CN113661923A - 一种罗汉果幼苗的快速繁殖方法 - Google Patents
一种罗汉果幼苗的快速繁殖方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN113661923A CN113661923A CN202110713197.3A CN202110713197A CN113661923A CN 113661923 A CN113661923 A CN 113661923A CN 202110713197 A CN202110713197 A CN 202110713197A CN 113661923 A CN113661923 A CN 113661923A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- bud
- section
- culture
- stem
- axillary
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
- A01H4/008—Methods for regeneration to complete plants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
- A01H4/001—Culture apparatus for tissue culture
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Botany (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Abstract
本发明属于组织培养技术领域，具体涉及一种罗汉果幼苗的快速繁殖方法。本技术方案中发明人通过改变无菌苗茎段的切割方法，控制腋芽到茎段切除处的距离和腋芽上端的长度，使培养的单节茎段较健壮，提高单节茎段的繁殖速率。发明人通过控制单节茎段插入培养基中的深浅度，不仅使茎段的切除面充分接触培养基，而且使腋芽处于培养基的上表面，使培养基能够激活各个复芽，增加组织培养培苗增殖倍数，增殖倍数能够达到25倍以上，提高了罗汉果幼苗的繁殖速度，缩短繁殖周期，降低生产成本。
Description
技术领域
本发明属于组织培养技术领域，具体涉及一种罗汉果幼苗的快速繁殖方法。
背景技术
罗汉果，属于葫芦科，是多年生藤本植物的果实。罗汉果雌雄异株，夏季开花，秋天结果。罗汉果主要产于我国的南方地区，罗汉果也是国家首批批准的药食两用材料之一，果实营养价值很高，含丰富的维生素C以及糖甙、果糖、葡萄糖、蛋白质、脂类等。而且罗汉果具有非常高的药用价值，罗汉果味甘性凉，归肺、大肠经，有润肺止咳，生津止渴的功效，适用于肺热或肺燥咳嗽，百日咳及暑热伤津口渴等，此外还有清肠排毒的功效，是减肥果品，常年服用，能驻颜美容、延年益寿。现代中医认为，罗汉果，清肺利咽，化痰止咳，润肠通便，主治肺热咳嗽，咽喉疼痛或失音；肠道燥热，大便秘结。现代医学研究证明，罗汉果具有优异的降血糖作用、降血脂作用、抗衰老作用、防治坏血病、抗癌作用、预防呼吸道感染、止咳、治疗咽喉、补肾养肾作用、清火作用、美容养颜的作用。
罗汉果的传统生产采用块茎和压蔓等进行无性繁殖，繁殖系数低，且长期采用无性繁殖导致种质退化和病毒积累，产量和品质下降，满足不了农户扩大种植面积的需求，严重制约了罗汉果产业的发展。随着科学技术的发展，利用组织培养进行种苗繁殖，是罗汉果良种快繁和控制罗汉果病毒病蔓延的有效途径，具所用繁殖材料少、苗整齐和脱病毒等特点。现有的技术中使用最为广泛的是使用茎段为外植体进行组织培养，和以芽繁芽的方式进行组织培养，使用茎段为外植体进行组织培养主要步骤分为诱导培养、增值培养和生根培养，但是使用茎段为外植体进行组织培养的增殖系数较小，繁殖速率较慢。以芽繁芽的方式进行组织培养不须要进行脱分化和再分化过程。培养基是MS加不同激素，培养25～30天为一个周期，增殖倍数一般在5倍左右，增殖速度同样较慢。
发明内容
为解决上述技术问题，本发明的第一个方面提供了一种罗汉果幼苗的快速繁殖方法，至少包括以下步骤：
(1)将无菌苗茎段的下端离腋芽1-4mm处切下，腋芽的上端保持在1-30mm，切成带腋芽的单节茎段；
(2)将带腋芽的单节茎段扦插于培养基中，使带腋芽的单节茎段的茎段切除面充分接触培养基，且使腋芽处于培养基的上表面；
(3)经13-17天培养后，带腋芽的单节茎段的基部长有愈伤组织，最长的芽长有3-5个芽段时，将最长的芽切成带芽的单节茎段，进行去势培养，即将最长的芽按照步骤(1)和步骤(2)中的方法再进行培养，对长有愈伤组织的带腋芽的单节茎段继续培养；
(4)经过25-30天的一个培养周期后，长有愈伤组织的带腋芽的单节茎段再次长出丛芽以及去势培养过程中的带芽的单节茎段也长出丛芽，每个丛芽有多个腋芽段，对每个腋芽段切割进行诱导生根，即得到罗汉果生根幼苗，经过一个培养周期后能够切出25-30个腋芽段，增殖倍数在25倍以上。
优选的，所述无菌苗茎段的获取方法为：从罗汉果植株上取50～100mm嫩梢为外植体，切去叶片，在超净工作台上用75％酒精将外植体预消毒10s，用无菌水冲洗3～4次即得到。
优选的，所述步骤(1)、(2)、(3)和(4)中的培养条件为培养温度在28±3℃，光照强度在2800-3000LX，光照时间为10h/天。
优选的，所述步骤(1)、(2)、(3)和(4)中的培养条件为光照强度为3000LX。
优选的，所述步骤(1)中将无菌苗茎段的下端离腋芽2mm处切下，腋芽的上端保持在1-30mm，切成带腋芽的单节茎段。
优选的，所述培养基包括基础培养基和植物激素，所述植物激素的含量为0.3-0.9mg/L。
优选的，所述基础培养基选自MS培养基、B5培养基和N6培养基中的至少一种。
优选的，所述基础培养基为MS培养基。
优选的，所述植物激素选自6-苄氨基嘌呤、1-萘乙酸、胺鲜酯、氯吡脲、复硝酚钠、赤霉素、乙烯、乙烯利、脱落酸、油菜素内酯、水杨酸和莉酸中的至少一种。
优选的，所述植物激素为6-苄氨基嘌呤和1-萘乙酸的混合物，所述6-苄氨基嘌呤和1-萘乙酸之间质量比在(3-10)：1。
有益效果：本技术方案中发明人通过改变无菌苗茎段的切割方法，控制腋芽到茎段切除处的距离和腋芽上端的长度，使培养的单节茎段较健壮，提高单节茎段的繁殖速率。发明人通过控制单节茎段插入培养基中的深浅度，不仅使茎段的切除面充分接触培养基，而且使腋芽处于培养基的上表面，使培养基能够激活各个复芽，增加组织培养培苗增殖倍数，增殖倍数能够达到25倍以上，提高了罗汉果幼苗的繁殖速度，缩短繁殖周期，降低生产成本。
具体实施方式
为了下面的详细描述的目的，应当理解，本发明可采用各种替代的变化和步骤顺序，除非明确规定相反。此外，除了在任何操作实例中，或者以其他方式指出的情况下，表示例如说明书和权利要求中使用的成分的量的所有数字应被理解为在所有情况下被术语“约”修饰。因此，除非相反指出，否则在以下说明书和所附权利要求中阐述的数值参数是根据本发明所要获得的期望性能而变化的近似值。至少并不是试图将等同原则的适用限制在权利要求的范围内，每个数值参数至少应该根据报告的有效数字的个数并通过应用普通舍入技术来解释。
尽管阐述本发明的广泛范围的数值范围和参数是近似值，但是具体实例中列出的数值尽可能精确地报告。然而，任何数值固有地包含由其各自测试测量中发现的标准偏差必然产生的某些误差。
当本文中公开一个数值范围时，上述范围视为连续，且包括该范围的最小值及最大值，以及这种最小值与最大值之间的每一个值。进一步地，当范围是指整数时，包括该范围的最小值与最大值之间的每一个整数。此外，当提供多个范围描述特征或特性时，可以合并该范围。换言之，除非另有指明，否则本文中所公开之所有范围应理解为包括其中所归入的任何及所有的子范围。例如，从“1至10”的指定范围应视为包括最小值1与最大值10之间的任何及所有的子范围。范围1至10的示例性子范围包括但不限于1至6.1、3.5至7.8、5.5至10等。
为解决上述技术问题，本发明的第一个方面提供了一种罗汉果幼苗的快速繁殖方法，至少包括以下步骤：
(1)将无菌苗茎段的下端离腋芽1-4mm处切下，腋芽的上端保持在1-30mm，切成带腋芽的单节茎段；
(2)将带腋芽的单节茎段扦插于培养基中，使带腋芽的单节茎段的茎段切除面充分接触培养基，且使腋芽处于培养基的上表面；
(3)经13-17天培养后，带腋芽的单节茎段的基部长有愈伤组织，最长的芽长有3-5个芽段时，将最长的芽切成带芽的单节茎段，进行去势培养，即将最长的芽按照步骤(1)和步骤(2)中的方法再进行培养，对长有愈伤组织的带腋芽的单节茎段继续培养；
(4)经过25-30天的一个培养周期后，长有愈伤组织的带腋芽的单节茎段再次长出丛芽以及去势培养过程中的带芽的单节茎段也长出丛芽，每个丛芽有多个腋芽段，对每个腋芽段切割进行诱导生根，即得到罗汉果生根幼苗，经过一个培养周期后能够切出25-30个腋芽段，增殖倍数在25倍以上。
发明人发现通过改变无菌苗茎段的切割方法，控制腋芽到茎段切除处的距离和腋芽上端的长度，使培养的单节茎段较健壮，提高单节茎段的繁殖速率。发明人通过控制单节茎段插入培养基中的深浅度，不仅使茎段的切除面充分接触培养基，而且使腋芽处于培养基的上表面，使培养基能够激活各个复芽，增加组织培养培苗增殖倍数，提高繁殖速度，缩短繁殖周期，降低生产成本。
作为一种优选的技术方案，所述无菌苗茎段的获取方法为：从罗汉果植株上取50～100mm嫩梢为外植体，切去叶片，在超净工作台上用75％酒精将外植体预消毒10s，用无菌水冲洗3～4次即得到。
作为一种优选的技术方案，所述步骤(1)、(2)、(3)和(4)中的培养条件为培养温度在28±3℃，光照强度在2800-3000LX，光照时间为10h/天。
作为一种优选的技术方案，所述步骤(1)、(2)、(3)和(4)中的培养条件为光照强度为3000LX。
发明人发现使用光照强度为3000LX的条件下，带腋芽的单节茎段长出愈伤组织的速度较快，能够提高繁殖速率。
作为一种优选的技术方案，所述步骤(1)中将无菌苗茎段的下端离腋芽2mm处切下，腋芽的上端保持在1-30mm，切成带腋芽的单节茎段。
发明人发现无菌苗茎段切割的长度尤为重要，切面距离腋芽的长度太短时，会影响腋芽的生长状况，切面距离腋芽的长度太长时，不能较好的激活各个复芽。
作为一种优选的技术方案，所述培养基包括基础培养基和植物激素，所述植物激素的含量为0.3-0.9mg/L。
作为一种优选的技术方案，所述基础培养基选自MS培养基、B5培养基和N6培养基中的至少一种。
作为一种优选的技术方案，所述基础培养基为MS培养基。
作为一种优选的技术方案，所述植物激素选自6-苄氨基嘌呤、1-萘乙酸、胺鲜酯、氯吡脲、复硝酚钠、赤霉素、乙烯、乙烯利、脱落酸、油菜素内酯、水杨酸和莉酸中的至少一种。
作为一种优选的技术方案，所述植物激素为6-苄氨基嘌呤和1-萘乙酸的混合物，所述6-苄氨基嘌呤和1-萘乙酸之间质量比在(3-10)：1。
6-苄氨基嘌呤能够促进植物细胞的生长，抑制植物叶绿素的降解，提高植株中氨基酸的含量，不仅能够促进芽的形成，也可以诱导愈伤组织发生。1-萘乙酸能够有效彻底的被茎段吸收，诱导芽和根的形成，发明人发现一定的6-苄氨基嘌呤和1-萘乙酸相混合，能够较好的提高芽段的增殖倍数。发明人发现使用6-苄氨基嘌呤和1-萘乙酸的混合物作为植物激素时，能够较好的诱导带腋芽的单节茎段长出愈伤组织、激活各个复芽，使复芽长出丛芽。在组织培养的各个阶段，根据培养情况可以对6-苄氨基嘌呤和1-萘乙酸之间的质量比进行调配。
另外，如果没有其它说明，所用原料都是市售得到的。
实施例1
一种罗汉果幼苗的快速繁殖方法，包括以下步骤：
(1)从罗汉果植株上取50～100mm嫩梢为外植体，切去叶片，在超净工作台上用75％酒精将外植体预消毒10s，用无菌水冲洗3～4次即得到无菌苗茎段，将无菌苗茎段的下端离腋芽2mm处切下，腋芽的上端保持在15mm，切成带腋芽的单节茎段；
(2)在培养温度为28±3℃，光照强度为3000LX，每天光照10h的条件下，将带腋芽的单节茎段扦插于培养基中，使带腋芽的单节茎段的茎段切除面充分接触培养基，且使腋芽处于培养基的上表面，所述培养基包括基础培养基和植物激素，所述基础培养基为MS培养基，所述植物激素的含量为0.6mg/L，所述植物激素为6-苄氨基嘌呤和1-萘乙酸的混合物，所述6-苄氨基嘌呤和1-萘乙酸的之间的质量比为5：1；
(3)经15天培养后，带腋芽的单节茎段的基部长有愈伤组织，最长的芽长有3-5个芽段时，将最长的芽切成带芽的单节茎段，进行去势培养，即将最长的芽按照步骤(1)和步骤(2)中的方法再进行培养，对长有愈伤组织的带腋芽的单节茎段继续培养；
(4)经过25-30天的一个培养周期后，长有愈伤组织的带腋芽的单节茎段再次长出丛芽以及去势培养过程中的带芽的单节茎段也长出丛芽，每个丛芽有多个腋芽段，对每个腋芽段切割进行诱导生根，即得到罗汉果生根幼苗，所述诱导生根的具体方法为：培养温度为28±3℃，光照强度为3000LX，每天光照10h的条件下，将腋芽段接种于生根培养基上进行培养，直至长出白色根系，所述生根培养基包括基础培养基和植物激素，所述基础培养基为MS培养基，所述植物激素的含量为0.3mg/L，所述植物激素为6-苄氨基嘌呤和1-萘乙酸的混合物，所述6-苄氨基嘌呤和1-萘乙酸的之间的质量比为3：1。
实施例2
一种罗汉果幼苗的快速繁殖方法，包括以下步骤：
(1)从罗汉果植株上取50～100mm嫩梢为外植体，切去叶片，在超净工作台上用75％酒精将外植体预消毒10s，用无菌水冲洗3～4次即得到无菌苗茎段，将无菌苗茎段的下端离腋芽5mm处切下，腋芽的上端保持在15mm，切成带腋芽的单节茎段；
(2)在培养温度为28±3℃，光照强度为3000LX，每天光照10h的条件下，将带腋芽的单节茎段扦插于培养基中，使带腋芽的单节茎段的茎段切除面充分接触培养基，且使腋芽处于培养基的上表面，所述培养基包括基础培养基和植物激素，所述基础培养基为MS培养基，所述植物激素的含量为0.6mg/L，所述植物激素为6-苄氨基嘌呤和1-萘乙酸的混合物，所述6-苄氨基嘌呤和1-萘乙酸的之间的质量比为5：1；
(3)经15天培养后，带腋芽的单节茎段的基部长有愈伤组织，最长的芽长有3-5个芽段时，将最长的芽切成带芽的单节茎段，进行去势培养，即将最长的芽按照步骤(1)和步骤(2)中的方法再进行培养，对长有愈伤组织的带腋芽的单节茎段继续培养；
(4)经过25-30天的一个培养周期后，长有愈伤组织的带腋芽的单节茎段再次长出丛芽以及去势培养过程中的带芽的单节茎段也长出丛芽，每个丛芽有多个腋芽段，对每个腋芽段切割进行诱导生根，即得到罗汉果生根幼苗，所述诱导生根的具体方法为：培养温度为28±3℃，光照强度为3000LX，每天光照10h的条件下，将腋芽段接种于生根培养基上进行培养，直至长出白色根系，所述生根培养基包括基础培养基和植物激素，所述基础培养基为MS培养基，所述植物激素的含量为0.3mg/L，所述植物激素为6-苄氨基嘌呤和1-萘乙酸的混合物，所述6-苄氨基嘌呤和1-萘乙酸的之间的质量比为3：1。
实施例3
一种罗汉果幼苗的快速繁殖方法，包括以下步骤：
(1)从罗汉果植株上取50～100mm嫩梢为外植体，切去叶片，在超净工作台上用75％酒精将外植体预消毒10s，用无菌水冲洗3～4次即得到无菌苗茎段，将无菌苗茎段的下端离腋芽1mm处切下，腋芽的上端保持在15mm，切成带腋芽的单节茎段；
(2)在培养温度为28±3℃，光照强度为3000LX，每天光照10h的条件下，将带腋芽的单节茎段扦插于培养基中，使带腋芽的单节茎段的茎段切除面充分接触培养基，且使腋芽处于培养基的上表面，所述培养基包括基础培养基和植物激素，所述基础培养基为MS培养基，所述植物激素的含量为0.6mg/L，所述植物激素为6-苄氨基嘌呤和1-萘乙酸的混合物，所述6-苄氨基嘌呤和1-萘乙酸的之间的质量比为5：1；
(3)经15天培养后，带腋芽的单节茎段的基部长有愈伤组织，最长的芽长有3-5个芽段时，将最长的芽切成带芽的单节茎段，进行去势培养，即将最长的芽按照步骤(1)和步骤(2)中的方法再进行培养，对长有愈伤组织的带腋芽的单节茎段继续培养；
(4)经过25-30天的一个培养周期后，长有愈伤组织的带腋芽的单节茎段再次长出丛芽以及去势培养过程中的带芽的单节茎段也长出丛芽，每个丛芽有多个腋芽段，对每个腋芽段切割进行诱导生根，即得到罗汉果生根幼苗，所述诱导生根的具体方法为：培养温度为28±3℃，光照强度为3000LX，每天光照10h的条件下，将腋芽段接种于生根培养基上进行培养，直至长出白色根系，所述生根培养基包括基础培养基和植物激素，所述基础培养基为MS培养基，所述植物激素的含量为0.3mg/L，所述植物激素为6-苄氨基嘌呤和1-萘乙酸的混合物，所述6-苄氨基嘌呤和1-萘乙酸的之间的质量比为3：1。
实施例4
一种罗汉果幼苗的快速繁殖方法，包括以下步骤：
(1)从罗汉果植株上取50～100mm嫩梢为外植体，切去叶片，在超净工作台上用75％酒精将外植体预消毒10s，用无菌水冲洗3～4次即得到无菌苗茎段，将无菌苗茎段的下端离腋芽2mm处切下，腋芽的上端保持在15mm，切成带腋芽的单节茎段；
(2)在培养温度为28±3℃，光照强度为3000LX，每天光照10h的条件下，将带腋芽的单节茎段扦插于培养基中，使带腋芽的单节茎段的茎段切除面充分接触培养基，且使腋芽处于培养基的上表面，所述培养基包括基础培养基和植物激素，所述基础培养基为MS培养基，所述植物激素的含量为0.6mg/L，所述植物激素为6-苄氨基嘌呤；
(3)经15天培养后，带腋芽的单节茎段的基部长有愈伤组织，最长的芽长有3-5个芽段时，将最长的芽切成带芽的单节茎段，进行去势培养，即将最长的芽按照步骤(1)和步骤(2)中的方法再进行培养，对长有愈伤组织的带腋芽的单节茎段继续培养；
(4)经过25-30天的一个培养周期后，长有愈伤组织的带腋芽的单节茎段再次长出丛芽以及去势培养过程中的带芽的单节茎段也长出丛芽，每个丛芽有多个腋芽段，对每个腋芽段切割进行诱导生根，即得到罗汉果生根幼苗，所述诱导生根的具体方法为：培养温度为28±3℃，光照强度为3000LX，每天光照10h的条件下，将腋芽段接种于生根培养基上进行培养，直至长出白色根系，所述生根培养基包括基础培养基和植物激素，所述基础培养基为MS培养基，所述植物激素的含量为0.3mg/L，所述植物激素为6-苄氨基嘌呤和1-萘乙酸的混合物，所述6-苄氨基嘌呤和1-萘乙酸的之间的质量比为3：1。
实施例5
一种罗汉果幼苗的快速繁殖方法，包括以下步骤：
(1)从罗汉果植株上取50～100mm嫩梢为外植体，切去叶片，在超净工作台上用75％酒精将外植体预消毒10s，用无菌水冲洗3～4次即得到无菌苗茎段，将无菌苗茎段的下端离腋芽2mm处切下，腋芽的上端保持在15mm，切成带腋芽的单节茎段；
(2)在培养温度为28±3℃，光照强度为3000LX，每天光照10h的条件下，将带腋芽的单节茎段扦插于培养基中，使带腋芽的单节茎段的茎段切除面充分接触培养基，且使腋芽处于培养基的上表面，所述培养基包括基础培养基和植物激素，所述基础培养基为MS培养基，所述植物激素的含量为0.6mg/L，所述植物激素为1-萘乙酸；
(3)经15天培养后，带腋芽的单节茎段的基部长有愈伤组织，最长的芽长有3-5个芽段时，将最长的芽切成带芽的单节茎段，进行去势培养，即将最长的芽按照步骤(1)和步骤(2)中的方法再进行培养，对长有愈伤组织的带腋芽的单节茎段继续培养；
(4)经过25-30天的一个培养周期后，长有愈伤组织的带腋芽的单节茎段再次长出丛芽以及去势培养过程中的带芽的单节茎段也长出丛芽，每个丛芽有多个腋芽段，对每个腋芽段切割进行诱导生根，即得到罗汉果生根幼苗，所述诱导生根的具体方法为：培养温度为28±3℃，光照强度为3000LX，每天光照10h的条件下，将腋芽段接种于生根培养基上进行培养，直至长出白色根系，所述生根培养基包括基础培养基和植物激素，所述基础培养基为MS培养基，所述植物激素的含量为0.3mg/L，所述植物激素为6-苄氨基嘌呤和1-萘乙酸的混合物，所述6-苄氨基嘌呤和1-萘乙酸的之间的质量比为3：1。
实施例6
一种罗汉果幼苗的快速繁殖方法，包括以下步骤：
(1)从罗汉果植株上取50～100mm嫩梢为外植体，切去叶片，在超净工作台上用75％酒精将外植体预消毒10s，用无菌水冲洗3～4次即得到无菌苗茎段，将无菌苗茎段的下端离腋芽2mm处切下，腋芽的上端保持在15mm，切成带腋芽的单节茎段；
(2)在培养温度为28±3℃，光照强度为3000LX，每天光照10h的条件下，将带腋芽的单节茎段扦插于培养基中，使带腋芽的单节茎段的茎段切除面充分接触培养基，且使腋芽处于培养基的上表面，所述培养基包括基础培养基和植物激素，所述基础培养基为MS培养基，所述植物激素的含量为0.6mg/L，所述植物激素为6-苄氨基嘌呤和乙烯利的混合物，所述6-苄氨基嘌呤和乙烯利的之间的质量比为5：1；
(3)经15天培养后，带腋芽的单节茎段的基部长有愈伤组织，最长的芽长有3-5个芽段时，将最长的芽切成带芽的单节茎段，进行去势培养，即将最长的芽按照步骤(1)和步骤(2)中的方法再进行培养，对长有愈伤组织的带腋芽的单节茎段继续培养；
(4)经过25-30天的一个培养周期后，长有愈伤组织的带腋芽的单节茎段再次长出丛芽以及去势培养过程中的带芽的单节茎段也长出丛芽，每个丛芽有多个腋芽段，对每个腋芽段切割进行诱导生根，即得到罗汉果生根幼苗，所述诱导生根的具体方法为：培养温度为28±3℃，光照强度为3000LX，每天光照10h的条件下，将腋芽段接种于生根培养基上进行培养，直至长出白色根系，所述生根培养基包括基础培养基和植物激素，所述基础培养基为MS培养基，所述植物激素的含量为0.3mg/L，所述植物激素为6-苄氨基嘌呤和1-萘乙酸的混合物，所述6-苄氨基嘌呤和1-萘乙酸的之间的质量比为3：1。
性能测试：
在同一罗汉果植株上分别取25个7mm嫩梢为外植体，平均分成5组，每组分别按照实施例1-5的方法进行组织培养增殖，定30天作为一个繁殖周期，繁殖周期结束后统计每组最后获取得到的腋芽段的平均个数，即每组的平均增殖倍数，测试结果见表1。
表1
| 平均增殖倍数 | |
| 实施例1 | 27 |
| 实施例2 | 18 |
| 实施例3 | 21 |
| 实施例4 | 16 |
| 实施例5 | 13 |
| 实施例6 | 16 |
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对发明作其他形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或更改为等同变化的等效实施例，但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改，等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。
Claims (10)
1.一种罗汉果幼苗的快速繁殖方法，其特征在于，至少包括以下步骤：
(1)将无菌苗茎段的下端离腋芽1-4mm处切下，腋芽的上端保持在1-30mm，切成带腋芽的单节茎段；
(2)将带腋芽的单节茎段扦插于培养基中，使带腋芽的单节茎段的茎段切除面充分接触培养基，且使腋芽处于培养基的上表面；
(3)经13-17天培养后，带腋芽的单节茎段的基部长有愈伤组织，最长的芽长有3-5个芽段时，将最长的芽切成带芽的单节茎段，进行去势培养，即将最长的芽按照步骤(1)和步骤(2)中的方法再进行培养，对长有愈伤组织的带腋芽的单节茎段继续培养；
(4)经过25-30天的一个培养周期后，长有愈伤组织的带腋芽的单节茎段再次长出丛芽以及去势培养过程中的带芽的单节茎段也长出丛芽，每个丛芽有多个腋芽段，对每个腋芽段切割进行诱导生根，即得到罗汉果生根幼苗，经过一个培养周期后能够切出25-30个腋芽段，增殖倍数在25倍以上。
2.根据权利要求1所述的罗汉果幼苗的快速繁殖方法，其特征在于，所述无菌苗茎段的获取方法为：从罗汉果植株上取50～100mm嫩梢为外植体，切去叶片，在超净工作台上用75％酒精将外植体预消毒10s，用无菌水冲洗3～4次即得到。
3.根据权利要求2所述的罗汉果幼苗的快速繁殖方法，其特征在于，所述步骤(1)、(2)、(3)和(4)中的培养条件为培养温度在28±3℃，光照强度在2800-3000LX，光照时间为10h/天。
4.根据权利要求1-3任一项所述的罗汉果幼苗的快速繁殖方法，其特征在于，所述步骤(1)、(2)、(3)和(4)中的培养条件为光照强度为3000LX。
5.根据权利要求1所述的罗汉果幼苗的快速繁殖方法，其特征在于，所述步骤(1)中将无菌苗茎段的下端离腋芽2mm处切下，腋芽的上端保持在1-30mm，切成带腋芽的单节茎段。
6.根据权利要求1所述的罗汉果幼苗的快速繁殖方法，其特征在于，所述培养基包括基础培养基和植物激素，所述植物激素的含量为0.3-0.9mg/L。
7.根据权利要求6所述的罗汉果幼苗的快速繁殖方法，其特征在于，所述基础培养基选自MS培养基、B5培养基和N6培养基中的至少一种。
8.根据权利要求7所述的罗汉果幼苗的快速繁殖方法，其特征在于，所述基础培养基为MS培养基。
9.根据权利要求6所述的罗汉果幼苗的快速繁殖方法，其特征在于，所述植物激素选自6-苄氨基嘌呤、1-萘乙酸、胺鲜酯、氯吡脲、复硝酚钠、赤霉素、脱落酸、油菜素内酯、水杨酸和莉酸中的至少一种。
10.根据权利要求9所述的罗汉果幼苗的快速繁殖方法，其特征在于，所述植物激素为6-苄氨基嘌呤和1-萘乙酸的混合物，所述6-苄氨基嘌呤和1-萘乙酸之间质量比在(3-10)：1。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110713197.3A CN113661923A (zh) | 2021-06-25 | 2021-06-25 | 一种罗汉果幼苗的快速繁殖方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202110713197.3A CN113661923A (zh) | 2021-06-25 | 2021-06-25 | 一种罗汉果幼苗的快速繁殖方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN113661923A true CN113661923A (zh) | 2021-11-19 |
Family
ID=78538421
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202110713197.3A Pending CN113661923A (zh) | 2021-06-25 | 2021-06-25 | 一种罗汉果幼苗的快速繁殖方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN113661923A (zh) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115669538A (zh) * | 2021-07-30 | 2023-02-03 | 桂林莱茵生物科技股份有限公司 | 一种罗汉果高效组培快繁方法 |
| CN115669537A (zh) * | 2021-07-30 | 2023-02-03 | 桂林莱茵生物科技股份有限公司 | 一种简单安全快速的罗汉果组培外植体入瓶方法 |
| CN116458428A (zh) * | 2023-04-20 | 2023-07-21 | 贵州省生物研究所 | 一种罗汉果茎段的组培育苗方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104920212A (zh) * | 2015-06-01 | 2015-09-23 | 广西大学 | 一种罗汉果组培苗繁育方法 |
| CN105409774A (zh) * | 2015-11-30 | 2016-03-23 | 浙江拓普药业股份有限公司 | 一种罗汉果愈伤组织的诱导方法 |
-
2021
- 2021-06-25 CN CN202110713197.3A patent/CN113661923A/zh active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104920212A (zh) * | 2015-06-01 | 2015-09-23 | 广西大学 | 一种罗汉果组培苗繁育方法 |
| CN105409774A (zh) * | 2015-11-30 | 2016-03-23 | 浙江拓普药业股份有限公司 | 一种罗汉果愈伤组织的诱导方法 |
Non-Patent Citations (4)
| Title |
|---|
| 刘健晖等: "不同激素浓度对罗汉果愈伤组织诱导的影响", 《安徽农学通报》 * |
| 苏玉卿: "罗汉果优良品系的选育及组培快速繁殖", 《中国优秀博硕士学位论文全文数据库（硕士） 农业科技辑》 * |
| 薛秋华: "《园林花卉学》", 31 August 2015, 华中科技大学出版社 * |
| 陈蔚文: "《岭南本草》", 31 July 2015, 广东科技出版社 * |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN115669538A (zh) * | 2021-07-30 | 2023-02-03 | 桂林莱茵生物科技股份有限公司 | 一种罗汉果高效组培快繁方法 |
| CN115669537A (zh) * | 2021-07-30 | 2023-02-03 | 桂林莱茵生物科技股份有限公司 | 一种简单安全快速的罗汉果组培外植体入瓶方法 |
| CN116458428A (zh) * | 2023-04-20 | 2023-07-21 | 贵州省生物研究所 | 一种罗汉果茎段的组培育苗方法 |
| CN116458428B (zh) * | 2023-04-20 | 2023-12-22 | 贵州省生物研究所 | 一种罗汉果茎段的组培育苗方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN113661923A (zh) | 一种罗汉果幼苗的快速繁殖方法 | |
| CN104335903B (zh) | 一种促进白及快速繁殖的方法 | |
| CN105393919B (zh) | 黑老虎的组织培养快速繁殖方法 | |
| CN102499080B (zh) | 一种以苦荞麦叶柄为外植体的植株快速繁殖方法 | |
| CN105409778A (zh) | 红腺忍冬无菌组培苗叶柄不定芽诱导的方法 | |
| CN102640705B (zh) | 一种水生植物莲花的快速繁殖方法 | |
| CN108901858B (zh) | 一种凤头姜富硒原原种快繁方法 | |
| CN114097611B (zh) | 一种低成本繁育斑兰组培苗的方法 | |
| CN104813938A (zh) | 一种三七组织培养育苗方法 | |
| CN110637723A (zh) | 百香果叶片植株再生快繁技术 | |
| CN108739380B (zh) | 一种白及组培苗一次性成苗的方法 | |
| CN110612904B (zh) | 一种青兰属植物的组培快繁的培养基组及其应用 | |
| CN111727884B (zh) | 一种圆锥绣球的离体芽培养方法 | |
| CN112119913A (zh) | 一种甘薯的脱毒扩繁方法 | |
| CN108739403B (zh) | 一种黄花梨木的组培快繁方法 | |
| CN105028196A (zh) | 一种猫屎瓜的组织培养快速育苗方法 | |
| CN110612905B (zh) | 一种青兰属植物的组培快繁方法及其应用 | |
| CN114403001A (zh) | 提高大叶千斤拔试管苗生长和品质的方法 | |
| CN110178733B (zh) | 一种山兰原球茎的种苗快繁培养基及种苗快繁方法 | |
| CN107125135B (zh) | 一种利用花序轴高效诱导大蒜胚性愈伤组织的方法 | |
| CN108040877A (zh) | 一种大蒜脱毒组织培养方法 | |
| CN103621401A (zh) | 老鸦瓣无性快繁体系的建立方法 | |
| Vanmathi et al. | Establishment of in vitro plant regeneration protocol for fig (Ficus carica L.) | |
| CN116267617B (zh) | 一种猴耳环愈伤组织的诱导方法及应用 | |
| CN115088617B (zh) | 用于多倍体蒲公英植物组织培养的培养基和方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20211119 |
|
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |