CN110794024A - 一种贝类血液生理指标的标准化测定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种贝类血液生理指标的标准化测定方法,通过用注射器收集贝类血液,并利用血气分析仪,对贝类的血液生理指标进行高效、快速、高通量、广指标的分析,测量每个样品只需大约3~5分钟。并且根据该方法,通过大量测量不同来源、不同品系、不同贝龄的扇贝从而提供一个扇贝的血液生理指标的标准参考值,可以为贝类生理健康状态的评估提供依据。本发明对贝类血液的血液生理指标进行快速检测,并通过各种指标来判断贝类的生长生活状态和生理活性,为快捷迅速高通量样品测量工作提供了一种可行的解决方案。
Description
技术领域
本发明涉及一种贝类血液生理指标的标准化测定方法,主要用于血液生理指标测量技术方面,属于海洋贝类养殖领域。
背景技术
贝类是我国重要的养殖物种,养殖规模大,经济价值高,在整个养殖产业中占有重要地位。贝类分布的环境广泛且多样,并且其生活史复杂,贝类的生长发育很容易受到外界环境的影响。近年来气候变暖、海洋酸化等全球性环境问题对贝类的生活现状造成了严重的影响。同时,贝类养殖过程中的养殖密度高和繁育种群小造成了种质的退化。一直以来贝类的养殖较为粗放,但始终缺乏一些高效科学的指标和方法对贝类进行综合评价。因此,开发一套行之有效的贝类血液生理评价指标是科研和产业上的迫切需求。
反映心血管机能的血液生理学指标是指示新陈代谢水平和机体机能状态的有效参数,但是由于缺乏适用的技术,贝类血液循环生理的研究迟迟无法开展,国外也仅对贻贝、腹足类等心率指标的生理节律变化开展研究,但对其它循环生理功能的研究尚不多见。
生物血液中钾(K+)钠(Na+)钙(Ca2+)氯(Cl-)等离子的含量能够直观的反应出贝类体内的电解质、酸碱平衡和渗透压平衡状态;氧分压(pO2)、二氧化碳分压(pCO2)能反映贝类的呼吸状态。然而目前这些指标大多采用试剂盒的方式进行测定,在样品数量庞大时,这种方法费时费力,效率低下,如果抽取样品数量少,则不具有代表性。在大规模养殖的条件下,利用血气分析技术可以对整个群体进行大量快速随机抽样分析,通过抽样分析能够准确的反映整个贝类群体的生活状态。目前该技术在贝类养殖领域中还没有涉及,所以本发明首次将血气分析技术应用在贝类养殖领域,并提供扇贝血液生理指标的标准参考值,为贝类生理状态的准确评价提供一种快速有效的评价方法。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是针对现有技术中存在的不足,而提供一种贝类血液生理指标的标准化测定方法,利用血气分析仪对贝类的血液生理指标进行高效、快速、高通量、广指标的分析,并且提供一个血液生理指标的标准参考值,可以为贝类生理状态的评估提供帮助。
为了实现上述目的,本发明采用如下技术方案:
首先,本发明提供一种贝类血液生理指标的标准化测定方法,包括以下步骤:
(1)设备调试:调试血气电解质分析仪使其处于正常工作状态;
(2)采集血样:取待测贝类样品,使贝类干燥60s从而刺激其开壳,待壳内海水流尽后,在贝类闭壳肌中央横切产生5mm长度的切口,迅速使用一次性注射器从切口处吸取贝类血液1ml置于离心管中,将装有血液的离心管置于冰上暂存;
(3)检测血液生理生化指标:贝类样品采集血液后利用血气电解质分析仪进行检测,所有的血液样品必须在取样后30分钟内完成检测。
上述技术方案中,步骤(2)中,所述的待测贝类样品,在采集血样之前,先在实验室内暂养5~7天使其适应实验室内的环境。
上述技术方案中,步骤(3)中,所述的血液样品完成检测后得到常见血液生理生化指标的检测结果,将检测结果输入excel中,利用SPSS软件进行离群数据分析,剔除离群数据后,得到贝类血气参数的有效数据;将有效数据与血气标准参考值进行比较,从而判断贝类的生长生活状态和生理活性;有效数据在血气标准参考值范围内,则说明所取扇贝生理状态正常,为健康扇贝。
上述技术方案中,步骤(3)中,优选利用SPSS 20软件进行离群数据分析,通过SPSS20软件的分析-描述统计-描述功能计算数据的标准分数,即z值,根据z值进行离群数据判定,将z值绝对值大于3的数据舍弃,最后得到的数据即为扇贝血气参数的有效数据;标准分数z用公式表示为:
z=(x-μ)/σ;其中x为某一具体分数,μ为平均数,σ为标准差。
其次,本发明提供一种贝类血液经过上述标准化测定方法测定得到检测结果后用来判断贝类的生长生活状态和生理活性时用到的血气标准参考值,当贝类为扇贝时,扇贝的血气标准参考值为:钾离子(K+)9.55-20.72mmol/L;钠离子(Na+)285.00-407.80mmol/L;钙离子(Ca2+)5.62-10.64mmol/L;氯离子(Cl-)415.76-477.14mmol/L;pH 7.00-7.31;二氧化碳分压(pCO2)2.10-8.20mmHg;氧分压(pO2)74.60-194.80mmHg;碳酸氢根(HCO3 -)1.00-2.80mmol/L;总钙(nCa2+)7.12-11.41mmol/L。
最后,本发明提供一种上述的扇贝的血气标准参考值的构建方法,包括以下步骤:
①扇贝暂养:将大量健康的、不同批次、不同品种、不同贝龄的扇贝在实验室内暂养5~7天使其适应实验室内的环境;
②设备调试:调试血气电解质分析仪使其处于正常工作状态;
③取血样:取待测扇贝,使扇贝干燥60s从而刺激其开壳,待壳内海水流尽后,在扇贝闭壳肌中央横切产生5mm长度的切口,使用一次性注射器从切口处吸取扇贝血液1ml置于离心管中,将装有血液的离心管置于冰上暂存;
④检测血液生理生化指标:一只扇贝取样完毕后利用血气电解质分析仪对血液进行检测,或者所有扇贝的血液取样完毕后再利用血气电解质分析仪对血液分别进行检测,必须保证所有样品在30分钟内完成检测;
⑤建立血气标准参考值:得到大量的健康扇贝的常见血液生理生化指标的检测结果后,将检测结果输入excel中,利用SPSS软件进行离群数据分析,剔除离群数据后,得到健康扇贝的常见血液生理生化指标的标准范围,建立了健康扇贝的血气标准参考值。
上述技术方案中,步骤⑤中,优选利用SPSS 20软件进行离群数据分析,通过SPSS20软件的分析-描述统计-描述功能计算数据的标准分数,即z值,根据z值进行离群数据判定,将z值绝对值大于3的数据舍弃,最后得到的数据即为扇贝血气参数的有效数据;标准分数z用公式表示为:
z=(x-μ)/σ;其中x为某一具体分数,μ为平均数,σ为标准差。
本发明对贝类血液的血液生理指标进行快速检测,并通过各种指标来判断贝类的生长生活状态和生理活性,为快捷迅速高通量样品测量工作提供了一种可行的解决方案。
具体实施方式
以下对本发明技术方案的具体实施方式详细描述,但本发明并不限于以下描述内容:
实施例1:
2019年7月从大连和青岛等地共取180只不同品种、不同贝龄、不同批次、健康的扇贝进行血液生理指标分析,通过大量测定,建立了健康扇贝的血气标准参考值,包括以下步骤:
①贝类暂养:将180只不同品种、不同贝龄、不同批次、健康的扇贝(如表1所示)在实验室内暂养7天使其适应实验室内的环境;
表1:贝类来源
②设备调试:调试PL2000血气电解质分析仪(南京普朗医疗),使其处于正常工作状态;
③取血样:取待测扇贝,使扇贝干燥60s从而刺激其开壳,待壳内海水流尽后,在贝类闭壳肌中央横切产生5mm长度的切口,使用一次性注射器从切口处吸取贝类血液1ml置于离心管中,将装有血液的离心管置于冰上暂存;
④检测血液生理生化指标:一只扇贝取样完毕后利用血气电解质分析仪对血液进行检测,或者所有扇贝的血液取样完毕后再利用血气电解质分析仪对血液分别进行检测,必须保证所有样品在30分钟内完成检测;点击血气分析仪屏幕上的测量按钮,待采样针伸出后,将盛有血样的离心管伸入采样针,使采样针入口浸没在血样中,使针口保持在距离心管底部约三分之一处;注意不能使采样针触及离心管底部,也要防止吸入其他杂质;
⑤建立血气标准参考值:得到大量的健康扇贝的常见血液生理生化指标的检测结果后,将检测结果输入excel中,利用SPSS 20的分析-描述统计-描述功能计算数据的标准分数,即z值,根据z值进行离群数据判定,将z值绝对值大于3的数据舍弃,最后得到的数据即为扇贝血气参数的有效数据;标准分数z用公式表示为:z=(x-μ)/σ;其中x为某一具体分数,μ为平均数,σ为标准差;剔除离群数据后,得到健康扇贝的常见血液生理生化指标的标准范围,建立了健康扇贝的血气标准参考值,如下所示:
当贝类为扇贝时,扇贝的血气标准参考值为:钾离子(K+)9.55-20.72mmol/L;钠离子(Na+)285.00-407.80mmol/L;钙离子(Ca2+)5.62-10.64mmol/L;氯离子(Cl-)415.76-477.14mmol/L;pH 7.00-7.31;二氧化碳分压(pCO2)2.10-8.20mmHg;氧分压(pO2)74.60-194.80mmHg;碳酸氢根(HCO3 -)1.00-2.80mmol/L;总钙(nCa2+)7.12-11.41mmol/L。
实施例2:
一种贝类血液生理指标的标准化测定方法,以取自山东青岛沙子口海域的蓬莱红2号栉孔扇贝为例,进行贝类血液生理指标标准化测定:
(1)将40只待测的健康的一龄扇贝和20只待测的健康的二龄扇贝在实验室内暂养7天使其适应实验室内的环境;
(2)调试PL2000血气电解质分析仪(南京普朗医疗),使其处于正常工作状态,检测仪器各指标正常,进行两点定标;
(3)取待测扇贝1只,使其干燥1分钟从而刺激其开壳,海水流尽后在闭壳肌中央横切产生大概5mm长度的切口,使用一次性注射器从切口处吸取贝类血液1ml置于2ml离心管中,将装有血液的离心管置于冰上暂存;
(4)1只扇贝取样完毕后,点击血气电解质分析仪屏幕上的测量按钮,待采样针伸出后,将盛有血样的离心管伸入采样针,使采样针入口浸没在血样中,使针口保持在距离心管底部约三分之一处,注意不能使采样针触及离心管底部,也要防止吸入其他杂质;在等待血气电解质分析仪进行该扇贝的血液生理指标的分析过程中进行下一只扇贝的取血工作;
(5)得到的一龄和二龄的扇贝的常见血液生理生化指标的检测结果后,将检测结果输入excel中,利用SPSS 20的分析-描述统计-描述功能计算数据的标准分数,即z值,根据z值进行离群数据判定,将z值绝对值大于3的数据舍弃,最后得到的数据即为扇贝血气参数的有效数据;标准分数z用公式表示为:z=(x-μ)/σ;其中x为某一具体分数,μ为平均数,σ为标准差;剔除离群数据后,得到一龄和二龄扇贝的血液生理生化指标如下:
一龄蓬莱红2号扇贝测量值:钾离子(K+)12.38-18.90mmol/L;钠离子(Na+)325.00-401.20mmol/L;钙离子(Ca2+)5.82-10.33mmol/L;氯离子(Cl-)443.30-470.70mmol/L;pH7.06-7.27;二氧化碳分压(pCO2)4.10-7.70mmHg;氧分压(pO2)91.60-194.80mmHg;碳酸氢根(HCO3 -)1.60-2.80mmol/L;总钙(nCa2+)7.50-11.41mmol/L。
二龄蓬莱红2号扇贝测量值:钾离子(K+)11.48-14.78mmol/L;钠离子(Na+)288.90-392.10mmol/L;钙离子(Ca2+)6.28-10.64mmol/L;氯离子(Cl-)453.20-474.70mmol/L;pH7.10-7.22;二氧化碳分压(pCO2)5.10-6.80mmHg;氧分压(pO2)97.20-135.50mmHg;碳酸氢根(HCO3 -)2.00-2.50mmol/L;总钙(nCa2+)7.83-11.31mmol/L。
所得指标均在实施例1得到的血气标准参考值范围内,说明所取扇贝生理状态正常,为健康扇贝。
根据血气电解质分析仪对血液进行检测后得到的血液生理生化检测结果,来判断贝类的生长生活状态和生理活性;血液生理生化检测结果在血气标准参考值内,说明贝类体内的电解质、酸碱和渗透压比较平衡和/或呼吸状态佳,贝类生理状态好;血液生理生化检测结果不在血气标准参考值内,说明贝类生理状态不好。本发明能够对贝类血液的血液生理指标进行快速检测,并通过各种指标来判断贝类的生长生活状态和生理活性,为快捷迅速高通量样品测量工作提供了一种可行的解决方案。
上述实例只是为说明本发明的技术构思以及技术特点,并不能以此限制本发明的保护范围。凡根据本发明的实质所做的等效变换或修饰,都应该涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (5)
1.一种贝类血液生理指标的标准化测定方法,其特征在于,包括以下步骤:
(1)设备调试:调试血气电解质分析仪使其处于正常工作状态;
(2)采集血样:取待测贝类样品,使贝类干燥60s从而刺激其开壳,待壳内海水流尽后,在贝类闭壳肌中央横切产生5mm长度的切口,迅速使用一次性注射器从切口处吸取贝类血液1ml置于离心管中,将装有血液的离心管置于冰上暂存;
(3)检测血液生理生化指标:贝类样品采集血液后利用血气电解质分析仪进行检测,所有的血液样品必须在取样后30分钟内完成检测。
2.根据权利要求1所述的标准化测定方法,其特征在于,步骤(2)中,所述的待测贝类样品,在采集血样之前,先在实验室内暂养5~7天使其适应实验室内的环境。
3.根据权利要求1所述的标准化测定方法,其特征在于,步骤(3)中,所述的血液样品完成检测后得到常见血液生理生化指标的检测结果,将检测结果输入excel中,利用SPSS软件进行离群数据分析,剔除离群数据后,得到贝类血气参数的有效数据;将有效数据与血气标准参考值进行比较,从而判断贝类的生长生活状态和生理活性;有效数据在血气标准参考值范围内,则说明所取扇贝生理状态正常,为健康扇贝。
4.一种贝类血液经过权利要求1-3任一项所述的标准化测定方法测定得到检测结果后用来判断贝类的生长生活状态和生理活性时用到的血气标准参考值,其特征在于,当贝类为扇贝时,扇贝的血气标准参考值为:钾离子(K+)9.55-20.72mmol/L;钠离子(Na+)285.00-407.80mmol/L;钙离子(Ca2+)5.62-10.64mmol/L;氯离子(Cl-)415.76-477.14mmol/L;pH7.00-7.31;二氧化碳分压(pCO2)2.10-8.20mmHg;氧分压(pO2)74.60-194.80mmHg;碳酸氢根(HCO3 -)1.00-2.80mmol/L;总钙(nCa2+)7.12-11.41mmol/L。
5.一种权利要求4所述的血气标准参考值的构建方法,其特征在于,包括以下步骤:
①扇贝暂养:将大量健康的、不同批次、不同品种的、不同贝龄的扇贝在实验室内暂养5~7天使其适应实验室内的环境;
②设备调试:调试血气电解质分析仪使其处于正常工作状态;
③取血样:取待测扇贝,使扇贝干燥60s从而刺激其开壳,待壳内海水流尽后,在扇贝闭壳肌中央横切产生5mm长度的切口,使用一次性注射器从切口处吸取扇贝血液1ml置于离心管中,将装有血液的离心管置于冰上暂存;
④检测血液生理生化指标:一只扇贝取样完毕后利用血气电解质分析仪对血液进行检测,或者所有扇贝的血液取样完毕后再利用血气电解质分析仪对血液分别进行检测,必须保证所有样品在30分钟内完成检测;
⑤建立血气标准参考值:得到大量的健康扇贝的常见血液生理生化指标的检测结果后,将检测结果输入excel中,利用SPSS软件进行离群数据分析,剔除离群数据后,得到健康扇贝的常见血液生理生化指标的标准范围,这个标准范围即健康扇贝的血气标准参考值。
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CN112136735A (zh) * | 2020-09-04 | 2020-12-29 | 中国科学院海洋研究所 | 一种提高牡蛎呼吸率稳定性的方法 |
CN112136735B (zh) * | 2020-09-04 | 2022-07-05 | 中国科学院海洋研究所 | 一种提高牡蛎呼吸率稳定性的方法 |
CN112175944A (zh) * | 2020-11-09 | 2021-01-05 | 江苏海洋大学 | 一种从贝类血液中提取贝类dna的方法 |
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CN110794024B (zh) | 2022-05-10 |
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