CN110607272B - 一种哺乳动物细胞培养液的添加剂及细胞培养液 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种哺乳动物细胞培养液的添加剂及细胞培养液，属于生物细胞技术领域。其中，本发明提供的一种哺乳动物细胞培养液的添加剂，其包括以下组分：乳白蛋白水解物、牛血清白蛋白、聚乙二醇、酵母粉。另外，本发明实施例提供的细胞培养液成分简单、成本低廉、使用方便，其不添加胰岛素及转铁蛋白，且通过调整乳白蛋白水解物、牛血清白蛋白等营养成分的用量可以解除细胞对血清、胰岛素及转铁蛋白的强烈依赖，从而可以降低细胞培养时的血清等成分含量。另外，本发明实施例通过添加聚乙二醇可以为细胞提供弱极性的温和环境，从而可以减少培养液中的极性物质对细胞的损害。
Description
技术领域
本发明涉及生物细胞技术领域，具体是一种哺乳动物细胞培养液的添加剂及细胞培养液。
背景技术
由于传统哺乳动物细胞培养液除了需要使用DMEM(Dulbecco's Modified EagleMed ium)培养基或MEM(Minimum Eagle's Medium)培养基等作为基础培养基外，还需要往基础培养基中添加10％左右的胎牛血清或小牛血清，故其存在血清用量大、成本高等问题。而血清因为来源、加工工艺等因素影响，其生物安全性难有保证，且质量不稳定，最终会影响细胞生长及终产品质量。
另外，目前市售的低血清培养基成分复杂，胰岛素及转铁蛋白基本为必须添加成分。其中大部分产品在使用时需要经过长时间的低血清培养环境驯化，而绝大多细胞难以适应低血清环境而出现细胞生长缓慢甚至细胞死亡的情况。
发明内容
本发明的目的在于提供一种哺乳动物细胞培养液的添加剂及细胞培养液，以解决上述背景技术中提出的问题。
为实现上述目的，本发明实施例提供如下技术方案：
一种哺乳动物细胞培养液的添加剂，包括以下按照重量份计的组分：乳白蛋白水解物5-12份、牛血清白蛋白2-3份、聚乙二醇10-30份、酵母粉2-10份。
本发明实施例采用的一种优选方案，所述的添加剂包括以下按照重量份计的组分：乳白蛋白水解物5-7份、牛血清白蛋白2-2.5份、聚乙二醇10-20份、酵母粉5-7份。
本发明实施例采用的另一种优选方案，所述的添加剂包括以下按照重量份计的组分：乳白蛋白水解物6份、牛血清白蛋白2份、聚乙二醇10份、酵母粉6份。
本发明实施例采用的另一种优选方案，所述聚乙二醇的平均分子量为5500-6500。
本发明实施例还提供了一种细胞培养液，其包括基础培养基、血清和上述添加剂。
本发明实施例采用的另一种优选方案，所述的血清为胎牛血清或小牛血清。
本发明实施例采用的另一种优选方案，所述血清的体积为基础培养基体积的2％-5％。
本发明实施例采用的另一种优选方案，所述添加剂与基础培养基的质量体积比以mg/L计为(1900-5500):1。
本发明实施例采用的另一种优选方案，所述的基础培养基为DMEM培养基或MEM培养基。
与现有技术相比，本发明实施例的有益效果是：
(1)本发明实施例通过往基础培养基添加含有乳白蛋白水解物、牛血清白蛋白、聚乙二醇和酵母粉的添加剂，可以降低在培养哺乳动物细胞时的血清用量，且可以使细胞在短时间内适应低血清生长环境，同时保持细胞良好的生长状态，从而可以降低培养细胞的成本。
(2)本发明实施例不添加胰岛素及转铁蛋白，其通过调整乳白蛋白水解物、牛血清白蛋白等营养成分的用量可以解除细胞对血清、胰岛素及转铁蛋白的强烈依赖，从而可以降低细胞培养时的血清等成分含量。
(3)本发明实施例通过添加聚乙二醇6000可以为细胞提供弱极性的温和环境，从而可以减少培养液中的极性物质对细胞的损害。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
该实施例提供了一种哺乳动物细胞培养液的添加剂以及含有该添加剂的细胞培养液，具体的，添加剂包括以下组分：乳白蛋白水解物、牛血清白蛋白、聚乙二醇、酵母粉，其中聚乙二醇可以选用市售的聚乙二醇6000，其平均分子量为5500。
另外，细胞培养液包括基础培养基、血清和上述添加剂。其中，血清为胎牛血清或小牛血清，基础培养基为市售的含有非必需氨基酸(Nnon-Essential Amino Acids，NEAA)的MEM培养基。具体的，该细胞培养液的制备方法包括以下步骤：先称取500mg的乳白蛋白水解物、200mg的牛血清白蛋白、1000mg的聚乙二醇6000、200mg的酵母粉以及1L的MEM培养基，备用；接着，将称取的乳白蛋白水解物、牛血清白蛋白、聚乙二醇6000和酵母粉添加到MEM培养基中混匀，并经过过滤除菌处理后，再在无菌条件下添加20mL的小牛血清，即可得到细胞培养液。
实施例2
该实施例提供了一种哺乳动物细胞培养液的添加剂以及含有该添加剂的细胞培养液，具体的，添加剂包括以下组分：乳白蛋白水解物、牛血清白蛋白、聚乙二醇、酵母粉，其中聚乙二醇可以选用市售的聚乙二醇6000，其平均分子量为6500。
另外，细胞培养液包括基础培养基、血清和上述添加剂。其中，血清为胎牛血清或小牛血清，基础培养基为市售的DMEM培养基。具体的，该细胞培养液的制备方法包括以下步骤：先称取1200mg的乳白蛋白水解物、300mg的牛血清白蛋白、3000mg的聚乙二醇6000、1000mg的酵母粉以及1L的DMEM培养基，备用；接着，将称取的乳白蛋白水解物、牛血清白蛋白、聚乙二醇6000和酵母粉添加到DMEM培养基中混匀，并经过过滤除菌处理后，再在无菌条件下添加50mL的胎牛血清，即可得到细胞培养液。
实施例3
该实施例提供了一种哺乳动物细胞培养液的添加剂以及含有该添加剂的细胞培养液，具体的，添加剂包括以下组分：乳白蛋白水解物、牛血清白蛋白、聚乙二醇、酵母粉，其中聚乙二醇可以选用市售的聚乙二醇6000，其平均分子量为6000。
另外，细胞培养液包括基础培养基、血清和上述添加剂。其中，血清为胎牛血清或小牛血清，基础培养基为市售的DMEM培养基。具体的，该细胞培养液的制备方法包括以下步骤：先称取500mg的乳白蛋白水解物、200mg的牛血清白蛋白、1000mg的聚乙二醇6000、500mg的酵母粉以及1L的DMEM培养基，备用；接着，将称取的乳白蛋白水解物、牛血清白蛋白、聚乙二醇6000和酵母粉添加到DMEM培养基中混匀，并经过过滤除菌处理后，再在无菌条件下添加30mL的小牛血清，即可得到细胞培养液。
实施例4
该实施例提供了一种哺乳动物细胞培养液的添加剂以及含有该添加剂的细胞培养液，具体的，添加剂包括以下组分：乳白蛋白水解物、牛血清白蛋白、聚乙二醇、酵母粉，其中聚乙二醇可以选用市售的聚乙二醇6000，其平均分子量为6000。
另外，细胞培养液包括基础培养基、血清和上述添加剂。其中，血清为胎牛血清或小牛血清，基础培养基为市售的DMEM培养基。具体的，该细胞培养液的制备方法包括以下步骤：先称取700mg的乳白蛋白水解物、250mg的牛血清白蛋白、2000mg的聚乙二醇6000、700mg的酵母粉以及1L的DMEM培养基，备用；接着，将称取的乳白蛋白水解物、牛血清白蛋白、聚乙二醇6000和酵母粉添加到DMEM培养基中混匀，并经过过滤除菌处理后，再在无菌条件下添加30mL的小牛血清，即可得到细胞培养液。
实施例5
该实施例提供了一种哺乳动物细胞培养液的添加剂以及含有该添加剂的细胞培养液，具体的，添加剂包括以下组分：乳白蛋白水解物、牛血清白蛋白、聚乙二醇、酵母粉，其中聚乙二醇可以选用市售的聚乙二醇6000，其平均分子量为6000。
另外，细胞培养液包括基础培养基、血清和上述添加剂。其中，血清为胎牛血清或小牛血清，基础培养基为市售的含有NEAA的MEM培养基。具体的，该细胞培养液的制备方法包括以下步骤：先称取600mg的乳白蛋白水解物、200mg的牛血清白蛋白、1000mg的聚乙二醇6000、600mg的酵母粉以及1L的MEM培养基，备用；接着，将称取的乳白蛋白水解物、牛血清白蛋白、聚乙二醇6000和酵母粉添加到MEM培养基中混匀，并经过过滤除菌处理后，再在无菌条件下添加20mL的小牛血清，即可得到细胞培养液。
对比例1
该对比例提供的是一种现有哺乳动物细胞常用的培养基，其包括含有NEAA的MEM培养基以及小牛血清，其中小牛血清的体积为MEM培养基体积的8％。
对比例2
该对比例提供的是一种哺乳动物细胞用的低血清含量的培养基，其包括含有NEAA的MEM培养基以及小牛血清，其中小牛血清的体积为MEM培养基体积的8％。
将上述实施例5、对比例1-2提供的细胞培养液分别置于三组T25细胞瓶中，并分别接入2.5×106个猪睾丸(Swine Testis，ST)细胞，然后置于37℃、二氧化碳含量为5％的气氛条件下培养三天后，进行细胞计数。其中，细胞计数结果如下表1所示。
表1
| 组别 | 实施例5 | 对比例1 | 对比例2 |
| 培养前的细胞数(个) | 2.5×10<sup>6</sup> | 2.5×10<sup>6</sup> | 2.5×10<sup>6</sup> |
| 培养后的细胞数(个) | 7.6×10<sup>6</sup> | 7.5×10<sup>6</sup> | 6.2×10<sup>6</sup> |
从上表1可以看到，本发明实施例提供的细胞培养液用于培养ST细胞，其效果显著。
综上所述，本发明实施例通过往基础培养基添加含有乳白蛋白水解物、牛血清白蛋白、聚乙二醇和酵母粉的添加剂，可以降低在培养哺乳动物细胞时的血清用量，且可以保证培养细胞的良好性，从而可以降低培养细胞的成本。
以上述依据本发明的理想实施例为启示，通过上述的说明内容，相关工作人员完全可以在不偏离本项发明技术思想的范围内，进行多样的变更以及修改。本项发明的技术性范围并不局限于说明书上的内容，必须要根据权利要求范围来确定其技术性范围。
Claims (4)
1.一种哺乳动物细胞培养液，由基础培养基、血清和添加剂组成，其特征在于，所述的血清为胎牛血清或小牛血清；所述血清的体积为基础培养基体积的2%；所述添加剂与基础培养基的质量体积比以mg/L计为(1900-5500):1；所述哺乳动物细胞为猪睾丸细胞；
所述添加剂为以下按照重量份计的组分：乳白蛋白水解物5-12份、牛血清白蛋白2-3份、聚乙二醇10-30份、酵母粉2-10份；所述聚乙二醇的平均分子量为5500-6500。
2.根据权利要求1所述的一种哺乳动物细胞培养液，其特征在于，所述的添加剂为以下按照重量份计的组分：乳白蛋白水解物5-7份、牛血清白蛋白2-2.5份、聚乙二醇10-20份、酵母粉5-7份。
3.根据权利要求1所述的一种哺乳动物细胞培养液，其特征在于，所述的添加剂为以下按照重量份计的组分：乳白蛋白水解物6份、牛血清白蛋白2份、聚乙二醇10份、酵母粉6份。
4.根据权利要求1所述的一种哺乳动物细胞培养液，其特征在于，所述的基础培养基为DMEM培养基或MEM培养基。
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| CN108795841A (zh) * | 2017-05-03 | 2018-11-13 | 上海奥浦迈生物科技有限公司 | 一种st培养基及其应用 |
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| CN110607272A (zh) | 2019-12-24 |
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