CN103276099B - 用于荧光定量pcr检测幽门螺杆菌的引物和试剂盒 - Google Patents
用于荧光定量pcr检测幽门螺杆菌的引物和试剂盒 Download PDFInfo
- Publication number
- CN103276099B CN103276099B CN201310244798.XA CN201310244798A CN103276099B CN 103276099 B CN103276099 B CN 103276099B CN 201310244798 A CN201310244798 A CN 201310244798A CN 103276099 B CN103276099 B CN 103276099B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- primer
- helicobacter pylori
- pcr
- fluorescent
- detection
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 241000590002 Helicobacter pylori Species 0.000 title claims abstract description 31
- 229940037467 helicobacter pylori Drugs 0.000 title claims abstract description 31
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 21
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 title abstract 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims description 23
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 claims description 18
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 12
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 claims description 5
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 4
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 4
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 claims description 3
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 claims description 2
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 claims description 2
- 238000013016 damping Methods 0.000 claims description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims description 2
- 238000010791 quenching Methods 0.000 claims description 2
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 claims description 2
- 125000006853 reporter group Chemical group 0.000 claims description 2
- ABZLKHKQJHEPAX-UHFFFAOYSA-N tetramethylrhodamine Chemical compound C=12C=CC(N(C)C)=CC2=[O+]C2=CC(N(C)C)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C([O-])=O ABZLKHKQJHEPAX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 238000000034 method Methods 0.000 abstract description 22
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 14
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 10
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 9
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 8
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 8
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 6
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 230000004087 circulation Effects 0.000 description 4
- 238000013461 design Methods 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 4
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 4
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 3
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 3
- 206010019375 Helicobacter infections Diseases 0.000 description 2
- 108020000999 Viral RNA Proteins 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000002866 fluorescence resonance energy transfer Methods 0.000 description 2
- 238000009413 insulation Methods 0.000 description 2
- 238000012134 rapid urease test Methods 0.000 description 2
- 239000003161 ribonuclease inhibitor Substances 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 230000004568 DNA-binding Effects 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 108700020796 Oncogene Proteins 0.000 description 1
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 1
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 1
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 208000007107 Stomach Ulcer Diseases 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-NJFSPNSNSA-N UREA C 14 Chemical compound N[14C](N)=O XSQUKJJJFZCRTK-NJFSPNSNSA-N 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-OUBTZVSYSA-N Urea-13C Chemical compound N[13C](N)=O XSQUKJJJFZCRTK-OUBTZVSYSA-N 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 230000002183 duodenal effect Effects 0.000 description 1
- 208000000718 duodenal ulcer Diseases 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 1
- 201000006549 dyspepsia Diseases 0.000 description 1
- 238000000105 evaporative light scattering detection Methods 0.000 description 1
- 238000001215 fluorescent labelling Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 201000005917 gastric ulcer Diseases 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 238000002575 gastroscopy Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 210000000214 mouth Anatomy 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 238000001921 nucleic acid quantification Methods 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 238000011897 real-time detection Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 201000000498 stomach carcinoma Diseases 0.000 description 1
Abstract
本发明提供一种用于荧光定量PCR检测幽门螺杆菌的引物、试剂盒及方法，其中引物序列如SEQIDNo.1和SEQIDNo.2所示。利用该引物及检测方法可以快速、简单、特异且灵敏地检测幽门螺杆菌的存在。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种用于荧光定量PCR检测幽门螺杆菌的引物和试剂盒。
背景技术
幽门螺杆菌（Helicobacter pylori，简称Hp）是1983年由澳大利亚学者巴里·马歇尔（Barry J. Marshall）和罗宾·沃伦（J. Robin Warren）首次从胃粘膜组织中分离得到的一种革兰氏阴性杆菌，在胃粘膜上皮细胞表面常呈典型的螺旋状或弧形。当人体抵抗力下降时，幽门螺杆菌可通过口腔侵入胃和十二指肠粘膜上皮细胞而引起消化道疾病，如十二指肠溃疡、胃溃疡、消化不良、胃非霍奇金氏淋巴瘤甚至胃癌。幽门螺杆菌在人群中的感染率极高，已经成为世界学者广泛关注的问题。
对幽门螺杆菌感染进行准确诊断可以有利于控制它的传播与流行。目前检测幽门螺杆菌感染的方法分为侵入性和非侵入性两类。侵入性方法依赖胃镜活检，包括快速尿素酶试验（RUT）、胃粘膜直接涂片染色镜检、胃粘膜组织切片染色镜检、细菌培养等。这些方法具有足够的敏感性和特异性，但成本高，需要专业人员操作，还可能引起患者不适，不利于临床应用，更不适用于大批量检测。非侵入性方法可能依赖于血清学方法和尿素呼吸试验，包括粪便Hp抗原检测、血清和分泌物抗体检测、尿素13C/14C呼气试验等。非侵入性方法不需借助胃镜检查、患者依从性较好，因而具有临床实际意义。
荧光定量PCR，也称作实时PCR（Real Time PCR），是美国PE（Perkin Elmer）公司1995年研制出来的一种核酸定量技术。与常规PCR相比，荧光定量PCR技术不仅实现了PCR从定性到定量的飞跃，而且具有灵敏度高、特异性强、自动化程度高、操作安全方便等特点，已广泛应用于细菌、病毒等病原体检测、肿瘤基因检测、免疫分析、基因表达、突变及其多态性研究等多个领域。荧光定量PCR要用定量PCR仪，目前常见的仪器有ABI公司的7900HT系列，罗氏公司的Lightcycle系列，Robbett公司的RG系列。根据荧光化学原理不同可分为DNA结合染料（SYGB）、TaqMan探针技术等。
迄今为止还未见关于荧光定量PCR方法快速检测幽门螺杆菌的报道。
发明内容
本发明的目的在于解决现有技术的不足，提供一种荧光定量PCR技术检测幽门螺杆菌的方法，该方法可以快速、简单、特异且灵敏地检测幽门螺杆菌的存在。
为了实现上述目的，本发明根据Genebank中已知的幽门螺杆菌基因的cDNA序列（序列号NC_000915），利用基因Blast软件系统寻找到其在幽门螺杆菌中十分保守的DNA序列，并设计合成了本发明用于荧光定量PCR检测幽门螺杆菌的引物。
所述用于荧光定量PCR检测幽门螺杆菌的引物的核苷酸序列为：
正向引物：gccaggggggctgtggttgaattg（SEQ ID No.1），
反向引物：gctttttgctcaaagaatccaaga（SEQ ID No.2）。
与所述引物配合使用的探针核苷酸序列为gcctttttaatggcgtgttag （SEQ ID No.3），该探针的5’端标记荧光报告基团FAM，3’端标记荧光淬灭基团TAMRA。
本发明还提供含有上述引物和荧光探针的检测试剂盒。在一种实施方式中，所述试剂盒还包含：反转录酶，10×TaqMan 缓冲液，dNTP，TaqMan DNA聚合酶。
本发明进一步提供利用上述引物检测幽门螺杆菌的方法，包括提取待测样品mRNA，并以此合成cDNA；以样品cDNA为模板，利用本发明提供的引物和探针进行荧光定量PCR反应，根据扩增曲线判定结果。
在一种优选的实施方式中，本发明的荧光定量PCR扩增反应体系为：
在一种优选的实施方式中，本发明的荧光定量PCR反应程序为：94°C 2分钟；94°C 30秒，60°C 60秒，进行40个循环；72°C 10分钟，4°C保温。
与现有技术中幽门螺杆菌的检测方法相比，本发明的荧光定量PCR检测方法具有操作快速、简单，对环境友好，检测结果准确等优点。本发明在常规PCR基础上运用荧光能量传递（fluorescence resonance energy transfer，FRET）技术，加入荧光标记探针，巧妙地把核酸扩增、杂交、光谱分析和实时检测技术结合在一起，借助于荧光信号来检测PCR产物，可以在拿到病人样本后数个小时获得确诊结果，准确度和特异性可以达到99%以上。由于PCR每循环一次，荧光信号也和目的片段一样，有一个同步增长的过程，由此建立实时扩增曲线，准确地确定Threshold cycle (CT) 值，从而根据CT值确定起始DNA的拷贝数，做到真正意义上的DNA定量。另外由于CT值是一个完全客观的参数，CT值越小，模板DNA的起始拷贝数越小。因此，利用CT值确定DNA拷贝数实时PCR方法比普通终点定量方法更加准确。
附图说明
图1：本发明采用的TaqMan探针原理图；
图2：本发明利用荧光定量PCR检测幽门螺杆菌的基本原理图；
图3：本发明利用荧光定量PCR检测样品中幽门螺杆菌获得的扩增曲线；
图4：本发明利用荧光定量PCR检测样品中幽门螺杆菌获得的溶解曲线。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，本领域技术人员可以理解，以下实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件者，均为按照本领域内常规技术活条件或按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为普通市售产品。
试剂和仪器：
QIAamp Viral RNA Mini Kit、quivalent Extraction Kit、QIAGEN OneStep RT-PCR kit，QIAGEN公司；RNase inhibitor 20U/μl，ABI公司；实时定量PCR扩增仪（型号7600），ABI公司。
实施例1：引物和探针的设计与合成
根据Genebank中已知的幽门螺杆菌基因的cDNA序列（atggcgacacgaactcaagccaggggggctgtggttgaattgttgtatgcgtttgagagcggtaatgaagaaattaaaaaaatcgcttctagcatgttagaagaaaaaaagattaaaaacaaccaactcgctttcgctttaagcctttttaatggcgtgttagaaaaaatcaatgaaattgacgccctcatcgagccgcatttaaaagactgggatttcaagcgattagggagcatggaaaaggcgattttacgcttaggagcgtatgaaattggcttcacgcccacgcaaaaccctatcatcatcaatgaatgcatagagcttggcaaactctacgctgagcctaacacccctaaatttttaaacgctatcttggattctttgagcaaaaagctcactcaaaaacccttgaattga，SEQ ID No.5），设计合成引物及探针，包括：cDNA合成引物：Random 6 mers：tcaattcaagggtttttgagtgagc（SEQ ID No.4）；PCR反应引物：正向引物：gccaggggggctgtggttgaattg（SEQ ID No.1）；反向引物：gctttttgctcaaagaatccaaga（SEQ ID No.2）；TaqMan探针：FAM-gcctttttaatggcgtgttag-TAMRA（SEQ ID No.3）引物和探针的设计合成委托大连宝生物公司（TAKARA）完成。
实施例2：mRNA的提取
使用QIAamp Viral RNA Mini Kit或Equivalent Extraction Kit，按照说明书中的具体配方和试剂比例，从人唾液中提取mRNA，最终提取液60ul。在随后进行RT-PCR反应时，mRNA提取液一次最大使用量是11ul，剩余的mRNA于-80℃保存。
实施例3：cDNA的合成
逆转录反应体系：
逆转录反应条件：
使用QIAGEN OneStep RT-PCR kit和RNase inhibitor 20U/μl，50°C反应2小时，之后70°C孵育15分钟终止反应，生成的cDNA随即用于RT-PCR反应，或者置于-20°C保存备用。
另外说明的是，本实施例中同时使用了Random 6 mers和Oligo dT Primer，可有效地将全长mRNA反转录成cDNA。试剂都来自QIAGEN公司。使用单引物进行反转录时，使用量分别如下：Random 6 mers（100μM） 2.0μl（200 pmol）；Oligo dT Primer（50μM） 0.5 μl（25pmol）；Specific Primer（2μM） 0.5 μl（1pmol）。本实施例中反应体系为20μl，根据实际情况可按需求相应放大，10μl反应体系可最大使用1μg的Total RNA。
实施例4：荧光定量PCR反应
参照Applied Biosystems（ABI）公司的试剂说明书进行操作。
荧光定量PCR扩增反应体系：
荧光定量PCR反应程序：94°C 2分钟； 94°C 30秒，60°C 60秒，进行40个循环；72°C 10分钟，4°C 保温。
实施例5：幽门螺杆菌的检测与定量
本发明采用TaqMan荧光定量PCR方法检测幽门螺杆菌的存在，在反应体系中加入TaqMan荧光探针，实时监测荧光信号积累的整个PCR进程，最后通过已知浓度的幽门螺杆菌标准品制作的标准曲线对未知浓度的样品进行定量分析。基本原理如图2所示。
本发明对4个未知样品进行PCR扩增，每个样品重复1次，得到的扩增曲线如图3所示。其中1号样品的循环圈数（Ct值）为20，2号样品的Ct值为21，3号样品的Ct值为23.5，4号样品的Ct值为31。比对标准曲线，可以定量地获得四个样品对应的幽门螺杆菌数目分别为1*104个，1*103个，5个，0个。
同时，本发明通过每个样品的溶解曲线来判断反应的特异性。如上4个样品的溶解曲线如图4所示。溶解曲线呈明显的尖锐单峰，表明扩增非常特异。
SEQUENCE LISTING
<110> 深圳市安之酶生物技术有限公司
<120> 用于荧光定量PCR检测幽门螺杆菌的引物和试剂盒
<130> 案号是YL113-042
<160> 5
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 人工序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(24)
<223> 正向引物
<400> 1
gccagggggg ctgtggttga attg 24
<210> 2
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 人工序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(24)
<223> 反向引物
<400> 2
gctttttgct caaagaatcc aaga 24
<210> 3
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 人工序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<223> 探针
<400> 3
gcctttttaa tggcgtgtta g 21
<210> 4
<211> 25
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 人工序列
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(25)
<223> cDNA合成引物Random 6 mers
<400> 4
tcaattcaag ggtttttgag tgagc 25
<210> 5
<211> 417
<212> DNA
<213> Helicobacter pylori
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(417)
<223> 幽门螺杆菌基因cDNA序列
<400> 5
atggcgacac gaactcaagc caggggggct gtggttgaat tgttgtatgc gtttgagagc 60
ggtaatgaag aaattaaaaa aatcgcttct agcatgttag aagaaaaaaa gattaaaaac 120
aaccaactcg ctttcgcttt aagccttttt aatggcgtgt tagaaaaaat caatgaaatt 180
gacgccctca tcgagccgca tttaaaagac tgggatttca agcgattagg gagcatggaa 240
aaggcgattt tacgcttagg agcgtatgaa attggcttca cgcccacgca aaaccctatc 300
atcatcaatg aatgcataga gcttggcaaa ctctacgctg agcctaacac ccctaaattt 360
ttaaacgcta tcttggattc tttgagcaaa aagctcactc aaaaaccctt gaattga 417
Claims (4)
1.一种用于荧光定量PCR检测人唾液中幽门螺杆菌的引物，其特征在于，所述引物的核苷酸序列为：
正向引物：gccaggggggctgtggttgaattg，
反向引物：gctttttgctcaaagaatccaaga。
2.与权利要求1所述的引物配合使用的荧光探针，其特征在于，所述探针的核苷酸序列为gcctttttaatggcgtgttag，该探针的5’端标记荧光报告基团FAM，3’端标记荧光淬灭基团TAMRA。
3.一种用于荧光定量PCR检测人唾液中幽门螺杆菌的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包含权利要求1所述的引物和权利要求2所述的荧光探针。
4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包含反转录酶，10×TaqMan 缓冲液，dNTP，TaqMan DNA聚合酶。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310244798.XA CN103276099B (zh) | 2013-06-19 | 2013-06-19 | 用于荧光定量pcr检测幽门螺杆菌的引物和试剂盒 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201310244798.XA CN103276099B (zh) | 2013-06-19 | 2013-06-19 | 用于荧光定量pcr检测幽门螺杆菌的引物和试剂盒 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN103276099A CN103276099A (zh) | 2013-09-04 |
| CN103276099B true CN103276099B (zh) | 2014-10-29 |
Family
ID=49058714
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201310244798.XA Active CN103276099B (zh) | 2013-06-19 | 2013-06-19 | 用于荧光定量pcr检测幽门螺杆菌的引物和试剂盒 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN103276099B (zh) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN105063191A (zh) * | 2015-07-31 | 2015-11-18 | 苏州百源基因技术有限公司 | 一组用于口腔中幽门螺杆菌的实时荧光定量pcr检测的特异性引物和探针 |
| CN106811515A (zh) * | 2015-12-01 | 2017-06-09 | 杭州致远医学检验所有限公司 | 一种鉴别杂菌中幽门螺杆菌的分子检测方法 |
| CN106086213B (zh) * | 2016-08-09 | 2020-02-25 | 新乡学院 | 口腔中幽门螺杆菌pcr检测方法 |
| CN107557436A (zh) * | 2017-10-09 | 2018-01-09 | 重庆博利达医学科技有限公司 | 一种用于检测幽门螺杆菌的核酸组合及其应用和试剂盒 |
| CN113652494A (zh) * | 2021-09-30 | 2021-11-16 | 山西康健恩生物科技有限公司 | 一种检测幽门螺杆菌的探针、引物组和试剂盒 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101608210A (zh) * | 2008-06-18 | 2009-12-23 | 中山大学达安基因股份有限公司 | 幽门螺旋杆菌核酸定量检测试剂盒 |
-
2013
- 2013-06-19 CN CN201310244798.XA patent/CN103276099B/zh active Active
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101608210A (zh) * | 2008-06-18 | 2009-12-23 | 中山大学达安基因股份有限公司 | 幽门螺旋杆菌核酸定量检测试剂盒 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 《TaqManMGB探针实时荧光定量PCR法检测幽门螺杆菌》;高正琴等;《临床检验杂志》;20120731;第30卷(第7期);全文 * |
| 刘静秋等.《食品中幽门螺杆菌荧光PCR快速检测方法的建立及评价》.《吉林大学学报(医学版)》.2011,第37卷(第1期),摘要,材料与方法部分. * |
| 高正琴等.《TaqManMGB探针实时荧光定量PCR法检测幽门螺杆菌》.《临床检验杂志》.2012,第30卷(第7期),全文. |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN103276099A (zh) | 2013-09-04 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN110551846B (zh) | 一种用于非洲猪瘟病毒核酸快速检测的Cpf1试剂盒及其检测方法 | |
| EP3087202B1 (en) | Nucleic acid detection method and kit | |
| CN107299155A (zh) | 一种鹅星状病毒实时荧光定量pcr检测的引物和探针 | |
| CN103276099B (zh) | 用于荧光定量pcr检测幽门螺杆菌的引物和试剂盒 | |
| US8936909B2 (en) | Method for determining the origin of a sample | |
| CN106868204A (zh) | 一种用于胃腺癌诊断的生物标志物 | |
| WO2017026606A1 (ko) | 결핵 진단용 바이오마커 마이크로 rna | |
| CN111778344A (zh) | Rpa-lfd可视化快速检测血吸虫核酸的引物、探针、试剂盒及方法 | |
| CN105018485A (zh) | 一种应用rpa技术检测小反刍兽疫病毒的引物和探针 | |
| CN110317861A (zh) | 一种检测病原体的试剂盒 | |
| CN107574262A (zh) | 一种用于检测甲型h1n1病毒的荧光rt‑raa引物、探针及检测方法 | |
| ITVT20110002A1 (it) | Metodo di determinazione dell'origine di fluidi o tracce biologiche e kit di reagenti per la loro identificazione in un campione. | |
| CN112239779A (zh) | 一种卵形鲳鲹性别快速鉴定引物、试剂盒及其应用 | |
| CN104561375A (zh) | 一种新布尼亚病毒的恒温扩增检测试剂盒及检测方法 | |
| CN115747361B (zh) | 检测海豚链球菌的实时荧光mira和mira-lfd引物组及检测方法 | |
| CN111826446A (zh) | 用于膀胱癌早期筛查与辅助诊断的引物、探针和试剂盒 | |
| KR20190037027A (ko) | 중증 열성 혈소판 감소 증후군 바이러스 검출용 프라이머 세트 및 검출방법 | |
| CN106916903A (zh) | 结核分枝杆菌85B mRNA的实时荧光RT‑PCR检测方法及试剂盒 | |
| CN116356079A (zh) | 一种基于RPA-CRISPR-Cas12a可视化检测盖塔病毒试剂盒及应用 | |
| CN108611442B (zh) | 一种检测猪非典型瘟病毒的荧光定量rt-pcr引物和探针及方法与应用 | |
| CN114134218B (zh) | 一种基于CRISPR-Cas12a的荧光检测方法 | |
| CN116042879A (zh) | 一种用于检测布鲁氏杆菌野生菌株和疫苗株的试剂盒与检测方法 | |
| CN105400908B (zh) | 一种利用焦磷酸测序技术检测斑点叉尾鮰病毒的引物、试剂盒和检测方法 | |
| CN106521038A (zh) | 一种高灵敏度的bhv‑2实时荧光定量pcr检测方法及试剂盒 | |
| CN107988429B (zh) | 一种检测狂犬病毒的试剂及其应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C53 | Correction of patent for invention or patent application | ||
| CB03 | Change of inventor or designer information |
Inventor after: Hou Zhibo Inventor after: Yuan Jing Inventor after: Zhao Yong Inventor after: Pan Xiaohua Inventor after: Tang Tao Inventor after: Li Chunman Inventor after: Lu Jiahong Inventor after: Chen Cheng Inventor before: Hou Zhibo Inventor before: Pan Xiaohua Inventor before: Yuan Jing Inventor before: Lu Wei Inventor before: Zhang Ge Inventor before: Zhao Yong Inventor before: Zou Weiguo Inventor before: Xu Jiake |
|
| COR | Change of bibliographic data |
Free format text: CORRECT: INVENTOR; FROM: HOU ZHIBO PAN XIAOHUA YUAN JING LU WEI ZHANG GE ZHAO YONG ZOU WEIGUO XU JIAKE TO: HOU ZHIBO YUAN JING ZHAO YONG PAN XIAOHUA TANG TAO LI CHUNMAN LU JIAHONG CHEN CHENG |
|
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20180927 Address after: 518000 No. 1301 Sightseeing Road, Guanlan Street, Longhua New District, Shenzhen City, Guangdong Province Patentee after: SHENZHEN HONGMEI BIOPHARMACEUTICAL TECHNOLOGY Co.,Ltd. Address before: Room 210A, 2nd Floor, No. 2 Huaying Science and Technology Industrial Park, No. 16 Jinniu West Road, Pingshan New District, Shenzhen City, Guangdong Province Patentee before: Shenzhen Enzyme Biological Technology Co., Ltd. |
|
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| TR01 | Transfer of patent right | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20191024 Address after: 518000 Guangdong province Shenzhen City Dapeng new Kwai Street Jinling Road No. 1 International Bio Valley Life Science Park A22 building 3, 4 floor Patentee after: Shenzhen Hongmei Diagnostic Technology Co., Ltd. Address before: Longhua District Guanlan Street sightseeing road 518000 Guangdong city of Shenzhen province No. 1301 Silver Star Hi tech Industrial Park C District 10 floor, No. 1002 Patentee before: SHENZHEN HONGMEI BIOPHARMACEUTICAL TECHNOLOGY Co.,Ltd. |