CN110923197A - 毛囊源细胞培养基 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种毛囊源细胞培养基，包括以下组分和配比：血清替代物 2‑15 v/v%；复合维生素 20‑90 ug/ml；氨基酸 20‑30 ng/ml；细胞生长因子 1.5‑9 ng/ml；L‑谷氨酰胺 3‑7 mmol/ml；青链霉素双抗溶液 12‑18μM；羟基乙醇 18‑25μM；壳聚糖 5‑10μg/ml；倍他米松 10‑15 ng/ml；余量为DMEM/F12培养基。通过本发明培养基培养的毛囊源细胞增长快速，生长稳定，纯度高，安全性高，为毛囊源细胞施用于治疗皮肤缺损奠定了基础，具有很好的临床应用前景。

Description

毛囊源细胞培养基
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体是一种毛囊源细胞培养基。
背景技术
皮肤作为人体最大的器官，具有感觉、调节体温、分泌与排泄、防止水分蒸发等多种作用，其中最主要的功能是作为人体与外界环境的屏障以维持内环境的稳定，同时其也是免疫系统的重要组成部分。目前，各种涉及皮肤缺损的外伤特别是烧伤、压轧伤、切割伤等也越来越多。其中，外伤导致的皮肤大面积缺损常常导致非常严重的肢体残疾，甚至死亡。目前临床上治疗皮肤缺损的标准治疗方法是自体皮肤移植，由于具有无免疫排斥反应，成活率高等特点，其在临床上应用极为广泛，并取得了很好的疗效。但自体皮肤移植的缺点也非常明显，由于是自体取材，其本身就是对患者的再次损伤，极大增加了患者痛苦，而且有发生供皮区感染，不愈合等并发症的风险。更为严重的是，对于上述的大面积皮肤缺损，常由于缺乏足够可供移植的自体皮肤而导致创面修复困难， 严重影响了治疗进程， 甚至导致死亡。
干细胞是一类具有自我复制能力的多潜能细胞，在一定条件下，可以分化成多种功能细胞。头发毛囊中含有大量干细胞，是最容易获得的干细胞来源之一。毛囊源细胞是一类存在于毛囊外根鞘隆突部的干细胞，具有未分化性、自我更新和体外增殖能力强等特点。体外培养研究中的毛囊源细胞表现出高克隆形成能力，具有很高的再生潜能。由于毛囊源细胞来源于毛发，可以直接从人体自身取得，数量极其丰富，且没有任何并发症，对人完全无创，现已成为皮肤组织工程学研究的焦点。
发明内容
本发明就是为了解决上述技术问题，所提出一种毛囊源细胞培养基。
本发明是按照以下技术方案实现的。
一种毛囊源细胞培养基，包括以下组分：DMEM/F12培养基、血清替代物、复合维生素、氨基酸、细胞生长因子、L-谷氨酰胺、青链霉素双抗溶液、羟基乙醇、海藻糖、倍他米松。
进一步的，所述组分的配比为：
血清替代物 2-15 v/v%；
复合维生素 20-90 ug/ml；
氨基酸 20-30 ng/ml；
细胞生长因子 1.5-9 ng/ml；
L-谷氨酰胺 3-7 mmol/ml；
青链霉素双抗溶液 12-18μM；
羟基乙醇 18-25μM；
壳聚糖 5-10μg/ml；
倍他米松 10-15 ng/ml；
余量为DMEM/F12培养基。
进一步的，所述组分的配比为：
血清替代物 8 v/v%；
复合维生素 50 ug/ml；
氨基酸 25 ng/ml；
细胞生长因子 4 ng/ml；
L-谷氨酰胺 5 mmol/ml；
青链霉素双抗溶液 15μM；
羟基乙醇 22μM；
壳聚糖 7μg/ml；
倍他米松 12 ng/ml；
余量为DMEM/F12培养基。
进一步的，所述细胞生长因子为重组人表皮细胞生长因子。
进一步的，所述氨基酸为非必需氨基酸。
进一步的，所述毛囊源细胞培养基还包括紫苏提取物。
进一步的，所述紫苏提取物的浓度为1-5μg/ml。
进一步的，所述紫苏提取物的浓度为3μg/ml。
本发明获得了如下的有益效果。
本发明提供了一种新的毛囊源细胞培养基，通过本发明培养基培养的毛囊源细胞增长快速，生长稳定，纯度高，安全性高，为毛囊源细胞施用于治疗皮肤缺损奠定了基础，具有很好的临床应用前景。
附图说明
图1是本发明实施例3培养基培养的毛囊源细胞显微镜观察图。
具体实施方式
下面结合附图及实施例对本发明进行进一步说明。
实施例1
一种毛囊源细胞培养基，包括以下组分及配比：
血清替代物 2 v/v%
复合维生素 20 ug/ml；
氨基酸 20 ng/ml
细胞生长因子 1.5 ng/ml；
L-谷氨酰胺 3 mmol/ml；
青链霉素双抗溶液 12μM；
羟基乙醇 18μM；
壳聚糖 5μg/ml；
倍他米松 10 ng/ml
余量为DMEM/F12培养基。
实施例2
一种毛囊源细胞培养基，包括以下组分及配比：
血清替代物15 v/v%
复合维生素 90 ug/ml；
氨基酸 30 ng/ml
细胞生长因子 9 ng/ml；
L-谷氨酰胺 7 mmol/ml；
青链霉素双抗溶液 18μM；
羟基乙醇 25μM；
壳聚糖 10μg/ml；
倍他米松15 ng/ml
余量为DMEM/F12培养基。
实施例3
一种毛囊源细胞培养基，包括以下组分及配比：
血清替代物 8 v/v%
复合维生素 50 ug/ml；
氨基酸 25 ng/ml
细胞生长因子 4 ng/ml；
L-谷氨酰胺 5 mmol/ml；
青链霉素双抗溶液 15μM；
羟基乙醇 22μM；
壳聚糖 7μg/ml；
倍他米松 12 ng/ml；
余量为DMEM/F12培养基。
实施例4
一种毛囊源细胞培养基，包括以下组分及配比：
血清替代物 6 v/v%
复合维生素 80 ug/ml；
氨基酸 22 ng/ml
细胞生长因子 7 ng/ml；
L-谷氨酰胺 4 mmol/ml；
青链霉素双抗溶液 14μM；
羟基乙醇 19μM；
壳聚糖 9μg/ml；
倍他米松 13 ng/ml；
余量为DMEM/F12培养基。
实施例5
一种毛囊源细胞培养基，包括以下组分及配比：
血清替代物 8 v/v%
复合维生素 50 ug/ml；
氨基酸 25 ng/ml
细胞生长因子 4 ng/ml；
L-谷氨酰胺 5 mmol/ml；
青链霉素双抗溶液 15μM；
羟基乙醇 22μM；
壳聚糖 7μg/ml；
倍他米松 12 ng/ml；
紫苏提取物的浓度为3μg/ml；
余量为DMEM/F12培养基。
实施例6
一种毛囊源细胞培养基，包括以下组分及配比：
血清替代物 6 v/v%
复合维生素 80 ug/ml；
氨基酸 22 ng/ml
细胞生长因子 7 ng/ml；
L-谷氨酰胺 4 mmol/ml；
青链霉素双抗溶液 14μM；
羟基乙醇 19μM；
壳聚糖 9μg/ml；
倍他米松 13 ng/ml；
紫苏提取物的浓度为4μg/ml；
余量为DMEM/F12培养基。
实施例7 采用实施例1-6培养基培养毛囊源细胞效果对比
24h 72h 120h
实施例1 毛囊源细胞增加，有少量杂细胞 毛囊源细胞量明显增加，杂细胞数量小于0.3% 毛囊源细胞量持续增加，杂细胞数量小于0.5%
实施例2 毛囊源细胞增加，无杂细胞 毛囊源细胞量明显增加，无杂细胞 毛囊源细胞量持续增加，杂细胞数量小于0.1%
实施例3 毛囊源细胞增加，杂细胞量很少 毛囊源细胞量明显增加，杂细胞数量小于0.1% 毛囊源细胞量持续增加，杂细胞数量小于0.2%
实施例4 毛囊源细胞增加，杂细胞量很少 毛囊源细胞量明显增加，杂细胞数量小于0.1% 毛囊源细胞量持续增加，杂细胞数量小于0.2%
实施例5 毛囊源细胞增加，杂细胞量很少 毛囊源细胞量明显增加，杂细胞数量小于0.1% 毛囊源细胞量持续增加，杂细胞数量小于0.2%
实施例6 毛囊源细胞增加，杂细胞量很少 毛囊源细胞量明显增加，杂细胞数量小于0.1% 毛囊源细胞量持续增加，杂细胞数量小于0.2%
最后应说明的是以上各实施例仅用以说明本发明的实施例的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明的实施例进行了详细的说明，本领域的普通技术 人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分 或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离 本发明的实施例各实施例技术方案的范围。

Claims (8)

1.一种毛囊源细胞培养基，其特征在于：包括以下组分：DMEM/F12培养基、血清替代物、复合维生素、氨基酸、细胞生长因子、L-谷氨酰胺、青链霉素双抗溶液、羟基乙醇、海藻糖、倍他米松。
2.根据权利要求1所述的一种毛囊源细胞培养基，其特征在于：所述组分的配比为：
血清替代物 2-15 v/v%；
复合维生素 20-90 ug/ml；
氨基酸 20-30 ng/ml；
细胞生长因子 1.5-9 ng/ml；
L-谷氨酰胺 3-7 mmol/ml；
青链霉素双抗溶液 12-18μM；
羟基乙醇 18-25μM；
壳聚糖 5-10μg/ml；
倍他米松 10-15 ng/ml；
余量为DMEM/F12培养基。
3.根据权利要求1所述的一种毛囊源细胞培养基，其特征在于：所述组分的配比为：
血清替代物 8 v/v%；
复合维生素 50 ug/ml；
氨基酸 25 ng/ml；
细胞生长因子 4 ng/ml；
L-谷氨酰胺 5 mmol/ml；
青链霉素双抗溶液 15μM；
羟基乙醇 22μM；
壳聚糖 7μg/ml；
倍他米松 12 ng/ml；
余量为DMEM/F12培养基。
4.根据权利要求1所述的一种毛囊源细胞培养基，其特征在于：所述细胞生长因子为重组人表皮细胞生长因子。
5.根据权利要求1所述的一种毛囊源细胞培养基，其特征在于：所述氨基酸为非必需氨基酸。
6.根据权利要求1所述的一种毛囊源细胞培养基，其特征在于：所述毛囊源细胞培养基还包括紫苏提取物。
7.根据权利要求6所述的一种毛囊源细胞培养基，其特征在于：所述紫苏提取物的浓度为1-5μg/ml。
8.根据权利要求7所述的一种毛囊源细胞培养基，其特征在于：所述紫苏提取物的浓度为3μg/ml。
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