CN110724762B - 一种非洲猪瘟病毒的lamp检测引物及检测方法 - Google Patents

一种非洲猪瘟病毒的lamp检测引物及检测方法 Download PDF

Info

Publication number
CN110724762B
CN110724762B CN201911000492.3A CN201911000492A CN110724762B CN 110724762 B CN110724762 B CN 110724762B CN 201911000492 A CN201911000492 A CN 201911000492A CN 110724762 B CN110724762 B CN 110724762B
Authority
CN
China
Prior art keywords
lamp
primers
swine fever
african swine
fever virus
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN201911000492.3A
Other languages
English (en)
Other versions
CN110724762A (zh
Inventor
赵俊龙
张力
夏颖君
贺兰
方瑞
胡艳莉
赵鹏飞
王超飞
周艳琴
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Zhijiang Yihezhong Animal Husbandry Co ltd
Original Assignee
Huazhong Agricultural University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Huazhong Agricultural University filed Critical Huazhong Agricultural University
Priority to CN201911000492.3A priority Critical patent/CN110724762B/zh
Publication of CN110724762A publication Critical patent/CN110724762A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN110724762B publication Critical patent/CN110724762B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
    • C12Q1/701—Specific hybridization probes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6844—Nucleic acid amplification reactions

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一种非洲猪瘟病毒的LAMP特异性检测引物，包括一组外引物和一组内引物，所述外引物和内引物的核苷酸序列如SEQ ID NO：2‑5所示。本发明还公开一种非洲猪瘟病毒的LAMP非诊断目检测方法，该方法包括根据非洲猪瘟病毒的P30基因设计LAMP检测引物的步骤。本发明具有经济便捷、灵敏度高、结果易于分辨等特点，可用于非洲猪瘟的快速临床诊断，减少疾病的传播和蔓延，同时还能用于非洲猪瘟病毒的非诊断目的实验室筛查、鉴定，为病毒的基础研究提供了一种有力工具。

Description

一种非洲猪瘟病毒的LAMP检测引物及检测方法
技术领域
本发明属于病毒检测领域，具体涉及一种非洲猪瘟病毒的LAMP检测引物及检测方法。
背景技术
非洲猪瘟病毒(African Swine Fever Virus，ASFV)是一种双链DNA病毒、具有囊膜，是非洲猪瘟病毒属唯一成员。自1921年在肯尼亚首次发现到2018年8月传入我国，现今在全球继续蔓延，对我国及全世界的养猪业造成空前的损失。非洲猪瘟是一种急性烈性传染病，可感染所有日龄猪，临床表现为急性高热、厌食呕吐、全身脏器出血肿大，且病程短、死亡率可达100％。
目前ASFV没有针对性的疫苗及药物，主要利用对病猪的扑杀及严格的卫生制度来控制疾病的扩散。目前对于ASFV的检测通常使用普通PCR或荧光定量PCR：普通PCR实验较为繁琐，需要多个反应温度的转换、较长的时间；荧光定量PCR需要昂贵的实验仪器。并且这两种PCR都需要在实验室进行，场所也相对固定。在该病可以迅速发展为死亡和传染的情况下，基于现场的快速检测尤为重要。于是我们选择了实验器材简单、检测灵敏的LAMP检测方法，该方法操作简便、无需复杂仪器设备、可在恒温水浴锅完成反应，适用于临床操作。
发明内容
本发明目的是针对已有的非洲猪瘟病毒检测方法的缺陷，提供一种LAMP检测引物及检测方法，该方法具有检测快速、操作简便、成本低、灵敏度高、检测结果准确和检测周期短等优点。
本发明所采用的技术方案为：
一种非洲猪瘟病毒的LAMP检测引物，包括一组外引物和一组内引物，所述外引物和内引物的核苷酸序列如下：
外引物F3：5'-CAGTACTGTTAAGTATGATATTGTG-3'；(SEQ ID NO：2)
外引物B3：5'-GAGGGCTCTTGCTCAAAC-3'；(SEQ ID NO：3)
内引物FIP：5'-CAGCACATGCAGAATCATATTCCATCTGCTCATATATATGCAGGGC-3'；(SEQID NO：4)
内引物BIP：5'-GAAGAGGAGACAGAATCCTCAGCGGATGTGCATTCATTGGTTTC-3'。(SEQ IDNO：5)
一种非洲猪瘟病毒的LAMP非诊断目检测方法，包括以下步骤：
1)根据非洲猪瘟病毒的P30基因设计LAMP检测引物，包括一组外引物和一组内引物，所述外引物和内引物的核苷酸序列如下：
外引物F3：5'-CAGTACTGTTAAGTATGATATTGTG-3'；
外引物B3：5'-GAGGGCTCTTGCTCAAAC-3'；
内引物FIP：5'-CAGCACATGCAGAATCATATTCCATCTGCTCATATATATGCAGGGC-3'；
内引物BIP：5'-GAAGAGGAGACAGAATCCTCAGCGGATGTGCATTCATTGGTTTC-3'；
2)提取样品总DNA，利用步骤1)设计的引物进行LAMP扩增反应；
3)对扩增产物进行检测。
优选地，所述LAMP扩增反应的体系为：
Figure BDA0002241162370000021
优选地，所述LAMP扩增反应的程序为：DNA经95℃预变性5min，向预变性的DNA中加入上述除DNA以外的反应体系，再将其放置于63℃反应45min，然后于80℃作用10min后终止反应。
本发明根据所设计的一套特异引物成功建立了对非洲猪瘟病毒即时、特异、快速、灵敏而且便捷实用的LAMP分子检测方法，对比于现有的检测方法，本发明具有以下优点：
(1)经济便捷：恒温条件下反应，金属浴即可，无需昂贵的PCR仪。
(2)灵敏度高：经实验对比，Lamp比PCR灵敏度高一个数量级。
(3)结果易于分辨：运用SYBR GreenⅠ荧光染料30s即可分辨阴性阳性。
(4)本发明不仅可用于非洲猪瘟的快速临床诊断，减少疾病的传播和蔓延，同时还能用于非洲猪瘟病毒的非诊断目的实验室筛查、鉴定，为病毒的基础研究提供了一种有力工具。
附图说明
图1是检验8个不同基因LAMP扩增反应结果的比对，图中的泳道M为markerDL5000；1～8分别代表P30、UK、P15、P54、P72、K205R、F317L、P602L基因引物，从中挑选出P30基因引物，条带更清晰、阶梯状更明显。
图2是非洲猪瘟病毒P30的基因片段，下划线英文字母标注的序列为引物结合区域(F3，F2，F1，B1，B2，B3)。
图3是不同Mg2+浓度的ASFV-LAMP电泳图，图中的泳道M为marker DL 5000；1～6分别代表反应体系中的Mg2+终浓度为2、3、4、5、6和7mM。
图4是不同dNTPs浓度的ASFV-LAMP电泳图，图中的泳道M为marker DL 5000；泳道1～6分别代表反应体系中的dNTPs浓度为0.7、0.8、0.9、1.0、1.1、1.2mM。
图5是不同引物比例(外引物：内引物)的ASFV-LAMP电泳图，图中的泳道M为markerDL 5000；泳道1～6分别代表反应体系中的引物比例为1:4、1:5、1:6、1:7、1:8和1:9。
图6是不同LAMP恒温扩增时间的ASFV-LAMP电泳图，图中的泳道M为marker DL5000；泳道1～5分别代表在预变性后和终止反应前的体系扩增时间为30、40、45、50、60min。
图7是不同LAMP恒温扩增温度的ASFV-LAMP电泳图。图中的泳道M为marker DL5000；泳道1～6分别代表在预变性后和终止反应前的体系扩增温度为60、61、62、63、64和65℃。
图8是ASFV-LAMP灵敏性电泳实验结果，图中的泳道M为marker DL 5000；泳道1～5分别代表10-1、10-2、10-3、10-4、10-5倍比稀释的非洲猪瘟病毒DNA；6为阴性对照。
图9是ASFV-PCR灵敏性实验结果，图中的泳道M为marker DL 5000；泳道1～5分别代表10-1、10-2、10-3、10-4、10-5倍比稀释的非洲猪瘟病毒DNA；6为阴性对照。
图10是ASFV-LAMP电泳最终效果图，图中的泳道M为marker DL 5000；泳道1～2分别代表阳性和阴性对照。
具体实施方式
下面结合附图与实施例对本发明进行详细说明。
实施例1：非洲猪瘟病毒LAMP检测方法的建立及优化
1)引物的设计与筛选：
引物合成：根据NCBI上报道的非洲猪瘟病毒基因组，挑选其中8个基因设计引物，进行目的基因和引物的优化，最终筛选出P30基因序列(SEQ ID NO：1，图2)的特异性引物，所述引物对的DNA序列如下所示：
外引物F3：5'-CAGTACTGTTAAGTATGATATTGTG-3'；
外引物B3：5'-GAGGGCTCTTGCTCAAAC-3'；
内引物FIP：5'-CAGCACATGCAGAATCATATTCCATCTGCTCATATATATGCAGGGC-3'；
内引物BIP：5'-GAAGAGGAGACAGAATCCTCAGCGGATGTGCATTCATTGGTTTC-3'；
2)环介导的等温扩增：
采用DNA提取试剂盒提取非洲猪瘟病毒总DNA，-20℃保存，建立环介导的等温扩增反应体系：
Figure BDA0002241162370000041
Figure BDA0002241162370000051
其中阴性对照为健康猪DNA；
环介导的等温扩增反应：DNA经95℃预变性5min，向预变性的DNA中加入上述除DNA以外的反应体系，再将其放置于63℃反应45min，然后于80℃作用5min后终止反应；
3)扩增产物分析：采用显色反应或琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物；
显色反应：将1000倍体积的荧光显色剂SYBR GreenⅠ进行10倍稀释，之后取0.5μL加入至25μL的环介导等温扩增的最终产物中，在自然光下用肉眼观察扩增产物的显色情况；
琼脂糖凝胶电泳：取25μL的环介导等温扩增的最终反应产物10μL，加入至含有0.5μg/mL溴化乙锭染料的2％的琼脂糖凝胶中，于100V电压下电泳30min，在凝胶成相系统上成像观察扩增产物的图谱。
(1)下表1是挑选的8个非洲猪瘟病毒基因及其设计的引物信息，从图1的琼脂糖凝胶电泳检测检测结果可以看出，当采用P30基因及其引物，条带更清晰、阶梯状更明显。
表1非洲猪瘟病毒8种基因及其引物序列
Figure BDA0002241162370000052
Figure BDA0002241162370000061
(2)反应条件优化
从图3的Mg2+浓度优化结果可以得出，在25μL体系中，加入终浓度为3mM的Mg2+可以使得扩增效果更为理想。
从图4的dNTPs浓度优化结果可以得出，终浓度0.8mM的dNTPs更适合于该LAMP体系。
从图5的内外引物比例优化结果可以得出，当外引物与内引物的体积比为1：7时，条带效果最好。
从图6的反应时间优化结果可以得出，在预变性后选择45min的LAMP扩增时间较为合适，45min与60min扩增效果一样，故以45min更佳。
从图7的反应温度优化结果可以得出，在95℃预变性后选择63℃为LAMP扩增温度可获得更好的反应效果，条带更清晰、阶梯状更明显。
实施例2：非洲猪瘟病毒LAMP检测方法敏感性试验
将非洲猪瘟病毒DNA稀释至1μg/ml作为模板，检测非洲猪瘟病毒LAMP方法的敏感性。方法如下：
1.将1μg/ml的DNA用ddH2O分别稀释10-1，10-2，10-3，10-4，10-5倍为模板DNA进行LAMP扩增的结果。
2.LAMP敏感性实验：以F3、B3为外引物，FIP、BIP为内引物对已稀释好的病毒核酸进行扩增。稀释好的DNA分别取0.5μL，体系中其他试剂为
Figure BDA0002241162370000071
DNA经95℃预变性5min，向预变性的DNA中加入上述除DNA以外的反应体系中，再将其放置于63℃反应45min，然后于80℃作用10min后终止反应。
3.扩增产物分析：取25μL的环介导等温扩增的最终反应产物10μL，加入至含有0.5μg/mL溴化乙锭染料的2％的琼脂糖凝胶中，于100V电压下电泳30min，在凝胶成相系统上成像观察扩增产物的图谱。其结果如图8所示。
结果显示LAMP可以检测最低浓度为10-4ng/μL，而普通PCR只能检测到10-3ng/μL的DNA(图10)，说明LAMP扩增灵敏度相对普通PCR扩增具有更大的优势。
普通PCR引物对的DNA序列如下所示：
P30 F：5'-ATGAAAATGGAGGTCATCT-3'；
P30 R：5'-AAGTTTAATGACCATGAG-3'；
LAMP具有高的灵敏性和特异性，针对基因组特异性保守片段的6个区域，设计4种特异性引物，只有4种引物全部匹配才能出现扩增反应，几乎不可能出现非特异性扩增的情况。
本发明构建的方法，操作简单，成本低廉，只需要金属浴，不需要其他昂贵仪器就可以在1h内完成现场临床检测。LAMP扩增产物的判断有传统的琼脂糖凝胶电泳法和SYBRgreenⅠ绿色荧光染料染色等两种方法，本发明选择荧光染料检测方法，该方法的突出特点是不需要仪器、操作简便、肉眼即可判断结果，很适合与野外、现场及临床检测非洲猪瘟病毒。
序列表
<110> 华中农业大学
<120> 一种非洲猪瘟病毒的LAMP检测引物及检测方法
<160> 5
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 236
<212> DNA
<213> 非洲猪瘟病毒(African swine fever virus)
<400> 1
attgctcagt actgttaagt atgatattgt gaaatctgct catatatatg cagggcaagg 60
gtatactgaa catcaggctc aagaagaatg gaatatgatt ctgcatgtgc tgtttgaaga 120
ggagacagaa tcctcagcat catcggaaag cattcatgaa aaaaatgata atgaaaccaa 180
tgaatgcaca tcctcctttg aaacattgtt tgagcaagag ccctcatcag aggaac 236
<210> 2
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
cagtactgtt aagtatgata ttgtg 25
<210> 3
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
gagggctctt gctcaaac 18
<210> 4
<211> 46
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
cagcacatgc agaatcatat tccatctgct catatatatg cagggc 46
<210> 5
<211> 44
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
gaagaggaga cagaatcctc agcggatgtg cattcattgg tttc 44

Claims (4)

1.一种非洲猪瘟病毒的LAMP检测引物，其特征在于包括一组外引物和一组内引物，所述外引物和内引物的核苷酸序列如下：
外引物F3：5'-CAGTACTGTTAAGTATGATATTGTG-3'；
外引物B3：5'-GAGGGCTCTTGCTCAAAC-3'；
内引物FIP：5'-CAGCACATGCAGAATCATATTCCATCTGCTCATATATATGCAGGGC-3'；
内引物BIP：5'-GAAGAGGAGACAGAATCCTCAGCGGATGTGCATTCATTGGTTTC-3'。
2.一种非洲猪瘟病毒的LAMP非诊断目的检测方法，其特征在于包括以下步骤：
1)根据非洲猪瘟病毒的P30基因设计LAMP检测引物，包括一组外引物和一组内引物，所述外引物和内引物的核苷酸序列如下：
外引物F3：5'-CAGTACTGTTAAGTATGATATTGTG-3'；
外引物B3：5'-GAGGGCTCTTGCTCAAAC-3'；
内引物FIP：5'-CAGCACATGCAGAATCATATTCCATCTGCTCATATATATGCAGGGC-3'；
内引物BIP：5'-GAAGAGGAGACAGAATCCTCAGCGGATGTGCATTCATTGGTTTC-3'；
2)提取样品总DNA，利用步骤1)设计的引物进行LAMP扩增；
3)对扩增产物进行检测。
3.如权利要求2所述非洲猪瘟病毒的LAMP非诊断目的检测方法，其特征在于，所述LAMP扩增反应的体系为：
Figure FDA0003024984700000011
Figure FDA0003024984700000021
4.如权利要求3所述非洲猪瘟病毒的LAMP非诊断目的检测方法，其特征在于，所述LAMP扩增反应的程序为：DNA经95℃预变性5min，向预变性的DNA中加入上述除DNA以外的反应体系，再将其放置于63℃反应45min，然后于80℃作用10min后终止反应。
CN201911000492.3A 2019-10-21 2019-10-21 一种非洲猪瘟病毒的lamp检测引物及检测方法 Active CN110724762B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201911000492.3A CN110724762B (zh) 2019-10-21 2019-10-21 一种非洲猪瘟病毒的lamp检测引物及检测方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201911000492.3A CN110724762B (zh) 2019-10-21 2019-10-21 一种非洲猪瘟病毒的lamp检测引物及检测方法

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN110724762A CN110724762A (zh) 2020-01-24
CN110724762B true CN110724762B (zh) 2021-08-10

Family

ID=69220471

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201911000492.3A Active CN110724762B (zh) 2019-10-21 2019-10-21 一种非洲猪瘟病毒的lamp检测引物及检测方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN110724762B (zh)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111254220A (zh) * 2020-02-06 2020-06-09 成都导胜生物技术有限公司 一种用于检测非洲猪瘟病毒dna的组合物及试剂盒
CN113502352B (zh) * 2021-07-01 2022-02-01 华中农业大学 检测具有感染性ASFV的EMA-ddPCR引物、探针及应用
CN113604606A (zh) * 2021-07-12 2021-11-05 吉林大学重庆研究院 非洲猪瘟lamp检测引物组、试剂盒及检测方法

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ES2337113B1 (es) * 2007-04-17 2011-01-24 Centre De Recerca En Sanitat Animal (Cresa) Empleo de la hemaglutinina del virus de la peste porcina africana como adyuvante.
WO2014179751A1 (en) * 2013-05-02 2014-11-06 The Children's Hospital Of Philadelphia Compositions and methods for the treatment of human immunodeficiency virus infection
CN104745731B (zh) * 2015-04-21 2017-10-17 天津出入境检验检疫局动植物与食品检测中心 非洲猪瘟病毒、猪瘟病毒和猪繁殖与呼吸综合症病毒的三重荧光rt‑pcr检测试剂及其制备方法与用途
CN104745730A (zh) * 2015-04-21 2015-07-01 天津出入境检验检疫局动植物与食品检测中心 非洲猪瘟病毒cp204l基因的荧光pcr检测试剂及其制备方法与用途
CN105463135A (zh) * 2016-01-14 2016-04-06 四川农业大学 一种快速检测非洲猪瘟病毒环介导等温扩增的方法
CN105647971B (zh) * 2016-03-02 2020-05-19 青岛农业大学 一种非洲猪瘟p30蛋白重组杆状病毒表达载体及其制备方法
CN108441514A (zh) * 2018-03-28 2018-08-24 扬州大学 一种表达非洲猪瘟病毒cp204l基因重组腺病毒载体、构建方法及重组腺病毒制备方法
CN109628644A (zh) * 2019-01-15 2019-04-16 许昌佰柯蛋白与基因工程研究院有限公司 一种用于非洲猪瘟病毒lamp检测的引物组、试剂盒及应用
CN110283935A (zh) * 2019-05-28 2019-09-27 陕西诺威利华生物科技有限公司 一种非洲猪瘟病毒lamp检测试剂盒及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN110724762A (zh) 2020-01-24

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN110551846B (zh) 一种用于非洲猪瘟病毒核酸快速检测的Cpf1试剂盒及其检测方法
CN106947838B (zh) 非洲猪瘟病毒非结构基因实时荧光lamp检测引物组、试剂盒及检测方法
CN110724762B (zh) 一种非洲猪瘟病毒的lamp检测引物及检测方法
CN107299155A (zh) 一种鹅星状病毒实时荧光定量pcr检测的引物和探针
CN110777220B (zh) 一种引物组、探针、rpa试纸条试剂盒、鉴别方法
CN107475458B (zh) 鹅星状病毒环介导等温扩增检测引物组及试剂盒
CN106957927A (zh) 非洲猪瘟荧光pcr检测试剂、非洲猪瘟荧光pcr检测试剂盒及其应用
CN101358246A (zh) 用于检测猪瘟病毒的lamp试剂盒及其制备方法
CN101712973B (zh) 常温核酸扩增链替换反应试剂及常温核酸扩增方法
CN111304365A (zh) 新型小鹅痛风病毒的一步法环介导等温检测试剂及其应用
CN115044710A (zh) 一种检测穿山甲β冠状病毒的引物组、试剂盒和应用
CN103276099B (zh) 用于荧光定量pcr检测幽门螺杆菌的引物和试剂盒
CN111690777B (zh) 柑橘叶斑驳病毒rt-rpa检测的特异引物、试剂盒和方法
CN106987657B (zh) 用于鉴别牛病毒腹泻病毒和牛轮状病毒的引物组合及其应用
CN113136459A (zh) 用于检测ibrv病毒的lamp引物及其方法
CN110804677B (zh) 一种区分非洲猪瘟病毒野毒株与基因缺失株的巢式二重pcr检测引物及试剂盒
CN109371110B (zh) 一种杨树细菌性溃疡病菌的lamp检测试剂盒
CN116814857A (zh) 猫细小病毒及其试剂盒和荧光重组酶聚合酶扩增的方法
CN115725756A (zh) 一种用于检测梅毒螺旋体的rpa引物组、试剂、试剂盒及其应用
CN104017886A (zh) 一种桉树焦枯病原菌的巢式pcr检测试剂盒及其使用方法
CN111534634A (zh) 一种ⅱ型犬腺病毒的可视化等温扩增检测试剂及其应用
CN111440901B (zh) 一种鉴别猪急性腹泻综合征病毒和猪流行性腹泻病毒的pcr-hrm引物、方法及其应用
CN114480678B (zh) 基于CpG-InDel/STR标记的精液来源鉴定及个人识别试剂盒
CN107586888A (zh) 一种鸽ttv实时荧光定量pcr检测试剂盒
CN104046701A (zh) 一种兔病毒性出血症病毒rt-lamp检测方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
TR01 Transfer of patent right
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20230619

Address after: 443200 Group 3, Tanhuasi Village, Wen'an Town, Zhijiang City, Yichang City, Hubei Province

Patentee after: Zhijiang Yihezhong Animal Husbandry Co.,Ltd.

Address before: 430070 No. 1 Lion Rock street, Hongshan District, Hubei, Wuhan

Patentee before: HUAZHONG AGRICULTURAL University