CN110507741A - 一种椰馏油及其制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及一种椰馏油及其制备方法和用途，该椰馏油中含酚类成分，以苯酚计的质量百分比为75％‑90％；对于不同温度干馏制得的椰馏油含酚量以及药理活性进行研究，获得一种新的干馏油，本发明所述的干馏油以苯酚计，质量百分含量不低于75％，药理试验研究表明，本发明方法得到的干馏油具有更好的药理作用。
Description
技术领域
本发明属于医药生物技术领域，具体涉及一种椰馏油及其制备方法和用途。
技术背景
椰子树是棕榈科椰属植物，椰子是椰树的果实，其成熟果实的硬壳，即椰子壳，椰子壳为棕榈科植物椰子的内果皮，早在《本草纲目》中对其已有记载，用于治疗杨梅疮、筋骨痛、癣等皮肤病，使用方法为炒热滚酒泡服或熬膏外敷。椰馏油是将成熟的椰子果壳干馏制颗粒炭时，收集馏出液得到的一种干馏油，该干馏油可以用于抑菌、止痒、消炎、收敛止血等用途。
因此，对于椰馏油的提取工艺进行深入的研究，具有重要意义。
发明内容
基于上述原因，申请人对于经过创造性研究，对于不同温度干馏制得的椰馏油含酚量以及药理活性进行研究，获得一种新的干馏油，本发明所述的干馏油以苯酚计，质量百分含量不低于75％，药理试验研究表明，本发明方法得到的干馏油具有更好的药理作用。
本发明通过下述技术方案实现的。
一种椰馏油，所述椰馏油中含酚类成分，以苯酚计的质量百分比为75％-90％。
优选的一种椰馏油，其中椰馏油中含酚类成分，以苯酚计的质量百分比为80％-90％。
进一步优选述的一种椰馏油，其中椰馏油中含酚类成分，以苯酚计的质量百分比为85％-90％。
上述所述的一种椰馏油，其特征在于椰馏油的制备方法为：
(1)取成熟椰子的果实，去掉外果皮、中果皮、果肉，保留椰子壳，粉碎；
(2)将粉碎的椰子壳放入干馏炉中，预热至120℃，弃去120℃以下的馏出液，继续加热至320℃，收集温度120℃-320℃的馏出物，即得椰馏油。
上述所述椰馏油在制备抗菌药物中的应用。
上述椰馏油在制备抗菌药物中的应用抑菌、止痒或收敛的。
一种药物制剂，该药物制剂活性成分含有权利要求1-4所述的椰馏油。
本发明所述的含量，是采用下述方法检测得到：
总酚含量测定：
取本品约0.5g，精密称定，置250ml量瓶中，加氢氧化钠试液8ml使溶解，再加水稀释至刻度。精密量取25ml，置碘量瓶中，精密加0.1mol/L溴液30ml，再加盐酸5ml，立即密塞，振摇30分钟，静置15分钟后，注意微开瓶塞，加碘化钾试液6ml，立即密塞，充分振摇后，加氯仿1ml，摇匀，用0.1mol/L硫代硫酸钠标准液滴定，至近终点时，加淀粉指示液2ml，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正，计算即得(每1ml的0.1mol/L硫代硫酸钠液相当于1.569mg的苯酚C6H6O)。
椰子壳油(椰馏油)提取物总酚(以苯酚计)W％(g/g)
W＝(V0-Vs)÷Ws×10÷F0×1.569÷1000×100
W-为总酚百分含量％(g/g)
V0-为空百液消耗硫代硫酸钠标准液的体积(ml)
Vs-为样品液消耗硫代硫酸钠标准液的体积(ml)
Ws-为椰子壳油(椰馏油)提取物取样量(g)
F0-为硫代硫酸钠标准液校正因子(即硫代硫酸钠标准液的实际浓度除以0.1mol/L)。
本发明的有益的技术效果：
1、本发明工艺方法获得的干馏油中含酚量高(以苯酚计)，该工艺方法实施简单，适合工业化生产。
2、本发明干馏油在抗菌方面，抗病毒作用。
具体实施方式
下面通过具体的实施实例对本发明作进一步的详细说明，但本发明并不局限于此。
试验1
抗炎作用
试验药物：
试验1组：取成熟椰子的果实，去掉外果皮、中果皮、果肉，保留椰子壳，粉碎；将粉碎的椰子壳放入干馏炉中，预热至100℃，持续加热至500℃，收集馏出物至不出为止，即得油状物原料。经检测原料中含酚类成分，以苯酚计的质量百分比为52.3％。
试验2组：取成熟椰子的果实，去掉外果皮、中果皮、果肉，保留椰子壳，粉碎；将粉碎的椰子壳放入干馏炉中，预热至120℃，弃去120℃一下馏出物，持续加热至500℃，收集120℃-500℃，馏出物至不出为止，即得油状物原料。经检测原料中含酚类成分，以苯酚计的质量百分比为74.2％。
试验3组：取成熟椰子的果实，去掉外果皮、中果皮、果肉，保留椰子壳，粉碎；将粉碎的椰子壳放入干馏炉中，预热至120℃，弃去120℃以下馏出物，持续加热至500℃，收集120℃-400℃馏出物，即得油状物原料。经检测原料中含酚类成分，以苯酚计的质量百分比为79.3％。
试验4组：取成熟椰子的果实，去掉外果皮、中果皮、果肉，保留椰子壳，粉碎；将粉碎的椰子壳放入干馏炉中，预热至120℃，弃去120℃以下馏出物，持续加热至380℃，收集120℃-380℃馏出物，即得油状物原料。经检测原料中含酚类成分，以苯酚计的质量百分比为89.1％。
试验方法：
取雄性和雌性各半的清洁昆明小鼠体质量20±2g，随机分组，分为对照组、各试验药物组，每天对小鼠左耳和右耳各涂抹给药1次(左耳和右耳各涂抹：油状物原料5mg、薄荷脑0.55mg)，持续8d，最后1次给药1h后，将0.03ml二甲苯均匀地涂抹到小鼠右耳的前部和后部(左耳是空白对照)，1h后，通过颈椎脱位处死小鼠，并在左耳和右耳的相同部分用8.0mm打孔器打耳片，用电子分析天平称质量，并且依据公式计算肿胀度(mg)及肿胀抑制率(％)。
肿胀度(mg)＝右耳质量(mg)—左耳质量(mg)。
抑制率(％)＝(空白组平均右耳片重—给药组平均右耳片重)/空白组平均耳片重。
试验结果见表1：
表1对二甲苯致小鼠耳水肿的影响
注：与对照组比较*P<0.05。
试验结论：在给药量相同的情况下，试验3组与试验4组的耳肿胀程度与空白对照组比较，有显著性差异(P<0.05)，这说明不同干馏的温度获得的产品，药理作用是不同的，因此，申请人进一步进行验证性试验。
试验2
抗菌试验
试验药物：试验1组-试验4组，同试验1。试验5组：试验4组原料与薄荷醇重量比：1:0.11。
试验方法：药液和菌液的制备药液：称取75mg的原料和于(2mL)EP管中，加入10％DMSO作为助溶剂，超声震荡使药物溶解,在超净工作台里加入灭菌生理盐水，配成浓度为50mg·mL-1的药液。菌液：将菌株接种于琼脂培养基上，细菌用M-H琼脂培养基，真菌用沙保罗氏琼脂，置于35℃恒温箱中培养20h，采用0.5号麦氏比浊管将细菌浓度配置为1.5×108CFU/mL，真菌用细胞计数板配成1.0×106CFU/mL,用于做药物敏感性和琼脂扩散法测量抑菌圈。琼脂扩散法测定抑菌圈：用打孔器将琼脂平板打上6mm的孔备用，每个平板均匀打上5个孔。再用棉签沾取细菌浓度为1.5×108CFU/mL的菌液均匀涂布于M-H琼脂平板，真菌菌液浓度为1.0×106CFU/mL,涂布于沙保罗氏琼脂平板上。最后于每孔加入50μl浓度50mg/mL药液，药液不得溢出孔外。琼脂平板放入35℃恒温箱中培养20h，用卡尺测量抑菌圈的直径，做3次平行实验,取平均值。根据药理学试验方法判断：抑菌圈＜10mm为耐药和无抑菌作用；10mm为轻度敏感；11～15为中度敏感；≥16mm为高度敏感。抗生素的抑菌圈以临床和实验室标准(Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI)作为标准。
试验结果见表2。
表2不同试验组的抑菌试验结果
试验结论：在相同给药量的情况下，试验3组-试验4组具有很好的抗菌作用，加入薄荷醇的试验组也具有很好的抗菌作用。
试验3
抗病毒试验(本试验委托军事医学科学院完成)
试验药物：试验1组-试验4组，同试验1。试验5组：试验4组原料与薄荷醇重量比：1:0.11。
试验病毒：人呼吸道合胞病毒，人手足口病毒，人柯萨奇病毒，人单纯疱疹病毒、猫肠道冠状病毒。从超低温冰箱中取出四种病毒的种子，待其融化后，吸取病毒加入前一天传代且已长至单层的MA104细胞中，吸取病毒量为最终培养基的10％，放在37℃5％CO2培养箱中培养，待细胞病变至90％后，三冻三融，1000r/min离心10min，取上清液分装冻存，用于实验中。
试验方法：取不同原料、用含2％胎牛血清的1640培养基维持液配制成5mg/ml，利巴韦林配制成0.25μg/ml，每孔50μl接种于MA104已长至90％的96孔板中，然后每孔加入50μl 100倍TCID 50浓度的病毒液，利巴韦林阳性对照，设置4个复孔。在37℃5％CO2培养箱中培养，待病毒对照病变达到80％时，每孔加入20μl MTT，置培养箱作用4h，吸去培养基，每孔加入100μlDMSO，设置空白校准孔。用酶标仪在492nm波长，处测得OD值，计算病毒抑制率。
试验结果：见表3。
表3对于不同病毒的抑制作用
试验结论：0.5mg/ml的试验3组与0.25μg/ml利巴韦林在抗人呼吸道合胞病毒、人手足口病毒、人柯萨奇病毒、人单纯疱疹病毒抑制率想当，而试验4组与试验5组的抑制率要高于利巴韦林组；在抑制猫肠道冠状病毒方面，试验组抑制率高于利巴韦林组。
试验4
抗HPV试验
试验药物：试验1组-试验4组，同试验1。试验5组：试验4组原料与薄荷醇重量比：1:0.11。
试验方法：经中国中医科学院广安门医院妇产科患者同意，取确诊HPV感染患者同意，采取的标本(HPV类型为HPV8和HPV36的混合型，属于皮肤高危型)，集中到1只离心管中，称重15mg，用玻璃匀浆器匀浆，在加入5ml生理盐水，配成3mg/ml的离体混悬液，备用。样品处理方法：用移液枪吸取25μl样品液和25μl标本悬浊液至15ml离心管中，振摇均匀，使样品与标本能充分作用，置37℃水浴箱中培养，在样品处理标本1天、3天、5天、7天后，各取1组进行以下试验。HPV-DNA的提取：从水浴箱中取出经样品处理的标本混悬液，按试剂盒步骤提取DNA：加入50μl生理盐水，混匀后再加入100μl DNA提取液，振摇均匀，1200r/min离心10min，弃去上清液，再加入25μl DNA提取液2，充分混匀，100℃沸水煮10min，1200r/min离心10min，上清液极为HPV-DNA模板。DNA扩增：取检测试剂盒中的PCR反应液37.6μl，Taq DNA聚合酶0.4μl，UNG0.03μl于PCR反应管中，在加入HPV-DNA模板2μl，扣严管盖，置于定量PCR仪上循环扩增。HPV-DNA经高温变性、低温退火及延伸进行循环扩增，循环程序设置为：37℃，5min；94℃，1min；95℃，5sec；60℃，30sec，循环40次。量标准曲线：用荧光探针检测定量，按照检测试剂盒要求，设立4个系列浓度的HPV-DNA定量阳性标准品，依次为5×107/ml,5×106/ml,5×105/ml,5×104/ml,经PCR检测(其检测灵敏度为1×103/ml，结果小于该浓度者判定为阴性)。以起始拷贝数的自然对数为横坐标，循环阙值为纵坐标，得到的回归直线为标准曲线，据此对样品的扩增倍数进行定量。
试验结果：见表1：
表1不同试验组抗HPV作用
注：—代表阴性
试验结论：在相同给药量的情况下，试验4组、试验5组的原料在培养3天时，就显示阴性。
试验总结：通过上述试验表明，以120℃-380℃的干馏出的原料为药物原料，具有更好的药理作用，充分说明本发明椰子干馏油具有重要科学意义。
制备实施例
实施例1
取成熟椰子的果实，去掉外果皮、中果皮、果肉，保留椰子壳，粉碎；将粉碎的椰子壳放入干馏炉中，预热至120℃，弃去120℃以下馏出物，持续加热至380℃，收集120℃-380℃馏出物，即得油状物原料。经检测原料中含酚类成分，以苯酚计的质量百分比为89.1％。
椰馏油100g，薄荷脑35g为原料制备成外用制剂；
椰馏油500g，薄荷脑45g为原料制备成外用制剂；
椰馏油500g，薄荷脑55g为原料制备成外用制剂；
椰馏油800g，薄荷脑75g为原料制备成外用制剂；
椰馏油1000g，薄荷脑85g为原料制备成外用制剂。
本发明所述的含量，是采用下述方法检测得到：
总酚含量测定：
取本品约0.5g，精密称定，置250ml量瓶中，加氢氧化钠试液8ml使溶解，再加水稀释至刻度。精密量取25ml，置碘量瓶中，精密加0.1mol/L溴液30ml，再加盐酸5ml，立即密塞，振摇30分钟，静置15分钟后，注意微开瓶塞，加碘化钾试液6ml，立即密塞，充分振摇后，加氯仿1ml，摇匀，用0.1mol/L硫代硫酸钠标准液滴定，至近终点时，加淀粉指示液2ml，继续滴定至蓝色消失，并将滴定结果用空白试验校正，计算即得(每1ml的0.1mol/L硫代硫酸钠液相当于1.569mg的苯酚C6H6O)。
椰子壳油(椰馏油)提取物总酚(以苯酚计)W％(g/g)
W＝(V0-Vs)÷Ws×10÷F0×1.569÷1000×100
W-为总酚百分含量％(g/g)
V0-为空百液消耗硫代硫酸钠标准液的体积(ml)
Vs-为样品液消耗硫代硫酸钠标准液的体积(ml)
Ws-为椰子壳油(椰馏油)提取物取样量(g)
F0-为硫代硫酸钠标准液校正因子(即硫代硫酸钠标准液的实际浓度除以0.1mol/L)。
Claims (10)
1.一种椰馏油，其特征在于：所述椰馏油中含酚类成分，以苯酚计的质量百分比为75％-90％。
2.根据权利要求1所述的一种椰馏油，其中椰馏油中含酚类成分，以苯酚计的质量百分比为80％-90％。
3.根据权利要求1所述的一种椰馏油，其中椰馏油中含酚类成分，以苯酚计的质量百分比为85％-90％。
4.根据权利要求1-3任一项所述的一种椰馏油，其特征在于椰馏油的制备方法为：
(1)取成熟椰子的果实，去掉外果皮、中果皮、果肉，保留椰子壳，粉碎；
(2)将粉碎的椰子壳放入干馏炉中，预热至120℃，弃去120℃以下的馏出液，继续加热至320℃，收集温度120℃-320℃的馏出物，即得椰馏油。
5.根据权利要求1-4任一项所述的一种椰馏油，其特征在于所述椰馏油在制备抗菌药物中的应用。
6.根据权利要求1-4任一项所述的一种椰馏油，其特征在于述椰馏油在制备抗病毒药物中的应用。
7.一种药物制剂，其特征在于：该药物制剂活性成分含有权利要求1-4所述的椰馏油。
8.根据权利要求7所述的一种药物制剂，其特征在于该药物制剂由下述原料制备而成：椰馏油、薄荷脑。
9.根据权利要求7所述的一种药物制剂，其特征在于该药物制剂由下述原料制备而成：椰馏油1-10重量份，薄荷脑0.35-0.85重量份。
10.根据权利要求7所述的一种药物制剂，其中所述的药物制剂为外用制剂。
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|---|---|---|---|---|
| CN113440641A (zh) * | 2021-07-19 | 2021-09-28 | 北京健翔嘉业日用品有限责任公司 | 一种抗人乳头瘤病毒的椰脂溶剂及其制备方法与应用 |
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