CN109097327A - 一种干细胞培养基及干细胞分离方法 - Google Patents

一种干细胞培养基及干细胞分离方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种干细胞培养基及干细胞分离方法。所述的干细胞培养基包括以下原料：复合维生素、胰岛素、硫辛酸、山茶籽油、海藻糖、紫苏提取物、牛磺酸、右旋糖酐、倍他米松、无机盐、碳酸氢钠、蛋白多肽。本发明的干细胞培养基通过复合维生素、胰岛素、硫辛酸、山茶籽油、海藻糖、紫苏提取物、牛磺酸、右旋糖酐、倍他米松、无机盐、碳酸氢钠和蛋白多肽复合而成，不含有动物血清，可避免而引入外源病毒；本发明的干细胞分离方法易操作，分离效果好，50ml组织最终可获得原代脂肪干细胞6.1×107～6.5×107个，且原代脂肪干细胞活率可达99.1～99.6％。

Description

一种干细胞培养基及干细胞分离方法
技术领域
本发明涉及细胞培养领域，具体是一种干细胞培养基及干细胞分离方法。
背景技术
干细胞(stemcell)是一类具有自我复制能力的多潜能细胞。在一定条件下，它可以分化成多种功能细胞。根据干细胞所处的发育阶段分为胚胎干细胞和成体干细胞。根据干细胞的发育潜能分为三类：全能干细胞、多能干细胞和单能干细胞。
目前，脂肪干细胞的分离方法多为胶原酶消化法，导致细胞得率低。而且培养体系多采用含血清培养法，由于血清含有其它动物源成分，使培养体系存在引入外源性病毒的风险，从而使脂肪干细胞在临床应用中存在很大瓶颈。
发明内容
本发明的目的在于提供一种干细胞培养基及干细胞分离方法，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种干细胞培养基，包括以下原料：复合维生素、胰岛素、硫辛酸、山茶籽油、海藻糖、紫苏提取物、牛磺酸、右旋糖酐、倍他米松、无机盐、碳酸氢钠、蛋白多肽。
作为本发明进一步的方案：复合维生素的浓度为2-5g/L、胰岛素的浓度为6-15g/L、硫辛酸的浓度为3-7g/L、山茶籽油的浓度为5-15g/L、海藻糖的浓度为13-20g/L、紫苏提取物的浓度为10-20g/L、牛磺酸的浓度为5-10g/L、右旋糖酐的浓度为12-25g/L、倍他米松的浓度为6-14g/L、无机盐的浓度为1-2g/L、碳酸氢钠的浓度为2-6g/L、蛋白多肽的浓度为11-17g/L。
作为本发明进一步的方案：复合维生素的浓度为3g/L、胰岛素的浓度为11g/L、硫辛酸的浓度为5g/L、山茶籽油的浓度为10g/L、海藻糖的浓度为16g/L、紫苏提取物的浓度为13g/L、牛磺酸的浓度为8g/L、右旋糖酐的浓度为22g/L、倍他米松的浓度12g/L、无机盐的浓度为2g/L、碳酸氢钠的浓度为4g/L、蛋白多肽的浓度为16g/L。
一种干细胞分离方法，包括以下步骤：
(1)获取离体组织，所述离体组织为脂肪组织，脂肪组织转移到无菌采集瓶中，1-5℃保存；所述离体组织与所述干细胞培养基混合前采用生理盐水清洗1-3遍，洗去血细胞直至加入生理盐水后脂肪组织悬液澄清无血色；将清洗后的脂肪组织置于100-500r/min转速下离心8-15min，去除下层液体，吸取上层组织块放入培养瓶中，将组织块均匀地铺在培养瓶中，置于33-37℃、7％CO2的培养箱中培养，40-55min后组织块贴于培养面，即得离体组织；
(2)将上述离体组织与所述干细胞培养基混合置于培养瓶中，培养至细胞从所述离体组织中爬出来后刮除离体组织；所述离体组织在所述干细胞培养基培养的第10-15天刮除离体组织；
(3)继续培养置于33-37℃、7％CO2的培养箱中培养，待培养基中细胞融合度达80-90％时，消化后传代培养；所述传代培养采用干细胞培养基进行传代培养。
作为本发明进一步的方案：所述生理盐水含有质量百分比为2％的青霉素和质量百分比为0.5％的叶酸。
作为本发明进一步的方案：所述离体组织与所述干细胞培养基混合置于培养瓶中培养直至传代培养之间，每隔2-3天更换所述干细胞培养基。
作为本发明进一步的方案：所述消化为EDTA-胰酶消化。
一种干细胞培养基在干细胞培养中的应用。
一种干细胞分离方法在干细胞培养中的应用。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
本发明的干细胞培养基通过复合维生素、胰岛素、硫辛酸、山茶籽油、海藻糖、紫苏提取物、牛磺酸、右旋糖酐、倍他米松、无机盐、碳酸氢钠和蛋白多肽复合而成，不含有动物血清，可避免而引入外源病毒；本发明的干细胞分离方法易操作，分离效果好，50ml组织最终可获得原代脂肪干细胞6.1×107～6.5×107个，且原代脂肪干细胞活率可达99.1～99.6％。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本专利的技术方案作进一步详细地说明。
实施例1
一种干细胞培养基，包括以下原料：复合维生素、胰岛素、硫辛酸、山茶籽油、海藻糖、紫苏提取物、牛磺酸、右旋糖酐、倍他米松、无机盐、碳酸氢钠、蛋白多肽。其中，复合维生素的浓度为2g/L、胰岛素的浓度为6g/L、硫辛酸的浓度为3g/L、山茶籽油的浓度为5g/L、海藻糖的浓度为13g/L、紫苏提取物的浓度为10g/L、牛磺酸的浓度为5g/L、右旋糖酐的浓度为12g/L、倍他米松的浓度为6g/L、无机盐的浓度为1g/L、碳酸氢钠的浓度为2g/L、蛋白多肽的浓度为11g/L。
一种干细胞分离方法，包括以下步骤：(1)获取离体组织，所述离体组织为脂肪组织，脂肪组织转移到无菌采集瓶中，1℃保存；所述离体组织与所述干细胞培养基混合前采用生理盐水清洗1遍，洗去血细胞直至加入生理盐水后脂肪组织悬液澄清无血色；所述生理盐水含有质量百分比为2％的青霉素和质量百分比为0.5％的叶酸；将清洗后的脂肪组织置于500r/min转速下离心8min，去除下层液体，吸取上层组织块放入培养瓶中，将组织块均匀地铺在培养瓶中，置于33℃、7％CO2的培养箱中培养，40min后组织块贴于培养面，即得离体组织；(2)将上述离体组织与所述干细胞培养基混合置于培养瓶中，培养至细胞从所述离体组织中爬出来后刮除离体组织；所述离体组织在所述干细胞培养基培养的第10天刮除离体组织；(3)继续培养置于33℃、7％CO2的培养箱中培养，待培养基中细胞融合度达80％时，EDTA-胰酶消化后传代培养；所述传代培养采用干细胞培养基进行传代培养。所述离体组织与所述干细胞培养基混合置于培养瓶中培养直至传代培养之间，每隔2天更换所述干细胞培养基。
实施例2
一种干细胞培养基，包括以下原料：复合维生素、胰岛素、硫辛酸、山茶籽油、海藻糖、紫苏提取物、牛磺酸、右旋糖酐、倍他米松、无机盐、碳酸氢钠、蛋白多肽。其中，复合维生素的浓度为5g/L、胰岛素的浓度为15g/L、硫辛酸的浓度为7g/L、山茶籽油的浓度为15g/L、海藻糖的浓度为20g/L、紫苏提取物的浓度为20g/L、牛磺酸的浓度为10g/L、右旋糖酐的浓度为25g/L、倍他米松的浓度为14g/L、无机盐的浓度为2g/L、碳酸氢钠的浓度为6g/L、蛋白多肽的浓度为17g/L。
一种干细胞分离方法，包括以下步骤：(1)获取离体组织，所述离体组织为脂肪组织，脂肪组织转移到无菌采集瓶中，5℃保存；所述离体组织与所述干细胞培养基混合前采用生理盐水清洗3遍，洗去血细胞直至加入生理盐水后脂肪组织悬液澄清无血色；所述生理盐水含有质量百分比为2％的青霉素和质量百分比为0.5％的叶酸；将清洗后的脂肪组织置于100r/min转速下离心15min，去除下层液体，吸取上层组织块放入培养瓶中，将组织块均匀地铺在培养瓶中，置于37℃、7％CO2的培养箱中培养，55min后组织块贴于培养面，即得离体组织；(2)将上述离体组织与所述干细胞培养基混合置于培养瓶中，培养至细胞从所述离体组织中爬出来后刮除离体组织；所述离体组织在所述干细胞培养基培养的第15天刮除离体组织；(3)继续培养置于37℃、7％CO2的培养箱中培养，待培养基中细胞融合度达90％时，EDTA-胰酶消化后传代培养；所述传代培养采用干细胞培养基进行传代培养。所述离体组织与所述干细胞培养基混合置于培养瓶中培养直至传代培养之间，每隔3天更换所述干细胞培养基。
实施例3
一种干细胞培养基，包括以下原料：复合维生素、胰岛素、硫辛酸、山茶籽油、海藻糖、紫苏提取物、牛磺酸、右旋糖酐、倍他米松、无机盐、碳酸氢钠、蛋白多肽。其中，复合维生素的浓度为3g/L、胰岛素的浓度为11g/L、硫辛酸的浓度为5g/L、山茶籽油的浓度为10g/L、海藻糖的浓度为16g/L、紫苏提取物的浓度为13g/L、牛磺酸的浓度为8g/L、右旋糖酐的浓度为22g/L、倍他米松的浓度12g/L、无机盐的浓度为2g/L、碳酸氢钠的浓度为4g/L、蛋白多肽的浓度为16g/L。
一种干细胞分离方法，包括以下步骤：(1)获取离体组织，所述离体组织为脂肪组织，脂肪组织转移到无菌采集瓶中，2℃保存；所述离体组织与所述干细胞培养基混合前采用生理盐水清洗2遍，洗去血细胞直至加入生理盐水后脂肪组织悬液澄清无血色；所述生理盐水含有质量百分比为2％的青霉素和质量百分比为0.5％的叶酸；将清洗后的脂肪组织置于300r/min转速下离心11min，去除下层液体，吸取上层组织块放入培养瓶中，将组织块均匀地铺在培养瓶中，置于35℃、7％CO2的培养箱中培养，45min后组织块贴于培养面，即得离体组织；(2)将上述离体组织与所述干细胞培养基混合置于培养瓶中，培养至细胞从所述离体组织中爬出来后刮除离体组织；所述离体组织在所述干细胞培养基培养的第12天刮除离体组织；(3)继续培养置于35℃、7％CO2的培养箱中培养，待培养基中细胞融合度达88％时，EDTA-胰酶消化后传代培养；所述传代培养采用干细胞培养基进行传代培养。所述离体组织与所述干细胞培养基混合置于培养瓶中培养直至传代培养之间，每隔2.5天更换所述干细胞培养基。
实施例4
一种干细胞培养基，包括以下原料：复合维生素、胰岛素、硫辛酸、山茶籽油、海藻糖、紫苏提取物、牛磺酸、右旋糖酐、倍他米松、无机盐、碳酸氢钠、蛋白多肽。其中，复合维生素的浓度为4g/L、胰岛素的浓度为12g/L、硫辛酸的浓度为4g/L、山茶籽油的浓度为12g/L、海藻糖的浓度为14g/L、紫苏提取物的浓度为18g/L、牛磺酸的浓度为6g/L、右旋糖酐的浓度为22g/L、倍他米松的浓度为8g/L、无机盐的浓度为1.8g/L、碳酸氢钠的浓度为3.6g/L、蛋白多肽的浓度为16g/L。
一种干细胞分离方法，包括以下步骤：
(1)获取离体组织，所述离体组织为脂肪组织，脂肪组织转移到无菌采集瓶中，4℃保存；所述离体组织与所述干细胞培养基混合前采用生理盐水清洗1遍，洗去血细胞直至加入生理盐水后脂肪组织悬液澄清无血色；所述生理盐水含有质量百分比为2％的青霉素和质量百分比为0.5％的叶酸；将清洗后的脂肪组织置于200r/min转速下离心13min，去除下层液体，吸取上层组织块放入培养瓶中，将组织块均匀地铺在培养瓶中，置于34℃、7％CO2的培养箱中培养，50min后组织块贴于培养面，即得离体组织；
(2)将上述离体组织与所述干细胞培养基混合置于培养瓶中，培养至细胞从所述离体组织中爬出来后刮除离体组织；所述离体组织在所述干细胞培养基培养的第11天刮除离体组织；
(3)继续培养置于34℃、7％CO2的培养箱中培养，待培养基中细胞融合度达83％时，EDTA-胰酶消化后传代培养；所述传代培养采用干细胞培养基进行传代培养。所述离体组织与所述干细胞培养基混合置于培养瓶中培养直至传代培养之间，每隔2天更换所述干细胞培养基。
实验例
将实施例1-4制备得到的原代脂肪干细胞离心收集，重悬计数，并计算活率。结果见表1。50ml组织最终获得原代脂肪干细胞6.1×107～6.5×107个，活率为99.1～99.6％。
表1 50ml组织最终获得原代脂肪干细胞个数及活率
项目 原代脂肪干细胞数(个) 原代脂肪干细胞活率(％)
实施例1 6.3×10<sup>7</sup> 99.1
实施例2 6.1×10<sup>7</sup> 99.4
实施例3 6.5×10<sup>7</sup> 99.6
实施例4 6.2×10<sup>7</sup> 99.3
上面对本专利的较佳实施方式作了详细说明，但是本专利并不限于上述实施方式，在本领域的普通技术人员所具备的知识范围内，还可以在不脱离本专利宗旨的前提下作出各种变化。

Claims (9)

1.一种干细胞培养基，其特征在于，包括以下原料：复合维生素、胰岛素、硫辛酸、山茶籽油、海藻糖、紫苏提取物、牛磺酸、右旋糖酐、倍他米松、无机盐、碳酸氢钠、蛋白多肽。
2.根据权利要求1所述的干细胞培养基，其特征在于，复合维生素的浓度为2-5g/L、胰岛素的浓度为6-15g/L、硫辛酸的浓度为3-7g/L、山茶籽油的浓度为5-15g/L、海藻糖的浓度为13-20g/L、紫苏提取物的浓度为10-20g/L、牛磺酸的浓度为5-10g/L、右旋糖酐的浓度为12-25g/L、倍他米松的浓度为6-14g/L、无机盐的浓度为1-2g/L、碳酸氢钠的浓度为2-6g/L、蛋白多肽的浓度为11-17g/L。
3.根据权利要求1所述的干细胞培养基，其特征在于，复合维生素的浓度为3g/L、胰岛素的浓度为11g/L、硫辛酸的浓度为5g/L、山茶籽油的浓度为10g/L、海藻糖的浓度为16g/L、紫苏提取物的浓度为13g/L、牛磺酸的浓度为8g/L、右旋糖酐的浓度为22g/L、倍他米松的浓度12g/L、无机盐的浓度为2g/L、碳酸氢钠的浓度为4g/L、蛋白多肽的浓度为16g/L。
4.一种根据权利要求1-3任一所述的干细胞分离方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）获取离体组织，所述离体组织为脂肪组织，脂肪组织转移到无菌采集瓶中，1-5℃保存；所述离体组织与所述干细胞培养基混合前采用生理盐水清洗1-3遍，洗去血细胞直至加入生理盐水后脂肪组织悬液澄清无血色；将清洗后的脂肪组织置于100-500r/min转速下离心8-15min，去除下层液体，吸取上层组织块放入培养瓶中，将组织块均匀地铺在培养瓶中，置于33-37℃、7％CO2的培养箱中培养，40-55min后组织块贴于培养面，即得离体组织；
（2）将上述离体组织与所述干细胞培养基混合置于培养瓶中，培养至细胞从所述离体组织中爬出来后刮除离体组织；所述离体组织在所述干细胞培养基培养的第10-15天刮除离体组织；
（3）继续培养置于33-37℃、7％CO2的培养箱中培养，待培养基中细胞融合度达80-90％时，消化后传代培养；所述传代培养采用干细胞培养基进行传代培养。
5.根据权利要求4所述的干细胞分离方法，其特征在于，所述生理盐水含有质量百分比为2％的青霉素和质量百分比为0.5％的叶酸。
6.根据权利要求4所述的干细胞分离方法，其特征在于，所述离体组织与所述干细胞培养基混合置于培养瓶中培养直至传代培养之间，每隔2-3天更换所述干细胞培养基。
7.根据权利要求4所述的干细胞分离方法，其特征在于，所述消化为EDTA-胰酶消化。
8.一种根据权利要求4-7任一所述的干细胞培养基在干细胞培养中的应用。
9.一种根据权利要求4-7任一所述的干细胞分离方法在干细胞培养中的应用。
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110713974A (zh) * 2019-11-25 2020-01-21 深圳科学之门生物工程有限公司 一种干细胞培养基及其制备方法
CN110923197A (zh) * 2019-11-11 2020-03-27 浙江卫未生物医药科技有限公司 毛囊源细胞培养基

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110923197A (zh) * 2019-11-11 2020-03-27 浙江卫未生物医药科技有限公司 毛囊源细胞培养基
CN110713974A (zh) * 2019-11-25 2020-01-21 深圳科学之门生物工程有限公司 一种干细胞培养基及其制备方法

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