CN110623971A - 白头翁皂苷b4在制备降血压药物中的应用 - Google Patents

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苑仁祎坤
许琼明
杨世林
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Abstract

本发明公开了白头翁皂苷B4在制备降血压药物中的应用。白头翁皂苷B4对高血压具有治疗作用，既能降低肾性高血压的血压，又能降低自发性高血压的血压，并且对高血压具有保护作用和改善心脏功能的作用。

Description

白头翁皂苷B4在制备降血压药物中的应用
技术领域
本发明涉及医药技术领域，具体涉及白头翁皂苷B4在制备降血压药物中的应用。
背景技术
血压异常升高是心血管疾病发生发展的主要危险因素之一，长期血压升高或血压不稳定导致心、脑、肾、血管等靶器官严重损害，严重影响疾病的预后。因此，稳定血压、预防和改善高血压所导致的靶器官的损害，是治疗高血压的最终目的。白头翁皂苷B4是从毛茛科多年生草本植物白头翁中提取具有药理活性的五环三萜类皂苷，其具有抗炎抗菌、免疫调节、抗肿瘤、抗氧化、抗病毒等药理作用，比如：公开号为CN 105213410A，名称为白头翁皂苷B4作为免疫调节剂在治疗急性炎症药物中的应用；公开号为CN 105535004A，名称为白头翁皂苷B4作为EV71病毒抑制剂在制备抗手足口病药物中的应用，但目前尚未有对降血压起作用的白头翁皂苷单体化合物的报道。
发明内容
本发明从高血压的机制研究白头翁皂苷B4在治疗高血压药物中的作用，为后续白头翁皂苷B4防治高血压提供科学依据与实验基础。
本发明的目的是提供白头翁皂苷B4在制备降血压药物中的应用。
其中，所述药物是治疗肾性高血压的药物。
其中，所述药物是治疗自发性高血压的药物。
本发明至少包括以下有益效果：
白头翁皂苷B4对高血压具有治疗作用，既能降低肾性高血压的血压，又能降低自发性高血压的血压，并且对高血压具有保护作用和改善心脏功能的作用。
白头翁皂苷B4应用在治疗肾性高血压的药物中，其能提高血清中一氧化氮(NO)含量，以及降低血浆中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和内皮素(ET)含量以改善血管舒缩功能和降低血压作用，并且降低心脏HW/BW、LVI值，抑制心肌肥大的作用，有助于改善心室的收缩和舒张功能，对高血压起到保护作用和改善心脏功能的作用。
白头翁皂苷B4应用在治疗自发性高血压的药物中，能提高血清中一氧化氮(NO)含量，以及降低血浆中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)含量，同时降低主动脉内径，可以实现降血压，对高血压的保护和改善心脏功能的作用。
本发明通过具体实施例中的实验证明了白头翁皂苷B4在降血压中的应用。
附图说明
图1是空白对照组、模型组、B4 5mg/kg组、B4 10mg/kg组、B4 20mg/kg组和氯沙坦钾片组的大鼠主动脉内径的柱形图；
图2是空白对照组、模型组、B4 5mg/kg组、B4 10mg/kg组、B4 20mg/kg组和氯沙坦钾片组的大鼠EF值的柱形图；
图3是空白对照组、模型组、B4 5mg/kg组、B4 10mg/kg组、B4 20mg/kg组和氯沙坦钾片组的大鼠FS值的柱形图。
具体实施方式
下面结合实例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
应当理解，本文所使用的诸如“具有”、“包含”以及“包括”术语并不配出一个或多个其它元件或其组合的存在或添加。
需要说明的是，下述实施方案中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。
实验得到的数据采用STATA8.0统计软件进行单因素方差分析和t检验数据，以P<0.05为差异有统计学意义，且P越小作用效果越好。
实施例1
白头翁皂苷B4对肾性高血压作用的动物实验如下：
1.1材料
1.1.1实验动物
健康雄性SD大鼠，60只，SPF级，体重(180±20)g，由广西医科大学实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK桂2009–0002。所有实验动物均饲养于可控环境中，室温18～24℃、湿度40％～50％，实验期间动物自由进食、饮水，昼夜节律正常。
1.1.2主要药品和试剂
白头翁皂苷B4(江西本草天工科技有限责任公司，批号：2018042205)；卡托普利(山德士中国制药有限公司，批号：AK002)；注射用生理盐水(四川科伦药业股份有限公司，批号：L219012211)；一氧化氮检测试剂盒(南京建成生物工程研究所，批号：20190303)；血管紧张素ⅡELISA测定试剂盒(美国Rapidbio公司，批号：20190226Q)；内皮素ELISA测定试剂盒(美国Rapidbio公司，批号：20190301B)。
ALC–NIBP无创血压测定分析系统(上海澳尔科特生物技术公司)；1/1000精密天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司，型号：ME204E)；低温高速离心机(Eppendorf公司,型号：5425R)；722sp可见分光光度计(上海棱光技术有限公司)；酶联免疫检测仪(美国BioTek公司,型号：SYNERGYH1)。
1.2实验方法
1.2.1动物模型的建立与分组
健康雄性SD大鼠50只，适应性喂养1周，于造模前用ALC–NIBP无创血压测定分析系统测量各大鼠尾动脉血压，重复测量3次，取其平均值并记录。采用“两肾一夹”法制备肾性高血压大鼠模型。造模4周后，使50只大鼠满足收缩压(SP)﹥120mmHg且造模后血压比造模前高20mmHg以上，即为实验用肾性高血压大鼠。取上述造模成功的肾性高血压大鼠50只，随机分为5组，分别为模型对照组(模型对照组)10只，阳性药对照组(卡托普利组)10只，白头翁皂苷B4高剂量组10只，白头翁皂苷B4中剂量组10只，白头翁皂苷B4低剂量组10只；另设假手术组10只(即只游离单侧肾动脉，但不做缩窄，未形成高血压)(假手术对照组)。术后4周，待大鼠SP稳定后，于给药前再用ALC–NIBP无创血压测定分析系统测定大鼠清醒状态下的尾动脉血压。白头翁皂苷B4高中低剂量组为5、10、20mg/kg，腹腔注射给药，卡托普利组剂量为7.0mg/kg，灌胃给药，模型对照组和假手术对照组大鼠每日腹腔注射等量体积生理盐水，于第5周开始，每日给药1次，连续给药4周。其中，等量体积为与腹腔给药体积相同，即为1mL/100g；本实验中选择卡托普利的剂量7.0mg/kg为最佳给药剂量，经过查文献及预实验结果筛选得到。
1.2.2血压测定
于造模前、造模后第4周和给药4周末用ALC–NIBP无创血压测定分析系统测定大鼠清醒状态下的尾动脉收缩压(SP)，重复测量3次，取其平均值，得到的数据详见表1。
表1：白头翁皂苷B4对肾性高血压大鼠血压的影响(mmHg)
注：给药前后自身血压比较，△P<0.05，△△P<0.01；与模型对照组比较，#P<0.05，##P<0.01。
表1的数据体现了白头翁皂苷B4对肾性高血压大鼠血压的影响。具体为：造模前，大鼠的平均血压为106.34mmHg，造模4周后，大鼠的平均血压为151.15mmHg，与假手术对照组(107.72mmHg)比较，血压变化存在显著性差异(P<0.01)。给药4周后，白头翁皂苷B4高中低剂量组和卡托普利组均产生明显的降压作用，与模型对照组比较有显著性差异(P<0.01)，给药前后自身血压相比较，白头翁皂苷B4高中低剂量组(5mg/kg、10mg/kg、20mg/kg)和卡托普利组给药后血压均显著低于药前血压，提示白头翁皂苷B4和卡托普利均有显著降低血压的作用。表1数据明显说明白头翁皂苷B4应用在治疗肾性高血压的药物中具有较好的降血压作用。
1.2.3血液学指标的检测
连续给药4周末，于最后一次给药后12h，10％的水合氯醛腹腔注射麻醉(3.0mL/kg)，经颈动脉插管取血，EDTA-K2抗凝管采血用于分离血浆，用真空采血管(无抗凝)采血用于分离血清。EDTA-K2抗凝管血样用低温离心机4000r/min离心10min分离血浆后，放-80℃冰箱保存备用，真空采血管血样放置在37℃恒温水槽中，静置30min～50min，待血清析出后，用低温离心机4℃，4000r/min离心10min，分离血清，放-80℃冰箱保存备用。(1)用比色法测定血清NO含量，实验步骤按NO检测试剂盒说明书操作。(2)用酶联免疫法测定血浆AngⅡ含量，实验步骤按AngⅡELISA测定试剂盒说明书操作。(3)用酶联免疫法测定血浆ET含量，实验步骤按ET ELISA测定试剂盒说明书操作。检测得到的数据详见表2。
表2：白头翁皂苷B4对肾性高血压大鼠血清NO及血浆AngⅡ、ET的影响
注：与模型对照组比较，#P<0.05，##P<0.01。
表2的数据体现了白头翁皂苷B4对肾性高血压大鼠血清NO及血浆AngⅡ、ET含量的影响。具体为：与模型对照组相比较，白头翁皂苷B4 20mg/kg组和卡托普利组血清NO含量均显著增加(P<0.01或P<0.05)，白头翁皂苷B4 10mg/kg组及以上剂量组和卡托普利组血浆AngⅡ含量均显著降低(P<0.01)，白头翁皂苷B4 5mg/kg组及以上剂量组和卡托普利组血浆ET含量均显著降低(P<0.01)。表2数据表明，白头翁皂苷B4和卡托普利均能提高血清中的NO含量，而降低血浆AngⅡ和ET含量，有助于改善血管舒缩功能，对高血压的保护和降低血压作用。
1.2.4心脏指数测定
处死大鼠取心脏，用精密天平称量全心重量(HW)，剪除心房和右心室，保留左心室(含室间隔)，称重，得左心室重量(LVW)，计算心脏指数(HW/BW)＝全心重量/体重、左心室重量指数(LVI)＝左心室重量/体重。测定得到的数据详见表3。
表3：白头翁皂苷B4对肾性高血压大鼠HW/BW及LVI值的影响
注：与模型对照组比较，#P<0.05，##P<0.01；与假手术组比较，△P<0.05，△△P<0.01。
表3的数据体现了白头翁皂苷B4对肾性高血压大鼠心脏指数的影响。具体为：给药四周后，处死大鼠摘取心脏时发现，与假手术对照组比较，模型对照组大鼠的心脏体积增大，心室壁肌肉层变厚，白头翁皂苷B4各给药组心室壁肌肉层较模型对照组要薄。与模型对照组比较，白头翁皂苷B4各剂量组和卡托普利组的HW/BW(心重/体重)、LVI较模型对照组有所下降。表3数据表明，白头翁皂苷B4能降低心脏HW/BW、LVI值，抑制心肌肥大的作用，有助于改善心室的收缩和舒张功能，对高血压的保护作用。
1.3结论
本实施例1的实验结果表明，白头翁皂苷B4具有降低肾性高血压大鼠血压作用，能提高血清中一氧化氮(NO)含量，以及降低血浆中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)和内皮素(ET)含量以改善血管舒缩功能和降低血压作用，并且降低心脏HW/BW、LVI值，抑制心肌肥大的作用，有助于改善心室的收缩和舒张功能，以及对高血压的保护作用。
实施例2
白头翁皂苷B4对自发性高血压作用的动物实验如下：
2.1材料
2.1.1实验动物
健康雄性9周龄自发性高血压大鼠(SHR)50只，9周龄雄性wistar kyoto大鼠(WKY)10只，SPF级，体重(180±20)g，由广西医科大学实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK桂2009–0002。所有实验动物均饲养于可控环境中，室温18～24℃、湿度40％～50％，实验期间动物自由进食、饮水，昼夜节律正常。
2.1.2主要药品和试剂
白头翁皂苷B4(江西本草天工科技有限责任公司，批号：2018042205)；氯沙坦钾片(杭州默沙东制药有限公司，批号：L016172)；注射用生理盐水(四川科伦药业股份有限公司，批号：L219012211)；一氧化氮检测试剂盒(南京建成生物工程研究所，批号：20190303)；血管紧张素ⅡELISA测定试剂盒(美国Rapidbio公司，批号：20190226Q)。
ALC–NIBP无创血压测定分析系统(上海澳尔科特生物技术公司)；1/1000精密天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司，型号：ME204E)；低温高速离心机(Eppendorf公司,型号：5425R)；722sp可见分光光度计(上海棱光技术有限公司)；酶联免疫检测仪(美国BioTek公司,型号：SYNERGYH1)；小动物超声检测仪(Visualsonics,Vev770)。
2.2实验方法
2.2.1动物分组与给药
健康雄性9周龄SHR大鼠50只，适应性喂养1周，随机分为5组，分别为模型对照组10只，阳性药对照组(氯沙坦钾片组)10只，白头翁皂苷B4高剂量组10只，白头翁皂苷B4中剂量组10只，白头翁皂苷B4低剂量组10只；另空白组以10只WKY大鼠为对照组。白头翁皂苷B4高中低剂量组为5、10、20mg/kg每日腹腔注射给药一次，氯沙坦钾片组研磨后按每天31.5mg/kg灌胃给药一次，模型组和空白对照组大鼠腹腔注射等量体积生理盐水，每日给药1次，连续给药10周。其中，等量体积为与腹腔给药体积相同，即为1mL/100g；本实验中选择氯沙坦钾片的剂量31.5mg/kg为最佳给药剂量，经过查文献及预实验结果筛选得到。
2.2.2血压测定
在给药前和给药10周中，每周用ALC–NIBP无创血压测定分析系统测定大鼠清醒状态下的尾动脉收缩压(SP)，重复测量3次，取其平均值，得到的数据详见表4。
表4：白头翁皂苷B4对自发性高血压大鼠血压的影响(mmHg)
注：与空白对照组比较，**P<0.01，***P<0.001；与模型组比较，△P<0.05，△△P<0.01，△△△P<0.001；与氯沙坦钾片组比较，#P<0.05，##P<0.01，###P<0.001。
表4的数据体现了白头翁皂苷B4对自发性高血压大鼠血压的影响。具体为：给药1周后，模型组平均血压较空白对照组明显升高(P<0.001)；氯沙坦钾组平均血压与模型组比较明显降低(P<0.001)；白头翁皂苷B4给药组与模型组比较均无明显的降压作用；随着给药时间的延长，至第五周后，与模型组比较，氯沙坦钾及白头翁皂苷高剂量组均表现出稳定的降低血压的效果。表4的数据表明，白头翁皂苷B4对自发性高血压也具有降血压的效果。
2.2.3血液学指标的检测
给药结束后，于最后一次给药后12h，10％的水合氯醛腹腔注射麻醉(3.0mL/kg)，经颈动脉插管取血，EDTA-K2抗凝管采血用于分离血浆，用真空采血管(无抗凝)采血用于分离血清。EDTA-K2抗凝管血样用低温离心机4000r/min离心10min分离血浆后，放-80℃冰箱保存备用，真空采血管血样放置在37℃恒温水槽中，静置30min～50min，待血清析出后，用低温离心机4℃，4000r/min离心10min，分离血清，放-80℃冰箱保存备用。(1)用比色法测定血清NO含量，实验步骤按NO检测试剂盒说明书操作。(2)用酶联免疫法测定血浆AngⅡ含量，实验步骤按AngⅡELISA测定试剂盒说明书操作。检测得到的数据详见表5。
表5：白头翁皂苷B4对自发性高血压大鼠血清NO及血浆AngⅡ的影响
注：与模型对照组比较，#P<0.05，##P<0.01。
表5体现了白头翁皂苷B4对自发性高血压大鼠血清NO及血浆AngⅡ含量的影响。具体为：与模型组相比较，白头翁皂苷B4 5mg/kg组及以上剂量组和氯沙坦钾片组血清NO含量均显著增加(P<0.01或P<0.05)，白头翁皂苷B4 5mg/kg组及以上剂量组和氯沙坦钾片组血浆AngⅡ含量均显著降低(P<0.01或P<0.05)。表5的数据表明白头翁皂苷B4能提高血清中的NO含量，而降低血浆AngⅡ含量，有助于降血压，对高血压的保护和改善心脏功能的作用。
2.2.4超声心动图检测
大鼠称重后用1％戊巴比妥钠按8mL/kg麻醉，后用刀片轻轻刮净胸前毛发，涂以耦合剂后用小动物超声检测仪进行检测。将探头置于左胸前，并指向其右上，获得左室长轴切面；在二尖瓣位水平部进行探测，取胸骨旁短轴切面，用标尺检测舒张期左室流出道主动脉根部直径，分别检测主动脉内径、EF和FS值，详见图1各组大鼠主动脉内径的柱形图，图2各组大鼠EF值的柱形图和图3各组大鼠FS值的柱形图，图中与模型组比较，*P＜0.05,**P＜0.01，***P＜0.001，柱形条上的星号表明有统计学意义。
参见图1的空白对照组、模型组、B4 5mg/kg组、B4 10mg/kg组、B4 20mg/kg组和氯沙坦钾片组的大鼠主动脉内径的柱形图显示，长期高血压影响主动脉结构和功能，本实验中模型组的自发性高血压大鼠主动脉内径较空白对照组明显增宽(P<0.001)；白头翁皂苷B4 5mg/kg组及以上剂量组和氯沙坦钾片组与模型组比较主动脉内径值均降低(P<0.001)。图1的数据说明，白头翁皂苷B4能够降低主动脉内径，有助于对高血压的保护作用。
EF、FS是评价左心室功能的重要指标，参见图2的空白对照组、模型组、B4 5mg/kg组、B4 10mg/kg组、B4 20mg/kg组和氯沙坦钾片组的大鼠EF值的柱形图，及图3的空白对照组、模型组、B4 5mg/kg组、B4 10mg/kg组、B4 20mg/kg组和氯沙坦钾片组的大鼠FS值的柱形图显示，与空白对照组比较，模型组EF、FS值明显降低(P<0.001)；白头翁皂苷B4 5mg/kg组及以上剂量组和氯沙坦钾片组与模型组比较EF、FS值均显著升高。图2和图3的数据说明，白头翁皂苷B4能够改善自发性高血压大鼠心脏功能。
2.3结论
本实施例2的实验结果表明，白头翁皂苷B4具有降低自发性高血压大鼠血压的作用，能提高血清中一氧化氮(NO)含量，以及降低血浆中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)含量，同时降低主动脉内径，以及提高EF、FS值，从而可以实现降血压和改善心脏功能的作用。
经实施例1和实施例2的实验结果显示，白头翁皂苷B4对高血压具有治疗作用，降低肾性高血压大鼠及自发性高血压大鼠血压，提高肾性高血压大鼠血清中NO含量，以及降低血浆中AngⅡ和ET含量，降低心脏HW/BW、LVI值，抑制心肌肥大的作用，有助于改善心室的收缩和舒张功能，又对高血压起到保护作用；也能提高自发性高血压大鼠血清中NO含量，以及降低高血浆中AngⅡ含量，降低主动脉内径，改善自发性高血压心功能，升高EF、FS值，能够改善自发性高血压大鼠心脏功能。综上说明白头翁皂苷B4通过以上作用机制而发挥在治疗高血压药物中的作用明显，既能降低肾性高血压的血压，又能降低自发性高血压的血压，并且对高血压具有保护作用和改善心脏功能的作用。
这里说明的设备数量和处理规模是用来简化本发明的说明。
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的图例。

Claims (3)

1.白头翁皂苷B4在制备降血压药物中的应用。
2.如权利要求1所述的白头翁皂苷B4在制备降血压药物中的应用，其特征在于，所述药物是治疗肾性高血压的药物。
3.如权利要求1所述的白头翁皂苷B4在制备降血压药物中的应用，其特征在于，所述药物是治疗自发性高血压的药物。
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