CN110642959A - 一种玉木耳酸性多糖及其制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种玉木耳酸性多糖及其制备方法和用途,属于天然产物领域。所述的制备方法，将玉木耳干燥子粉碎，加入果胶酶，水浴，酶解，加入氯仿正丁醇，搅拌，离心，提取上层溶液，减压浓缩至原体积1/3，定容，层析，从而制备出玉木耳酸性多糖。制备的酸性多糖具有抗氧化和抑制黑色素生成的作用，同时提高了多糖得率，改善了酸性多糖在水中的溶解性，具有重要的经济价值和市场价值。
Description
技术领域
本发明涉及一种玉木耳酸性多糖及其制备方法和用途，属于天然产物领域。
背景技术
玉木耳是从毛木耳中选育的白色新品种，与黑木耳的区别在于其色泽如玉、少筋、肉厚、口感清脆，产量高于黑木耳。玉木耳营养丰富，具有滋阴壮阳、清肺益气、抑制血小板聚集等功效。由于玉木耳是食用菌中的新品种，面市时间较短，对其活性成分及活性功效的研究较少，玉木耳多糖作为其主要活性成分。目前的研究仅证实其具有抗氧化、抑菌及抗疲劳活性。
玉木耳多糖提取主要采用热水浸提法，此方法虽然简单、易用、不需投入高昂的仪器设备，但是存在耗时长、耗能高，提取率低的缺点，并且热水浸提法提取的多糖复溶性较差、不溶物较多、不宜直接使用、实际利用率低。除热水浸提外，高压蒸煮法虽能够将提取率提升到20％以上，但同样存在耗时过长的问题，且提取物的胶黏性下降，破坏了原有物化性质。同时上述现有制备技术均未实现从玉木耳中提取酸性多糖，不能满足该类产品产业化开发及生产的大量需求。
发明内容
本发明是针对现有研究及技术的不足，旨在提供一种玉木耳酸性多糖及其制备方法和用途。
本发明的技术方案按照下列步骤进行：一种玉木耳酸性多糖的制备方法，其特征在于：玉木耳酸性多糖的制备方法具体步骤如下：
(1)将玉木耳干燥子实体过40目筛，进行粉碎，得到玉木耳干燥子实体粉末，装入烧杯中；
(2)称取果胶酶，将其用pH值为5.0的磷酸盐缓冲液，配制成10mg/mL果胶酶溶液，并将果胶酶溶液加入上述步骤(1)所述烧杯中，使加入的果胶酶的酶质量为玉木耳干燥子实体粉末的0.2％～0.6％，再加入pH值为5.0的缓冲液，制备的溶液为混合溶液1，使混合溶液1液体体积为玉木耳干燥子实体粉末的60～120倍；
(3)将上述步骤(2)制备的装有混合溶液1的烧杯放在40℃～60℃水浴锅中恒温加热反应1小时，再将烧杯放置于80℃～90℃水浴中1小时，灭活果胶酶活性，减压浓缩至原混合溶液1体积的1/3～1/4，即为玉木耳酶提取液；
(4)在上述步骤(3)提取的玉木耳酶提取液中，加入质量为玉木耳干燥子实体粉末0.2％的中性蛋白酶，形成玉木耳酶解液，保持上述玉木耳酶解液在温度为40℃环境下，酶解1小时；
(5)在上述步骤(4)所述酶解后的玉木耳酶解液中加入氯仿正丁醇混合溶液，其中氯仿和正丁醇的体积比例为4:1，制备成混合溶液2，对混合溶液2进行磁力搅拌1小时，离心，提取上层溶液，向上层溶液中再次加入氯仿正丁醇混合溶液，氯仿和正丁醇的体积比例为4:1，磁力搅拌1小时，离心，取上层溶液进行减压浓缩至原体积1/3，加入无水乙醇，获得玉木耳水溶性多糖；
(6)玉木耳水溶性多糖加去离子水溶解，定容，经DEAE 52纤维素柱层析，依次用去离子水及0mol/L～1mol/L氯化钠溶液洗脱，洗脱流速为5mL/3min，洗脱进行收集，每管收集洗脱液5mL；
(7)对上述步骤(6)处理后的溶液进行糖含量检测，根据检测结果将步骤(6)处理收集后的各管多糖溶液分为玉木耳水溶性多糖-Ⅰ、玉木耳水溶性多糖-Ⅱ、玉木耳水溶性多糖-Ⅲ和玉木耳水溶性多糖-Ⅳ，对玉木耳水溶性多糖-Ⅲ进行聚丙烯酰胺葡聚糖S400凝胶柱层析，从而获得玉木耳酸性多糖。
上述步骤(2)中所述加入的果胶酶的酶质量为玉木耳干燥子实体粉末的0.4％，所述混合溶液1液体体积为玉木耳干燥子实体粉末的100倍。
上述步骤(3)所述将装有混合溶液1的烧杯放在50℃水浴锅中恒温加热反应1小时，将烧杯放置于85℃水浴中1小时，灭活果胶酶活性，减压浓缩至原体积1/3，从而制备玉木耳酶提取液。
上述的制备方法取得的玉木耳酸性多糖在制备消除自由基保健食品、化妆品中的用途。
上述的制备方法取得的玉木耳酸性多糖在制备抑制黑色素生成保健食品、化妆品中的用途。
一种保健食品组合物，其特征在于，保健食品组合物含有权利要求1所述的玉木耳酸性多糖和任选地保健食品上可接受的辅料。
一种化妆品组合物，其特征在于，化妆品组合物含有权利要求1所述的玉木耳酸性多糖和任选地化妆品上可接受的辅料。
本发明积极效果在于：通过本发明所述制备方法，首次从玉木耳中获得了兼具抗氧化和抑制黑色素生成活性的酸性多糖Ⅲ；并在该多糖制备过程中采用了果胶酶酶解的方法，提高了多糖得率，并改善了酸性多糖在水中的溶解性，提升了酸性多糖的实际利用率，同时公开了该多糖具有消除自由基、抑制黑色素生成等功能活性，可用于制备消除自由基、抑制黑色素生成的保健食品及化妆品，为玉木耳深加工产品开发提供基础数据，具有重要的经济价值和市场价值。
具体实施方式
下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
实施例1
将玉木耳干燥子实体过40目筛，进行粉碎，得到玉木耳干燥子实体粉末，装入烧杯中；称取果胶酶，将其用pH值为5.0的磷酸盐缓冲液配制成10mg/mL果胶酶溶液，并将果胶酶溶液加入上述所述的烧杯中，使加入的果胶酶的酶质量为玉木耳干燥子实体粉末的0.4％，再加入pH值为5.0的缓冲液，使混合溶液液体体积为玉木耳干燥子实体粉末的60、100、120倍。烧杯放在50℃水浴锅中恒温加热反应1小时，再将烧杯放置于85℃水浴中1小时，灭活果胶酶活性，减压浓缩至混合溶液1的1/3，即为玉木耳酶提取液；向其中加入质量为玉木耳干燥子实体粉末0.2％的中性蛋白酶，并在温度40℃的环境下，酶解1小时后加入氯仿正丁醇混合溶液，氯仿和正丁醇的体积比例为4:1，磁力搅拌1小时，离心，吸取上层溶液；并向上层溶液中再次加入氯仿正丁醇混合溶液，氯仿和正丁醇的体积比例为4:1，磁力搅拌1小时，离心，取上层溶液进行减压浓缩至原体积1/3，加入无水乙醇，获得玉木耳水溶性多糖。玉木耳水溶性多糖加去离子水溶解，定容，经DEAE52纤维素柱层析，依次用去离子水及0mol/L～1mol/L氯化钠溶液洗脱，洗脱流速为5mL/3min，洗脱进行收集，每管收集洗脱液5mL；并逐管进行糖含量检测，根据检测结果将收集后的各管多糖溶液分为玉木耳水溶性多糖-Ⅰ、玉木耳水溶性多糖-Ⅱ、玉木耳水溶性多糖-Ⅲ和玉木耳水溶性多糖-Ⅳ，对玉木耳水溶性多糖-Ⅲ进行聚丙烯酰胺葡聚糖S400凝胶柱层析，从而获得玉木耳酸性多糖。制备得到的玉木耳酸性多糖具有良好的抗氧化活性，其中清除超氧阴离子的IC为0.77mg/mL，清除ABTS自由基的IC50为0.81mg/mL，清除羟基自由基的IC50为1.87mg/mL，清除DPPH自由基的IC50为1.85mg/mL。此外，制备得到的玉木耳酸性多糖具有抑制酪氨酸酶活性的作用，可将L-多巴转化成黑色素的生产率将为2.83％，因此，该多糖可应用于消除自由基、抑制黑色素生成的保健食品及化妆品中。
实施例2
将玉木耳干燥子实体过40目筛，进行粉碎，得到玉木耳干燥子实体粉末，装入烧杯中；称取果胶酶，将其用pH值为5.0的磷酸盐缓冲液配制成10mg/mL果胶酶溶液，并将果胶酶溶液加入上述所述的烧杯中，使加入的果胶酶的酶质量为玉木耳干燥子实体粉末的0.2％，再加入pH值为5.0的缓冲液，使混合溶液液体体积为玉木耳干燥子实体粉末的60倍。烧杯放在40℃、水浴锅中恒温加热反应1小时，再将烧杯放置于80℃水浴中1小时，灭活果胶酶活性，减压浓缩至混合溶液1的1/4，即为玉木耳酶提取液；向其中加入质量为玉木耳干燥子实体粉末0.2％的中性蛋白酶，并在温度40℃的环境下，酶解1小时后加入氯仿正丁醇混合溶液，氯仿和正丁醇的体积比例为4:1，磁力搅拌1小时，离心，吸取上层溶液；并向上层溶液中再次加入氯仿正丁醇混合溶液，氯仿和正丁醇的体积比例为4:1，磁力搅拌1小时，离心，取上层溶液进行减压浓缩至原体积1/3，加入无水乙醇，获得玉木耳水溶性多糖。玉木耳水溶性多糖加去离子水溶解，定容，经DEAE 52纤维素柱层析，依次用去离子水及0mol/L～1mol/L氯化钠溶液洗脱，洗脱流速为5mL/3min，洗脱进行收集，每管收集洗脱液5mL；并逐管进行糖含量检测，根据检测结果将收集后的各管多糖溶液分为玉木耳水溶性多糖-Ⅰ、玉木耳水溶性多糖-Ⅱ、玉木耳水溶性多糖-Ⅲ和玉木耳水溶性多糖-Ⅳ，对玉木耳水溶性多糖-Ⅲ进行聚丙烯酰胺葡聚糖S400凝胶柱层析，从而获得玉木耳酸性多糖。制备得到的玉木耳酸性多糖具有良好的抗氧化活性，其中清除超氧阴离子的IC为0.81mg/mL，清除ABTS自由基的IC50为0.85mg/mL，清除羟基自由基的IC50为1.77mg/mL，清除DPPH自由基的IC50为1.91mg/mL。此外，制备得到的玉木耳酸性多糖具有抑制酪氨酸酶活性的作用，可将L-多巴转化成黑色素的生产率将为3.18％，因此，该多糖可应用于消除自由基、抑制黑色素生成的保健食品及化妆品中。
实施例3
将玉木耳干燥子实体过40目筛，进行粉碎，得到玉木耳干燥子实体粉末，装入烧杯中；称取果胶酶，将其用pH值为5.0的磷酸盐缓冲液配制成10mg/mL果胶酶溶液，并将果胶酶溶液加入上述所述的烧杯中，使加入的果胶酶的酶质量为玉木耳干燥子实体粉末的0.6％，再加入pH值为5.0的缓冲液，使混合溶液液体体积为玉木耳干燥子实体粉末的120倍。烧杯放在60℃水浴锅中恒温加热反应1小时，再将烧杯放置于、90℃水浴中1小时，灭活果胶酶活性，减压浓缩至混合溶液1的1/3，即为玉木耳酶提取液；向其中加入质量为玉木耳干燥子实体粉末0.2％的中性蛋白酶，并在温度40℃的环境下，酶解1小时后加入氯仿正丁醇混合溶液，氯仿和正丁醇的体积比例为4:1，磁力搅拌1小时，离心，吸取上层溶液；并向上层溶液中再次加入氯仿正丁醇混合溶液，氯仿和正丁醇的体积比例为4:1，磁力搅拌1小时，离心，取上层溶液进行减压浓缩至原体积1/3，加入无水乙醇，获得玉木耳水溶性多糖。玉木耳水溶性多糖加去离子水溶解，定容，经DEAE 52纤维素柱层析，依次用去离子水及0mol/L～1mol/L氯化钠溶液洗脱，洗脱流速为5mL/3min，洗脱进行收集，每管收集洗脱液5mL；并逐管进行糖含量检测，根据检测结果将收集后的各管多糖溶液分为玉木耳水溶性多糖-Ⅰ、玉木耳水溶性多糖-Ⅱ、玉木耳水溶性多糖-Ⅲ和玉木耳水溶性多糖-Ⅳ，对玉木耳水溶性多糖-Ⅲ进行聚丙烯酰胺葡聚糖S400凝胶柱层析，从而获得玉木耳酸性多糖。制备得到的玉木耳酸性多糖具有良好的抗氧化活性，其中清除超氧阴离子的IC为0.84mg/mL，清除ABTS自由基的IC50为0.85mg/mL，清除羟基自由基的IC50为1.84mg/mL，清除DPPH自由基的IC50为1.91mg/mL。此外，制备得到的玉木耳酸性多糖具有抑制酪氨酸酶活性的作用，可将L-多巴转化成黑色素的生产率将为3.09％，因此，该多糖可应用于消除自由基、抑制黑色素生成的保健食品及化妆品中。
实施例4
将玉木耳干燥子实体过40目筛，进行粉碎，得到玉木耳干燥子实体粉末，装入烧杯中；称取果胶酶，将其用pH值为5.0的磷酸盐缓冲液配制成10mg/mL果胶酶溶液，并将果胶酶溶液加入上述所述的烧杯中，使加入的果胶酶的酶质量为玉木耳干燥子实体粉末的0.4％，再加入pH值为5.0的缓冲液，使混合溶液液体体积为玉木耳干燥子实体粉末的80倍。烧杯放在50℃水浴锅中恒温加热反应1小时，再将烧杯放置于、85℃水浴中1小时，灭活果胶酶活性，减压浓缩至混合溶液1的1/4，即为玉木耳酶提取液；向其中加入质量为玉木耳干燥子实体粉末0.2％的中性蛋白酶，并在温度40℃的环境下，酶解1小时后加入氯仿正丁醇混合溶液，氯仿和正丁醇的体积比例为4:1，磁力搅拌1小时，离心，吸取上层溶液；并向上层溶液中再次加入氯仿正丁醇混合溶液，氯仿和正丁醇的体积比例为4:1，磁力搅拌1小时，离心，取上层溶液进行减压浓缩至原体积1/3，加入无水乙醇，获得玉木耳水溶性多糖。玉木耳水溶性多糖加去离子水溶解，定容，经DEAE 52纤维素柱层析，依次用去离子水及0mol/L～1mol/L氯化钠溶液洗脱，洗脱流速为5mL/3min，洗脱进行收集，每管收集洗脱液5mL；并逐管进行糖含量检测，根据检测结果将收集后的各管多糖溶液分为玉木耳水溶性多糖-Ⅰ、玉木耳水溶性多糖-Ⅱ、玉木耳水溶性多糖-Ⅲ和玉木耳水溶性多糖-Ⅳ，对玉木耳水溶性多糖-Ⅲ进行聚丙烯酰胺葡聚糖S400凝胶柱层析，从而获得玉木耳酸性多糖。制备得到的玉木耳酸性多糖具有良好的抗氧化活性，其中清除超氧阴离子的IC为0.89mg/mL，清除ABTS自由基的IC50为0.94mg/mL，清除羟基自由基的IC50为1.85mg/mL，清除DPPH自由基的IC50为1.98mg/mL。此外，制备得到的玉木耳酸性多糖具有抑制酪氨酸酶活性的作用，可将L-多巴转化成黑色素的生产率将为3.26％，因此，该多糖可应用于消除自由基、抑制黑色素生成的保健食品及化妆品中。
本发明实施方式说明到此结束。
Claims (7)
1.一种玉木耳酸性多糖的制备方法，其特征在于：玉木耳酸性多糖的制备方法具体步骤如下：
(1)将玉木耳干燥子实体过40目筛，进行粉碎，得到玉木耳干燥子实体粉末，装入烧杯中；
(2)称取果胶酶，将其用pH值为5.0的磷酸盐缓冲液，配制成10mg/mL果胶酶溶液，并将果胶酶溶液加入上述步骤(1)所述烧杯中，使加入的果胶酶的酶质量为玉木耳干燥子实体粉末的0.2％～0.6％，再加入pH值为5.0的缓冲液，制备的溶液为混合溶液1，使混合溶液1液体体积为玉木耳干燥子实体粉末的60～120倍；
(3)将上述步骤(2)制备的装有混合溶液1的烧杯放在40℃～60℃水浴锅中恒温加热反应1小时，再将烧杯放置于80℃～90℃水浴中1小时，灭活果胶酶活性，减压浓缩至原混合溶液1体积的1/3～1/4，即为玉木耳酶提取液；
(4)在上述步骤(3)提取的玉木耳酶提取液中，加入质量为玉木耳干燥子实体粉末0.2％的中性蛋白酶，形成玉木耳酶解液，保持上述玉木耳酶解液在温度为40℃环境下，酶解1小时；
(5)在上述步骤(4)所述酶解后的玉木耳酶解液中加入氯仿正丁醇混合溶液，其中氯仿和正丁醇的体积比例为4:1，制备成混合溶液2，对混合溶液2进行磁力搅拌1小时，离心，提取上层溶液，向上层溶液中再次加入氯仿正丁醇混合溶液，氯仿和正丁醇的体积比例为4:1，磁力搅拌1小时，离心，取上层溶液进行减压浓缩至原体积1/3，加入无水乙醇，获得玉木耳水溶性多糖；
(6)玉木耳水溶性多糖加去离子水溶解，定容，经DEAE 52纤维素柱层析，依次用去离子水及0mol/L～1mol/L氯化钠溶液洗脱，洗脱流速为5mL/3min，洗脱进行收集，每管收集洗脱液5mL；
(7)对上述步骤(6)处理后的溶液进行糖含量检测，根据检测结果将步骤(6)处理收集后的各管多糖溶液分为玉木耳水溶性多糖-Ⅰ、玉木耳水溶性多糖-Ⅱ、玉木耳水溶性多糖-Ⅲ和玉木耳水溶性多糖-Ⅳ，对玉木耳水溶性多糖-Ⅲ进行聚丙烯酰胺葡聚糖S400凝胶柱层析，从而获得玉木耳酸性多糖。
2.根据权利要求1所述一种玉木耳酸性多糖的制备方法，其特征在于：上述步骤(2)中所述加入的果胶酶的酶质量为玉木耳干燥子实体粉末的0.4％，所述混合溶液1液体体积为玉木耳干燥子实体粉末的100倍。
3.根据权利要求1～2所述一种玉木耳酸性多糖的制备方法，其特征在于：上述步骤(3)所述将装有混合溶液1的烧杯放在50℃水浴锅中恒温加热反应1小时，将烧杯放置于85℃水浴中1小时，灭活果胶酶活性，减压浓缩至原体积1/3，从而制备玉木耳酶提取液。
4.一种如权利要求1所述的制备方法取得的玉木耳酸性多糖在制备消除自由基保健食品、化妆品中的用途。
5.一种如权利要求1所述的制备方法取得的玉木耳酸性多糖在制备抑制黑色素生成保健食品、化妆品中的用途。
6.一种保健食品组合物，其特征在于，保健食品组合物含有权利要求1所述的玉木耳酸性多糖和任选地保健食品上可接受的辅料。
7.一种化妆品组合物，其特征在于，化妆品组合物含有权利要求1所述的玉木耳酸性多糖和任选地化妆品上可接受的辅料。
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| GR01 | Patent grant | ||
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