CN110672842A - 一种竞争法抗原检测方法及试纸 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种竞争法抗原检测方法及试纸。其中,该方法包括:通过第一试剂向乙醇溶液溶解,制备第一溶液;以及通过第二试剂向乙醇溶液溶解,制备第二溶液;将第一溶液、第二溶液与荧光原料液进行混合,得到第一混合溶液;将第一混合溶液中的上清液排除,并利用超声波对所述第一混合溶液进行超声分散处理,得到活化荧光原料液;用活化荧光原料液标记检测抗体;根据标记后的检测抗体,制备包被抗体;将待测样品与检测抗体和包被抗体结合;收集检测抗体发出的荧光信号强度。本发明解决了活化荧光原料的步骤,往往采用人工操持溶液试管或烧杯进行摇匀,其摇匀的效果往往不佳,造成混合不够均匀充分,导致交联抗体后的微球发生团聚,微球跑条带变得很差的技术问题。
Description
技术领域
本发明涉及生物检测领域,具体而言,涉及一种竞争法抗原检测方法及试纸。
背景技术
随着新型实验手段的不断发展,在生物检测领域利用超声波超声装置对溶液进行处理,代替以往人工混合均匀的步骤。目前,生物检测领域技术人员在进行抗原检测的时候,往往利用双抗体竞争法进行检测,双抗体竞争法进行抗原检测具有高精准度、便操作性等优点,备受生物检测领域技术人员的青睐。
竞争法检测抗原指的是当小分子抗原或半抗原因缺乏可作夹心法的两个以上的抗体结合位点,不能用传统双抗体夹心法进行测定,而采用竞争法模式。经洗涤后分成两组:一组加酶标记抗原和被测抗原的混合液,而另一组只加酶标记抗原,再经孵育洗涤后加底物显色,这两组底物降解量之差,即为所要测定的未知抗原的量。小分子激素、药物等ELISA测定多用此法。但是在双抗体竞争法检测过程中,对于活化荧光原料的步骤,往往采用人工操持溶液试管或烧杯进行摇匀,其摇匀的效果往往不佳,造成混合不够均匀充分,导致交联抗体后的微球发生团聚,微球跑条带变得很差。
针对上述的问题,目前尚未提出有效的解决方案。
发明内容
本发明实施例提供了一种竞争法抗原检测方法及试纸,以至少解决活化荧光原料的步骤,往往采用人工操持溶液试管或烧杯进行摇匀,其摇匀的效果往往不佳,造成混合不够均匀充分,导致交联抗体后的微球发生团聚,微球跑条带变得很差的技术问题。
根据本发明实施例的一个方面,提供了一种竞争法抗原检测方法,包括:通过第一试剂向乙醇溶液溶解,制备第一溶液;以及通过第二试剂向乙醇溶液溶解,制备第二溶液;将第一溶液、第二溶液与荧光原料液进行混合,得到第一混合溶液;将第一混合溶液中的上清液排除,并利用超声波对所述第一混合溶液进行超声分散处理,得到活化荧光原料液;用活化荧光原料液标记检测抗体;根据标记后的检测抗体,制备包被抗体;将待测样品与检测抗体和包被抗体结合;收集检测抗体发出的荧光信号强度。
可选地,在通过第一试剂向乙醇溶液溶解,制备第一溶液之前,所述方法还包括:将荧光原料进行超声分散;向分散后的荧光原料加入超纯水进行稀释,得到荧光原料液。
可选地,在将第一混合溶液中的上清液排除,并利用超声波对第一混合溶液进行超声分散处理,得到活化荧光原料液之前,所述方法还包括:将第一混合溶液进行超声波超声处理;将超声处理后的第一混合溶液进行离心。
可选地,将第一溶液、第二溶液与荧光原料液进行混合,得到第一混合溶液包括:将第一溶液加入荧光原料液,并充分混合至均匀,得到第二混合溶液;向第二混合溶液中加入第二溶液,并充分混合至均匀,得到第三混合溶液;将第三混合溶液在常温下静置第一预设时间,得到第一混合溶液。
可选地,将第一混合溶液中的上清液排除,并利用超声波对第一混合溶液进行超声分散处理,得到活化荧光原料液包括:倒掉第一混合溶液中的上清液,得到第四混合溶液;向第四混合溶液中加入超纯水,得到第五混合溶液;将第五混合溶液进行超声波超声处理,得到活化荧光原料液。
可选地,用活化荧光原料液标记检测抗体包括:将检测抗体加入活化荧光原料液中;将牛血清蛋白加入活化荧光原料液中,得到被活化荧光原料液标记好的检测抗体。
可选地,在将检测抗体加入活化荧光原料液中之后,所述方法还包括:将加入了检测抗体的活化荧光原料液静置第二预设时间;用超声波超声处理静止了第二预设时间后的活化荧光原料液,并在超声处理后继续静置第三预设时间。
可选地,将牛血清蛋白加入活化荧光原料液中,得到被活化荧光原料液标记好的检测抗体包括:向加入了检测抗体的活化荧光原料液中加入牛血清蛋白,并封闭第四预设时间;将封闭第四预设时间后的活化荧光原料液进行离心处理;向经过离心处理后的活化荧光原料液加入保存液。
可选地,根据标记后的检测抗体,制备包被抗体包括:用检测抗体的抗原制备包被液;根据包被液,制作包被垫,形成固相包被抗体。
可选地,所述荧光信号强度与待测样品中的抗原数量成线性正比关系。
根据本发明实施例的另一方面,还提供了一种竞争法抗原检测试纸,根据上述一种竞争法抗原检测方法制作而成,用于检测待测样品中抗原的数量。
在本发明实施例中,采用制备活化荧光标记物来标记检测抗体以及利用包被抗体和检测抗体,与待测抗原结合检测的方式,通过超声波超声处理,达到了使得活化荧光原料液分散均匀的目的,从而实现了交联抗体后的微球不发生团聚,微球跑条带不会变差的技术效果,进而解决了活化荧光原料的步骤,往往采用人工操持溶液试管或烧杯进行摇匀,其摇匀的效果往往不佳,造成混合不够均匀充分,导致交联抗体后的微球发生团聚,微球跑条带变得很差的技术问题。
附图说明
此处所说明的附图用来提供对本发明的进一步理解,构成本申请的一部分,本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明,并不构成对本发明的不当限定。在附图中:
图1是根据本发明实施例的一种竞争法抗原检测方法的流程图。
具体实施方式
为了使本技术领域的人员更好地理解本发明方案,下面将结合本发明实施例中的附图,对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分的实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都应当属于本发明保护的范围。
需要说明的是,本发明的说明书和权利要求书及上述附图中的术语“第一”、“第二”等是用于区别类似的对象,而不必用于描述特定的顺序或先后次序。应该理解这样使用的数据在适当情况下可以互换,以便这里描述的本发明的实施例能够以除了在这里图示或描述的那些以外的顺序实施。此外,术语“包括”和“具有”以及他们的任何变形,意图在于覆盖不排他的包含,例如,包含了一系列步骤或单元的过程、方法、系统、产品或设备不必限于清楚地列出的那些步骤或单元,而是可包括没有清楚地列出的或对于这些过程、方法、产品或设备固有的其它步骤或单元。
根据本发明实施例,提供了一种竞争法抗原检测方法的实施例,需要说明的是,在附图的流程图示出的步骤可以在诸如一组计算机可执行指令的计算机系统中执行,并且,虽然在流程图中示出了逻辑顺序,但是在某些情况下,可以以不同于此处的顺序执行所示出或描述的步骤。
图1是根据本发明实施例的一种竞争法抗原检测方法,如图1所示,该方法包括如下步骤:
步骤S102,通过第一试剂向乙醇溶液溶解,制备第一溶液。
具体地,第一试剂可以选择氧化示踪性较强的N-羟基琥珀酰亚胺(NHS),上述第一试剂的应用,其反应稳定度高、速度快,适合配置多试剂的混合功能性溶液,所以经过该试剂与溶解专用试剂混合之后,即可配置成第一溶液。例如,可以称取50mg的N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)用乙醇溶解,配制成浓度为50mg/ml的溶液。
需要说明的是,用于溶解第一试剂的溶剂可以是乙醇或其他亲水性无机溶剂,由于其作用主要是将试剂进行溶解分散,所以在此并不做具体的限定。
可选地,在通过第一试剂向乙醇溶液溶解,制备第一溶液之前,所述方法还包括:将荧光原料进行超声分散;向分散后的荧光原料加入超纯水进行稀释,得到荧光原料液。
具体地,在通过第一试剂向乙醇溶液溶解,制备第一溶液之前,需要将购买的荧光原料进行处理,荧光原料可以是荧光乳胶微球,将该荧光乳胶微球进行超声波装置的超声处理后,荧光乳胶微球会发生散失效应,即以离散状态分散于容器的边缘,然后向容器中加入一定量的超纯水进行稀释,搅拌均匀后得到荧光原料液。例如,先将购买的荧光乳胶微球用超声波清洗仪进行超声分散,并结合操作人员的手工措施进行摇匀,其中,超声分散的时间大约为1min,使荧光乳胶微球分散均匀后,取100ul固含为1%的荧光乳胶微球悬浮液,用超纯水稀释10倍,即稀释后的体积为1000ul,加入到试管中以备后续处理用。
需要说明的是,荧光乳胶微球是用于免疫层析技术的优选荧光原料,由于其价格低、荧光反应环境要求较低、荧光光度高等特点,被本发明实施例选择为荧光原料。另外,本发明实施例利用超纯水进行稀释,由于超纯水(UItrapure water)又称UP水,是指电阻率达到18MΩ*cm(25℃)的水。这种水中除了水分子外,几乎没有什么杂质,更没有细菌、病毒、含氯二噁英等有机物,当然也没有人体所需的矿物质微量元素,也就是几乎去除氧和氢以外所有原子的水。可以用于超纯材料(半导体原件材料、纳米精细陶瓷材料等)应用蒸馏、去离子化、反渗透技术或其它适当的超临界精细技术的制备过程。
步骤S104,通过第二试剂向乙醇溶液溶解,制备第二溶液。
具体地,第二试剂可以选择还原示踪性较强的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC),上述第二试剂的应用,其反应稳定度高、速度快,适合配置多试剂的混合功能性溶液,所以经过该试剂与溶解专用试剂混合之后,即可配置成第二溶液。例如,可以称取50mg的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)用乙醇溶解,配制成浓度为50mg/ml的溶液。
需要说明的是,用于溶解第二试剂的溶剂可以是乙醇或其他亲水性无机溶剂,由于其作用主要是将试剂进行溶解分散,所以在此并不做具体的限定。
步骤S106,将第一溶液、第二溶液与荧光原料液进行混合,得到第一混合溶液。
具体地,将上述本发明实施例中所得到的第一溶液、第二溶液与荧光原料液分别混合至同一容器中,得到第一混合溶液,即该混合溶液含有三种混合试剂成分。
可选地,将第一溶液、第二溶液与荧光原料液进行混合,得到第一混合溶液包括:将第一溶液加入荧光原料液,并充分混合至均匀,得到第二混合溶液;向第二混合溶液中加入第二溶液,并充分混合至均匀,得到第三混合溶液;将第三混合溶液在常温下静置第一预设时间,得到第一混合溶液。
具体地,先从第一溶液烧杯中取40ul的第一溶液,加入上述实施例中得到的荧光原料液中进行混匀,得到第二混合溶液(由第一溶液和荧光原料液混合而成),其中,混匀可以是利用操作人员人工搅拌的方法顺时针搅拌烧杯。然后从第二溶液烧杯中取40ul的第二溶液,用滴管加入到上述第二混合溶液中并进行混匀得到第三混合溶液(由第一溶液、第二溶液和荧光原料液混合而成),最后将该试管在常温下反应0.5小时,得到第一混合溶液。
需要说明的是,上述实施例中静置的第一预设时间是根据环境温度以及荧光原料决定,当荧光原料为荧光乳胶微球并且环境温度为常温(室温)时,第一预设时间可以是0.5小时。
步骤S108,将第一混合溶液中的上清液排除,并利用超声波对所述第一混合溶液进行超声分散处理,得到活化荧光原料液。
可选地,将第一混合溶液中的上清液排除,并利用超声波对第一混合溶液进行超声分散处理,得到活化荧光原料液包括:倒掉第一混合溶液中的上清液,得到第四混合溶液;向第四混合溶液中加入超纯水,得到第五混合溶液;将第五混合溶液进行超声波超声处理,得到活化荧光原料液。
具体地,混合溶液中由于有不同试剂混合,所以会呈现出有上清液部分,其中,上清液指的是混合溶液上层与下层混合物质的层析现象导致的上层清澈透明的密度较低的液体。在倒掉第一混合溶液中的上清液之后,得到的溶液为第四混合溶液,因此第四混合溶液时第一混合溶液的一部分,然后向第四混合溶液加入超纯水进行稀释操作以获得第五混合溶液,最后将第五混合溶液进行超声波的超声处理,得到活化的荧光原料液。
例如,获得第一混合溶液之后,操作人员倒掉试管或烧杯中的溶液上清液,并加入1ml的超纯水进行稀释,人工搅拌均匀之后,再用超声波超声分散均匀,此处利用超声波装置进行超声混匀,可以大大提高活化荧光原料液的均匀度,提高了活化荧光原料液的制备精度,解决了仅仅通过人工混匀导致交联抗体后的微球发生团聚,微球跑条带变得很差的技术问题。
可选地,在将第一混合溶液中的上清液排除,并利用超声波对第一混合溶液进行超声分散处理,得到活化荧光原料液之前,所述方法还包括:将第一混合溶液进行超声波超声处理;将超声处理后的第一混合溶液进行离心。
具体地,将第一混合溶液进行超声波装置的超声分散处理有助于第一混合溶液的均匀混合,将超声处理后的第一混合溶液进行离心的目的是利用层析现象层析出第一混合溶液的上清液,使得后续处理中可以倒掉上清液,保留浓缩的混合物质。
例如,将经过了0.5小时静置反应后的第一混合溶液用超声波装置进行超声处理,使管壁上的荧光乳胶微球重新悬浮在水溶液中,然后将第一混合溶液进行离心处理,离心条件可以是10000r/min以及持续离心20min。
步骤S110,用活化荧光原料液标记检测抗体。
具体地,活化荧光原料液用于标记检测抗原的抗体,当检测抗体被标记之后,即活化荧光原料液可以附着在检测抗体之上,通过化学键稳固相连接,当周围检测环境刺激活化荧光材料进行荧光反应的时候,便可以以荧光反应作为检测抗体的表征现象进行测量和分析。
可选地,用活化荧光原料液标记检测抗体包括:将检测抗体加入活化荧光原料液中;将牛血清蛋白加入活化荧光原料液中,得到被活化荧光原料液标记好的检测抗体。
具体地,由于本发明实施例需要检测到对象为抗原,那么也就需要相应的抗体作为检测工具,当抗原与抗体结合之后,即可检验抗原的存在情况。当检测抗体与活化荧光原料液混合之后,需要加入牛血清蛋白(BSA)作为载体,BSA的加入使得检测抗体与活化荧光原料液形成酶链关系,这种稳固的关系可以使得检测抗体具有荧光反应的功能。
需要说明的是,牛血清蛋白是牛血清中的简单蛋白,是血液的主要成分(38g/100ml),分子量68kD。等电点4.8。含氮量16%,含糖量0.08%。仅含已糖和已糖胺,含脂量只有0.2%。白蛋白由581个氨基酸残基组成,其中35个半胱氨酸组成17个二硫键,在肽链的第34位有一自由巯基。白蛋白可与多种阳离子、阴离子和其他小分子物质结合。血液中的白蛋白主要起维持渗透压作用、PH缓冲作用、载体作用和营养作用。在动物细胞无血清培养中,添加白蛋白可起到生理和机械保护作用和载体作用。牛血清白蛋白(BSA),又称第五组分,是牛血清中的一种球蛋白,包含583个氨基酸残基,分子量为66.430kDa,等电点为4.7。
可选地,将牛血清蛋白加入活化荧光原料液中,得到被活化荧光原料液标记好的检测抗体包括:向加入了检测抗体的活化荧光原料液中加入牛血清蛋白,并封闭第四预设时间;将封闭第四预设时间后的活化荧光原料液进行离心处理;向经过离心处理后的活化荧光原料液加入保存液。
可选地,在将检测抗体加入活化荧光原料液中之后,所述方法还包括:将加入了检测抗体的活化荧光原料液静置第二预设时间;用超声波超声处理静止了第二预设时间后的活化荧光原料液,并在超声处理后继续静置第三预设时间。
具体地,例如,先取1ml活化荧光原料液,并对其进行超声波超声分散至均匀,然后边搅拌边滴加检测抗体,所滴加检测抗体的量可以是0.01mg-0.05mg/ml,进一步地,最佳滴加量一般为0.02mg/ml。其中,检测抗体可以是鼠抗曲霉菌半乳甘露聚糖单克隆IgG抗体,上述过程大约静置反应1-2min后,再到超声波装置上进行超声处理约30秒钟,然后再次静置反应1小时。其后向反应烧杯中加入BSA(终浓度在0.50%)进行封闭1-2小时(第四预设时间)。其中,封闭指的是隔绝与环境因素的接触而自我进行独立的反应。最后,将封闭好的微球进行离心,速度可以是10000r/min,离心持续15min,并将保存液加入到被活化荧光原料液标记好的检测抗体中,使微球分散均匀,并可保存较长时间。
步骤S112,根据标记后的检测抗体,制备包被抗体。
可选地,根据标记后的检测抗体,制备包被抗体包括:用检测抗体的抗原制备包被液;根据包被液,制作包被垫,形成固相包被抗体。
具体地,包被液和包被垫是包被抗体固相化所需要的两种物质,其中包被液利用检测抗体的抗原进行制备,例如,先取包被用曲霉菌半乳甘露聚糖抗原加入磷酸盐缓冲液中,制成检测线包被液;取羊抗鼠IgG加入磷酸盐缓冲液中,制成质控线包被液。包被液配方为:0.01-0.05的磷酸盐缓冲液,其pH6.5至8.5之间。
需要说明的是包被液检测线和质控线都是衡量包被抗体固相化是否达到标准的方法,由于制作包被液和包被垫是包被抗体与检测抗体配合检测抗原的关键,所以上述实施例中包被液的制备是需要根据不同的IgG或抗原制成检测线和质控线的。
步骤S114,将待测样品与检测抗体和包被抗体结合。
具体地,待测样品中含有待测待测的抗原,当待测样品与检测抗体和包被抗体进行混合的时候,其中混合可以是滴加混合,也可以是超声搅拌混合,检测抗体与包被抗体将待测样品夹在中间,形成一种“夹心的状态”,也称为双抗体竞争法检测抗原。
步骤S116,收集检测抗体发出的荧光信号强度。
具体地,由于检测抗体与活化荧光原料进行了标记,所以当待测样品中的抗原与检测抗体进行结合的时候,检测抗体发出的荧光表征着检测抗体的数量或分布,所以同时也表征着待测抗原的数量或分布,因此起到了通过检测抗体来检测待测抗原的目的。
需要说明的是,荧光信号强度的收集可以采用荧光光度采集仪,这种荧光光度采集仪基于示踪荧光波长检测原理,对于在检测抗体中微小的荧光标记可以进行精确的采集和分析,以便准确地计算出待测抗原的数据。
可选地,所述荧光信号强度与待测样品中的抗原数量成线性正比关系。
通过上述步骤,可以实现交联抗体后的微球不发生团聚,微球跑条带不会变差的技术效果。
根据本发明实施例的另一方面,还提供了一种竞争法抗原检测试纸,根据上述一种竞争法抗原检测方法制作而成,用于检测待测样品中抗原的数量。例如,该试纸的制作工艺步骤可以是:通过第一试剂向乙醇溶液溶解,制备第一溶液;以及通过第二试剂向乙醇溶液溶解,制备第二溶液;将第一溶液、第二溶液与荧光原料液进行混合,得到第一混合溶液;将第一混合溶液中的上清液排除,并利用超声波对所述第一混合溶液进行超声分散处理,得到活化荧光原料液;用活化荧光原料液标记检测抗体;根据标记后的检测抗体,制备包被抗体;将待测样品与检测抗体和包被抗体结合;收集检测抗体发出的荧光信号强度。
具体地,上述本发明实施例的描述仅描述了制作一种竞争法抗原检测试纸的步骤,例如,通过第一试剂向乙醇溶液溶解,制备第一溶液时制作试纸最终抗原检测试剂的一个步骤,又例如将待测样品与检测抗体和包被抗体结合,即根据之前步骤制作的试纸(即含有检测抗体和包被抗体的试纸)进行应用的步骤。
上述本发明实施例序号仅仅为了描述,不代表实施例的优劣。
在本发明的上述实施例中,对各个实施例的描述都各有侧重,某个实施例中没有详述的部分,可以参见其他实施例的相关描述。
在本申请所提供的几个实施例中,应该理解到,所揭露的技术内容,可通过其它的方式实现。其中,以上所描述的装置实施例仅仅是示意性的,例如所述单元的划分,可以为一种逻辑功能划分,实际实现时可以有另外的划分方式,例如多个单元或组件可以结合或者可以集成到另一个系统,或一些特征可以忽略,或不执行。另一点,所显示或讨论的相互之间的耦合或直接耦合或通信连接可以是通过一些接口,单元或模块的间接耦合或通信连接,可以是电性或其它的形式。
所述作为分离部件说明的单元可以是或者也可以不是物理上分开的,作为单元显示的部件可以是或者也可以不是物理单元,即可以位于一个地方,或者也可以分布到多个单元上。可以根据实际的需要选择其中的部分或者全部单元来实现本实施例方案的目的。
另外,在本发明各个实施例中的各功能单元可以集成在一个处理单元中,也可以是各个单元单独物理存在,也可以两个或两个以上单元集成在一个单元中。上述集成的单元既可以采用硬件的形式实现,也可以采用软件功能单元的形式实现。
所述集成的单元如果以软件功能单元的形式实现并作为独立的产品销售或使用时,可以存储在一个计算机可读取存储介质中。基于这样的理解,本发明的技术方案本质上或者说对现有技术做出贡献的部分或者该技术方案的全部或部分可以以软件产品的形式体现出来,该计算机软件产品存储在一个存储介质中,包括若干指令用以使得一台计算机设备(可为个人计算机、服务器或者网络设备等)执行本发明各个实施例所述方法的全部或部分步骤。而前述的存储介质包括:U盘、只读存储器(ROM,Read-Only Memory)、随机存取存储器(RAM,Random Access Memory)、移动硬盘、磁碟或者光盘等各种可以存储程序代码的介质。
以上所述仅是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以做出若干改进和润饰,这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (11)
1.一种竞争法抗原检测方法,其特征在于,包括:
通过第一试剂向乙醇溶液溶解,制备第一溶液;以及
通过第二试剂向乙醇溶液溶解,制备第二溶液;
将所述第一溶液、第二溶液与荧光原料液进行混合,得到第一混合溶液;
将所述第一混合溶液中的上清液排除,并利用超声波对所述第一混合溶液进行超声分散处理,得到活化荧光原料液;
用所述活化荧光原料液标记检测抗体;
根据标记后的检测抗体,制备包被抗体;
将待测样品与所述检测抗体和所述包被抗体结合;
收集所述检测抗体发出的荧光信号强度。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,在通过第一试剂向乙醇溶液溶解,制备第一溶液之前,所述方法还包括:
将所述荧光原料进行超声分散;
向分散后的荧光原料加入超纯水进行稀释,得到所述荧光原料液。
3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,在将所述第一混合溶液中的上清液排除,并利用超声波对所述第一混合溶液进行超声分散处理,得到活化荧光原料液之前,所述方法还包括:
将所述第一混合溶液进行超声波超声处理;
将超声处理后的第一混合溶液进行离心。
4.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,将所述第一溶液、第二溶液与荧光原料液进行混合,得到第一混合溶液包括:
将第一溶液加入所述荧光原料液,并充分混合至均匀,得到第二混合溶液;
向所述第二混合溶液中加入所述第二溶液,并充分混合至均匀,得到第三混合溶液:
将所述第三混合溶液在常温下静置第一预设时间,得到所述第一混合溶液。
5.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,将所述第一混合溶液中的上清液排除,并利用超声波对所述第一混合溶液进行超声分散处理,得到活化荧光原料液包括:
倒掉所述第一混合溶液中的上清液,得到第四混合溶液;
向所述第四混合溶液中加入超纯水,得到第五混合溶液;
将所述第五混合溶液进行超声波超声处理,得到所述活化荧光原料液。
6.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,用所述活化荧光原料液标记检测抗体包括:
将所述检测抗体加入所述活化荧光原料液中;
将牛血清蛋白加入所述活化荧光原料液中,得到被所述活化荧光原料液标记好的检测抗体。
7.根据权利要求6所述的方法,其特征在于,在将所述检测抗体加入所述活化荧光原料液中之后,所述方法还包括:
将加入了检测抗体的所述活化荧光原料液静置第二预设时间;
用超声波超声处理静止了第二预设时间后的活化荧光原料液,并在超声处理后继续静置第三预设时间。
8.根据权利要求6所述的方法,其特征在于,将牛血清蛋白加入所述活化荧光原料液中,得到被所述活化荧光原料液标记好的检测抗体包括:
向加入了检测抗体的所述活化荧光原料液中加入牛血清蛋白,并封闭第四预设时间;
将封闭所述第四预设时间后的所述活化荧光原料液进行离心处理;
向经过离心处理后的所述活化荧光原料液加入保存液。
9.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,根据标记后的检测抗体,制备包被抗体包括:
用所述检测抗体的抗原制备包被液;
根据所述包被液,制作包被垫,形成固相包被抗体。
10.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述荧光信号强度与所述待测样品中的抗原数量成线性正比关系。
11.一种竞争法抗原检测试纸,其特征在于,根据上述权利要求1至10制作而成,用于检测待测样品中抗原的数量。
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