CN104920048A - 一种提高烟草k326组培苗移栽成活率的炼苗过渡方法 - Google Patents

一种提高烟草k326组培苗移栽成活率的炼苗过渡方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开一种提高烟草K326组培苗移栽成活率的炼苗过渡方法，将已生根的烟草K326组培苗经三段炼苗处理，同时对盆土烫土消毒杀菌，再将组培苗去除根部培养基，全株浸泡在多菌灵液中消毒，然后用水冲洗，再将组培苗移栽至消毒后盆土中，在室内生长成活壮苗后，进行分株移栽至未经消毒的盆土中，再成长后移置于室外遮阳处继续生长数周，最后移于正常露天环境下，按常规进行浇水、施肥管理，即完成烟草K326组培苗的炼苗过渡。本发明能大大提高烟草转基因组培小苗室外移栽后的成活率，达96.7～100%，降低工作量，节约时间和能耗，也节约了成本。通过本发明可以缩短炼苗时间，在一周内即可完成从炼苗、消毒到移栽上盆等过程。

Description

一种提高烟草K326组培苗移栽成活率的炼苗过渡方法
技术领域
本发明涉及一种提高烟草K326组培苗移栽成活率的炼苗过渡方法，属于植物繁育培养技术领域。
背景技术
烟草（Nicotiana tabacum）为茄科（Solanaceae）烟草属（Nicotiana）一年生或多年生的重要经济作物，烟草由于具有易于组织培养和转化效率高等原因，成为当前植物基因工程领域中重要的模式植物。烟草K326品种自1985年从美国引进我国云南，其优点是香气品质和香气量上均优于其它烟草品种，是我国目前推广种植面积最大的品种，也被广泛用做植物基因功能验证中的重要模式植物之一。
烟草作为一种模式植物被广泛地应用于外源基因功能验证的试验中，由于烟草在进行外源基因功能验证过程中，常常是利用叶盘法通过农杆菌介导导入外源基因后诱导抗性愈伤组织产生直至生出抗性小苗，这个过程一般都是在严格控温抑菌的室内组织瓶内进行，所以抗性烟草组培小苗从室内无菌环境中移栽到室外并生长的过程中由于外界温度、湿度、病菌的种种因素的影响，组培小苗移栽后室外成活率很低，甚至一批移栽苗会全部死亡，进而影响后续工作的顺利进行。所以烟草转基因组培苗室外炼苗过渡过程是植物基因工程领域中基因功能验证工作中的一个重要环节。
目前，在进行烟草K326组培苗一般的室外炼苗过渡过程中，常常仅进行室内的简单粗放的炼苗过程，以及仅仅用一定浓度的多菌灵等杀菌剂进行一定时间的杀菌处理，由于在室内炼苗阶段组培小苗没有经过一个持续的、逐渐过渡的炼苗过程，或多菌灵等杀菌剂对栽培土等外界环境中的病菌杀灭效果不彻底，或由于移栽过程操作不规划以及后期烟草组培苗刚刚移栽上盆后初期阶段管理问题，所以以往的烟草转基因组培苗在从组培室转移出后，进行炼苗过渡过程及移栽后，往往造成烟草小苗死亡率过高，成活率不超过70%，严重的甚至整批苗移栽全部死亡。
发明内容
为提高转基因烟草组培苗移栽后在室外环境下的成活率，简化炼苗过渡程序，降低成本，本发明提供一种提高烟草K326组培苗移栽成活率的炼苗过渡方法。
本发明通过下列技术方案完成：一种提高烟草K326组培苗移栽成活率的炼苗过渡方法，其特征在于经过下列各步骤：
步骤A，炼苗处理：将已生根2cm的烟草K326组培苗置于白天最高温度不超过30℃、夜晚最低温度不低于10℃的室内2天，然后将揭瓶口膜一半后，再在相同环境下放置2天，之后完全揭开瓶口膜后在相同环境下再放置2天，对烟草K326组培苗进行选壮去弱；
步骤B，盆土消毒：用沸水浇灌盆土进行烫土消毒杀菌，自然降至室温备用；
步骤C，组培苗消毒清洗：将步骤A炼苗处理后的烟草K326组培苗去除根部培养基，以水冲洗2～3次后，再将烟草K326组培苗的植株全株浸泡在0.3～0.5%浓度的多菌灵液中5～10分钟进行消毒，然后用水将烟草K326组培苗冲洗2～3次以去除多菌灵；
步骤D，移栽上盆：将步骤C所得烟草K326组培苗移栽至步骤B中的盆土中；
步骤E，分株移栽：将步骤D移栽上盆后的烟草K326组培苗放置在室内通风散光处，避免极端温度，保持土壤湿润，生长5～6周，待烟草K326组培苗成活壮苗后，即进行分株移栽至未经消毒的盆土中，再在同样的环境下成长4～5周，然后将盆土移置于室外树荫下或遮阳处继续生长3～4周，再将盆土移置于正常露天环境下，按常规进行浇水、施肥管理，即完成烟草K326组培苗的炼苗过渡。
所述步骤A的选壮去弱是剔除根系短甚至无根、叶片发黄、植株矮小的弱苗或畸形苗。
所述步骤B的烫土消毒杀菌是每次用足量沸水浇灌盆土，使沸水从盆土底部排水孔流出，每个盆土烫土消毒杀菌2～3次，每次间隔不超过10分钟。
所述步骤B的盆土是腐植土与红土按体积比为1:1的混合物。
所述步骤C的去除根部培养基是将组培瓶口向下倾斜45度，将炼苗处理后的烟草K326组培苗及培养基一同取出，再小心去除培养基，避免损伤弄断烟草组培小苗根系。
所述步骤D的移栽是先用干净无菌的小竹片插入到湿润的盆土中，挖出深5cm的小坑，再将烟草K326组培苗的根部放入小坑中，用竹片轻轻压实烟草K326组培苗的根部土壤，移栽时的株距控制以30cm直径的盆土中移栽4～5株烟草K326组培苗为宜。
所述步骤E的盆土是腐植土与红土按体积比为1:1的混合物。
所述步骤E的盆土的直径为30cm。
本发明具有下列优点和效果：本发明采用多段炼苗处理、盆土消毒、组培苗消毒清洗、移栽上盆及分株移栽等步骤，通过各步骤的有效操作，能大大提高烟草转基因组培小苗室外移栽后的成活率，达96.7～100%。以沸水浇灌盆土消毒杀菌的方法，相比药剂拌土（或灌土）杀菌更为彻底，杀菌效果好，不仅可以杀灭盆土中的病原菌，还可杀死盆土中的害虫（卵）、杂草种子等。另外，沸水浇灌消毒相对高压锅蒸土消毒具有用时短、操作简单、耗能低，不会对灭菌锅造成污染等优点。后期移栽过程，先在已经沸水消毒的盆土中多栽种几棵小苗，等移栽后的烟草小苗经过缓苗、成活、壮苗后，再分株直接移栽到未经消毒的盆土中，这样可减少沸水浇灌盆土消毒操作过程，降低工作量，节约时间和能耗，也节约了成本。通过本发明可以缩短炼苗时间，在一周内即可完成从炼苗、消毒到移栽上盆等过程。
具体实施方式
为了更好地说明本发明，下面给出本发明的实施例，但本发明的内容并不仅限于此。
实施例1
步骤A，炼苗处理：将在组培瓶内已生根2cm的烟草K326组培苗从组培室内置于白天最高温度不超过30℃、夜晚最低温度不低于10℃的室内2天，然后将组培瓶封口膜打开一半，再在相同环境下放置2天，之后完全除去组培瓶的封口膜后在相同环境下再放置2天，对烟草K326组培苗进行选壮去弱，剔除根系短甚至无根、叶片发黄、植株矮小的弱苗或畸形苗；
步骤B，盆土消毒：每次用足量沸水浇灌盆土，使沸水从盆土底部排水孔流出，每个盆土烫土消毒杀菌2次，每次间隔不超过10分钟，自然降至室温备用，其中盆土是腐植土与红土按体积比为1:1的混合物；
步骤C，组培苗消毒清洗：将组培瓶口向下倾斜45度，将步骤A炼苗处理后的烟草K326组培苗及培养基一同取出，再小心去除培养基，避免损伤弄断烟草组培小苗根系，以水冲洗2次后，再将烟草K326组培苗的植株全株浸泡在0.3%浓度的多菌灵液中5分钟进行消毒，然后用水将烟草K326组培苗冲洗2次以去除多菌灵；
步骤D，移栽上盆：将步骤C所得烟草K326组培苗移栽至步骤B中的盆土中，先用干净无菌的小竹片插入到湿润的盆土中，挖出深5cm的小坑，再将烟草K326组培苗的根部放入小坑中，用竹片轻轻压实烟草K326组培苗的根部土壤，移栽时的株距控制以30cm直径的盆土中移栽4株烟草K326组培苗为宜；
步骤E，分株移栽：将步骤D移栽上盆后的烟草K326组培苗放置在室内通风散光处，避免极端温度，保持土壤湿润，生长5周，待烟草K326组培苗成活壮苗后，即进行分株移栽至未经消毒的直径为30cm的盆土中，盆土是腐植土与红土按体积比为1:1的混合物；再在同样的环境下成长4周，然后将盆土移置于室外遮阳处继续生长3周，再将盆土移置于正常露天环境下，按常规进行浇水、施肥管理，即完成烟草K326组培苗的炼苗过渡。
实施例2
步骤A，炼苗处理：将在组培瓶内已生根2cm的烟草K326组培苗从组培室内置于白天最高温度不超过30℃、夜晚最低温度不低于10℃的室内2天，然后将组培瓶封口膜打开一半，再在相同环境下放置2天，之后完全除去组培瓶的封口膜后在相同环境下再放置2天，对烟草K326组培苗进行选壮去弱，剔除根系短甚至无根、叶片发黄、植株矮小的弱苗或畸形苗；
步骤B，盆土消毒：每次用足量沸水浇灌盆土，使沸水从盆土底部排水孔流出，每个盆土烫土消毒杀菌3次，每次间隔不超过10分钟，自然降至室温备用，其中盆土是腐植土与红土按体积比为1:1的混合物；
步骤C，组培苗消毒清洗：将组培瓶口向下倾斜45度，将步骤A炼苗处理后的烟草K326组培苗及培养基一同取出，再小心去除培养基，避免损伤弄断烟草组培小苗根系，以水冲洗3次后，再将烟草K326组培苗的植株全株浸泡在0.4%浓度的多菌灵液中8分钟进行消毒，然后用水将烟草K326组培苗冲洗3次以去除多菌灵；
步骤D，移栽上盆：将步骤C所得烟草K326组培苗移栽至步骤B中的盆土中，先用干净无菌的小竹片插入到湿润的盆土中，挖出深5cm的小坑，再将烟草K326组培苗的根部放入小坑中，用竹片轻轻压实烟草K326组培苗的根部土壤，移栽时的株距控制以30cm直径的盆土中移栽5株烟草K326组培苗为宜；
步骤E，分株移栽：将步骤D移栽上盆后的烟草K326组培苗放置在室内通风散光处，避免极端温度，保持土壤湿润，生长6周，待烟草K326组培苗成活壮苗后，即进行分株移栽至未经消毒的直径为30cm的盆土中，盆土是腐植土与红土按体积比为1:1的混合物；再在同样的环境下成长5周，然后将盆土移置于室外树荫下继续生长4周，再将盆土移置于正常露天环境下，按常规进行浇水、施肥管理，即完成烟草K326组培苗的炼苗过渡。
实施例3
步骤A，炼苗处理：将在组培瓶内已生根2cm的烟草K326组培苗从组培室内置于白天最高温度不超过30℃、夜晚最低温度不低于10℃的室内2天，然后将组培瓶封口膜打开一半，再在相同环境下放置2天，之后完全除去组培瓶的封口膜后在相同环境下再放置2天，对烟草K326组培苗进行选壮去弱，剔除根系短甚至无根、叶片发黄、植株矮小的弱苗或畸形苗；
步骤B，盆土消毒：每次用足量沸水浇灌盆土，使沸水从盆土底部排水孔流出，每个盆土烫土消毒杀菌3次，每次间隔不超过10分钟，自然降至室温备用，其中盆土是腐植土与红土按体积比为1:1的混合物；
步骤C，组培苗消毒清洗：将组培瓶口向下倾斜45度，将步骤A炼苗处理后的烟草K326组培苗及培养基一同取出，再小心去除培养基，避免损伤弄断烟草组培小苗根系，以水冲洗2次后，再将烟草K326组培苗的植株全株浸泡在0.5%浓度的多菌灵液中10分钟进行消毒，然后用水将烟草K326组培苗冲洗2次以去除多菌灵；
步骤D，移栽上盆：将步骤C所得烟草K326组培苗移栽至步骤B中的盆土中，先用干净无菌的小竹片插入到湿润的盆土中，挖出深5cm的小坑，再将烟草K326组培苗的根部放入小坑中，用竹片轻轻压实烟草K326组培苗的根部土壤，移栽时的株距控制以30cm直径的盆土中移栽5株烟草K326组培苗为宜；
步骤E，分株移栽：将步骤D移栽上盆后的烟草K326组培苗放置在室内通风散光处，避免极端温度，保持土壤湿润，生长5周，待烟草K326组培苗成活壮苗后，即进行分株移栽至未经消毒的直径为30cm的盆土中，盆土是腐植土与红土按体积比为1:1的混合物；再在同样的环境下成长5周，然后将盆土移置于室外遮阳处继续生长4周，再将盆土移置于正常露天环境下，按常规进行浇水、施肥管理，即完成烟草K326组培苗的炼苗过渡。
对比例1：同实施例1，仅省略步骤A。
对比例2：同实施例1，仅省略步骤A的揭膜操作，具体为将在组培瓶内已生根2cm的烟草K326组培苗从组培室内置于白天最高温度不超过30℃、夜晚最低温度不低于10℃的室内6天，对烟草K326组培苗进行选壮去弱，剔除根系短甚至无根、叶片发黄、植株矮小的弱苗或畸形苗。
对比例3：同实施例1，仅在步骤A时直接揭膜一半，具体为将在组培瓶内已生根2cm的烟草K326组培苗从组培室内置于白天最高温度不超过30℃、夜晚最低温度不低于10℃的室内，并将组培瓶封口膜打开一半放置3天，之后完全除去组培瓶的封口膜后在相同环境下再放置3天，对烟草K326组培苗进行选壮去弱，剔除根系短甚至无根、叶片发黄、植株矮小的弱苗或畸形苗。
对比例4：同实施例1，仅将步骤B替换为药剂拌土杀菌。
对比例5：同实施例1，仅将步骤B替换为浓度0.2%的多菌灵药剂灌土杀菌。
对比例6：同实施例1，仅将步骤B替换高压锅蒸土消毒。
对比例7：同实施例1，仅将步骤E的未经消毒的盆土替换为经沸水浇灌杀菌后的盆土，即进行分株移栽至已消毒的盆土。

Claims (8)

1.一种提高烟草K326组培苗移栽成活率的炼苗过渡方法，其特征在于经过下列各步骤：
步骤A，炼苗处理：将已生根2cm的烟草K326组培苗置于白天最高温度不超过30℃、夜晚最低温度不低于10℃的室内2天，然后将揭瓶口膜一半后，再在相同环境下放置2天，之后完全揭开瓶口膜后在相同环境下再放置2天，对烟草K326组培苗进行选壮去弱；
步骤B，盆土消毒：用沸水浇灌盆土进行烫土消毒杀菌，自然降至室温备用；
步骤C，组培苗消毒清洗：将步骤A炼苗处理后的烟草K326组培苗去除根部培养基，以水冲洗2～3次后，再将烟草K326组培苗的植株全株浸泡在0.3～0.5%浓度的多菌灵液中5～10分钟进行消毒，然后用水将烟草K326组培苗冲洗2～3次以去除多菌灵；
步骤D，移栽上盆：将步骤C所得烟草K326组培苗移栽至步骤B中的盆土中；
步骤E，分株移栽：将步骤D移栽上盆后的烟草K326组培苗放置在室内通风散光处，保持土壤湿润，生长5～6周，待烟草K326组培苗成活壮苗后，即进行分株移栽至未经消毒的盆土中，再在同样的环境下成长4～5周，然后将盆土移置于室外遮阳处继续生长3～4周，再将盆土移置于正常露天环境下，按常规进行浇水、施肥管理，即完成烟草K326组培苗的炼苗过渡。
2.根据权利要求1所述的炼苗过渡方法，其特征在于：所述步骤A的选壮去弱是剔除根系短甚至无根、叶片发黄、植株矮小的弱苗或畸形苗。
3.根据权利要求1所述的炼苗过渡方法，其特征在于：所述步骤B的烫土消毒杀菌是每次用足量沸水浇灌盆土，使沸水从盆土底部排水孔流出，每个盆土烫土消毒杀菌2～3次，每次间隔不超过10分钟。
4.根据权利要求1所述的炼苗过渡方法，其特征在于：所述步骤B的盆土是腐植土与红土按体积比为1:1的混合物。
5.根据权利要求1所述的炼苗过渡方法，其特征在于：所述步骤C的去除根部培养基是将组培瓶口向下倾斜45度，将炼苗处理后的烟草K326组培苗及培养基一同取出，再小心去除培养基。
6.根据权利要求1所述的炼苗过渡方法，其特征在于：所述步骤D的移栽是先挖出深5cm的小坑，再将烟草K326组培苗的根部放入小坑中，压实烟草K326组培苗的根部土壤，移栽时的株距控制以30cm直径的盆土中移栽4～5株烟草K326组培苗为宜。
7.根据权利要求1所述的炼苗过渡方法，其特征在于：所述步骤E的盆土是腐植土与红土按体积比为1:1的混合物。
8.根据权利要求1所述的炼苗过渡方法，其特征在于：所述步骤E的盆土的直径为30cm。
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