CN102512354A

CN102512354A - 一种竹荪醇提取物及其制备方法与应用

Info

Publication number: CN102512354A
Application number: CN2011104447646A
Authority: CN
Inventors: 董银卯; 何聪芬; 王领; 崔希庆; 黄福山; 程华
Original assignee: Beijing Technology and Business University
Current assignee: Beijing Technology and Business University
Priority date: 2011-12-27
Filing date: 2011-12-27
Publication date: 2012-06-27
Anticipated expiration: 2031-12-27
Also published as: CN102512354B

Abstract

本发明公开了一种竹荪醇提取物及其制备方法与应用。该制备方法包括如下步骤：(1)将竹荪粉末与乙醇水溶液混合后经加热提取得提取液；(2)所述提取液经静置沉淀后经过滤得到回收液；(3)浓缩所述回收液得浓缩液；(4)向所述浓缩液中加入糊精，并搅拌均匀后依次经预冻成冰和冷冻干燥即得产品。本发明方法操作简单，生产成本低，制备的产物具有较高的纯度，活性成分产率高；该方法制备的竹荪醇提取物容易成粉，颜色呈淡黄色或黄色，容易添加到化妆品配方之中；采用此提取物制备的化妆产品具有明显的抗衰老效果，美白美容效果更为显著。

Description

一种竹荪醇提取物及其制备方法与应用

技术领域

本发明涉及一种竹荪醇提取物及其制备方法与应用，具体涉及一种竹荪中抗衰老、美容美白有效成分及其制备方法与应用。

背景技术

竹荪(Dictyophora indusiata)为笔鬼科(Phallaceae)竹荪属(Dictyophora)真菌，又名竹笙、竹参、网纱菌等，是一种珍贵的兼具食用和药用价值的两用真菌，在我国主要分布在云南、福建、湖南、四川及东北三省等地区。

竹荪是一种名贵的食用菌，富含多种优质植物营养蛋白，蛋白质含量高且含有组成蛋白质的全套氨基酸，其中必需氨基酸含量占总氨基酸的1/3以上，高于谷物与一些肉类，谷氨酸含量最为丰富，占氨基酸总量的17.0％以上。竹荪的子实体酥脆可口，香味浓郁，味道鲜美，别具风味，素有“菌中皇后”、“山珍之王”的美称。竹荪属于生理碱性食品，能够调节人体中血酸和脂肪酸的含量，降血压作用效果明显，竹荪还能够降低体内胆固醇、减少腹壁脂肪的贮积；竹荪中所含有的高活性的大分子物质多糖成分具有抑制肿瘤、抗炎症、抗凝血、刺激免疫以及降血糖等疗效，对艾滋病也有一定的抑制作用；竹荪中含有的有效成分对肌肤具有美白及延缓衰老的功效。

目前对竹荪的研究多集中在液体培养条件、多糖的提取、发酵菌及子实体营养成分等方面，近年来随着竹荪提取物尤其是醇提取物的美容美白功效的发现，竹荪逐渐成为时尚化妆品有效成分的原材料，但是针对竹荪醇提物，由于液体中含有乙醇，一般很难作为化妆品活性原料进行添加，所以对竹荪醇提物进行研究，研发出适用于化妆品原料要求的竹荪醇提物，此提取物也可以作为食品、保健品的功效成分添加到产品之中，具有重要的经济价值。

发明内容

本发明的目的是提供一种竹荪醇提取物及其制备方法与应用。

本发明提供的一种竹荪醇提取物的制备方法，包括如下步骤：

(1)将竹荪粉末与乙醇水溶液混合后经加热提取得提取液；

(2)所述提取液经静置沉淀后经过滤得到回收液；

(3)浓缩所述回收液得浓缩液；

(4)向所述浓缩液中加入糊精，并搅拌均匀后依次经预冻成冰和冷冻干燥即得产品。

上述的制备方法中，步骤(1)中，所述竹荪粉末的粒度为60目～80目，具体可为60目、70目或80目；所述竹荪粉末与乙醇水溶液的质量份数比为1∶(30～40)，具体可为1∶30、1∶40或1∶50；所述乙醇水溶液中，乙醇的体积百分含量为80％～90％，具体可为80％、85％或90％。

上述的制备方法中，步骤(1)中，所述加热提取的温度为80℃～85℃，具体可为80℃或85℃，时间为2.0h～2.5h，具体可为2.0h或2.5h。

上述的制备方法中，步骤(2)中，所述静置沉淀的时间为0.5h～1h，具体可为0.5h或1h；步骤(3)中，所述浓缩的温度为55℃～60℃，具体可为55℃或60℃，所述浓缩液与所述回收液的质量份数比为1∶(28～37)，具体可为1∶28、1∶32或1∶37。

上述的制备方法中，步骤(4)中，所述糊精与所述浓缩液中可溶性固形物的质量份数比为1∶(2～3)，具体可为1∶3或1∶2；用数字式折射仪或阿贝折射率仪测定所述浓缩液中可溶性固形物的含量。

上述的制备方法中，步骤(4)中，所述预冻成冰步骤在冰箱中于-40℃～-60℃下进行，如-40℃或-60℃；所述冷冻干燥步骤在真空冷冻干燥机中进行；所述冷冻干燥的温度为-70℃，时间为18h～36h，如18h、24h或36h。

本发明还提供了上述方法制备的竹荪醇提取物。

本发明还进一步提供了上述竹荪醇提取物在制备化妆品中的应用，该化妆品具有抗衰老、美白美容的功效。

本发明方法操作简单，生产成本低，制备的产物具有较高的纯度，活性成分产率高；该方法制备的竹荪醇提取物容易成粉，颜色呈淡黄色或黄色，容易添加到化妆品配方之中；采用此提取物制备的化妆产品具有明显的抗衰老效果，美白美容效果更为显著。

附图说明

图1为本发明实施例1制备竹荪醇提取物的工艺流程图。

图2为本发明实施例1制备的竹荪醇提取物的照片。

图3为本发明实施例1制备的竹荪醇提取物对L-酪氨酸酶的活性抑制率曲线。

图4为本发明实施例2制备的竹荪醇取提物清除超氧阴离子自由基的清除率曲线。

图5为本发明实施例3制备的竹荪醇取提物清除DPPH自由基的清除率曲线。

具体实施方式

下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例1、竹荪醇提取物的制备及美白功效试验

1、制备竹荪醇提取物

本实施例制备竹荪醇提取物的工艺流程图如图1所示。

1)制备样品：将竹荪粉碎(粉碎设备：多功能粉碎机GX-04，上海高翔食品机械厂)并过60目筛得到粉末，置于通风干燥处保存，备用，称取竹荪粉末100g；

2)加热提取：将制备的竹荪粉末和体积百分含量为80％的乙醇水溶液以1∶30的质量比混合搅拌均匀，置于80℃微沸条件(加热设备：电子调温电热器98-1-B型，天津市泰斯特仪器有限公司)下回流提取2.5h；

3)沉淀抽滤：将提取液静置沉淀0.5h，用滤板进行抽滤(抽滤设备：SHZ-III型循环水式多用真空泵，上海知信实验仪器有限公司)得到回收液；

4)浓缩：将2800g回收液置于55℃条件下浓缩(浓缩设备：旋转蒸发器RE2000型，上海亚荣生化仪器厂)到100g浓缩液，其中浓缩液与回收液的质量份数比为1∶28，并采用固含仪(ATAGO数字式折射仪PR-101α)测定浓缩液中可溶性固形物含量为40％；

5)加入糊精：向浓缩液中加入2倍于可溶性固形物质量的糊精80g得混合液；

6)将混合液搅拌均匀，充分溶解后，放在冰箱中于-40℃预冻成冰后，再置于真空冷冻干燥机中(美国VIRTIS公司)-70℃条件下真空冷冻18h，得到竹荪醇提取物冻干粉，如图2所示。

2、上述制备的竹荪醇提取物的美白功效试验-对L-酪氨酸酶的活性抑制率实验

酪氨酸酶是黑素形成过程中主要的限速酶，该酶的活性大小决定着黑素形成的数量，当前化妆品市场上的美白产品绝大多数以酪氨酸酶抑制剂为主。

L-酪氨酸酶与其底物L-酪氨酸可以发生催化反应，当在反应体系中添加有L-酪氨酸酶活性抑制作用的试剂后，对催化反应可以产生抑制作用，通过测定添加有L-酪氨酸酶活性抑制作用的试剂前后475nm处吸光度值的变化，来评价该有L-酪氨酸酶活性抑制作用的试剂对L-酪氨酸酶活性的抑制率。

具体实验过程如下：

1)称取17.91g十二水磷酸氢二钠溶于500mL蒸馏水中，得到溶液a；称取7.8g二水磷酸二氢钠溶于500mL蒸馏水中，得到溶液b；将92.6mL溶液a和107.4mL溶液b混合，得到200mL pH为6.8的PBS缓冲溶液；

2)称取0.05g L-酪氨酸，先用少量0.1mol/L的盐酸溶解，待其溶解后用上述配制的pH为6.8的PBS缓冲液定容至100mL；

实验过程中，各组中各物质的加入量如表1所示。

表1竹荪醇提取冻干粉对L-酪氨酸酶的活性抑制实验中各物质的加入量

注：C₁组和T₁组均加入0.5mL酪氨酸酶，酶活为100U/mL。

3)C₀组各溶液配好摇匀后，在37℃水浴锅中水浴加热10min，波长475nm下调零。C₁组溶液配好摇匀后，37℃水浴10min后加入0.5ml酶活为100U/mL的酪氨酸酶，继续水浴10分钟，测定吸光度值。

4)T₀组各溶液配好摇匀后，在37℃水浴锅中水浴加热10min，波长475nm下调零。T₁组溶液配好摇匀后，37℃水浴10min后加入0.5ml酶活为100U/mL的酪氨酸酶，继续水浴10分钟，测定吸光度值。

5)计算酪氨酸酶的活性抑制率T(％)，T(％)＝(C₁-T₁)/C₁×100％。

实验设三次重复，三次重复的平均结果如图3所示。结果表明，当竹荪醇提物冻干粉浓度为2％时，酪氨酸酶活性抑制率达到79％，随着浓度的增大，抑制率也呈上升趋势，当3％浓度时，抑制率达到88％，表明竹荪醇提取物具有良好的美白效果。

实施例2、竹荪醇提取物的制备及抗衰老功效试验

1、制备竹荪醇提取物

1)制备样品：将竹荪粉碎(粉碎设备：多功能粉碎机GX-04，上海高翔食品机械厂)并过80目筛得到粉末，置于通风干燥处保存，备用，称取竹荪粉末100g；

2)加热提取：将制备的竹荪粉末和体积百分含量为90％的乙醇水溶液以1∶40的质量比混合搅拌均匀，置于85℃微沸条件(加热设备：电子调温电热器98-1-B型，天津市泰斯特仪器有限公司)下回流提取2.0h；

3)沉淀抽滤：将提取液静置沉淀1.0h，用滤板进行抽滤(抽滤设备：SHZ-III型循环水式多用真空泵，上海知信实验仪器有限公司)得到回收液；

4)浓缩：将3700g回收液置于60℃条件下浓缩(浓缩设备：旋转蒸发器RE2000型，上海亚荣生化仪器厂)到100g浓缩液，其中浓缩液与回收液的质量份数比为1∶37，并采用固含仪(ATAGO数字式折射仪PR-101α)测定浓缩液中可溶性固形物含量为50％；

5)加入糊精：向浓缩液中加入3倍于可溶性固形物质量的糊精150g得混合液；

6)将混合液搅拌均匀，充分溶解后，放在冰箱中于-60℃预冻成冰后，再置于真空冷冻干燥机中(美国VIRTIS公司)-70℃条件下真空冷冻24h，得到竹荪醇提取物冻干粉。

2、上述制备的竹荪醇提取物的抗衰老功效试验-清除超氧阴离子自由基实验

取0.05mol/L pH 8.2的Tris-HCl缓冲液4.5ml，置于25℃水浴中预热20min，分别加入1ml不同浓度的上述制备的竹荪醇提取物冻干粉水溶液和0.4ml 25mmol/L的邻苯三酚溶液，混匀后于25℃水浴中反应5min，加入1.0ml 8mol/L的HCl终止反应，以Tris-HCl缓冲液作参比，在299nm处测定吸光度，计算清除率。

空白对照组以1ml去离子水代替样品，每个处理均做三个重复。

清除率的计算公式：超氧阴离子自由基清除率(％)＝100(A₁-A₂)/A₁，其中A₁为空白对照的平均吸光度，A₂为竹荪醇提取物冻干粉水溶液的平均吸光度。

上述制备的竹荪醇提取冻干粉对超氧阴离子自由基的清除作用的清楚率曲线如图4所示；结果表明，竹荪醇提取冻干粉浓度为3％时，超氧阴离子自由基的清除率为82％，说明竹荪醇提取冻干粉具有显著的延缓衰老的功效。

实施例3、竹荪醇提取物的制备及美容功效试验

1、制备竹荪醇提取物

1)制备样品：将竹荪粉碎(粉碎设备：多功能粉碎机GX-04，上海高翔食品机械厂)并过70目筛得到粉末，置于通风干燥处保存，备用，称取竹荪粉末100g；

2)加热提取：将制备的竹荪粉末和体积百分含量为85％的乙醇水溶液以1∶35的质量比混合搅拌均匀，置于85℃微沸条件(加热设备：电子调温电热器98-1-B型，天津市泰斯特仪器有限公司)下回流提取2.0h；

4)浓缩：将3200g回收液置于60℃条件下浓缩(浓缩设备：旋转蒸发器RE2000型，上海亚荣生化仪器厂)到100g浓缩液，其中浓缩液与回收液的质量份数比为1∶32，并采用固含仪(ATAGO数字式折射仪PR-101α)测定浓缩液中可溶性固形物含量为50％；

6)将混合液搅拌均匀，充分溶解后，放在冰箱中于-40℃预冻成冰后，再置于真空冷冻干燥机中(美国VIRTIS公司)-70℃条件下真空冷冻36h，得到竹荪醇提取物冻干粉。

2、上述制备的竹荪醇提取物的美容功效试验-清除DPPH自由基(DPPH·)实验

DPPH·是一种很稳定的以氮为中心的自由基，若提取物能将其清除，则表示提取物具有降低羟自由基、烷自由基或氧化自由基的有效浓度和打断脂质过氧化链反应的作用。DPPH·在有机溶剂中非常稳定，呈紫色，在517nm处有一个特征吸收峰，当其遇到自由基清除剂时，DPPH·的孤电子被配对，使其颜色变浅，在最大吸收波长处的吸光度变小。因此，可通过测定吸光度的变化来评价其对DPPH·的清除效果。

准确称取20mg DPPH·(sigma公司)，用无水乙醇定容至250ml容量瓶中，得到浓度为20mmol/L的DPPH·溶液，将上述制备的竹荪醇提取冻干粉分别用蒸馏水溶解成不同浓度的测试液。分别取2ml不同浓度的测试液及2ml 20mmol/L DPPH·，混匀后反应30min，测定517nm波长下吸光度的变化，对照溶剂用无水乙醇代替，按下式计算抑制率。

抑制率(％)＝[1-(A_i-A_j)/Ac]×100；

式中，A_i为2ml DPPH·溶液与2ml不同浓度的测试液组成的混合液的吸光度；A_j为2ml不同浓度的测试液与2ml无水乙醇组成的混合液的吸光度；Ac为2ml DPPH·溶液与2ml无水乙醇组成的混合液的吸光度。

上述制备的竹荪醇提取冻干粉对DPPH·的清除作用的清除率曲线如图5所示，从图中可以看出，随着浓度的增大，DPPH自由基清除率也逐渐增大，说明竹荪醇提取冻干粉清除DPPH自由基效果显著，具有抗衰老的美容功效。

Claims

1.一种竹荪醇提取物的制备方法，包括如下步骤：

(1)将竹荪粉末与乙醇水溶液混合后经加热提取得提取液；

(2)所述提取液经静置沉淀后经过滤得到回收液；

(3)浓缩所述回收液得浓缩液；

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤(1)中，所述竹荪粉末的粒度为60目～80目；所述竹荪粉末与乙醇水溶液的质量份数比为1∶(30～40)；所述乙醇水溶液中，乙醇的体积百分含量为80％～90％。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：步骤(1)中，所述加热提取的温度为80℃～85℃，时间为2.0h～2.5h。

4.根据权利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：步骤(2)中，所述静置沉淀的时间为0.5h～1h；步骤(3)中，所述浓缩的温度为55℃～60℃，所述浓缩液与所述回收液的质量份数比为1∶(28～37)。

5.根据权利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：步骤(4)中，所述糊精与所述浓缩液中可溶性固形物的质量份数比为1∶(2～3)；用数字式折射仪测定所述浓缩液中可溶性固形物的含量。

6.根据权利要求1-5中任一所述的方法，其特征在于：步骤(4)中，所述预冻成冰步骤在冰箱中于-40℃～-60℃下进行；所述冷冻干燥步骤在真空冷冻干燥机中进行；所述冷冻干燥的温度为-70℃，时间为18h～36h。

7.权利要求1-6中任一所述方法制备的竹荪醇提取物。

8.权利要求7所述竹荪醇提取物在制备化妆品中的应用。

9.一种化妆品，包括权利要求7所述的竹荪醇提取物。