CN110709496A - 含有高度不饱和脂肪酸的组合物的制造方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一边抑制银盐溶液的劣化，一边制造高度不饱和脂肪酸的方法。含有高度不饱和脂肪酸的组合物的制造方法，所述方法包括：向流路型搅拌机中投入含有高度不饱和脂肪酸的烷基酯的原料液和含有银盐的水溶液而使它们接触；和回收与该原料液接触的含有该银盐的水溶液，其中，同时进行含有该银盐的水溶液向该流路型搅拌机中的投入和该回收。

Description

含有高度不饱和脂肪酸的组合物的制造方法

技术领域

本发明涉及含有高度不饱和脂肪酸的组合物的制造方法、和抑制该制造方法所使用的银盐溶液的劣化。

背景技术

近年来，关于二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳六烯酸(DHA)、二十二碳五烯酸(DPA)等高度不饱和脂肪酸(polyunsaturated fatty acid，PUFA)，其药理效果逐渐明确，被广泛用作药品或保健食品的原料。由于不容易通过化学合成得到PUFA，所以现状是，工业利用的PUFA大多数通过从富含PUFA的来源于海洋生物的原料、例如鱼油等提取或纯化来制造。但是，由于来源于生物的原料是碳数、双键的数量或位置、以及立体异构体的构成比等不同的多种脂肪酸的混合物，所以PUFA的含量未必高。因此，以往需要从来源于生物的原料选择性地纯化作为目标的PUFA。

在专利文献1~7中，记载了使含有PUFA的原料与含有银盐的水溶液接触而生成PUFA与银的络合物，在洗脱(溶出，elute)至水相中后，使用有机溶剂从该水相中提取高度不饱和脂肪酸的方法。在专利文献1~7所记载的方法中，在大量的银盐水溶液中投入含有PUFA的原料，并适当地将其搅拌，从而增加该水溶液与含有PUFA的原料的接触，促进PUFA与银的络合物的生成。但是，由于上述以往的方法为了得到大量的PUFA而需要大规模设备，而且每次提取PUFA时，必须回收与原料接触的批量的银盐水溶液，所以在工业上不是有效的方法。另外，在上述以往的方法中，由于银盐水溶液与氧的接触机会多，所以银盐水溶液的劣化容易进展。此外，原料中含有的过氧化物也会成为银盐水溶液劣化的原因(专利文献7)。劣化的银盐水溶液可通过在回收后再生为银，进而再加工为银盐而再次使用。但是，由于银的再生费用和加工为银盐的加工费用高昂，所以大量的银盐水溶液的使用及其劣化会使PUFA的制造成本增加。

现有技术文献

专利文献

专利文献1：日本专利第3001954号公报；

专利文献2：日本专利第2786748号公报；

专利文献3：日本专利第2935555号公报；

专利文献4：日本专利第2895258号公报；

专利文献5：日本特开2015-091940号公报；

专利文献6：国际公开公报第2014/054435号；

专利文献7：国际公开公报第2016/194360号。

发明内容

发明所要解决的课题

本发明涉及提供可更有效且低成本地制造PUFA，并且可抑制制造PUFA所使用的银盐溶液的劣化的方法。

用于解决课题的手段

本发明人发现以下方法：在使用银盐溶液的PUFA的制造中，使用流路型搅拌机作为用于使该银盐溶液与原料油脂接触的反应槽，通过同时进行该银盐溶液向反应槽中的投入和与原料油脂接触的该银盐溶液的回收，从而连续地实施PUFA与银的络合物的生成和含有该络合物的水相的回收。此外，本发明人发现：根据该方法，可抑制PUFA的制造过程中的银盐溶液的劣化。

因此，本发明提供以下发明。

[1] 含有高度不饱和脂肪酸的组合物的制造方法，

所述方法包括：

向流路型搅拌机中投入含有高度不饱和脂肪酸的烷基酯的原料液和含有银盐的水溶液(水性溶液，aqueous solution)而使它们接触；和

回收与该原料液接触的含有该银盐的水溶液，

其中，同时进行含有该银盐的水溶液向该流路型搅拌机中的投入和该回收。

[2] [1]所述的方法，

所述方法进一步包括：

向提取槽中投入由所述流路型搅拌机回收的含有银盐的水溶液和有机溶剂而使它们接触；和

回收与含有该银盐的水溶液接触的该有机溶剂，

其中，同时进行含有该银盐的水溶液向该提取槽中的投入和该有机溶剂的回收。

[3] [1]或[2]所述的方法，其中，与所述原料液接触的含有银盐的水溶液的回收包括：由该流路型搅拌机回收含有所述银盐的水溶液与所述原料液的混合液，接着，从回收的该混合液中分取含有该银盐的水溶液。

[4] [2]或[3]所述的方法，其中，与含有所述银盐的水溶液接触的有机溶剂的回收包括：由该提取槽回收含有所述银盐的水溶液与所述有机溶剂的混合液，接着，从回收的该混合液中分取该有机溶剂。

[5] [1]~[4]中任一项所述的方法，其中，所述方法进一步包括：再次向流路型搅拌机中投入由所述流路型搅拌机回收后的所述原料液。

[6] [1]~[5]中任一项所述的方法，其中，含有所述银盐的水溶液向所述流路型搅拌机中的投入、与所述原料液的接触、和由该流路型搅拌机的回收在低氧条件下进行。

[7] [1]~[6]中任一项所述的方法，其中，所述流路型搅拌机中的含有所述银盐的水溶液的线速度为0.5cm/秒以上。

[8] [1]~[7]中任一项所述的方法，其中，所述流路型搅拌机的内径为0.1~100cm，长度为0.05~10m。

[9] [1]~[8]中任一项所述的方法，其中，所述流路型搅拌机中的含有所述银盐的水溶液的滞留时间为0.02~300秒。

[10] [1]~[9]中任一项所述的方法，其中，与所述原料液接触时的含有所述银盐的水溶液的温度为5~30℃。

[11] [2]~[10]中任一项所述的方法，其中，所述提取槽为流路型搅拌机。

[12] [11]所述的方法，其中，所述提取槽中的含有所述银盐的水溶液的线速度为0.5cm/秒以上。

[13] [11]或[12]所述的方法，其中，所述提取槽的内径为0.1~100cm，长度为0.05~10m。

[14] [11]~[13]中任一项所述的方法，其中，所述提取槽中的含有所述银盐的水溶液的滞留时间为0.02~300秒。

[15] [2]~[14]中任一项所述的方法，其中，与所述有机溶剂接触时的含有所述银盐的水溶液的温度为30~80℃。

[16] [1]~[15]中任一项所述的方法，其中，所述含有高度不饱和脂肪酸的烷基酯的原料液的氧化指标为POV 10以下或AV 0.3以下。

[17] [1]~[16]中任一项所述的方法，其中，所述高度不饱和脂肪酸含有二十碳五烯酸或二十二碳六烯酸。

发明效果

在本发明的含有PUFA的组合物的制造方法中，同时连续地进行原料油脂与银盐溶液的接触、以及与原料油脂反应后的银盐溶液的回收。在本发明的方法中，不同于现有的利用批量式的PUFA的制造方法，在回收PUFA时不需要回收银盐溶液的操作。此外，根据本发明的方法，不仅可削减银盐溶液的使用量，而且可抑制该银盐溶液的劣化。因此，根据本发明，可实现PUFA制造所需要的设备的小规模化和成本的削减。

附图说明

[图1]是将流路型搅拌机用于反应槽和提取槽的含有PUFA的组合物的制造用装置的示意图。

[图2]是由于银盐溶液的重复使用而导致的游离脂肪酸含量的经时变化。

[图3]是利用逆流的连续式下的由于银盐溶液的重复使用而导致的游离脂肪酸含量的经时变化。

具体实施方式

本发明的含有高度不饱和脂肪酸的组合物的制造方法包括：

向反应槽中投入含有高度不饱和脂肪酸的烷基酯的原料液和含有银盐的水溶液而使它们接触；和

回收与该原料液接触的含有该银盐的水溶液。

在该方法中，同时进行含有该银盐的水溶液向该反应槽中的投入和该回收。

在本说明书中，高度不饱和脂肪酸(PUFA)是指具有2个以上的不饱和键的脂肪酸。作为PUFA的实例，可列举出亚油酸(LA，18：2n-6)、γ-亚麻酸(GLA，18：3n-6)、花生四烯酸(AA，20：4n-6)、α-亚麻酸(ALA，18：3n-3)、二十碳四烯酸(ETA，20：4n-3)、二十二碳五烯酸(DPA，22：5n-3)、二十碳五烯酸(EPA，20：5n-3)、二十二碳六烯酸(DHA，22：6n-3)等。在本发明的含有PUFA的组合物的制造方法中，所制造的组合物中应含有的PUFA优选为选自EPA、DHA和DPA的至少1种，更优选为选自EPA和DHA的至少1种，进一步优选为EPA。

在本发明的方法中，利用PUFA向银盐溶液的溶解性因银盐在PUFA的双键部形成络合物而改变，分离纯化PUFA烷基酯。在该本发明的方法中，可有效地分离纯化具有5个以上的不饱和键的EPA、DHA和DPA的烷基酯以及AA、ETA等不饱和键为4个以下的脂肪酸烷基酯。

作为本发明中使用的含有PUFA的组合物的原料，主要为来源于天然物的油脂混合物，可列举出含有上述PUFA的原料。作为如上所述的原料的实例，可列举出来源于鱼类等海产动物或浮游生物的油脂、来源于藻类等微生物的油脂等，其中优选来源于沙丁鱼(イワシ，sardine)、黄尾鱼(ハマチ，yellowtail)等鱼类的油脂和来源于藻类的油脂。

优选本发明中使用的含有PUFA的组合物的原料为相对于所含有的脂肪酸的总量含有15质量%以上、更优选40质量%以上的目标PUFA (优选为选自EPA、DHA和DPA的至少1种，更优选为选自EPA和DHA的至少1种，进一步优选为EPA)的油脂。该原料优选为EPA、DHA和DPA的总含量尽可能高的原料。从成本或获取容易度的观点出发，在所含有的全部脂肪酸中，该原料的EPA、DHA和DPA的总含量只要优选为65质量%以下、更优选为60质量%以下、进一步优选为55质量%以下即可。该原料中的PUFA能够以游离脂肪酸的形态存在，或能够以甘油单酯、甘油二酯或甘油三酯等脂肪酸链的形态存在。

在本发明的方法中，将该原料中的PUFA被烷基酯化。优选该原料含有目标PUFA(优选为选自EPA、DHA和DPA的至少1种，更优选为选自EPA和DHA的至少1种，进一步优选为EPA)的烷基酯。作为构成该PUFA的烷基酯的烷基，可列举出碳数为1~6的直链状或支链状的烷基，优选为甲基或乙基，更优选为乙基。烷基酯化的程度越高越适宜，在原料中含有的目标PUFA (包含游离体)的总量中，可优选80%以上、更优选90%以上被烷基酯化。

含有该PUFA的烷基酯的原料可通过利用公知的方法使含有PUFA的油脂和具有所期望的烷基的酸进行酯化反应来制造。例如，通过将含有PUFA的甘油三酯的油脂进行皂化处理和酯交换等，可简便地得到PUFA的烷基酯化物。或者，作为含有该PUFA的烷基酯的原料，也可使用市售的油脂类。例如，优选使用将所含有的PUFA的种类或量标准化的市售的来源于鱼油的油脂类等。

从保持本发明中制造的含有PUFA的组合物的品质和防止含有银盐的水溶液的劣化的观点出发，本发明中使用的含有PUFA的烷基酯的原料优选氧化指标低。脂质的氧化指标可用过氧化值(POV)、酸值(AV)等表示。本发明中使用的含有PUFA的烷基酯的原料的POV(mEq/kg)优选为10以下、更优选为5以下，或AV (mg/g)优选为0.3以下、更优选为0.2以下。进一步优选本发明中使用的含有PUFA的烷基酯的原料的POV为10以下且AV为0.3以下、更优选POV为5以下且AV为0.2以下。POV可通过碘滴定法(ISO 3960：2007)等测定。AV可通过氢氧化钾滴定法(ISO 660：2009)等测定。

(1. 含有PUFA的组合物的制造方法)

(1-1. 络合物的生成)

在本发明的含有PUFA的组合物的制造方法中，使含有上述PUFA的烷基酯的原料以液体(原料液)的形态与含有银盐的水溶液(在本说明书中也称为银盐溶液)接触。为了在与该银盐溶液接触时的温度下维持液体的状态，该原料可根据需要溶解或稀释于有机溶剂或其它的油中。作为该有机溶剂，例如可列举出乙酸乙酯、氯仿、四氯化碳、二乙醚、己烷、环己烷等。

作为本发明的方法中使用的银盐溶液所含有的银盐，只要是可与PUFA的不饱和键形成络合物的化合物，则无特殊限制，例如可列举出硝酸银、高氯酸银、四氟硼酸银、乙酸银等。其中，优选硝酸银。作为该银盐溶液的溶剂，可列举出水、或水和甘油或乙二醇等具有羟基的化合物的混合介质，优选使用水。该银盐溶液中的银盐浓度只要为20质量%以上即可，优选为30质量%以上。在优选的实施方式中，该银盐溶液中的银盐浓度为20~80质量%、优选为30~70质量%。

通过该原料液与银盐溶液的接触，形成PUFA与银的络合物(在本说明书中也称为PUFA-银络合物)。所形成的络合物转移至水相、即银盐溶液相中。因此，通过回收与原料液接触的银盐溶液，可获取含有PUFA-银络合物的液体。

在本发明的方法中，将流路型搅拌机用于该原料液与银盐溶液的接触所使用的反应槽。流路型搅拌机是具备具有液体材料的投入口和排出口的流路的可进行流路内的2种以上的不同液体材料的混合或搅拌的装置。该流路型搅拌机可为要混合的不同液体材料在相同方向通过流路内的类型(例如并流式)或要混合的不同液体材料在相反方向通过流路内的类型(例如逆流式)。只要考虑液体材料的流动性、比重、液体材料彼此的分离容易度、比重差等，适宜选择任一适宜类型的搅拌机即可。由于并流式的流路型搅拌机的搅拌效率高，所以可在短时间内混合，可使液体材料彼此的接触时间较短，因此优选。作为流路型搅拌机所具备的用于该液体材料的混合或搅拌的机构，可列举出在流路内设置的螺旋桨等可动的搅拌子或在流路内设置的叶片或孔等(利用液体相对于它们的阻力来搅拌)等，可将它们使用1种或组合使用2种以上。

作为本发明中可使用的流路型搅拌机的优选的实施方式的一个实例，可列举出静止型流体混合器(在内部具备用于混合流体的叶片、翅片等的静态混合器、在线混合器(in-line mixer)等)、压入型混合器(具备文丘里孔的在线混合器等)、元件层合型混合器(具备具有用于混合流体的多个贯通孔的层合体的在线混合器等)、均质混合器(具备定子、高速旋转的涡轮等的在线混合器等)等。作为静止型流体混合器的实例，可列举出静态混合器(T-3、-4型，N10型，N60型等：Noritake Co., Ltd.)、在线混合器(TD型：株式会社北斗)、OHR混合器(MX10型：株式会社OHR流体工学研究所)等。作为压入型混合器的实例，可列举出VR管线混合器(VRX10、VRX20等：Nagoya Oshima Machinery Co., Ltd.)等。作为元件层合型混合器的实例，可列举出(MSE静态混合器：ISEL CO., LTD.)等。作为均质混合器的实例，可列举出(管道均质混合器：PRIMIX Corporation)等。但是，本发明中可使用的流路型搅拌机的实例并不限定于这些。

在本发明的方法中，只要可在该反应槽内使含有PUFA的烷基酯的原料液与银盐溶液接触即可。例如，可在反应槽中分别投入原料液和银盐溶液，在该反应槽内使它们接触，或可通过在反应槽中投入预先混合的原料液和银盐溶液，在该反应槽内使它们接触。

与该原料液接触时的银盐溶液的温度优选为5~30℃、更优选为15~30℃。作为用于将与原料液接触时的银盐溶液的温度维持在上述范围的方法，可列举出将该原料液和/或银盐溶液加热或冷却至上述范围后使它们接触的方法、将用于使该原料液与银盐溶液接触的反应槽的温度维持在上述范围的方法、和这些方法的组合。

在本发明的方法中，同时进行银盐溶液向反应槽中的投入、和在该反应槽内与原料液接触的含有络合物的银盐溶液的回收。因此，在本发明的方法中，无需如现有方法的批量式所示地全交换络合物生成反应后的反应槽的银盐溶液，可一边持续进行银盐溶液向反应槽中的投入和与原料液的接触，一边持续进行含有络合物的银盐溶液的回收。因此，在本发明的方法中，连续地(即连续式地)进行原料液与银盐溶液的接触、以及含有络合物的银盐溶液的回收。

在本发明的方法中，可在反应槽中连续地或间断地投入含有PUFA的烷基酯的原料液。优选在本发明的方法中，同时进行原料液向反应槽中的投入、和与银盐溶液接触的该原料液的回收。更优选该原料液的投入和回收的过程、与上述银盐溶液的投入和回收的过程同时且连续地(即连续式地)进行。

银盐溶液和原料液向反应槽中的投入优选通过与该反应槽流体连通的流路(以下在本说明书中称为投入路)进行。该投入路是用于投入银盐溶液和投入原料液而分别设置，分别将银盐溶液和原料液的供给源与该反应槽流体连通。在该投入路，可设置阀、泵、活门等。另外，该投入路可分别与反应槽直接连接，或也可在相互连接而汇集后与反应槽连接。反应槽的内径优选为0.1~100cm、更优选为0.3~43cm。另外，反应槽的长度优选为0.05~10m、更优选为0.1~4m。另外，银盐溶液的反应槽内滞留时间优选为0.02~300秒左右、更优选为0.04~150秒左右。进一步优选银盐溶液和原料液的反应槽内滞留时间分别为0.02~300秒左右、进一步优选分别为0.04~150秒左右。

在本发明的方法中，该反应槽中的银盐溶液的线速度优选0.5cm/秒以上、更优选0.5~400cm/秒。进一步优选该反应槽中的原料液和银盐溶液的线速度分别为0.5cm/秒以上、进一步优选分别为0.5~400cm/秒。若银盐溶液的线速度小，则形成络合物的效率降低，有作为目标的PUFA的收率降低的情况。另一方面，若银盐溶液和原料液的线速度大，则有在分配槽中导致分离不良之虞，另外，反应槽的内压上升，其损伤的风险提高。

在本说明书中，反应槽或提取槽中的液体(原料液、银盐溶液或有机溶剂等)的线速度是指由反应槽或提取槽的长度和该液体通过该反应槽或提取槽所需要的时间(即该液体的槽内滞留时间)计算而得的值[反应槽或提取槽的长度/液体通过反应槽或提取槽所需要的时间]。其中，[液体通过反应槽或提取槽所需要的时间] (液体的槽内滞留时间)是指[反应槽或提取槽中的液体的容积]除以[反应槽或提取槽内的液体的流速]而得的值。在反应槽或提取槽中存在多种液体的情况下，针对某1种液体的[反应槽或提取槽中的该液体的容积]为[该液体在液体的总容量中占有的比例]×[反应槽或提取槽的容积]。例如，在流过反应槽的液体为原料液、银盐溶液和有机溶剂的情况下，[银盐溶液通过反应槽所需要的时间]是指[反应槽的容积×{银盐溶液容量/(原料液、银盐溶液和有机溶剂的总容量)}]除以[反应槽内的银盐溶液的流速]而得的值。反应槽或提取槽中的液体的线速度可通过调节反应槽或提取槽的尺寸、或液体的流速来适宜调整。

在反应槽中投入的银盐溶液和原料液，在该反应槽内同时被搅拌，相互接触。通过该接触而在银盐溶液中生成PUFA-银络合物。

在本发明的方法中，将含有所生成的PUFA-银络合物的银盐溶液与原料液的混合液由反应槽一次全部回收。接着，从回收的该混合液中分取该银盐溶液。优选将由反应槽流出的含有原料液和银盐溶液的液体转移至与反应槽流体连通的分配槽(1) (用于分配银盐溶液和原料液的分配槽)中，在其中利用比重差分配为原料液相(有机相)和银盐溶液相(水相)。若分取所分配的水相，则可回收含有络合物的银盐溶液。此外，若分取所分配的有机相，则可回收使用后的原料液。银盐溶液和原料液由分配槽(1)的回收可通过与分配槽(1)连接的用于各自的回收的流路(以下在本说明书称为回收路)来进行。由于使所分配的有机相和水相的回收容易，所以优选将银盐溶液由分配槽(1)的出口配置在该分配槽(1)的底面或下部壁面，将原料液的出口配置在该分配槽(1)的上面或上部壁面。另外，优选银盐溶液可从配置在该分配槽(1)内的下部、优选配置在底面上的喷嘴吸引，由分配槽(1)回收。这些分配槽(1)中的银盐溶液和原料液用的出口或喷嘴与各自的回收路连接。可在该回收路设置阀、泵、活门等。

本发明的方法中使用的反应槽可为1个槽，也可为流体连通的2个以上槽的组合。例如，可将上述的流路型搅拌机(例如上述的静止型流体混合器、压入型混合器、元件层合型混合器、均质混合器等)单独使用或组合使用2种以上。在组合使用2个以上的反应槽的情况下，由第1反应槽回收的原料液和含有络合物的银盐溶液根据需要与追加的原料液、银盐溶液、银盐溶液清洗用有机溶剂和原料液稀释用有机溶剂中的1种以上同时投入另外的反应槽中，在其中该原料液和银盐溶液接触而进一步生成PUFA-银络合物。可进一步重复该操作。然后，将该原料液和银盐溶液转移至分配槽(1)中，回收含有PUFA-银络合物的银盐溶液。

或者，将第1反应槽的原料液和含有络合物的银盐溶液在第1分配槽(1)中分离、回收后，根据需要与追加的原料液、银盐溶液、银盐溶液清洗用有机溶剂和原料液稀释用有机溶剂中的1种以上同时投入另外的反应槽中，在其中与新的原料液接触而蓄积PUFA-银络合物。接着，将该银盐溶液在与该另外的反应槽连接的另外的(第2)分配槽(1)中分离、回收。可进一步重复该操作。

在该2个以上的反应槽的任一个中，与该原料液或银盐溶液清洗用有机溶剂接触时的银盐溶液的温度优选为5~30℃、更优选为15~30℃。作为该银盐溶液清洗用有机溶剂和原料液稀释用有机溶剂，可使用与上述原料液的稀释所使用的有机溶剂相同的溶剂。优选使用与在该第1反应槽中投入的原料液的稀释所使用的有机溶剂相同的溶剂。将所回收的含有该PUFA-银络合物的银盐溶液转移至后述的提取槽中，提供给PUFA烷基酯的提取工序。

更详细地说明反应槽的组成的实例。本发明的方法中使用的反应槽可为1个槽，也可为流体连通的2个以上槽的组合。例如，可将上述的流路型搅拌机(例如上述的静止型流体混合器、压入型混合器、元件层合型混合器、均质混合器等)单独使用或组合使用2种(2基)以上。在组合使用2个以上的反应槽的情况下，将原料液和含有络合物的银盐溶液由第1个反应槽投入至所连接的下一个反应槽中。反应槽可为若干个，将这些1个或多个反应槽作为第1反应槽。然后，将该原料液和银盐溶液转移至分配槽(1)中，回收含有PUFA-银络合物的银盐溶液和原料液。或者，由第1反应槽转移至第1分配槽(1)中，可将由该第1分配槽(1)回收的银盐溶液和原料液投入第2反应槽(包含1个或多个反应槽)中。此时，可将由第1分配槽(1)回收的原料液和银盐溶液根据需要与追加的原料液、银盐溶液、银盐溶液清洗用有机溶剂和原料液稀释用有机溶剂中的1种以上同时投入第2反应槽中。在第2反应槽中，该原料液和银盐溶液接触而进一步生成PUFA-银络合物。然后，将该原料液和银盐溶液转移至第1分配槽(1)或另外的(第2)分配槽(1)中，回收含有PUFA-银络合物的银盐溶液和原料液。可进一步重复这些操作。在分配槽(1)为多个的情况下，由各个分配槽(1)回收的含有该PUFA-银络合物的银盐溶液可在用于将它们合并的混合槽(上述的流路型搅拌机或用于简单的混合的槽等)中均匀化，或不均匀化。将该银盐溶液转移至后述的提取槽中，提供给PUFA烷基酯的提取工序。优选各反应槽的内径为0.1~100cm，长度为0.05~10m，该反应槽中的银盐溶液的线速度为0.5~400cm/秒，反应槽内滞留时间为0.02~300秒左右，并且根据需要，该反应槽中的原料液的线速度为0.5~400cm/秒，反应槽内滞留时间为0.02~300秒左右。更优选为各反应槽的内径为0.3~43cm，长度为0.1~4m，该反应槽中的银盐溶液的线速度为0.5~400cm/秒，反应槽内滞留时间为0.04~150秒左右，并且根据需要，该反应槽中的原料液的线速度为0.5~400cm/秒，反应槽内滞留时间为0.04~150秒左右。另外，在组合使用2个以上的反应槽的情况下，可使用上述条件的反应槽。

在由分配槽(1)回收的有机相(原料液)中，有时还含有未络合的PUFA。因此，通过将所回收的有机相投入该第1或另外的反应槽中，并再次与银盐溶液接触，从而可将该未络合的PUFA转化为PUFA-银络合物，与银盐溶液同时回收。得到的银盐溶液与上述相同地，可与原料液同时转移至第1分配槽(1)或另外的分配槽(1)中，从有机相分配而回收。所回收的银盐溶液可与按照上述步骤得到的含有PUFA-银络合物的银盐溶液合并，提供给后述的PUFA烷基酯的提取工序，或也可单独地提供给该提取工序。

优选以上的本发明的方法的步骤在低氧条件下进行。低氧条件例如可通过将本发明的方法的系统(例如反应槽(流路型搅拌机)、投入路、回收路、分配槽(1)等)设为与空气隔断的密闭系统，将该反应槽、投入路、回收路、分配槽(1)等的内部置于氮等惰性气体气氛下，在该反应槽、投入路、回收路、分配槽(1)等中充满液体(原料液或银盐溶液)等而达成。优选将该反应槽、投入路、回收路、分配槽(1)设为与空气隔断的密闭系统，并在其中充满原料液或银盐溶液。在银盐溶液和原料液向反应槽的投入和回收均连续式地进行的情况下，一旦在系统中充满液体，则此后可维持低氧状态。优选本发明中的低氧条件是指氧浓度低于0.4%、更优选为0.1%以下的条件。另外，优选本发明的方法在遮光下进行。通过在低氧条件和遮光下进行本发明的方法，可抑制银盐溶液的pH降低或原料液和银盐溶液中的油脂的氧化，防止银盐溶液的劣化或所纯化的含有PUFA的组合物的劣化。

(1-2. PUFA烷基酯的提取)

可使用有机溶剂从按照以上步骤回收的含有PUFA和银的络合物的银盐溶液提取PUFA烷基酯。因此，本发明的含有PUFA的组合物的制造方法可进一步包括使用有机溶剂从由反应槽回收的银盐溶液中提取PUFA烷基酯的工序。

PUFA烷基酯的提取的步骤可依据专利文献1~4所记载的方法等通常的步骤进行。更详细而言，使由反应槽回收的含有PUFA-银络合物的银盐溶液与有机溶剂接触。通过该接触，将该银盐溶液中的PUFA烷基酯提取至有机溶剂中。通过回收与该银盐溶液接触的有机溶剂，可获取PUFA烷基酯。

作为该提取所使用的有机溶剂，可列举出己烷、醚、乙酸乙酯、乙酸丁酯、氯仿、环己烷、苯、甲苯、二甲苯等EPA、DHA、DPA等烷基酯的溶解性高且可与水分离的溶剂，优选己烷或环己烷。

优选将由反应槽回收的银盐溶液转移至用于银盐溶液与有机溶剂的接触的提取槽中，在其中与有机溶剂接触。银盐溶液或有机溶剂向提取槽的投入和回收可批量式地进行，但优选连续式地进行。优选在本发明的方法中，向提取槽投入由该反应槽回收的含有银盐的水溶液和有机溶剂而使它们接触，接着，回收与含有该银盐的水溶液接触的该有机溶剂。优选同时进行含有该银盐的水溶液向该提取槽中的投入和该有机溶剂的回收。更优选同时进行有机溶剂向提取槽中的投入、由反应槽回收的银盐溶液向提取槽中的投入、银盐溶液与有机溶剂的接触、接触后的有机溶剂和银盐溶液由提取槽的回收。

银盐溶液向提取槽中的投入通过将反应槽或上述的分配槽(1) (根据需要为上述混合槽)和该提取槽流体连通的流路(以下在本说明书中称为连通路)进行。另外，有机溶剂向提取槽中的投入优选通过将有机溶剂的供给源和该提取槽流体连通的流路(以下在本说明书称为有机溶剂投入路)进行。在该连通路和有机溶剂投入路，可设置阀、泵、活门等。另外，该连通路和有机溶剂投入路可分别与提取槽直接连接，或也可在相互连接而汇集后与提取槽连接。

与有机溶剂接触时的银盐溶液的温度优选为30~80℃、更优选为50~70℃。作为用于将与有机溶剂接触时的银盐溶液的温度维持在上述范围的方法，可列举出将银盐溶液和/或有机溶剂加热至上述范围后使它们接触的方法、将提取槽的温度维持在上述范围的方法、和这些方法的组合。

优选将接触后的银盐溶液和有机溶剂的混合液由提取槽一次全部回收。接着，从所回收的该混合液中分取含有PUFA烷基酯的有机溶剂。优选将由提取槽回收的液体转移至与提取槽流体连通的分配槽(2) (用于分配有机溶剂和银盐溶液的分配槽)中，在其中利用比重差分配为有机溶剂相(有机相)和银盐溶液相(水相)。若分取所分配的有机相，则可回收含有PUFA烷基酯的有机溶剂。此外，若分取所分配的水相，则可回收使用后的银盐溶液。银盐溶液和有机溶剂由分配槽(2)的回收可通过分别与该分配槽(2)连接的回收路来进行。由于使所分配的有机相和水相的回收容易，所以优选将银盐溶液由该分配槽(2)的出口配置在该分配槽(2)的底面或下部壁面，将有机溶剂的出口配置在该分配槽(2)的上面或上部壁面。另外，优选银盐溶液可由配置在分配槽(2)内的下部、优选为底面上的喷嘴吸引，由分配槽(2)回收，有机溶剂可由配置在该分配槽(2)内的上部的喷嘴吸引，由该分配槽(2)回收。这些分配槽(2)中的银盐溶液和有机溶剂用的出口或喷嘴与各自的回收路连接。在该回收路，可设置阀、泵、活门等。

作为提取槽的适宜的实例，可列举出与反应槽分开设置的流路型搅拌机。作为该提取槽所使用的流路型搅拌机，可列举出与上述反应槽所使用的装置相同的流路型搅拌机，例如可示例出在上述(1-1)中叙述的静止型流体混合器、压入型混合器、元件层合型混合器、均质混合器等。该提取槽可为1个槽，也可为流体连通的2个以上槽的组合。例如，可将上述静止型流体混合器、压入型混合器、元件层合型混合器、均质混合器等单独使用或组合使用2种(2基)以上。在组合使用2个以上的提取槽的情况下，由第1提取槽回收的有机溶剂和含有络合物的银盐溶液根据需要与追加的有机溶剂或含有络合物的银盐溶液同时投入另外的反应槽中，在其中该有机溶剂和银盐溶液接触而进一步提取PUFA。可进一步重复该操作。然后，将该有机溶剂和银盐溶液转移至分配槽(2)中，回收含有PUFA的有机溶剂。或者，将第1提取槽内的银盐溶液在分配槽(2)中分离、回收后，根据需要与有机溶剂或含有络合物的银盐溶液同时投入另外的提取槽中，在其中与新的有机溶剂接触，将在该银盐溶液中残留的PUFA提取至有机溶剂中。接着，将该银盐溶液和有机溶剂在与该另外的反应槽连接的另外的(第2)分配槽(2)中分离、回收。可进一步重复该操作。在该2个以上的提取槽的任一个中，与有机溶剂接触时的银盐溶液的温度优选为30~80℃、更优选为50~70℃。

在该提取槽为流路型搅拌机的情况下，该提取槽中的银盐溶液的线速度优选0.5cm/秒以上、更优选0.5~400cm/秒。进一步优选该提取槽中的银盐溶液和有机溶剂的线速度分别为0.5cm/秒以上、进一步优选分别为0.5~400cm/秒。若银盐溶液的线速度小，则PUFA烷基酯向有机溶剂的提取的效率降低，作为目标的PUFA的收率降低。另一方面，若银盐溶液和有机溶剂的线速度大，则有在分配槽(2)中导致分离不良之虞，另外，提取槽的内压上升，其损伤的风险提高。另外，银盐溶液的提取槽内滞留时间优选为0.02~300秒左右、更优选为0.04~150秒左右。进一步优选银盐溶液和有机溶剂的提取槽内滞留时间分别为0.02~300秒左右、进一步优选分别为0.04~150秒左右。优选各提取槽的内径为0.1~100cm，长度为0.05~10m，该提取槽中的银盐溶液的线速度为0.5~400cm/秒，提取槽内滞留时间为0.02~300秒左右，并且根据需要，该提取槽中的有机溶剂的线速度为0.5~400cm/秒，反应槽内滞留时间为0.02~300秒左右。更优选各提取槽的内径为0.3~43cm，长度为0.1~4m，该提取槽中的银盐溶液的线速度为0.5~400cm/秒，提取槽内滞留时间为0.04~150秒左右，并且根据需要，该提取槽中的有机溶剂的线速度为0.5~400cm/秒，提取槽内滞留时间为0.04~150秒左右。另外，在组合使用2个以上的提取槽的情况下，可使用上述条件的提取槽。

为了防止所提取的PUFA烷基酯或银盐溶液中的油脂的氧化，上述PUFA烷基酯的提取步骤也优选在低氧条件下或遮光下进行。优选将该步骤的系统(例如提取槽、连通路、有机溶剂投入路、回收路、分配槽(2)等)置于低氧条件或遮光下。低氧条件可按照与在上述(1-1)中叙述的步骤相同的步骤达成。

(1-3. 银盐溶液的劣化抑制和再利用)

在本发明的含有PUFA的组合物的制造方法中，通过同时且连续地(即连续式地)进行银盐溶液向反应槽(流路型搅拌机)的投入和回收的过程，进而根据需要同时且连续地(即连续式地)进行银盐溶液向提取槽的投入和回收的过程，优选通过连续式地进行从银盐溶液向反应槽中的投入至银盐溶液由提取槽的回收的过程，可大大地抑制银盐溶液的pH降低或原料液和银盐溶液中的油脂的氧化、和由此导致的银盐溶液的劣化或所纯化的含有PUFA的组合物的劣化。例如，在现有的批量式中，在反应槽内的原料液和银盐溶液的搅拌混合或反应后的银盐溶液的批量回收的过程中混入至银盐溶液中的油脂氧化，认为这会导致银盐溶液的劣化。另一方面，在如本发明所示的连续式中，在反应槽或提取槽内或由它们回收银盐溶液的过程中，由于可极少地进行银盐溶液与空气的接触，所以可抑制银盐溶液的劣化。

因此，在本发明的方法中，可将由提取槽回收的银盐溶液再利用。更详细而言，在本发明的方法中，可将由提取槽回收的银盐溶液直接或适宜调整银盐的浓度后再次投入反应槽中而与原料液接触。在本发明的方法的优选的实施方式中，投入反应槽中的银盐溶液含有在与有机溶剂接触后由提取槽回收的银盐溶液。

因此，在优选的实施方式中，本发明的含有PUFA的组合物的制造方法可为一边使银盐溶液在反应槽和提取槽之间循环，一边连续地进行该银盐溶液与原料液的接触、和由此得到的含有络合物的银盐溶液与有机溶剂的接触的方法。在该方法中，使由反应槽回收的银盐溶液与有机溶剂接触，从该银盐溶液提取PUFA烷基酯后，由提取槽回收与该有机溶剂接触的银盐溶液，再次投入该反应槽中。再次投入反应槽中的银盐溶液与原料液接触而形成PUFA-银络合物。在本发明的方法中，银盐溶液可重复使用优选10次以上、更优选30次以上、进一步优选70次以上、进一步优选100次以上、进一步优选300次以上。需说明的是，本发明中的银盐溶液的重复使用所涉及的“使用”适用于将银盐溶液从向反应槽中的投入至由提取槽的回收的一系列的过程，进行1次该过程相当于使用“1次”银盐溶液。在每1次的该过程中，银盐溶液与PUFA接触的时间(后述的实施例中示出的PUFA接触时间，即从在原料液中投入银盐溶液的时间点起至利用有机溶剂从银盐溶液提取含有PUFA乙酯的组合物的时间)平均优选为10分钟以内、更优选为5分钟以内。

银盐溶液的劣化的程度能够以银盐溶液的pH或色调、或银盐溶液中含有的游离脂肪酸量、或该溶液的加德纳色度(Gardner color scale)等为指标测定。例如，未使用的银盐溶液通常pH约为7，无色透明，并且不含有游离脂肪酸，但随着因使用而劣化，pH降低，变为带有黄色~褐色的色调，游离脂肪酸量增加。溶液的游离脂肪酸量可通过后述的参考例2所记载的方法测定。根据本发明的方法，可将在形成络合物和提取PUFA烷基酯的过程中重复使用10次后的银盐溶液的游离脂肪酸量控制在优选5mEq/L以下、更优选3mEq/L以下。进一步优选可将重复使用100次后的银盐溶液的游离脂肪酸量控制在优选50mEq/L以下、更优选20mEq/L以下。

银盐溶液的加德纳色度可依据日本工业规格JIS K0071“化学制品的颜色试验方法”测定。溶液的加德纳色度越高，意味着银盐溶液更劣化。在本发明的方法中，所使用的银盐溶液即使在重复使用30次以上左右后，加德纳色度为5左右，优选即使进一步重复使用，加德纳色度也不会为9以上。与之相对的是，在现有的批量法中，所使用的银盐溶液因重复使用15次左右，加德纳色度上升至11以上。这表示本发明的方法与批量法相比非常不容易发生银盐溶液的劣化。

另外，在本发明的含有PUFA的组合物的制造方法中，通过连续式的采用和银盐溶液的再使用，与现有方法(批量式)相比，可减少提取PUFA所需要的银盐溶液的量。在优选的实施方式中，本发明的方法与现有方法相比，可将提取PUFA所需要的银盐溶液的量减少至1/2~1/20左右、优选1/5~1/10左右。

(1-4. 含有PUFA的组合物的分离)

在本发明中，按照上述步骤回收的含有PUFA烷基酯的有机溶剂作为含有PUFA的组合物而获取。该含有PUFA的组合物含有从原料液分离的PUFA、优选EPA、DHA或DPA的烷基酯。所回收的有机溶剂可根据需要通过浓缩、色谱法、蒸馏等进一步纯化。通过本发明的方法得到的含有PUFA的组合物在所含有的全部脂肪酸中含有70质量%以上、更优选80质量%以上的优选选自EPA、DHA和DPA的至少1种PUFA的烷基酯，更优选为EPA和/或DHA的烷基酯，进一步优选含有50质量%以上、更优选70质量%以上的EPA的烷基酯。更优选通过本发明的方法得到的含有PUFA的组合物在所含有的全脂肪酸中合计含有的70质量%以上、优选80质量%以上的EPA的烷基酯和DHA的烷基酯，并且含有55质量%以上、优选60质量%以上的EPA烷基酯。

另外，在本发明的方法中，所回收的有机溶剂可通过浓缩、色谱法、蒸馏等分离PUFA烷基酯后，再使用于PUFA烷基酯的提取。更详细而言，可将分离PUFA烷基酯的有机溶剂直接或与新的有机溶剂混合后，再次投入提取槽中而与银盐溶液接触。

在本发明的利用连续式的含有PUFA的组合物的制造方法中，无需如现有方法(批量式)所示地回收批量的含有络合物的银盐溶液或含有PUFA的有机溶剂，另外，无需为了其的回收而停止络合物生成反应或PUFA提取操作。另外，在本发明的方法中，可抑制银盐溶液的劣化，并且可减少银盐溶液的使用量。因此，本发明提供高效率且低成本的PUFA制造法。

(2. 含有PUFA的组合物的制造用装置)

作为本发明的优选的实施方式，在图1中公开了将流路型搅拌机用于反应槽和提取槽的含有PUFA的组合物的制造步骤的示意图。

在图1中，反应槽和提取槽的流路型搅拌机为相同类型的并流式的静止型流体混合器，在内部具备用于流体混合的叶片。该流路型搅拌机与原料液供给源和银盐溶液供给源流体连通。投入反应槽中的原料液和银盐溶液通过叶片的搅拌作用混合而相互接触。通过调节所搅拌的原料液和银盐溶液的量，可生成原料液或银盐溶液的液滴。在一个实施方式中，反应槽内的原料液为连续相，银盐溶液为液滴状。在另外一个实施方式中，反应槽内的原料液为液滴状，银盐溶液为连续相。在另外一个实施方式中，反应槽内的原料液和银盐溶液均为连续相。由于反应槽在液体投入口的相反侧与分配槽(1)连通，所以将投入反应槽中的液体缓慢地转移至分配槽(1)中。在分配槽(1)中将原料液(有机相)分离为上层，将含有络合物的银盐溶液(水相)分离为下层。回收上层的原料液，将下层的银盐溶液转移至提取槽中。

在图1中，提取槽与分配槽(1)的下层和有机溶剂供给源流体连通。投入提取槽中的有机溶剂和银盐溶液通过叶片的搅拌作用混合而相互接触。在一个实施方式中，提取槽内的有机溶剂为连续相，银盐溶液为液滴状。在另外一个实施方式中，提取槽内的有机溶剂为液滴状，银盐溶液为连续相。在另外一个实施方式中，提取槽内的有机溶剂和银盐溶液均为连续相。由于提取槽在液体投入口的相反侧与分配槽(2)连通，所以将投入提取槽中的液体缓慢地转移至分配槽(2)中。在分配槽(2)中将含有PUFA的有机溶剂(有机相)分离为上层，将银盐溶液(水相)分离为下层。回收上层的有机溶剂，纯化或浓缩含有PUFA的组合物。将下层的银盐溶液送回至银盐溶液供给源，再次投入反应槽中。

在图1中，反应槽、提取槽、分配槽和连接它们的流路为密闭系统且用液体充满。如图1所示，反应槽和提取槽的内部的温度可通过分别设置的制冷剂或热媒控制。另外，如图1所示，液体向反应槽和提取槽的投入和回收的速度和量可通过泵控制。反应槽和提取槽中的银盐溶液和原料液的线速度优选为0.5~400cm/秒左右。优选反应槽中的银盐溶液的温度为5~30℃。优选提取槽中的银盐溶液的温度为30~80℃。

在优选的实施方式中，图1的装置中的银盐溶液的PUFA接触时间在每1次使用时平均优选为10分钟以内、更优选为5分钟以内。如图1所示，在本发明中使用的含有PUFA的组合物的制造方法中，通过同时且连续地进行银盐溶液向反应槽和提取槽的投入和回收，使得可连续地提取含有PUFA的组合物，因此无需如现有的批量式中采用的大规模的反应槽。根据本发明，可使PUFA制造所使用的设备小规模化。

实施例

以下，列举实施例，更详细地说明本发明，但本发明并不只限定于这些实施例。

(参考例1) 脂肪酸组成比的分析

将12.5mg的测定试样稀释于1mL的正己烷中，使用气相色谱分析装置(Type 7890 GC：Agilent Technologies制)，按照以下条件分析全部脂肪酸中的各脂肪酸的含量比。结果以由色谱图的面积换算的质量%表示。

<注入口条件>

注入口温度：250℃，分流比：10

<柱条件>

柱：J&W公司制DB-WAX 0.25mm×30m，柱温度：210℃

He流速：1.0mL/min，He压力：20PSI

<检测条件>

H₂流速：40mL/min，Air流速：450mL/min

He流速：1.00mL/min，DET温度：260℃

分析的脂肪酸如下所述：AA-E：花生四烯酸乙酯，DPA-E：二十二碳五烯酸乙酯，DHA-E：二十二碳六烯酸乙酯，ETA-E：二十碳四烯酸乙酯，EPA-E：二十碳五烯酸乙酯。

(参考例2) 银盐溶液中的游离脂肪酸含量的测定方法

1. 标准溶液的调制

(1) 在1000mL的容量瓶中称取0.114g的肉豆蔻酸，用二甲基亚砜定容至100mL。

(2) 另外在100mL容量瓶中称取1.5g的三乙醇胺，用纯水定容至100mL。

(3) 另外在100mL容量瓶中称取0.10g的乙二胺四乙酸四钠四水合物，用纯水定容至100mL。

(4) 在100mL容量瓶中量取20mL的(1)的溶液、10mL的(2)的溶液、10mL的(3)的溶液，用纯水定容至100mL作为标准溶液。

2. 铜试液的调制

(1) 在烧杯中称取6.49g的硫酸铜(II)五水合物和20.0g的氯化钠，用纯水溶解，转移至100mL容量瓶中，合并烧杯的洗液后，用纯水定容至100mL。

(2) 另外在100mL容量瓶中称取14.9g的三乙醇胺，用纯水定容至100mL。

(3) 将相同量(容量比)的(1)的溶液和(2)的溶液混合，作为铜试液。

3. 显色试液的调制

在250mL容量瓶中称取0.189g的浴铜灵，用2-丁醇定容至250mL。

4. 操作步骤

(1) 分别在具塞试管中量取5μL的银盐溶液、500μL的标准溶液，加入1mL的铜试液。

(2) 在各自的试管中加入3mL的氯仿/庚烷混合液(容量比为1/1)，盖紧塞用手剧烈振荡3分钟。

(3) 振荡后取下塞进行离心分离(3,000rpm)。

(4) 采取2mL的上清液，放入另外的试管中，加入2mL的显色试液并轻轻振荡混合。

(5) 在2~3分钟后，以纯水为对照测定475nm的吸光度。

5. 计算式

通过下述的式(1)，计算银水溶液中的游离脂肪酸浓度。

(式1) 游离脂肪酸浓度(meq/L)=(B/A)×(D/C)

A：使用标准溶液时的吸光度

B：使用试样溶液时的吸光度

C：试样采取量(μL)

D：标准溶液采取量(μL)

(参考例3) 银盐的测定方法

银盐溶液和原料液中的银盐的量依据JIS K 0121，通过原子吸收光谱法测定。

(参考例4) 银盐溶液的线速度的测定方法

反应槽和提取槽中的银盐溶液的线速度由反应槽或提取槽的长度和银盐溶液通过反应槽或提取槽所需要的时间计算。

银盐溶液的线速度(cm/sec)

=[反应槽或提取槽的长度(cm)]/[银盐溶液通过反应槽或提取槽所需要的时间(sec)]

银盐溶液通过反应槽或提取槽所需要的时间(sec)

=[反应槽或提取槽中的银盐溶液的容积(mL)]/[反应槽或提取槽中的银盐溶液的流速(mL/sec)]

(材料)

原料油：AA-E 2.5%、ETA-E 1.7%、EPA-E 44.5%、

　　　 DPA-E 2.1%、DHA-E 7.4%，

过氧化值(POV)=1.0mEq/kg，

　　　 酸值(AV)=0.1mg/g。

银盐溶液：50质量%硝酸银水溶液

有机溶剂：环己烷

反应槽、提取槽：并流式的流路型搅拌机(静态混合器，型号为T3-27-2PT，内径为3.4mm，长度为15.5cm：Noritake Co., Ltd.)

(实施例1)

利用连续式从原料油纯化PUFA乙酯。相对于30g的原料油以有机溶剂为14mL的比例混合，使其溶解得到原料液。将得到的原料液和银盐溶液分别冷却至15℃，由与反应槽(流路型搅拌机)的一端(投入口)连接的各自的投入路压入反应槽内，在反应槽内相互接触。将120g的银盐溶液以30g/分钟的流速由投入路流入，将41g的原料液以10.3g/分钟的流速由投入路流入。流过反应槽内的该银盐溶液的线速度为7.5cm/秒，该反应槽内的该银盐溶液的滞留时间为2秒。反应槽内的温度为20℃。

反应槽的相反侧的一端(回收口)与分配槽(1)直连，在该分配槽(1)的下部蓄积水相(含有PUFA-银络合物的银盐溶液)。分配槽(1)中的该水相的滞留时间为2.1分钟。将该水相由与提取槽(另外的流路型搅拌机)的一端连接的投入路，以33g/分钟的流速压入该提取槽内部。该提取槽内的该水相的线速度为14cm/秒。同时使加热至65℃的140mL的有机溶剂以35mL/分钟的流速由与该提取槽的相同的一端连接的投入路流入，在该提取槽内使该水相和有机溶剂接触而将该水相中的PUFA乙酯提取至有机溶剂中。提取槽内的温度为60℃，该提取槽内的该水相的滞留时间为1秒。该提取槽的相反侧的一端(回收口)与分配槽(2)直连，将在该分配槽(2)的下部蓄积的水相(银盐溶液)与有机相分离并回收。另行由分配槽(2)回收有机相，馏去有机溶剂得到含有PUFA乙酯的组合物。由分配槽(2)回收的水相(银盐溶液)的一部分用于游离脂肪酸含量的测定，余量再使用。将以上的一系列操作作为1个过程，将该过程重复10次。计算每1个过程的反应槽、分配槽(1)、提取槽中的水相(银盐溶液)的滞留时间的总和作为银盐溶液与原料液的接触时间，求得10个过程的平均值。原料液和有机溶剂在每个过程中都更换为新的原料。在该过程中，投入路、反应槽、提取槽、分配槽(1)和(2)、以及连通它们的流路总是用液体(原料液、银盐溶液或有机溶剂)充满，一系列操作全部在低氧条件下进行。

(比较例1)

利用批量法从原料油纯化PUFA乙酯。将30g的原料油和14mL的有机溶剂充分搅拌混合，使其溶解得到原料液。在烧瓶中加入120g的银盐溶液和41g的原料液，在氮气氛(氧浓度为0.4%)下，于20℃以300rpm的速度搅拌20分钟。将搅拌后的液体于20℃静置15分钟，除去分离的有机相，回收水相(含有PUFA-银络合物的银盐溶液)。将得到的水相加热至60℃，加入140mL的有机溶剂，在60℃的条件下以300rpm的速度搅拌20分钟，将水相中的PUFA乙酯提取至有机相中。静置搅拌后的液体，回收分离的有机相后，浓缩，得到含有PUFA乙酯的组合物。回收剩余的水相(银盐溶液)，将一部分用于游离脂肪酸含量的测定，余量再使用。将以上的一系列操作作为1个过程，将该过程每次都使用新的原料进行10次。计算1个过程中的从原料液和银盐溶液的混合至含有PUFA乙酯的有机相的分离的时间作为银盐溶液与原料液的接触时间，求得10个过程的平均值。

(试验例1) 含有PUFA的组合物的脂肪酸组成和产量

依据参考例测定原料油、在实施例1和比较例1中得到的含有PUFA的组合物的脂肪酸组成、以及在实施例1和比较例1中得到的含有PUFA的组合物的产量。将其结果示于表1中。

[表1]

(试验例2) 酸值(AV)

对于在实施例1和比较例1的各个过程中得到的含有PUFA的组合物的10份样品，分别测定酸值(AV值)，求得10份样品的平均值。另外，测定原料液的酸值(AV值)。将其结果示于表2中。

(试验例3) 银盐溶液中的硝酸银量

依据参考例3测定在实施例1和比较例1的各个过程中使用后的原料液中的硝酸银量。基于使用前的银盐溶液中的硝酸银量，计算转移至原料液中而损失的硝酸银量(损失率)。将其结果以10份样品的平均值示于表2中。

[表2]

如表1所示，通过实施例1的方法得到的含有PUFA的组合物的产量及其脂肪酸组成与现有的批量法(比较例1)相当。另一方面，如表2所示，即使在处理相同量的原料油的情况下，通过实施例1的方法得到的含有PUFA的组合物与现有的批量法(比较例1)相比抑制酸值的上升。认为由于在实施例1的方法中可使原料液与银盐溶液的接触时间更少，所以可抑制含有PUFA的组合物的酸值上升。由此可知，本发明的方法与现有方法相比，可不降低产量而得到品质良好的含有PUFA的组合物。另外，实施例1的方法与现有方法(比较例1)相比大幅降低硝酸银的损失率，可显著提高银盐溶液的利用效率。

(试验例4) 银盐溶液的线速度与PUFA产量的关系

除了如表3所示变化反应槽内的银盐溶液的线速度以外，按照与实施例1相同的步骤制造含有PUFA的组合物。另外，将反应槽和提取槽的尺寸变更成内径为8mm、长度为26cm，按照与实施例1相同的步骤制造含有PUFA的组合物(实施例10)。依据参考例1测定得到的含有PUFA的组合物的脂肪酸组成，计算组合物中的EPA-E含量(%)和从原料油中的EPA-E回收率(%)。将其结果示于表3中。

[表3]

如表3所示，若投入反应槽中的银盐溶液的线速度为0.5cm/秒以上，则得到的含有PUFA的组合物的EPA-E的含量高，另外，也能够以从原料油的EPA-E回收率为57%以上的高比例纯化。

(试验例5) 处理时间与银盐溶液劣化的关系

将实施例1和比较例1中的每1个过程的银盐溶液的PUFA接触时间和使用后的银盐溶液中的FFA含量的增加量的平均值(10次过程量)示于表4中。

[表4]

(试验例6) 银盐溶液的劣化(色调变化)

在实施例1和比较例1中，比较重复使用10个过程的银盐溶液的外观和色调(加德纳色度)。溶液的加德纳色度与加德纳标准液比较由3人通过目视进行感官试验，采用其平均值进行评价。将结果示于表5中。

[表5]

	外观	加德纳色度
			实施例1	淡黄色	2
比较例1	黄色	9

如表4所示，银盐溶液的FFA含量随着PUFA接触时间而增加。采用连续式的实施例1与采用批量式的比较例1相比，银盐溶液的PUFA接触时间更短，而FFA含量的增加不少。另外，如表5所示，实施例1与比较例1相比银盐溶液的色调变化少。由此显示出，在实施例1中抑制银盐溶液的劣化。

(试验例7) 银盐溶液的劣化水平(游离脂肪酸含量)的比较

按照与实施例1和比较例1相同的步骤，重复纯化PUFA乙酯的过程。每隔数个过程，依据参考例2测定使用后的银盐溶液中的游离脂肪酸(FFA)含量。将银盐溶液的重复使用次数(过程数)所伴有的游离脂肪酸(FFA)含量的经时变化示于图2中。

(试验例8) 银盐溶液的使用量与PUFA产量的关系

按照与实施例1和比较例1相同的步骤，重复纯化PUFA乙酯的过程至银盐溶液的FFA含量超过10mEq/L。将得到的含有PUFA的组合物的累积产量示于表6中。如实施例1所示的连续式与如比较例1所示的批量式相比，含有PUFA的组合物的产量增加至8倍以上。由此表明，在如实施例1所示的连续式中，可抑制银盐溶液的劣化而重复使用，因此，与批量式相比可显著减少生成含有PUFA的组合物所需要的银盐溶液的量。

[表6]

(试验例9) 原料液POV与银盐溶液劣化的关系

研究原料油的氧化劣化对银盐溶液的劣化造成的影响。使用氧化指标(POV和AV)不同的下述原料油A~D，依据实施例1进行PUFA乙酯的纯化。另外，使用下述原料油C~D，依据比较例1进行PUFA乙酯的纯化。研究重复使用3次(3个过程)后的银盐溶液的FFA含量的变化。将结果示于表7中。

原料油A：POV=1.0mEq/kg，AV=0.2mg/g

原料油B：POV=11.6mEq/kg，AV=0.1mg

原料油C：POV=40.5mEq/kg，AV=0.2mg

原料油D：POV=1.3mEq/kg，AV=5.3mg

(脂肪酸组成均为AA-E 2.8%、ETA-E 1.8%、EPA-E 44.7%、DPA-E 2.0%、DHA-E 7.7%)

[表7]

(试验例10) 基于利用逆流的连续式的PUFA乙酯的纯化中的银盐溶液的劣化水平

(材料)

原料油：AA-E 2.6%、ETA-E 1.7%、EPA-E 44.5%、

DPA-E 2.1%、DHA-E 7.4%，

过氧化值(POV)=1.0mEq/kg，

酸值(AV)=0.1mg/g。

银盐溶液：50质量%硝酸银水溶液

有机溶剂：环己烷

反应槽、提取槽：逆流式的流路型搅拌机。从填充有有机相的柱的上部投入银盐溶液，一边用振动器微细化，一边在柱内沈降而与有机相接触。柱(内径为20mm、长度为20cm、圆筒型)、银盐溶液投入口(喷嘴、内径约为1mm)的前端的位置在有机相(原料液、有机溶剂)的上面下方2cm以内，银盐溶液回收口在柱下部。

相对于30g的原料油以有机溶剂为14mL的比例混合，使其溶解得到原料液。将47mL的得到的原料液填充于第一柱(反应槽)中，从上部吹入氩气而从柱内赶出空气(柱内氧浓度为0.1%以下)。由柱内的投入口，以10g/分钟的流速滴加120g的银盐溶液，使原料液和银盐溶液接触。将滴加的银盐溶液用振动器微细化。与银盐溶液的滴加同时地，以11g/分钟的量回收在柱下部蓄积的水相。从柱的投入口的喷嘴前端至水相上面的距离维持13cm。流过反应槽内的该银盐溶液的线速度为0.1cm/秒，该反应槽内的该银盐溶液的滞留时间为157秒。原料液和银盐溶液的温度为20℃。接着，在用60℃的有机溶剂填充的第二柱(提取槽，吹入氩气，赶出空气)中，一边由柱内的投入口，以11g/分钟的流速滴加由第一柱回收的水相(含有PUFA乙酯的银盐溶液)，一边由柱下部注入60℃的有机溶剂。由此，使水相和有机溶剂接触，将水相中的PUFA乙酯提取至有机相中。与水相的滴加和有机溶剂的注入同时地，一边以10g/分钟的流速回收在第二柱下部蓄积的银盐溶液，一边由柱上部回收提取PUFA乙酯的有机相。从第二柱的投入口的喷嘴前端至水相上面的距离维持13cm。流过提取槽内的该水相的线速度为0.1cm/秒，该反应槽内的该银盐溶液的滞留时间为157秒。将由第二柱回收的有机相(含有PUFA乙酯的有机溶剂)浓缩，得到含有PUFA乙酯的组合物。由第二柱回收的水相(银盐溶液)的一部分用于游离脂肪酸含量的测定，余量再使用。将以上的一系列操作作为1个过程，重复该过程。第一柱内的原料液在每个过程中都更换为新的原料。

每隔数个过程，依据参考例2测定使用后的银盐溶液中的游离脂肪酸(FFA)含量。将银盐溶液的重复使用(过程数)所伴有的游离脂肪酸(FFA)含量的经时变化示于图3中。

Claims (17)

1.含有高度不饱和脂肪酸的组合物的制造方法，

所述方法包括：

向流路型搅拌机中投入含有高度不饱和脂肪酸的烷基酯的原料液和含有银盐的水溶液而使它们接触；和

回收与该原料液接触的含有该银盐的水溶液，

其中，同时进行含有该银盐的水溶液向该流路型搅拌机中的投入和该回收。

2.权利要求1所述的方法，

所述方法进一步包括：

向提取槽中投入由所述流路型搅拌机回收的含有银盐的水溶液和有机溶剂而使它们接触；和

回收与含有该银盐的水溶液接触的该有机溶剂，

其中，同时进行含有该银盐的水溶液向该提取槽中的投入和该有机溶剂的回收。

3.权利要求1或2所述的方法，其中，与所述原料液接触的含有银盐的水溶液的回收包括：由该流路型搅拌机回收含有所述银盐的水溶液与所述原料液的混合液，接着，从回收的该混合液中分取含有该银盐的水溶液。

4.权利要求2或3所述的方法，其中，与含有所述银盐的水溶液接触的有机溶剂的回收包括：由该提取槽回收含有所述银盐的水溶液与所述有机溶剂的混合液，接着，从回收的该混合液中分取该有机溶剂。

5.权利要求1~4中任一项所述的方法，其中，所述方法进一步包括：再次向流路型搅拌机中投入由所述流路型搅拌机回收后的所述原料液。

6.权利要求1~5中任一项所述的方法，其中，含有所述银盐的水溶液向所述流路型搅拌机中的投入、与所述原料液的接触、和由该流路型搅拌机的回收在低氧条件下进行。

7.权利要求1~6中任一项所述的方法，其中，所述流路型搅拌机中的含有所述银盐的水溶液的线速度为0.5cm/秒以上。

8.权利要求1~7中任一项所述的方法，其中，所述流路型搅拌机的内径为0.1~100cm，长度为0.05~10m。

9.权利要求1~8中任一项所述的方法，其中，所述流路型搅拌机中的含有所述银盐的水溶液的滞留时间为0.02~300秒。

10.权利要求1~9中任一项所述的方法，其中，与所述原料液接触时的含有所述银盐的水溶液的温度为5~30℃。

11.权利要求2~10中任一项所述的方法，其中，所述提取槽为流路型搅拌机。

12.权利要求11所述的方法，所述提取槽中的含有所述银盐的水溶液的线速度为0.5cm/秒以上。

13.权利要求11或12所述的方法，其中，所述提取槽的内径为0.1~100cm，长度为0.05~10m。

14.权利要求11~13中任一项所述的方法，其中，所述提取槽中的含有所述银盐的水溶液的滞留时间为0.02~300秒。

15.权利要求2~14中任一项所述的方法，其中，与所述有机溶剂接触时的含有所述银盐的水溶液的温度为30~80℃。

16.权利要求1~15中任一项所述的方法，其中，所述含有高度不饱和脂肪酸的烷基酯的原料液的氧化指标为POV 10以下或AV 0.3以下。

17.权利要求1~16中任一项所述的方法，其中，所述高度不饱和脂肪酸含有二十碳五烯酸或二十二碳六烯酸。

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