CN110658285A - 一种快速检测焦糖色中2-甲基咪唑和4-甲基咪唑含量的方法 - Google Patents

一种快速检测焦糖色中2-甲基咪唑和4-甲基咪唑含量的方法 Download PDF

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Abstract

本发明涉及分析检测技术领域，提供了一种快速检测焦糖色中2‑甲基咪唑和4‑甲基咪唑含量的方法。本发明利用水将焦糖色溶解，然后基于氯甲酸异丁酯可以在水环境中对甲基咪唑进行衍生、且衍生物溶于正己烷的特点，将甲基咪唑与水溶性焦糖色快速分离，然后使用气相色谱‑质谱法测定。本发明的方法样品前处理简单，焦糖色溶于水后无需净化处理，直接即可进行衍生化，进一步检测分析。本发明的样品前处理过程中有机溶剂用量仅为2mL左右，样品前处理时间仅为10min左右，可以同时进行大批量样品的快速检测，本发明的方法具有快速、简便、灵敏度高的特点。

Description

一种快速检测焦糖色中2-甲基咪唑和4-甲基咪唑含量的方法
技术领域
本发明涉及分析检测技术领域，特别涉及一种快速检测焦糖色中2-甲基咪唑和4-甲基咪唑含量的方法。
背景技术
焦糖色是食用色素中用量最大、使用范围最广的天然食品添加剂之一，我国GB2760《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》中规定除个别产品外，大多数可以按生产需要适量使用，它可以显著改进食品的色泽和风味等感官品质，应用于糖果、饼干、调味品、饮料等。根据GB1886.64《食品安全国家标准食品添加剂焦糖色》，焦糖色制备工艺分为普通法焦糖色(Ⅰ型)、苛性亚硫酸盐法焦糖色(Ⅱ型)、氨法焦糖色(Ⅲ型)和亚硫酸铵法焦糖色(Ⅳ型)，且GB 2760《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》分别规定四种焦糖色的使用范围和使用量。
2011年国际肿瘤研究机构(IARC)将甲基咪唑类化合物认定为2B类致癌物，人体若过量摄入有引起惊厥甚至引发癌症的风险。普通法焦糖色(Ⅰ型)、苛性亚硫酸盐法焦糖色(Ⅱ型)生产的焦糖色不含2-甲基咪唑和4-甲基咪唑，而当前国内外大部分厂家生产的氨法焦糖色(Ⅲ型)和亚硫酸铵法焦糖色(Ⅳ型)都是使用“氨类化合物”作为催化剂，由糖、氨水或亚硫酸铵在高压高温下产生化学作用而成，会产生致癌物质2-甲基咪唑和4-甲基咪唑，因此GB1886.64《食品安全国家标准食品添加剂焦糖色》规定氨法焦糖色(Ⅲ型)和亚硫酸铵法焦糖色(Ⅳ型)中4-甲基咪唑的含量不得超过200mg/kg。
焦糖色中2-甲基咪唑、4-甲基咪唑含量检测方法有分光光度法、气相色谱法、高效液相色谱法，气相色谱质谱联用法和液相色谱-串联质谱法等。目前的分光光度法、气相色谱法和高效液相色谱法均需要使用大量有机溶剂进行液液萃取，且灵敏度比较低、定性特异性差；液相色谱-串联质谱法仪器设备贵，难以普及。气相色谱质谱联用法定性定量准确，但目前报道的方法仍存在需要的大量溶剂提取、样品前处理方法复杂、检测时间长等缺陷。
发明内容
有鉴于此，本发明目的在于提供一种快速检测焦糖色中2-甲基咪唑和4-甲基咪唑含量的方法。本发明提供的方法样品前处理简单，定性定量准确、具有快速、简便、灵敏度高的特点。
为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：
一种快速检测焦糖色中2-甲基咪唑和4-甲基咪唑含量的方法，包括以下步骤：
(1)将焦糖色和水混合后进行超声溶解，得到溶解液；
(2)将所述溶解液与乙腈-异丙醇-吡啶混合液、D6-4-甲基咪唑内标液混合后加入氯甲酸异丁酯进行衍生化处理，得到衍生液；
(3)将所述衍生液、正己烷和碳酸钠溶液混合后进行离心，取上层正己烷相；
(4)将所述正己烷相进行气相色谱-质谱检测，得到谱图，使用内标法计算得到焦糖色中2-甲基咪唑和4-甲基咪唑的含量。
优选的，所述焦糖色和水的用量比为0.05～0.2g：0.2～0.3mL。
优选的，所述步骤(1)中的混合为涡旋混合；所述涡旋混合的时间为0.5～2min；所述超声溶解的时间为0.5～2min。
优选的，所述乙腈-异丙醇-吡啶混合液中乙腈、异丙醇和吡啶的体积比为1～5:1～3:1～3；所述内标液中D6-4-甲基咪唑的浓度为50～500μg/mL；所述溶解液和乙腈-异丙醇-吡啶混合液、内标液的体积比为0.2～0.3mL：0.2～0.3mL：50μL。
优选的，所述步骤(2)中的混合为涡旋混合，所述涡旋混合的时间为1min。
优选的，所述焦糖色和氯甲酸异丁酯的用量比为0.05～0.2g：50μL；所述衍生化处理的时间为0.5～2min。
优选的，所述碳酸钠溶液的质量浓度为10％；所述焦糖色、正己烷和碳酸钠溶液的用量比为0.05～0.2g：0.5mL：1mL。
优选的，所述步骤(3)中混合为涡旋混合，所述涡旋混合的时间为0.5～2min，所述离心的时间为0.5～2min。
优选的，所述气相色谱-质谱检测的色谱条件为：
色谱柱：DB-INNWAX弹性石英毛细管柱或等同柱；
柱温度程序：初温50℃，保持2min，以10℃/min升至200℃，最后240℃后运行4min；
进样口温度：220℃；
色谱-质谱接口温度：230℃；
离子源温度：230℃；
载气：氦气，载气纯度≥99.999％，流速为1.0mL/min；
电离方式：EI源；
电离能量：70eV；
质量扫描范围：40～300；
测定方式：全扫描SCAN模式；
进样方式：不分流进样；
进样量：1μL；
溶剂延迟：9min。
本发明提供了一种快速检测焦糖色中2-甲基咪唑和4-甲基咪唑含量的方法，本发明提供的方法利用水将焦糖色溶解，然后基于氯甲酸异丁酯可以在水环境中对甲基咪唑进行衍生、且衍生物溶于正己烷的特点，将甲基咪唑与水溶性焦糖色快速分离，然后使用气相色谱-质谱法测定。本发明提供的方法样品前处理简单，焦糖色溶于水后无需净化处理，直接即可进行衍生化，进一步进行分析检测；此外，本发明的样品前处理过程中有机溶剂用量仅为2mL左右，样品前处理时间仅为10min左右，可以同时进行大批量样品的快速检测，本发明的方法具有快速、简便、灵敏度高的特点。实施例结果表明，本发明的方法焦糖色中2-甲基咪唑、4-甲基咪唑定量限为5.0mg/kg，检出限为2.0mg/kg，且定性定量准确。
附图说明
图1为D6-4-甲基咪唑、4-甲基咪唑和2-甲基咪唑衍生物的总离子流图；
图2为D6-4-甲基咪唑、4-甲基咪唑和2-甲基咪唑衍生物的质谱图，其中(1)为D6-4-甲基咪唑衍生物的质谱图，(2)为4-甲基咪唑衍生物的质谱图，(3)为2-甲基咪唑衍生物的质谱图；
图3为实施例1中2-甲基咪唑、4-甲基咪唑阴性的焦糖色的典型质量色谱图；
图4为实施例1中4-甲基咪唑阳性的焦糖色的典型质量色谱图。
具体实施方式
本发明提供了一种快速检测焦糖色中2-甲基咪唑和4-甲基咪唑含量的方法，包括以下步骤：
(1)将焦糖色和水混合后进行超声溶解，得到溶解液；
(2)将所述溶解液与乙腈-异丙醇-吡啶混合液、D6-4-甲基咪唑内标液混合后加入氯甲酸异丁酯进行衍生化处理，得到衍生液；
(3)将所述衍生液、正己烷和碳酸钠溶液混合后进行离心，取上层正己烷相；
(4)将所述正己烷相进行气相色谱-质谱检测，得到谱图，使用内标法计算得到焦糖色中2-甲基咪唑和4-甲基咪唑的含量。
本发明将焦糖色和水混合后进行超声溶解，得到溶解液。在本发明中，所述水优选为纯净水，具体为符合GB/T 6682规定的一级水；所述焦糖色和水的用量比优选为0.05～0.2g：0.2～0.3mL，更优选为0.1～0.15g：0.25mL；所述混合优选为涡旋混合，所述涡旋混合的时间优选为0.5～2min，更优选为1min；所述超声溶解的时间优选为0.5～2min，更优选为2min。
得到溶解液后，本发明将所述溶解液与乙腈-异丙醇-吡啶混合液、内标液混合后加入氯甲酸异丁酯进行衍生化处理，得到衍生液。在本发明中，所述乙腈-异丙醇-吡啶混合液中乙腈、异丙醇和吡啶的体积比优选为1～5:1～3:1～3，更优选为5:3:2；所述内标液中的D6-4-甲基咪唑的浓度优选50～500μg/mL，更优选为100μg/mL；所述内标液的溶剂优选为乙腈；所述溶解液和乙腈-异丙醇-吡啶混合液、内标液的体积比优选为0.2～0.3mL：0.2～0.3mL：50μL，更优选为0.25mL：0.25mL：50μL；在本发明中，所述混合优选为涡旋混合，所述涡旋混合的时间优选为0.5～2min，更优选为1min。在本发明中，所述乙腈-异丙醇-吡啶混合液能够起到分散催化的作用，促进氯甲酸异丁酯和甲基咪唑的反应，并且本发明使用异丙醇代替本领域常用分散催化体系中的异丁醇，异丙醇的来源更加广泛，从而使本发明更加容易实施；本发明使用D6-4-甲基咪唑为内标物，可抵消质谱离子化时的基质效应，还可消除样品前处理过程中的差异，有效提高定量准确度和精密度。
在本发明中，所述焦糖色和氯甲酸异丁酯的用量比优选为0.05～0.2g：50μL，更优选为0.1～0.15g：50μL；所述衍生化处理的时间优选为0.5～2min，更优选为1min；在衍生化处理过程中，氯甲酸异丁酯和焦糖色中的2-甲基咪唑和4-甲基咪唑发生反应，生成衍生物。
衍生化处理完成后，本发明将所述衍生液、正己烷和碳酸钠溶液混合后进行离心，取上层正己烷相。在本发明中，所述碳酸钠溶液的质量浓度优选为10％；所述焦糖色、正己烷和碳酸钠溶液的体积比优选为0.05～0.2g：0.5mL：1mL；所述混合优选为涡旋混合，所述涡旋混合的时间优选为0.5～2min，更优选为1min，所述离心的时间优选为0.5～2min，更优选为1min；所述碳酸钠用于除去多余的氯甲酸异丁酯，有利于保护仪器及色谱柱；在本发明中，氯甲酸异丁酯和甲基咪唑反应生成的衍生物溶于正己烷，而焦糖色为水溶性，本发明将衍生物萃取到正己烷相中，从而将甲基咪唑从焦糖色中分离。
本发明提供的方法焦糖色的前处理简单，直接用水将焦糖色溶解后进行衍生即可，无需净化处理，所需的有机溶剂用量少，更加环保，且各个步骤所需的时间较短，样品前处理在10min左右即可完成。
得到正己烷相后，将所述正己烷相进行气相色谱-质谱检测，得到谱图。在本发明中，所述气相色谱-质谱检测的色谱条件优选为：
色谱柱：DB-INNWAX弹性石英毛细管柱或等同柱；所述色谱柱的尺寸优选为30m×0.25mm×0.25μm；
柱温度程序：初温50℃，保持2min，以10℃/min升至200℃，最后240℃后运行4min；
进样口温度：220℃；
色谱-质谱接口温度：230℃；
离子源温度：230℃；
载气：氦气，载气纯度≥99.999％，流速为1.0mL/min；
电离方式：EI源；
电离能量：70eV；
质量扫描范围：40～300；
测定方式：全扫描SCAN模式；
进样方式：不分流进样；
进样量：1μL；
溶剂延迟：9min。
在本发明中，所述D6-4-甲基咪唑、4-甲基咪唑和2-甲基咪唑衍生物的总离子流图如图1所示，D6-4-甲基咪唑、4-甲基咪唑和2-甲基咪唑衍生物的质谱图如图2所示，其中(1)为D6-4-甲基咪唑衍生物的质谱图，(2)为4-甲基咪唑衍生物的质谱图，(3)为2-甲基咪唑衍生物的质谱图；在本发明中，D6-4-甲基咪唑、4-甲基咪唑和2-甲基咪唑衍生物在EI源电子轰击下发生裂解，形成碎片离子，得到质谱图，根据衍生物的质谱图确定其定量离子和定性离子，从而实现对4-甲基咪唑和2-甲基咪唑的定量和定性，本发明根据衍生物的质谱图选择定量及定性离子，根据总离子流图确定各衍生物的保留时间，具体的定量、定性离子及保留时间如表1所示；在本发明的质谱条件下，4-甲基咪唑和2-甲基咪唑能够被准确的检测出。
表1 2-甲基咪唑、4-甲基咪唑及内标D6-4-甲基咪唑衍生物监测离子及保留时间
序号 化合物 保留时间min 定量离子 定性离子
1 D6-4-甲基咪唑 14.45、15.41 187 114
2 4-甲基咪唑 14.50、15.45 182 109、81、82
3 2-甲基咪唑 14.56 182 109、81、82
得到谱图后，本发明使用内标法计算得到焦糖色中2-甲基咪唑和4-甲基咪唑的含量。本发明对所述内标法的具体计算方法没有特殊要求，使用本领域技术人员熟知的方法即可，在本发明的具体实施例中，优选先绘制2-甲基咪唑的标准曲线和4-甲基咪唑的标准曲线，然后结合谱图和标准曲线，按照内标法进行计算；所述标准曲线的横坐标优选为2-甲基咪唑(或4-甲基咪唑)标准品与内标物质量的比值，纵坐标优选为2-甲基咪唑(或4-甲基咪唑)标准品峰面积与内标物峰面积的比值；本发明对标准曲线的绘制方法没有特殊要求，按照本领域技术人员熟知的方法进行绘制即可。
下面结合实施例对本发明提供的方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
(1)试剂和材料
实验用水为符合GB/T 6682规定的一级水；碳酸钠(Na2CO3)：分析纯。吡啶：分析纯；正己烷：色谱纯；乙酸乙酯：色谱纯；乙腈：色谱纯；二氯甲烷：色谱纯；异丙醇：色谱纯；2-甲基咪唑标准品、4-甲基咪唑标准品、D6-4-甲基咪唑标准品；氯甲酸异丁酯：分析纯。
(2)标准溶液及试剂配制
2-甲基咪唑、4-甲基咪唑标准储备液(1.0mg/mL)：各称取10mg 2-甲基咪唑、4-甲基咪唑标准品至10mL容量瓶中，用乙腈溶解并定容至刻度，4℃冰箱保存。
2-甲基咪唑、4-甲基咪唑混合标准使用液(100.0μg/mL)：取1mL 1.0mg/mL 2-甲基咪唑、4-甲基咪唑标准储备液至10mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度得100.0μg/mL混合标准使用液，4℃冰箱保存。
2-甲基咪唑、4-甲基咪唑混合标准使用液(10.0μg/mL)：取1mL 100.0μg/mL 2-甲基咪唑、4-甲基咪唑混合标准使用液至10mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度得10.0μg/mL标准使用液，4℃冰箱保存。
D6-4-甲基咪唑内标储备液(1.0mg/mL)：称取10mg D6-4-甲基咪唑标准品至10mL容量瓶中，用乙腈溶解并定容至刻度，4℃冰箱保存。
D6-4-甲基咪唑内标应用液(100.0μg/mL)：取1mL 1.0mg/mL D6-4-甲基咪唑内标储备液至10mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度得100.0μg/mLD6-4-甲基咪唑内标使用液，4℃冰箱保存。
10％Na2CO3溶液：称取5g Na2CO3溶于50mL超纯水。
乙腈:异丙醇:吡啶混合溶液(V:V V 5:3:2)：取5mL乙腈、加入3mL异丙醇、2mL吡啶，混匀。
(3)仪器和设备
50mL和15mL具塞刻度离心管、气相色谱质谱仪、氮吹仪、离心机：最大转速10000rpm以上、旋涡混匀器、超声波清洗仪、固相萃取仪：带真空泵。
(4)分析步骤
(4.1)样品处理
取八个焦糖色样品，依次编号为1～8；按照下述方法进行处理：
称取0.05～0.20g焦糖色入10mL塑料离心管内，加入0.2～0.3mL纯净水、涡旋混合1min，超声溶解2min，加入0.2～0.3mL乙腈:异丙醇:吡啶(V:V V 5:3:2)混合液、50μL 100μg/mL D6-4-甲基咪唑内标液涡旋混合1min，再加入50μL氯甲酸异丁酯，涡旋混合1min充分反应，加入0.5mL正己烷、1mL 10％Na2CO3溶液，涡旋混合1min，4000rpm离心1min，吸取上层正己烷相转移到进样瓶中，供气相色谱质谱测定。
(4.2)气相色谱-质谱条件
色谱柱：DB-INNWAX弹性石英毛细管柱(30m×0.25mm×0.25μm)；柱温度程序：初温50℃，保持2min，以10℃/min升至200℃，最后240℃后运行4min；进样口温度：220℃；色谱-质谱接口温度：230℃；离子源温度：230℃；载气：氦气，纯度≥99.999％，流速为1.0mL/min；电离方式：EI源；电离能量：70eV；质量扫描范围：40-300，具体定性定量离子见附录表1；测定方式：全扫描SCAN模式；进样方式：不分流进样；进样量：1μL；溶剂延迟：9min
(4.3)标准曲线的制作
取6个15mL塑料离心管，分别加入20μL、50μL、100μL 10.0μg/mL 2-甲基咪唑、4-甲基咪唑混合标准使用液，50μL、100μL、300μL 100.0μg/mL 2-甲基咪唑、4-甲基咪唑混合标准使用液，再加入50μL 100.0μg/mL D6-4-甲基咪唑内标应用液，按照(4.1)中相同的方法进行衍生等处理，得到的正己烷相进行气相色谱-质谱测定，测试条件同(4.2)，测得相应的峰面积获得0.4μg/mL～60μg/mL2-甲基咪唑、4-甲基咪唑(含5μg D6-4-甲基咪唑)标准曲线，以标准品与内标质量比为横坐标(X)，峰面积比为纵坐标(Y)绘制标准曲线。
2-甲基咪唑标准曲线为：Y＝1.21X-0.0217(r＝0.998)；
4-甲基咪唑标准曲线为：Y＝1.06X+0.0853(r＝0.999)。
(4.4)试样溶液的测定
将试样待测液注入气相色谱-质谱仪中，测得2-甲基咪唑、4-甲基咪唑、D6-4-甲基咪唑相应的峰面积，根据标准曲线得到试样待测液中2-甲基咪唑、4-甲基咪唑含量。如果试样待测液中被测物质的响应值超出仪器检测的线性范围，可适当稀释后测定。
图3为2-甲基咪唑、4-甲基咪唑阴性的焦糖色的典型质量色谱图，该谱图中显示焦糖色中不含2-甲基咪唑和4-甲基咪唑；
图4为4-甲基咪唑阳性的焦糖色的典型质量色谱图；该谱图中显示焦糖色中含有4-甲基咪唑，2-甲基咪唑未检出。
(4.5)方法检出限、定量限、回收率和精密度
取4-甲基咪唑，2-甲基咪唑阴性焦糖色，加标5.0mg/kg，按照本方法进行测定6次，平均回收率为82.4％，相对标准偏差7.5％，平均信噪比S/N为22.5，完全满足GB1886.64-2015《食品安全国家标准食品添加剂焦糖色》中对4-甲基咪唑不大于200mg/kg的限量要求，因此确定该方法定量限(LOQ)为5.0mg/kg(S/N＝15.3)，检出限(LOD)为2.0mg/kg(S/N＝7)。说明本方法具有高灵敏度，定性定量良好，结果可靠。
(5)分析结果
根据内标法标准曲线计算样品中2-甲基咪唑、4-甲基咪唑的含量，2-甲基咪唑、4-甲基咪唑均以D6-4-甲基咪唑为内标进行定量。
结果计算：样品中2-甲基咪唑、4-甲基咪唑含量按式(1)计算，结果保留小数点后1位：
C＝(N*1000)/(M*1000) (1)
式(1)中：
C——实际样品中2-甲基咪唑、4-甲基咪唑含量，mg/kg。
M——取样量，g；
N——仪器分析测定进样液中2-甲基咪唑、4-甲基咪唑的质量，μg；
样品1～8的检测结果如表2所示：
表2样品1～8中4-甲基咪唑和2-甲基咪唑的检测结果(ND表示未检出)
由以上实施例可以看出，本发明提供的方法将焦糖色中2-甲基咪唑、4-甲基咪唑经氯甲酸异丁酯衍生化后进行有机溶剂提取，然后使用用气相色谱-质谱法测定，SCAN方式监测，D6-4-甲基咪唑内标法定量；样品的前处理方法简单，直接在水中即可进行衍生化，衍生化之前无需对样品进行净化处理，且样品前处理时间短、有机溶剂用量少、灵敏度高、定性定量准确。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (9)

1.一种快速检测焦糖色中2-甲基咪唑和4-甲基咪唑含量的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)将焦糖色和水混合后进行超声溶解，得到溶解液；
(2)将所述溶解液与乙腈-异丙醇-吡啶混合液、D6-4-甲基咪唑内标液混合后加入氯甲酸异丁酯进行衍生化处理，得到衍生液；
(3)将所述衍生液、正己烷和碳酸钠溶液混合后进行离心，取上层正己烷相；
(4)将所述正己烷相进行气相色谱-质谱检测，得到谱图，使用内标法计算得到焦糖色中2-甲基咪唑和4-甲基咪唑的含量。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述焦糖色和水的用量比为0.05～0.2g：0.2～0.3mL。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中的混合为涡旋混合；所述涡旋混合的时间为0.5～2min；所述超声溶解的时间为0.5～2min。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述乙腈-异丙醇-吡啶混合液中乙腈、异丙醇和吡啶的体积比为1～5:1～3:1～3；所述内标液中D6-4-甲基咪唑的浓度为50～500μg/mL；所述溶解液和乙腈-异丙醇-吡啶混合液、内标液的体积比为0.2～0.3mL：0.2～0.3mL：50μL。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中的混合为涡旋混合，所述涡旋混合的时间为0.5～2min。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述焦糖色和氯甲酸异丁酯的用量比为0.05～0.2g：50μL；所述衍生化处理的时间为0.5～2min。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述碳酸钠溶液的质量浓度为10％；所述焦糖色、正己烷和碳酸钠溶液的用量比为0.05～0.2g：0.5mL：1mL。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中混合为涡旋混合，所述涡旋混合的时间为0.5～2min，所述离心的时间为0.5～2min。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述气相色谱-质谱检测的色谱条件为：
色谱柱：DB-INNWAX弹性石英毛细管柱或等同柱；
柱温度程序：初温50℃，保持2min，以10℃/min升至200℃，最后240℃后运行4min；
进样口温度：220℃；
色谱-质谱接口温度：230℃；
离子源温度：230℃；
载气：氦气，载气纯度≥99.999％，流速为1.0mL/min；
电离方式：EI源；
电离能量：70eV；
质量扫描范围：40～300；
测定方式：全扫描SCAN模式；
进样方式：不分流进样；
进样量：1μL；
溶剂延迟：9min。
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Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113984924A (zh) * 2021-10-21 2022-01-28 广东工业大学 一种液相咪唑类物质的分析方法及其在环境检测中的应用
CN114935615A (zh) * 2022-05-31 2022-08-23 石家庄四药有限公司 一种甲硝唑原料中2-甲基咪唑杂质的检测方法
CN115343393A (zh) * 2022-08-23 2022-11-15 福建省纤维检验中心 一种织物中1-乙烯基咪唑的检测方法
CN115343392A (zh) * 2022-08-23 2022-11-15 福建省纤维检验中心 气质联用法测定纺织品中1-乙烯基咪唑的方法
CN115993414A (zh) * 2023-01-18 2023-04-21 中汽研汽车零部件检验中心(宁波)有限公司 一种汽车非金属材料胺类物质测定方法

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104297399A (zh) * 2014-05-21 2015-01-21 江苏省疾病预防控制中心 焦糖色中副产物4-甲基咪唑和2-乙酰基-4-羟基-丁基咪唑的检测方法
CN106290658A (zh) * 2016-10-14 2017-01-04 佛山海悦智达科技有限公司 一种食用植物油中阿维菌素、甲草胺和腐霉利的定量方法
KR20170116358A (ko) * 2016-04-11 2017-10-19 한국식품연구원 홍삼 제품에서 카라멜 색소를 검출하는 방법

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104297399A (zh) * 2014-05-21 2015-01-21 江苏省疾病预防控制中心 焦糖色中副产物4-甲基咪唑和2-乙酰基-4-羟基-丁基咪唑的检测方法
KR20170116358A (ko) * 2016-04-11 2017-10-19 한국식품연구원 홍삼 제품에서 카라멜 색소를 검출하는 방법
CN106290658A (zh) * 2016-10-14 2017-01-04 佛山海悦智达科技有限公司 一种食用植物油中阿维菌素、甲草胺和腐霉利的定量方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
SEULGI SEO等: "Reduction of Carcinogenic 4(5)-Methylimidazole in a Caramel Model System: Influence of Food Additives", 《JOURNAL OF AGRICULTURAL AND FOOD CHEMISTRY》 *
崔金梅等: "食品中4-甲基咪唑的分析方法", 《中国酿造》 *
彭向前等: "气相色谱法同时检测焦糖色素中的2-甲基咪唑和4-甲基咪唑", 《中国调味品》 *

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN113984924A (zh) * 2021-10-21 2022-01-28 广东工业大学 一种液相咪唑类物质的分析方法及其在环境检测中的应用
CN113984924B (zh) * 2021-10-21 2023-10-27 广东工业大学 一种液相咪唑类物质的分析方法及其在环境检测中的应用
CN114935615A (zh) * 2022-05-31 2022-08-23 石家庄四药有限公司 一种甲硝唑原料中2-甲基咪唑杂质的检测方法
CN115343393A (zh) * 2022-08-23 2022-11-15 福建省纤维检验中心 一种织物中1-乙烯基咪唑的检测方法
CN115343392A (zh) * 2022-08-23 2022-11-15 福建省纤维检验中心 气质联用法测定纺织品中1-乙烯基咪唑的方法
CN115343393B (zh) * 2022-08-23 2023-09-26 福建省纤维检验中心 一种织物中1-乙烯基咪唑的检测方法
CN115993414A (zh) * 2023-01-18 2023-04-21 中汽研汽车零部件检验中心(宁波)有限公司 一种汽车非金属材料胺类物质测定方法

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