CN110511267B - 抗肥胖多肽、组合物及其应用和用于治疗肥胖症的药物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种抗肥胖多肽、组合物及其应用和用于治疗肥胖症的药物。其中，所述抗肥胖多肽序列中具有：如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，或具有与SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列具有至少70％同源性的氨基酸序列。经体外细胞实验和体内动物实验的验证，上述抗肥胖多肽可以抑制脂肪细胞的分化、降低脂肪生成，控制体重增长，从而达到治疗肥胖症的目的。

Description

抗肥胖多肽、组合物及其应用和用于治疗肥胖症的药物

技术领域

本发明涉及生物医药领域，特别是涉及一种抗肥胖多肽、组合物及其应用和用于治疗肥胖症的药物。

背景技术

肥胖症是由体内过剩的能量在脂肪组织中过度堆积所引发的慢性代谢性疾病，是影响心脑血管疾病、糖尿病和肿瘤等的重大风险因素。

目前在临床上，治疗肥胖的药物多为食欲抑制剂、中枢抑制食欲药物、调节食欲的胃肠激素等，上述绝大部分药物多是基于催吐、抑制食欲等方法来减少摄入体内的能量从而达到减肥的目的，副作用大，且给患者带来痛苦。

近年来，随着多肽组学的快速发展，越来越多具有诊断及治疗潜能的内源性多肽被应用于肿瘤、神经退行性病变、骨质疏松、代谢及免疫性疾病等领域的治疗。多肽具有结构简单、具有化学和生物多样性、特异性及亲和力高、器官蓄积性低，较少引起严重的免疫反应等诸多优点，成为新药物研究的热点之一，具有良好的市场前景。然而，目前具有抗肥胖效果的小分子多肽类药物未见报道。

发明内容

基于此，提供一种能够提高抗肥胖效果的小分子抗肥胖多肽。

一种抗肥胖多肽，所述抗肥胖多肽序列中具有：

如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，或具有与SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列具有至少70％同源性的氨基酸序列。

经体外细胞实验和体内动物实验的验证，上述抗肥胖多肽可以抑制脂肪细胞的分化、降低脂肪生成，控制体重增长，从而达到治疗肥胖症的目的，上述抗肥胖多肽的抗肥胖效果好。

在其中一个实施例中，所述抗肥胖多肽序列中具有如X-P式表示的氨基酸序列，其中，X为Arg-Ala或Ala，P为SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。

在其中一个实施例中，所述抗肥胖多肽序列中具有如P-Y式表示的氨基酸序列，其中，P为SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，Y为Gln-Glu或Gln。

在其中一个实施例中，所述抗肥胖多肽序列中具有如X-P-Y式表示的氨基酸序列，其中，X为Arg-Ala或Ala，P为SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，Y为Gln-Glu或Gln。

在其中一个实施例中，所述抗肥胖多肽序列为如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列或为与SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列具有至少70％同源性的氨基酸序列。

在其中一个实施例中，所述抗肥胖多肽序列为如X-P式表示的氨基酸序列、如P-Y式表示的氨基酸序列或如X-P-Y式表示的氨基酸序列，其中，X为Arg-Ala或Ala，P为SEQ IDNO.1所示的氨基酸序列，Y为Gln-Glu或Gln。

本发明还提供一种抗肥胖多肽组合物，其包括具有如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列的抗肥胖多肽、具有如SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的抗肥胖多肽、具有如SEQ IDNO.3所示氨基酸序列的抗肥胖多肽以及具有如SEQ ID NO.4所示氨基酸序列的抗肥胖多肽中的至少两种。

本发明还提供一种用于治疗肥胖症的药物，所述药物的活性成分包括本发明所述的抗肥胖多肽或本发明所述的抗肥胖多肽组合物。

本发明所述的抗肥胖多肽或本发明所述的抗肥胖多肽组合物在制备预防和/或治疗肥胖症药物中的应用。

本发明所述的抗肥胖多肽或本发明所述的抗肥胖多肽组合物在制备抑制白色脂肪细胞分化药物中的应用。

附图说明

图1A为HPA油红O染色细胞形貌图；

图1B为油红O染色检测下各实验组的脂滴大小的吸光度图；

图1C为各实验组中的脂肪细胞的甘油三脂测定图；

图1D为各实验组中脂肪细胞分化相关分子(C/EBPα、C/EBPβ、PPARγ)mRNA的表达图；

图2A为HFD模型下各实验组小鼠体重增长比较图；

图2B为HFD模型下各实验组小鼠处死后的形态图；

图2C为小鼠皮下脂肪、附睾脂肪、内脏脂肪形态图；

图2D为小鼠皮下脂肪、附睾脂肪、内脏脂肪重量柱形图。

具体实施方式

为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合附图对本发明的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明。但是本发明能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似改进，因此本发明不受下面公开的具体实施例的限制。

除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“及/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。

本发明一实施例中提供了一种抗肥胖多肽，所述抗肥胖多肽序列中具有如SEQ IDNO.1所示的氨基酸序列。

其中，SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列为SEQ ID NO.1：Val-Pro-Val-Gln-Ala-Leu-Leu-Leu-Asn。

在其中一个实施例中，本发明中所述的抗肥胖多肽序列是SEQ ID NO.1：Val-Pro-Val-Gln-Ala-Leu-Leu-Leu-Asn所示的氨基酸序列，由SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列组成的抗肥胖多肽命名为多肽A，多肽A的分子量为966.19，等电点为3.68。

可以理解，本发明所述抗肥胖多肽序列中具有如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列是指包括但不限于如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，例如还可以在SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列中插入、替换、缺失一个或多个氨基酸片段。

本发明另一实施例中提供了一种抗肥胖多肽，所述抗肥胖多肽序列中具有与SEQID NO.1所示的氨基酸序列具有至少70％同源性的氨基酸序列。

本发明中的术语“同源性”是指两个多肽部分之间的同一性百分比。同源性是指与给定氨基酸序列的同一性程度，并且可以表示为百分比。在本发明公开的内容中，具有与给定氨基酸序列相同或相似活性的同源序列可以用“同源性％”表示。从一个部分到另一个部分的序列之间的同源性可以通过本领域已知的技术来确定。例如，可以使用用于计算参数例如分数、同一性和相似性的标准软件，特别是BLAST 2.0。例如，本发明中使用的70％同源性是指，与通过明确的算法确定的70％序列同一性相同的序列，且因此给定序列的同源物在给定序列的长度上具有大于或等于70％序列同一性。其中，本发明所称的同源性包括但不限于在一条多肽序列中插入、替换、缺失一个或多个氨基酸片段。

在其中一个实施例中，所述抗肥胖多肽序列中具有如X-P式表示的氨基酸序列，其中，X为Arg-Ala或Ala，P为SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。

在其中一个实施例中，所述抗肥胖多肽序列中具有如P-Y式表示的氨基酸序列，其中，P为SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，Y为Gln-Glu或Gln。

在其中一个实施例中，所述抗肥胖多肽序列中具有如X-P-Y式表示的氨基酸序列，其中，X为Arg-Ala或Ala，P为SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，Y为Gln-Glu或Gln。

在其中一个实施例中，所述抗肥胖多肽序列为如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列或为与SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列具有至少70％同源性的氨基酸序列。

在其中一个实施例中，所述抗肥胖多肽序列为与所述SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列具有至少80％同源性的氨基酸序列。进一步地，所述抗肥胖多肽序列为与所述SEQ IDNO.1所示的氨基酸序列具有至少90％同源性的氨基酸序列。更进一步地，所述抗肥胖多肽序列为与所述SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列具有至少95％同源性的氨基酸序列。又进一步地，所述抗肥胖多肽序列为与所述SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列具有至少99％同源性的氨基酸序列。

在其中一个实施例中，所述抗肥胖多肽序列为如X-P式表示的氨基酸序列、如P-Y式表示的氨基酸序列或如X-P-Y式表示的氨基酸序列，其中，X为Arg-Ala或Ala，P为SEQ IDNO.1所示的氨基酸序列，Y为Gln-Glu或Gln。

在本实施例中，当X为Arg-Ala时，Y为Gln-Glu时，所述抗肥胖多肽序列为SEQ IDNO.2：Arg-Ala-Val-Pro-Val-Gln-Ala-Leu-Leu-Leu-Asn-Gln-Glu，由SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列组成的抗肥胖多肽命名为多肽B，多肽B的分子量为1450.68，等电点为6.58。

在本实施例中，当X为Ala时，所述抗肥胖多肽序列为SEQ ID NO.3：Ala-Val-Pro-Val-Gln-Ala-Leu-Leu-Leu-Asn，由SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列组成的抗肥胖多肽命名为多肽C，多肽C的分子量为1037.25，等电点为3.77。

在本实施例中，当X为Ala、Y为Gln时，所述抗肥胖多肽序列为SEQ ID NO.4：Ala-Val-Pro-Val-Gln-Ala-Leu-Leu-Leu-Asn-Gln，由SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列组成的抗肥胖多肽命名为多肽D，多肽D的分子量为1165.38，等电点为3.77。

可以理解，本发明中所称的多肽A、多肽B、多肽C和多肽D所对应的氨基酸序列均具有至少70％的序列同源性，即多肽A、多肽B、多肽C和多肽D互为同源性多肽，具有相似的结构和功能。当然还可以理解，与多肽A具有至少70％同源性的多肽包括但不限于多肽B、多肽C和多肽D，还可以为其他本发明中未列举的有相似生理活性的多肽，即与多肽A具有至少70％同源性的多肽也具有抑制脂肪细胞的分化、降低脂肪生成，控制体重增长，从而达到治疗肥胖症的目的。

可以理解，本发明所称的抗肥胖多肽均可以采用本领域技术人员常用的固相合成方法制备而成，在此不在过多赘述。

在其中一个实施例中，所述抗肥胖多肽为抑制脂肪细胞分化的多肽。

在其中一个实施例中，所述抗肥胖多肽为抑制白色脂肪细胞分化的乳源性多肽。

本发明还提供一种抗肥胖多肽组合物，其包括具有如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列的抗肥胖多肽、具有如SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的抗肥胖多肽、具有如SEQ IDNO.3所示氨基酸序列的抗肥胖多肽以及具有如SEQ ID NO.4所示氨基酸序列的抗肥胖多肽中的至少两种。

在其中一个实施例中，本发明的抗肥胖多肽组合物包括由如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列组成的抗肥胖多肽、由如SEQ ID NO.2所示氨基酸序列组成的抗肥胖多肽、由如SEQ ID NO.3所示氨基酸序列组成的抗肥胖多肽以及由如SEQ ID NO.4所示氨基酸序列组成的抗肥胖多肽中的至少两种。

经体外细胞实验和体内动物实验的验证，上述抗肥胖多肽可以抑制脂肪细胞的分化、降低脂肪生成，控制体重增长，从而达到治疗肥胖症的目的，上述抗肥胖多肽的抗肥胖效果好。

本发明还提供一种用于治疗肥胖症的药物，其所述药物的活性成分包括本发明任一项所述的抗肥胖多肽或本发明所述的抗肥胖多肽组合物，抗肥胖多肽的序列在前文中已经给出，在此不再过多赘述。

实验结果表明，上述抗肥胖多肽具有抑制脂肪细胞的分化、降低脂肪生成，控制体重增长，减轻脂肪质量的作用，因此，上述抗肥胖多肽可开发成治疗肥胖症的药物。

本发明还提供一种所述的抗肥胖多肽或本发明所述的抗肥胖多肽组合物在制备预防和/或治疗肥胖症的药物中的应用。

本发明还提供一种所述的抗肥胖多肽或本发明所述的抗肥胖多肽组合物在制备抑制白色脂肪细胞分化药物中的应用。

为了使本发明的目的及优点更加清楚明白，以下结合实验对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实验设计仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

如无特殊说明，以下实验中所使用的试剂均来源于市售，操作方法均为现有的常规操作方法。

实验设计

对脂肪细胞分化的影响的实验设计

1.实验细胞

实验选用人白色前体脂肪细胞HPA(human pre-adipocyte)，购自美国ScienCell公司。

2.实验分组：

设置对照组和实验干预组，实验干预组分为多肽A组(对应本发明的多肽A)、多肽B组(对应本发明的多肽B)、多肽C组(对应本发明的多肽C)、多肽D组(对应本发明的多肽D)，其中，实验干预组在细胞分化过程中每隔一天向培养体系中添加20μM浓度的多肽，分化7天后进行后续实验。以打乱序列的scramble多肽为对照组。多肽A、多肽B、多肽C和多肽D均采用固相合成法制备而成。

3.实验方法

3.1HPA细胞培养及诱导分化

1)HPA细胞培养于PAM完全培养基，在37℃、5％CO₂培养箱中培养，待PreAd生长完全融合后(记为第0天)将完全培养液换成诱导分化剂I，开始诱导脂肪细胞分化。

2)第4天撤去诱导分化剂I，替换为诱导分化剂II，每2-3天换一次液(诱导分化剂II)。

3)细胞分化过程中每天监测，记录分化情况，根据实验需要收集细胞备用。

4)诱导分化剂I(100ml体系)配置方案如下：

DMEM/F12培养基：88ml；

IBMX：称取11.5mg，加入200μl 0.5N的KOH助溶；

胰岛素(1mg/ml)：58μl，终浓度100nM；

地塞米松(0.1mM)：1ml，终浓度1μM；

罗格列酮(40mM)：2.5μl，终浓度1μM；

P/S：1ml。

5)诱导分化剂II(100ml体系)配置方案如下：

DMEM/F12培养基：100ml；

胰岛素(1mg/ml)：58μl，终浓度100nM；

P/S：1ml。

3.2油红O染色

1)分化成熟的脂肪细胞弃去培养基，PBS洗2遍，4％多聚甲醛1ml/孔固定30min；

2)油红染色液配置：按油红：异丙醇＝150mg：50ml比例配置储备液；工作液按储备液：ddH₂O＝3:2比例配置；65℃水浴锅加热溶解；

3)过滤：配置溶解好的油红，先用滤纸过滤，再用0.22um滤膜过滤，注意轻柔操作；

4)染色：固定好的细胞，吸弃固定液，PBS洗两遍，加入油红工作液后置于37℃温箱，染色30min；

5)染色完成后弃去染色液，自来水冲洗，注意不要正对着细胞冲洗；加入适量PBS，显微镜下拍照。

3.3甘油三酯含量检测(化学发光比色法)

1)细胞裂解：分化成熟的脂肪细胞，PBS洗涤1-2遍以去除甘油，后按比例每1x106个细胞加入0.1ml裂解液，移液器吸头刮下细胞混匀后室温静置10分钟；

2)裂解液处理：吸取适量上清转移到1.5ml离心管中，余下的裂解液可用BCA法蛋白定量试剂盒进行蛋白定量；细胞裂解液置于70℃，混匀加热10min；加热完成后2000rpm室温离心5min，上层清液即可进行酶学检测；

3)工作溶液配制：选用普利来组织甘油三酯测定试剂盒E1013，其中，试剂R1与试剂R2按4：1比例混合即可，当天配制，变色弃去；

4)标准品稀释：4mM甘油标准品使用蒸馏水或与缓冲液一致的液体等比稀释，一般4-6管即可，设置0浓度对照反应管；

5)待测样品10ul/孔，工作液190ul/孔，混匀后置于37℃10min或25℃30min，反应平衡后60min内颜色均稳定；

6)于550nm处测定各管OD值。

3.4荧光定量PCR(qPCR)

通过Trizol试剂联合氯仿收取细胞mRNA，Thermo Fisher试剂盒逆转录为cDNA，通过SYBR Green法检测样品中目的基因的表达水平。

4.数据及统计学处理：本实验中数据采用SPSS13.0软件处理，以平均数±标准差(mean±SD)来表示，组间以t检验分析比较，以p<0.05表示有显著性差异。

肥胖小鼠造模实验

1.实验动物

选择6-8周C57BL/6小鼠共28只，雄性，清洁级，体重：20-25g，由上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供。

2.实验分组：将实验小鼠随机分成四组(n＝7)：对照组、HFD模型组、多肽B组(对应本发明的多肽B)，多肽D组(对应本发明的多肽D)。多肽B组，多肽D组的给药剂量以体重计算，多肽组按10mg/kg给药，药物以生理盐水为溶剂配成注射液，腹腔注射给药。

3.实验方法

多肽B组和多肽D组是以高脂饲料饮食诱导的肥胖模型小鼠(HFD)作为研究对象，连续高脂喂养8周，期间通过腹腔注射每周两次多肽给药(10mg/kg)，每周监测小鼠体重变化；干预结束后处死后取皮下脂肪、附睾脂肪、内脏脂肪组织称取湿重。

HFD模型组是以高脂饲料喂养的小鼠。

对照组是普通饮食喂养的小鼠。

4.数据及统计学处理：

本实验中数据采用SPSS13.0软件处理，以平均数±标准差(mean±SD)来表示，组间以One-way ANOVA以及t检验分析比较，以p<0.05表示有显著性差异。

效果实验

油红O染色及甘油三酯测定结果

图1A为油红O染色后的细胞形态图，由图1可以看出，多肽A、多肽B、多肽C、多肽D干预HPA后，HPA细胞内脂滴数量及体积减小，成脂水平受到抑制。

图1B为油红O染色检测下各组抗肥胖多肽干预后的脂滴大小的吸光度图，图1C为各组抗肥胖多肽干预后的脂肪细胞的甘油三脂测定图，结合图1B和1C，并参阅下表1。

表1

组别	吸光度OD(nm)	甘油三脂(mmol/g)
			对照组	0.56±0.051	2.40±0.060
多肽A	0.50±0.020	2.01±0.090
			多肽B	0.41±0.041	1.50±0.120
多肽C	0.47±0.001	2.10±0.180
			多肽D	0.30±0.080	1.00±0.220

由表1可知，在油红O染色检测实验中，各实验干预组(A、B、C、D)分别与相应的对照组相比，吸光度值明显降低，差异有统计学意义(P＜0.05)。其中，多肽B、多肽D组的油红O的吸光度值降低更加明显，由此表明，多肽A、多肽B、多肽C、多肽D组干预后脂肪细胞分化成熟细胞的比例减少、脂滴体积变小，而多肽B、多肽D干预效果更为明显。

由表1可知，在脂肪细胞中甘油三酯的检测实验中，各实验干预组(A、B、C、D)分别与相应的对照组相比，脂肪细胞中的甘油三酯明显降低，差异有统计学意义(P＜0.05)。其中，多肽B、多肽D组干预的脂肪细胞中的甘油三酯的降低更加明显，由此表明，多肽A、多肽B、多肽C、多肽D组干预的脂肪细胞中的甘油三酯含量均有降低，而多肽B、D组干预效果更为明显。

脂肪细胞分化相关分子(C/EBPα、C/EBPβ、PPARγ)的mRNA表达结果

图1D为各组抗肥胖多肽干预后脂肪细胞分化相关分子(C/EBPα、C/EBPβ、PPARγ)mRNA的表达图，采用qPCR检测脂肪细胞分化相关分子(C/EBPα、C/EBPβ、PPARγ)的mRNA表达，结果见表2。

表2

组别	C/EBPαmRNA	C/EBPβmRNA	PPARγmRNA
				对照组	1.00±0.061	1.00±0.090	1.00±0.040
多肽A	0.89±0.010	0.88±0.051	0.91±0.050
				多肽B	0.71±0.030	0.60±0.051	0.80±0.031
多肽C	0.79±0.110	0.85±0.090	0.85±0.091
				多肽D	0.50±0.090	0.32±0.900	0.82±0.052

由表2可知，在C/EBPαmRNA指标评定中，各实验干预组(A、B、C、D)分别与相应的对照组相比降低，差异有统计学意义(P＜0.05)。其中，多肽B、多肽D组干预的脂肪细胞分化相关分子C/EBPαmRNA的降低更加明显。

在C/EBPβmRNA指标评定中，各实验干预组(A、B、C、D)分别与相应的对照组相比降低，差异有统计学意义(P＜0.05)。其中，多肽B、多肽D组干预的脂肪细胞分化相关分子C/EBPβmRNA的降低更加明显。

在PPARγmRNA指标评定中，各实验干预组(A、B、C、D)分别与相应的对照组相比降低，差异有统计学意义(P＜0.05)。其中，多肽B、多肽D组干预的脂肪细胞分化相关分子PPARγmRNA的降低更加明显。

综上所述，多肽A、多肽B、多肽C、多肽D均可降低分化相关分子(C/EBPα、C/EBPβ、PPARγ)mRNA的表达，而多肽B、多肽D干预效果更为明显。

HFD小鼠体重增长实验结果

请参阅图2A-2B，每周称量小鼠体重，连续处理8周。结果发现：HFD组小鼠的体重增长比对照组增长缓慢，并且从干预后第14天HFD组小鼠体重(25.1±1.0)g与对照组体重(27.2±2.3)g具有差异，具有统计学意义(P＜0.05)。干预14-28天多肽D组小鼠体重水平与对照组相当，干预28-56天多肽D组小鼠体重下降趋势明显，尤其56天时多肽D处理组小鼠体重[Day56(34.1±1.1)g]与HFD组小鼠[Day56(40.6±2.1)g]相比明显降低，差异有统计学意义(P＜0.001)。多肽B组小鼠体重从干预后开始体重也较HFD组增长缓慢，处理21天多肽B组[Day21(30.4±1.1)g]较HFD组[Day21(33.3±0.9)g]体重下降具有统计学差异(P＜0.05)。

结合图2A并参阅图2B，小鼠解剖结果显示，多肽B组和多肽D组小鼠体型较HFD造模组稍显瘦小，皮下脂肪减小，且多肽D组效果更为明显。综上所述，多肽B和多肽D干预肥胖模型小鼠，减缓了HFD诱导的小鼠体重增长趋势，且多肽D比多肽B对小鼠的体重增长的抑制作用更加明显。

HFD小鼠皮下脂肪、附睾脂肪、内脏脂肪重量评价实验

请参阅图2C-2D所示，干预结束，处死小鼠后取皮下脂肪、附睾脂肪、内脏脂肪组织称取湿重，结果见表3。

表3

组别	皮下脂肪(g)	附睾脂肪(g)	内脏脂肪(g)
				对照组	0.21±0.03	0.43±0.16	0.11±0.02
HFD造模组	1.11±0.20	2.32±0.17	0.73±0.23
				多肽B组	0.78±0.04	1.98±0.09	0.52±0.11
多肽D组	0.51±0.17	1.30±0.47	0.44±0.19

由表3可知，小鼠各部位脂肪称重HFD造模组[皮下(1.11±0.20)、附睾(2.32±0.17)、内脏(0.73±0.23g]与对照组[皮下(0.21±0.03)、附睾(0.43±0.16)、内脏(0.11±0.02g]相比，重量明显增加(P＜0.05)，说明HFD造模成功。多肽D组小鼠各部位脂肪组织湿重[皮下(0.51±0.17)、附睾(1.3±0.47)、内脏(0.44±0.19)g]与HFD造模组小鼠[皮下(1.11±0.20)、附睾(2.32±0.17)、内脏(0.73±0.23g]相比明显降低，差异有统计学意义(P＜0.05)；而多肽B组小鼠[皮下(0.78±0.04)、附睾(1.98±0.09)、内脏(0.52±0.11g]与HFD造模组[皮下(1.11±0.20)、附睾(2.32±0.17)、内脏(0.73±0.23g]小鼠相比，各组织称重呈下降趋势，差异有统计学意义(P＜0.05)，但下降程度较多肽D组稍弱；综上所述，多肽B、D干预可明显控制HFD引起的小鼠肥胖及各部位脂肪组织的增加，但多肽D的效果更加明显。

综上所述，本发明的多肽具有抑制脂肪细胞成脂分化的作用，具体而言，多肽A、多肽B、多肽C、多肽D干预脂肪细胞，采用油红O染色检测脂滴大小，采用化学发光比色法测定甘油三脂含量；采用qPCR检测分化相关分子(C/EBPα、C/EBPβ、PPARγ)mRNA的表达，综合评估脂肪细胞的分化效率。结果显示多肽A、多肽B、多肽C、多肽D干预HPA后，脂肪细胞脂滴体积减小，甘油三酯含量下降，分化相关分子表达均出现下调。而多肽B、多肽D干预对脂肪细胞形态、甘油三酯含量及分化相关分子的影响更加显著(图1A-D)。

此外，本发明的多肽还具有控制肥胖小鼠体重增长的作用，具体而言，选取体外实验效果明显的多肽B、多肽D进行在体实验研究，结果发现多肽B、多肽D干预肥胖模型小鼠(HFD)后，小鼠体重上升趋势减缓，且多肽D比多肽B对小鼠体重抑制效果更加明显，进一步取各部位脂肪组织称取湿重，发现多肽B、多肽D组小鼠体脂含量显著降低，且具有统计学差异，但多肽D效果更加明显(图2A-D)。综上所述，多肽B、多肽D均可抑制脂肪细胞分化，降低脂生成，同时降低肥胖小鼠体重增长，起到抗肥胖的作用，且多肽D比多肽B的抗肥胖效果更加明显。

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

序列表

<110> 上海市同仁医院

<120> 抗肥胖多肽、组合物及其应用和用于治疗肥胖症的药物

<141> 2019-08-22

<160> 4

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<400> 1

Val Pro Val Gln Ala Leu Leu Leu Asn

1 5

<210> 2

<211> 13

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<400> 2

Arg Ala Val Pro Val Gln Ala Leu Leu Leu Asn Gln Glu

1 5 10

<210> 3

<211> 10

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<400> 3

Ala Val Pro Val Gln Ala Leu Leu Leu Asn

1 5 10

<210> 4

<211> 11

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<400> 4

Ala Val Pro Val Gln Ala Leu Leu Leu Asn Gln

1 5 10

Claims (6)

1.一种抗肥胖多肽，其特征在于，所述抗肥胖多肽序列为如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。

2.根据权利要求1所述的抗肥胖多肽，其特征在于，所述抗肥胖多肽序列为如X-P式表示的氨基酸序列、如P-Y式表示的氨基酸序列或如X-P-Y式表示的氨基酸序列，其中，X为Arg-Ala或Ala，P为SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，Y为Gln-Glu或Gln。

3.一种抗肥胖多肽组合物，其特征在于，包括具有如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列的抗肥胖多肽、具有如SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的抗肥胖多肽、具有如SEQ ID NO.3所示氨基酸序列的抗肥胖多肽以及具有如SEQ ID NO.4所示氨基酸序列的抗肥胖多肽中的至少两种。

4.一种用于治疗肥胖症的药物，其特征在于，所述药物的活性成分包括权利要求1-2任一项所述的抗肥胖多肽或权利要求3所述的抗肥胖多肽组合物。

5.权利要求1-2任一项所述的抗肥胖多肽或权利要求3所述的抗肥胖多肽组合物在制备预防和/或治疗肥胖症药物中的应用。

6.权利要求1-2任一项所述的抗肥胖多肽或权利要求3所述的抗肥胖多肽组合物在制备抑制白色脂肪细胞分化药物中的应用。

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