CN110810852A - 一种调节心血管功能的蚯蚓冻干粉的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种调节心血管功能的蚯蚓冻干粉的制备方法，属于保健品领域。先将蚯蚓自溶酶提取，沉淀物进行酶解，再水醇提取。本发明现将蚯蚓粉碎后在清水中自溶解，将能够溶解在水中的蛋白质提取至上清液中。再将沉淀物再次进行酶解和醇提，能够提高蚯蚓中蛋白质的提取含量，提取工艺简单，提取效率高。
Description
技术领域
本发明涉及保健品领域，具体涉及一种调节心血管功能的蚯蚓冻干粉的制备方法。
背景技术
血管性痴呆是指大脑功能衰退，特别是与智能有关的功能全面衰退的综合征，通常包括记忆力、认知力、情绪与行为异常等一系列的症状与体征，其中脑血管病变所致的脑组织供血不足是本病发生的根本原因；北京统计的患病率为1.37％,并有增长趋势。目前血管性痴呆疾病发病形势十分严峻，随着社会老龄化的到来，血管性痴呆患者日益增多，晚期往往导致生活完全不能自理,不仅给患者的正常生活造成了严重的影响，给家庭及社会带来沉重的负担；目前中西医缺少特效型的治疗药物，多限于使用脑神经营养药物或临床对症处理，疗程长,费用昂贵，达不到理想的治疗效果,同时尚未有单味中药治疗本疾病的药物。
蚯蚓又称地龙，体内营养十分丰富,蛋白质含量平均为50％,最高可达70％,且富含多种氨基酸、维生素、矿物质元素及微量元素,并含有对人体有益的酶类、糖类、肽类等多种活性成分如:溶栓酶、抗氧化酶、抗菌肽、溶血素等。具有抗血栓，抗肿瘤，调节免疫力，降压，镇痛消炎的作用。而当前血栓性疾病的发病率较高，而地龙中的蛋白能够抑制血管紧张素转化酶的活性，降低血压。而其中地龙蛋白中的氨基酸能够促进神经细胞更新，调节神经递质代谢，维护神经功能及抗脑组织缺氧的作用。苯丙氨酸能够降低心血管疾病的发病率，抵抗自由基。赖氨酸又可有效预防血栓，与蛋氨酸相互配合能够抑制高血压。精氨酸能够抑制血小板聚集，减少氧自由基损伤。饱和与不饱和脂肪酸能够调节血脂，降低胆固醇，预防动脉硬化、心血管疾病和大脑的机制。
蚯蚓提取物中大部分为大分子蛋白质和小分子氨基酸，其中小分子氨基酸主要亮氨酸、谷氨酸、天冬氨酸、缬氨酸、赖氨酸、精氨酸、丙氨酸、甘氨酸、丝氨酸、苏氨酸、蛋氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、组氨酸和酪氨酸等。而多肽更容易被人体吸收，对疾病的防御更好。现有大部分的蚯蚓蛋白提取物主要分为水提或纯提，提取含量不高，且纯度低，程序复杂。
发明内容
为了解决上述问题，本发明提出了一种提取效果好，多肽含量高、纯度高的调节心血管功能的蚯蚓冻干粉的制备方法。
为了实现上述目的，本发明是通过以下技术方案来实现的：
一种调节心血管功能的蚯蚓冻干粉的制备方法，包括以下步骤：
(1)将蚯蚓洗净置于清水中，放置浸泡12-24h吐沙；
(2)将蚯蚓粉碎制浆，加入去离子水后，高速匀浆，离心，取上清液A和沉淀物；
(3)在步骤(2)中的沉淀物再次加入去离子水后，再加入蛋白酶酶解反应，离心取上清液B；
(4)将上清液A和上清液B合并，再加入溶解剂后，再次离心取沉淀物，上弱阴离子交换树脂柱，用NaCl溶液洗脱，收集洗脱液，透析除盐，溶液冷冻干燥，即得。
进一步的，步骤(3)中所述蛋白酶为丝氨酸蛋白酶。
进一步的，步骤(3)中所述酶解反应的温度为35-40℃，酶解时间为1-2.5h。
进一步的，步骤(3)中蛋白酶的加入量为步骤(2)中沉淀物质量的5-10％。
进一步的，步骤(4)中所述的溶解剂为65-90％的乙醇。
进一步的，步骤(4)中所述的溶解剂为75％的乙醇。
本发明调节心血管功能的蚯蚓冻干粉的制备方法，其有益效果在于：
(1)本发明现将蚯蚓粉碎后在清水中自溶解，将能够溶解在水中的蛋白质提取至上清液中。再将沉淀物再次进行酶解和醇提，能够提高蚯蚓中蛋白质的提取含量。
(2)在酶解的过程中，加入丝氨酸蛋白酶，能够将大分子的蛋白质分解成小分子，提高蛋白粉中小分子氨基酸的含量，尤其是提高了苯丙氨酸、赖氨酸和丝氨酸的含量。能够使蛋白粉提高在心血管疾病方面的应用，降低心血管疾病的发病率，抵抗自由基、有效预防血栓，调节血脂，降低胆固醇，预防动脉硬化、心血管疾病和大脑的机制。
(3)在提取过程中采用65-90％的乙醇，尤其是75％的乙醇，能够促进氨基酸的溶出，提高蛋白质提取效果；防止蛋白质变质，提高蛋白质的利用率。
(4)本发明提取工艺简单，提取效率高。
具体实施方式
下面结合具体实施例来进一步详细说明本发明。
实施例1
一种调节心血管功能的蚯蚓冻干粉的制备方法，包括以下步骤：
(1)将蚯蚓洗净置于清水中，放置浸泡12h吐沙；
(2)将蚯蚓粉碎制浆，加入去离子水后，高速匀浆30Min，离心，取上清液A和沉淀物；
(3)在步骤(2)中的沉淀物再次加入去离子水后，再加入丝氨酸蛋白酶酶解反应，丝氨酸蛋白酶的加入量为沉淀物质量的5％；酶解反应的温度为40℃，酶解时间为1h离心取上清液B；
(4)将上清液A和上清液B合并，再加入75％的乙醇后，再次离心取沉淀物，上弱阴离子交换树脂柱，用NaCl溶液洗脱，收集洗脱液，透析除盐，溶液冷冻干燥，即得。
实施例2
一种调节心血管功能的蚯蚓冻干粉的制备方法，包括以下步骤：
(1)将蚯蚓洗净置于清水中，放置浸泡24h吐沙；
(2)将蚯蚓粉碎制浆，加入去离子水后，高速匀浆60Min，离心，取上清液A和沉淀物；
(3)在步骤(2)中的沉淀物再次加入去离子水后，再加入丝氨酸蛋白酶酶解反应，丝氨酸蛋白酶的加入量为沉淀物质量的10％；酶解反应的温度为35℃，酶解时间为1.5h离心取上清液B；
(4)将上清液A和上清液B合并，再加入65％的乙醇后，再次离心取沉淀物，上弱阴离子交换树脂柱，用NaCl溶液洗脱，收集洗脱液，透析除盐，溶液冷冻干燥，即得。
实施例3
一种调节心血管功能的蚯蚓冻干粉的制备方法，包括以下步骤：
(1)将蚯蚓洗净置于清水中，放置浸泡16h吐沙；
(2)将蚯蚓粉碎制浆，加入去离子水后，高速匀浆40Min，离心，取上清液A和沉淀物；
(3)在步骤(2)中的沉淀物再次加入去离子水后，再加入丝氨酸蛋白酶酶解反应，丝氨酸蛋白酶的加入量为沉淀物质量的8％；酶解反应的温度为37℃，酶解时间为2h离心取上清液B；
(4)将上清液A和上清液B合并，再加入90％的乙醇后，再次离心取沉淀物，上弱阴离子交换树脂柱，用NaCl溶液洗脱，收集洗脱液，透析除盐，溶液冷冻干燥，即得。
实施例4
一种调节心血管功能的蚯蚓冻干粉的制备方法，包括以下步骤：
(1)将蚯蚓洗净置于清水中，放置浸泡20h吐沙；
(2)将蚯蚓粉碎制浆，加入去离子水后，高速匀浆50Min，离心，取上清液A和沉淀物；
(3)在步骤(2)中的沉淀物再次加入去离子水后，再加入丝氨酸蛋白酶酶解反应，丝氨酸蛋白酶的加入量为沉淀物质量的6％；酶解反应的温度为38℃，酶解时间为2.5h离心取上清液B；
(4)将上清液A和上清液B合并，再加入80％的乙醇后，再次离心取沉淀物，上弱阴离子交换树脂柱，用NaCl溶液洗脱，收集洗脱液，透析除盐，溶液冷冻干燥，即得。
实施例5
一种调节心血管功能的蚯蚓冻干粉的制备方法，包括以下步骤：
(1)将蚯蚓洗净置于清水中，放置浸泡24h吐沙；
(2)将蚯蚓粉碎制浆，加入去离子水后，高速匀浆50Min，离心，取上清液A和沉淀物；
(3)在步骤(2)中的沉淀物再次加入去离子水后，再加入丝氨酸蛋白酶酶解反应，丝氨酸蛋白酶的加入量为沉淀物质量的8％；酶解反应的温度为37℃，酶解时间为2h离心取上清液B；
(4)将上清液A和上清液B合并，再加入85％的乙醇后，再次离心取沉淀物，上弱阴离子交换树脂柱，用NaCl溶液洗脱，收集洗脱液，透析除盐，溶液冷冻干燥，即得。
物质检测：
对蛋白冻干粉总氮含量及游离氨基酸含量的检测
参照GB5009-2010《食品中蛋白质的测定》规定的方法，采用凯氏定氮法，对蚯蚓小分子多肽提取物总氮含量进行分析。参照GB/T5009.124-2003《食品中氨基酸的测定》规定的方法，用磺基水酸溶液溶解样品并定容，样品溶液摇匀后过滤、离心，采用日立L-8900氨基酸分析仪测定上清液对蚯蚓小分子多肽提取物中种游离氨基酸进行分析。
经过凯氏定氮法测定，每100g冻干粉中，总氮的含量为14.8g，按照6.25的换算系数蛋白质的含量在92.5％。由此可见提取出的蛋白质冻干粉含量高，灰分含量少，纯度高。且游离态氨基酸的总含量为67.2％。每100g样品中含有丝氨酸1.79g、精氨酸2.41g、赖氨酸1.84g、苯丙氨酸3.29g。由此可以看出，本发明的提取方法中苯丙氨酸、赖氨酸、精氨酸和丝氨酸含量高，能够有效降低心血管疾病的发病率，抵抗自由基，预防血栓、动脉硬化、心血管疾病。
以上对本发明实施例所提供的技术方案进行了详细介绍，本文中应用了具体个例对本发明实施例的原理以及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明只适用于帮助理解本发明实施例的原理；同时，对于本领域的一般技术人员，依据本发明实施例，在具体实施方式以及应用范围上均会有改变之处，综上所述，本说明书内容不应理解为对本发明的限制。
Claims (6)
1.一种调节心血管功能的蚯蚓冻干粉的制备方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)将蚯蚓洗净置于清水中，放置浸泡12-24h吐沙；
(2)将蚯蚓粉碎制浆，加入去离子水后，高速匀浆，离心，取上清液A和沉淀物；
(3)在步骤(2)中的沉淀物再次加入去离子水后，再加入蛋白酶酶解反应，离心取上清液B；
(4)将上清液A和上清液B合并，再加入溶解剂后，再次离心取沉淀物，上弱阴离子交换树脂柱，用NaCl溶液洗脱，收集洗脱液，透析除盐，溶液冷冻干燥，即得。
2.根据权利要求1所述调节心血管功能的蚯蚓冻干粉的制备方法，其特征在于：步骤(3)中所述蛋白酶为丝氨酸蛋白酶。
3.根据权利要求1所述调节心血管功能的蚯蚓冻干粉的制备方法，其特征在于：步骤(3)中所述酶解反应的温度为35-40℃，酶解时间为1-2.5h。
4.根据权利要求1所述调节心血管功能的蚯蚓冻干粉的制备方法，其特征在于：步骤(3)中蛋白酶的加入量为步骤(2)中沉淀物质量的5-10％。
5.根据权利要求1所述调节心血管功能的蚯蚓冻干粉的制备方法，其特征在于：步骤(4)中所述的溶解剂为65-90％的乙醇。
6.根据权利要求1所述调节心血管功能的蚯蚓冻干粉的制备方法，其特征在于：步骤(4)中所述的溶解剂为75％的乙醇。
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