CN104922247A - 一种黄根的乙酸乙酯提取物的提取方法及应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种黄根的乙酸乙酯提取物的提取方法，包括以下步骤：将黄根的根部清洗、烘干、粉碎；将黄根粗粉与乙醇溶液置于反应容器中，常温浸泡；将浸泡液进行加热回流，350目滤布过滤，滤液泵入贮液罐，再通过真空抽至浓缩罐进行浓缩，共提取三次；合并三次过滤液，浓缩至无醇味时，把浓缩液转移至电磁锅，用电磁炉加热，一边搅拌一边浓缩，至稠浸膏，得到黄根醇提物；将黄根醇提物加适量蒸馏水溶解，依次用石油醚、乙酸乙酯，制备得到乙酸乙酯相；蒸发除去乙酸乙酯得到黄根的乙酸乙酯提取物。本发明还公开了一种黄根的乙酸乙酯提取物在制备抗肝纤维化活性药物的应用。制备得到的乙酸乙酯部位具有抗肝纤维化作用。

Description

一种黄根的乙酸乙酯提取物的提取方法及应用

技术领域

本发明属于中草药提取技术领域，具体涉及一种黄根的乙酸乙酯提取物的提取方法，本发明还涉及一种黄根的乙酸乙酯提取物在制备抗肝纤维化活性药物的应用。

背景技术

黄根又名南山花、狗骨木。为茜草科植物南山花(Prismatomeriscomatar.Z.Ruan)的根，是广西特产特色壮药材之一。有强筋壮骨，利湿退黄，祛瘀生新，凉血止血之功。广西壮族民间用以治疗风湿跌打、肝炎、矽肺、贫血等多种疾病。现代研究黄根含有有机铝化合物、柚木醌、虎刺醛、甲基异茜草素、β—各甾醇及蒽类、萜类。黄根提取物有抗菌消炎、祛瘀平喘、保肝、抗肝纤维化、抗肺纤维化等作用(梁启成，钟鸣.中国中药学.广西民族医药出版社.2005；382)。早在1986年甘荔等人首先报告黄根抑制肝纤维化的病理形态学观察，认为黄根对肝脏吞噬细胞有保护作用，促进肝吞噬细胞对异物的排除，从而抑制肝纤维化。姜建双等对黄根化学成分进行了研究，通过反复的提取分离和纯化鉴定了1-羟基-2-甲基蒽醌等6个化合物(姜建双，冯子明，张培成.黄根化学成份的研究.中国中药杂志.2005,22(11):1751)，邓家刚等又报告黄根醇提物对CCL₄所致大鼠肝纤维化具有保护作用。此后邓家刚等采用黄根醇提物对CCL₄所致大鼠肝纤维化的作用进行观察，结果认为黄根醇提物各剂量组可使肝纤维化大鼠肝组织中的Ⅰ、Ⅲ型胶原含量减少，TGF-β1仅微量表达(①邓家刚，周程艳，郑作文：黄根醇提物对四氯化碳所致大鼠肝纤维化的保护作用时珍国医国药2008，19(6)：1339.②邓家刚，郑作文，王勤等.复方黄根对四氯化碳所致大鼠慢性肝损伤的保护作用.中国中西医结合消化杂志.200614(6):372.③邓家刚,周程艳,郑作文.黄根醇提物对肝纤维化大鼠肝组织中TGF-β1表达及COI-Ⅰ、COI-Ⅲ水平的影响.北京中医药大学学报.2009；(1):42)。

发明内容

本发明的目的是提供一种黄根的乙酸乙酯提取物的提取方法，解决了现有技术中存在的黄根中具有抗肝纤维化的物质成份不容易被浸提出来的问题。

本发明的另一目的是提供一种黄根的乙酸乙酯提取物在制备抗肝纤维化活性药物的应用。

本发明所采用的第一技术方案是，一种黄根的乙酸乙酯提取物的提取方法，包括以下步骤：

步骤1、原料处理，将黄根的根部清洗、烘干、粉碎，制备的到黄根粗粉；

步骤2、将黄根粗粉与乙醇溶液置于反应容器中，常温浸泡45min-75min，制备得到浸泡液；

步骤3、将浸泡液进行加热回流，350目滤布过滤，滤液泵入贮液罐，再通过真空抽至浓缩罐进行浓缩，共提取三次；

步骤4、浓缩，合并三次过滤液，浓缩至无醇味时，把浓缩液转移至电磁锅，用电磁炉加热，一边搅拌一边浓缩，至稠浸膏，得到黄根醇提物；

步骤5、将步骤4得到的黄根醇提物加适量蒸馏水溶解，依次用石油醚、乙酸乙酯，制备得到乙酸乙酯相；

步骤6、蒸发，蒸发除去乙酸乙酯得到黄根的乙酸乙酯提取物。

上述技术方案中，乙醇溶液的浓度为60％-95％。

黄根粗粉与乙醇溶液按照质量体积比为1:5-1:10。

回流条件是微沸45min-75min。

本发明所采用的第二技术方案是一种黄根的乙酸乙酯提取物在制备抗肝纤维化活性药物的应用。

本发明的有益效果是：本提取方法是采用60％-95％乙醇进行提取，再按极性强弱对乙醇提取物进行萃取，再针对各部位开展抗肝纤维化的活性研究。从肝纤维化模型大鼠肝脏指数、ALT、AST指标可看出乙酸乙酯部位具有抗肝纤维化作用。

附图说明

图1是黄根的乙酸乙酯提取物的提取方法的工艺流程图。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明进行详细说明。

本发明提供一种黄根的乙酸乙酯提取物的提取方法，如图1所示，包括以下步骤：

步骤1、原料处理，将黄根的根部清洗、烘干、粉碎，制备的到黄根粗粉；

步骤2、将黄根粗粉与60％-95％的乙醇溶液按照质量体积比为1:5-1:10置于反应容器中，常温浸泡45min-75min，制备得到浸泡液，

步骤3、将浸泡液进行加热回流，加热回流条件是：微沸45min-75min，350目滤布过滤，滤液泵入贮液罐共提取三次；

步骤4、浓缩，合并三次过滤液，再通过真空抽至浓缩罐进行浓缩，浓缩至无醇味时，把浓缩液转移至电磁锅，用电磁炉加热，目的就是为了挥干乙醇，一边搅拌一边浓缩，至稠浸膏，得到黄根醇提物；

步骤5、将步骤4得到的黄根醇提物加适量蒸馏水溶解，用石油醚萃取2-3次，合并水相，然后用乙酸乙酯萃取水相2-3次，合并得到乙酸乙酯相；

步骤6、蒸发，蒸发除去乙酸乙酯得到黄根的乙酸乙酯提取物。

实施例1：黄根的乙酸乙酯提取物的制备

黄根，采自广西防城，经广西民族医药研究院兰日春副主任药师鉴定为茜草科植物南山花PrismatomerisconnataY.Z.Ruan.的干燥根。黄根醇提物为实验室自制：将药材粉碎成粗粉，按1Kg/袋装入布袋中，扎好袋口，共20袋黄根粗粉，放入多功能提取、浓缩机组的提取锅中，按料：液＝1：7的比例，加入140Kg95％乙醇，浸泡药材粉1小时后，第一次加热回流提取、保持微沸1小时，350目滤布过滤，滤液泵入贮液罐，再通过真空抽至浓缩罐进行浓缩，药渣再按料：液＝1：7的比例，加入140Kg95％乙醇，共提取三次。第二、三次加热回流提取、过滤、浓缩同第一次的方法；合并三次滤液，浓缩至无醇味时，把浓缩液转移至电磁锅，用电磁炉加热，一边搅拌一边浓缩，至稠浸膏，称重，得稠浸膏1.25kg。

黄根醇提物加适量蒸馏水溶解，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，分别得石油醚部位56克(得率4.48％)，乙酸乙酯部位169克(得率13.52％)；正丁醇部位237克(得率18.96％)，水部位共得约574克(得率45.92％)。

实施例2：黄根的乙酸乙酯提取物的制备

一种黄根的乙酸乙酯提取物的提取方法，将黄根的根部清洗、烘干、粉碎，制备的到黄根粗粉；将黄根粗粉与60％的乙醇溶液按照质量体积比为1:5置于反应容器中，常温浸泡75min，制备得到浸泡液，将浸泡液进行加热回流，加热回流条件是：微沸45min，350目滤布过滤，滤液泵入贮液罐共提取三次；合并三次过滤液，再通过真空抽至浓缩罐进行浓缩，浓缩至无醇味时，把浓缩液转移至电磁锅，用电磁炉加热，目的就是为了挥干乙醇，一边搅拌一边浓缩，至稠浸膏，得到黄根醇提物；将黄根醇提物加适量蒸馏水溶解，用石油醚萃取2-3次，合并水相，然后用乙酸乙酯萃取水相2-3次，合并得到乙酸乙酯相；蒸发除去乙酸乙酯得到黄根的乙酸乙酯提取物。

实施例3：黄根的乙酸乙酯提取物的制备

一种黄根的乙酸乙酯提取物的提取方法，将黄根的根部清洗、烘干、粉碎，制备的到黄根粗粉；将黄根粗粉与75％的乙醇溶液按照质量体积比为1:10置于反应容器中，常温浸泡45min，制备得到浸泡液，将浸泡液进行加热回流，加热回流条件是：微沸75min，350目滤布过滤，滤液泵入贮液罐共提取三次；合并三次过滤液，再通过真空抽至浓缩罐进行浓缩，浓缩至无醇味时，把浓缩液转移至电磁锅，用电磁炉加热，目的就是为了挥干乙醇，一边搅拌一边浓缩，至稠浸膏，得到黄根醇提物；将黄根醇提物加适量蒸馏水溶解，用石油醚萃取2-3次，合并水相，然后用乙酸乙酯萃取水相2-3次，合并得到乙酸乙酯相；蒸发除去乙酸乙酯得到黄根的乙酸乙酯提取物。

实施例4：黄根的乙酸乙酯提取物胶囊

1、组成：黄根的乙酸乙酯提取物(实施例1)制备50g，淀粉20g，硬脂酸镁5g。

2、制备方法：按照配比称取原辅料，混合均匀，分装胶囊。

实施例5:黄根的乙酸乙酯提取物治疗抗肝纤维化的药效试验

1材料与仪器

1.1实验动物

SPF级Wistar大鼠，雄性，北京维通利华实验动物技术有限公司提供，合格证号：SCXK京2012-0001。

1.2药物

1.3试剂

丙氨酸氨基转移氨酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)试剂盒均购自南京建成生物工程研究所；CMC，分析纯，500ml/瓶，国药集团化学试剂有限公司，批号：20130426；CCL4，分析纯，500ml/瓶，北京现代东方精细化学品有限公司，批号：20110718；秋水仙碱，0.5mg/片，吉林省辉南辉发制药股份有限公司，批号：20130401。

1.4主要仪器

WTD-200多功能提取、浓缩机组(温州中翔轻工机械厂)；电磁炉(美的WK2101)；分析天平(上海友声衡器有限公司)。

2方法

2.1动物分组

雄性大鼠分笼饲养，实验室温度控制在20～25℃，湿度在50％～60％，自由饮水。将动物随机分为11个组，分别显正常对照组、模型组、秋水仙碱组(0.1mg·kg^－1)、水部位(0.52g·kg^-1、0.258g·kg^-1)、正丁醇部位(0.21g·kg^-1、0.107g·kg^-1)、乙酸乙酯部位(0.152g·kg^-1、0.076g·kg^-1)、石油醚部位(0.05g·kg^-1、0.0252g·kg^-1)。除正常组和模型组按体重给予相应体积生理盐水外，其余各组分别给予相应剂量受试药物，每只大鼠每次灌胃液体量为1ml/100g体重，1次/天，连续8周。

2.2造模方式

采用四氯化碳复合因素法制备大鼠肝纤维化模型。取Wistar大鼠，皮下注射40％CCL₄花生油溶液，0.3ml/㎏体重。每周2次，从第2周起，隔日以20％～30％乙醇1ml灌胃。饲以加有0.5％胆固醇低胆碱的饲料，连续8W。

2.3指标检测

给药时间到达到，腹腔动脉取血，3000r/min离心10min，取大鼠血清于－20℃冰箱保存，分别测定血清ALT、AST、TP、ALB、GLO及A/G等生化指标。取大鼠肝脏，测定肝脏指数(g/100g)。

2.4统计学方法

数据以均数±标准差表示，用SPSS15.0软件进行t检验方法统计，以P<0.05为差异有统计学意义。

3结果

3.1对肝纤维化模型大鼠肝脏指数、ALT、AST指标的影响

与空白对照组比较，模型对照组肝脏指数、ALT、AST水平显著升高，模型制备成功；与模型组比较，水部位高剂量组显著降低肝脏指数、ALT、AST水平；水部位低剂量组可降低肝指数、ALT水平，乙酸乙酯部位高剂量组可降低肝指数、AST水平。实验结果见表1。

表1对肝纤维化模型大鼠肝脏指数、ALT、AST指标的影响

注：与空白对照组比较:△p<0.05,△△p<0.01,与模型对照组比较*p<0.05，**p<0.01(下同)。

3.2对肝纤维化模型大鼠TP、ALB、GLO、A/G指标的影响

与空白对照组比较，模型对照组ALB、A/G水平出现下降；与模型组比较，各组指标并未发生明显变化。实验结果见表2。

表2对肝纤维化模型大鼠TP、ALB、GLO、A/G指标的影响

Claims (5)

1.一种黄根的乙酸乙酯提取物的提取方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1、原料处理，将黄根的根部清洗、烘干、粉碎，制备的到黄根粗粉；

步骤2、将黄根粗粉与乙醇溶液置于反应容器中，常温浸泡45min-75min，制备得到浸泡液；

步骤3、将浸泡液进行加热回流，350目滤布过滤，滤液泵入贮液罐，再通过真空抽至浓缩罐进行浓缩，共提取三次；

步骤4、浓缩，合并三次过滤液，浓缩至无醇味时，把浓缩液转移至电磁锅，用电磁炉加热，一边搅拌一边浓缩，至稠浸膏，得到黄根醇提物；

步骤5、将步骤4得到的黄根醇提物加适量蒸馏水溶解，依次用石油醚、乙酸乙酯，制备得到乙酸乙酯相；

步骤6、蒸发，蒸发除去乙酸乙酯得到黄根的乙酸乙酯提取物。

2.根据权利要求1所述的黄根的乙酸乙酯提取物的提取方法，其特征在于，所述乙醇溶液的浓度为60％-95％。

3.根据权利要求1所述的黄根的乙酸乙酯提取物的提取方法，其特征在于，所述黄根粗粉与乙醇溶液按照质量体积比为1:5-1:10。

4.根据权利要求1所述的黄根的乙酸乙酯提取物的提取方法，其特征在于，所述回流条件是微沸45min-75min。

5.一种黄根的乙酸乙酯提取物在制备抗肝纤维化活性药物的应用。