CN103168693B - 弄岗马兜铃组织培养的增殖培养基及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了弄岗马兜铃组织培养的增殖培养基及其应用，通过改良MS培养基+一定浓度的植物激素进行弄岗马兜铃的节增殖培养。本发明解决了其他节增殖培养基配方不适合弄岗马兜铃组培节增殖培养的问题，使用改良的MS培养基+合理浓度的6-BA细胞分裂素可使其增殖效果达到最佳，提高增殖效率。
Description
技术领域
本发明属于农业种植领域，具体而言，涉及一种弄岗马兜铃组织培养的增殖培养基及其应用。
背景技术
弄岗马兜铃为胡椒目马兜铃科马兜铃属植物，学名：Aristolochia longgonensisC.F.Liang，别名弄岗通城虎。1979年由广西弄岗综合考察队在广西弄岗国家级自然保护区调查时发现，是广西热带北缘岩溶森林下的一种藤本药用植物，其性味功能与广西著名民间草药通城虎相似，有良好的镇痛作用，民间用于痛伤、蛇伤、高热等疾病的治疗。中国野生弄岗马兜铃多分布于广西弄岗国家级自然保护区内。
“木通马兜铃的组织培养和快速繁殖”(《植物生理学通讯》第4卷第1期，2008年2月，136页)，公开了：使用1/2B5+IBA0.05+1％蔗糖作为木通马兜铃节增殖的培养基配方。而本发明涉及的弄岗马兜铃与木通马兜铃分布地域不相同，生长条件差异大，虽然同科同属，但不同种，通过试验，该现有技术所公开的培养基配方不适合弄岗马兜铃的组织培养节增殖。
发明内容
本发明的目的是针对上述存在问题，提供一种弄岗马兜铃组织培养的增殖培养基，所述的培养基包括：
大量元素：KNO3 1800-2000mg/L；NH4NO3 1600-1700mg/L；MgSO4·7H2O350-390mg/L；CaCl2 400-480mg/L；KH2PO4 300-380mg/L；
微量元素：KI 0.63-1.0mg/L；H3BO3 5.2-7.2mg/L；MnSO4·4H2O 20-25mg/L；ZnSO4·7H2O 7.6-9.6mg/L；Na2MoO4·2H2O 0.2-0.3mg/L；CuSO4·5H2O 0.02-0.03mg/L；CoCl2·6H2O 0.02-0.03mg/L；
植物激素：6-BA0.5mg/L-1.0mg/L；
其他：蔗糖20-40g/L；琼脂3-5g/L；
余量为水，所述培养基的pH5.5-6.0。
本发明通过改良MS培养基+一定浓度的植物激素进行弄岗马兜铃的节增殖培养。本发明解决了其他节增殖培养基配方不适合弄岗马兜铃组培节增殖培养的问题，使用本发明的培养基可以提高其增殖效果。
具体实施方式
实施例1：
配制培养基，其中每升该培养基的组分及各组分的含量如下：
1、大量元素：KNO3 1900mg/L；NH4NO3 1650mg/L；MgSO4·7H2O370mg/L；CaCl2440mg/L；KH2PO4 340mg/L。
2、微量元素：KI 0.83mg/L；H3BO3 6.2mg/L；MnSO4·4H2O 22.3mg/L；ZnSO4·7H2O 8.6mg/L；Na2MoO4·2H2O 0.25mg/L；CuSO4·5H2O 0.025mg/L；CoCl2·6H2O0.025mg/L。
3、植物激素：6-BA0.5mg/L-1.0mg/L。
4、其他：蔗糖30g/L；琼脂4g/L；水；pH5.8。
5、培养基配制：按各组分含量分别添加，次序为蔗糖→大量元素→微量元素→植物激素→已经煮沸的琼脂和水的混合物→加水定容→调节pH至5.8→分装至果酱瓶中并密封好→高压锅灭菌灭菌温度121℃20分钟。
6、接种方法：在超净工作台上取已接至果酱瓶中并已长出茎、芽的弄岗马兜铃瓶苗，将其切割成长约为2cm的一叶一段，接至已配制好并经过高压灭菌过的培养基中。接种完毕后，放于恒温27℃，光照强度为300-700lx的培养间中培养。
7、增殖过程：在培养间中培养约7天左右，开始出现腋芽，约14天后，腋芽开始伸长，达到增殖目的。
8、增殖试验
8.1、试验设计：试验以改良MS培养基为基础培养基，添加6-BA或IBA激素，激素浓度分别为6-BA0.5mg/l、lmg/l；IBA0.05mg/l，以1/2B5+IBA0.05mg/l为CK。共得5种培养基，分别为：(1)改良MS培养基；(2)改良MS培养基+6-BA0.5mg/l；(3)改良MS培养基+6-BA1mg/l；(4)改良MS培养基+IBA0.05mg/l；(5)1/2B5+IBA0.05mg/l(CK)。按接种方法，每个处理16瓶，每瓶接种一叶一段。8.2、数据记录
7d后腋芽统计表
8.3、数据分析和结果
7d后腋芽萌发F测验表
Duncan新复极差多重比较表
通过分析的处理间F＝38.609，F0.05＝3056，F0.01＝4.893，即F＞F0.01＞F0.05，说明处理间差异极显著。通过Duncan新复极差多重比较，在5％水平和1％上，处理2与其他处理具有极显著差异，处理3与其他处理也具有极显著差异，而处理1、4、5显著不差异。
8.4、小结
通过试验和分析，处理2和处理3的瓶苗均能较好的萌发，说明该两组配方适合弄岗马兜铃节增殖培养。
以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何不经过创造性劳动想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应该以权利要求书所限定的保护范围为准。
Claims (1)
1.一种培养基在弄岗马兜铃组织培养的增殖培养中的应用，所述的培养基特征包括：
大量元素：KNO3 1800-2000mg/L；NH4NO3 1600-1700mg/L；MgSO4·7H2O350-390mg/L；CaCl2 400-480mg/L；KH2PO4 300-380mg/L；
微量元素：KI 0.63-1.0mg/L；H3BO3 5.2-7.2mg/L；MnSO4·4H2O 20-25mg/L；ZnSO4·7H2O 7.6-9.6mg/L；Na2MoO4·2H2O 0.2-0.3mg/L；CuSO4·5H2O 0.02-0.03mg/L；CoCl2·6H2O 0.02-0.03mg/L；
植物激素：6-BA 0.5mg/L-1.0mg/L
其他：蔗糖20-40g/L；琼脂3-5g/L；
余量为水，培养基的pH 5.5-6.0。
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