CN110612904B

CN110612904B - 一种青兰属植物的组培快繁的培养基组及其应用

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Publication number: CN110612904B
Application number: CN201911006770.6A
Authority: CN
Inventors: 秦小波
Original assignee: Chengdu Jihe Biotechnology Co ltd
Current assignee: Chengdu Jihe Biotechnology Co ltd
Priority date: 2019-10-22
Filing date: 2019-10-22
Publication date: 2021-06-08
Anticipated expiration: 2039-10-22
Also published as: CN110612904A

Abstract

本发明涉及植物细胞诱导及组织培养技术领域，公开了一种青兰属植物的组培快繁的培养基组，包括诱导培养基、分化培养基和生根培养基，所述诱导培养基包括0.8～1.5MS培养基、6‑BA 0.5～1.0mg/L、IAA 0.1～0.3mg/L、2,4‑D 0.1～0.2mg/L、Vc 0.2～0.4mg/L、亚硝基铁氰化钠2.0～6.0mg/L、蔗糖25～30g/L和琼脂5～7g/L，pH＝5.6～6.2；所述分化培养基包括0.8～1.5MS培养基、6‑BA 0.5～1.0mg/L、NAA 0.05～0.1mg/L、IAA 0.05～0.1mg/L、蔗糖25～30g/L和琼脂5～7g/L，pH＝5.6～6.2；所述生根培养基包括0.5～1.0MS培养基、NAA 0.1～0.2mg/L、IBA 0～0.05mg/L、蔗糖15～25g/L、琼脂5～7g/L和马铃薯汁1.0～3.0mL/L；本发明还公开了该培养基组的应用，所述培养基组通过具有针对性的对多植物激素组合的培养基成分和配比的限定，达到了高效率繁育青兰属植物的栽培苗的效果。

Description

一种青兰属植物的组培快繁的培养基组及其应用

技术领域

本发明涉及植物细胞诱导及组织培养技术领域，具体是一种青兰属植物的组培快繁的培养基组及其应用。

背景技术

青兰属(Dracocephalum)植物属唇形科(Labiatae)，草本，多年生，具木质根茎，稀一年生。茎常多数自根茎生出，直立，稀铺地，常不分枝或具少数分枝，稀生多数分枝，四棱形。叶对生，基出叶具长柄，茎生叶具短柄或无柄，常心状卵形或长圆形，或为披针形，边缘具圆齿或锯齿，或全缘，通常不分裂或羽状稀近于掌状深裂。轮伞花序密集成头状或穗状或稀疏排列；花通常蓝紫色，稀白色；苞片常倒卵形，常具锐齿或刺，稀全缘。青兰属植物化学成分复杂，主要可分为挥发油类、黄酮及黄酮苷类、植物甾醇类、有机酸及其酯类、无机元素等。国内外研究报道多为黄酮类化合物，也有二萜、三萜等。其中作为民间药应用的代表有毛建草。

青兰属植物主要有毛建草(Dracocephalum rupestre Hance)、岷山毛建草(Dracocephalum purdomii W.W.Smith)、香青兰(Dracocephalum moldavica L.)、甘青青兰(Dracocephalum tanguticum Maxim)、白花枝子花(Dracocephalum heterophyllumBenth)、全叶青兰 (Dracocephalum integrifolium Bge.)、羽叶枝子花(Dracocephalumbipinnatum Rupr.)、大理青兰(Dracocephalum taliense Forrest ex W.W.Smith)、松叶青兰(Dracocephalum forrestii W.W. Smith)、截萼毛建草(Dracocephalum truncatumSun ex C.Y.Wu)、绒叶毛建草(Dracocephalum velutinum C.Y.Wu et W.T.Wang)、美叶青兰(Dracocephalum calophyllum Hand.-Mazz.)、小花毛建草(Dracocephalummicroflorum C.Y.Wu et W.T.Wang)、皱叶毛建草(Dracocephalum bullatum Forrest exDiels)、大花毛建草(Dracocephalum grandiflorum L.)、覆苞毛建草 (Dracocephalumimbricatum C.Y.Wu et W.T.Wang)、美花毛建草(Dracocephalum wallichii Sealy)等。

毛建草(Dracocephalum rupestre Hance)，作为青兰属植物，多年生草本，具有典型的青兰属植物特征。其茎带紫色，叶三角状卵形，基部心形，具圆齿。轮伞花序密集成头状，稀穗状。花萼、花冠紫蓝色。据《内蒙古植物药志》记载，其具有清热、解表、止痛的功效，可用于治疗感冒头疼、咽疼、咳嗽、胸肋胀痛、黄疸性肝炎、吐血和痢疾等，为蒙古族习用药材。此外，毛建草叶片中含有总糖、粗多糖、总黄酮、蛋白质、维生素C、粗纤维和氮、磷、钾、钙、铁、镁、锰、铜、锌等物质；其茎、叶通过现代工艺与传统工艺相结合，生产茶叶、饮料及保健品等系列产品。近年来，毛建草茶叶已走进各大餐馆，深受消费者喜爱。毛建草适应性强，花期长而且色泽艳丽，故还可作为宿根花卉美化环境。

岷山毛建草(Dracocephalum purdomii W.W.Smith)是主产于四川北部(松潘)和甘肃南部 (岷山)等地，生于海拔2250～3300米的高山谷地多石处。全草可清热消炎、凉血止血，主治外感风热、头痛寒热、喉痛咳嗽、黄疸肝炎等，民间以之蒸后代茶饮。该植物已知化学成分有硬脂酸、β-谷甾醇、熊果酸、咖啡酸、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、β-胡萝卜苷和3,7- 二甲氧基-槲皮素等。

香青兰(Dracocephalum moldavica L.)青兰属植物，一年生草本，高6-40厘米，全株密被短毛；生于干燥山地、山谷、河滩多石处，适应性强。可作为香料作物用于糖果、化妆品；全草可药用，性味辛苦凉，具有清热燥湿、凉肝止血的功效。

甘青青兰(Dracocephalum tanguticum Maxim)，多年生草本，高10-55cm，作为中药取其干燥全草；主要生于干燥河谷的谷岸、山野路旁、草滩或高山草地及松林林缘，分布于甘肃、青海、四川及西藏等地。具有止咳化痰，和胃疏肝，清热利水之功效。用于咳嗽痰多，气管炎，黄疸型肝炎，慢性胃炎，溃疡病，肝肿大，腹水，浮肿。

白花枝子花(Dracocephalum heterophyllum)又称异叶青兰，多年生草本，高10-25cm；多生长在草原带石质或砂质丘陵坡地上，分布于我国内蒙古、山西、宁夏、甘肃、青海、西藏、新疆及四川北部等地。属中等饲用植物，也为较好的辅助蜜源植物，全草可入药，可治疗高血压，淋巴结核，气管炎等。

全叶青兰(Dracocephalum integrifolium Bge.)又称全缘叶青兰，中药名，全草可入药，多年生草本，高17-60cm；主要生于海拔900-2000m的森林草原、山坡草地或云杉冷杉混交林下，主要分布于新疆等地。具有祛痰，止咳，平喘之功效；常用于急慢性支气管炎，支气管哮喘。

羽叶枝子花(Dracocephalum bipinnatum Rupr.)又称羽叶青兰，根茎斜，茎多数，常在基部或中部具分枝，高15-30cm；主要生长于海拔2500-2600米得山溪石缝中，草原或半沙漠，主要分布于新疆和西藏西部等地。具有很高观赏价值，在园林绿化中可用于花带、花坛、花境栽培；作为药用植物，全株入药，具有清肝热、愈疮、止血作用，主要用于治疗肝病。

大理青兰(Dracocephalum taliense Forrest ex W.W.Smith)多年生草本，高约20cm，根茎粗短，具多数圆柱状粗根；主要生于山坡草地，海拔2800米左右，主要分布于云南西北部，如大理等地。

松叶青兰(Dracocephalum forrestii W.W.Smith)根茎粗而短，密生须状根，顶部生出多茎，茎直立，高13-28cm；多生长于亚高山多石的灌丛草甸中，海拔2300-3500米，主要分布于云南西北部(如丽江、中甸)。藏药称药青兰，全株可用于肝炎，头晕，神倦，便血，尿血，疮痈；幼苗可用于水肿，腹水。

截萼毛建草(Dracocephalum truncatum Sun ex C.Y.Wu)多年生草本，根茎匍匐，茎高达 30cm，多生于海拔约2700米山地溪边石块中，主要分布于甘肃南部等地。

绒叶毛建草(Dracocephalum velutinum)多年生草本，根茎短，高10-15cm；主要生长于海拔3400-4000米的山谷草坡口中，多分布于云南西北部等地。

美叶青兰(Dracocephalum calophyllum Hand.-Mazz.)多年生草本，茎直立，高约35cm，多生于山地草甸或草原多石处，主要分布于云南西北，四川西南部等地。

小花毛建草(Dracocephalum microflorum C.Y.Wu et W.T.Wang)，根茎粗，具粗的须根；多生长于海拔至4800米的高山草甸中，主要分布于中国四川西南部等地。

但是，目前使用常规的植物组织培养基中的植物激素配比对青兰属植物进行繁育时，效率非常低下，甚至不如种子繁殖效率高。除此之外，由于毛建草种子小，不易采集，自然环境下，种子萌发率不高，致使其种子繁殖存在困难；同时，因其次生代谢产物丰富，含有多种酶类及各种小分子物质，严重影响了常规植物组织培养的植物激素组合的作用效果，使得常规植物组织培养方法对毛建草的繁育也不能有效达到组织培养的效率。例如，常用的烟草组培用培养基就无法完成毛建草、岷山毛建草、松叶青兰等青兰属植物的再生，其诱导培养基无法诱导出足够的愈伤组织，诱导过程中组织材料的褐化也明显。

因此，针对毛建草等青兰属植物，我们亟需一种针对青兰属植物，能够高效率地繁育栽培苗的组培快繁的培养基。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种青兰属植物的组培快繁的培养基组及其应用，以达到提高青兰属植物，尤其是毛建草的繁殖效率和缩短繁殖时间的效果。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：一种青兰属植物的组培快繁的培养基组，包括诱导培养基、分化培养基和生根培养基；

其中，所述诱导培养基包括0.8～1.5MS培养基、6-BA 0.5～1.0mg/L、IAA 0.1～0.3mg/L、 2,4-D 0.1～0.2mg/L、Vc 0.2～0.4mg/L和亚硝基铁氰化钠2.0～6.0mg/L。

通过上述技术方案，所述Vc和亚硝基铁氰化钠的组合补充可以针对青兰属植物中各组织的次生代谢产物、酶等内含物丰富的情况，抑制组织褐化和控制次生代谢水平，从而缓冲这些内含物对诱导愈伤组织的影响；同时配合MS培养基、6-BA、IAA和2,4-D等培养基组分的添加和配比的限定，产生共同作用，达到了高效诱导愈伤组织的效果。除此之外，对pH进行限定能够更好地发挥培养基的缓冲剂作用，达到了稳定各种生化反应的效果。

优选的，所述诱导培养基还包括蔗糖25～30g/L和琼脂5～7g/L。

优选的，所述诱导培养基的pH＝5.6～6.2。

优选的，所述分化培养基包括0.8～1.5MS培养基、6-BA 0.5～1.0mg/L、NAA 0.05～0.1 mg/L、IAA 0.05～0.1mg/L、蔗糖25～30g/L和琼脂5～7g/L；所述分化培养基的pH＝5.6～6.2。

通过上述技术方案，所述分化培养基快速诱导愈伤组织分化出大量芽体，达到了高效诱导芽的形成及生长，从而为获得大量再生植物提供基础的效果。

优选的，所述生根培养基包括0.5～1.0MS培养基、NAA 0.1～0.2mg/L、IBA 0～0.05mg/L、蔗糖15～25g/L、琼脂5～7g/L和马铃薯汁1.0～3.0mL/L。

优选的，所述生根培养基还包括活性炭0.5～3.5g/L。

通过上述技术方案，在所述生根培养基中添加了马铃薯汁和活性炭，由于活性炭具有吸附作用，在生根时，更有利于根细胞与培养基间的物质交换，达到了在诱导芽体生长的基础上进一步促进芽体生根的效果。

优选的，所述生根培养基的pH＝5.6～6.2。

一种青兰属植物的组培快繁的培养基组的应用，是将所述培养基组用于青兰属植物的组培快繁。

优选的，是将所述培养基组用于毛建草的组培快繁。

优选的，所述诱导培养基用于对青兰属植物的外植体进行诱导培养，以得到愈伤组织；所述分化培养基用于对所述愈伤组织进行分化培养，以得到不定芽；所述生根培养基用于对所述不定芽进行生根培养，以得到组培苗。

本发明的有益效果是：

1.本发明的一种青兰属植物的组培快繁的培养基组，通过所述Vc和亚硝基铁氰化钠的组合补充，针对青兰属植物中各组织的次生代谢产物、酶等内含物丰富的情况，有效地缓冲这些内含物对诱导愈伤组织的影响；同时配合MS培养基、6-BA、IAA和2,4-D等培养基组分的共同作用，达到了高效诱导愈伤组织的效果。

2.本发明的一种青兰属植物的组培快繁的培养基组，通过分化培养基快速诱导所述愈伤组织分化出大量芽体，达到了高效诱导芽的形成及生长，从而为获得大量再生植物提供基础的效果。

3.本发明的一种青兰属植物的组培快繁的培养基组，在所述生根培养基中添加了马铃薯汁和活性炭，达到了在诱导芽体生长的基础上进一步促进芽体生根的效果。

附图说明

图1为本发明效果试验5中炼苗培养后的植物生长效果图。

具体实施方式

下面结合附图进一步详细描述本发明的技术方案，但本发明的保护范围不局限于以下所述。

实施例1

1.一种青兰属植物的组培快繁的培养基组，包括诱导培养基、分化培养基和生根培养基。

其中，诱导培养基包括0.8MS培养基、6-BA 0.5mg/L、IAA 0.1mg/L、2,4-D0.1mg/L、蔗糖30g/L、琼脂5g/L、Vc 0.2mg/L、亚硝基铁氰化钠2.0mg/L，pH＝5.6；

分化培养基包括1.5MS培养基、6-BA 0.8mg/L、NAA 0.1mg/L、IAA 0.1mg/L、蔗糖30g/L、琼脂5g/L，pH＝6.2；

生根培养基包括0.8MS培养基、NAA 0.15mg/L、IBA 0.025mg/L、蔗糖20g/L、琼脂5g/L、马铃薯汁2.0mL/L、活性炭1g/L，pH＝5.8。

2.一种青兰属植物的组培快繁的培养基组的应用方法

其中，诱导培养基用于对毛建草的外植体进行诱导培养，以得到愈伤组织(出愈率为 86.85％)；分化培养基用于对愈伤组织进行分化培养，以得到不定芽(出芽率为86.29％)；生根培养基用于对不定芽进行生根培养，以得到组培苗(生根率为85.44％)。

实施例2

其中，诱导培养基包括1.5MS培养基、6-BA 1.0mg/L、IAA 0.3mg/L、2,4-D 0.2mg/L、蔗糖30g/L、琼脂5g/L、Vc 0.4mg/L、亚硝基铁氰化钠6.0mg/L，pH＝6.2；

分化培养基包括0.8MS培养基、6-BA 0.5mg/L、NAA 0.05mg/L、IAA 0.05mg/L、蔗糖30g/L、琼脂5g/L，pH＝5.6；

生根培养基包括1.0MS培养基、NAA 0.2mg/L、IBA 0.05mg/L、蔗糖25g/L、琼脂5g/L、马铃薯汁3.0mL/L、活性炭1g/L，pH＝6.2。

2.一种青兰属植物的组培快繁的培养基组的应用方法

其中，诱导培养基用于对毛建草的外植体进行诱导培养，以得到愈伤组织(出愈率为 94.48％)；分化培养基用于对愈伤组织进行分化培养，以得到不定芽(出芽率为87.54％)；生根培养基用于对不定芽进行生根培养，以得到组培苗(生根率为85.06％)。

实施例3

其中，诱导培养基包括MS培养基、6-BA 0.8mg/L、IAA 0.2mg/L、2,4-D 0.15mg/L、蔗糖30g/L、琼脂5g/L、Vc 0.3mg/L、亚硝基铁氰化钠4.0mg/L，pH＝5.8；

分化培养基包括MS培养基、6-BA 0.7mg/L、NAA 0.08mg/L、IAA 0.08mg/L、蔗糖30g/L、琼脂5g/L，pH＝5.8；

生根培养基包括0.5MS培养基、NAA 0.1mg/L、蔗糖15g/L、琼脂5g/L、马铃薯汁1.0mL/L、活性炭1g/L，pH＝5.6。

2.一种青兰属植物的组培快繁的培养基组的应用方法

其中，诱导培养基用于对毛建草的外植体进行诱导培养，以得到愈伤组织(出愈率为 88.15％)；分化培养基用于对愈伤组织进行分化培养，以得到不定芽(出芽率为89.13％)；生根培养基用于对不定芽进行生根培养，以得到组培苗(生根率为85.05％)。

实施例4

其中，诱导培养基包括1.5MS培养基、6-BA 1.0mg/L、IAA 0.3mg/L、2,4-D 0.2mg/L、蔗糖30g/L、琼脂5g/L、Vc 0.2mg/L、亚硝基铁氰化钠2.0mg/L，pH＝5.8；

分化培养基包括0.8MS培养基、6-BA 0.5mg/L、NAA 0.05mg/L、IAA 0.05mg/L、蔗糖30 g/L、琼脂5g/L，pH＝5.8；

生根培养基包括1.0MS培养基、NAA 0.2mg/L、IBA 0.05mg/L、蔗糖25g/L、琼脂5g/L、马铃薯汁2.0mL/L、活性炭1g/L，pH＝5.8。

2.一种青兰属植物的组培快繁的培养基组的应用方法

其中，诱导培养基用于对香青兰的外植体进行诱导培养，以得到愈伤组织(出愈率为 90.03％)；分化培养基用于对愈伤组织进行分化培养，以得到不定芽(出芽率为84.36％)；生根培养基用于对不定芽进行生根培养，以得到组培苗(生根率为86.52％)。

实施例5

其中，诱导培养基包括MS培养基、6-BA 0.8mg/L、IAA 0.2mg/L、2,4-D 0.15mg/L、蔗糖30g/L、琼脂5g/L、Vc 0.2mg/L、亚硝基铁氰化钠2.0mg/L，pH＝5.8；

生根培养基包括0.5MS培养基、NAA 0.1mg/L、蔗糖15g/L、琼脂5g/L、马铃薯汁1.0mL/L、活性炭1g/L，pH＝5.8。

2.一种青兰属植物的组培快繁的培养基组的应用方法

其中，诱导培养基用于对白花枝子花的外植体进行诱导培养，以得到愈伤组织(出愈率为89.55％)；分化培养基用于对愈伤组织进行分化培养，以得到不定芽(出芽率为88.58％)；生根培养基用于对不定芽进行生根培养，以得到组培苗(生根率为84.15％)。

实施例6

生根培养基包括0.5MS培养基、NAA 0.1mg/L、蔗糖20g/L、琼脂5g/L、马铃薯汁1.0mL/L、活性炭1g/L，pH＝5.8。

2.一种青兰属植物的组培快繁的培养基组的应用方法

其中，诱导培养基用于对岷山毛建草的外植体进行诱导培养，以得到愈伤组织(出愈率为89.48％)；分化培养基用于对愈伤组织进行分化培养，以得到不定芽(出芽率为88.42％)；生根培养基用于对不定芽进行生根培养，以得到组培苗(生根率为82.50％)。

实施例7

其中，诱导培养基包括1.2MS培养基、6-BA 0.8mg/L、IAA 0.2mg/L、2,4-D 0.2mg/L、蔗糖30g/L、琼脂5g/L、Vc 0.2mg/L、亚硝基铁氰化钠5.0mg/L，pH＝5.8；

分化培养基包括MS培养基、6-BA 1.0mg/L、NAA 0.08mg/L、IAA 0.08mg/L、蔗糖28g/L、琼脂5g/L，pH＝5.8；

生根培养基包括0.7MS培养基、NAA 0.1mg/L、IBA 0.05mg/L、蔗糖25g/L、琼脂5g/L、马铃薯汁2.0mL/L、活性炭1g/L，pH＝5.8。

2.一种青兰属植物的组培快繁的培养基组的应用方法

其中，诱导培养基用于对大理青兰的外植体进行诱导培养，以得到愈伤组织(出愈率为 86.24％)；分化培养基用于对愈伤组织进行分化培养，以得到不定芽(出芽率为85.52％)；生根培养基用于对不定芽进行生根培养，以得到组培苗(生根率为82.18％)。

实施例8

其中，诱导培养基包括MS培养基、6-BA 0.9mg/L、IAA 0.2mg/L、2,4-D 0.1mg/L、蔗糖 28g/L、琼脂5g/L、Vc 0.2mg/L、亚硝基铁氰化钠6.0mg/L，pH＝6.0；

分化培养基包括1.2MS培养基、6-BA 0.6mg/L、NAA 0.08mg/L、IAA 0.08mg/L、蔗糖28 g/L、琼脂5g/L，pH＝5.8；

生根培养基包括0.6MS培养基、NAA 0.1mg/L、IBA 0.05mg/L、蔗糖25g/L、琼脂5g/L、马铃薯汁2.0mL/L、活性炭3.0g/L，pH＝6.0。

2.一种青兰属植物的组培快繁的培养基组的应用方法

其中，诱导培养基用于对美叶青兰的外植体进行诱导培养，以得到愈伤组织(出愈率为 87.05％)；分化培养基用于对愈伤组织进行分化培养，以得到不定芽(出芽率为85.92％)；生根培养基用于对不定芽进行生根培养，以得到组培苗(生根率为83.61％)。

实施例9

其中，诱导培养基包括1.2MS培养基、6-BA 0.8mg/L、IAA 0.2mg/L、2,4-D 0.2mg/L、蔗糖25g/L、琼脂6g/L、Vc 0.3mg/L、亚硝基铁氰化钠6.0mg/L，pH＝6.0；

分化培养基包括MS培养基、6-BA 0.5mg/L、NAA 0.08mg/L、IAA 0.08mg/L、蔗糖28g/L、琼脂7g/L，pH＝5.6；

生根培养基包括0.7MS培养基、NAA 0.1mg/L、IBA 0.05mg/L、蔗糖20g/L、琼脂5g/L、马铃薯汁3.0mL/L、活性炭1.5g/L，pH＝5.8。

2.一种青兰属植物的组培快繁的培养基组的应用方法

其中，诱导培养基用于对小花毛建草的外植体进行诱导培养，以得到愈伤组织(出愈率为84.52％)；分化培养基用于对愈伤组织进行分化培养，以得到不定芽(出芽率为86.63％)；生根培养基用于对不定芽进行生根培养，以得到组培苗(生根率为80.15％)。

实施例10

其中，诱导培养基包括MS培养基、6-BA 0.7mg/L、IAA 0.15mg/L、2,4-D 0.2mg/L、蔗糖25g/L、琼脂6g/L、Vc 0.3mg/L、亚硝基铁氰化钠4.0mg/L，pH＝5.6；

分化培养基包括1.2MS培养基、6-BA 0.7mg/L、NAA 0.07mg/L、IAA 0.07mg/L、蔗糖30 g/L、琼脂5g/L，pH＝6.0；

生根培养基包括0.6MS培养基、NAA 0.1mg/L、IBA 0.05mg/L、蔗糖15g/L、琼脂6g/L、马铃薯汁1.0mL/L、活性炭2.0g/L，pH＝5.8。

2.一种青兰属植物的组培快繁的培养基组的应用方法

其中，诱导培养基用于对全叶青兰的外植体进行诱导培养，以得到愈伤组织(出愈率为 88.25％)；分化培养基用于对愈伤组织进行分化培养，以得到不定芽(出芽率为83.26％)；生根培养基用于对不定芽进行生根培养，以得到组培苗(生根率为83.97％)。

实施例11

其中，诱导培养基包括MS培养基、6-BA 0.8mg/L、IAA 0.15mg/L、2,4-D 0.2mg/L、蔗糖27g/L、琼脂7g/L、Vc 0.4mg/L、亚硝基铁氰化钠3.0mg/L，pH＝5.8；

分化培养基包括1.2MS培养基、6-BA 0.6mg/L、NAA 0.06mg/L、IAA 0.08mg/L、蔗糖28 g/L、琼脂6g/L，pH＝6.0；

生根培养基包括0.7MS培养基、NAA 0.1mg/L、IBA 0.05mg/L、蔗糖20g/L、琼脂5g/L、马铃薯汁3.0mL/L、活性炭2.0g/L，pH＝5.8。

2.一种青兰属植物的组培快繁的培养基组的应用方法

其中，诱导培养基用于对松叶青兰的外植体进行诱导培养，以得到愈伤组织(出愈率为 80.13％)；分化培养基用于对愈伤组织进行分化培养，以得到不定芽(出芽率为83.94％)；生根培养基用于对不定芽进行生根培养，以得到组培苗(生根率为82.77％)。

试验效果

为了验证本发明的组培养基组对青兰属植物诱导率、出愈率、出芽率和生根率的提高，进行了如下试验：

对比试验1

(1)将统一条件消毒处理后的各样品材料取叶、茎、根各10～15份，共30～45份置于相同诱导培养基培养，观察统计出愈率，设置3次重复；最后，使用SPSS软件对计算结果进行差异显著性分析。其中，愈伤组织诱导率＝(愈伤组织块数/接种外植体数)×100％。

(2)诱导培养：将经灭毒的外植体材料，取0.5～2.0cm长或见方的外植体(一般为叶、茎、根部位)，接种于诱导培养基，培养温度24～28℃，光照8～12h/d，光照强度2000～4000Lx，培养7～15天即可获得稳定愈伤组织且诱导率达80％及以上。

试验结果如表1所示：

表1诱导培养基组合对青兰属材料愈伤组织诱导情况

由上表所示，当采用0.5MS培养基或2.0MS培养基时，出愈率较低；诱导培养基中不含 IAA、2,4-D中的一种或两种时，出愈率显著降低；当采用0.8～1.5MS培养基，添加6-BA0.5～1.0mg/L，IAA 0.1～0.3mg/L，2,4-D 0.1～0.2mg/L时，出愈率达到最佳。

对比试验2

(1)取诱导培养基中生长良好的材料30～45份，置于分化培养基培养，观察统计出芽率，设置3次重复；最后，使用SPSS软件对计算结果进行差异显著性分析。其中，不定芽分化率＝(分化不定芽的愈伤组织块数/接种外植体数)×100％。

(2)分化培养：从诱导培养基上剪切下0.5～1.0cm大小愈伤组织，转入分化培养基，培养温度24～28℃，光照8～12h/d，光照强度2000～4000Lx，约8～10天每个接种块可分化出大于0.5cm的有效不定芽达4个左右，培养时间为15～25天。

试验结果如表2所示：

表2分化培养基组合对青兰属材料愈伤组织出芽情况

由上表所示，当采用0.5MS培养基或2.0MS培养基时，出芽率较低；分化培养基中不含 IAA、NAA中的一种或两种时，出芽率降低；当采用0.8～1.5MS培养基，添加6-BA 0.5～1.0 mg/L，NAA 0.05～0.1mg/L，IAA 0.05～0.1mg/L时，出芽率达到最佳。

对比试验3

(1)分别取不同种材料中生长良好的芽体30～45份，置于生根培养基培养观察，统计生根率，设置3次重复；最后，使用SPSS软件对计算结果进行差异显著性分析。其中，生根率＝(生根的不定芽数/接种的不定芽数)×100％。

(2)生根培养：从分化培养基上剪下长高至3～4cm的试管苗，转入生根培养基，培养温度24～28℃，光照8～12h/d，光照强度2000～4000Lx，培养时间为8～15天。

试验结果如表3所示：

表3生根培养基组合对青兰属材料生根的情况

由上表所示，当采用0.25MS培养基或1.5MS培养基时，生根率较低；生根培养基中不含NAA、IBA中的一种或两种时，生根率有一定降低；当采用0.5～1.0MS培养基，添加NAA0.1～0.20mg/L，IBA 0～0.10mg/L时，生根率达到最佳。

对比试验4

试验分为实验组和对照组，其中实验组采用本发明实施例1中的培养基组；对照组采用的诱导培养基包括MS培养基、6-BA、IAA、2,4-D、蔗糖、琼脂，pH＝5.8，其他培养基的成分、用量配比和使用方法等与本发明实施例1均相同(本对比试验是与不添加Vc和亚硝基铁氰化钠进行对比，用于证明本发明的方法培养青兰属植物的诱导效果更好)。试验结果如下表所示：

组别	出愈率％	出芽率％	生根率％
				对照组	70.82％	84.38％	85.65％
实验组	86.85％	86.29％	85.44％

由上表可知，相比于对照组，实验组的出愈率显著提高。因此，本发明的诱导培养方法对青兰属植物的诱导效果更好。

效果试验5

将不同材料的组培苗瓶移至室外，自然光下封口炼苗4～7天，取出组培苗将根部的琼脂洗净，移栽到经过0.1％的高锰酸钾消毒的蛭石中，浇透水，用塑料膜保湿，置于20～28℃的温室中生长，约8～12天后将苗栽于营养钵中，于遮光50％的阴棚下放置8～15天。

如图1所示，组培苗在炼苗和移栽过程中均呈现良好的生长趋势。

综上所述，本发明的一种青兰属植物的组培快繁的培养基组，提高了出愈率、出芽率、生根率和诱导率，达到了提高青兰属植物，尤其是毛建草的繁殖效率和缩短繁殖时间的效果。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当理解本发明并非局限于本文所披露的形式，不应看作是对其他实施例的排除，而可用于各种其他组合、修改和环境，并能够在本文所述构想范围内，通过上述教导或相关领域的技术或知识进行改动。而本领域人员所进行的改动和变化不脱离本发明的精神和范围，则都应在本发明所附权利要求的保护范围内。

Claims

1.一种青兰属植物的组培快繁的培养基组，其特征在于：包括诱导培养基、分化培养基和生根培养基；

其中，所述诱导培养基为0.8~1.5 MS培养基、6-BA 0.5~1.0 mg/L、IAA 0.1~0.3 mg/L、2,4-D 0.1~0.2 mg/L、Vc 0.2~0.4 mg/L和亚硝基铁氰化钠2.0~6.0 mg/L；

所述分化培养基为0.8~1.5 MS培养基、6-BA 0.5~1.0 mg/L、NAA 0.05~0.1 mg/L、IAA0.05~0.1 mg/L、蔗糖25~30 g/L和琼脂5~7 g/L；

所述生根培养基为0.5~1.0 MS培养基、NAA 0.1~0.2 mg/L、IBA 0~0.05 mg/L、蔗糖15~25 g/L、琼脂5~7 g/L和马铃薯汁1.0~3.0 mL/L；

所述青兰属植物选自毛建草、岷山毛建草、香青兰、甘青青兰、白花枝子花、全叶青兰、羽叶枝子花、大理青兰、松叶青兰、截萼毛建草、绒叶毛建草、美叶青兰、小花毛建草、皱叶毛建草、大花毛建草、覆苞毛建草和美花毛建草中的一种。

2.根据权利要求1所述的一种青兰属植物的组培快繁的培养基组，其特征在于：所述诱导培养基还包括蔗糖25~30 g/L和琼脂5~7 g/L。

3.根据权利要求1所述的一种青兰属植物的组培快繁的培养基组，其特征在于：所述诱导培养基的pH=5.6~6.2。

4.根据权利要求1所述的一种青兰属植物的组培快繁的培养基组，其特征在于：所述分化培养基的pH=5.6~6.2。

5.根据权利要求1所述的一种青兰属植物的组培快繁的培养基组，其特征在于：所述生根培养基还添加有活性炭0.5~3.5 g/L。

6.根据权利要求1所述的一种青兰属植物的组培快繁的培养基组，其特征在于：所述生根培养基的pH=5.6~6.2。

7.根据权利要求1~6任一项所述的培养基组的应用，其特征在于：是将所述培养基组用于青兰属植物的组培快繁，所述青兰属植物选自毛建草、岷山毛建草、香青兰、甘青青兰、白花枝子花、全叶青兰、羽叶枝子花、大理青兰、松叶青兰、截萼毛建草、绒叶毛建草、美叶青兰、小花毛建草、皱叶毛建草、大花毛建草、覆苞毛建草和美花毛建草中的一种。

8.根据权利要求7所述的培养基组的应用，其特征在于：是将所述培养基组用于毛建草的组培快繁。

9.根据权利要求7所述的培养基组的应用，其特征在于：所述诱导培养基用于对青兰属植物的外植体进行诱导培养，以得到愈伤组织；所述分化培养基用于对所述愈伤组织进行分化培养，以得到不定芽；所述生根培养基用于对所述不定芽进行生根培养，以得到组培苗。