所述的银丝草菇菌丝体的培养方法，以PDA 液体培养基为基础培养基，加入碳源和氮源，控制碳氮比，在一定温度和pH条件下培养6-8d获得。

1.温度对银丝草菇菌丝体生长的影响：

以PDA 液体培养基为基础培养基，分别设置15℃、20℃、25℃、30℃、35℃等5个温度梯度，各实验组设置6瓶重复。各组分别接接菌后，在恒温培养箱中培养7d，观察菌落形态和菌丝长势。培养结束后用真空抽滤法过滤得到菌丝体，将其置于烘干箱中烘干，测其干重。为了更进一步获取菌丝体生长的最适温度，在上一组温度梯度培养的基础上，又分别设置了27℃、30℃、33℃、36℃、39℃等5个温度梯度，每个温度梯度设置6个重复，接入等量银丝草菇菌种后于恒温培养箱中培养7d，测其菌丝体干重。

表 1 不同温度对银丝草菇菌丝生长的影响；

实验结果（图1-2，表1）表明，不同温度对祁连山地区银丝草菇菌丝生长的影响结果显示，祁连山银丝草菇菌丝体的生长受温度变化影响较大，菌丝生长数量随着温度的升高而加大，在 35℃时达到最大，然后又逐渐降低；温度为 35℃时，菌丝体干重最大，为0.6685g；36℃时，次之，为 0.5602g，33℃时，为0.5434g，三之间差异不显著，但与其他试验组数据成极显著差异。因此，祁连山银丝草菇菌丝在 15~39℃下均能生长，适宜生长温度为33~36℃，在15℃下菌丝体基本不生长，在35℃时菌丝体生长速度达到最快。

2.pH 值对菌丝生长的影响：

以PDA 液体培养基为基础培养基，用 0.1mol/L HCl 或 0.1mol/L NaOH 将培养基分别调节到 4、5、6、7、8、9、10、11、12等9个不同 pH 值梯度，每个pH值设置6个重复，接菌，35℃下恒温培养7d。之后用真空抽滤法过滤得到菌丝体，将菌丝体置于烘干箱中烘干，称量其干重。以菌丝体干重作为菌丝体生长量的指标，探索银丝草菇菌丝体生长最适 pH 值。

实验结果（表2，图3,4），不同pH对丝草菇菌丝体生长的影响较大。

表2 不同 pH 值对银丝草菇菌丝生长的影响；

随着 pH 值的升高，银丝草菇菌丝体干重呈现先增大后减少的变化趋势。当 pH 值为8.0 时，菌丝体干重达到最大，为 0.9957g，与其它试验组呈现显著差异；当 pH 值为9.0时，菌丝体干重，为 0.8266g，与其他试验组也呈现显著差异；当 pH 为12.0 时，菌丝体干重最小，为0.0768g。因此，菌丝体在 pH 值 4~12内均能生长，适宜生长的 pH 值范围为 7~9，最适pH为8，在 pH = 12 时基本不生长。

碳源对菌丝生长的影响：

供试碳源:可溶性淀粉、玉米面、蔗糖、葡萄糖、甘露糖、果糖。

PDA液体培养基为基础培养基测定最适碳源，每种碳源设置6个生物学重复。配制PDA培养基装入250mL三角瓶中, 每瓶150mL，分别加入1g碳素的不同碳源 (依碳源分子量换算成碳源的量分别加入)，121℃、30min灭菌后接菌，置于35℃恒温培养箱中, 连续培养7d, 测菌丝体干重。

表3不同碳源对银丝草菇菌丝生长的影响；

实验结果（表3，图5,6）表明，银丝草菇菌丝体在供试的6种碳源上均能生长，生长最慢的是果糖，其菌丝体干重为0.0696g；而生长最快的是蔗糖，其菌丝体干重为 0.7835g,该碳源培养下的菌丝体，与其他碳源培育下的菌丝体的生长呈现极显著差异，且菌丝体浓密健壮，生长势旺盛，以甘露糖为碳源的菌丝体生长次之。因此，祁连山银丝草菇菌丝体生长的最适碳源选用蔗糖。

氮源对菌丝生长的影响：

供试氮源:硝酸铵、硫酸铵、黄豆粉、麸皮、甘氨酸、蛋白胨、谷氨酸。

PDA液体培养基为基础培养基测定最适氮源，每种氮源设置6个生物学重复。配制PDA培养基装入250mL三角瓶中, 每瓶150mL，分别加入1g氮素的不同氮源 (依氮源分子量换算成氮源的量分别加入)，121℃、30min灭菌后接菌，置于35℃恒温培养箱中, 连续培养7d, 测菌丝体干重。

表4不同氮源对银丝草菇菌丝生长的影响；

实验结果（表4，图7,8）表明，在参试的 7 种氮源中，银丝草菇的菌丝体在以蛋白胨为氮源的培养基上生长速度最快，菌丝体浓稠，长势最旺盛，菌丝体干重最大，与其他 6 种氮源差异极显著；黄豆粉与麸皮之间差异不显著，但与硫酸铵、甘氨酸、硝酸铵、谷氨酸之间差异显著；菌丝在以硫酸铵、硝酸铵、谷氨酸、甘氨酸为氮源时，虽能生长，但长势很弱。因此，祁连山银丝草菇菌丝体生长的最适氮源选用蛋白胨。

碳氮比对菌丝生长的影响：

以蔗糖为碳源，以蛋白胨作为氮源, PDA液体培养基为基础培养基, 配制成碳氮比分别为10︰1、15︰1、20︰1、 23︰1、 26︰1、 29︰1、 32︰1、 35︰1、 38︰1、41︰1、44︰1，47:1、50:1共13种配方, 同一碳氮比设置6个重复，121℃、30min灭菌后接菌，置于35℃恒温培养箱中培养7d。测不同碳氮比下的菌丝体干重，选择菌丝体生长所需最适的碳氮比。

表5 碳氮比对银丝草菇菌丝生长的影响；

实验结果（表5，图9,10）表明，银丝草菇菌丝体能够在C/N比为10/1~50/1的范围内生长，最适C/N比为15/1，此时的菌丝生长速度快，菌丝体浓稠健壮，生长旺盛，菌丝体干重最大，与其他碳氮比组之间差异极显著。随着碳氮比的增大，菌丝体的生长数量逐步下降。因此，祁连山地区银丝草菇菌丝体生长的最适碳氮比为15/1。

．光照对菌丝生长的影响：

以PDA培养基为基础培养基检测光照对因第四次干菌丝体生长的影响。配制PDA培养基，分装于250mL三角瓶中（150mL/瓶）, 接菌, 分别置于完全黑暗、12h光 (3000lx日光灯)暗交替和连续光照 (3000lx日光灯) 三个条件下培养，每组设置6个重复，置于35℃恒温培养箱中培养7d, 测不同光照处理下的菌丝体干重，选择菌丝体生长所需最适光照条件。

表6不同光照对银丝草菇菌丝体的影响；

实验结果（表6）表明，不同光处理对祁连山银丝草菇菌丝体生长影响的实验结果表明，祁连山银丝草菇在连续光照，光暗交替12h，完全黑暗条件下都能生长，但在光暗交替条件下菌丝体生长趋势较其他两者优越，菌丝体生长势较好。

实施例2

本发明所述银丝草菇菌丝体的培养方法，以PDA培养基为基础培养，其中以蔗糖作为碳源、蛋白胨作为氮源，碳、氮质量比为15/1，pH=8，配制好培养基，分装于250mL三角瓶中（150mL/瓶）并高温高压灭菌, 冷却后接菌，置于35℃恒温培养箱中培养7d，培养过程中进行12h光暗交替刺激。收集菌丝体、烘干、称重，最终获得0.75g菌丝体。

Claims

1.一种银丝草菇（Volvariella bombycina）食用菌菌种，其保藏号为CGMCC No：18586。

2.一种如权利要求1所述的银丝草菇食用菌菌种的菌丝体培养方法，其特征在于：以PDA 液体培养基为基础培养基，加入碳源、氮源，控制碳氮比，在温度为15~39℃，pH为4.0~12.0的条件下，接入银丝草菇菌丝恒温培养6-8d获得。

3.根据权利要求2所述的一种银丝草菇食用菌菌种的菌丝体培养方法，其特征在于：碳源为蔗糖、氮源为蛋白胨，且碳、氮质量比为15∶1。

4.根据权利要求2或3所述的一种银丝草菇食用菌菌种的菌丝体培养方法，其特征在于：光暗交替12h培养。

5.根据权利要求4所述的一种银丝草菇食用菌菌种的菌丝体培养方法，其特征在于：所述温度为35℃。

6.根据权利要求2 、3或5所述的一种银丝草菇食用菌菌种的菌丝体培养方法，其特征在于：所述pH为8。

7.根据权利要求1所述的一种银丝草菇食用菌菌种在栽培可食用银丝草菇中的应用。