CN110819739A - 一种Saffold病毒实时荧光PCR检测引物和探针、检测试剂盒、检测方法及应用 - Google Patents

一种Saffold病毒实时荧光PCR检测引物和探针、检测试剂盒、检测方法及应用 Download PDF

Info

Publication number
CN110819739A
CN110819739A CN201911203799.3A CN201911203799A CN110819739A CN 110819739 A CN110819739 A CN 110819739A CN 201911203799 A CN201911203799 A CN 201911203799A CN 110819739 A CN110819739 A CN 110819739A
Authority
CN
China
Prior art keywords
virus
saffold
real
detection
pcr detection
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201911203799.3A
Other languages
English (en)
Inventor
吴建国
刘为勇
刘映乐
谭秋萍
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Guangdong Long Fan Biology Technology Co Ltd
Original Assignee
Guangdong Long Fan Biology Technology Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Guangdong Long Fan Biology Technology Co Ltd filed Critical Guangdong Long Fan Biology Technology Co Ltd
Priority to CN201911203799.3A priority Critical patent/CN110819739A/zh
Publication of CN110819739A publication Critical patent/CN110819739A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
    • C12Q1/701—Specific hybridization probes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions
    • C12Q1/686—Polymerase chain reaction [PCR]

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明属于病毒检测技术领域，尤其涉及一种Saffold病毒实时荧光PCR检测引物和探针、检测试剂盒、检测方法及应用。本发明采用单管双荧光通道同时检测Saffold病毒和内参基因Rnase P的存在，能检测全血、血清、鼻咽拭子、鼻咽抽吸物、脑脊液、粪便和组织等标本中Saffold病毒RNA的存在。本发明检测时间周期短、检测效率高；检测病毒特异性高，准确率高；在进行病毒定性分析的同时还能进行病毒定量分析，定量线性范围好；检测灵敏度高；操作简单、易于推广；实验结果重复性好，精密度高；能通过内参基因的检测结果对样本的提取和扩增整个过程进行质量监控。

Description

一种Saffold病毒实时荧光PCR检测引物和探针、检测试剂盒、 检测方法及应用
技术领域
本发明属于病毒检测技术领域，尤其涉及一种Saffold病毒实时荧光PCR检测引物和探针、检测试剂盒、检测方法及应用。
背景技术
Saffold病毒(Saffold virus)属于小核糖核酸病毒科、心病毒属，属于无包膜的单股正链RNA病毒。Saffold病毒是1981年从发热婴儿粪便中分离的一种新病毒，是新病毒属中被鉴定的第2个可以致人疾病的病毒。该病毒普遍存在，呈全球分布。Saffold病毒感染可引起急性胃肠炎、呼吸道及中枢神经系统感染，与1型糖尿病也有一定关系。Saffold病毒(目前有两种型别，分别是Saffold病毒1型和Saffold病毒2型。当前还没有针对Saffold病毒的检测试剂盒和方法的相关报道。
发明内容
针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种Saffold病毒实时荧光PCR检测引物和探针、检测试剂盒、检测方法及应用，目的在于解决现有技术中的一部分问题或至少缓解现有技术中的一部分问题。
本发明是这样实现的，一种Saffold病毒实时荧光PCR检测引物和探针，包括Saffold病毒特异性引物及探针序列，见SEQ ID NO.1-3；内标基因Rnase P特异性引物及探针序列，见SEQ ID NO.4-6。
一种Saffold病毒实时荧光PCR检测试剂盒，包括如权利要求1所述的实时荧光PCR检测引物和探针。
进一步地，还包括：
阳性对照品：Saffold病毒标准品；
内标溶液：含Rnase P序列的病毒样颗粒溶液；
阴性对照品：RNase Free H2O。
一种Saffold病毒实时荧光PCR检测方法，包括：以样品RNA为模板，配制扩增反应体系进行实时荧光PCR扩增得到扩增曲线，对所述扩增曲线进行分析，并作出判断；所述扩增反应体系包括权利要求1所述的Saffold病毒的实时荧光PCR检测引物对和探针。
进一步地，所述扩增反应体系包括：样品模板、权利要求1所述的Saffold病毒的实时荧光PCR检测引物和探针、5×PCR Buffer和Enzyme Mix；扩增程序为：40℃15min；95℃5min；95℃15sec、59℃45sec，45个循环。
进一步地，其特征在于，对扩增曲线进行分析判断原则为：
当FAM荧光通道中Ct≤40时，判断样品为Saffold病毒阳性；
当FAM荧光通道中40<Ct≤45时，重复一次实验，如果Ct还是在此范围之内或小于40就判断样品为Saffold病毒阳性，否则判断样品为Saffold病毒阴性；
当FAM荧光通道中无扩增曲线时，且HEX通道中Ct≤45时，判断样品为Saffold病毒阴性；
当FAM荧光通道中无扩增曲线时，且HEX通道也无扩增曲线时，判断本次实验异常，需要重新提取标本RNA和重新扩增。
如上述的一种Saffold病毒实时荧光PCR检测引物和探针在制备用于检测Saffold病毒的试剂盒中的应用。
综上所述，本发明的优点及积极效果为：
1、本发明提供了供了Saffold病毒的实时荧光PCR检测引物对、探针、试剂盒及检测方法，更够快速、准确且灵敏地检测出Saffold病毒，特异性强、灵敏度高，灵敏度高达2拷贝/mL。
2、本申请经过大量的创新性试验得出本申请的引物对、探针、试剂盒及检测方法，解决了用一对引物对和一个探针就能同时检测出Saffold病毒1型和Saffold病毒2型病毒，且使其特异性强，灵敏度高的问题，这也是本申请最大的技术难点。本发明采用单管双荧光通道同时检测Saffold病毒和内参基因Rnase P的存在，能检测脑脊液、咽拭子等标本中Saffold病毒RNA的存在。当脑脊液、全血、血浆或鼻咽拭子中的存在反转录或者PCR抑制时，容易造成病毒核酸定量结果不准备甚至出现“假阴性”，针对这个难点与技术问题，本发明设计了内参基因，可对标本提取和扩增这整个过程进行质量监控，能监控RNA是否成功提取以及后续的逆转录和PCR是否顺利进行，以及监控是否出现人工操作失误。
3、本发明提供了Saffold病毒的实时荧光PCR检测引物对、探针、试剂盒及检测方法，不仅缩短了操作时间，减少了污染，也降低了样品诊断的成本，具有潜在的应用价值。
附图说明
图1是Saffold病毒标准品扩增曲线；
图2是Saffold病毒标准品浓度标准曲线；
图3是50例鼻咽抽吸物标本Saffold病毒荧光定量PCR扩增曲线；
图4是50例鼻咽抽吸物标本内参基因Rnase P扩增曲线；
图5是本发明的定量线性范围分析；
图6是20例大便标本Saffold病毒荧光定量PCR扩增曲线；
图7是18份标本内参基因Rnase P扩增曲线。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本发明进行进一步详细说明，各实施例及试验例中所用的设备和试剂如无特殊说明，均可从商业途径得到。此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
本发明披露了一种Saffold病毒实时荧光PCR检测引物和探针、检测试剂盒、检测方法及应用。具体如下各实施例所示。
实施例1 Saffold病毒的实时荧光PCR试剂盒及检测方法
1、试剂盒的组成
本发明选取Saffold病毒1型和Saffold病毒2型VP1基因序列中的同时高度保守的区段设计出一对特异性引物和一条特异性的荧光探针，选用内标基因Rnase P设计一对特异性引物和一条特异性的荧光探针，构建实时荧光定量PCR技术可同时对Saffold病毒1型和Saffold病毒2型进行检测。VP1基因是Saffold病毒的抗原决定基因，能根据VP1序列确定种别，而其他技术一般是针对病毒5’UTR区域设计引物和探针，只能鉴定到属，不能确定病毒种别。本发明本实施例设计的引物及探针见下表1所示。
表1
试剂盒内还包括阳性对照，Saffold病毒标准品；阴性对照，RNase Free H2O；内标溶液，含Rnase P序列的病毒样颗粒溶液；5×PCR Buffer和Enzyme Mix。其中5×PCRBuffer和Enzyme Mix的配制方法如下：
5×PCR Buffer配制：
Figure BDA0002296506190000041
配置混合后于冰箱-20℃保存。
Enzyme Mix配制：
Figure BDA0002296506190000042
配置混合后于冰箱-20℃保存。
2、Saffold病毒的实时荧光PCR检测方法
(1)病毒核酸的提取
①首先在缓冲液1、2中加入无水乙醇，分别加入25ml和30ml无水乙醇；在漂洗液中加入30μg/ml carrier RNA；
②取30μl蛋白酶放入1.5ml离心管中；
③将标本(如脑脊液、全血等)取200μl加入此管中，加入5μl内标溶液，充分混匀；
④再在每管分别加入200μl漂洗液(含30μg/ml carrier RNA)，混匀振荡30s，70℃温育10min；
⑤加入250μl无水乙醇，充分混匀振荡30s，室温裂解5min；
⑥将上述裂解液加入离心柱中，8000rpm，离心1min，弃收集管中的离心液；滤柱仍放回收集管上，将步骤③剩余的混合液全部吸入滤柱中，离心后弃离心液；
⑦滤柱中加入500μl缓冲液1，12000rpm，离心1min，弃收集管中的离心液；
⑧另取一支干净的2ml收集管，将离心后的滤柱移到新的收集管上，于滤柱中加入500μl缓冲液2，12000rpm，离心1min。重复步骤⑧一次；
⑨将滤柱移到一个干净的收集管中，12000rpm，离心3min，后将滤柱放在37℃15min以干燥滤膜；
⑩将滤柱放在1.5ml Eppendorf管上，向滤柱中加入50μl RNase-free H2O，室温静置2min；12 000rpm，离心2min，收集离心液即为提取的核酸；
按上述方法提取15份疑似Saffold病毒感染病人疱疹液标本的核酸。
(2)实时荧光定量PCR扩增(每份25μl体系)
取5μl RNA作为模板，同时加入20μl PCR反应液(荧光定量PCR反应液的配制体系如表2所示)至八联管中进行荧光定量PCR扩增。
表2荧光定量PCR反应液的配制体系
Figure BDA0002296506190000051
(3)实时荧光定量PCR反应程序为：
40℃15min；95℃5min；94℃15sec、59℃45sec，45个循环。从60℃步骤开始收集荧光信号。本发明使用LightCycle 480II荧光定量PCR仪进行检测。
3、得到实时荧光定量PCR扩增结果，对扩增曲线进行分析，并作出判断。具体判断规则为：
当FAM荧光通道中Ct≤40时，判断样品为Saffold病毒阳性；
当FAM荧光通道中40<Ct≤45时，重复一次实验，如果Ct还是在此范围之内或小于38就判断样品为Saffold病毒阳性，否则判断样品为Saffold病毒阴性；
当FAM荧光通道中无扩增曲线时，且HEX通道中Ct≤45时，判断样品为Saffold病毒阴性；
当FAM荧光通道中无扩增曲线时，且HEX通道也无扩增曲线时，判断本次实验异常，需要重新提取标本RNA和重新扩增。
Saffold病毒标准品扩增曲线见图1；图2是Saffold病毒标准品浓度标准曲线，所述标准浓度曲线方程为：y＝-3.46x+44.35，其中x是浓度的log值，y是Ct值。
利用上述构建的检测体系检测急性呼吸道感染患儿鼻咽抽吸物标本50例，检测出Saffold病毒阳性5例；图3是这5例Saffold病毒阳性标本及45份阴性标本的病毒荧光定量PCR扩增曲线，根据这5例阳性结果的所述Ct值结合标准曲线方程，由Roche LightCycler480分析软件自动分析得到这5例Saffold病毒阳性标本的病毒浓度，具体结果见表5。同时，这50份标本的内参基因Rnase P扩增曲线正常，如图4所示，说明本次实验的提取和扩增过程正常，阳性和阴性结果准确。
表3 5例Saffold病毒阳性标本病毒浓度
样品编号 Ct值 Saffold病毒浓度(拷贝/mL)
阳性样品1 29.12 2.54×10<sup>4</sup>
阳性样品2 34.17 8.84×10<sup>2</sup>
阳性样品3 32.72 2.31×10<sup>3</sup>
阳性样品4 32.19 3.30×10<sup>3</sup>
阳性样品5 31.89 4.02×10<sup>3</sup>
实施例2 Saffold病毒的实时荧光PCR试剂盒的性能测定
1.准确性验证
病毒核酸检测的金标准是基因组测序，将此试剂盒的检测结果与病毒基因组测序做比较，分析其准确性。本实施例选取了基因组测序确定为Saffold病毒的40例标本，其中1型Saffold病毒20例，2型Saffold病毒20例，用本发明提供的试剂盒检测后结果如下表4。由结果可见，40份阳性标本全部被检出，表明本发明提供的Saffold病毒的实时荧光PCR的准确性为100％。
表4本发明的准确性分析
病毒型别 例数 测序阳性数 此方法阳性数 准确率
1型Saffold病毒 20 20 20 100％
1型Saffold病毒 20 20 20 100％
2.特异性验证
试剂盒的特异性是通过检测其他病原体来评估，本实施例选择了24种常见病原体阳性标本，结果如下表5。经检测，本发明对24种常见病原体阳性标本无扩增，表明本发明提供的Saffold病毒的实时荧光PCR的特异性为100％。
表5本发明的特异性分析
阳性病原体 是否有扩增 是否有扩增
腺病毒 无 埃可病毒11型 无
巨细胞病毒 无 脊髓灰质炎病毒 无
甲型流感病毒 无 人嗜T细胞病毒 无
乙型流感病毒 无 人疱疹病毒6型 无
乙型肝炎病毒 无 卡波西肉瘤病毒 无
丙型肝炎病毒 无 金黄色葡萄球菌 无
EB病毒 无 大肠杆菌 无
人单纯疱疹病毒1型 无 鲍曼不动杆菌 无
人单纯疱疹病毒2型 无 铜绿假单胞菌 无
HIV-1 无 白色念珠菌 无
EV71 无 耶氏肺孢子菌 无
CAV16 无 曲霉 无
3.灵敏度检测
灵敏度也即最低检测限，是指将阳性标本经过梯度稀释后，在最低稀释梯度的同一个标本上中测到靶核酸的可能性在统计学上概率>95％。用于灵敏度评估的样本在每个需评估的浓度水平检测次数应不少于20次，以至少19次出现阳性扩增信号为合格。在此，本发明将Saffold病毒的阳性标准品质粒按一定拷贝数倍比稀释后，每一个稀释度平均分为20个样本，用此发明的方法进行检测，出现19次及以上阳性的该拷贝数即为最低检测限，结果见表6。经验证，在2拷贝/ml浓度时，检出率为100％，低于此浓度时，检出率不足95％。由此可见，表明本发明提供的Saffold病毒的实时荧光PCR的灵敏度为2拷贝/mL。
表6本发明的灵敏度分析
Figure BDA0002296506190000081
4.精确性检测
精确性是指相同阳性样本多次检测，结果判读的一致性，以变异系数(CV)小于5判定为精确性良好。本发明在每个浓度梯度分3次检测了30份阳性标本，结果如下表7所示。经验证，在2～1×108拷贝/mL范围内，此发明的批内CV<5％，且批间CV<5％，精密度良好。
表7本发明的精确性分析
Figure BDA0002296506190000091
5.线性范围分析
本实施例分析了在1、2、5、10、20、50、1×102、1×103、1×104、1×105、1×106和1×107拷贝/ml范围内，本发明的线性范围，结果如图5所示，此发明提供的Saffold病毒的实时荧光定量PCR在2～1×107拷贝/ml范围内呈良好的线性范围。
实施例3临床检测
用上述方法对另外60例消化道感染患儿大便标本进行了检测，其中Saffold病毒病毒检测结果阳性7例，病毒荧光定量PCR扩增曲线见图6，根据这7例阳性结果的Ct值结合扩增曲线，由Roche LightCycler 480分析软件自动分析得到这7例Saffold病毒病毒阳性标本的病毒浓度，具体结果见表4。同时，这60例大便标本的内参基因Rnase P扩增曲线正常，如图7所示，说明本次实验的提取和扩增过程正常，阳性和阴性结果准确。
表4 5例Saffold病毒病毒阳性标本病毒浓度
样品编号 Ct值 Saffold病毒浓度(拷贝数/mL)
阳性样品1 36.05 2.53×10<sup>2</sup>
阳性样品2 27.19 9.18×10<sup>4</sup>
阳性样品3 36.03 2.56×10<sup>2</sup>
阳性样品4 33.66 1.24×10<sup>3</sup>
阳性样品5 35.32 4.09×10<sup>2</sup>
阳性样品6 30.51 1.00×10<sup>4</sup>
阳性样品7 26.88 1.12×105
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换和改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
序列表
<110> 广东龙帆生物科技有限公司
<120> 一种Saffold病毒实时荧光PCR检测引物和探针、检测试剂盒、检测方法及应用
<160> 6
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 28
<212> DNA
<213> 人工序列(Saffold-F)
<400> 1
gtgtgatttg gaggtcactc tgtccttg 28
<210> 2
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Saffold-R)
<400> 2
catcttaatg gaacctcaga ataat 25
<210> 3
<211> 33
<212> DNA
<213> 人工序列(Saffold- FAM)
<400> 3
cccatgtggc gcaccagtgg atttgtctga aca 33
<210> 4
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Rnase P-F)
<400> 4
agatttggac ctgcgagcg 19
<210> 5
<211> 20
<212> DNA
<213> 人工序列(Rnase P-R)
<400> 5
gagcggctgt ctccacaagt 20
<210> 6
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Rnase P-HEX)
<400> 6
ttctgacctg aaggctctgc gcg 23

Claims (7)

1.一种Saffold病毒实时荧光PCR检测引物和探针，包括Saffold病毒特异性引物及探针序列，见SEQ ID NO.1-3；内标基因Rnase P特异性引物及探针序列，见SEQ ID NO.4-6。
2.一种Saffold病毒实时荧光PCR检测试剂盒，包括如权利要求1所述的实时荧光PCR检测引物和探针。
3.根据权利要求2所述的一种Saffold病毒实时荧光PCR检测试剂盒，其特征在于，还包括：阳性对照品：Saffold病毒标准品；
内标溶液：含Rnase P序列的病毒样颗粒溶液；
阴性对照品：RNase Free H2O。
4.一种Saffold病毒实时荧光PCR检测方法，其特征在于，包括：以样品RNA为模板，配制扩增反应体系进行实时荧光PCR扩增得到扩增曲线，对所述扩增曲线进行分析，并作出判断；所述扩增反应体系包括权利要求1所述的Saffold病毒的实时荧光PCR检测引物对和探针。
5.根据权利要求4所述的一种Saffold病毒实时荧光PCR检测方法，其特征在于：所述扩增反应体系包括：样品模板、权利要求1所述的Saffold病毒的实时荧光PCR检测引物和探针、5×PCR Buffer和Enzyme Mix；扩增程序为：40℃15min；95℃5min；95℃15sec、59℃45sec，45个循环。
6.根据权利要求4所述的一种Saffold病毒实时荧光PCR检测方法，其特征在于，对扩增曲线进行分析判断原则为：
当FAM荧光通道中Ct≤40时，判断样品为Saffold病毒阳性；
当FAM荧光通道中40<Ct≤45时，重复一次实验，如果Ct还是在此范围之内或小于40就判断样品为Saffold病毒阳性，否则判断样品为Saffold病毒阴性；
当FAM荧光通道中无扩增曲线时，且HEX通道中Ct≤45时，判断样品为Saffold病毒阴性；
当FAM荧光通道中无扩增曲线时，且HEX通道也无扩增曲线时，判断本次实验异常，需要重新提取标本RNA和重新扩增。
7.如权利要求1所述的一种Saffold病毒实时荧光PCR检测引物和探针在制备用于检测Saffold病毒的试剂盒中的应用。
CN201911203799.3A 2019-11-29 2019-11-29 一种Saffold病毒实时荧光PCR检测引物和探针、检测试剂盒、检测方法及应用 Pending CN110819739A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201911203799.3A CN110819739A (zh) 2019-11-29 2019-11-29 一种Saffold病毒实时荧光PCR检测引物和探针、检测试剂盒、检测方法及应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201911203799.3A CN110819739A (zh) 2019-11-29 2019-11-29 一种Saffold病毒实时荧光PCR检测引物和探针、检测试剂盒、检测方法及应用

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN110819739A true CN110819739A (zh) 2020-02-21

Family

ID=69542406

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201911203799.3A Pending CN110819739A (zh) 2019-11-29 2019-11-29 一种Saffold病毒实时荧光PCR检测引物和探针、检测试剂盒、检测方法及应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN110819739A (zh)

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101633964A (zh) * 2009-08-04 2010-01-27 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所 一种甲型h1n1流感病毒rna检测试剂盒
CN103275862A (zh) * 2013-04-25 2013-09-04 浙江大学 一种检测甲型流感病毒h7n9亚型的荧光定量rt-pcr试剂盒
CN109609696A (zh) * 2018-12-29 2019-04-12 北京卓诚惠生生物科技股份有限公司 用于检测人乳头瘤病毒的核酸试剂、试剂盒、系统及方法
CN110408726A (zh) * 2019-07-23 2019-11-05 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 利用Taqman低密度微流体芯片技术检测29种呼吸道病原体的方法

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101633964A (zh) * 2009-08-04 2010-01-27 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所 一种甲型h1n1流感病毒rna检测试剂盒
CN103275862A (zh) * 2013-04-25 2013-09-04 浙江大学 一种检测甲型流感病毒h7n9亚型的荧光定量rt-pcr试剂盒
CN109609696A (zh) * 2018-12-29 2019-04-12 北京卓诚惠生生物科技股份有限公司 用于检测人乳头瘤病毒的核酸试剂、试剂盒、系统及方法
CN110408726A (zh) * 2019-07-23 2019-11-05 中国人民解放军军事科学院军事医学研究院 利用Taqman低密度微流体芯片技术检测29种呼吸道病原体的方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
王维等: "天津地区儿童急性呼吸道和消化道感染Saffold病毒的检出和临床流行特征", 《天津医药》 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN111057797B (zh) 新型冠状病毒2019-nCoV实时荧光定量PCR检测引物和探针、试剂盒和方法
CN111020064B (zh) 新型冠状病毒ORF1ab基因核酸检测试剂盒
WO2022095723A1 (zh) 用于检测SARS-CoV-2的试剂盒及方法
Monpoeho et al. Application of a real-time polymerase chain reaction with internal positive control for detection and quantification of enterovirus in cerebrospinal fluid
CN111500776A (zh) 新型冠状病毒2019-nCoV荧光RPA检测引物和探针、试剂盒和方法
CN108676920B (zh) 一种快速检测小鼠诺如病毒引物、试剂盒及其rt-rpa方法
CN110273027B (zh) 诺如病毒gⅰ、gⅱ和gⅳ型核酸分型检测试剂盒及检测方法
CN110760620A (zh) 一种猪瘟病毒与非洲猪瘟病毒双重荧光pcr检测试剂、试剂盒和检测方法
WO2022095731A1 (zh) 用于检测新型冠状病毒的试剂盒及方法
CN110699492A (zh) 一种永安河病毒实时荧光定量pcr检测引物和探针、检测试剂盒、检测方法及其应用
WO2023087868A1 (en) Compositions, kits, methods for detecting and identifying pathogens that cause respiratory tract infections and use thereof
CN112094944A (zh) 一种定量检测新型冠状病毒拷贝数的试剂盒
CN112176109A (zh) 一种甲型、乙型流感病毒核酸检测试剂盒及使用方法
CN111621602A (zh) 猪圆环病毒3型快速检测荧光定量pcr试剂盒及其应用
CN113046483A (zh) 新型冠状病毒实时荧光rt-raa引物、探针及检测试剂盒
CN110760618A (zh) 一种副肠孤病毒3型实时荧光定量pcr检测引物和探针、检测试剂盒、检验方法及其应用
LU500740B1 (en) REAL-TIME FLUORESCENT PCR DETECTION PRIMERS AND PROBES, KIT AND METHOD FOR NOVEL CORONAVIRUS 2019-nCoV
CN111593137A (zh) 非洲猪瘟病毒的荧光定量pcr检测试剂和试剂盒
CN109234465A (zh) 用于检测a型猪轮状病毒的引物及探针、荧光定量pcr试剂盒及方法和应用
CN110819739A (zh) 一种Saffold病毒实时荧光PCR检测引物和探针、检测试剂盒、检测方法及应用
CN111074006B (zh) Salivirus病毒的双通道实时荧光PCR检测引物对、探针、试剂盒、方法及应用
CN110684862B (zh) 用于定量检测乙型肝炎病毒的微滴数字pcr试剂盒及检测方法
CN111690774A (zh) 一种用于检测小鼠肝炎病毒的超快速实时荧光vpcr试剂盒和方法
CN111206117A (zh) 一种检测人类免疫缺陷病毒的试剂盒
CN114262758B (zh) 检测新型冠状病毒突变株的试剂盒及检测方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
RJ01 Rejection of invention patent application after publication

Application publication date: 20200221

RJ01 Rejection of invention patent application after publication