CN110679457A - 一种提高本氏烟组培苗移栽成活率的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种提高本氏烟组培苗移栽成活率的方法，其特征在于包括以下步骤：将生根2‑3周的本氏烟组培苗，从组培瓶中取出后用流水冲洗以去除根部培养基；将种植土浇透水后将种植土放入在培养盆中；将处理后的本氏烟组培苗移栽至培养盆的种植土中，然后将培养盆移入人工培养箱或人工气候室进行第一次过渡培养7‑10天；第一次过渡培养后的本氏烟组培苗移出人工培养箱或人工气候室，置于室内采光通风处，保持土壤湿润，进行第二次过渡培养3‑5天；第二次过渡培养后，将生长健壮的组培苗移置正常露天环境下，按常规进行浇水和施肥管理。本发明方法本氏烟组培苗的过渡培养，经人工培养箱、室内过渡，直接进行室外移栽，减少工作步骤，加快移栽过程，显著提高移栽成活率。

Description

一种提高本氏烟组培苗移栽成活率的方法
技术领域
本发明属于植物繁育培养技术领域，具体涉及一种提高本氏烟组培苗移栽成活率的室外移栽方法。
背景技术
本氏烟(Nicotiana benthamiana)为茄科(Solanaceae)烟草属(Nicotiana)一年生或多年生的植物，本氏烟是当前植物基因工程育种中重要的模式植物。首先，本氏烟是植物病毒学中应用最广泛的实验寄主，其主要原因是能够成功感染烟草的植物病毒种类繁多。此外，本氏烟对多种其他植物病原体(如细菌、卵菌、真菌等)敏感，这使得该物种成为宿主病原体研究的基石，特别是在先天免疫和防御信号的背景下。最主要的是由于它可以进行基因转化和再生，具有良好的效率，并易于病毒诱导的基因沉默或瞬时蛋白表达的方法，本氏烟在植物生物学中迅速流行起来，特别是应用在蛋白亚细胞定位、植物蛋白质表达和基因功能验证等研究中。
近年来，本氏烟作为一种模式植物被广泛地应用于异源基因功能验证的实验中，本氏烟的转化方法是利用农杆菌介导的叶盘法导入外源基因，诱导产生抗性愈伤组织，并继代筛选出抗性植株，整个过程需要在严格抑菌、控温、控湿的室内进行，而抗性小苗也一直需要在组培瓶中培养。当从瓶内无菌环境中移栽到室外有菌环境培养时，由于外界温度、湿度、病菌的影响，组培小苗移栽到室外成活率很低，从而导致前期工作前功尽弃，后续工作也会受到严重影响。因此，本氏烟组培苗室外过渡培养、移栽在植物基因工程领域中是一项关键性基础工作。
目前，在对烟草组培苗进行练苗移栽的过程中，往往需要对组培苗进行复杂的灭菌工作，如多菌灵溶液浸泡，反复无菌水冲洗等，忽略了对组培苗的保护，使组培苗在灭菌后受到不等程度的伤害，导致移栽成活率并不高，影响实验进展。同时灭菌、练苗过程繁琐，使移栽时间过长，影响了组培苗的生长过程。将组培苗移栽至室外，虽是进入有菌环境，但不应一味地对组培苗进行反复灭菌来达到抑菌的效果，应通过提高对组培苗的保护，使其生长健壮以抵抗病菌侵害。
本发明可不经过前期开瓶口膜的炼苗处理，开盖处理过程中容易造成组培小苗叶片和根失水，而降低成活率。本发明采用直接开盖，洗去培养基后，即种植到种植土中，不对组培苗进行反复灭菌，而是尽量保护组培小苗少受伤害，使其生长健壮以抵抗病菌侵害。在人工培养箱中进行过渡培养7-10天，人工培养箱中湿度、温度适宜，并且与外界环境相对隔离，病菌较少，极利于组培小苗的过渡生长。再经室内适应培养3-5天后，即可移于正常露天环境下。本发明可显著提高本氏烟组培苗室外移栽的成活率，达97.5～100％，简化了移栽过程，极大地减小了工作量，节约时间和成本，2周左右即可完成从移苗、过渡培养到室外移栽的过程。
发明内容
为了解决上述存在的技术问题，本发明采用了以下方案：
一种提高本氏烟组培苗移栽成活率的方法，其特征在于包括以下步骤：
S1.将生根2-3周的本氏烟组培苗，从组培瓶中取出后用流水冲洗以去除根部培养基；
S2.将种植土浇透水后将种植土放入在培养盆中；
S3.将步骤S1处理后的本氏烟组培苗移栽至培养盆的种植土中，然后将培养盆移入人工培养箱或人工气候室进行第一次过渡培养7-10天；
S4.步骤S3第一次过渡培养后的本氏烟组培苗移出人工培养箱或人工气候室，置于室内采光通风处，保持土壤湿润，进行第二次过渡培养3-5天；
S5.步骤S4第二次过渡培养后，将生长健壮的组培苗移置正常露天环境下，按常规进行浇水和施肥管理。
所述的提高本氏烟组培苗移栽成活率的方法，其特征在于：所述步骤S1中的本氏烟组培苗的根长2-3cm、生长健壮。
所述的提高本氏烟组培苗移栽成活率的方法，其特征在于：所述种植土包括二份泥炭土，一份珍珠岩和一份蛭石。
所述的提高本氏烟组培苗移栽成活率的方法，其特征在于：所述步骤S3中人工培养箱或人工气候室条件为：光照6000Lx，温度21-25℃，湿度70-90％RH。
所述的提高本氏烟组培苗移栽成活率的方法，其特征在于：所述步骤33-S4中第一次过渡培养的标准为本氏烟组培苗长出新叶2-3片，生长健壮。
该提高本氏烟组培苗移栽成活率的方法具有以下有益效果：
本发明通过不进行灭菌，增加对组培苗的保护使其健壮生长的方法，充分利用人工培养箱环境相对隔离、病菌较少，温湿度易控制的特点，利用人工培养箱进行本氏烟组培苗的过渡培养，并经过室内过渡后，直接进行室外移栽，既减少了工作步骤，加快移栽过程，同时也显著提高移栽成活率。
附图说明
图1：本发明中步骤一的示意图；
图2：本发明中步骤二的培植土示意图及步骤三和步骤四的组培苗移栽示意图；
图3：本发明步骤三中人工培养箱一次过渡培养示意图；
图4：本发明步骤四中室内采光处二次过渡培养示意图；
图5：本发明提高本氏烟组培苗移栽成活率的方法各步骤示意图。
具体实施方式
下面结合附图，对本发明的具体实施方式作进一步详述，使本发明技术方案更易于理解和掌握。
结合图1-图5，本发明的操作步骤为：
1.将生根2-3周(根长2-3cm)、生长健壮的本氏烟组培苗，从组培瓶中取出，流水冲洗，去除根部培养基(注意适当清洗，不要过度伤害组培苗，可保留少量培养基，但要尽量减少对组培苗的伤害)。
2.配置种植土(泥炭土：珍珠岩：蛭石＝2:1:1)，浇透水。如人工培养箱空间有限，或移栽组培苗数量较多需要空间较大时，执行步骤3，若具有体积足够的人工培养箱或人工气候室，执行步骤4。
3.将种植土放入1号小培养盆(推荐7cm*7cm*10cm即可)中，将去除培养基的本氏烟组培苗移栽至种植土中，根部适当压紧，对枯叶、烂叶进行修剪(防止感染病菌)后，放入人工培养箱(光照6000Lx，温度25℃，湿度90％，湿度不可太低，要保持在90％左右或以上)中过渡培养，期间注意浇水，保持土壤湿润。
4.将种植土直接放入2号大培养盆(推荐直径14cm左右)中，将去除培养基的本氏烟组培苗移栽至种植土中，根部适当压紧，对枯叶、烂叶进行修剪(防止感染病菌)后，放入人工培养箱(光照6000Lx，温度25℃，湿度90％)进行过渡培养，注意浇水，保持土壤湿润。
5.过渡培养7-10天(以本氏烟组培苗长出新叶2-3片，生长健壮为标准)，将步骤3的本氏烟组培苗连同其种植土一起移入2号大培养盆(步骤4的组培苗可直接移出，无需换盆)，移出人工培养箱，至于室内采光通风处，保持土壤湿润，进行二次过渡培养3-5天。
6.两次过渡培养后，便可生长健壮的组培苗移置正常露天环境下，按常规进行浇水、施肥管理即可。
实施例1
将生根2-3周(根长2-3cm)、生长健壮的本氏烟组培苗放置在人工培养箱中进行一次过渡培养，第一次过渡培养的时间为12天，培养箱的环境温度为21℃，湿度为70％RH，光照6000Lx。然后从人工培养箱中移出，至于室内采光通风处，保持土壤湿润，进行二次过渡培养7天。两次过渡培养后，将可生长健壮的组培苗移置正常露天环境下，按常规进行浇水、施肥管理，然后统计移栽成活率。
实施例2
将生根2-3周(根长2-3cm)、生长健壮的本氏烟组培苗放置在人工培养箱中进行一次过渡培养，第一次过渡培养的时间为10天，培养箱的环境温度为21℃，湿度为70％RH，光照6000Lx。然后从人工培养箱中移出，至于室内采光通风处，保持土壤湿润，进行二次过渡培养7天。两次过渡培养后，将可生长健壮的组培苗移置正常露天环境下，按常规进行浇水、施肥管理，然后统计移栽成活率。
实施例3
将生根2-3周(根长2-3cm)、生长健壮的本氏烟组培苗放置在人工培养箱中进行一次过渡培养，第一次过渡培养的时间为10天，培养箱的环境温度为21℃，湿度为80％RH，光照6000Lx。然后从人工培养箱中移出，至于室内采光通风处，保持土壤湿润，进行二次过渡培养5天。两次过渡培养后，将可生长健壮的组培苗移置正常露天环境下，按常规进行浇水、施肥管理，然后统计移栽成活率。
实施例4
将生根2-3周(根长2-3cm)、生长健壮的本氏烟组培苗放置在人工培养箱中进行一次过渡培养，第一次过渡培养的时间为10天，培养箱的环境温度为21℃，湿度为90％RH，光照6000Lx。然后从人工培养箱中移出，至于室内采光通风处，保持土壤湿润，进行二次过渡培养5天。两次过渡培养后，将可生长健壮的组培苗移置正常露天环境下，按常规进行浇水、施肥管理，然后统计移栽成活率。
实施例5
将生根2-3周(根长2-3cm)、生长健壮的本氏烟组培苗放置在人工培养箱中进行一次过渡培养，第一次过渡培养的时间为12天，培养箱的环境温度为25℃，湿度为70％RH，光照6000Lx。然后从人工培养箱中移出，至于室内采光通风处，保持土壤湿润，进行二次过渡培养7天。两次过渡培养后，将可生长健壮的组培苗移置正常露天环境下，按常规进行浇水、施肥管理，然后统计移栽成活率。
实施例6
将生根2-3周(根长2-3cm)、生长健壮的本氏烟组培苗放置在人工培养箱中进行一次过渡培养，第一次过渡培养的时间为10天，培养箱的环境温度为25℃，湿度为80％RH，光照6000Lx。然后从人工培养箱中移出，至于室内采光通风处，保持土壤湿润，进行二次过渡培养5天。两次过渡培养后，将可生长健壮的组培苗移置正常露天环境下，按常规进行浇水、施肥管理，然后统计移栽成活率。
实施例7
将生根2-3周(根长2-3cm)、生长健壮的本氏烟组培苗放置在人工培养箱中进行一次过渡培养，第一次过渡培养的时间为10天，培养箱的环境温度为25℃，湿度为90％RH，光照6000Lx。然后从人工培养箱中移出，至于室内采光通风处，保持土壤湿润，进行二次过渡培养5天。两次过渡培养后，将可生长健壮的组培苗移置正常露天环境下，按常规进行浇水、施肥管理，然后统计移栽成活率。
实施例8
将生根2-3周(根长2-3cm)、生长健壮的本氏烟组培苗放置在人工培养箱中进行一次过渡培养，第一次过渡培养的时间为9天，培养箱的环境温度为25℃，湿度为90％RH，光照6000Lx。然后从人工培养箱中移出，至于室内采光通风处，保持土壤湿润，进行二次过渡培养4天。两次过渡培养后，将可生长健壮的组培苗移置正常露天环境下，按常规进行浇水、施肥管理，然后统计移栽成活率。
实施例9
将生根2-3周(根长2-3cm)、生长健壮的本氏烟组培苗放置在人工培养箱中进行一次过渡培养，第一次过渡培养的时间为8天，培养箱的环境温度为25℃，湿度为90％RH，光照6000Lx。然后从人工培养箱中移出，至于室内采光通风处，保持土壤湿润，进行二次过渡培养3天。两次过渡培养后，将可生长健壮的组培苗移置正常露天环境下，按常规进行浇水、施肥管理，然后统计移栽成活率。
实施例10
将生根2-3周(根长2-3cm)、生长健壮的本氏烟组培苗放置在人工培养箱中进行一次过渡培养，第一次过渡培养的时间为7天，培养箱的环境温度为25℃，湿度为90％RH，光照6000Lx。然后从人工培养箱中移出，至于室内采光通风处，保持土壤湿润，进行二次过渡培养5天。两次过渡培养后，将可生长健壮的组培苗移置正常露天环境下，按常规进行浇水、施肥管理，然后统计移栽成活率。
试验结果见表1。
表1不同试验条件移栽成活率
Figure BDA0002273369560000061
从试验结果可知，通过本发明提供的培苗移栽方法，利用人工培养箱进行本氏烟组培苗的过渡培养，并经过室内过渡后，直接进行室外移栽，既减少了工作步骤，加快移栽过程，同时也显著提高移栽成活率。

Claims (5)

1.一种提高本氏烟组培苗移栽成活率的方法，其特征在于包括以下步骤：
S1.将生根2-3周的本氏烟组培苗，从组培瓶中取出后用流水冲洗以去除根部培养基；
S2.将种植土浇透水后将种植土放入在培养盆中；
S3.将步骤S1处理后的本氏烟组培苗移栽至培养盆的种植土中，然后将培养盆移入人工培养箱或人工气候室进行第一次过渡培养7-10天；
S4.步骤S3第一次过渡培养后的本氏烟组培苗移出人工培养箱或人工气候室，置于室内采光通风处，保持土壤湿润，进行第二次过渡培养3-5天；
S5.步骤S4第二次过渡培养后，将生长健壮的组培苗移置正常露天环境下，按常规进行浇水和施肥管理。
2.根据权利要求1所述的提高本氏烟组培苗移栽成活率的方法，其特征在于：所述步骤S1中的本氏烟组培苗的根长2-3cm、生长健壮。
3.根据权利要求1所述的提高本氏烟组培苗移栽成活率的方法，其特征在于：所述种植土包括二份泥炭土，一份珍珠岩和一份蛭石。
4.根据权利要求1所述的提高本氏烟组培苗移栽成活率的方法，其特征在于：所述步骤S3中人工培养箱或人工气候室条件为：光照6000Lx，温度21-25℃，湿度70-90%RH。
5.根据权利要求1所述的提高本氏烟组培苗移栽成活率的方法，其特征在于：所述步骤33-S4中第一次过渡培养的标准为本氏烟组培苗长出新叶2-3片，生长健壮。
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GR01 Patent grant
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