CN110531089A - 鼻分泌物总IgE胶体金检测卡、试剂盒和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种鼻分泌物总IgE胶体金检测卡、试剂盒和应用，涉及医疗检测用品技术领域。该鼻分泌物总IgE胶体金检测卡包括胶体金标记部分和反应部分；反应部分包括检测区域和质控区域；胶体金标记部分包被有胶体金颗粒标记的第一抗体，第一抗体抗人总IgE；检测区域包被有第二抗体，第二抗体抗人总IgE；第二抗体和第一抗体识别人总IgE不同的抗原表位；质控区域包被有第三抗体，第三抗体抗第一抗体。该鼻分泌物总IgE胶体金检测卡缓解了现有技术中缺少一种适用于普通群众早期自行筛查是否处于过敏状态的产品的问题。
Description
技术领域
本发明涉及医疗检测用品技术领域，尤其是涉及一种鼻分泌物总IgE胶体金检测卡、试剂盒和应用。
背景技术
过敏性鼻炎是耳鼻喉科最常见的一类疾病，以鼻痒、喷嚏和流涕为主要临床表现。该病的全球患病率高达10％～25％，患者由于长期鼻堵，乏氧严重，患者生活质量差，此外病患还容易出现抑郁情绪。早期诊断，早期规范化治疗，不仅能提高患者生活质量，还能改善患者心理状态。
人体接触过敏原之后，经过抗原提呈细胞呈递，在细胞因子IL-4的帮助下诱导B细胞分化为浆细胞产生IgE；机体再次接触变应原后，IgE与肥大细胞、嗜碱性粒细胞上的IgE受体FcεRI结合，引起炎性介质(如组胺、白三烯)的释放，因此临床上过敏性鼻炎的诊断上依赖于临床症状和过敏原特异性IgE检测来进行诊断。感冒主要是病毒到达鼻、咽部时，与上皮细胞结合，并在上皮细胞及局部淋巴组织中快速复制，引起激肽、组胺、白三烯等炎性介质释放，导致血管通透性增加，腺体分泌增多。
虽然过敏性鼻炎和感冒的发病机制差异很大，可是过敏性鼻炎患者的临床表现与感冒非常相似，很多过敏性鼻炎患者出现打喷嚏、流鼻涕、鼻塞等症状时经常误认为是患上了感冒，并自服感冒药物，以及抗生素类药物，一方面造成了大量的药物滥用和资源的浪费，加重社会经济负担，另一方面30％～40％过敏性鼻炎可发展为支气管哮喘，过敏性鼻炎的延误治疗很可能加重患者病情。因此，让普通群众更好的区分过敏性鼻炎和普通感冒，是减少社会医疗资源浪费和避免误治的关键环节。
现有市面上存在针对过敏原初步筛查的胶体金诊断试纸条，这些试纸条主要用于筛选引起患者过敏的过敏原种类，因此不能检测到样品中的所有IgE。同时现有的胶体金诊断试纸条检测的标本是血清或外周血，因此现有的试纸条主要应用于医院，对于普通群众而言，自行获得外周血或血清以提前对鼻部过敏状态进行初步的筛查和判定是不切实际的。因此一种适用于普通群众早期自行筛查是否处于过敏状态的产品是目前市场需要的。
有鉴于此，特提出本发明。
发明内容
本发明的第一目的在于提供一种鼻分泌物总IgE胶体金检测卡，缓解了现有技术中缺少一种适用于普通群众早期自行筛查是否处于过敏状态的产品的问题。
本发明的第二目的在于提供一种包含上述鼻分泌物总IgE胶体金检测卡的试剂盒。
本发明的第三目的在于提供上述鼻分泌物总IgE胶体金检测卡或试剂盒在制备用于检测过敏状态的产品中的应用。
为解决上述技术问题，本发明特采用如下技术方案：
根据本发明的一个方面，本发明提供了一种鼻分泌物总IgE胶体金检测卡，包括胶体金标记部分和反应部分；所述反应部分包括检测区域和质控区域；
所述胶体金标记部分包被有胶体金颗粒标记的第一抗体，所述第一抗体抗人总IgE；
所述检测区域包被有第二抗体，所述第二抗体抗人总IgE；所述第二抗体和所述第一抗体识别人总IgE不同的抗原表位；
所述质控区域包被有第三抗体，所述第三抗体抗所述第一抗体。
根据本发明的另一个方面，本发明还提供了一种试剂盒，该试剂盒包含上述鼻分泌物总IgE胶体金检测卡。
根据本发明的另一个方面，本发明还提供了一种上述鼻分泌物总IgE胶体金检测卡或上述试剂盒在制备用于检测过敏状态的产品中的应用。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
本发明提供的胶体金检测卡以抗人总IgE的抗体作为标记胶体金的第一抗体，能够结合待检测样品中的因各种过敏原产生的IgE，以检测待检测样品中的总IgE，实现初步筛查当患者出现打喷嚏、流鼻涕、鼻塞等症状时是由于感冒还是过敏性鼻炎引起。
本发明应用层析式免疫胶体金原理，通过检测卡中检测区域与质控区域的颜色对检测样品中的总IgE含量进行定性检测，在短时间内快速准确地在鼻分泌物中检测出总IgE含量，提示是否存在过敏状态。
本发明提供的胶体金检测卡主要用于检测鼻分泌物，方便患者自行取得检测样品。本发明提供的胶体金检测卡以识别和第一抗体不同的人总IgE抗原表位的抗体作为第二抗体，当第二抗体和结合了第一抗体的IgE结合后，标记在第一抗体上的胶体金颗粒聚合产生肉眼可见的标记；以抗第一抗体的抗体作为质控区域的抗体，确保检测结果的正确性。
本发明提供的鼻分泌物总IgE胶体金检测卡可以更好的在普通群众中早期自行筛查过敏性鼻炎，减少误治。本发明提供的鼻分泌物总IgE胶体金检测卡的目的并非是判定引起患者过敏症状的过敏原，而是通过鼻分泌物总IgE的检测，对鼻部过敏状态进行提前了解，更好的自行判定自己是过敏状态还是感冒，避免耽误病情，同时减少药物误用和滥用，减轻因为过敏性鼻炎的误治所带来的经济负担。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案，下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图是本发明的一些实施方式，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明实施例1中加入不同体积还原剂制备的胶体金的吸收峰；
图2为本发明实施例1制备得到的20nm和40nm胶体金颗粒的吸收峰；
图3为本发明实施例1制备得到的20nm胶体金颗粒的溶液；
图4为本发明实施例1制备得到的40nm胶体金颗粒的溶液；
图5为本发明实施例1制备得到的20nm胶体金颗粒的电镜检测结果；
图6为本发明实施例1制备得到的40nm胶体金颗粒的电镜检测结果；
图7为本发明中10nm胶体金的包被不同浓度抗体对应的OD-蛋白浓度曲线；
图8为本发明中20nm胶体金的包被不同浓度抗体对应的OD-蛋白浓度曲线；
图9为本发明中40nm胶体金的包被不同浓度抗体对应的OD-蛋白浓度曲线；
图10为本发明实施例3提供的鼻分泌物总IgE胶体金检测卡；
图11为本发明实施例3制备的10nm胶体金在的吸收峰；
图12为本发明：实施例3制备的10nm胶体金的包被不同浓度抗体的溶液。
图标：100-PVC垫板；200-样品垫；300-金标垫；400-反应膜；410-检测线；420-质控线；500-吸水垫。
具体实施方式
下面将结合实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
根据本发明的一个方面，本发明提供了一种鼻分泌物总IgE胶体金检测卡，包括胶体金标记部分和反应部分；所述反应部分包括检测区域和质控区域；所述胶体金标记部分包被有胶体金颗粒标记的第一抗体，所述第一抗体抗人总IgE；所述检测区域包被有第二抗体，所述第二抗体抗人总IgE；所述第二抗体和所述第一抗体识别人总IgE不同的抗原表位；所述质控区域包被有第三抗体，所述第三抗体抗所述第一抗体。
本发明提供的胶体金检测卡以抗人总IgE的抗体作为标记胶体金的第一抗体，能够结合待检测样品中的各种过敏原的特异性IgE，以检测待检测样品中的总IgE，提高判别当患者出现打喷嚏、流鼻涕、鼻塞等症状时是否由过敏引起的准确性。本发明提供的鼻分泌物总IgE胶体金检测卡以鼻分泌物作为检测样本，可以更好的适用于非医疗环境，方便非专业人员更好的自行判定是过敏状态还是感冒，及时就医避免耽误病情，同时减轻因为过敏性鼻炎的误治所带来的经济负担。
本发明中胶体金标记部分包被有胶体金颗粒标记的第一抗体，第一抗体抗人总IgE。本发明不限制第一抗体的类型，第一抗体只要含有能够识别抗原表位单元即可，所述第一抗体包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、抗体片段或嵌合抗体。第一抗体优选为单克隆抗体，单克隆抗体特异性好，以鼻分泌物作为检测样品时，特异性更好的单克隆抗体可以更好和抗原结合，并且单克隆抗体的实验重现性较高。优选地，第一抗体的免疫球蛋白类型包括IgG或IgM。本发明不限制第一抗体的来源，第一抗体的来源包括但不限于牛、羊、马、驴、小鼠、兔、鹿或鸡。
在一些优选的实施方式中，标记在第一抗体上的胶体金颗粒的粒径为10～40nm，例如可以为但不限于为10nm、15nm、20nm、25nm、30nm、35nm或40nm。
在一些优选的实施方式中，采用柠檬酸三钠还原法可以制备得到粒径为10～40nm的胶体金颗粒。
在一些优选的实施方式中，所述胶体金颗粒按照如下方法制备效果更佳：将质量分数为0.01％～0.05％的氯金酸水溶液加热至沸，搅动下加入质量分数为1％～2％的柠檬酸三钠水溶液1.5～6mL，颜色突变后继续煮沸5～20min，冷却后以蒸馏水定容至100mL后调节pH至8.2～9.0，优选使用0.1M的K2CO3调节pH。
根据胶体金颗粒的粒径，优化胶体金颗粒标记第一抗体时第一抗体的浓度，能够避免过多第一抗体造成浪费，导致胶体金检测卡成本过高；或者由于第一抗体较少而使样品中的抗原不能和第一抗体结合，降低检测结果的准确性。在一些优选的实施方式中，当胶体金颗粒的粒径为10～40nm时，胶体金颗粒标记终浓度为20～75μg/mL的第一抗体，例如可以为但不限于为20μg/mL、25μg/mL、30μg/mL、35μg/mL、40μg/mL、45μg/mL、50μg/mL、55μg/mL、60μg/mL、65μg/mL、70μg/mL或75μg/mL，优选为20～60μg/mL。
在一些优选的实施方式中，第一抗体按照如下方法标记胶体金颗粒：
(1)取胶体金100mL，用0.1M的K2CO3将胶体金溶液调至pH为8.2～9，磁力快速搅拌下缓慢加入稀释的第一抗体，继续搅拌10min，加入牛血清白蛋白(BSA)，使其最终浓度为1％，再搅拌10min。
(2)将初步制得的胶体金探针以4000rpm离心20min；弃沉淀，上清以16000rpm离心60min；弃上清，沉淀用0.01M的PBS(含1％牛血清白蛋白)重新悬浮。
(3)上清以16000rpm离心60min离心洗涤2次，将沉淀用0.01M的PBS(pH 8.2～9，含1％BSA，0.02％NaN3)悬浮，4℃保存备用。
(4)将胶体金颗粒标记的第一抗体均匀包被至胶体金标记部分。
本发明提供的胶体金检测卡的检测区域包被有第二抗体，第二抗体抗人总IgE，为了促进第二抗体能有效的和抗原结合，第二抗体和第一抗体识别人IgE不同的抗原表位。优选地，第一抗体识别的抗原表位和第二抗体识别的抗原表位为IgE的不同恒定区，两者具有一定间隔，可以使第二抗体更有效的与其识别的抗原表位结合。更优选地，第一抗体识别的抗原表位为IgE的重链第二恒定区，第二抗体识别的抗原表位为IgE的重链第四恒定区。
本发明不限制第二抗体的类型，第二抗体只要含有能够识别抗原表位的单元即可，所述第二抗体包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、抗体片段或嵌合抗体。在一些优选的实施方式中，所述第二抗体的免疫球蛋白类型包括IgG或IgM。本发明不限制第二抗体的来源，第二抗体的来源包括但不限于牛、羊、马、驴、小鼠、兔、鹿或鸡，优选第一抗体和第二抗体来源于不同的物种。检测区域上包被的第二抗体的浓度优选为1～4mg/mL，例如可以为但不限于为1mg/mL、1.5mg/mL、2mg/mL、2.5mg/mL、3mg/mL、3.5mg/mL或4mg/mL。
本发明提供的胶体金检测卡的质控区域包被有第三抗体，第三抗体识别的抗原为第一抗体。本发明不限制第三抗体的类型，第三抗体只要含有能够识别抗原表位的单元即可，所述第三抗体包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、抗体片段或嵌合抗体。在一些优选的实施方式中，第三抗体的免疫球蛋白类型包括IgG或IgM。本发明不限制第三抗体的来源，第三抗体的来源包括但不限于牛、羊、马、驴、小鼠、兔、鹿或鸡，优选第三抗体和第二抗体来源于不同的物种。质控区域上包被的第三抗体的浓度优选为0.5～2mg/mL，例如可以为但不限于为0.5mg/mL、0.8mg/mL、1mg/mL、1.2mg/mL、1.5mg/mL、1.8mg/mL或2mg/mL。
在一些优选的实施方式中，第二抗体和第三抗体优选使用划膜仪包被于反应部分，优选按照如下步骤实施，包被效果较佳：
(a)第二抗体划膜：取第二抗体加入质量分数为50％的海藻糖，用0.1M、pH为7.4的PBS定容，之后用划膜仪划在硝酸纤维素膜上为检测线。
(b)第三抗体划膜：加入质量分数为50％的海藻糖，用0.1M、pH 7.4的PBS定容，之后用划膜仪划在硝酸纤维素膜上为质控线。
(c)将上述第二抗体和第三抗体用划膜仪划在同一张硝酸纤维素膜上，用1％BSA、0.01M的PBS(pH8.2～9.0)封闭2h，以0.01M的PBS洗涤，干燥后即得划膜处理的硝酸纤维素膜。
在一些优选的实施方式中，鼻分泌物总IgE胶体金检测卡包括样液吸收部分、胶体金标记部分、反应部分和吸水部分，样液吸收部分、胶体金标记部分、反应部分和吸水部分依次相接。使用时样液依次通过样液吸收部分、胶体金标记部分、反应部分和吸水部分；在反应部分中，样液依次通过检测区域和质控区域。样液经样液吸收部分进入胶体金检测卡，先流经胶体金标记部分，若待测样品中含有IgE，则样品中的IgE与胶体金标颗粒记的第一抗体结合，然后流动至反应部分，检测区域中的第二抗体与IgE结合后第一抗体结合的胶体金颗粒聚合产生肉眼可见的标记。
基于上述发明构思，本发明还提供了一种试剂盒，该试剂盒包含上述鼻分泌物总IgE胶体金检测卡。可选地，该试剂盒还可以包括本领域可接受的任选的试剂或耗材，一些实例包括但不限于用于预处理样品的试剂、用于收集样品的容器，和在判定患者症状为过敏后，用于进一步检测过敏原种类的试剂或检测卡等，本发明对此不作限制。
根据本发明的另一个方面，本发明还提供了上述鼻分泌物总IgE胶体金检测卡或上述试剂盒在制备用于检测过敏状态的产品中的应用。上述检测卡或上述试剂盒可以和鼻分泌物收集装置，样品预处理系统，以及用于鉴定过敏原种类的试剂、检测卡和仪器等共同组成用于检测过敏状态的产品，以用于初步判定患者的症状是否源于过敏。将上述鼻分泌物总IgE胶体金检测卡或上述试剂盒用于制备检测过敏状态的产品，可以对鼻部过敏状态进行预判，在早期分辨症状是源于过敏还是感冒，避免在不能确定是否为过敏状态的前提下盲目检测过敏原，避免耽误病情，减少药物误用和滥用。
下面结合优选实施例进一步说明本申请的技术方案和有益效果。
实施例1
不同体积还原剂制备的胶体金颗粒吸收峰：取质量分数为0.01％的氯金酸水溶液加热至沸，之后搅动下加入质量分数为1％的柠檬酸三钠水溶液(分别为3mL、4mL、5mL和6mL)，颜色突变后继续煮沸15min，冷却后以蒸馏水定容至100mL，得胶体金颗粒用0.1M的K2CO3调节pH值至8.2～9.0。加入不同体积还原剂制备的胶体金颗粒的吸收峰如图1所示；加入5mL 1％的柠檬酸三钠水溶液制备得到的20nm胶体金颗粒的吸收峰，和加入3mL 1％的柠檬酸三钠水溶液40nm胶体金颗粒的吸收峰如图2所示，其中20nm胶体金颗粒的吸收峰为520nm，40nm胶体金颗粒的吸收峰为525nm；20nm胶体金颗粒的溶液如图3所示；40nm胶体金颗粒的溶液如图4所示；20nm胶体金颗粒的检测结果如图5所示(电镜放大倍数为100000倍)；40nm胶体金颗粒的检测结果如图6所示(电镜放大倍数为100000倍)。
实施例2
(1)第一抗体为鼠抗人IgE抗体，用PBS稀释第一抗体至如下浓度0、5μg/mL、10μg/mL、15μg/mL、20μg/mL、25μg/mL、30μg/mL、35μg/mL、40μg/mL、45μg/mL、50μg/mL、55μg/mL、60μg/mL，分别取1mL，加入1mL的10～40nm胶体金溶液中，混合均匀。
(2)5min后，在上述各管中加入0.1mL 10％NaCl溶液，混匀后静置2h，观察结果。
(3)检测各个蛋白浓度对应的OD 525或OD 520，画出OD-浓度曲线，如图7，8和9所示，确定最适标记浓度为20～60μg/mL，在实际工作中，可适当增加10％～20％。
实施例3
本实施例提供了一种鼻分泌物总IgE胶体金检测卡，如图10所示，
包括PVC垫板100，作为样液吸收部分的样品垫200，作为胶体金标记部分的金标垫300，作为反应部分的反应膜400，和作为吸水部分的吸水垫500。
样品垫200由15mm加样纸制成。金标垫300是包被有胶体金颗粒标记的第一抗体的6mm玻璃纤维，其中第一抗体为鼠IgG单克隆抗人总IgE抗体，抗体识别区域为IgE免疫球蛋白的ε链的第二恒定区域。反应部分为25mm硝酸纤维素膜制成的反应膜400，反应膜400上设置有检测区域和质控区域，本实施例中检测区域为检测线410，检测线410是用划膜仪将第二抗体划在硝酸纤维素膜上后的区域，本实施例中使用的第二抗体是兔IgG多克隆抗人总IgE抗体，抗体识别区域为IgE免疫球蛋白的重链；本实施例中质控区域为质控线420，质控线420是用划膜仪将第三抗体划在硝酸纤维素膜上后的区域，本实施例中使用的第三抗体是抗第一抗体的羊IgG来源的抗鼠IgG抗体。吸水垫500为30mm吸水纸。样品垫200、金标垫300、反应膜400和吸水垫500依次组装于PVC垫板100上，得最终检测用胶体金免疫层析试条，结构如图10所示。
使用时样液依次流经样品垫200、金标垫300、反应膜400和吸水垫500，样液中的IgE和金标垫中的第一抗体结合后流动至检测线410，样液中的IgE和检测线410包被的第二抗体反应，胶体金颗粒在检测线聚集形成肉眼可见的标记；质控线420中的第三抗体和样液中的IgE上结合的第一抗体反应，胶体金颗粒在检测线聚集形成肉眼可见的标记。当检测线和质控线均出现标记，则样品为阳性。
本实施例的鼻分泌物总IgE胶体金检测卡的制备方法如下：
(1)胶体金的制备：取质量分数为0.01％的氯金酸(sigma)水溶液100mL用电热套加热至沸，搅动下准确加入质量分数为1％的柠檬酸三钠水溶液5mL，继续煮沸10分钟，冷却后用0.1M的K2CO3调节pH＝8.2，以蒸馏水定容到100mL，得胶体金颗粒。
(2)胶体金标记：第一抗体为鼠单克隆抗人总IgE抗体。取步骤(1)中的金颗粒1mL，抗第一体的用量根据实际结果进行调试，调试范围示例如图7～9、图11和图12所示。本实施例以包被20μg/mL第一抗体为标记的条件，充分混匀反应20min，加入110μl 10％的BSA溶液进行封闭，反应10min，4000rpm离心20min；弃沉淀,上清以16000rpm离心60min；弃上清,沉淀用0.01M的PBS(含1％牛血清白蛋白)重新悬浮，上清以16000rpm离心60min离心洗涤2次，将沉淀用0.01M的PBS(pH 8.2～9,含1％BSA，0.02％NaN3悬浮，4℃保存备用。将胶体金颗粒标记的第一抗体标记液用枪头均匀铺至玻璃纤维上(尺寸：0.5cm×30cm)，放置鼓风干燥箱内于42℃干燥2小时，得标记的金标垫300。
(3)划膜
第二抗体为兔多克隆抗人总IgE抗体，取第二抗体40μg，加入8μL质量分数为50％的海藻糖，用0.1M、pH 7.4的PBS定容至40μL，均匀的用划膜仪划在硝酸纤维素膜上为检测线410。
第三抗体为抗第一抗体的抗体，本实施例使用的是羊抗鼠抗体，取羊抗鼠抗体20μg，加入8μL质量分数为50％的海藻糖，用0.1M、pH 7.4的PBS定容至40μL，均匀的用划膜仪划在硝酸纤维素膜上为质控线420。
第二抗体和第三抗体使用划膜仪划在同一张硝酸纤维素膜上，放置鼓风干燥箱内42℃干燥2小时，得化膜处理的硝酸纤维素膜作为反应膜400。
(4)组装：
将处理好的样品垫200、金标垫300、反应膜400和吸水垫500依次组装于PVC垫板100上，裁成细条得最终鼻分泌物总IgE胶体金检测卡，所制备的鼻分泌物总IgE胶体金检测卡结构如图10所示。
效果例1
将人IgE抗原用生理盐水分别稀释成10μg/mL，1μg/mL，0.1μg/mL，0.01μg/mL，用生理盐水做阴性，加入45μL样本直接反应5min，肉眼判读，结果如表1所示，得到检测范围为0.1～10μg/mL，++表示检测线明显呈红棕色，判读结果为强阳性；+表示检测线明显呈红色，判读结果为阳性；-表示检测线不变色，为阴性。
表1
| 浓度(μg/mL) | 10 | 1 | 0.1 | 0.01 | 0 |
| IgE | ++ | + | - | - | - |
效果例2
用IgA，IgG，IgM抗原做干扰，将IgA，IgG，IgM抗原分别稀释成10μg/mL，5μg/mL，2.5μg/mL，1.25μg/mL，0.75μg/mL，加入45μL样本直接反应5min，肉眼判读，结果显示没有交叉反应。
综上本实施例提供的鼻分泌物总IgE胶体金检测卡，能够检测出0.1μg/mL或相当于51.3kU/L的总IgE，基本满足理论上CUT OFF值需求，且其他几种抗原没有交叉反应。
最后应说明的是：以上各实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述各实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分或者全部技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的范围。
Claims (10)
1.一种鼻分泌物总IgE胶体金检测卡，包括胶体金标记部分和反应部分；所述反应部分包括检测区域和质控区域；
所述胶体金标记部分包被有胶体金颗粒标记的第一抗体，所述第一抗体抗人总IgE；
所述检测区域包被有第二抗体，所述第二抗体抗人总IgE；所述第二抗体和所述第一抗体识别人总IgE不同的抗原表位；
所述质控区域包被有第三抗体，所述第三抗体抗所述第一抗体。
2.根据权利要求1所述的鼻分泌物总IgE胶体金检测卡，其特征在于，所述第一抗体包括单克隆抗体、多克隆抗体、抗体片段或嵌合抗体，优选为单克隆抗体；
优选地，所述第一抗体的免疫球蛋白类型包括IgG或IgM；
优选地，所述第一抗体的来源包括牛、羊、马、驴、小鼠、兔、鹿或鸡。
3.根据权利要求1所述的鼻分泌物总IgE胶体金检测卡，其特征在于，所述胶体金颗粒的粒径为10～40nm；
优选地，所述胶体金颗粒采用柠檬酸三钠还原法制备得到；
优选地，所述胶体金颗粒按照如下方法制备：将质量分数为0.01％～0.05％的氯金酸水溶液加热至沸，搅动下加入质量分数为1％～2％的柠檬酸三钠水溶液1.5～6mL，颜色突变后继续煮沸5～20min，定容至100mL后调节pH至8.2～9.0。
4.根据权利要求3所述的鼻分泌物总IgE胶体金检测卡，其特征在于，胶体金颗粒标记终浓度为20～75μg/mL的所述第一抗体；
优选地，胶体金颗粒标记终浓度为20～60μg/mL的所述第一抗体。
5.根据权利要求1所述的鼻分泌物总IgE胶体金检测卡，其特征在于，所述第二抗体的免疫球蛋白类型包括IgG或IgM；
优选地，所述第二抗体的物种来源包括牛、羊、马、驴、小鼠、兔、鹿或鸡；
优选地，所述第二抗体的物种来源和所述第一抗体不相同；
优选地，所述第二抗体的浓度为1～4mg/mL。
6.根据权利要求1所述的鼻分泌物总IgE胶体金检测卡，其特征在于，所述第一抗体识别的抗原表位和所述第二抗体识别的抗原表位为IgE的不同恒定区；
优选地，所述第一抗体识别的抗原表位为IgE的重链第二恒定区，所述第二抗体识别的抗原表位为IgE的重链第四恒定区。
7.根据权利要求1所述的鼻分泌物总IgE胶体金检测卡，其特征在于，所述第三抗体包括IgG或IgM；
优选地，所述第三抗体的物种来源包括牛、羊、马、驴、小鼠、兔、鹿或鸡；
优选地，所述第三抗体的物种来源和所述第二抗体不相同；
优选地，所述第三抗体的浓度为0.5～2mg/mL。
8.根据权利要求1～7任一项所述的鼻分泌物总IgE胶体金检测卡，其特征在于，还包括样液吸收部分和吸水部分；所述样液吸收部分、所述胶体金标记部分、所述反应部分和所述吸水部分依次相接。
9.试剂盒，其特征在于，包含权利要求1～8任一项所述的鼻分泌物总IgE胶体金检测卡。
10.权利要求1～8任一项所述的鼻分泌物总IgE胶体金检测卡或权利要求9所述的试剂盒在制备用于检测过敏状态的产品中的应用。
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Legal Events
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|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
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| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
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Application publication date: 20191203 |